CN1626103A - 一种含三七总皂苷和淫羊藿苷的药物组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种含三七总皂苷和淫羊藿苷的药物组合物，该组合物组成是：三七总皂苷∶淫羊藿苷的重量比值是：0.01∶0.99～0.50∶0.50。组合物与药用赋形剂可制备成主要包括液体和固体的药物制剂。本发明提供的组合物可在制备治疗和改善老年性痴呆症(阿尔茨海默病和血管性痴呆)的药物中的应用。本发明的组合物将两种有效部位合用，作用比单用其中任何一种显著增强，也显著强于两种药材的常规水煎液。本发明从三七和淫羊藿药材中提取单一的有效部位三七总皂苷和淫羊藿苷，各达到＞50％以上，并获得用于治疗老年性痴呆的两种有效部位最佳配比，可用于研制5类以上中药新药，拓展了单一药物用途。

Description

一种含三七总皂苷和淫羊藿苷的药物组合物及其用途

技术领域

本发明属于天然药物组合物，尤其涉及三七总皂苷和淫羊藿苷的组合物及其在制备治疗老年性痴呆症药物中的用途。

背景技术

随着我国社会结构改变，总人口老龄化比率日益突出，老年性痴呆的发病率有逐渐增高的趋势，但是能够达到疗效肯定、不良反应轻微、用药方便、疗程适中的药物却明显缺乏。中国加入WTO后，具有我国自主知识产权的该类新药更少，亟待研制开发具有我国独立知识产权的，并具有我国特色的疗效肯定、不良反应轻微的治疗老年性痴呆高技术含量新药。

对老年性痴呆中医讲究辨证论治，认为该病既为虚症，又为实症。从 虚症 论治，认为由于诸脏亏损，气血不足引起的，认为与肾脑有关。中医认为精藏于肾，肾精不足不能生髓，“脑为髓之海”，从而引起脑海空虚。因此肾精亏虚，精夺髓枯，而髓海不足，发为脑海。从 实症论治，认为多因痰瘀，血瘀，引起脑络阻死有关。因此治疗多运用补肾填精益髓、活血化瘀的治则。

以现代医学观点，老年性痴呆的发病机理较复杂，一些发病环节已经得到证实。其中β淀粉样蛋白(Aβ)肽的生成和蓄积是阿尔茨海默病发病机制的中心环节，而血管硬化等又是血管性痴呆的重要原因。其中脑组织和血管的氧化和脂质过氧化，以及雌激素水平改变与老年性痴呆发病的相关性已经获得了共识^[1，2]。

发明内容

本发明的一个目的是提供三七总皂苷和淫羊藿苷组合物，三七总皂苷和淫羊藿苷是从祖国医学中具有活血化瘀、补肾温阳的中药三七和淫羊藿中提取单一的具活性的有效部位，本发明组合物组成是：三七总皂苷∶淫羊藿苷的重量比值是：0.01∶0.99～0.50∶0.50。相当于相应的三七∶淫羊藿两药材重量比值为0.01∶0.99～0.50∶0.50。

组合物与药用赋形剂制备的制剂形式主要包括液体制剂和固体制剂。固体制剂主要包括颗粒剂、片剂、胶囊剂(含软胶囊)、滴丸剂。液体制剂主要包括口服液体制剂和注射液体制剂。

所述制剂的给药形式主要包括口服给药或非肠道给药，优选口服给药。

本发明的另一个目的是提供该组合物在制备治疗老年性痴呆症(阿尔茨海默病和血管性痴呆)的药物中的应用。

本发明的又一个目的是提供该组合物在制备改善老年性痴呆症(阿尔茨海默病和血管性痴呆)药物中的应用。

本发明的有益效果是：

1.该组合物基于中医药理论，参考循证医学资料，选用了两种药材中具有活血化瘀、补肾温阳、补益强壮之功效的有效部位组合，因此具有我国独特的经历了长期用药证实的治疗作用理论基础，并能获相得益彰的作用。

2.该组合物在制备用于治疗和改善老年性痴呆(阿尔茨海默病和血管性痴呆)药物中应用，可解决该类疾病治疗中，明显缺乏疗效肯定、不良反应轻微、用药方便的药物的问题。

3.采用多种经典的生物评价系统，在细胞水平和基因水平证实组合物之一的淫羊藿苷经口给药后，其代谢产物具有显著的抗氧化作用和雌激素样作用，可提供该组合物制备的药物在治疗上述疾病中具有多层次、多靶点作用的依据。

4.经动物药效学实验证明，该组合物具有以下作用：

(1)大鼠活血化瘀作用(调节凝血作用，抗血栓形成作用，调节血液流变学作用)。

(2)促进大鼠空间记忆作用，对D-半乳糖所致亚急性衰老合并鹅膏蕈酸损伤Meynert基底核的老年性痴呆模型大鼠学习记忆能力有显著改善作用。

5.经拆方研究，组合物将两种有效部位合用，比单用其中任何一种作用显著增强，并非简单作用叠加。该组合物的上述作用显著强于两种药材的常规水煎液。本组合物毒理作用研究结果表明，两种有效部位合用的小鼠急性毒性研究结果，与单用其中任何一种相仿，均未出现死亡和明显的中毒症状。

6.本发明从三七和淫羊藿药材中提取单一的有效部位三七总皂苷和淫羊藿苷，各达到＞50％以上，并获得用于治疗老年性痴呆的两种有效部位最佳配比，可用于研制5类以上中药新药，拓展了单一药物用途。

具体实施方式

本发明结合实施例作进一步说明。

实施例1    本发明三七总皂苷和淫羊藿苷的制备方法

(一)称取三七粉末(20-40目)，加10倍量70％乙醇回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至一定体积(0.33g生药/ml)，即得上柱溶液。吸取该溶液上大孔树脂，用7倍量75％乙醇洗脱，分段收集洗脱液。洗脱液水浴挥干，减压浓缩，真空干燥，称量总固体物并测定三七总皂苷含量。本批三七总皂苷含量＞80％。

(二)称取淫羊藿干燥原料(地上部分粉碎料，包括茎叶)乙醇提取3次(1小时/次)提取液浓缩烘干，干燥物HPLC检测，提取物淫羊藿苷含量为4.9％)。继而分离精制如下：提取液→DM130大孔树脂吸附→蒸馏水洗脱杂质→低醇洗脱杂质→高醇洗脱有效成分→树脂再生。60％乙醇洗脱液获淫羊藿苷76.9％。

上述两种制备方法提取的三七总皂苷(含量＞80％)和淫羊藿苷(含量76.9％)，以下简称“三七总皂苷和淫羊藿苷提取物”。

实施例2    本发明组合物的最大耐受量实验

(1)材料与方法：

三七总皂苷和淫羊藿苷提取物参照实施例1方法获得，以0.5％羧甲基纤维素钠配制成悬液。药物浓度各相当于在10g生药中含量/ml，临用前按照三七总皂苷∶淫羊藿苷重量比0.01∶0.99混匀成为组合物A和三七总皂苷∶淫羊藿苷重量比0.5∶0.5混匀成为组合物B。

采用最大浓度(相当于10g生药/ml)、最大给药容量0.4ml/10g/次灌胃给药，一天给与小鼠组合物和两药材单个提取物及各两次，间隔5～6小时，观察给药当天及随后两周内小鼠的体重和各种症状。

(2)结果：

小鼠灌胃给药当天和次日均有拉稀便现象，给药当天尚出现耳廓血管扩张现象，但组合物和两药材单个提取物之间未见差异。所有给药组均未出现死亡，随后两周内未见表观不良症状。

(3)结论：

组合物和两药材单个提取物小鼠灌胃给予800g生药中相应含量/kg，除给药当天有拉稀便现象外和耳廓血管扩张现象，未出现死亡及其它明显毒性反应。

实施例3    本发明组合物的最大耐受量实验2

(1)材料与方法参见实施例2，供试药物为三七总皂苷和淫羊藿苷以重量比0.1∶0.9、0.15∶0.85、0.2∶0.8、0.4∶0.6的组合物A～D。

(2)结果：

小鼠灌胃给药当天和次日均有拉稀便现象，给药当天尚出现耳廓血管扩张现象，但组合物A～D之间未见显著差异。所有给药组均未出现死亡，随后两周内未见表观不良症状。

(3)结论：

组合物A～D小鼠灌胃给予800g生药中相应含量/kg，除给药当天有拉稀便现象外和耳廓血管扩张现象，未出现死亡及其它明显毒性反应。

实施例4    抗大鼠凝血酶原(PT)和部分凝血活酶(KPTT)实验

(1)材料与方法：

三七总皂苷和淫羊藿苷提取物参照实施例1方法获得，并组成组合物A(三七总皂苷∶淫羊藿苷重量比0.01∶0.99)和组合物B(三七总皂苷∶淫羊藿苷重量比0.50∶0.50)。

肝素钠注射液：上海第一生化药业有限公司 批号：031101。复方丹参片：杭州胡庆余堂药业有限公司 批号：031030。枸橼酸钠：西安化学试剂厂 批号：980602。PT试剂盒：上海荣盛生物技术有限公司 批号：20040302。KPTT试剂盒：上海荣盛生物技术有限公司 批号：20040223。

Sprage-Dawley大鼠，清洁级，体重180～200g，雌雄各半。

设溶剂对照蒸馏水，阳性对照复方丹参片(1g/kg，灌胃)、肝素钠(1000u/kg，腹腔注射)，组合物A和组合物B的低剂量组(总10g生药/kg，灌胃)和高剂量组(总20g生药/kg，灌胃)，三七总皂苷和淫羊藿苷提取物单独给药组(均各为10g生药/kg，灌胃)。

除阳性对照肝素钠组外，其他各组连续给药7天，期间肝素钠组每天灌胃10ml/kg蒸馏水。末次给药前禁饲不禁水12～16小时。并于末次给药后1小时(肝素钠组为结扎前30min，腹腔注射)，用乌拉坦(1g/kg)麻醉固定大鼠，打开腹腔分离下腔静脉。用一次性注射器顺利从下腔静脉抽取1.8ml静脉血，立即滴入硅化试管(事先注入0.2ml 3.2％枸橼酸钠)，轻摇试管使抗凝剂和血浆混匀。将标本于3000rpm离心5min，上清分装于75×10mm的硅化试管，每个标本分装四份，每份0.1ml血清。

按试剂盒说明测定PT及KPTT，每个指标测两份复管取均值。比较给药组和对照组的差异。

(2)统计学处理

PT和KPTT测得数据以秒单位和溶剂对照进行t检验

(3)结果

大鼠用相当于20g总生药中含量/kg的组合物A和组合物B连续灌胃，9天后均能延长KPTT(P＜0.05)，但不能延长PT(P＞0.05)；用相当于总生药10g/kg的组合物A和组合物B或各10g生药/kg单一提取物连续灌胃，9天后均不能延长大鼠PT和KPTT(P＞0.05)。详细结果参见表1：

表1  三七总皂苷和淫羊藿苷组合物抗大鼠凝血酶原(PT)和部分凝血活酶(KPTT)作用

组别              剂量         动物数       PT(秒)         KPTT(秒)

溶剂对照        10ml/kg          10       18.1±1.5       28.6±2.6

肝素钠          1000u/kg         10       23.3±5.5       111.2±44.3^**

三七总皂苷      10g生药/kg       10       18.9±1.7       31.6±4.9

淫羊藿苷        10g生药/kg       10       18.3±1.3       30.2±4.6

组合物A         10g生药/kg       10       18.7±2.2       31.8±5.7

组合物A         20g生药/kg       10       20.2±3.7       39.3±4.0^*

组合物B         10g生药/kg       10       18.6±1.4       30.4±5.7

组合物B         20g生药/kg       10       19.2±3.1       36.7±2.8^*

复方丹参片      1g生药/kg        10       19.5±1.9       34.4±6.4

^*P＜0.05，^**P＜0.01与溶剂对照相比

(4)结论

大鼠用相当于20g总生药中含量/kg的组合物A和组合物B连续灌胃9天，能抑制内源性凝血活酶(P＜0.05)，比单用其中任何一种作用显著增强；对外源性凝血酶原没有显著性抑制作用(P＞0.05)。

实施例5    抗大鼠凝血酶原(PT)和部分凝血活酶(KPTT)实验2

(1)材料与方法参见实施例4，供试药物为三七总皂苷和淫羊藿苷以重量比0.1∶0.9、0.15∶0.85、0.2∶0.8、0.4∶0.6的组合物A～D。

设溶剂对照蒸馏水，阳性对照复方丹参片(1g/kg，灌胃)、肝素钠(1000u/kg，腹腔注射)，组合物A～D的低剂量组(总10g生药/kg，灌胃)和高剂量组(总20g生药/kg，灌胃)。

(2)结果

大鼠用相当于20g总生药中含量/kg的组合物A～D连续灌胃，9天后均能延长KPTT(P＜0.05)，但不能延长PT(P＞0.05)；用相当于总生药10g/kg的组合物A～D连续灌胃，9天后均不能延长大鼠PT和KPTT(P＞0.05)。详细结果参见表2：

表2  三七总皂苷和淫羊藿苷组合物抗大鼠凝血酶原(PT)和部分凝血活酶(KPTT)作用

组别               剂量         动物数       PT(秒)         KPTT(秒)

溶剂对照         10ml/kg          10       18.3±1.4       27.6±2.0

肝素钠           1000u/kg         10       22.6±4.7       109.2±40.3^**

组合物A          10g生药/kg       10       18.6±1.4       30.4±5.7

组合物A          20g生药/kg       10       18.9±3.3       37.6±2.1^*

组合物B          10g生药/kg       10       18.5±2.7       32.8±6.1

组合物B          20g生药/kg       10       20.7±2.3       38.4±2.9^*

组合物C          10g生药/kg       10       17.9±1.8       31.2±3.6

组合物C          20g生药/kg       10       20.1±3.7       38.8±2.3^*

组合物D          10g生药/kg       10       18.7±2.0       31.6±2.7

组合物D          20g生药/kg       10       19.8±2.8       35.9±2.0^*

复方丹参片       1g生药/kg        10       19.9±1.5       34.3±4.7

^*P＜0.05，^**P＜0.01与溶剂对照相比

(3)结论

大鼠用相当于20g总生药中含量/kg的组合物A～D连续灌胃9天，能抑制内源性凝血活酶(P＜0.05)；对外源性凝血酶原没有显著性抑制作用(P＞0.05)。

实施例6    三七总皂苷和淫羊藿苷提取物抗大鼠血栓形成试验(下腔静脉结扎法)

(1)材料与方法：

三七总皂苷和淫羊藿苷提取物参照实施例1方法获得，组合物制备与实施例3同，批号：040330，药物浓度4g生药/ml。

肝素钠注射液：上海第一生化药业有限公司 批号：031101。乌拉糖：曹扬第二中学化工厂 批号：19971022。

Sprage-Dawley大鼠，清洁级，体重220～240g，雌雄各半。

设溶剂对照蒸馏水，阳性对照肝素钠(1000u/kg，腹腔注射)、三七总皂苷组、淫羊藿苷组(各折合生药量10g/kg，灌胃)、三七总皂苷和淫羊藿苷组合物按0.01∶0.99组合物(组合物A)和0.50∶0.50(组合物B)低剂量组(折合总生药量10g/kg，灌胃)、高剂量组(折合总生药量20g/kg，灌胃)。

除阳性对照外，其他各组连续给药7天，期间阳性组灌胃10ml/kg蒸馏水。末次给药前禁饲不禁水12～14h。末次给药后1h(阳性对照为结扎前30分钟，腹腔注射)，用乌拉坦(1g/kg)麻醉固定大鼠，于腹中线切开皮肤及肌肉约3cm打开腹腔，找到下腔静脉并分离，于左肾静脉下方用7号粗丝线结扎下腔静脉，缝合腹壁。2h后重新打开腹壁，用止血钳夹住结扎下方2cm处下腔静脉(髂静脉分支处附近)，并用止血钳夹住2cm段内主要静脉分支。纵行切开该段静脉，滤纸条吸尽管腔内血液，观察有无血栓形成。如有则取出用滤纸吸尽血液称重。比较用药组和对照组间差异。

(2)统计学处理

对血栓重量进行组间t检验。

(3)结果

大鼠用组合物A和组合物B的低剂量组和高剂量组连续灌胃(折合总生药量10g/kg、20g/kg)7天后，均能显著抑制血栓的形成(P＜0.05，P＜0.01)，结果参见表3。

表3  三七总皂苷和淫羊藿苷组合物抗大鼠血栓形成作用

  组别             剂量          动物数      血栓重量(mg)

溶剂对照         10ml/kg           10        3.50±1.22

三七总皂苷       10g生药/kg        10        1.69±0.63^*

淫羊藿苷         10g生药/kg        10        2.28±0.67

组合物A          10g生药/kg        10        1.47±0.98^*

组合物A          20g生药/kg        10        0.64±0.52^**

组合物B          10g生药/kg        10        1.97±0.78^*

组合物B          20g生药/kg        10        0.82±0.57^**

肝素钠           1000u/kg          10            0^***

^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001与溶剂对照相比

(4)结论

大鼠用组合物A和组合物B低剂量组(均折合总生药量10g/kg)和高剂量组(均折合总生药量20g/kg)连续灌胃7天，对下腔静脉结扎引起的血栓形成有显著抑制作用(P＜0.05，P＜0.01)，比单用其中任何一种作用显著增强。

实施例7    三七总皂苷和淫羊藿苷提取物抗大鼠血栓形成试验2(下腔静脉结扎法)

(1)材料与方法参见实施例6，供试药物为三七总皂苷和淫羊藿苷以重量比0.1∶0.9、0.15∶0.85、0.2∶0.8、0.4∶0.6的组合物A～D。

设溶剂对照蒸馏水，阳性对照肝素钠(1000u/kg，腹腔注射)、三七总皂苷和淫羊藿苷组合物A～D低剂量组(折合总生药量10g/kg，灌胃)、高剂量组(折合总生药量20g/kg，灌胃)。

(3)结果

大鼠用组合物A～D的低剂量组和高剂量组连续灌胃(折合总生药量10g/kg、20g/kg)7天后，均能显著抑制血栓的形成(P＜0.05，P＜0.01)，结果参见表4。

表4  三七总皂苷和淫羊藿苷组合物抗大鼠血栓形成作用

  组别            剂量          动物数      血栓重量(mg)

溶剂对照        10ml/kg           10        3.89±1.42

组合物A         10g生药/kg        10        1.45±0.59^*

组合物A         10g生药/kg        10        2.09±0.62

组合物B         10g生药/kg        10        1.50±0.66^*

组合物B         20g生药/kg        10        0.68±0.57^**

组合物C         10g生药/kg        10        2.08±0.80

组合物C         20g生药/kg        10        1.33±0.72^*

组合物D         10g生药/kg        10        0.69±0.46^**

组合物D         20g生药/kg        10        0.78±0.49^**

肝素钠          1000u/kg          10            0^***

^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001与溶剂对照相比

(4)结论

大鼠用组合物A～D低剂量组(均折合总生药量10g/kg)和高剂量组(均折合总生药量20g/kg)连续灌胃7天，对下腔静脉结扎引起的血栓形成有显著抑制作用(P＜0.05，P＜0.01)。

实施例8    淫羊藿苷大鼠灌胃后体内代谢产物测定及其代谢产物体外抗氧化作用

取Sprage-Dawley大鼠8只，经18h空腹(禁食不禁水)后灌胃给予淫羊藿120mg/kg，予给药后240min尾静脉取血，同时收集0-96h的尿液和粪便，作生物样品预处理，并以毛细管电泳法测定血清，尿液和粪便中代谢产物，并以液-质联用(LC-MS)技术分析确证结构。结果显示，尿液与粪便中几乎未见淫羊藿苷，但是可见淫羊藿素与去甲淫羊藿素。

体外抗氧化活性通过Photochem^抗氧化测定仪测定。采用水溶性物质抗氧化能力测定法(ACW法)，先用维生素C为标准制作标准曲线，淫羊藿苷、及其体内代谢产物淫羊藿素与去甲淫羊藿素用工作液溶解后使最终实验量分别为6nmol、0.6nmol、0.6nmol，并进行抗氧化活性测定。实验结果以维生素C当量表示，结果参见表5。

表5  淫羊藿苷及其代谢产物的体外抗氧化活性

  样品        迟滞时间      抗氧化当量      x     标准差      相对标准差

                           (nmol维生素C)          (S.D.)        R.S.D

                                                                 (％)

               13.1            0.28

淫羊藿苷

               15.1            0.32       0.30     0.021         7.0

(6nmol)

               14.5            0.31

               7.9             0.17

淫羊藿素

               8.2             0.17       0.17     0.006         3.5

(0.6nmol)

               7.6             0.16

               36.9            0.77

去甲淫羊藿素

               38.1            0.80       0.84     0.091         10.8

(0.6nmol)

               44.9            0.94

参见图1，采用PHOTOCHEM^化学发光法获得抗氧化能力标准光发射曲线，样品具有较强的抗氧化能力，可消除较多的自由基，从而使发光强度减小、信号减弱、出现时间变迟。图中内标氨基苯二酰肼(1)，淫羊藿素0.6nmol、淫羊藿苷6.0nmol，、去甲淫羊藿素0.6nmol(2-4)的曲线。

结果显示，标准曲线线性关系良好，回归方程为：Y＝47.86×-0.16(R²＝0.9990)。以维生素C为标准物质与迟滞时间做标准曲线，其他测定样品的信号通过标准取消的转换，转变为维生素C当量，定量比较如下：去甲淫羊藿素的抗氧化能力最强，(相当于1.400nmol维生素C/nmol)，淫羊藿素其次(相当于0.289nmol维生素C/nmol)，淫羊藿苷最弱(相当于0.051nmol维生素C/nmol)，结果见表6。

表6  采用PHOTOCHEM^化学发光法获得水系统中样品抗氧化活性

抗氧化剂                nmol维生素C/nmol样品

淫羊藿苷                    0.051±0.003

淫羊藿素                    0.289±0.009

去甲淫羊藿素                1.400±0.146

结果提示，淫羊藿苷经口给药后，其主要代谢产物淫羊藿素与去甲淫羊藿素具有显著的抗氧化活性，目前认为脑组织和血管的氧化和脂质过氧化与老年性痴呆发生发展有关，药物抗氧化作用与防治老年性痴呆有关^[2]，由此可在口服后产生抗老年性痴呆作用。

实施例9    淫羊藿苷大鼠灌胃后体内代谢产物雌激素样活性测定

雌激素样活性通过人乳腺癌细胞MCF-7体外增殖法测定。将常规培养的MCF-7细胞经胰蛋白酶消化后分置24孔细胞培养版中，贴壁48h后换用实验用培养基，预培养48h，加入不同浓度的受试物和阳性药雌二醇(17-β-estradiol，E₂)，继续培养6天，并于结束前加入噻唑蓝(MTT)，继续培养4h，用酶标仪在570nm波长处比色，吸光度与活细胞数成反比。

参见图2，淫羊藿苷、淫羊藿素、去甲淫羊藿素对雌激素敏感型MCF-7/BUS细胞的促增殖作用。1nM雌二醇设为100％，结果均为相对于1nM雌二醇的相对增殖率。表述为平均值±标准差，数据统计用t-检验(^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001与溶剂二甲基亚砜相比)。

参见图3，淫羊藿素、去甲淫羊藿素对雌激素敏感型MCF-7/BUS细胞PR、PS2基因mRNA表达的影响。组别分别是(a.溶剂对照；b.1nM 17-β雌二醇；c.0.1μM淫羊藿素；d.1μM淫羊藿素；e.10μM淫羊藿素；f.1μM淫羊藿素+雌激素受体拮抗剂100nM ICI 182，780；g.1μM淫羊藿素；h.1μM淫羊藿素+100nM ICI 182，780；i.1nM 17-β雌二醇+100nM ICI 182，780).图3A、图3B分别为RT-PCR方法检测到的PR、PS2 mRNA水平，β-actin为内标，结果所示为PR、PS2相对于β-actin的相对值。

结果显示，与溶剂组相比，10^-9mol/L E₂引起MCF-7细胞的显著增殖(P＜0.01)；10^-8-10^-10mol/L淫羊藿素与去甲淫羊藿素也均可引起MCF-7细胞的显著增殖(P＜0.05或P＜0.01)；同样浓度范围内淫羊藿苷的促细胞增殖作用不显著(P＞0.148)。

结果提示，淫羊藿苷经口给药后，其主要代谢产物淫羊藿素与去甲淫羊藿素呈现显著雌激素样活性，目前认为雌激素样活性作用与防治老年性痴呆有关^[1]，由此可在服用淫羊藿苷后产生抗老年性痴呆作用。

实施例10    三七总皂苷和淫羊藿苷对老年性痴呆大鼠模型学习记忆能力影响

(1)材料与方法：

三七总皂苷和淫羊藿苷提取物制备与实施例1同，并组成组合物A(三七总皂苷∶淫羊藿苷重量比0.01∶0.99)和组合物B(三七总皂苷∶淫羊藿苷重量比0.50∶0.50)，浓度相当于总10g生药中含量/ml。喜德镇片由瑞士山德士药厂和天津华津制药厂合作生产，批号：021085。D-半乳糖由上海华舜生物工程有限公司提供；鹅膏蕈氨酸(IBO)由Sigma公司提供。

Sprage-Dawley大鼠，清洁级，体重220～240g，雌雄各半。

将大鼠随机分为5组：设溶剂对照每天腹腔注射(ip)蒸馏水6周后，脑内双侧Meynert基底核注射生理盐水。老年性痴呆模型组每天腹腔注射D-半乳糖50mg//kg6周，同时脑内双侧Meynert基底核注射IBO。阳性对照喜德镇片(0.36mg//kg，腹腔注射)，组合物A和组合物B分低剂量组(均折合叠加生药量10g/kg，灌胃)和高剂量组(均折合叠加生药量20g/kg，灌胃)，三七总皂苷和淫羊藿苷单独给药组(均各为10g生药/kg，灌胃)。造模方法均同痴呆模型组。溶剂对照组和模型组每天给予生理盐水5ml/kg灌胃，阳性对照组给予喜德镇片，实验组给予组合物A和B的低、高剂量。参照大鼠立体定位解剖图谱^[4，5]，每侧Meynert基底核缓慢注射1μm生理盐水或生理盐水溶解的IBO(1μm含IBO 5μg)。

(2)跳台试验：于末次给药后1小时，将大鼠放入跳台仪中开始实验。

将动物放入反应箱内适应环境3min，然后立即通以30v的交流电。动物受到电击，其正常反应是跳回平台，以躲避伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台上，如此训练5min，记录大鼠第一次跳下平台的潜伏期以及5min的错误次数，以此作为学习成绩。24后重作测验，记录潜伏期及3min内的错误次数，作为记忆保持成绩。

(3)统计方法：数据用均数±SD表示，各组间用t检验进行比较。结果见表7：

表7  三七总皂苷和淫羊藿苷组合物对老年性痴呆大鼠模型学习记忆能力影响(n＝10)

  组别          治疗剂量                 学习能力                     记忆能力

                                 潜伏期(秒)    错误次数(次)    潜伏期(秒)    错误次数(次)

溶剂对照      生理盐水5ml/kg    63.3±8.9       1.7±0.8      159.9±18.2      1.2±0.5

模型组        生理盐水5ml/kg    133.2±22.3^**  4.9±1.2^**   89.3±24.4^*     3.3±0.9^**

三七总皂苷    10g生药/kg        106.6±17.6     3.1±0.8      121.0±23.8^#    2.6±0.9

淫羊藿苷      10g生药/kg        92.5±11.3^#    2.9±1.0^#   127.0±19.5^#    1.9±1.0

组合物A       10g生药/kg        63.4±9.8       2.7±0.7      138.7±25.2^#    1.5±0.5^#

组合物A       20g生药/kg        60.8±16.7^##   2.4±0.8^#    156.3±16.3^##   1.2±0.6^##

组合物B       10g生药/kg        60.4±7.2       2.1±0.4^#    142.7±22.7^#    1.4±0.6^#

组合物B       20g生药/kg        60.8±16.7^##   2.4±0.8^#    156.3±14.9^##   1.2±0.4^##

喜德镇片      0.36mg//kg        89.3±18.7^##   3.2±1.1^#    126.5±28.6^#    1.8±0.8^#

与溶剂组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与模型组相比，^#P＜0.01，^##P＜0.01。

(4)结论

大鼠灌胃相当于总生药10g/kg、20g/kg的三七总皂苷和淫羊藿苷组合物A和组合物B，在学习能力测试中，能显著延长老年性痴呆大鼠跳台期潜伏期并显著降低错误次数(P＜0.05)，(P＜0.01)；在记忆能力测试中，也能显著延长老年性痴呆大鼠跳台期潜伏期并显著降低错误次数，上述作用比单用其中任何一种作用显著增强。

实施例11    三七总皂苷和淫羊藿苷对老年性痴呆大鼠模型学习记忆能力影响2

(1)材料与方法参见实施例10，供试药物为三七总皂苷和淫羊藿苷以重量比0.1∶0.9、0.15∶0.85、0.2∶0.8、0.4∶0.6的组合物A～D。

设溶剂对照(生理盐水5ml/kg，灌胃)、阳性对照组(喜德镇片0.36mg//kg，腹腔注射)，组合物A～D低剂量组(均折合叠加生药量10g/kg，灌胃)和高剂量组(均折合叠加生药量20g/kg，灌胃)。造模方法均同痴呆模型组。

结果见表8：

表8  三七总皂苷和淫羊藿苷组合物对老年性痴呆大鼠模型学习记忆能力影响(n＝10)

组别           治疗剂量              学习能力                    记忆能力

                             潜伏期(秒)    错误次数(次)    潜伏期(秒)    错误次数(次)

溶剂对照     生理盐水5ml/kg  62.9±8.1       1.9±0.7     150.9±19.2     1.5±0.4

模型组       生理盐水5ml/kg  130.7±24.4^**  5.1±1.2^**  87.9±25.6^*    3.5±0.6^**

组合物A      10g生药/kg      100.5±12.6     3.1±0.8     123.0±22.9^#   2.7±0.7

组合物A      20g生药/kg      90.5±11.7^#    2.3±1.4^#  130.0±18.6^#   1.8±1.1

组合物B      10g生药/kg      64.3±7.5       2.8±0.9     140.7±24.6^#   1.4±0.3^#

组合物B      20g生药/kg      61.6±12.8^##   2.5±0.7^#   155.7±16.0^##  1.3±0.8^##

组合物C      10g生药/kg      60.9±5.7       2.3±0.5^#   140.8±21.9^#   1.4±0.4^#

组合物C      20g生药/kg      62.0±17.2^##   2.5±0.7^#   150.1±10.7^##  1.5±0.7^##

组合物D      10g生药/kg      60.9±10.0      2.2±0.7^#   144.6±21.5^#   1.4±0.7^#

组合物D      20g生药/kg      61.3±15.9^##   2.9±0.8^#   150.3±12.99^## 1.3±0.5^##

喜德镇片     0.36mg//kg      90.1±16.3^##   3.1±1.4^#   127.5±25.0^#   1.8±0.7^#

与溶剂组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与模型组相比，^#P＜0.01，^##P＜0.01。

(4)结论

大鼠灌胃相当于总生药10g/kg、20g/kg的三七总皂苷和淫羊藿苷组合物A～D，在学习能力测试中，能显著延长老年性痴呆大鼠跳台期潜伏期并显著降低错误次数(P＜0.05)，(P＜0.01)；在记忆能力测试中，也能显著延长老年性痴呆大鼠跳台期潜伏期并显著降低错误次数。

实施例12    胶囊制剂及其辅料的一个实例

组成： 三七总皂苷     30mg

       淫养藿苷      150mg

       药用淀粉       适量

制备方法：

取三七总皂苷和淫养藿苷干浸膏细粉(80-100目)加入适量淀粉，混合均匀。按以下工艺流程填充：取2号空心胶囊→排列→校正方向→胶囊帽、体分开→药物填入→残品剔除→胶囊帽、体结合→成品(粒重：250mg)。

可以根据药剂学允许的制剂方法，制备液体制剂和固体制剂。固体制剂主要包括颗粒剂、片剂、胶囊、软胶丸、软胶囊、滴丸剂、栓剂。液体制剂主要包括口服液体制剂和注射液体制剂。

无需进一步详细阐述，相信采用前面所公开的内容，本领域技术人员可最大限度地应用。因此，前面的优选具体实施方案应被理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。

本发明涉及的部分参考文献：

1.杨华，等：雌激素与阿尔茨海默病  中国临床康复  2004；8(1)：148-150。

2.盛树力：老年性痴呆的药物治疗和药物作用靶位  2003；5(6)402-404。

3.潘竟锵，等：中药对D-半乳糖诱导病理模型作用的研究进展  广东医药  2001；11(5)：1-5。

4.Riekkinen PJR，et al：The effects of THA on scopolamine and basalislesioninduced EEG slowing[J].Brain Res Bull，1991，26(4)：623-637.

5.Riekkinen PJR，et al：Comparison of the effects of acute and chronicibotenic and quisqualic acid nucleus basalis leioning[J].Brain Res Bull，1991，27(2)：199-126.

Claims (8)

1.一种含三七总皂苷和淫羊藿苷的组合物，三七总皂苷和淫羊藿苷是从中药三七和淫羊藿中提取单一的具活性的有效部位，其特征是：组合物的组成为三七总皂苷∶淫羊藿苷的重量比值是：0.01∶0.99～0.50∶0.50。

2.根据权利要求1所述的含三七总皂苷和淫羊藿苷的组合物，其特征是：组合物可与药用赋形剂制备成药物制剂。

3.根据权利要求2所述的药物制剂，其特征是：制剂形式主要包括液体制剂和固体制剂。

4.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征是：固体制剂主要包括颗粒剂、片剂、胶囊、软胶丸、滴丸剂、栓剂。

5.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征是：液体制剂主要包括口服液体制剂和注射液体制剂。

6.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征是：所述制剂的给药形式主要包括口服给药或非肠道给药。

7.根据权利要求1-6所述的一种含三七总皂苷和淫羊藿苷的组合物的用途，其特征是：该组合物在制备治疗老年性痴呆症(阿尔茨海默病和血管性痴呆)的药物中的应用。

8.根据权利要求1-6所述的一种含三七总皂苷和淫羊藿苷的组合物的用途，其特征是：该组合物在制备改善老年性痴呆症(阿尔茨海默病和血管性痴呆)药物中的应用。

Images