CN1771992A - 一种脑提取物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种脑提取物，由除人以外的哺乳动物脑组织中提取得到，所述的除人以外的哺乳动物为猪、狗、牛、羊、鹿、马或兔，脑提取物含有多肽、游离赖氨酸、游离谷氨酸和总糖，所有组分分子量为5000～10000道尔顿。所述的脑提取物中多肽∶游离赖氨酸∶游离谷氨酸∶总糖的重量份比为1～200∶0.1～100∶0.1～80∶0.1～12。本发明所述的药物组合物含有治疗脑血管疾病及其引起的脑代谢障碍后遗症的活性物质，该活性物质能调节和改善脑代谢。

Description

一种脑提取物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种脑提取物及其制备方法和用途，具体地说，涉及一种由从除人以外的哺乳动物脑组织中提取的含有多肽、游离氨基酸、总糖的脑提取物，以及该提取物的制备方法和用途，属于生物制剂领域。

背景技术

脑组织中的游离氨基酸含量以谷氨酸为最高，其次是牛磺酸，再就是天冬氨酸。谷氨酸是大脑内主要兴奋性神经递质。脑损伤可能导致脑组织离子失衡，引起与谷氨酸和其他兴奋性氨基酸相关的兴奋毒性级联反应，并导致最初损伤部位周围脑组织的神经元死亡。赖氨酸是八种必需氨基酸之一，它在生物机体的代谢中起着重要的作用，赖氨酸缺乏会引起蛋白质功能障碍，影响生长发育，导致生长障碍。因植物性蛋白中普遍缺乏赖氨酸，故营养学家称之为“第一必须氨基酸”。赖氨酸在医药上具有特殊的用途，它是合成脑神经及生殖细胞、核蛋白、血红蛋白的必须物质。

随着人口自然增长、结构老龄化以及饮食结构的变化，老年疾病的发生日趋严重，其中脑血管病主要致死病之一。动物脑蛋自水解物类药物作为这类疾病的特效药，近年来得到了广泛关注，它的化学成分、药理作用、临床应用、生产工艺等都得到不同程度的研究。

已面市的脑蛋自水解物类药物可分为片剂、口服液和注射液，主要成分都是动物脑脱脂后再经蛋白酶降解产生的含有游离氨基酸和分子量在10,000以下的小分子肽的混合物，但具体药效成分有差别，如脑蛋白水解物注射液是由猪脑组织中提取的不含蛋白质，约含80％游离氨基酸和20％小分子肽，与进口脑活素为同类产品，在临床上作为脑代谢改善药取的了不错的疗效。脑蛋白水解物能增加脑组织内葡萄糖和氧的利用，从而增加脑组织抗氧能力和机体应激能力，减轻脑组织损伤，促进脑细胞功能恢复，具有良好的健脑、益智、修复脑损伤的功效。但除了注射剂应用的一些不便外，同时也存在不少不良反应。

因此，有必要寻找一种成分更合理、效果更好、服用更方便的脑代谢改善药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种脑提取物，由除人以外的哺乳动物脑组织中提取得到。

本发明的另一目的在于提供上述脑提取物的制备方法。

本发明的再一目的是提供含有上述脑提取物的各种药物剂型。

本发明的最后一目的是提供上述脑提取物在制备治疗急慢性脑血管疾病、由脑血管疾病或脑外伤所引起的脑代谢障碍等后遗症、先天性脑发育不全、中枢神经系统感染、闭塞综合症、动脉硬化、血栓性静脉炎、毛细血管出血以及血管通透性升高引起的水肿药物方面的用途。

本发明所述的脑提取物由从除人以外的哺乳动物脑组织中提取得到，含有多肽、游离赖氨酸、游离谷氨酸和总糖，所有组分分子量为5000～10000道尔顿。

所述的除人以外的哺乳动物为猪、狗、牛、羊、鹿、马或兔，从生产成本、生产工艺、产品质量稳定性、临床疗效等因素考虑，上述除人以外的哺乳动物优选猪。

上述的脑提取物与磺基水杨酸反应，混匀，不发生混浊；与双缩脲反应，溶液应显蓝紫色至紫红色；与茚三酮反应，应显蓝紫色；与碱性枸橼酸铜试液反应显蓝紫色或紫色。

所述的脑提取物中多肽∶游离赖氨酸∶游离谷氨酸∶总糖的重量份比为1～200∶0.1～100∶0.1～80∶0.1～12。

该脑提取物中多肽∶游离赖氨酸∶游离谷氨酸∶总糖的重量份比进一步优选为3～40∶0.3～30∶0.3～20∶0.1～6；同时所有组分分子量优选为6000～8000道尔顿；

该脑提取物中多肽∶游离赖氨酸∶游离谷氨酸∶总糖的重量份比更优选为15～30∶3～15∶2～6∶1～3；并且所有组分分子量优选为8000道尔顿。

本发明所述的脑提取物的制备方法为：

取除人以外的哺乳动物脑组织，加0.5-2.5倍重量注射用水，高压匀浆，在-30℃～-40℃下冷冻，冻实后在10～40℃融化后，加热至80-95℃，保持15-30分钟，然后自然降温至常温，在0～5℃下以10000～12000转/分的速度在高速冷冻离心机上离心15～30分钟，然后分离上清液和沉淀，上清液备用；

向沉淀中加入0.1-1.5％沉淀重量的蛋白水解酶，在35～50℃下酶解2～8小时，酶解pH值控制为7.5-8.5，然后加入前述上清液，调节pH值至3.0～4.0，加热至80-95℃，保持15-30分钟后，自然降温至常温后，在0～5℃下以3500～4000转/分的速度在低速冷冻离心机上离心20～30分钟，然后将上清液过滤，滤液调pH值为6.5～7.5，加热至80～95℃，保持15～30分钟后，自然降温至常温，在0～5℃下以3500～4000转/分的速度在低速冷冻离心机上离心20～30分钟，离心后的上清液在-15℃～-20℃冷冻，冻实后在室温下融化，过滤，滤液用截留分子量为5000-10000超滤膜超滤，超滤液即为脑提取物。

所述的高压匀浆优选使用GRB1500-4S高压匀浆泵(上海东华高压匀浆厂)。

动物脑组织应为新鲜健康。

所述蛋白水解酶可以是胃蛋白酶或胰蛋白酶；优选使用胰蛋白酶；所述胰蛋白酶常用规格为1∶250(上海伯奥生物科技有限公司)。酶解适合温度为35-50℃，优选为37～42℃；为保持温度稳定，可采取夹层水浴保温的方法。

酶解适合pH值为7.5-8.5，优选为7.8～8.2。

为使本发明生产工艺、产品质量稳定，使用的酶应尽可能由固定生产商提供。

所述的过滤为现有技术中通用的纸浆过滤或澄清板过滤。

上述过程调pH值使用盐酸和/或氢氧化钠。

上述超滤膜优选为截留分子量为6000-10000的超滤膜，更优选截留分子量为8000的超滤膜。使用的超滤膜为市售产品，其生产商应为行业认可的生产单位，使用的滤膜型号与尺寸可根据具体的生产量、选用的超滤器尺寸来确定。

本发明所述的脑提取物的制备方法优选为：

取新鲜健康的哺乳动物脑组织，加0.8-1.2倍重量注射用水，用高压匀浆泵匀浆，-30℃～-40℃速冻，在10～20℃下融化；加热至80-85℃，保持15-20分钟，冷却至常温后在高速冷冻离心机上离心，0～5℃条件下以10000～12000转/分离心25～30分钟，上清液备用；沉淀加入按重量加入0.4-0.8％的胰蛋白酶，在37～42℃酶解3～5小时，酶解pH值控制为7.8-8.2，酶解结束将前述上清液加入，调节pH值至3.3～3.7，加热至80-90℃，保持15-20分钟，冷却至常温后在低速冷冻离心机上离心，0～5℃条件下以4000转/分的速度离心25～30分钟。上清液过滤，滤液调pH值为6.8～7.2，加热至80～90℃，保持15～20分钟，冷却至常温后在低速冷冻离心机上离心，0～5℃条件下以4000转/分的速度离心25～30分钟，上清液-15℃～-20℃冷冻，冷冻后融化，再经过滤处理，滤液用截留分子量为8000超滤膜超滤，超滤液即为脑提取物。

所述的脑提取物可以制成各种药剂学上可接受的剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、小容量注射剂、大容量注射剂或冻干粉针剂等，优选小容量注射剂、大容量注射剂或冻干粉针剂，最优选口服液。

上述各剂型可以按照药剂学上的常规方法进行。

本发明所述脑提取物含有一种大脑所特有的肽能神经营养物，能以多种方式作用于中枢神经，调节和改善神经元的代谢，促进突触的形成，诱导神经元的分化，并进一步保护神经细胞免受各种缺血和神经毒素的损害。

所述脑提取物可通过血脑屏障，促进脑内蛋白质的合成，影响呼吸链，具有抗缺氧的保护能力，改善脑内能量代谢，可激活腺苷酸环化酶和催化其他激素系统，提供神经递质，肽类激素及辅酶前体；可用于老年痴呆、脑供血不足，老年脑力退化及抑郁症；帕金森氏综合症的支持治疗；脑神经功能障碍、精神分裂症；神经衰弱，神经性头痛；先天性大脑发育迟缓、发育不全、智力低下，记忆障碍等；脑外伤急性期及其后遗症；各类型脑炎、脑膜炎急性期及其后遗症；促进神经外科手术(脑肿瘤、颅脑外伤、脑血管炎症等)脑神经组织修复；对脑代谢不全有辅助改善作用，也用于蛋白质缺乏、神经衰弱病人以及对一般蛋白质消化吸收障碍的病例；可用于制备治疗脑血栓、脑栓塞、脑痉挛等急慢性脑血管疾病，颅脑外伤及脑血管疾病、脑供血不全、脑梗塞所引起的脑代谢障碍及后遗症，闭塞综合症、动脉硬化、血栓性静脉炎、毛细血管出血以及血管通透性升高引起的水肿，先天性脑发育不全、中枢神经系统感染、老年性痴呆，周围神经损伤疾病药物。

本发明最优选剂型口服液的规格为：

10ml/支，每ml含多肽为1.7～2.3mg，含游离赖氨酸为0.8～1.2mg，含游离谷氨酸为0.4～0.6mg，含总糖不低于120μg。

服用方法为口服，一日3次，一次10ml。

本发明在现有工艺上进行了多年的研究，出人意料的发现，将一般生化实验室中应用的低温高速离心应用到制备脑提取物中，可以收集到更多的低分子量活性多肽和重要的氨基酸，同时也将大分子的蛋白酶沉淀下来，避免了对活性物质的降解；本发明经过多次试验，发现其中氨基酸以赖氨酸、谷氨酸为主，较一般工艺富集，同时在药理、临床试验中也发现了积极的效果。

本发明的另一个有益效果是保留了提取物中的总糖，具体含有葡萄糖、果糖、及各种多糖、核糖等，一方面使本发明组合物具有高的营养、和大脑具有相同的物质，同时作为口服液应用时，糖与多肽的一定结合，保护了多肽类活性物质受到胃肠等酶的酶解，使更多的活性物质被吸收利用；同时本发明药物组合物作为口服液应用时，使用方便，有利于患者长期服用，对患者康复、缓解病情有很大好处；避免了长期使用注射液的不便。

本发明所述的药物组合物含有治疗脑血管疾病及其引起的脑代谢障碍后遗症的活性物质，该活性物质能调节和改善脑代谢。

本发明所述的药物组合物含有治疗脑血管疾病及其引起的脑代谢障碍后遗症的活性物质，包括大量活性多肽和多种氨基酸。脑提取液所含的大量活性多肽、多种氨基酸等能透过血脑屏障，以多种形式作用于中枢神经，调整和改善神经元代谢，并影响其呼吸链，具有激活、改善脑内神经递质和酶的活性，保护神经细胞免受各种缺血和神经毒素的损害。能增加脑组织对葡萄糖的利用，改善脑细胞缺氧状态，对缺氧的脑组织具保护作用。可应用于制备治疗脑血栓、脑栓塞、脑痉挛等急慢性脑血管疾病药物方面的用途，可用于治疗颅脑外伤及脑血管疾病(脑供血不全、脑梗塞)所引起脑代谢障碍等后遗症，以及作为治疗闭塞综合症、动脉硬化、血栓性静脉炎、毛细血管出血以及血管通透性升高引起的水肿与先天性脑发育不全、中枢神经系统感染、老年性痴呆等药物中的应用。

具体实施方式

                                 实施例1

取新鲜健康的猪脑10Kg，加10L注射用水，使用高压匀浆泵(GRB1500-4S，上海东华高压匀浆)匀浆，在-35℃下冷冻，冻实后在15℃融化后，加热至80℃，保持15分钟，然后自然降温至常温，在4℃下以10000转/分的速度在高速冷冻离心机上离心30分钟，然后分离上清液和沉淀，上清液备用；

向沉淀中加入0.5％沉淀重量的胰蛋白酶[Trypsin，1∶250，Amresco 0458]，在37℃下酶解4小时，酶解pH值控制为8.0，然后加入前述上清液，调节pH值至3.5，加热至80℃，保持15分钟后，自然降温至常温后，在4℃下以4000转/分的速度在低速冷冻离心机上离心25分钟，然后将上清液过滤，滤液调pH值为7.0，加热至85℃，保持15分钟后，自然降温至常温，在4℃下以4000转/分的速度在低速冷冻离心机上离心25分钟，离心后的上清液在-15℃冷冻，冻实后在室温下融化，过滤，滤液用截留分子量为8000超滤膜超滤，超滤液即为脑提取物，其多肽含量为20mg/ml，游离赖氨酸含量为10mg/ml、游离谷氨酸含量为5mg/ml，总糖含量为1.6mg/ml。

                                 实施例2

取新鲜健康的狗脑10Kg，加10L注射用水，高压匀浆，在-35℃下冷冻，冻实后在20℃融化后，加热至85℃，保持15分钟，然后自然降温至常温，在1℃下以10000转/分的速度在高速冷冻离心机上离心25分钟，然后分离上清液和沉淀，上清液备用；

向沉淀中加入0.3％沉淀重量的胰蛋白酶[Trypsin，1∶250，Amresco 0458]，在40℃下酶解4小时，酶解pH值控制为8.0，然后加入前述上清液，调节pH值至3.0，加热至85℃，保持20分钟后，自然降温至常温后，在2℃下以3500转/分的速度在低速冷冻离心机上离心30分钟，然后将上清液过滤，滤液调pH值为7.0，加热至85℃，保持30分钟后，自然降温至常温，在2℃下以3500转/分的速度在低速冷冻离心机上离心30分钟，离心后的上清液在-20℃冷冻，冻实后在室温下融化，过滤，滤液用截留分子量为6000超滤膜超滤，超滤液即为脑提取物，其多肽含量为15mg/ml，游离赖氨酸含量为10mg/ml、游离谷氨酸含量为2mg/ml，总糖含量为3mg/ml。

                                 实施例3

取新鲜健康的牛脑10Kg，加15L注射用水，高压匀浆，在-30℃下冷冻，冻实后在30℃融化后，加热至90℃，保持30分钟，然后自然降温至常温，在2℃下以11000转/分的速度在高速冷冻离心机上离心20分钟，然后分离上清液和沉淀，上清液备用；

向沉淀中加入0.1％沉淀重量的胰蛋白酶[Trypsin，1∶250，Amresco 0458]，在45℃下酶解6小时，酶解pH值控制为7.5，然后加入前述上清液，调节pH值至3.5，加热至90℃，保持25分钟后，自然降温至常温后，在1℃下以3500转/分的速度在低速冷冻离心机上离心25分钟，然后将上清液过滤，滤液调pH值为7.5，加热至90℃，保持20分钟后，自然降温至常温，在1℃下以3500转/分的速度在低速冷冻离心机上离心25分钟，离心后的上清液在-20℃冷冻，冻实后在室温下融化，过滤，滤液用截留分子量为10000超滤膜超滤，超滤液即为脑提取物，其多肽含量为3mg/ml，游离赖氨酸含量为15mg/ml、游离谷氨酸含量为15mg/ml，总糖含量为6mg/ml。

                                 实施例4

取新鲜健康的羊脑10Kg，加20L注射用水，高压匀浆，在-35℃下冷冻，冻实后在35℃融化后，加热至95℃，保持20分钟，然后自然降温至常温，在3℃下以12000转/分的速度在高速冷冻离心机上离心15分钟，然后分离上清液和沉淀，上清液备用；

向沉淀中加入0.8％沉淀重量的胃蛋白酶，在50℃下酶解2小时，酶解pH值控制为8.5，然后加入前述上清液，调节pH值至4.0，加热至95℃，保持30分钟后，自然降温至常温后，在5℃下以4000转/分的速度在低速冷冻离心机上离心25分钟，然后将上清液过滤，滤液调pH值为7.5，加热至80℃，保持25分钟后，自然降温至常温，在5℃下以4000转/分的速度在低速冷冻离心机上离心25分钟，离心后的上清液在-15℃冷冻，冻实后在室温下融化，过滤，滤液用截留分子量为5000超滤膜超滤，超滤液即为脑提取物，其多肽含量为40mg/ml，游离赖氨酸含量为5mg/ml、游离谷氨酸含量为10mg/ml，总糖含量为3mg/ml。

                                 实施例5

取新鲜健康的马脑10Kg，加25L注射用水，高压匀浆，在-40℃下冷冻，冻实后在40℃融化后，加热至80℃，保持25分钟，然后自然降温至常温，在4℃下以12000转/分的速度在高速冷冻离心机上离心25分钟，然后分离上清液和沉淀，上清液备用；

向沉淀中加入1.5％沉淀重量的胃蛋白酶，在40℃下酶解4小时，酶解pH值控制为8.0，然后加入前述上清液，调节pH值至3.5，加热至85℃，保持25分钟后，自然降温至常温后，在4℃下以4000转/分的速度在低速冷冻离心机上离心20分钟，然后将上清液过滤，滤液调pH值为6.5，加热至85℃，保持15分钟后，自然降温至常温，在4℃下以4000转/分的速度在低速冷冻离心机上离心20分钟，离心后的上清液在-15℃冷冻，冻实后在室温下融化，过滤，滤液用截留分子量为8000超滤膜超滤，超滤液即为脑提取物，其多肽含量为65mg/ml，游离赖氨酸含量为20mg/ml、游离谷氨酸含量为4mg/ml，总糖含量为5mg/ml。

                                 实施例6

取新鲜健康的兔脑10Kg，加15L注射用水，高压匀浆，在-30℃下冷冻，冻实后在15℃融化后，加热至85℃，保持25分钟，然后自然降温至常温，在5℃下以11000转/分的速度在高速冷冻离心机上离心30分钟，然后分离上清液和沉淀，上清液备用；

向沉淀中加入1.0％沉淀重量的胃蛋白酶，在45℃下酶解5小时，酶解pH值控制为8.5，然后加入前述上清液，调节pH值至3.0，加热至80℃，保持20分钟后，自然降温至常温后，在0℃下以4000转/分的速度在低速冷冻离心机上离心30分钟，然后将上清液过滤，滤液调pH值为7.0，加热至90℃，保持30分钟后，自然降温至常温，在0℃下以4000转/分的速度在低速冷冻离心机上离心30分钟，离心后的上清液在-20℃冷冻，冻实后在室温下融化，过滤，滤液用截留分子量为6000超滤膜超滤，超滤液即为脑提取物，其多肽含量为25mg/ml，游离赖氨酸含量为13mg/ml、游离谷氨酸含量为11mg/ml，总糖含量为8mg/ml。

                               实施例7～12

分别取实施例1～6脑提取物，按公知的方法处理，制成颗粒，干燥后压片，得片剂。

                               实施例13～18

参照实施例1～6，加入适宜的调味剂(如蔗糖、柠檬酸等)，进行除菌灌装，或按公知的方法，罐装、灭菌、分装的口服液，口服液中各组分含量如下：

	多肽应为mg/mL	游离赖氨酸mg/mL	游离谷氨酸mg/mL	总糖μg/mL
					实施例13	1.7	1.2	0.4	125
实施例14	2.3	0.8	0.6	132
					实施例15	2.1	0.9	0.5	137
实施例16	2.2	1.1	0.4	151
					实施例17	1.8	0.8	0.6	144
实施例18	2.0	1.0	0.5	160

                               实施例19～24

参照实施例1～6，加入适宜的赋型剂(如右旋糖酐40、甘露醇等)，进行除菌灌装，按公知的方法，冷冻干燥制成冻干粉针产品。

                               实施例25～30

参照实施例1～6，将脑提取液投入到稀配罐中；在浓配罐中投入维脑路通和0.85％最终配制总体积的氯化钠，加入0.4‰活性炭煮沸脱炭过滤，冷却后，将药液过滤至稀配罐中，在稀配罐中补加注射用水至配液量，调PH为6.8～7.0，过滤。灌封于输液瓶中，100℃流通蒸汽灭菌45分钟，即得输液产品。

                                  实验例1

本实验例为实施例18口服液外观性状、pH值、蛋白质及其它规定的口服剂检查项目的检测。

本品为无色或浅黄色澄明液体。

pH值：应为6.0～8.0(中国药典2000年版二部VIH)。

蛋白质：取本品2ml，加20％磺基水杨酸溶液1ml，混匀，不得发生混浊或沉淀。

其他：应符合口服溶液剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版二部附录IO)。

                               实验例2

本实验例为实施例18口服剂液中主要组分的定性测定。

取本品1支，加水20ml溶解，作为供试品溶液。

(1)取供试品溶液5ml，加茚三酮试液数滴，加热，溶液应显蓝紫色。

(2)取供试品溶液5ml，加氢氧化钠溶液(6→10)2ml，加碱性枸橼酸铜试液0.2ml，混匀，室温放置15分钟，溶液应显蓝紫色或紫色。

以上三种实验为本发明药物组合物所含组份的定性反应，说明本发明药物组合中含有确定的组份。

                               实验例3

本实验例为实施例18口服液多肽定量测定。

取本品适量，加水制成每1ml含多肽0.15mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1.0ml，照福林酚测定法(附)测定，从回归方程中求出多肽含量。

试剂 碱性铜溶液  取氢氧化钠10g，碳酸钠50g，加水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g，加水50ml使其溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使其溶解，将两液混合，作为乙液。

临用前，合并甲、乙两液，并加水至500ml。

操作法  对照品溶液的制备 取牛血清白蛋白对照品，加水制成每1ml中含0.3mg的溶液。

供试品溶液的制备  照各品种项下规定的方法制备。

标准曲线的制备  精密量取对照品溶液0.0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，各加入福林酚试液(取福林试液中的贮备液1→16)4.0ml，立即混匀，置55℃水浴中准确反应5分钟，置冷水浴10分钟，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IV B)在650nm的波长处测定吸收度；以0号管作为空白。以对照品溶液浓度与相应吸收度计算回归方程。

测定法  精密量取供试品溶液1.0ml，照标准曲线的制备项下的方法，“自加入碱性铜试液”起，依法测定，从回归方程计算多肽的含量，并乘以稀释倍数，即得。

                               实验例4

本实验例为实施例18口服液中总糖的定量测定。

对照品溶液的制备：称取干燥至恒重的葡萄糖约50mg，置50ml量瓶中，加蒸馏水溶解并定容至刻度，混匀。取此溶液5.0ml，加水定容至50ml，混匀，即得。

供试品溶液的制备：取本品10ml，加水定容至50ml，作为供试品溶液。

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml分别置具塞试管中，各加入水至1.0ml，各加入5％苯酚溶液1.0ml，摇匀，加5ml硫酸，置37℃水浴中准确加热10分钟，迅速冷却至室温，以0号管为空白，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IVA)，在487nm的波长处测定吸收度，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲线并进行线性回归，其相关系数应大于0.99。

测定法：精密量取供试品溶液1ml，照标准曲线的制备方法，自“各加入5％苯酚溶液1.0ml”起，依法测定。从回归方程中求出总糖含量。

                               实验例5

本实验例说明了实施例18口服液治疗颅脑外伤后遗症的效果。

1、一般资料 本组38例，年龄38～70岁；病程1个月至3年；颅脑挫裂伤20例，脑震荡10例，颅内血肿术后8例，其中有昏迷病史22例。后遗症的主要表现为均有不同程度的头痛，头昏，头晕，失眠，多梦易惊，近事遗忘，记忆力减退，精神障碍以及偏瘫，失语，个别病例尚有阵发性抽搐。

2、治疗方法治疗组：本发明实施例15口服液10ml，每天3次，14天为一疗程3、疗效观察

3、疗效标准 痊愈：症状基本消失，恢复正常工作。显效：症状大部分消失，时有轻微头痛、头昏、头晕、记忆力较前下降者，但能坚持工作。无效：经治疗4个疗程，病情无明显改善者。

治疗结果38例中痊愈32例，显效3例，无效5例，总有效率为92.1％。

本试验证明本发明脑提取物口服液治疗颅脑外伤后遗症有很好的疗效。

                               比较例

1、病例选择：本组50例，男30例，女20例，年龄40～78岁，平均56岁；脑血栓28例，脑出血16例(出血量25ml以下9例，血肿清除术后7例)，脑梗死6例；急性期12例，恢复期21例，后遗症期17例；病程最长者为8年，对患者作头颅CT和MRI检查，均有不同程度脑软化或脑萎缩，并作血尿粪常规、肝功、血脂、全血比粘度、纤维蛋白原、血沉等测定；分成治疗组、对照组。

2、用药及观察方法：治疗组：5％GS250ml+本发明实施例18口服液10ml，iv gtt，qd，14天为一疗程；对照组：5％GS250ml+脑复康8g+胞二磷胆碱针0175g，iv gtt，qd，14天为一疗程。用药前后进行简易智能测验，智力障碍、语言障碍程度及偏瘫程度用国际标准长谷川简易智力量表检测和评估。

3、临床疗效评定：显效：智力恢复正常或语言障碍提高I级，肌力在原基础上提高I级；有效：在原基础上智力、语言提高I级，肌力提高I级；无效：智力、语言及肌力无变化。

4、统计学处理：治疗组及对照组神经功能缺损评分比较，采用t检验，临床疗效行卡方检验。治疗组与对照组临床症状改善有效率比较，见表1。结果：治疗组显效47例，有效28例，4例无效，总有效率达94％，其中23例智力低下者用药后肌力提高I级以上者10例，3例用药后感肢体无力，1例无明显变化，22例语言障碍者18例提高I级以上

                      表1两组疗效比较

组别	显效	有效	无效	总有效率(％)
					治疗组(n＝25)	18	5	2	92
对照组(n＝25)	11	8	6	76

脑血管障碍造成脑缺血缺氧，引起脑细胞坏死，神经细胞损伤，使其失去功能，随着病情的发展，出现脑软化、脑萎缩。传统治疗均以抗凝、溶栓、降脂、扩张血管、改善微循环、改善脑部供血，尽量减少脑细胞死亡，改善临床症状，但对已死亡的脑细胞或丧失功能的神经无能为力，而本发明所述的脑提取物主要成分为脑器官特异性多肽，并含有游离氨基酸和总糖，可通过血脑屏障，直接参与中枢和外周神经组织的代谢，使受损神经组织的核酸代谢和糖代谢恢复正常。它能促进交感、感觉等效应神经元的发育和分化。营养成熟的效应神经元，维持其存活与功能，就此我们临床观察脑血管障碍引起的脑萎缩患者获得了满意疗效，它对一些后遗症期患者智力恢复、语言障碍改善及肢体功能恢复起到良好的作用。

Claims (9)

1、一种脑提取物，由除人以外的哺乳动物脑组织中提取得到，其特征在于所述的脑提取物含有多肽、游离赖氨酸、游离谷氨酸和总糖，所有组分分子量为5000～10000道尔顿。

2、根据权利要求1所述的脑提取物，其特征在于，所述的除人以外的哺乳动物为猪、狗、牛、羊、鹿、马或兔，优选猪。

3、根据权利要求2所述的脑提取物，其特征在于，所述的脑提取物中多肽∶游离赖氨酸∶游离谷氨酸∶总糖的重量份比为1～200∶0.1～100∶0.1～80∶0.1～12；进一步优选为3～40∶0.3～30∶0.3～20∶0.1～6；同时所有组分分子量优选为6000～8000道尔顿；更优选为15～30∶3～15∶2～6∶1～3；并且所有组分分子量优选为8000道尔顿。

4、一种脑提取物的制备方法，其特征在于，所述方法为：取除人以外的哺乳动物脑组织，加0.5-2.5倍重量注射用水，高压匀浆，在-30℃～-40℃下冷冻，冻实后在10～40℃融化后，加热至80-95℃，保持15-30分钟，然后自然降温至常温，在0～5℃下以10000～12000转/分的速度在高速冷冻离心机上离心15～30分钟，然后分离上清液和沉淀，上清液备用；向沉淀中加入0.1-1.5％沉淀重量的蛋白水解酶，在35～50℃下酶解2～8小时，酶解pH值控制为7.5-8.5，然后加入前述上清液，调节pH值至3.0～4.0，加热至80-95℃，保持15-30分钟后，自然降温至常温后，在0～5℃下以3500～4000转/分的速度在低速冷冻离心机上离心20～30分钟，然后将上清液过滤，滤液调pH值为6.5～7.5，加热至80～95℃，保持15～30分钟后，自然降温至常温，在0～5℃下以3500～4000转/分的速度在低速冷冻离心机上离心20～30分钟，离心后的上清液在-15℃～-20℃冷冻，冻实后在室温下融化，过滤，滤液用截留分子量为5000-10000超滤膜超滤，超滤液即为脑提取物。

5、根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白水解酶是胃蛋白酶或胰蛋白酶；优选使用胰蛋白酶；所述胰蛋白酶常用规格为1∶250；酶解适合温度为35-50℃，优选为37～42℃；为保持温度稳定，可采取夹层水浴保温的方法；酶解适合pH值为7.5-8.5，优选为7.8～8.2。

6、根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的过滤为现有技术中通用的纸浆过滤或澄清板过滤；上述过程调pH值使用盐酸和/或氢氧化钠；上述超滤膜优选为截留分子量为6000-10000的超滤膜，更优选截留分子量为8000的超滤膜。

7、根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的除人以外的哺乳动物为猪、狗、牛、羊、鹿、马或兔，优选猪。

8、含有权利要求1所述脑提取物的各种剂型药物，所述的剂型为各种药剂学上可接受的剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、小容量注射剂、大容量注射剂或冻干粉针剂等，优选小容量注射剂、大容量注射剂或冻干粉针剂，最优选口服液。

9、权利要求1所述的脑提取物在制备治疗急慢性脑血管疾病、由脑血管疾病或脑外伤所引起的脑代谢障碍等后遗症、先天性脑发育不全、中枢神经系统感染、闭塞综合症、动脉硬化、血栓性静脉炎、毛细血管出血以及血管通透性升高引起的水肿药物方面的用途。