CN1771796A - 一种蚕豆离体培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的一种蚕豆离体培养方法,包括获取无菌种子苗、构建克隆3代群体、环境胁迫筛选、生根繁殖培养等步骤。培养时所使用的发芽培养基和恢复培养基是以MS培养基为基本培养基,其中添加30g/L蔗糖、6.0g/L琼脂,pH 5.8;增殖培养基则在发芽培养基的基础上添加0.5mg/L 6-BA、0.01mg/L NAA、0.5mg/L MET、800mg/L CH、1mg/L PVP、0.5g/L AC;生根培养基是以MS培养基为基本培养基,其中添加1.0mg/L NAA、0.5g/L AC并在121℃高温高压灭菌。采用本发明的培养方法,其苗与种子苗没有差异,茎秆粗壮,叶色浓绿,长势良好。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物的培养方法,特别是一种蚕豆离体培养方法。
背景技术
细胞全能性学说的提出及其在动植物上的证明,是生命科学研究的一大杰出成果。克隆技术已在植物上得到广泛应用,于动物以及人类上的应用也已展开。由于蚕豆染色体大而数量少,细胞分生组织增殖周期短,是一种用于监测环境污染及重金属污染的指示植物,因此,如何利用现代植物培养技术,快速培养蚕豆植物已成为当今生物界的重要话题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种蚕豆离体培养方法。
本发明所要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。
一种蚕豆离体培养方法,包括以下步骤:
1)、获取无菌种子苗:选择饱满、均匀的蚕豆种子,放置于70%的酒精中1分钟后,再用饱和的漂白粉溶液浸泡,用无菌水冲洗;再倒入添加5mg/L GA3的无菌水浸泡12h,待种子完全吸胀后,再用饱和的漂白粉溶液浸泡,用无菌水冲洗,采用胚根向上放置方式接种到无激素的发芽培养基上,进行光周期下培养;
2)、构建克隆3代群体:当芽长出2-3cm时,将芽切下转移至增殖培养基上,连续克隆三代;
3)、环境胁迫筛选:将克隆苗按照下面的a)步骤或b)步骤进行环境胁迫筛选:
a)、45℃ 1h、2h,在光照培养箱中进行;
b)、紫外灯照射,在超净工作台上将培养瓶的盖子打开,将苗暴露在20w的紫外灯下照射,高度60cm,时间设置为1h和2h;
4)、生根繁殖培养:环境胁迫处理结束后,将无菌苗接种至无激素的恢复培养基培养,21天后统计存活率,并将存活的植株转移到生根培养基生根。
上述发芽培养基和恢复培养基是以MS培养基为基本培养基,其中添加30g/L蔗糖、6.0g/L琼脂,pH5.8;增殖培养基则在发芽培养基的基础上添加0.5mg/L 6-BA、0.01mg/LNAA、0.5mg/L MET、800mg/L CH、1mg/L PVP、0.5g/L AC;恢复培养基以MS培养基为基本培养基,其中添加30g/L蔗糖、6.0g/L琼脂,pH5.8;生根培养基是以MS培养基为基本培养基,其中添加1.0mg/L NAA、0.5g/L AC并在121℃高温高压灭菌。
本发明在蚕豆种子苗的克隆过程中,切口部分受伤氧化,容易出现褐化现象,使克隆无法进行下去,因此在1000克增殖培养基中添加1mg/L PVP和0.5g/L AC能较为有效地阻止褐化的发生;尤其是在添加AC的培养基上,褐化现象也得到了控制,植株生长十分健壮。
另外,本发明在蚕豆克隆苗中,玻璃苗现象也较为严重,严重影响了繁殖系数,因此在培养基中添加0.5mg/L MET可以十分有效地控制克隆苗的玻璃化。
本发明在增殖培养基上,30d可以继代一次。
采用本发明的培养方法,其苗与种子苗没有差异,茎秆粗壮,叶色浓绿,长势良好。
具体实施方式
一种蚕豆离体培养方法,包括以下步骤:
1、获取无菌种子苗:选择饱满、均匀的蚕豆种子,放置于70%的酒精中1分钟后,再用饱和的漂白粉溶液浸泡10分钟,用无菌水冲洗5-6次。放在铺有无菌纱布的磁盘中,倒入添加5mg/L GA3的无菌水浸泡12h,待种子完全吸胀后,再用饱和的漂白粉溶液浸泡10分钟,用无菌水冲洗5-6次,采用胚根向上放置方式接种到无激素的发芽培养基上,在23±1℃、光强1800lx、每天光照12h/黑暗12h的光周期下培养;
2、构建克隆3代群体:当芽长出2-3cm时,将芽切下转移至增殖培养基上,连续克隆三代;
3、环境胁迫筛选:将克隆苗按照下面的a)步骤或b)步骤进行环境胁迫筛选:
a)、45℃1h、2h,在光照培养箱中进行;
b)、紫外灯照射,在超净工作台上将培养瓶的盖子打开,将苗暴露在20w的紫外灯下照射,高度60cm,时间设置为1h和2h;
4、生根繁殖培养:环境胁迫处理结束后,将无菌苗接种至无激素的恢复培养基培养,21天后统计存活率,并将存活的植株转移到生根培养基生根。
上述发芽培养基和恢复培养基是以MS培养基为基本培养基,其中添加30g/L蔗糖、6.0g/L琼脂,pH5.8;增殖培养基则在发芽培养基的基础上添加0.5mg/L 6-BA、0.01mg/LNAA、0.5mg/L MET、800mg/L CH、1mg/L PVP、0.5g/L AC;生根培养基是以MS培养基为基本培养基,其中添加1.0mg/L NAA、0.5g/L AC并在121℃高温高压灭菌。
Claims (1)
1、一种蚕豆离体培养方法,包括以下步骤:
1)、获取无菌种子苗:选择饱满、均匀的蚕豆种子,放置于70%的酒精中1分钟后,再用饱和的漂白粉溶液浸泡10分钟,用无菌水冲洗5-6次。放在铺有无菌纱布的磁盘中,倒入添加5mg/L GA3的无菌水浸泡12h,待种子完全吸胀后,再用饱和的漂白粉溶液浸泡10分钟,用无菌水冲洗5-6次,采用胚根向上放置方式接种到无激素的发芽培养基上,在23±1℃、光强18001x、每天光照12h/黑暗12h的光周期下培养;
2)、构建克隆3代群体:当芽长出2-3cm时,将芽切下转移至增殖培养基上,连续克隆三代;
3)、环境胁迫筛选:将克隆苗按照下面的a)步骤或b)步骤进行环境胁迫筛选:
a)、45℃ 1h、2h,在光照培养箱中进行;
b)、紫外灯照射,在超净工作台上将培养瓶的盖子打开,将苗暴露在20w的紫外灯下照射,高度60cm,时间设置为1h和2h;
4)、生根繁殖培养:环境胁迫处理结束后,将无菌苗接种至无激素的恢复培养基培养,21天后统计存活率,并将存活的植株转移到生根培养基生根。
上述发芽培养基和恢复培养基是以MS培养基为基本培养基,其中添加30g/L蔗糖、6.0g/L琼脂,pH 5.8;增殖培养基则在发芽培养基的基础上添加0.5mg/L 6-BA、0.01mg/LNAA、0.5mg/L MET、800mg/L CH、1mg/L PVP、0.5g/L AC;生根培养基是以MS培养基为基本培养基,其中添加1.0mg/L NAA、0.5g/L AC并在121℃高温高压灭菌。
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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-
2005
- 2005-09-21 CN CN 200510029841 patent/CN1771796A/zh active Pending
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