CN1775300A - 纳米银生物仿生敷料及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种纳米银生物仿生敷料及其制备方法，敷料特征：通过纳米技术及自组装技术，在壳聚糖膜上组装纳米银粒子层。方法特征：(1)纳米银粒子的制备：配制硝酸银(AgNO3)溶液后置于容器中搅拌并加热，沸腾后滴加柠檬酸三钠(Na3C6H5O7·2H2O)溶液，反应一定时间后，自然冷却；(2)壳聚糖膜的制备：用醋酸溶液溶解壳聚糖，再将其抽滤，抽滤后倒入培养皿中烘干成膜，然后用氢氧化钠(NaOH)处理，最后用自来水冲洗；(3)纳米银生物仿生敷料的制备：将壳聚糖膜浸泡在纳米银粒子溶液中，通过自组装技术使纳米银粒子组装到壳聚糖膜上，即得到纳米银生物仿生敷料。其有益效果为：该纳米银生物仿生敷料具有促进表皮角质形成细胞生长，加速创面愈合的功能，而且组装在壳聚糖膜上的纳米银粒子持续不断地作用于再生细菌，具有持久、高效的杀菌特点，无耐药性和过敏现象发生。
Description
技术领域
本发明属于医疗器械中的敷料，是利用纳米技术及自组装技术构造的纳米银生物仿生敷料，具体说是临床治疗中伤口及烧、烫伤、创伤创面的治疗覆盖用生物敷料，进一步说，是一种纳米银生物仿生敷料及其制备方法。
背景技术
皮肤是维持内环境稳定和阻止微生物入侵的屏障。重建或恢复皮肤屏障是烧伤治疗的最终目标，在达到这个目标之前，一个性能优良的创面覆盖物可暂时起到皮肤屏障功能的作用，提供一个有利于创面愈合的环境。一种理想的创面覆盖物应具有：①良好的黏附性、通透性，又能控制水分蒸发，具有类似正常皮肤的水分蒸发率；②减少营养物质经创面丢失，阻止细菌入侵和限制细菌在创面上定殖；③减轻疼痛；④良好的顺应性，具有良好的弹性和柔韧性，可随体形覆盖创面，适合于人体不同解剖部位；⑤不干扰创面愈合过程。不阻碍上皮化，不促使暂时的新的基质(肉芽组织)过渡沉积。无占位性；⑥储存、应用方便；⑦对组织无刺激性、无毒性、无抗原性、无致癌性；⑧能耐受高压或其他常用消毒方法处理，能在室温内长期保存，并能大量生产。
目前创面覆盖物可分为三类：生物敷料、合成敷料和生物合成敷料。传统的生物性敷料如异体皮肤、异种猪皮对于II度烧伤创面的治疗起到了很好的作用，但也存在如来源紧张、抗原性高、粘附性差、创面易感染、换药次数频繁，保存和运输条件高，又具有交叉感染的危险性等缺点。而各种合成敷料价格均较贵，而且各种产品均存在着不足，如不具有吸收渗液、通透水蒸气性能差；通透水蒸气太高，不能控制创面水分丢失，而且合成敷料是通过为创面提供一个微湿、微酸的环境，有利于中性粒细胞发挥作用，增强局部杀菌能力，但本身不具有杀菌的能力。而生物合成敷料外层为高分子材料，内层为生物性材料构成的组合型敷料。但因其价格昂贵，不易在临床推广应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有促进表皮角质形成细胞生长，良好抗菌功能，加速创面愈合，缩短愈合周期的纳米银生物仿生敷料及其制备方法。
本发明的技术解决方案是：
一种纳米银生物仿生敷料，其特征是：通过纳米技术及自组装技术，在壳聚糖膜上组装纳米银粒子层。
本发明中所述的纳米银粒子是通过自组装技术与壳聚糖分子上的-NH2形成Ag-N键，使纳米银粒子均匀牢固地组装在壳聚糖膜上。组装在壳聚糖膜上的纳米银的粒径大小为10～100nm。
一种纳米银生物仿生敷料的制备方法，其特征是：包括纳米银粒子的制备、壳聚糖膜的制备及最终纳米银生物仿生敷料的制备：
(1)纳米银粒子的制备：配制AgNO3溶液后置于容器中，搅拌并加热，沸腾后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反应一定时间后，脱离热源，自然冷却，即得到纳米银粒子溶液；
(2)壳聚糖膜的制备：用醋酸溶液溶解壳聚糖，然后将壳聚糖溶液抽滤，抽滤后倒入培养皿中，放烘箱中烘干成膜。接下来用NaOH中和壳聚糖膜中的醋酸，最后用自来水清洗即得到壳聚糖膜；
(3)纳米银生物仿生敷料的制备：将壳聚糖膜放在纳米银粒子溶液中，通过自组装技术即得到纳米银生物仿生敷料。
本发明中所述的：
(一)纳米银粒子的制备：
(1)将AgNO3置于容器中，用亚沸水溶解，转移定容，过滤后加到容器中；
(2)将Na3C6H5O7·2H2O置于容器中溶解，转移定容后过滤；
(3)加热并搅拌盛有AgNO3溶液的容器，沸腾后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反应一定时间后，脱离热源，自然冷却，即得到纳米银粒子溶液。
(二)壳聚糖膜的制备：
(1)将壳聚糖加入醋酸溶液中，搅拌至全部溶解；
(2)将壳聚糖溶液倒入负压抽滤装置抽滤。抽滤完毕，静置除气泡后，再倒入培养皿中；
(3)将培养皿放到烘箱中烘干成膜；
(4)将壳聚糖膜放入NaOH溶液中，加热至沸腾以中和醋酸；
(5)将用NaOH处理过的壳聚糖膜取出，用自来水清洗至中性，再用去离子水浸泡过夜；
(6)将壳聚糖膜取出，用酒精浸泡后，紫外灯照射即得到无菌的壳聚糖膜。
(三)纳米银生物仿生敷料的制备：
(1)壳聚糖膜完全浸泡在过滤的纳米银粒子溶液中，低温保存。
(2)将壳聚糖膜取出，用生理盐水冲洗并浸泡，即得到无菌的纳米银生物仿生敷料。
纳米银粒子的制备：
(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液：准确称取0.085gAgNO3置于容器中，用亚沸水溶解，转移至500mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质后加到用亚沸水润洗过的容器中；
(2)10mg/mL Na3C6H5O7·2H2O溶液：准确称取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于容器中并用亚沸水溶解，转移至10mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质；
(3)加热并搅拌盛有AgNO3溶液的容器，沸腾后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反应30min左右后，脱离热源，自然冷却，即得到10～100nm的纳米银粒子溶液。
壳聚糖膜的制备：
(1)0.5～10％醋酸溶液：取0.5～10mL冰醋酸于容器中，加90～99.5mL亚沸水，混匀；
(2)1～8％壳聚糖溶液：称1～8g壳聚糖至容器中，加0.5～10％醋酸溶液100mL，搅拌至全部溶解；
(3)将壳聚糖溶液倒入负压抽滤装置抽滤。抽滤完毕，静置除气泡后，倒入培养皿中，每皿10～50mL；
(4)将培养皿平放在烘箱中烘干成膜，控制温度在30～50℃；
(5)1～10％NaOH溶液：称取5～50gNaOH于容器中，加亚沸水溶解；
(6)将壳聚糖膜放入1～10％NaOH溶液中，加热至沸腾后计时0.5～3h；
(7)将NaOH处理过的壳聚糖膜取出，用自来水清洗至中性，再用去离子水浸泡过夜；
(8)在超净工作台中将壳聚糖膜取出，置于无菌的容器中，75％酒精浸泡0.5～3d后，取出，紫外灯照射1～5h，即得到无菌的壳聚糖膜。
纳米银生物仿生敷料的制备：
(1)在超净工作台中过滤纳米银粒子溶液；
(2)在超净工作台中将壳聚糖膜完全浸泡在纳米银粒子溶液中，4℃冰箱保存0.5～4d；
(3)在超净工作台中把壳聚糖膜取出，用生理盐水冲洗并浸泡，即得到无菌的纳米银生物仿生敷料。
本发明的有益效果为：以壳聚糖和纳米银为原料构成的纳米银生物仿生敷料具有良好的促进表皮角质形成细胞生长，加速创面愈合的功能，而且组装在壳聚糖膜上的纳米银粒子能不断地作用于再生细菌，具有持续、高效的杀菌特点，无耐药性和过敏现象发生。纳米银粒子体积小，具有极大的接触面积，在能有效地控制创面细菌的前提下，减少了贵金属银的用量。此外，虽然纳米银生物仿生敷料覆盖伤口，早期须加以包扎、固定，但是当渗出物变干，该敷料便与创面牢固粘附，可以不包扎。半透明的纳米银生物仿生敷料可方便地观察伤口，而且创面愈合后，该敷料可自行与创面分离。使用该敷料换药次数少，减少了换药时的痛苦。纳米银生物仿生敷料不会产生耐药性、无过敏现象发生。该生物仿生敷料的促进表皮角质形成细胞生长、加速创面愈合的功能、持久抗感染能力以及良好的生物相容性，在生命科学领域，尤其是在医学领域，将具有广泛的应用前景。
以下结合实施例对本发明作进一步的详细说明：
具体实施方式
实施例一：
制备过程：
§1.纳米银粒子的制备：
(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液：准确称取0085gAgNO3置于烧杯中，用亚沸水溶解，转移至500mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质后加到用亚沸水润洗过的容器中；
(2)10mg/mLNa3C6H5O7·2H2O溶液：准确称取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于烧杯中并用亚沸水溶解，转移至10mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质；
(3)加热并搅拌盛有AgNO3溶液的容器，沸腾后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反应30min左右后，脱离热源，自然冷却，即得到10～100nm的纳米银粒子溶液。
§2.壳聚糖膜的制备：
(1)0.5％醋酸溶液：取0.5mL冰醋酸于容器中，加99.5mL亚沸水，混匀；
(2)1％壳聚糖溶液：称1g壳聚糖至容器中，加0.5％醋酸溶液100mL，搅拌至全部溶解；
(3)将壳聚糖溶液倒入负压抽滤装置抽滤。抽滤完毕，静置除气泡后，倒入培养皿中，每皿10mL；
(4)将培养皿平放在烘箱中烘干成膜，控制温度在30℃；
(5)1％NaOH溶液：称取5gNaOH于容器中，加亚沸水溶解；
(6)将壳聚糖膜放入1％NaOH溶液中，加热至沸腾后计时0.5h；
(7)将NaOH处理过的壳聚糖膜取出，用自来水清洗至中性，再用去离子水浸泡过夜；
(8)在超净工作台中将壳聚糖膜取出，置于无菌的容器中，用75％酒精浸泡0.5d后，取出，紫外灯照射1h，即得到无菌的壳聚糖膜。
§3.纳米银生物仿生敷料的制备：
(1)在超净工作台中过滤纳米银粒子溶液；
(2)在超净工作台中将壳聚糖膜完全浸泡在纳米银粒子溶液中，4℃冰箱保存0.5d；
(3)在超净工作台中将壳聚糖膜取出，用生理盐水冲洗并浸泡，即得到无菌的纳米银生物仿生敷料。
实施例二：
§1.纳米银粒子的制备：
(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液：准确称取0.085gAgNO3置于烧杯中，用亚沸水溶解，转移至500mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质后加到用亚沸水润洗过的容器中；
(2)10mg/mL Na3C6H5O7·2H2O溶液：准确称取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于烧杯中并用亚沸水溶解，转移至10mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质；
(3)加热并搅拌盛有AgNO3溶液的容器，沸腾后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反应30min左右后，脱离热源，自然冷却，即得到10～100nm的纳米银粒子溶液。
§2.壳聚糖膜的制备：
(1)1％醋酸溶液：取1mL冰醋酸于容器中，加99mL亚沸水，混匀；
(2)1.5％壳聚糖溶液：称1.5g壳聚糖至容器中，加1％醋酸溶液100mL，搅拌至全部溶解；
(3)将壳聚糖溶液倒入负压抽滤装置抽滤。抽滤完毕，静置除气泡后，倒入培养皿中，每皿20mL；
(4)将培养皿平放在烘箱中烘干成膜，控制温度在37℃；
(5)5％NaOH溶液：称取25gNaOH于容器中，加亚沸水溶解；
(6)将壳聚糖膜放入5％NaOH溶液中，加热至沸腾后计时1h；
(7)将NaOH处理过的壳聚糖膜取出，用自来水清洗至中性，再用去离子水浸泡过夜；
(8)在超净工作台中将壳聚糖膜取出，置于无菌的容器中，用75％酒精浸泡1d后，取出，紫外灯照射2h，即得到无菌的壳聚糖膜。
§3.纳米银生物仿生敷料的制备：
(1)在超净工作台中过滤纳米银粒子溶液；
(2)在超净工作台中将壳聚糖膜完全浸泡在纳米银粒子溶液中，4℃冰箱保存1d；
(3)在超净工作台中将壳聚糖膜取出，用生理盐水冲洗并浸泡，即得到无菌的纳米银生物仿生敷料。
实施例三：
§1.纳米银粒子的制备：
(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液：准确称取0.085gAgNO3置于烧杯中，用亚沸水溶解，转移至500mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质后加到用亚沸水润洗过的容器中；
(2)10mg/mL Na3C6H5O7·2H2O溶液：准确称取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于烧杯中并用亚沸水溶解，转移至10mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质；
(3)加热并搅拌盛有AgNO3溶液的容器，沸腾后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反应30min左右后，脱离热源，自然冷却，即得到10～100nm的纳米银粒子溶液。
§2.壳聚糖膜的制备：
(1)5％醋酸溶液：取5mL冰醋酸于容器中，加95mL亚沸水，混匀；
(2)5％壳聚糖溶液：称5g壳聚糖至容器中，加5％醋酸溶液100mL，搅拌至全部溶解；
(3)将壳聚糖溶液倒入负压抽滤装置抽滤。抽滤完毕，静置除气泡后，倒入培养皿中，每皿30mL；
(4)将培养皿平放在烘箱中烘干成膜，控制温度在45℃；
(5)8％NaOH溶液：称取40gNaOH，于容器中，加亚沸水溶解；
(6)将壳聚糖膜放入8％NaOH溶液中，加热至沸腾后计时2h；
(7)将NaOH处理过的壳聚糖膜取出，用自来水清洗至中性，再用去离子水浸泡过夜；
(8)在超净工作台中将壳聚糖膜取出，置于无菌的容器中，用75％酒精浸泡2d后，取出，紫外灯照射3h，即得到无菌的壳聚糖膜。
§3.纳米银生物仿生敷料的制备：
(1)在超净工作台中过滤纳米银粒子溶液；
(2)在超净工作台中将壳聚糖膜完全浸泡在纳米银粒子溶液中，4℃冰箱保存2d；
(3)在超净工作台中将壳聚糖膜取出，用生理盐水冲洗并浸泡，即得到无菌的纳米银生物仿生敷料。
实施例四：
§1.纳米银粒子的制备：
(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液：准确称取0.085gAgNO3置于烧杯中，用亚沸水溶解，转移至500mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质后加入到用亚沸水润洗过的容器中；
(2)10mg/mL Na3C6H5O7·2H2O：准确称取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于烧杯中并用亚沸水溶解，转移至10mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质；
(3)加热并搅拌盛有AgNO3溶液的容器，沸腾后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反应30min左右后，脱离热源，自然冷却，即得到10～100nm的纳米银粒子溶液。
§2.壳聚糖膜的制备：
(1)10％醋酸溶液：取10mL冰醋酸于容器中，加90mL亚沸水，混匀；
(2)8％壳聚糖溶液：称8g壳聚糖至容器中，加10％醋酸溶液100mL，搅拌至全部溶解；
(3)将壳聚糖溶液倒入负压抽滤装置抽滤。抽滤完毕，静置除气泡后，倒入培养皿中，每皿50mL；
(4)将培养皿平放在烘箱中烘干成膜，控制温度在50℃；
(5)10％NaOH溶液：称取50gNaOH于容器中，加亚沸水溶解；
(6)将壳聚糖膜放入10％NaOH溶液中，加热至沸腾后计时3h；
(7)将NaOH处理过的壳聚糖膜取出，用自来水清洗至中性，再用去离子水浸泡过夜；
(8)在超净工作台中将壳聚糖膜取出，置于无菌的容器中，用75％酒精浸泡3d后，取出，紫外灯照射5h，即得到无菌的壳聚糖膜。
§3.纳米银生物仿生敷料的制备：
(1)在超净工作台中过滤纳米银粒子溶液；
(2)在超净工作台中将壳聚糖膜完全浸泡在纳米银粒子溶液中，4℃冰箱保存4d；
(3)在超净工作台中将壳聚糖膜取出，用生理盐水冲洗并浸泡，即得到无菌的纳米银生物仿生敷料。
实施例五：
§1.纳米银粒子的制备：
(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液：准确称取0.085gAgNO3置于烧杯中，用亚沸水溶解，转移至500mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质后加到用亚沸水润洗过的容器中；
(2)10mg/mL Na3C6H5O7·2H2O溶液：准确称取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于烧杯中并用亚沸水溶解，转移至10mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质；
(3)加热并搅拌盛有AgNO3溶液的容器，沸腾后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反应30min左右后，脱离热源，自然冷却，即得到10～100nm的纳米银粒子溶液。
§2.壳聚糖膜的制备：
(1)3％醋酸溶液：取3mL冰醋酸于容器中，加97mL亚沸水，混匀；
(2)3％壳聚糖溶液：称3g壳聚糖至容器中，加3％醋酸溶液100mL，搅拌至全部溶解；
(3)将壳聚糖溶液倒入负压抽滤装置抽滤。抽滤完毕，静置除气泡后，倒入培养皿中，每皿15mL；
(4)将培养皿平放在烘箱中烘干成膜，控制温度在33℃；
(5)3％NaOH溶液：称取15gNaOH，于容器中，加亚沸水溶解；
(6)将壳聚糖膜放入3％NaOH溶液中，加热至沸腾后计时1.5h；
(7)将NaOH处理过的壳聚糖膜取出，用自来水清洗至中性，再用去离子水浸泡过夜；
(8)在超净工作台中将壳聚糖膜取出，置于无菌的容器中，用75％酒精浸泡1.5d后，取出，紫外灯照射4h，即得到无菌的壳聚糖膜。
§3.纳米银生物仿生敷料的制备：
(1)在超净工作台中过滤纳米银粒子溶液；
(2)在超净工作台中将壳聚糖膜完全浸泡在纳米银粒子溶液中，4℃冰箱保存1.5d；
(3)在超净工作台中将壳聚糖膜取出，用生理盐水冲洗并浸泡，即得到无菌的纳米银生物仿生敷料。
实施例六：
§1.纳米银粒子的制备：
(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液：准确称取0.085gAgNO3置于烧杯中，用亚沸水溶解，转移至500mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质后加入到用亚沸水润洗过的容器中；
(2)10mg/mL Na3C6H5O7·2H2O：准确称取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于烧杯中并用亚沸水溶解，转移至10mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质；
(3)加热并搅拌盛有AgNO3溶液的容器，沸腾后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反应30min左右后，脱离热源，自然冷却，即得到10～100nm的纳米银粒子溶液。
§2.壳聚糖膜的制备：
(1)8％醋酸溶液：取8mL冰醋酸于容器中，加92mL亚沸水，混匀；
(2)7％壳聚糖溶液：称7g壳聚糖至容器中，加8％醋酸溶液100mL，搅拌至全部溶解；
(3)将壳聚糖溶液倒入负压抽滤装置抽滤。抽滤完毕，静置除气泡后，倒入培养皿中，每皿40mL；
(4)将培养皿平放在烘箱中烘干成膜，控制温度在41℃；
(5)9％NaOH溶液：称取45gNaOH于容器中，加亚沸水溶解；
(6)将壳聚糖膜放入9％NaOH溶液中，加热至沸腾后计时2.5h；
(7)将NaOH处理过的壳聚糖膜取出，用自来水清洗至中性，再用去离子水浸泡过夜；
(8)在超净工作台中将壳聚糖膜取出，置于无菌的容器中，用75％酒精浸泡2.5d后，取出，紫外灯照射2.5h，即得到无菌的壳聚糖膜。
§3.纳米银生物仿生敷料的制备：
(1)在超净工作台中过滤纳米银粒子溶液；
(2)在超净工作台中将壳聚糖膜完全浸泡在纳米银粒子溶液中，4℃冰箱保存3d；
(3)在超净工作台中将壳聚糖膜取出，用生理盐水冲洗并浸泡，即得到无菌的纳米银生物仿生敷料。
下面用本发明治疗SD大鼠深II度切割伤的实验来说明本发明的技术效果。
1、材料与方法
1.1 实验动 物清洁级SD大鼠15只，每只体重200g左右，由南通大学实验动物中心提供。
1.2 实验器材 取皮刀，持针器，镊子，剪刀，纱布，手术针，手术线，金属网罩，1％聚维酮碘，0.05％洗必泰，8％硫化钠溶液，3％戊巴比妥钠
1.3 实验步骤
1.3.1 实验前一天，用3％戊巴比妥钠麻醉SD大鼠，剪刀剪去背部毛发，再用8％的硫化钠溶液脱毛。
1.3.2 手术当天3％戊巴比妥钠麻醉SD大鼠，常规消毒、铺巾，用取皮刀在背部削到深II度，面积在36.2±1.8cm2。生理盐水冲洗3遍，待用。
1.3.3将SD大鼠随机分成三组：
实验组------纳米银生物仿生敷料组：将纳米银/壳聚糖膜覆盖
创面，周缘缝合数针，用消毒纱布覆盖，外用金
属网罩固定缝合；
对照I组---磺胺嘧啶银暴露保痂组：外用磺胺嘧啶银粉，暴
露保痂治疗；
对照II组---壳聚糖膜组：将壳聚糖膜覆盖创面，周缘缝合数
针，用消毒纱布覆盖，外用金属网罩固定缝合。
2、实验结果
2.1实验第九天揭开膜后的对比情况(见表.1)
实验组------纳米银生物仿生敷料组，该组SD大鼠术后9天除
⑤号有轻微感染尚未全愈外，其它大鼠创面基本
愈合，愈合率分别为99.4％，98.7％，97.2％，94.6％。
对照I组---磺胺嘧啶银暴露保痂组，该组SD大鼠术后9天有3
只感染未愈，其它未感染的2只术后创面愈合率
也仅有44.4％和28.6％。
对照II组---壳聚糖膜组，该组SD大鼠术后9天有3只感染未
愈，其它未感染的2只术后9天创面愈合率也不
高，分别为79.7％和90.9％。
2.2组织学观察(见表.2)
实验组-------纳米银生物仿生敷料组，由术后6天取材病理
切片，可见该组SD大鼠创面已形成连续的上皮
层，表皮各层基本形成，皮下有丰富的皮脂腺。
对照I组---磺胺嘧啶银暴露保痂组，由术后6天取材病理切
片，可见该组SD大鼠创面基本没形成上皮层，
皮下炎性细胞多。
对照II组---壳聚糖膜组，由术后6天取材病理切片，可见部
分SD大鼠创面形成不连续的上皮层，皮下有少
量皮脂腺，未形成上皮层的皮下有少量炎性细
胞。
2.3动物创面感染及愈合情况(见表.3)
3、讨论
从本实验的术后9天愈合情况照片、术后6天取材病理切片可知，纳米银生物仿生敷料的促进深II度削皮创面愈合作用明显好于磺胺嘧啶银和壳聚糖膜，大大缩短了愈合周期。从表3可知，纳米银生物仿生敷料组感染少，感染面积小，程度轻；未感染SD大鼠的术后9天创面愈合率明显高于其它两组，与愈合情况照片和病理切片照片结果一致。此外，使用纳米银生物仿生敷料无皮肤红肿等过敏现象发生，愈合过程中无需换药，减少了换药时的痛苦。而且从本实验观察到，创面愈合后，纳米银生物仿生敷料可自行与创面分离，无需另外处理。
经纳米技术处理后的银粒子其抗菌性能大大提高，将其组装到壳聚糖膜上后，通过一定的缓释作用，可持续不断地作用于再生细菌，因而本敷料具有强烈且持久的抗感染能力。本敷料生物相容性好，无毒，加速创面愈合，缩短愈合周期。在创面覆盖该敷料后既有隔离细菌，保护创面的作用，又有合适的透湿、透气性，防止创面积液。此外，虽然纳米银生物仿生敷料覆盖伤口，早期须加以包扎、固定，但是当渗出物变干，该敷料便与创面牢固粘附，可以不包扎。半透明的纳米银生物仿生敷料可方便地观察伤口。使用该敷料换药次数少，减少了换药时的痛苦。另外纳米银生物仿生敷料不会产生耐药性、无过敏现象发生。
关于纳米银抗菌机理的探讨：纳米级材料比表面积大，且与粒径大小成反比，由于粒径的减少，使处于表面层的原子数迅速增高，导致原配位不足，不饱和键增多，原子的表面能增高，使纳米级的超微粒子的化学活性增强。当纳米银生物仿生敷料覆盖到创面后，纳米银粒子与含-SH的酶结合，使酶丧失活性而导致病菌死亡，从而达到杀菌的目的。
本产品的生产工艺不复杂，成膜迅速，使用方便，可于临床推广应用。
表.1实验第九天揭膜后情况
| 组别 | 实验动物编号 | 愈合情况(图略) | 结论 |
| 纳米银︵生实物验仿组生︶敷料组 | ①②③④⑤ | 削成深II度创面，术后9天创面全部愈合，仅取材做病理切片的部位尚未愈合。削成深II度创面，术后9天除取材部位未愈合外，其它部位创面愈合良好，可见明显的表皮各层结构。削成深II度创面，除取材做病理切片部位外，其它部位创面愈合良好。削成深II度创面，由创面可以看到清晰的毛细血管；除取材部位和缝针处，创面基本愈合。削成深II度创面，术后9天创面大部分愈合，局部有轻度感染，尚未愈合。 | 除⑤号有轻微感染尚未全愈外，其它大鼠创面基本愈合。 |
| 磺︵胺对嘧照啶I银组组︶ | ①②③④⑤ | 削成深II度创面，术后9天小部分创面上皮化，大部分创面仍覆盖暗红痂皮。削成深II度创面外用SD-Ag暴露保痂治疗，术后9天少部分创面上皮化，痂皮硬。削成深II度创面，术后9天创面痂皮覆盖，痂皮硬、厚，痂下有脓性分泌物，经细菌培养为金黄色葡萄球菌。削成深II度创面外用SD-Ag暴露保痂治疗，术后9天厚痂下两处见有脓性分泌物削成深II度创面，术后9天痂皮厚、硬，痂下有脓性分泌物。 | 术后9天有3只痂下有脓性分泌物，未愈；其它未感染的2只痂皮厚、硬，基本未上皮化。 |
| 壳︵聚对糖照膜II组组︶ | ①②③④⑤ | 削成深II度创面，术后9天揭开壳聚糖膜大部分创面愈合，散在未愈创面有淡黄色薄痂覆盖，创面干燥。削成深II度创面，术后9天部分膜未脱落，不易揭开，揭开处有渗血，散在创面有轻微感染。削成深II度创面，术后9天大部分创面已经愈合削成深II度创面，术后9天大部分创面已愈合，部分创面感染加深。削成深II度创面，术后9天部分创面轻微感染，部分创面膜不易揭开，未愈合。 | 术后9天有3只感染未愈，其它未感染的2只术后大部分(80％)创面基本愈合。 |
表.2术后六天取材病理切片情况
| 组别 | 实验动物编号 | 切片情况(图略) | 结论 |
| 纳米银生︵物实仿验生组敷︶料组 | ①②③④⑤ | 由6天切片可见已形成明显的上皮层，且有较多的毛囊和皮脂腺形成连续且较厚的上皮层，用可见较多毛根，皮下有丰富的皮脂腺形成连续上皮层，有毛根，表皮层可见较多毛囊形成连续且较厚的上皮层，有毛囊上皮化，皮下有丰富的皮脂腺 | 已形成连续的上皮层，而且表皮各层结构基本形成，皮下有较丰富的毛囊和皮脂腺。 |
| 磺︵胺对嘧照啶I银组组︶ | ①②③④⑤ | 有大量的炎性细胞，没有上皮化大量炎性细胞，没有上皮化有大量炎性细胞，没有上皮化炎性细胞浸润，未上皮化没有上皮化，有炎性细胞 | 大量炎性细胞浸润，没有形成上皮层。 |
| 壳︵聚对糖照膜II组组︶ | ①②③④⑤ | 形成连续的上皮层，无毛囊形成连续的上皮层，但较薄，有毛囊和大量皮脂腺没有形成连续的上皮层，仅有少数几个毛囊和皮脂腺未上皮化，仅有少量毛囊和皮脂腺未形成连续的上皮层，有少量毛囊和皮脂腺 | 各只大鼠愈合情况差别大，不稳定。 |
表.3动物创面感染及愈合情况
| 组别 | 编号 | 感染情况 | 9天愈合率(％) | 愈合时间(d) |
| 纳 ︵米 实银 验生 组物 ︶仿生敷料组 | ①②③④⑤ | 未未未未轻微感染 | 99.498.797.294.681.7 | 9 |
| 磺︵胺对嘧照啶I银组组︶ | ①②③④⑤ | 未未感染感染感染 | 44.428.615.531.620.6 | 18 |
| 壳︵聚对糖照膜II组组︶ | ①②③④⑤ | 未轻微感染未感染加深轻微感染 | 79.746.790.977.580.2 | 13 |
Claims (10)
1、一种纳米银生物仿生敷料，其特征是：通过纳米技术及自组装技术，在壳聚糖膜上组装纳米银粒子层。
2、根据权利要求1所述的纳米银生物仿生敷料，其特征是：纳米银粒子是通过自组装技术与壳聚糖分子上的氨基形成银-氮键，使纳米银粒子均匀牢固地组装在壳聚糖膜上。
3、根据权利要求1或2所述的纳米银生物仿生敷料，其特征是：组装在壳聚糖膜上的纳米银粒径大小为10～100nm。
4、一种权利要求1所述的纳米银生物仿生敷料的制备方法，其特征是：包括纳米银粒子的制备、壳聚糖膜的制备及最终纳米银生物仿生敷料的制备：
(1)纳米银粒子的制备：配制AgNO3溶液后置于容器中，搅拌并加热，沸腾后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反应一定时间后，脱离热源，自然冷却，即得到纳米银粒子溶液；
(2)壳聚糖膜的制备：抽滤用醋酸溶液溶解的壳聚糖，然后倒入培养皿中，放烘箱中烘干成膜。最后将膜用NaOH处理，用自来水清洗即得到壳聚糖膜；
(3)纳米银生物仿生敷料的制备：将壳聚糖膜放在纳米银粒子溶液中，通过自组装技术即得到纳米银生物仿生敷料。
5、根据权利要求4所述的纳米银生物仿生敷料的制备方法，其特征是：
纳米银粒子的制备：
(1)将AgNO3置于容器中，用亚沸水溶解定容，过滤后加到容器中；
(2)将Na3C6H5O7·2H2O置于容器中溶解，转移定容后过滤；
(3)加热并搅拌盛有AgNO3溶液的容器，沸腾后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反应一定时间后，脱离热源，自然冷却，即得到纳米银粒子溶液。
6、根据权利要求4所述的纳米银生物仿生敷料的制备方法，其特征是：
壳聚糖膜的制备：
(1)将壳聚糖加入醋酸溶液中，搅拌至全部溶解；
(2)将壳聚糖溶液倒入负压抽滤装置进行抽滤，抽滤完毕，静置除气泡后，倒入培养皿中；
(3)将培养皿放到烘箱中烘干成膜；
(4)将壳聚糖膜放入NaOH溶液中，加热至沸腾以中和醋酸；
(5)取出用NaOH处理过的壳聚糖膜，用自来水清洗至中性，再用去离子水浸泡过夜；
(6)将壳聚糖膜取出经酒精浸泡、紫外灯照射后，即得到无菌的壳聚糖膜。
7、根据权利要求4所述的纳米银生物仿生敷料的制备方法，其特征是：
纳米银生物仿生敷料的制备：
(1)将壳聚糖膜完全浸泡在过滤的纳米银粒子溶液中，低温保存。
(2)取出壳聚糖膜，用生理盐水冲洗并浸泡，即得到无菌的纳米银生物仿生敷料。
8、根据权利要求5所述的纳米银生物仿生敷料的制备方法，其特征是：
纳米银粒子的制备：
(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液：准确称取0.085gAgNO3置于容器中，用亚沸水溶解，转移至500mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质后加到用亚沸水润洗过的容器中；
(2)10mg/mL Na3C6H5O7·2H2O溶液：准确称取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于容器中，用亚沸水溶解，转移至10mL容量瓶中，定容。过滤除去杂质；
(3)加热并搅拌盛有AgNO3溶液的容器至沸腾，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反应30min左右后，脱离热源，自然冷却，即得到10～100nm的纳米银粒子溶液。
9、根据权利要求6所述的纳米银生物仿生敷料的制备方法，其特征是：
壳聚糖膜的制备：
(1)0.5～10％醋酸溶液：取0.5～10mL冰醋酸于容器中，加90～99.5mL亚沸水，混匀；
(2)1～8％壳聚糖溶液：称1～8g壳聚糖至容器中，加0.5～10％醋酸溶液100mL，搅拌至全部溶解；
(3)将壳聚糖溶液倒入负压抽滤装置抽滤。抽滤完毕，静置除气泡后，倒入培养皿中，每皿10～50mL；
(4)将培养皿平放在烘箱中烘干成膜，控制温度在30～50℃；
(5)1～10％NaOH溶液：称取5～50gNaOH于容器中，加亚沸水溶解；
(6)将壳聚糖膜放入1～10％NaOH溶液中，加热至沸腾后计时0.5～3h；
(7)将NaOH处理过的壳聚糖膜取出，用自来水清洗至中性，再用去离子水浸泡过夜；
(8)在超净工作台中将壳聚糖膜取出，置于无菌的容器中，用75％的酒精浸泡0.5～3d后，取出，紫外灯照射1～5h即得到无菌的壳聚糖膜。
10、根据权利要求7所述的纳米银生物仿生敷料的制备方法，其特征是：
纳米银生物仿生敷料的制备：
(1)在超净工作台中过滤纳米银粒子溶液；
(2)在超净工作台中将壳聚糖膜完全浸泡在纳米银粒子溶液中，4℃冰箱保存0.5～4d；
(3)在超净工作台中将壳聚糖膜取出，用生理盐水冲洗并浸泡，即得到无菌的纳米银生物仿生敷料。
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