CN1745756A - 人参皂甙治疗艾滋病的新用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及具有以下通式I的化合物用于制备抗艾滋病药物在治疗艾滋病中的用途，其中，R1是－Glc2－Glc，R2选自－Glc6－Glc、－Glc6－Ara(p)、－Glc6－Xyl和－Glc6－Ara(f)；以及R3是H。本发明还涉及含有上述化合物的组合物用于治疗艾滋病的用途。

Description

人参皂甙治疗艾滋病的新用途
技术领域
本发明涉及治疗艾滋病的药物。具体而言，本发明涉及使用从人参中提取的物质某类人参皂苷用于治疗艾滋病的新用途。本发明还涉及含有该人参皂苷的组合物用于治疗艾滋病的用途。本发明还涉及用于治疗艾滋病的选自人参(panax ginseng C.A.Mey)、西洋参(Radixpanacis quinquefolii)、绞股蓝(gymostemma pentaphyllum(thunb)makino)、三七(panax notoginseng(burk.)F.H.Chen.)、竹节人参(panax japonicus C.A.Meyer)和珠子参(panax japonicus var.major(burk.)Wu et Feng)的根、茎或叶的该类皂甙。
背景技术
人参根味甘、微苦、性温，具有调气养血、安神益智、生津止咳、滋补强身之功效，被誉为“百草之王”，在中国自古就是调理身体的优选药物。经研究发现，人参主要有以下调理机能：
1.人参对中枢神经系统有镇静作用，对很多兴奋药有对抗作用，并能减轻中枢抑制药的抑制作用。人参皂甙Rb类对中枢神经系统有镇静作用，而Rg类则可能有弱的兴奋作用，但剂量过大则呈抑制作用。人参对中枢神经不但能改善兴奋过程，也能加强抑制过程，使抑制趋于集中，使分化更完全。
2.人参有抗疲劳作用。人参二醇、人参三醇和各种人参皂甙有抗疲劳作用，其中人参三醇的作用比人参二醇强1倍以上。有人认为人参流浸膏能导致对糖元和高能磷酸化合物更经济的利用，增强乳酸、丙酮酸的代谢，通过有氧氧化，为肌肉活动及时提供能量。
3.人参对麻醉动物，小剂量可使血压上升，大剂量可使血压下降，但人参的治疗剂量对患者血压并无明显影响；人参皂甙对麻醉动物有轻微而短暂的降压作用。人参水浸剂有类似强心甙的作用，可使收缩幅度加强，心率减慢。
4.人参能加强机体对多种有害因素的非特异性抵抗力。如对物理的(冷冻、高温、过度运动、高压或低压)、化学的(如各种毒剂、麻醉药物)、生物的(异种血清、微生物、移植瘤)不良影响，均能增强机体的抵抗。
5.人参对正常兔及用四氧嘧啶、肾上腺素引起高血糖的大鼠及狗都有降低血糖的作用，但不能代替胰岛素。
6.人参提取物具有促性腺作用，人参皂甙A、C、F都具有相似强度的促性腺活性。
7.人参的总皂甙殆无溶血作用，而有微弱的抗皂甙或卵磷脂引起的溶血作用。近年的实验表明，人参总皂甙中以Rh、Rg和Rf为主的部分(即以原人参三醇为甙元的皂甙)有溶血作用，而以Rc和Rb为主的部分(即以原人参二醇为甙元的皂甙)有抗溶血作用。
8.人参提取物注射可使兔骨髓等处红细胞生成素(Erythropoietin)的含量升高。无论口服或体外直接加人参提取物，都能促进骨髓细胞DNA、蛋白质、脂质的生物合成，其有效成分至少有部分是人参皂甙(特别是Rb2，Rg1等)。灌胃有抗利尿作用。
9.人参对垂体肾上腺系统的机能有良好的影响。表现为人参在使动物对不利条件(高温、低温、长时期游泳等)的耐受力提高的同时，也减轻应激引起的肾上腺机能改变。
10.人参能促进蛋白质及核酸的合成。近年来的研究证明，人参提取物能明显促进大鼠肝、肾、骨髓、睾丸细胞的核酸及蛋白质的合成，促进血清蛋白质的合成。
许多实验表明，人参可提高动物与人的体力及智力活动能力，并能增强机体对各种有害刺激的非特异性抵抗力，在治疗剂量下对正常生理功能无干扰亦无副作用，是一类有益无害的全身性强壮滋补药。
在发现人参的上述药物作用的基础上，科技工作者对人参提取物进行了研究，发现在人参中起作用的主要含30多种人参皂甙，如Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg、Rh1、Rh2、F2，和拟人参甙F1，RTs及西洋参皂甙LI等，这些人参皂苷的药理研究主要有：抗衰老作用、增强免疫功能的作用、降低血脂的作用，并能引起心脏及血管的一些改变。但迄今为止，尚没有关于人参、人参提取物或任何一种人参皂苷能治疗艾滋病的公开。艾滋病即“人类获得性免疫缺损”综合症疾病的简称。其病原为“艾滋病毒(HIV)”，主要侵犯人体免疫系统，尤其是CD4淋巴细胞，最后摧毁机体免疫功能，引发条件性感染，導致死亡。
抗艾滋病毒药物的研究，第一个被报道的是苏拉明(Suramin)，1985年发现AZT具有体外抗艾滋病毒的活性，1986年进行了临床研究，1987年AZT作为第一个被美国批准用于治疗艾滋病的药，其主要问题是毒性和抗药性，以后又有其它药物出现，到目前为止被美国批准的抗艾滋病毒药有20个，按其作用机理主要属于三类，除2002年底批准的T20是作用于阻断病毒进入细胞之外，其它均是即病毒逆转酶抑制剂，如AZT、DDC、DDI等，和病毒蛋白酶抑制剂，其中后者在美国FDA批准了5种药物，分别是沙奎那维(saquinavir)、利托那韦(ritonavir)、indinavir硫酸盐、奈非那韦(nefinavir)等，1995年，美国科学家采用两种逆转酶抑制剂和一种蛋白酶抑制剂联合用药，即现在应用的高活性抗逆转酶疗法(HAART)，组合的药称之为“三联”，此疗法提高了疗效，进一步延长了病人寿命，至今应用6-7年，尚有少数病人活存。
目前我国已有三种药配制HAART疗法的药，但只有抗逆转录酶的药物，缺乏抑制蛋白酶的药物，而且毒性很大，有近20％的病人不能服用。因此在应用中仍面临毒性和抗药性问题。如前所述，T20虽然可以阻断病毒进入细胞，但由于T20是一种肽类，不能口服，只能注射，且价格十分昂贵。因此迫切需要毒性小的抗艾滋病毒药物。
祖国医药是一个伟大的宝库，值得挖掘发扬。发明人经过十多年的研究，找到一些中药提取物或组分或单一成分具有确切的抗艾滋病毒的活性，研究了其抗艾滋病毒作用的靶点，并明显提高机体免疫功能，具有比HAART价格便宜、毒性小等的优势，而且由于HAART疗法有抗药性，需要不断更新治疗组合的药物，因此，中药治疗艾滋病具有广阔的临床应用前景。
发明内容
本发明人发现人参提取物的达玛甾烷(dammarane)型化合物(也叫四环三萜达玛烷型皂苷)具有明显的治疗艾滋病的作用。
因此，本发明一方面涉及具有以下通式I的化合物用于制备抗艾滋病药物在治疗艾滋病中的用途：
Figure A20041007430700071
其中，R1是-Glc2-Glc，R2选自-Glc6-Glc、-Glc6-Ara(p)、-Glc6-Xyl和-Glc6-Ara(f)；以及R3是H。优选地，所述的R1是-Glc2-Glc，R2是-Glc6-Xyl，以及R3是H。
所述的化合物的给药剂量是0.03～0.50mg/ml。
所述的化合物可以以口服、透皮、注射、吸入或粘膜的方式给予。
本发明的化合物可以与其它抗艾滋病毒药物联合应用，并具有协同增效功能。所述的其它抗艾滋病毒药物可以是AZT或其它已产生了抗性的药物，所述的其它药物可以是AZT、DDC、DDI、沙奎那维(saquinavir)、利托那韦(ritonavir)、indinavir硫酸盐、奈非那韦(nefinavir)或其结合。所述的化合物可以对其它耐药毒株亦有效。
本发明还涉及具有以下通式I的化合物作为活性成分的药物组合物用于制备治疗艾滋病的药物中的用途：
Figure A20041007430700072
其中，R1是-Glc2-Glc，R2选自-Glc6-Glc、-Glc6-Ara(p)、-Glc6-Xyl和-Glc6-Ara(f)；以及R3是H。
本发明进一步涉及含有以下通式I的化合物：
其中，R1是-Glc2-Glc，
R2选自-Glc6-Glc、-Glc6-Ara(p)、-Glc6-Xyl和-Glc6-Ara(f)；以及
R3是H。
所述的组合物可以选自人参(panax ginseng C.A.Mey)、西洋参(Radix panacis quinquefolii)、绞股蓝(gymostemma pentaphyllum(thunb)makino)、三七(panax notoginseng(burk.)F.H.Chen.)、竹节人参(panax japonicus C.A.Meyer)和珠子参(panax japonicusvar.major(burk.)Wu et Feng)的根、茎或叶。
本发明进一步涉及所述的组合物用于制备治疗艾滋病的药物中的用途。所述的组合物亦可以对艾滋病的耐药株有效。所述的组合物可以来自上述植物的根、茎或/和叶。另外，来自所述的植物的干粉也应该函盖在本发明的范围之内。
根据本发明还涉及含有作为活性成份的本发明的提取物或化合物和常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。
本发明化合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明的提取物或化合物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为药物使用的适当的施用形式或剂量形式。
本发明提取物或化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等，优选口服。
本发明提取物或化合物或含有它的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射和皮内注射等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。
本发明提取物或化合物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。其它载体如聚丙烯酸树脂类、脂质体，水溶性载体如PEG4000和PEG6000、PVP等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
例如为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。
例如为了将给药单元制成胶囊，将有效成分本发明提取物或化合物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。
例如，将本发明提取物或化合物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。这些辅料是本领域常用的。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明提取物或化合物、药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数、治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明化合物组合物中最后的制剂中所含有的实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目的。本发明化合物的每天的合适剂量范围本发明的提取物或化合物的用量为0.03～0.50mg/Kg体重。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药这受限于给药医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。
本发明中可以对植物中含量少活性强的微量成分用人工仿生半合成的方法，制备该类化合物，从而获得足量的化合物供药用。
附图说明
图1表明Rb3体外抑制艾滋病病毒的作用靶点分析图。
图2A、B为检测JHR、Rb3对gp41蛋白的结合图示。
图3为检测Rb3对gp120蛋白的结合图示。
图4为检测JHR对CD4受体的作用图，A为对照组，B为给药组。
图5为JHR对CXCR4、CCR5辅助受体的作用。
图6为JHR体外抑制艾滋病毒作用靶点分析图。
具体实施方式
发明人研究抗艾滋病毒药物，一方面以现代医学为基础，十分重视艾滋病治疗中抗病毒的重要性，亦要考虑对免疫功能的影响，经过体外抗病毒实验的筛选，选择具有抗病毒，及可增强机体免疫功功能的药物，并结合中医辨症，以滋阴清热，益气补血，活血消淤，滋补肝肾的原则，组合药物。结果发现，具有以下通式I的化合物：
其中，R1是-Glc2-Glc，R2选自-Glc6-Glc、-Glc6-Ara(p)、-Glc6-Xyl和-Glc6-Ara(f)；以及R3是H。优选地，所述的R1是-Glc2-Glc，R2是-Glc6-Xyl，以及R3是H。
可以用于治疗艾滋病。
上述通式I的化合物是公知化合物，可以根据本领域文献报道的提取或合成方法合成。
具体讲，本发明优选的具体化合物包括Rb1、Rb2，Rb3，Rc，等等，其中Rb2和Rb3是本技术领域已知的具有相同结构的异构体。
Rh1
Figure A20041007430700112
Rb2
Figure A20041007430700121
Rb3
Figure A20041007430700122
Rc
Figure A20041007430700131
所述的具有通式I的化合物最初是从人参中提取的，但经过发明人的大量的实验，发现在多种植物中都含有通式I的化合物，所述的植物包括但不限于：人参(panax ginseng C.A.Mey)、西洋参(Radix panacisquinquefolii)、绞股蓝(gymostemma pentaphyllum(thunb)makino)、三七(panax notoginseng(burk.)F.H.Chen.)、竹节人参(panax japonicus C.A.Meyer)和珠子参(panax japonicus var.major(burk.)Wu et Feng)以及其它任何含有通式I的植物。所述的具有通式I的化合物不仅在上述植物的根中存在，在其茎与叶中都以一定的含量存在。
本发明所述的组合物可以含有一种以上的以下通式I的化合物：
Figure A20041007430700132
其中，R1是-Glc2-Glc，
R2选自-Glc6-Glc、-Glc6-Ara(p)、-Glc6-Xyl和-Glc6-Ara(f)；以及
R3是H。
组合物中各组分存在的比例优选Rbl：15-20wt％，Rb2：15-20wt％，Rb3：30-90wt％，Rc：30-90wt％。
因此，本领域普通技术人员可以理解的是，由于上述具有通式I的化合物具有治疗艾滋病的作用，所以任何含有上述通式I的化合物的植物应该具有治疗艾滋病的用途，因此，含有上述通式I的化合物的植物的组合物、混合物、研磨物都函盖在本发明保护的范围之内。
以下以实施例的方式阐明本发明的化合物具有抗艾滋病病毒的作用。
实施例1
体外实验：
分别用HIV-1病毒感染三种细胞(MT4，Hela-CD4，PBMC)，观察根据实施例1制备的人参组合物(JHR)对HIV-1复制的抑制作用。
1.MT4细胞
病毒：HIV-1，NL4
方法：将人参组合物配制成1mg/ml的浓度，进行实验时稀释成不同浓度备用。其中对所述的人参组合物进行的分析表明，其中含有15wt％的Rbl、33wt％的Rc、17wt％的Rb2以及35wt％的Rb3。①：在96孔培养板进行实验，于各孔加入100μl药液，每个浓度药液至少设两个孔。另取新鲜培养的MT4细胞，每管5×105细胞，加HIV-1病毒1×103TCID50/ML，37℃二氧化碳培养箱中培养，两小时后离心，弃去上清，再用RPMl1640洗一次，去除游离的病毒，加培养基到5×105/1ml。于96孔板每个加有药的孔中加入100μL此感染HIV-1的细胞(5×104/100u L)二氧化碳培养箱中37℃培养。第三天换药，于孔中吸出100μL上清，加入100μL与本孔相同浓度的新鲜药液，对照组加入100μL培养基。第六天，各孔取上清，采用Microelisa方法及试剂，测定P24抗原量。每次实验设病毒对照，细胞对照及AZT阳性药对照，根据所测P24抗原量按下列公式计算抑制率
Figure A20041007430700141
不同浓度药液所得的不同抑制率，经统计处理，求得半数制率量(IC50)。
在MT4细胞株药物JHR的半数抑制量IC50＝105.2ug/ml。
2.Hela-CD4细胞
病毒：HIV的单一生活周期的报告病毒(Single-life-cycle reportervirus)由带HIV质粒转染而得。
方法：24孔板接种Hela-CD4-LTR--gal细胞0.4×105/孔，放置24小时，使之吸附，贴壁，第二天，吸去孔中上清，加100ul药(药对照)或药及HIV-1(可不同浓度药液)或培养基(Mock)，两小时后各孔加入200μl相同药液或培养基，CO2培养箱37℃培养48小时，按下列方法检测。
固定：各孔吸去上清加入固定液(1ml)再以K4[Fe(CN)6]·3H2O，K3[Fe(CN)6]及X-gel染色。
计数：每孔兰色细胞数以下列公式计算抑制率，再计算IC50。
                          表1
体外：抑制HIV-1在细胞内(HeLa-CD4细胞)的复制(MAGI test)
剂量(mg/ml)                        抑制率(％)
1. 0.5020                          100
2. 0.1255                          98.8
3. 0.0313                          26.2
4. 0.0078                          0
结果发现，Hela-CD4细胞株的半数抑制量IC50＝44.3ug/ml。
3、PBMC细胞
病毒：NL4-3。
方法：以医院中新鲜取得的PBMC(人外周血新分离的淋巴细胞)，计数、离心1200rpm弃去上清，配成3×106细胞/ml。所用培养基应加入IL2.(1000×的IL2按每ml培养基中加入1μl)37°C过夜。实验以5×106为一感染单位，JHR浓度为0.4mg/ml相同浓度设两孔，病毒对照两孔，细胞对照也设两孔，24孔板每孔5×106细胞在0.5ml药液或培养基中，NL4.3病毒(HIV-1)，病毒量为每孔加入4×104IU，吹打均匀，转入12孔板，再加入相同药液或培养基，1.5ml，使总量为2ml，37℃培养，每3-4天取上清，每孔取100μl，放-80℃保存，全部收集完测定RT，药物组与病毒对照组比较计算抑制率。
结果发现，人参组合物在体外试验对PBMC细胞的HIV-1有明显的抑制作用见表2。
            表2
  药后天数   抑制率(％)
  3天   73.59
  6天   100
  9天   100
  12天   100
实施例2
采用与实施例1相同的方法，分别在于在培养孔中所加入的药物为人参皂甙单体，具体的加入浓度如下表3所示。
(一).人参皂甙单体抗HIV-1作用的分析比较-HeLa-CD4细胞株
                表3
  单体名称   抑制率(0.2mgml)   抑制率(0.4mgml)
  Rb1   41.88％
  Rb2   42.93％
  Rb3   70.68％   97.9％
  Rc   60.73％
  Rd   9.42％
由上表可以看出，在5种人参皂甙提取物中，其中所述的Rb3具有最佳的艾滋病抑制率。
(二)Rb3作用靶点的分析
目的：观察人参组合物作用于病毒生活周期哪个或哪几个阶段，包括病毒进入细胞，逆转录酶、整合酶、转录、蛋白酶。应用病毒“单一生活周期”(single life cycle)模型研究药物作用靶点。
(1)MAGI法：合病毒为重组病毒，以HIV的LTR，使β-半乳糖苷酶报告基因得以表达，形成病毒的一种“单一生活周期”的模型。
此模型如前述用Hela-CD4细胞以K4[Fe(CN)6]、K3[Fe(CN)6]、x-gel染色，显微镜下蓝色细胞表示带有病毒基因。
(2)Luciferase法：
采用重组、转染的VSVG病毒，细胞系用H9细胞株，检查方法采用发光法检测Luciferase的活性，病毒量多则此酶活性高。
实验方法：细胞感染病毒后设不同组，分别于感染后0，6，12，18，24，36小时加药，作用至感染后48小时，分别进行MAGI或Luciferase法检测。
以上两种检测方法均为病毒“单一生活周期”模型，其最大优点是感染的不同时间表示病毒繁殖的不同阶段。2-6小时是病毒进入细胞，10-14小时是逆转录阶段，20小时以后是整合、转录阶段。故不同时间给药其抑制作用表示作用于何靶点。本发明实验对JHR和Rb3的作用靶点进行了分析。
表4.本发明药物Rb3作用于病毒生活史靶点的分析
  加药时间(感染后)   2小时   10小时   29小时
  抑制率(％)   83.98   0   0
结果见图1和图6所示。如图1和图6所示，其中JHR的最佳抑制为在病毒感染后两小时加入药物抑制效果最佳，而此时药物作用的靶点为阻断病毒进入细胞。
用嗜M细胞病毒表示对CCR5辅助受体的作用，用嗜T细胞病毒表示对CXCR4辅助受体的作用。
(三)BIACORE检测JHR、Rb3对gp41、gp120蛋白的结合
1.Rb3对gp41蛋白的结合
将基因重组的gp41，gp120分别置于BIACORE检测仪的芯片上，加入Rb3一定浓度，一定量，仪器即检测出是否与之结合。结果如图2。
2.Rb3对gp120蛋白的结合，结果见图3。
从结果可以看出，JHR、Rb3可以与病毒的gp41及gp120均有结合，对gp41的结合作用更强。
(四)JHR对淋巴细胞CXCR4受体、巨噬细胞CCR5辅助受体的作用
实验使用MAGItest法进行，方法同上。(结果见图5)，其结果说明如下表5：
表5：辅助受体及其进入机制的研究(MAGI Test)
  嗜T病毒株(NL4).Hela-CD4细胞
  嗜M病毒株(Yu2).293T细胞
  药物   病毒   细胞系统                        结果
  药物   NL4   Hela-CD4(嗜T细胞)   有抑制作用   没有抑制作用   有抑制作用
  药物   Yu2   293T细胞(嗜M细胞)   没有抑制作用   有抑制作用   有抑制作用
  解释   作用于CXCR4辅助受体   作用于CCR5辅助受体   作用于CD4或其他机制
  其他机制：作用于除了受体外的细胞膜，病毒的脱壳，RNA的释放等。
(五)JHR对CD4受体的作用
使用流式细胞仪的方法进行测试。方法如下：采用SupT1细胞与药物37℃共同培育2小时，以PBS+2％FCS洗涤，于4℃冰浴条件加CD4PE放置30分钟，洗涤，离心后加CD4单抗，冰浴中培育30分钟，洗涤，离心，冰浴条件，悬浮于50ul的二抗Ab抗-小鼠-FITC中20分钟，洗涤一次，悬浮于300-500ul的PBS/2％CS+PI中，FACS(进行流式仪检测)。检测结果见图4A、B。
结果表明JHR对CD4受体无作用。
实施例3
合并用药的研究
目的：观察JHR与AZT有无协同作用
方法：实验采用MAGI+est方法(如前)
①单独用药：AZT从1uM至3.9nM，设五个剂量AZT1-5
            JHR从400ug/ml至1.56ug/ml，设五个剂量分别求得IC50
②合并应用
以AZT与JHR各1/2量相加为一个样品
AZT1分别与JHR1-JHR5五个组合
AZT2、AZT3、AZT4、AZT5亦分别与ZN1-ZN5五个组合，故为25个浓度组合，每个浓度设两孔，另设细胞、病毒对照。
③以各药物组合与病毒组比较，求得抑制率。以各药物组合抑制率与单独AZT IC50比较作用增减。
结果：见表6。
                表6
  药物   ED50   AZT/A+J
  JHR   21.5ug/ml
  AZT   46nM
  AZT-JHRl   5.8nM   7.93
  AZT-JHR2   10nM   4.60
  AZT-JHR3   16.7nM   2.75
  AZT-JHR4   33.5nM   1.37
  AZT-JHR5   40.6nM   1.13
结果表明，单用AZT半数抑制量(IC50)为46nM/ml，与JHR(其成分同实施例1)第一个剂量相加后AZT的半数抑制量(IC50)仅为5.8nM/ml，即1/8用量可达相同效果，说明两药有协同作用，增效8倍。
实施例4
对抗药性病毒株的作用
HIV-1对一种蛋白酶抑制剂形成的抗性株，毒力为5.7×104IU/ml，采用Hela-CD4细胞，MAGI实验方法观察JHR的作用，有无交叉抗性，结果：JHR剂量为0.4mg/ml，病毒5ul或8ul抑制率均达100％，表明对白酶抑制剂形成的抗性株也有作用，见表5。
                    表5
    JHR对HIV蛋白酶抑制剂抗性毒株的抑制率
  病毒量   药物   抑制率(％)
  PRIV   5μl   JHR0.4mg/ml   100
  8μl   JHR0.4mg/ml   100
注：PIRV病毒是抗蛋白抑制剂的病霉。
结果表明，所述的JHR对蛋白酶抑制剂产生抗性的HIV-1病毒株有很好的抑制作用。
实施例5
毒性实验
一.急性毒性实验
结果：给昆明种小鼠灌胃给药，在剂量大于20克/公斤未见任何毒性。
二.亚急性毒性实验
结果：给昆明种小鼠连续灌胃六个月，大，中，小三个剂量组动物的体重及生长情况正常ALT、BUN、RBC、WBC及白细胞分类均正常，病理切片表明心，肝，脾，肺，肾，胰，脑卵巢，睾丸等脏器未见异常。

Claims (11)

1.具有以下通式I的化合物用于制备治疗艾滋病的药物中的用途：
Figure A2004100743070002C1
其中，R1是-Glc2-Glc，
R2选自-Glc6-Glc、-Glc6-Ara(p)、-Glc6-Xyl和-Glc6-Ara(f)；以及
R3是H。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的R1是-Glc2-Glc，R2是-Glc6-Xyl，以及R3是H。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述的化合物的给药剂量是0.03～0.50mg/公斤体重。
4.根据权利要求1-4所述的用途，其特征在于所述的化合物可以与抗艾滋病毒药联合应用。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于所述的抗艾滋病毒药可以是AZT及其它抗艾滋病毒药物。
6、根据权利要求4所述的用途，其特征在于所述的艾滋病毒是由与其它抗艾滋病毒药物反复作用后产生对该药的抗药性的病毒。
7、含有以下通式I的化合物作为活性成分的药物组合物用于制备治疗艾滋病药物在治疗艾滋病中的用途：
Figure A2004100743070003C1
其中，R1是-Glc2-Glc，
R2选自-Glc6-Glc、-Glc6-Ara(p)、-Glc6-Xyl和-Glc6-Ara(f)；以及
R3是H。
8、根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述的组合物与抗艾滋病毒药联合应用。
9、根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述的抗艾滋病毒药可以是AZT及其它抗艾滋病毒药物。
10、含有一种或一种以上的以下通式I的化合物的组合物用于制备治疗艾滋病的药物中的用途：
其中，R1是-Glc2-Glc，
R2选自-Glc6-Glc、-Glc6-Ara(p)、-Glc6-Xyl和-Glc6-Ara(f)；以及
R3是H。
11、如权利要求10所述的用途，其中所述的艾滋病毒是由与其它抗艾滋病毒药物反复作用后产生对该药的抗药性的病毒。
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