CN1748511A - 生物、生化制剂及其配制方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明生物、生化制剂它是含有一株拟康氏木霉(Trichoderma pseudokiningii)和一株芽孢杆菌(Bacillus spp)的混合微生物，以及与保护细胞膜物质，复合诱导子，天然抗菌物质，如微量元素和有益元素如：牛磺酸、轻稀土、维生素C；牛蒡寡糖、壳寡糖、糊精、氨基酸；绿原酸、银杏黄铜，锌盐、硼酸、铁盐等共同组成的多靶位生物－生化制剂；拟康氏木霉从秸秆上分离筛选到的菌株，命名为TRIP1；芽孢杆菌是从土壤中分离到的，命名为BAC1，均保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；经生产试验，用于防治植物多种病害，促进植物生长，保护细胞膜和提高植物的光化学效率；尤其对黄瓜、番茄、茄子、棉花、大豆、甘薯的枯萎病、黄萎病、霜霉病、白粉病、灰霉病、线虫病和生理性病害和红蜘蛛和蚜虫有效；好于常规农药；在河北徐水的示范证明，交替使用I，II，每个大棚杀菌剂投入由400元降为40元，效益非常显著。
Description
所属技术领域
本发明属于农药生物技术领域，涉及微生物发酵及微生物在农业上的应用两方面，具体涉及的是一种芽孢杆菌和木霉孢子、菌丝的发酵培养，用于防治植物多种病害，促进植物生长的生物、生化农药制剂及其配制方法。
背景技术
病虫害是降低农作物产量的重要因素。为了控制病害的爆发和流行，基本上还是依赖于化学合成杀菌剂。这又导致了：(1)环境污染，危害人畜安全；(2)高频度大剂量使用农药，增加了生产成本；对作物造成伤害，降低了农产品品质；(3)农用抗菌素的使用还导致了抗药突变小种的出现，新的病害将更严重危害农作物；因此，迫切需要发展环境友好的病虫害防治剂，开发低残留、无公害、高效的病虫害防治剂。
1985年，仅有少量生物防治因子注册使用，占农药市场份额不足1％，如今已达30多个，占农药市场份额10％。如在柑橘表面喷施假单孢菌，竞争病原菌的浸染位点，防治柑橘青霉病；利用荧光假单孢菌产生的抗菌素防治土传性病害；利用沙雷氏杆菌分泌几丁质酶防解病原真菌胞壁，控制豌豆萎蔫病。利用木霉防治枯萎病。1989年，国内申报了用柑橘皮的油保存柑橘抑制青霉菌的专利，银杏黄酮类似物防病剂，1996年，诱导抗性剂BTH在德国注册使用，以色列Bar-Ilan大学以生产连霉素的菌丝防治瓜类作物的病害，若干不同的寡糖作为抗病诱导物，已经开发出多个产品。
近年，多靶标的作物病虫害防制剂也有一定发展。若干植物促生长制剂在田间均表现有一定的防病作用。专利01123508.x CN1328769A《一种含有水溶性壳聚糖的农用组合物》、专利01124042.3 CN1180693C《一种植物生长调节组合物》、专利03111946.8 CN1435406A《一种制备绿原酸的方法》、专利200410036582.5 CN1634640A《猕猴桃属植物资源的杀虫应用》，这些专利对病害防治的措施主要还是基于对病原单方面的控制，或仅是抗病诱导这一单一(寄主)的因素，效果有限。
发明内容
本发明的目的是提供一种在现有生防农作物病害基础上针对不同靶位的制剂在最适浓度产生协同效应，选择具有协同或叠加效应的物质，发出有诱抗、促生作用的物质，该发酵微生物与保护细胞膜物质，复合诱导子，天然抗菌物质，微量元素和有益元素等共同组成的多靶位高效的生化-生物农药制剂及其配制方法。
本发明的目的是由以下技术方案实现的。
首先根据现有专利的技术和效果可以得出：(1)寄主对病原生物本身具有抗性，此种抗性是可以诱导的；(2)寄主对病原物只有特定的敏感时期；(3)某些有机营养物和简单分子如氨基酸，葡萄糖，草酸等可以解除病原物对寄主的危害；(4)若干无机营养可以提高植物抗病性；(5)有益微生物可竞争病原物的生态位。只有针对不同靶位的制剂在最适浓度才会产生协同效应；因此，改变片面防治策略，选择具有协同或叠加效应的物质，能开发出有诱抗、促生作用的高效的生化-生物制剂。
由以上结论，本发明者认为，只有针对不同靶位的制剂在最适合的浓度才会产生协同效应，具体设汁方案为：(1)以综合措施进行健身栽培，提高作物抗病的基础，其关键是保护细胞膜系统；(2)以不同类型的次生代谢物质和抑制或杀灭病原物；(3)以综合手段进行抗病诱导等；(4)用有益微生物竞争病原物生态位。
本发明采用一种含有一株拟康氏木霉(Trichoderma pseudokiningii)和一株芽孢杆菌(Bacillus spp)的混合微生物，与保护细胞膜物质，复合诱导子，天然抗菌物质，微量元素和有益元素共同组成的多靶位生物--生化制剂。用于防治植物多种病害，促进植物生长。
本发明生物、生化农药制剂是由以下按重量(份)比的原料配制而成的：
原料 有效范围 较好范围 最佳范围
拟康氏木霉发酵液 0-50 20-40 25-40
芽孢杆菌发酵液 0-50 30-50 35-45
成分A 0-5 2.5-5.2 3-5
成分B 0-20 5-15 10-15
成分C 0-25 10-15 10-15
成分D 0.5-25 15-26 17-25
其中：
拟康氏木霉发酵液：每毫升拟康氏木霉发酵液中含木霉孢子及菌丝干重00.5克；芽孢杆菌发酵液：每毫升芽孢杆菌发酵液中芽孢杆菌1×107-1×1010个；
上述成分A中含有以下原料物质按重量(份)组成：(100克中含)
牛磺酸 0-30 20-35 20-30
轻稀土 10-60 20-50 30-45
维生素C 0-10 5-11 5-10
成分B中含有以下物质组成：(100克中含)
牛蒡寡糖 0-40 20-40 25-35
壳寡糖 0-40 15-25 17-25
糊精 0-50 25-40 30-40
氨基酸 0-10 10-20 11-18
成分C中含有以下物质组成：(100克中含)：
绿原酸 30-70 40-70 45-60
银杏黄铜 20-60 35-55 40-50
成分D中含有以下物质组成：(100克中含)
锌盐 20-40 25-40 25-35
硼酸 0-40 15-40 25-35
铁盐 0-50 15-50 27-43
上述多靶位高效的生化-生物农药制剂的配制方法为：
①拟康氏木霉发酵的制取方法：加工中应无菌操作；首先将木霉试管中的菌种加入真菌培养基中，灭菌后在摇床上培养，得种子液，再放进种子罐中培养，不断搅拌，再进入二级种子罐搅拌，然后注入发酵罐中搅拌混匀，再进入高速剪切机加工，再进入双效浓缩器在45℃的温度下浓缩制得木霉培养物；
②枯草芽孢杆菌发酵制取方法：加工中应无菌操作；将枯草芽孢杆菌试管菌种加入细菌培养基中，在摇床上培养，得种子液，再放进种子罐中培养，不断搅拌，再进入二级种子罐搅拌，然后注入发酵罐中搅拌混匀，再进入乳化罐中乳化，再进入双效浓缩器在45℃的温度下浓缩制得枯草芽孢杆菌培养物；
③分别将原料中的成分A、B、C在常温下溶解，再调制成膏后备用；再将成分D溶解后熬合，然后将调制好的成分A、B、C、D混合备用；
④最后将上述备用的拟康氏木霉培养物、枯草芽孢杆菌培养物及成分A、B、C、D混合物在配料罐中合并、混匀、乳化，再经检测合格即为本发明的成品。
所述的4种成分A、B、C、D，均为生物活性物质或生物必须的微量元索，微量元素可以补充作物自身的元素缺乏，在一定程度上，能保护其细胞膜，改善作物品质，提高作物抗性；生物活性物质能有效的抑制或杀灭病原微生物，并且通过诱导作物产生植保素，提高自身抗性，促进作物健康生长。
本发明效果非常明显，由于本发明是采用一株拟康氏木霉(Trichodermapseudokiningii)和一株芽孢杆菌(Bacillus spp)的混合微生物，并添加了保护细胞膜物质，复合诱导子，天然抗菌物质，微量元素和有益元素的成分A、B、C、D共同组成的多靶位生物--生化制剂；经生产试验，对防治黄瓜、番茄、茄子、棉花、大豆、甘薯病害具有良好预防和治疗作用，对枯萎病、黄萎病、霜霉病、白粉病、灰霉病、线虫病和生理性病害和红蜘蛛和蚜虫有效；可以控制上述病害的发生，防治效果好于常规农药；在河北徐水的示范证明，交替使用该药，每个大棚杀菌剂投入由400元降为40元，效益非常显著。
附图说明
图1为本发明原料拟康氏木霉发酵工艺流程图
图2为本发明原料枯草芽孢杆菌发酵工艺流程图
图3为本发明制剂生产工艺流程图
具体实施方式
由图1可知，拟康氏木霉发酵的制取方法：加工中应无菌操作；首先将拟康氏木霉菌种经过PDA平板活化24h，后接到PD液体培养基三角瓶中，28℃，100r/min培养36h，制得种子液，按3％的接种量接到种子罐中，培养搅拌通气培养36h，进入二级种子罐搅拌通气培养36h，然后注入发酵罐中搅拌通气培养96h，进入高速减切机混匀、包埋，再进入双效农缩器在45℃的温度下浓缩制得拟康氏木霉培养物。
由图2可看出枯草芽孢杆菌发酵制取方法：加工中应无菌操作；将枯草芽孢杆菌试管菌种经过NA培养基平板活化，接到NA液体培养基中在摇床上培养24h，按3％的接种量进行种子罐中搅拌通气培养24h，再进入二级种子罐搅拌通气培养24h，然后注入发酵罐中搅拌通气培养48h，再进入乳化罐中乳化包埋，再进入双效浓缩器在45℃的温度下浓缩制得枯草芽孢杆菌培养物。
图3为本发明生物、生化农药制剂的生产工艺流程图，先将已制得的枯草芽孢杆菌培养物与拟康氏木霉培养物合并加入配料罐中混匀；再将成分A、B、C分别溶解、调膏后加入配料罐中；再将成分D溶解、熬合后加入配料罐中；然后在配料罐中将加进的原料混合，再经乳化，经检测合格后进行成品分装入库备用。
前面所述的4种成分A、B、C、D，均为生物活性物质或生物必须的微量元索，微量元素可以补充作物自身的元素缺乏，在一定程度上，能保护细胞膜，改善作物品质，提高作物抗性；生物活性物质能有效的抑制或杀灭病原微生物，并且通过诱导作物产生植保素，提高自身抗性，促进作物健康生长。
本发明中的木霉菌株为拟康氏木霉(Trichoderma pseudokiningii)菌株，是从济南市历城区玉米秸秆上分离筛选得到的，命名为TRIP1，已经保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；用马铃薯固体培养基活化菌株，土豆麸皮培养基(麸皮40g/L，马铃薯50g/L，蔗糖20g/L，KH2PO4 0.5g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，CaCl2 0.25g/L，pH5-7，培养温度28。C、转速20-50RPM、接种量3-7％)，拟康氏木霉在36小时培养时间内能达到100mL发酵液中含有木霉菌丝干重0.1-1g；拟康氏木霉菌液体培养基为土豆、麸皮培养基。
培养基含PDA，液体培养活化的菌种36小时，得拟康氏木霉孢子及菌丝发酵液。
本发明的拟康氏木霉也可以以固体培养基进行固体发酵，培养基为7∶3的秸秆粉和麦麸，另添加4％硫酸铵、0.4％磷酸二氢钾、0.1％硫酸镁为最佳培养基，28-32℃为适宜培养温度，30℃为最佳温度，4％为最佳接种量，96h到达发酵高峰。产生孢子作为原料。
本发明从山东寿光菜园土壤中分离得到一株芽孢杆菌(Bacillus spp)，命名为BAC1，菌种保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；进行液体发酵，培养基为胰蛋白胨、酵母提取物、NaCl，液体培养48小时达到30亿/ML，也可直接使用配制液体混合菌。
本发明使用的一组保护细胞膜的物质是牛磺酸、轻稀土、维生素C的组合物或任何一种成分--A
本发明使用的抗病诱导子是牛蒡寡糖，壳寡糖，糊精，氨基酸及其组合物，成分--B
本发明使用的天然抗菌物质是绿原酸，银杏黄酮及其组合物，成分--C
本发明使用的植物生长的微量元素和有益元素是锌，硼，铁，成分--D
本发明将TRIP1与BAC1按比例(1∶3-3∶1)混合，制备的固体产品I或液体产品II，然后按照一定比例加入成分A，B，C，D，制备液体和固体产品；同样本制剂中微生物灭活后也起到良好的防治作用。
本发明生物、生化制剂具体实施例如下：
例1、本发明生物、生化制剂是由以下按重量(份)比的原料配制而成的：
拟康氏木霉发酵液35、芽孢杆菌发酵液40、成分A4、成分B9、成分C12、成分D20；其中成分A由下列按重量(份)比的原料配制而成的：牛磺酸30、轻稀土35、维生素C8；成分B是由下列按重量(份)比的原料配制而成的：牛蒡寡糖30、壳寡糖20、糊精32、氨基酸15；成分C是由下列按重量(份)比的原料配制而成的：绿原酸55、银杏黄铜45；成分D是由下列按重量(份)比的原料配制而成的：锌盐30、硼酸27、铁盐35。
例2、本发明生物、生化制剂是由以下按重量(份)比的原料配制而成的：拟康氏木霉发酵液30、芽孢杆菌发酵液35、成分A3、成分B7、成分C10、成分D15；其中成分A由下列按重量(份)比的原料配制而成的：牛磺酸25、轻稀土25、维生素C 5；成分B是由下列按重量(份)比的原料配制而成的：牛蒡寡糖23、壳寡糖17、糊精27、氨基酸12；成分C是由下列按重量(份)比的原料配制而成的：绿原酸42、银杏黄铜35；成分D是由下列按重量(份)比的原料配制而成的：锌盐27、硼酸18、铁盐20。
例3、本发明生物、生化制剂是由以下按重量(份)比的原料配制而成的：拟康氏木霉发酵液40、芽孢杆菌发酵液45、成分A5、成分B13、成分C15、成分D25；其中成分A由下列按重量(份)比的原料配制而成的：牛磺酸35、轻稀土45、维生素C11；成分B是由下列按重量(份)比的原料配制而成的：牛蒡寡糖40、壳寡糖25、糊精37、氨基酸19；成分C是由下列按重量(份)比的原料配制而成的：绿原酸66、银杏黄铜53；成分D是由下列按重量(份)比的原料配制而成的：锌盐38、硼酸36、铁盐46。
具体使用方法可以喷施和灌根，间隔时间7-10天，可以与常规农药交替使用。
下面用具体实验实例说明本发明的明显效果：
实例1：接种黄瓜霜霉病，本发明对保护地黄瓜霜霉病的盆栽试验结果(新疆)
| 制剂 | 各级发病数(三个重复的平均值) | 病情指数(％) | 防治效果(％ | ||||
| 0级 | 1级 | 2级 | 3级 | 4级 | |||
| IIIIIICK | 92011170 | 1871080 | 006112 | 000110 | 00005 | 16.86.420.412.068.5 | 75.490.770.282.50 |
实例2：本发明对大棚黄瓜霜霉病的防治效果(青岛市既墨)
| 调查日期 | I30倍 | I5C倍 | II50倍 | II1C0倍 | 杀毒矾病指 | ||||
| 病指 | 防效 | 病指 | 防效 | 病指 | 防效 | 病指 | 防效 | ||
| 10月09日10月22日11月04日11月12日 | 16.812.715.824.0 | 62.153.634.434.4 | 21.912.213.322.4 | 50.655.544.838.8 | 37.719.59.117.5 | 14.928.862.252.2 | 38.226.211.218.1 | 13.84.353.550.5 | 44.327.424.136.6 |
实例3：本发明对保护地黄瓜白粉病的防治效果
| 处理 | 11月12日 | 11月25日 | ||||||||
| 病指 | 发病株数 | 总调查株 | 发病率 | 防效 | 病指 | 发病株数 | 总调查株 | 发病率 | 防效 | |
| I30倍I50倍I100倍II50倍II100倍II150倍杀毒矾 | 00001.91.94.0 | 0000326 | 34343434343434 | 00008.85.917.6 | 10010010010052.552.5 | 001.902.22.35.9 | 0020568 | 34343434343434 | 005.9014.717.623.5 | 10010067.810062.761.0 |
实例4：本发明对番茄黄萎+灰霉并发的防治效果；黄萎病发病后，其它农药无效，II灌根一次，12月18日调查病指，黄萎病和灰霉病分别为对照76，43处理减为28和14。
实例5：本发明对辣椒霜霉病，白粉病并发的防治效果，I 50倍，II 50，100倍相对防效分别达到68，80，59％。
实例6：本发明对细胞膜的保护作用。将各处理的小麦第1叶位的叶片剪成1cm长的片段，用清水漂洗，再用蒸馏水冲洗3次，用干净纱布吸干水分，充分混匀，分别称取各处理的叶片0.5g，置于15ml具塞刻度试管中，缓慢加入10ml蒸馏水，使叶片完全浸没在水中，振荡，并用真空泵抽气5min，在25℃恒温水浴中静置30min，用DDS-11A型电导仪(上海雷磁仪器厂)测定组织外渗液的电导率。再将此溶液置于沸水浴中煮沸15min，冷却后测定其电导率。计算其相对电导率。实验重复三次。
表：本发明制剂对黄瓜子叶细胞膜的保护作用
| 处理 | 相对透性(％) |
| CK1∶200001∶500001∶800001∶100000 | 15.17.26.25.85.6 |
实例7：本发明对植物光化学效率的提高作用。光合机构吸收的光能有三个可能的去向：一是用于推动光化学反应，引起反应中心的电荷分离及后来的电子传递和光合磷酸化，形成用于固定、还原二氧化碳的同化力(ATP和NADPH)；二是转变成热散失；三是以荧光的形式发射出来。由于这三者之间存在此消彼长的相互竞争关系，所以可以通过荧光的变化探测光合作用的变化。由于可以测定完整叶片的荧光，叶绿素a荧光诱导动力学可以成为原位检测光合作用PSII反应中心重要步骤的极好的探针。调制式荧光是测定PSII光化学效率(Fv/Fm)的一个重要工具。Fv/Fm-没有遭受环境胁迫并经过充分暗适应的植物叶片PSII最大的或潜在的量子效率指标，有时Fv/Fm也被称为开放的PSII反应中心的能量捕捉效率，即潜在的PSII的光化学效率。光受到抑制，光合作用差，总是导致Fv/Fm的降低，反之亦然。因此Fv/Fm的变化可以用作光合作用强弱的诊断指标。喷施后一周用植物效率仪测定光化学效率。下述数据表明本发明对几种植物光化学效率有明显促进作用。
| 植物 | 处理组(Fv/Fm)X±Sd | 对照组(Fv/Fm)X±Sd | 光化学效率提高率(％) |
| 蝴蝶兰栀子花茉莉花 | 0.8108±0.019770.8076±0.006070.8044±0.00483 | 0.7286±0.014030.7142±0.053090.7676±0.0290 | 11.2813.084.794 |
P＜0.05，显著性差异
| 棉花 | 处理组(Fv/Fm)X±Sd | 对照组(Fv/Fm)X±Sd | 光化学效率提高率(％) |
| 上部叶片中部叶片下部叶片 | 0.7478±0.019490.7982±0.022620.8350±0.01049 | 0.6560±0.036390.7792±0.018050.7496±0.0208 | 13.992.43811.39 |
P＜0.1，显著性差异
| 棉花 | 处理组(Fv/Fm)X±Sd | 对照组(Fv/Fm)X±Sd | 光化学效率提高率(％) |
| 上部叶片中部叶片下部叶片 | 0.7824±0.014960.8288±0.006380.8324±0.00365 | 0.6948±0.023820.8044±0.011060.7950±0.01994 | 12.613.0334.704 |
P＜0.1，显著性差异
| 葡萄 | 处理组(Fv/Fm)X±Sd | 对照组(Fv/Fm)X±Sd | 光化学效率提高率(％) |
| 上部叶片中部叶片下部叶片 | 0.7430±0.005610.7832±0.00920.7658±0.01331 | 0.6958±0.013850.7304±0.006350.7382±0.0061 | 6.7847.2293.739 |
| 大豆 | 处理组(Fv/Fm)X±Sd | 对照组(Fv/Fm)X±Sd | 光化学效率提高率(％) |
| 上部叶片中部叶片下部叶片 | 0.8158±0.010060.8296±0.003360.8136±0.00493 | 0.7712±0.010330.7804±0.007090.7698±0.00811 | 5.7836.3045.690 |
| 花生 | 处理组(Fv/Fm)X±Sd | 对照组(Fv/Fm)X±Sd | 光化学效率提高率(％) |
| 中部叶片下部叶片 | 0.8068±0.005120.8286±0.0068 | 0.7662±0.006910.7938±0.00249 | 5.2994.384 |
| 山药 | 处理组(Fv/Fm)X±Sd | 对照组(Fv/Fm)X±Sd | 光化学效率提高率(％) |
| 上部叶片中部叶片下部叶片 | 0.7946±0.00770.8230±0.004360.7914±0.01074 | 0.7630±0.00970.7906±0.01060.7608±0.00701 | 4.1424.0984.022 |
本发明“生物、生化制剂及其配制方法和用途”所涉及到的需要微生物菌种保藏的：拟康氏木霉菌株和枯草芽孢杆菌，已于2005年8月22日申请并被“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”收藏，收藏地址为北京市海淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所。该中心建议的分类命名分别为拟康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)菌株，保藏中心登记入册编号为：CGMCCNo.1443；枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株，保藏中心登记入册编号为：CGMCCNo.1442。
Claims (10)
1、一种生物、生化制剂，其特征在于：它是含有一株拟康氏木霉(Trichodermapseudokiningii)和一株芽孢杆菌(Bacillus spp)的混合微生物，以及与保护细胞膜物质，复合诱导子，天然抗菌物质，微量元素和有益元素共同组成的多靶位生物--生化制剂；拟康氏木霉是从秸秆上分离筛选到的菌株，命名为TRIPl；芽孢杆菌是从土壤中分离到的一株一株芽孢杆菌，命名为BACl；拟康氏木霉是用马铃薯固体培养基活化菌株，土豆麸皮培养基，液体培养活化的菌株36小时，得拟康氏木霉孢子及菌丝发酵液。
2、根据权利要求1生物、生化制剂，其特征在于：它是由以下原料按重量份组成的：拟康氏木霉发酵液0-50、芽孢杆菌发酵液0-50、成分A0-5、成分B0-20、成分C0-25、成分D0.5-25。
3、根据权利要求2生物、生化制剂，其特征在于：成分A是由以下原料按重量份组成的：牛磺酸0-30、轻稀土10-60、维生素C0-10；成分B是由以下原料按重量份组成的：牛蒡寡糖0-40、壳寡糖0-40、糊精0-50、氨基酸0-10；成分C是由以下原料按重量份组成的：绿原酸30-70、银杏黄铜20-60；成分D是由以下原料按重量份组成的：锌盐20-40、硼酸0-40、铁盐0-50。
4、根据权利要求1生物、生化制剂，其特征在于：它是由以下原料按重量份组成的：拟康氏木霉发酵液20-40、芽孢杆菌发酵液30-50、成分A2.5-5.2、成分B5-15、成分C10-15、成分D15-26。
5、根据权利要求4生物、生化制剂，其特征在于：成分A是由以下原料按重量份组成的：牛磺酸20-35、轻稀土20-50、维生素C5-11；成分B是由以下原料按重量份组成的：牛蒡寡糖20-40、壳寡糖15-25、糊精25-40、氨基酸10-20；成分C是由以下原料按重量份组成的：绿原酸40-70、银杏黄铜35-55；成分D是由以下原料按重量份组成的：锌盐25-40、硼酸15-40、铁盐15-50。
6、根据权利要求1生物、生化制剂，其特征在于：它是由以下原料按重量份组成的：拟康氏木霉发酵液25-40、芽孢杆菌发酵液35-45、成分A3-5、成分B10-15、成分C10-15、成分D17-25。
7、根据权利要求6生物、生化制剂，其特征在于：成分A是由以下原料按重量份组成的：牛磺酸20-30、轻稀土30-45、维生素C5-10；成分B是由以下原料按重量份组成的：牛蒡寡糖25-35、壳寡糖17-25、糊精30-40、氨基酸11-18；成分C是由以下原料按重量份组成的：绿原酸45-60、银杏黄铜40-50；成分D是由以下原料按重量份组成的：锌盐25-35、硼酸25-35、铁盐27-43。
8、根据权利要求2或4或6生物、生化制剂，其特征在于：生物、生化农药制剂是由以下按重量(份)比的原料配制而成的：拟康氏木霉发酵液35、芽孢杆菌发酵液40、成分A4、成分B9、成分C12、成分D20；其中成分A由下列按重量(份)比的原料配制而成的：牛磺酸30、轻稀土35、维生素C8；成分B是由下列按重量(份)比的原料配制而成的：牛蒡寡糖30、壳寡糖20、糊精32、氨基酸15；成分C是由下列按重量(份)比的原料配制而成的：绿原酸55、银杏黄铜45；成分D是由下列按重量(份)比的原料配制而成的：锌盐30、硼酸27、铁盐35。
9、根据权利要求1或2或4或6或8生物、生化制剂的配制方法如下：按照原料配比：
①拟康氏木霉发酵的制取方法：加工中应无菌操作；首先将拟康氏木霉菌种经过PDA平板活化24h，后接到PD液体培养基三角瓶中，28℃，100r/min培养36h，制得种子液，按3％的接种量接到种子罐中，培养搅拌通气培养36h，进入二级种子罐搅拌通气培养36h，然后注入发酵罐中搅拌通气培养96h，进入高速减切机混匀、包埋，再进入双效浓缩器在45℃的温度下浓缩制得拟康氏木霉培养物，备用；
②枯草芽孢杆菌发酵制取方法：加工中应无菌操作；将枯草芽孢杆菌试管菌种经过NA培养基平板活化，接到NA液体培养基中在摇床上培养24h，得种子液，按3％的接种量进入种子罐中搅拌通气培养24h，再进入二级种子罐搅拌通气培养24h，然后注入发酵罐中搅拌通气培养48h，再进入乳化罐中乳化包埋，再进入双效浓缩器在45℃的温度下浓缩制得枯草芽孢杆菌培养物，备用；
③分别将成分A、B、C在常温下溶解，再调制成膏后备用；再将成分D溶解后熬合，然后将调制好的成分A、B、C、D混合备用；
④最后将备用的拟康氏木霉培养物、枯草芽孢杆菌培养物及成分A、B、C、D混合物在配料罐中混匀、乳化，再终检测合格即为本发明的成品。
10、一种权利要求1或8生物、生化制剂的用途，其特征在于：对黄瓜、辣椒、番茄、棉花、大豆、甘薯病害具有良好预防和治疗作用，对防治枯萎病、黄萎病、霜霉病、疫病、立枯病、角斑病、白粉病、灰霉病、线虫病，生理性病害和红蜘蛛和蚜虫有效。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Biologica land biochemical preparation and its preparing method and use Effective date of registration: 20150717 Granted publication date: 20070905 Pledgee: Shandong agricultural financing Company limited by guarantee Pledgor: Kaoshan Biological Science and Technology Co., Ltd., Shandong Registration number: 2015990000558 |
|
| PLDC | Enforcement, change and cancellation of contracts on pledge of patent right or utility model | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20160718 Granted publication date: 20070905 Pledgee: Shandong agricultural financing Company limited by guarantee Pledgor: Kaoshan Biological Science and Technology Co., Ltd., Shandong Registration number: 2015990000558 |
|
| PLDC | Enforcement, change and cancellation of contracts on pledge of patent right or utility model | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Biologica land biochemical preparation and its preparing method and use Effective date of registration: 20160722 Granted publication date: 20070905 Pledgee: Shandong agricultural financing Company limited by guarantee Pledgor: Kaoshan Biological Science and Technology Co., Ltd., Shandong Registration number: 2016370000049 |
|
| PLDC | Enforcement, change and cancellation of contracts on pledge of patent right or utility model | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20070905 Termination date: 20170831 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |