CN101317846B - 一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂 - Google Patents
一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101317846B CN101317846B CN200810127045XA CN200810127045A CN101317846B CN 101317846 B CN101317846 B CN 101317846B CN 200810127045X A CN200810127045X A CN 200810127045XA CN 200810127045 A CN200810127045 A CN 200810127045A CN 101317846 B CN101317846 B CN 101317846B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- preparation
- tetrodotoxin
- fugu ocellatus
- temperature
- ocellatus toxin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明涉及一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂。该制剂包括作为药物活性成份的小剂量河豚毒素和选自药学上允许的助溶剂或支架剂，所述的助溶剂为氨基酸。本发明中选用氨基酸作助溶剂，不仅能起到助溶剂的作用，增加河豚毒素在水中的溶解性，还能与河豚毒素形成高水溶性的盐溶液。本发明所用的河豚毒素采用本发明特定的方法制备，所制备的河豚毒素纯度高达98％，收率高。采用本发明所提供的方法所制备的河豚毒素和氨基酸形成的制剂不仅水溶性良好，而且稳定性良好，安全可靠，质量稳定，不需在特定温度下的冰箱中保存，室温下贮存期可达2年以上，大大节约了贮藏、运输成本，方便医疗使用，治疗效果显著，特别是用于生理脱毒，治愈率达100％。
Description
技术领域
本发明属于医药制剂领域，具体地说涉及一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂。
背景技术
河豚毒素(Tetrodotoxin，TTX)是一种由河豚鱼内脏提取的低分子量生物碱类物质。由于其独特的化学结构使其成为细胞钠离子通道专一阻断剂。因此其在生物学研究领域作为生物试剂有着不可替代的位置。河豚毒素在医学临床上所显示的药理学作用，早在上世纪30年代就已有用于临床介断生物碱类成瘾性病症的报道。在镇痛治疗方面也不断有报道推出。因此，其无论在生物学研究领域还是在医学临床应用方面，都显示了十分重要的地位。
TTX由于在极微量的情况下就能阻断细胞钠离子的通道，而对钾离子通道没有影响，具有高度的转移性，因此是十分有用的神经生理研究用工具药。
临床医学上已证明TTX是良好的镇静剂、解痉剂、镇痛剂，特别对癌症等恶性疼痛具有良好的镇痛作用，与传统的杜冷丁、吗啡等镇痛药相比虽然响应时间稍长，但其镇痛作用可达12-20小时，而且无成瘾性。近来TTX在戒毒方面也显示出良好的效果，一般戒毒者只需每日注射10μgTTX一针，5-7天为一个疗程，毒瘾即可得到控制，并可大大减轻一般戒毒中常常出现的戒毒综合症。
但河豚毒素注射液(水溶液)对温度很敏感，容易受温度的影响而发生降解，温度越高，降解越快。一旦有效活性物质河豚毒素含量低于其标示量的90％或有关物质的相对含量超过医药标准规定限度(大于对照溶液主峰面积)就不符合临床使用要求。试验证明，河豚毒素注射液(水针剂)在室温下不稳定，为了保证河豚毒素注射液的质量，防止河豚毒素含量下降和有关物质含量升高，必须将其置于4-8℃冰箱中保存。这就给河豚毒素的临床适用带来诸多困难和不便，相应在贮存、运输、装卸、批发、零售、医院和应用各个环节都得注意保持4-8℃低温，否则温度偏高可能影响临床效果，对此，必须设法尽快予以解决，研制出安全稳定，室温下就能长期贮存的可靠产品。为了解决上述问题，一个简单的做法是将河豚毒素做成冻干制剂。一般在水溶液中不稳定的生物活性物质在冻干脱水后贮存期都可延长，待临床应用时，加灭菌注射用水再生即可。但河豚毒素用于医药时，其每剂量的用量只有0.5-60μg，如此微量的河豚毒素在溶液中经冻干脱水后形成不了所要求的固态残留物，必需加入医药上能接受的赋形剂，才能提供微量河豚毒素得以附着的支架，在溶液冻干脱水后能形成固态物。
申请号为03146020.8的中国专利申请公开了一种具有良好稳定性的含有符合人体安全注射使用的室温下能长期贮存的河豚毒素冷冻干燥制剂的组合物及制备方法，是通过在河豚毒素制剂中加入一定量的双糖如乳糖、蔗糖、纤维二糖、麦芽糖，冷冻干燥后制成冻干剂来解决河豚毒素在制剂中稳定性的问题。该冻干剂在室温下贮存1年后，其河豚毒素的含量及有关物质含量均未发生明显变化，符合医药用规定标准。
但是，由于生物活性物质河豚毒素几乎不溶于水，尽管上述专利申请公开的河豚毒素冻干制剂的组合物中加入了一定量的助溶剂，但其冻干制剂的复溶性依然不太好。
为了获得所需浓度的河豚毒素水溶液，现有技术中，以河豚毒素为原料将其制备成高水溶性的河豚毒素盐衍生物，如申请号为200410102449.5的中国专利申请公开了河豚毒素各种以盐形式制备成的河豚毒素衍生物(包括河豚毒素的酒石酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、盐酸盐、硫酸盐、氢溴酸盐、醋酸盐、枸橼酸盐的等当量衍生物)及其制备方法。
中国专利02117928.X公开了一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素呼吸道给药制剂，其特点是以河豚毒素枸橼酸盐或河豚毒素醋酸盐为原料药，按常规方法制成气雾剂、喷雾剂或气溶胶制剂。本发明呼吸道给药制剂安全、高效、非成瘾性、使用方便。本发明的河豚毒素呼吸道给药制剂对癌痛患者有效率达97％以上，戒毒有效率达100％，因此是一种很好的戒毒、镇痛的药物制剂。但其给药方式限于呼吸道给药，包括鼻腔、口腔或舌给药，最好是鼻腔给药。然而，鼻腔粘膜的吸收率受多种因素的影响。且该专利的实施例中所用的酸为缓冲剂，制备用酸的摩尔数说明多数TTX仍然未形成盐，即多数TTX还是不能形成高水溶性的溶液，未能从根本上解决其水溶性的问题。
可见，解决河豚毒素的水溶性和稳定性是制备河豚毒素制剂的关键问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂，该制剂不仅水溶性良好，而且稳定性良好，安全可靠，质量稳定，不需在特定温度下的冰箱中保存，室温下贮存期可达2年以上，大大节约了贮藏、运输成本，方便医疗使用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂，其特征在于，所述的制剂包括作为药物活性成份的小剂量河豚毒素和选自药学上允许的助溶剂或支架剂，所述的助溶剂为氨基酸。
生物活性物质河豚毒素几乎不溶于水，为了获得所需浓度的水溶液，现有技术中，以河豚毒素为原料将其制备成高水溶性的河豚毒素盐衍生物，如酒石酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、盐酸盐、硫酸盐、氢溴酸盐、醋酸盐、枸橼酸盐的等当量衍生物。但本发明人发现在实际应用中，制备这些高水溶性的河豚毒素盐衍生物时，所用的酸为缓冲剂，多数TTX仍然未形成盐，未能从根本上解决河豚毒素的溶解性问题，而且这些酸多数是强酸，会对河豚毒素的毒性造成破坏。本发明人在进行了大量的试验后惊喜地发现氨基酸不仅能够起到助溶剂的作用，还能与河豚毒素形成TTX氨基酸盐，从而形成高水溶性的盐溶液，以TTX氨基酸盐制备的制剂水溶性良好，制剂稳定性亦很好。
本发明中，所述的小剂量河豚毒素为每制剂单位含有5-20μg河豚毒素。
本发明中，所述的制剂单位是指片剂的每片、胶囊剂的每粒胶囊、颗粒剂的每袋等药学上常规制剂的剂型单位。
本发明中，优选的制剂方式有以下两种：
(1)所述的制剂为由河豚毒素、助溶剂和注射用水配制的每制剂单位含有5-20μg河豚毒素的注射剂。
(2)所述的制剂为由河豚毒素、助溶剂、支架剂和注射用水配制的每制剂单位含有5-20μg河豚毒素的冻干粉针剂。
本发明所提供的河豚毒素注射剂采用本领域技术人员常用的方法制备，优选采用如下方法制备：向TTX中加入助溶剂，再加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤，滤液超滤，灌装，封口制成1000只，灭菌，检验，即得。
本发明所提供的河豚毒素冻干粉针剂采用本领域技术人员常用的方法制备，优选采用如下方法制备：向TTX中加入助溶剂，再加入支架剂和注射用水，加热过滤，滤液超滤，分装，冷冻干燥后压盖即得。
上述冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻3-4小时，温度在-30～-45℃；(2)减压干燥14小时，温度在-30～-45℃；(3)升温干燥4小时，温度在-15～-10℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
本发明采用特有的低温速冻，分阶段升温干燥的冻干方法，所得河豚毒素冻干成形良好，获得了稳定性能较常规冻干结晶优良的晶型，有利稳定的运输和贮存，彻底解决了河豚毒素冻干粉针剂的稳定问题。总之，本发明的冷冻干燥工艺大大提高了河豚毒素冻干粉针剂在制备过程中的稳定性，制备所得的河豚毒素冻干粉针剂质量均一稳定，贮存和运输更加方便。
本发明中，所述的助溶剂为氨基酸或其盐酸盐，优选天门冬氨酸、精氨酸、甘氨酸、谷氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、络氨酸、缬氨酸、组氨酸或L-半胱氨酸盐酸盐，更优选天门冬氨酸。本发明中选用氨基酸或其盐酸盐作为助溶剂，不仅增加了河豚毒素在水中的溶解性，还能与河豚毒素形成TTX氨基酸盐，从而形成高水溶性的盐溶液，而且还同时补充了人体所必需的氨基酸。
本发明中，所述的支架剂为甘露醇、甘露醇-葡萄糖、甘露醇-右旋糖酐、葡萄糖或右旋糖酐，优选甘露醇-葡萄糖、甘露醇-右旋糖酐，更优选比为5∶1的甘露醇-葡萄糖或4∶1的甘露醇-右旋糖酐。本发明人发现在制备冻干剂时，选用甘露醇-葡萄糖、甘露醇-右旋糖酐能更好地解决河豚毒素在制剂中的稳定性问题。
本发明中，所述的河豚毒素采用如下方法制备：
1)将河豚的卵巢或肝脏绞碎、匀浆，用含乙酸的醇溶液搅拌浸泡，将浸泡液过滤，滤液减压回收醇，至无醇味，得粗毒液；
2)将上步获得的粗毒液离心、过滤，得滤液；滤渣用含3～5％乙酸的水溶液洗涤，将洗涤液合并到滤液中，静置，分离水层和上层油层，油层放置用于精制河豚鱼肝油；
3)将上步的水层滤过，滤液过弱酸性阳离子交换树脂柱，洗脱，收集洗脱液；
4)将洗脱液减压浓缩，所得的浓缩液过葡萄糖凝胶柱，洗脱，收集洗脱液，合并减压浓缩，得浓缩液；
5)将浓缩液用氨水调pH值至8-9，在5～10℃温度下放置45-50小时后，沉淀过滤、洗涤、干燥、精制，富集TTX峰的馏分，减压浓缩、冷冻干燥即得。
现有技术中，很多河豚毒素制剂中河豚毒素还属于毒素原液类型的粗品，其河豚毒素的纯度不够高，直接影响其制剂的质量和疗效。本发明中采用特定的方法提取河豚毒素，不仅所得的河豚毒素纯度高，而且以其为原料药所制备的制剂，稳定性好，溶解性好，疗效显著。
本发明中采用含乙酸的醇溶液浸泡后再提取，河豚毒素的提取率较高。
上述步骤1)中所述的浸泡为含3～5％醋酸的30％-100％甲醇或乙醇溶液搅拌浸泡3～6次。本发明中选用含3～5％醋酸的30％-100％甲醇或乙醇溶液浸泡，更有利于TTX的溶解，同时减少了大分子蛋白质溶入，因此，可以避免高温加热除蛋白质。
上述步骤2)中所述的洗涤为洗涤2-4次，优选3次；步骤2)中所述的静置为在5-15℃温度下，放置8-12小时。
上述步骤3)中的洗脱为先用水洗脱，再用10％醋酸洗脱；步骤4)中的洗脱为用含5％醋酸的50％乙醇溶液洗脱。本发明中，两个步骤中所用的洗脱液不同，一方面是根据两次用的柱的填料不同而选择不同的洗脱剂的，另一方面则是采用本发明所提供的洗脱方式洗脱效果好。
本发明所用的葡萄糖凝胶柱为本领域常用的葡萄糖凝胶柱，优选LH-20葡萄糖凝胶柱。
相对于现有技术，本发明具有如下优点：
(1)本发明所提供的用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂，不仅水溶性良好，而且稳定性良好，安全可靠，质量稳定，不需在特定温度下的冰箱中保存，室温下贮存期可达2年以上，大大节约了贮藏、运输成本，方便医疗使用；
(2)本发明所提供的河豚毒素原料药，纯度大于98％，其水溶性良好，所制备的制剂稳定性优良，疗效好，治疗效果明显；
(3)本发明所提供的河豚毒素的制备方法制备河豚毒素对河豚毒素的破坏少、损耗少、收率高、纯度高、稳定性好；
(4)本发明所提供的河豚毒素的制备方法中不需采用活性炭吸附，采用两次柱层析，不仅能有效地除去杂质，还减少了提取时间，使河豚毒素的生物活性损失减少到最低限度；
(5)本发明所提供的河豚毒素的制备方法中的提取分离过程中保持较低温度处理，避免了温度对河豚毒素造成的破坏；
(6)本发明所提供的河豚毒素的制备方法中提取分离后的油层还可以用于精制河豚鱼肝油，除毒和油脂的残渣，通过发酵后可作为家禽的饲料，从而避免了不必要的浪费和环境污染；
附图说明
图1为确定河豚毒素最低共熔点曲线示意图；
图2为冻干曲线示意图。
具体实施方式
以下为本发明的具体实施方式，所述的实施例是为了进一步描述本发明，而不是限制本发明。
[实施例1]原料药河豚毒素的制备
将河豚的卵巢100kg，绞肉机绞碎，以匀浆机匀浆，加入100升含3％醋酸的60％乙醇，搅拌浸泡3次，过滤、离心过滤，取4次滤液，再减压过滤，滤液通过D152型弱酸性阳离子树脂柱，以去离水洗脱柱子，至洗脱液呈无色，然后用10％醋酸水溶液洗脱(洗脱速度50ml/分)。以HPLC检测，富集含毒液，合并减压浓缩，浓缩液通过葡萄糖凝胶LH-20柱，以含5％醋酸的50％乙醇液洗脱，HPLC检测，富集含TTX的洗脱液，合并、减压浓缩，浓缩物以氨水调pH＝8.0，低温5°放置48小时，将沉淀过滤、洗涤、干燥，得白色沉淀物TTX。
以制备HPLC精制，富集TTX峰的馏分，减压浓缩，得浓缩液，冷冻干燥后，得TTX的毒素2.0g，纯度≥98％。
[实施例2]原料药河豚毒素的制备
将河豚的卵巢100kg，绞肉机绞碎，以匀浆机匀浆，加入120升含5％醋酸的50％甲醇，搅拌浸泡6次，过滤、离心过滤，取4次滤液，减压过滤，滤液通过D152型弱酸性阳离子树脂柱，以去离水洗脱柱子，至洗脱液呈无色，然后用10％醋酸液洗脱(洗脱速度50ml/分)。以HPLC检测，富集含毒液，合并、减压浓缩，浓缩液通过葡萄糖凝胶LH-20柱，以含5％醋酸的50％乙醇液洗脱，HPLC检测，富集含TTX的洗脱液合并、减压浓缩，浓缩物以氨水调pH9.0，低温10℃放置48小时，过滤、干澡，得白色沉淀物TTX。
以制备HPLC精制，富集TTX峰的馏分，减压浓缩得浓缩液，冷冻干燥得TTX毒素2.0g，纯度≥98％。
[实施例3]原料药河豚毒素的制备
取河豚的肝脏100kg，绞肉机绞碎，以匀浆机匀浆，加入110升含4％醋酸的60％乙醇，搅拌浸泡4次，过滤、离心过滤，取4次滤液，再减压过滤，滤液通过D152型弱酸性阳离子树脂柱，以去离水洗脱柱子，至洗脱液呈无色，然后用10％醋酸水溶液洗脱(洗脱速度50ml/分)。以HPLC检测，富集含毒液，合并减压浓缩，浓缩液通过葡萄糖凝胶LH-20柱，以含5％醋酸的50％乙醇液洗脱，HPLC检测，富集含TTX的洗脱液，合并、减压浓缩，浓缩物以氨水调pH＝8.5，低温8℃放置48小时，将沉淀过滤、洗涤、干燥，得白色沉淀物TTX。
以制备HPLC精制，富集TTX峰的馏分，减压浓缩，得浓缩液，冷冻干燥后，得TTX的毒素2.0g，纯度≥98％。
[实施例4]原料药河豚毒素的制备
1)取河豚的肝脏100g，绞肉机绞碎，以匀浆机匀浆，加入115升含3％醋酸的30％甲醇溶液搅拌浸泡2次，将浸泡液过滤，滤液减压回收醇，至无醇味，得粗毒液；
2)将上步获得的粗毒液离心、过滤，得滤液；滤渣用含3％乙酸的水溶液洗涤2次，将洗涤液合并到滤液中，在5℃温度下静置8小时，分离水层和上层油层，油层放置用于精制河豚鱼肝油；
3)将上步的水层滤过，滤液过D152型弱酸性阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，再用10％醋酸洗脱，收集洗脱液；
4)将洗脱液减压浓缩，所得的浓缩液过LH-20葡萄糖凝胶柱，用含5％醋酸的50％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，合并减压浓缩，得浓缩液；
5)将浓缩液用氨水调pH值至8，在5℃温度下放置45小时后，沉淀过滤、洗涤、干燥、精制，富集TTX峰的馏分，减压浓缩、冷冻干燥即得，纯度≥98％。
[实施例5]原料药河豚毒素的制备
1)取河豚的卵巢100g，绞肉机绞碎，以匀浆机匀浆，加入110升含5％醋酸的100％乙醇溶液搅拌浸泡4次，将浸泡液过滤，滤液减压回收醇，至无醇味，得粗毒液；
2)将上步获得的粗毒液离心、过滤，得滤液；滤渣用含5％乙酸的水溶液洗涤4次，将洗涤液合并到滤液中，在15℃温度下静置12小时，分离水层和上层油层，油层放置用于精制河豚鱼肝油；
3)将上步的水层滤过，滤液过D152型弱酸性阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，再用10％醋酸洗脱，收集洗脱液；
4)将洗脱液减压浓缩，所得的浓缩液过LH-20葡萄糖凝胶柱，用含5％醋酸的50％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，合并减压浓缩，得浓缩液；
5)将浓缩液用氨水调pH值至9，在15℃温度下放置50小时后，沉淀过滤、洗涤、干燥、精制，富集TTX峰的馏分，减压浓缩、冷冻干燥即得，纯度≥98％。
[实施例6]原料药河豚毒素的制备
1)取河豚的肝脏100g，绞肉机绞碎，以匀浆机匀浆，加入115升含3％醋酸的60％乙醇溶液搅拌浸泡2次，将浸泡液过滤，滤液减压回收醇，至无醇味，得粗毒液；
2)将上步获得的粗毒液离心、过滤，得滤液；滤渣用含3％乙酸的水溶液洗涤3次，将洗涤液合并到滤液中，在5℃温度下静置8小时，分离水层和上层油层，油层放置用于精制河豚鱼肝油；
3)将上步的水层滤过，滤液过D152型弱酸性阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，再用10％醋酸洗脱，收集洗脱液；
4)将洗脱液减压浓缩，所得的浓缩液过LH-20葡萄糖凝胶柱，用含5％醋酸的50％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，合并减压浓缩，得浓缩液；
5)将浓缩液用氨水调pH值至8，在10℃温度下放置45小时后，沉淀过滤、洗涤、干燥、精制，富集TTX峰的馏分，减压浓缩、冷冻干燥即得，纯度≥98％。
[制剂实施例1]河豚毒素冻干粉针剂的制备
5.0mgTTX加入5.0g精氨酸，加5.0g甘露醇溶解，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤、滤液超滤，分装、冷冻干燥，完毕后压盖。制成1000只，每只含TTX5.0μg。
其中，上述冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻3小时，温度在-30℃；(2)减压干燥14小时，温度在-30℃；(3)升温干燥4小时，温度在-15℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
[制剂实施例2]河豚毒素冻干粉针剂的制备
5.0mgTTX加入5.0g甘氨酸，加入5.0g甘露醇-葡萄糖(5∶1)，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤、滤液超滤，分装、冷冻干燥，完毕后压盖。制成1000只，每只含TTX5.0μg。
上述冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻4小时，温度在-45℃；(2)减压干燥14小时，温度在-45℃；(3)升温干燥4小时，温度在-10℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
[制剂实施例3]河豚毒素冻干粉针剂的制备
10.0mg TTX加入5.0g谷氨酸，加入5.0g甘露醇-葡萄糖(5∶1)，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤、滤液超滤，分装、冷冻干燥，完毕后压盖。制成1000只，每只含TTX10.0μg。
上述冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻3.5小时，温度在-35℃；(2)减压干燥14小时，温度在-35℃；(3)升温干燥4小时，温度在-12℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
[制剂实施例4]河豚毒素冻干粉针剂的制备
10.0mgTTX加入5.0g赖氨酸，加入5.0g葡萄糖，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤、滤液超滤，分装、冷冻干燥，完毕后压盖。制成1000只，每只含TTX10.0μg。
上述冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻3.8小时，温度在-40℃；(2)减压干燥14小时，温度在-40℃；(3)升温干燥4小时，温度在-13℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
[制剂实施例5]河豚毒素冻干粉针剂的制备
10.0mgTTX加入5.0gL-半胱氨酸盐酸盐，加入5.0g葡萄糖，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤、滤液超滤，分装、冷冻干燥，完毕后压盖。制成1000只，每只含TTX10.0μg
上述冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻3-4小时，温度在-30～-45℃；(2)减压干燥14小时，温度在-30～-45℃；(3)升温干燥4小时，温度在-15～-10℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
[制剂实施例6]河豚毒素冻干粉针剂的制备
15.0mgTTX加入5.0g谷氨酸，加入5.0g右旋糖苷，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤、滤液超滤，分装、冷冻干燥，完毕后压盖。制成1000只，每只含TTX15.0μg。
上述冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻3.6小时，温度在-33℃；(2)减压干燥14小时，温度在-36℃；(3)升温干燥4小时，温度在-13℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
[制剂实施例7]河豚毒素冻干粉针剂的制备
15.0mgTTX加入5.0g谷氨酸，加入5.0g甘露醇，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤、滤液超滤，分装、冷冻干燥，完毕后压盖。制成1000只，每只含TTX15.0μg。
上述冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻3.6小时，温度在-33℃；(2)减压干燥14小时，温度在-36℃；(3)升温干燥4小时，温度在-13℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
[制剂实施例8]河豚毒素冻干粉针剂的制备
20.0mgTTX加入5.0g甘氨酸，加入5.0g甘露醇-葡萄糖(5∶1)，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤、滤液超滤，分装、冷冻干燥，完毕后压盖。制成1000只，每只含TTX20.0μg。
上述冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻3-4小时，温度在-30～-45℃；(2)减压干燥14小时，温度在-30～-45℃；(3)升温干燥4小时，温度在-15～-10℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
[制剂实施例9]河豚毒素冻干粉针剂的制备
20.0mgTTX加入5.0g精氨酸，加入5.0g甘露醇-葡萄糖(5∶1)，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤、滤液超滤，分装、冷冻干燥，完毕后压盖，制成1000只。加入注射用水加热溶解，稀释至1000ml，，过滤，滤液超滤，滤液灌装，封口制成1000只，每只含TTX20.0μg。
上述冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻3.5小时，温度在-35℃；(2)减压干燥14小时，温度在-35℃；(3)升温干燥4小时，温度在-12℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
[制剂实施例10]河豚毒素冻干粉针剂的制备
5.0mgTTX加入5.0g天门冬氨酸，加入5.0g甘露醇-葡萄糖(5∶1)，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤、滤液超滤，分装、冷冻干燥，完毕后压盖。制成1000只，每只含TTX5.0μg。
上述冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻4小时，温度在-45℃；(2)减压干燥14小时，温度在-45℃；(3)升温干燥4小时，温度在-10℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
[制剂实施例11]河豚毒素注射剂的制备
5.0mgTTX加入50mg谷氨酸，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤，滤液超滤，滤液灌装，封口制成1000只，灭菌、检验。每只含TTX5.0μg。
[制剂实施例12]河豚毒素注射剂的制备
5.0mgTTX加入50mg精氨酸，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，，过滤，滤液超滤，滤液灌装，封口制成1000只，灭菌、检验。每只含TTX5.0μg。
[制剂实施例13]河豚毒素注射剂的制备
10.0mgTTX加入50mg甘氨酸，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，，过滤，滤液超滤，滤液灌装，封口制成1000只，灭菌、检验。每只含TTX10.0μg。
[制剂实施例14]河豚毒素注射剂的制备
10.0mgTTX加入50mg精氨酸，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤，滤液超滤，滤液灌装，封口制成1000只，灭菌、检验。每只含TTX10.0μg。
[制剂实施例15]河豚毒素注射剂的制备
15mgTTX加入75mg甘氨酸，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤，滤液超滤，滤液灌装，封口制成1000只，灭菌、检验。每只含TTX15.0μg。
[制剂实施例16]河豚毒素注射剂的制备
15mgTTX加入75mg谷氨酸，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤，滤液超滤，滤液灌装，封口制成1000只，灭菌、检验。每只含TTX15.0μg。
[制剂实施例17]河豚毒素注射剂的制备
20mgTTX加入100mg赖氨酸，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤，滤液超滤，滤液灌装，封口制成1000只，灭菌、检验。每只含TTX20.0μg。
[制剂实施例18]河豚毒素注射剂的制备
10mgTTX加入50mg L-半胱氨酸盐酸盐，加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤，滤液超滤，滤液灌装，封口制成1000只，灭菌、检验。每只含TTX10.0μg。
以下通过试验例来对本发明产品的有益效果进行更详细的说明。
[试验例1]稳定性试验
取制剂实施例1所制备的河豚毒素冻干粉针剂，根据《中国药典》2005年版二部附录XIX C药物稳定性试验指导原则，进行了影响因素试验、加速试验和长期试验。考察项目包括：性状、鉴别、含量。
(一)影响因素试验
1、光照试验
仪器：ST-80C照度计，日光灯
条件：4500±500LX
将制剂实施例1的样品，批号20040906，置日光灯下，分别于5天、10天取样测定各项有关指标，结果见表1。
表1.光照试验
2、高温试验
仪器：AXGZ-10型医用干燥箱
取制剂实施例1的样品，批号20040906，置60℃条件下，分别于5天、10天取样测定各项有关指标，结果见2。
表2.高温试验
经试验，本品在强光照射条件下，试验后含量降低。高温10天时，含量也有降低明显。加湿试验，因本品的原料易吸潮，故不再检查此项目。由试验结果看出本品的贮藏条件应低温、遮光、密闭保存。
(二)低温长期放置试验
样品：取制剂实施例1、2、3的样品，批号20040906、20040919、20040928
样品包装：铝塑包装(上市包装)。
试验仪器：恒温恒湿箱
试验条件：温度2～6℃
取包装好的样品，放入恒温恒湿箱内，分别于3、6、9、12、18、24、36个月取样测定各项有关指标，测定结果见表3。
表3.低温长期放置试验
结果表明，本品在市售包装条件下，低温试验前后各项指标与0天比较无明显变化。
(三)常温长期放置试验
样品：取制剂实施例1、2、3的样品，批号20040906、20040919、20040928
样品包装：铝塑包装(上市包装)。
试验仪器：恒温恒湿箱
条件：温度30±2℃、相对湿度60±10％
取上市包装样品，置于留样室中，分别于3、6、9、12、18、24、36个月取样测定，测定结果见表4。
表4.常温长期放置试验
结果表明，本品常温长期试验36个月，三批样品的各项指标与0天各项指标比较，均无明显变化。可见，本发明产品河豚毒素制剂的稳定性良好。
[试验例2]本发明产品河豚毒素制剂的镇痛作用
1、小鼠热板(55℃)镇痛试验
昆明种小鼠，由军事医学科学院动物中心提供，符合国家SPF级实验动物标准。♀，体重18～22g。笼养，每笼6～12只。室温20～24℃，自然光照，食水不限。将小鼠随机分组，每组15只。阳性对照药物：盐酸吗啡(morphine hydrochloride)购自青海制药厂，批号：981101；受试药物：制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂。批号：070906，由上海亿年生物科技有限公司提供。在热板测痛仪(GJ-8402型热板测痛仪)上进行热板法镇痛试验。热板温度55℃，疼痛反应指标为舔后足，截止时间(cut-offtime)为60s，测定疼痛反应的潜伏期。镇痛效率计算公式：镇痛效率(％)＝(实验组的潜伏期-对照组的潜伏期)/(截止时间-对照组的潜伏期)×100％。给药程序如下：皮下注射给予不同剂量的受试药物或阳性对照药物，30min后测定小鼠的添后足疼痛反应潜伏期。各组均以溶剂为对照组。实验结果用均数±标准误表示，采用SPSS统计软件进行方差分析(ANOVA)，组间比较选用LSD法，并用Bliss法计算ED50。
表5.本发明产品河豚毒素制剂对小鼠热伤害刺激(55℃)的镇痛作用
注：均数±标准误.*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，与溶剂对照组比较
表5结果显示，在小鼠热板(55℃)镇痛试验中，小鼠皮下注射制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂可以产生明显的镇痛作用。制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂1-16μg/kg呈剂量依赖性延长小鼠在热板(55℃)上舔后足疼痛反应的潜伏期。从低剂量到高剂量，制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂的镇痛效率分别为4.8％、13.3％、49.2％、74.1％和81.1％。小鼠热板(55℃)法制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂镇痛作用ED50及95％可信区间为4.9(3.3-7.8)μg/kg。与吗啡镇痛作用[4.9(2.2-8.1)mg/kg]相比较，制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂镇痛作用的强度大约是吗啡的1000倍。根据小鼠热板(55℃)法镇痛试验中制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂剂量与镇痛效率的关系，计算临床有效剂量范围为0.36-0.85μg/kg。研究资料表明，热板(55℃)疼痛的刺激作用较强。因此，上述推断的临床有效剂量适用于中重度疼痛病人。
本发明中其他制剂实施例的制剂在本试验中具有相似的结果。
2、小鼠醋酸扭体镇痛试验
昆明种小鼠，由军事医学科学院动物中心提供，符合国家SPF级实验动物标准。体重18～22g。笼养，每笼6～12只，室温20～24℃，自然光照，食水不限。将小鼠随机分组，每组16只，♂♀各半。阳性对照药物：盐酸吗啡(morphine hydrochloride)购自青海制药厂，批号：981101；受试药物：制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂。批号：070906，由上海亿年生物科技有限公司提供。试验以0.6％醋酸为致痛剂。皮下注射给予不同剂量的制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂(受试药物)或盐酸吗啡(阳性对照药物)，以溶剂为阴性对照。30min后，每只腹腔注射0.6％的醋酸0.2ml，立即记录15min内小鼠扭体次数。以小鼠出现腰部肌肉反复收缩、拱背、臀部扭转和后肢伸展为扭体反应阳性。将给药组和溶剂组小鼠扭体数进行比较，并式计算镇痛效率。计算公式：镇痛效率(％)＝(对照组的扭体次数-实验组的扭体次数)/对照组的扭体次数×100％。实验结果用均数±标准误表示，采用SPSS统计软件进行方差分析(ANOVA)，组间比较选用LSD法，并用Bliss法计算ED50。
表6.本发明产品河豚毒素制剂对小鼠化学性伤害刺激(0.6％醋酸)的镇痛作用
注：均数±标准误.*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，与溶剂对照组比较
表6结果显示，在小鼠醋酸(0.6％)扭体的镇痛试验中，给小鼠皮下注射制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂可以明显抑制腹腔注射0.6％醋酸所致小鼠扭体的疼痛反应，呈剂量依赖性。低剂量0.5μg/kg制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂的镇痛效率为13.8％，高剂量8μg/kg可达到89.9％。小鼠醋酸(0.6扭体法制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂镇痛作用的ED50及95％可信区间为1.9(1.7～2.2)μg/kg，吗啡的ED50及95％可信区间为1.0(0.9～1.2)μg/kg。相比之下，制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂抗小鼠醋酸(0.6％)扭体疼痛反应的作用强度大约是吗啡的526倍。根据小鼠醋酸(0.6％)扭体法制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂剂量与镇痛效率的关系，计算临床有效剂量范围为0.19～0.24μg/kg。与热板(55℃)疼痛刺激相比较，小鼠腹腔注射0.6％醋酸的疼痛刺激较弱。因此，上述推断的临床有效剂量适用于中轻度疼痛病人。
本发明中其他制剂实施例的制剂在本试验中具有相似的结果。
3、本发明产品河豚毒素制剂镇痛作用的时效关系
昆明种小鼠，由军事医学科学院动物中心提供，符合国家SPF级实验动物标准。体重18～22g。笼养，每笼6～12只.室温20～24℃，自然光照，食水不限。将小鼠随机分组，每组10只，♂♀各半。阳性对照药物：盐酸吗啡(morphine hydrochloride)购自青海制药厂，批号：981101；受试药物：制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂。批号：070906，由上海亿年生物科技有限公司提供。试验以0.6％醋酸为致痛剂。皮下注射给予4μg/kg的制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂。分别于5、10、15、30、60、120、180、240、300、360min后，每只腹腔注射0.6％的醋酸0.2ml，立即记录15min内小鼠扭体次数。以小鼠出现腰部肌肉反复收缩、拱背、臀部扭转和后肢伸展为扭体反应阳性。将给药组和溶剂组小鼠扭体数进行比较，并计算镇痛效率。计算公式：镇痛效率(％)＝(对照组的扭体次数-实验组的扭体次数)/对照组的扭体次数×100％。实验结果用均数±标准误表示，采用SPSS统计软件进行方差分析(ANOVA)，组间比较选用LSD法。
根据表6的实验结果，选择镇痛效率为75.9％的制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂剂量4μg/kg，采用小鼠醋酸(0.6％)扭体法则测定制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂镇痛作用的时-效关系。表3的结果显示，给小鼠皮下注射制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂4μg/kg，镇痛作用在给药后10min起效，60min后达到最大镇痛效率72％。制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂的镇痛作用可持续6小时。
表7.本发明产品河豚毒素制剂对小鼠醋酸(0.6％)扭体镇痛作用的时效关系
注：均数±标准误.P值与溶剂对照组比较。
本发明中其他制剂实施例的制剂在本试验中具有相似的结果。
[试验例3]本发明产品河豚毒素制剂的戒毒作用
1、吗啡依赖小鼠纳洛酮催促戒断治疗试验
昆明种小鼠，由军事医学科学院动物中心提供，符合国家II级实验动物标准。体重18～22g。笼养，每笼6～12只.室温20～24℃，自然光照，食水不限。药品及试剂：受试药物：制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂，批号：070906，由上海亿年生物科技有限公司提供。10μg/ml，用溶剂配成所需浓度；盐酸吗啡(morphinehydrochloride)购自青海制药厂，批号：981101；盐酸纳洛酮：Sigma公司产，批号：42k1184，用生理盐水配制。给药途径及体积：皮下注射，给药体积：0.1ml/10g。试验方法：小鼠随机分为5组，每组10只，♀♂各半，5组分别为溶剂对照组、4个制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂组。各组按下表每天皮下注射吗啡3次(8:00，14:00，20:00)，连续给药8d，d8早8:00为吗啡末次给药。建立吗啡依赖模型。
建立吗啡依赖模型的给药程序表
吗啡末次给药后2小时用盐酸纳洛酮(2mg/kg，0.1ml/10g，腹腔注射)进行催促戒断，催促前30min进行治疗给药。溶剂对照组皮下注射溶剂0.1ml/10g；制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂分别皮下注射1、2、4、8μg/kg。记录催促后小鼠10min内的跳跃次数，以及催促戒断前和催促戒断后30min和60min时的体重，以催促戒断前的体重为基值，计算催促后的体重变化率。计算公式：体重变化率(％)＝(催促后的体重-催促前的体重)/催促前的体重×100％。实验结果用均数±标准误表示，采用SPSS统计软件进行方差分析(ANOVA)，组间比较选用LSD法。
表8.本发明产品河豚毒素制剂对吗啡依赖小鼠戒断反应的影响
注：均数±标准误.*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，与溶剂(0μg/kg)对照组比较。
表8的实验结果表明：溶剂对照给予纳洛酮(2mg/kg)催促后，戒断跳跃次数为66.8±9.74，催促戒断30min和60min后体重均下降2.7％，说明小鼠对吗啡形成了明显的躯体依赖。在注射纳洛酮前，给予治疗药物制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂，呈剂量依赖性抑制戒断跳跃行为和体重下降，制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂2μg/kg可以明显减轻催促戒断30min后的体重下降，4μg/kg和8μg/kg明显降低戒断跳跃次数和催促戒断60min后的体重下降。上述结果表明制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂对吗啡依赖小鼠的催促戒断症状具有明显的脱毒治疗作用。根据吗啡依赖小鼠纳洛酮催促戒断治疗试验制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂剂量与脱毒作用的量效关系，计算临床有效剂量范围为0.22-0.88μg/kg/day。
本发明中其他制剂实施例的制剂在本试验中具有相似的结果。
2、吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断治疗试验
Wistar大鼠，由军事医学科学院动物中心提供，符合国家SPF级实验动物标准。体重180～220g。笼养，每笼5～6只。室温20～24℃，自然光照，食水不限。药品及试剂：受试药物-制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂，批号：070906，由上海亿年生物科技有限公司提供。10μg/ml，用溶剂配成所需浓度；盐酸吗啡(morphinehydrochloride)购自青海制药厂，批号：981101；盐酸纳洛酮：Sigma公司产，批号：42k1184，用生理盐水配制。给药途径及体积：皮下注射，给药体积：0.1ml/10g。试验方法：小鼠随机分为5组，每组12只，♀♂各半，5组分别为溶剂对照组、4个制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂组。采用剂量递增法建立吗啡依赖大鼠模型。皮下注射吗啡，每天2次(8:00，16:00)，连续6d。吗啡日剂量：d 120mg/kg，d 240mg/kg，d 360mg/kg，d 480mg/kg，d 5100mg/kg，d 68：00AM，皮下注射吗啡50mg/kg，6h后，皮下注射制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂1、2、4、8μg/kg。30min后，腹腔注射纳洛酮2mg/kg，立即放入12cm×29cm×15cm(长×宽×高)的透明有机玻璃盒中观察并记录15min内大鼠的戒断症状评分以及催促前后30min和60min内大鼠的体重变化。并以催促戒断前的体重为基值，计算催促后的体重变化率。计算公式：体重变化率(％)＝(催促后的体重-催促前的体重)/催促前的体重×100％。大鼠的戒断症状评分标准：(1)跳跃、湿狗样摇体、扭体、摇头、打哈欠、扫尾、激惹(以尖叫为准)：0分＝无；1分＝1-5次；2分＝6-10次；3分＞10次。(2)齿颤、咀嚼(次与次之间至少间隔3s)：0分＝无；1分＝1-10次；2分＝11-20次；3分＞20次。(3)流涎、流泪、毛发直立、眼睑下垂、腹泻：0分＝无；1分＝轻度；2分＝中度；3分＝重度。实验结果用均数±标准误表示，采用SPSS统计软件进行方差分析(ANOVA)，组间比较选用LSD法。
表9.本发明产品河豚毒素制剂对吗啡依赖大鼠戒断反应的影响
注：均数±标准误.*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，与溶剂(0μg/kg)对照组比较。
在表8的实验基础上，进一步建立了吗啡依赖大鼠模型。表5的实验结果表明：溶剂对照组的大鼠给予纳洛酮(4mg/kg)催促后，戒断症状的评分达到12.2±0.91，催促戒断30min和60min后体重分别下降5.4％和6.7％，说明大鼠对慢性吗啡给药形成了明显的躯体依赖。催促戒断前，给予治疗药物制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂0.75-6μg/kg呈剂量依赖性降低吗啡依赖大鼠戒断症状的分值，抑制催促戒断30min和60min后体重下降，剂量为1.5，3和6μg/kg时与溶剂对照组相比较，戒断症状分值和体重下降均明显减轻，表明制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂对吗啡依赖大鼠纳洛酮催促的戒断反应同样具有明显的脱毒治疗作用。根据吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断治疗试验，制剂实施例5的河豚毒素冻干粉针剂剂量与脱毒作用的量效关系，计算临床有效剂量范围为0.23～0.93μg/kg/da。
本发明中其他制剂实施例的制剂在本试验中具有相似的结果。
Claims (7)
1.一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂，其特征在于，所述的制剂为由河豚毒素、助溶剂、支架剂和注射用水配制的每毫升含有5-20μg河豚毒素的冻干粉针剂；所述的助溶剂为氨基酸或其盐酸盐，所述的支架剂为甘露醇、甘露醇-葡萄糖、甘露醇-右旋糖酐、葡萄糖或右旋糖酐。
2.根据权利要求1所述的用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂，其特征在于，所述的助溶剂为天门冬氨酸、精氨酸、甘氨酸、谷氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、络氨酸、缬氨酸、组氨酸或L-半胱氨酸或其盐酸盐。
3.根据权利要求2所述的用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂，其特征在于，所述的助溶剂为天门冬氨酸。
4.根据权利要求1所述的用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂，其特征在于，所述的支架剂为甘露醇-葡萄糖、甘露醇-右旋糖酐。
5.根据权利要求4所述的用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂，其特征在于，所述的支架剂为重量比为5∶1的甘露醇-葡萄糖或4∶1的甘露醇-右旋糖酐。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂，其特征在于，所述的河豚毒素制剂采用如下方法制备：向河豚毒素中加入助溶剂，再加入支架剂和注射用水，加热过滤，滤液超滤，分装，冷冻干燥后压盖即得。
7.根据权利要求6所述的用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂，其特征在于，所述的冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻3-4小时，温度在-30～-45℃；(2)减压干燥14小时，温度在-30～-45℃；(3)升温干燥4小时，温度在-15～-10℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200810127045XA CN101317846B (zh) | 2008-05-28 | 2008-06-18 | 一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200810111343 | 2008-05-28 | ||
| CN200810111343.X | 2008-05-28 | ||
| CN200810127045XA CN101317846B (zh) | 2008-05-28 | 2008-06-18 | 一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010102279942A Division CN101891751B (zh) | 2008-06-18 | 2008-06-18 | 一种河豚毒素的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101317846A CN101317846A (zh) | 2008-12-10 |
| CN101317846B true CN101317846B (zh) | 2010-11-10 |
Family
ID=40178286
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200810127045XA Expired - Fee Related CN101317846B (zh) | 2008-05-28 | 2008-06-18 | 一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101317846B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109157649A (zh) * | 2017-06-08 | 2019-01-08 | 赵恩成 | 一种蝎肽的制药用途 |
| CN107880054A (zh) * | 2017-10-09 | 2018-04-06 | 浙江省海洋水产研究所 | 一种制备高纯河豚毒素的方法 |
| WO2022221963A1 (en) * | 2021-04-23 | 2022-10-27 | Wex Pharmaceuticals Inc. | Tetrodotoxin liquid formulations |
| CN113321661B (zh) * | 2021-05-04 | 2022-04-12 | 中洋生物科技(上海)股份有限公司 | 一种高效的从河豚内脏提取和分离制备高纯度河豚毒素的方法 |
| WO2024007068A1 (en) * | 2022-07-06 | 2024-01-11 | Wex Pharmaceuticals Inc. | Process for the extraction and purification of tetrodotoxin |
-
2008
- 2008-06-18 CN CN200810127045XA patent/CN101317846B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101317846A (zh) | 2008-12-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20240041984A1 (en) | Methods for producing stable therapeutic formulations in aprotic polar solvents | |
| CN103442695A (zh) | 肠胃外注射用肽药物的稳定制剂 | |
| US20070286911A1 (en) | Huperzia serrate (thunb.) trev. composition comprising compounded huperzine a and huperzine b and methods for preparing it | |
| CN101317846B (zh) | 一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂 | |
| GB2513060A (en) | Microparticle buprenorphine suspension | |
| EP2589382A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising levocarnitine and dobesilate | |
| CN102058593A (zh) | 艾普拉唑钠的组合药物及其制备工艺 | |
| CN111848512B (zh) | 使用高纯度盐酸罂粟碱制备粉针剂药物组合物 | |
| CN101891751B (zh) | 一种河豚毒素的制备方法 | |
| CN105078909B (zh) | 一种注射用苯磺顺阿曲库铵冷冻干燥组合物及其制备方法 | |
| CN1835754A (zh) | 稳定的医药用河豚毒素冷冻干燥制剂 | |
| KR19980014498A (ko) | 부자-유황 복합제제 | |
| RU2005135428A (ru) | Поглощение макромолекул | |
| RU2398583C2 (ru) | Антиоксидантное и антигипоксантное средство на основе 6-метил-2-этил-3-гидроксипиридина сукцината | |
| CN101054414B (zh) | 鹿茸表皮生长因子(deer egf)提取及其制备方法 | |
| CN111789818B (zh) | 注射用盐酸罂粟碱药物组合物及制备方法 | |
| CN114028537B (zh) | 一种含有svhrsp蝎毒肽的药物组合物及其制备方法 | |
| CN111796043B (zh) | 注射用盐酸罂粟碱粉针剂及其质量检测方法 | |
| TW201440783A (zh) | 含有米卡芬淨或其鹽的醫藥組成物 | |
| CN1771992A (zh) | 一种脑提取物及其制备方法和用途 | |
| CN100396289C (zh) | 灯盏花乙素注射制剂及其制备方法 | |
| CN102233130A (zh) | 稳定的含有胸腺肽1衍生物的药物制剂 | |
| ES2930757T3 (es) | Una formulación de fármaco para uso en el control eficaz del dolor agudo y/o crónico | |
| CN1277831C (zh) | 一种银杏内酯b的复合物及其制备方法与治疗用途 | |
| CN1457780A (zh) | 植物来源总生物碱组合物及其药物制剂 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20090320 Address after: Room 6, building 632, D District, 137 Lanxi Road, Shanghai, Putuo District: 200062 Applicant after: Shanghai Yinian Biotech Co., Ltd. Address before: Beijing City, Haidian District North Fourth Ring Road No. 4 Building 1207 room Jianxiang Park Post encoding: 100083 Applicant before: Wang Kaiye |
|
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: SHANGHAI YINIAN BIOLOGY SCIENCE CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: WANG KAIYE Effective date: 20090320 |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20101110 Termination date: 20120618 |