CN1799574A - 治疗抑郁症的药物 - Google Patents

治疗抑郁症的药物 Download PDF

Info

Publication number
CN1799574A
CN1799574A CNA2005100595060A CN200510059506A CN1799574A CN 1799574 A CN1799574 A CN 1799574A CN A2005100595060 A CNA2005100595060 A CN A2005100595060A CN 200510059506 A CN200510059506 A CN 200510059506A CN 1799574 A CN1799574 A CN 1799574A
Authority
CN
China
Prior art keywords
extract
poria
fructus psoraleae
pharmaceutical composition
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2005100595060A
Other languages
English (en)
Inventor
孔祥复
孔令东
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hong Kong Jockey Club Institute of Chinese Medicine Ltd
Original Assignee
Hong Kong Jockey Club Institute of Chinese Medicine Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hong Kong Jockey Club Institute of Chinese Medicine Ltd filed Critical Hong Kong Jockey Club Institute of Chinese Medicine Ltd
Priority to PCT/CN2005/002432 priority Critical patent/WO2006072213A1/zh
Publication of CN1799574A publication Critical patent/CN1799574A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A61K31/366—Lactones having six-membered rings, e.g. delta-lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
    • A61K36/076—Poria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A61K36/487—Psoralea
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及使用中草药补骨脂提取物与茯苓提取物来制备治疗抑郁症及相关症状的配方。

Description

治疗抑郁症的药物
技术领域
本发明涉及药物组合物、营养补充品、保健食品及其它相关组方的领域。特别是，本发明涉及包含草药提取物的制剂，用来减轻与抑郁症及相关的病症。
背景技术
本公开所引用的参考资料并不一定是现有技术。因此，引用这些参考资料的并不代表承认这些参考资料是任一司法辖区内的现有技术。
抑郁症是严重危害人类身心健康的常见病、多发病。随着社会竞争的日益加剧，人们承受的生理、心理压力越来越大，抑郁症的发病率有不断升高的趋势。世界卫生组织最新统计结果表明全球患病率约11％，并预测2020年抑郁症将成为全球第二位医疗疾患。因此加强抑郁症发病机制和防治的研究，具有十分重要战略的意义。
抑郁症病因病机复杂，其发生发展与中枢神经系统、神经内分泌系统及免疫系统等系统功能失常有关。在临床上依靠药物治疗或控制抑郁症时，现有西药存在抗抑郁谱窄、作用位点较单一、毒副作用较大等缺点常限制患者选择使用。因此，世界范围内日益迫切需求针对抑郁症复杂病因治疗的高效安全药品。
因此，有必要针对以上所述缺点，提出新的，更有效的治疗抑郁症的药物。
发明内容
根据本发明的一个方面，提供一种治疗抑郁症的药物组合物，其特征在于所述药物组合物包含豆科植物补骨脂的提取物及多孔菌科真菌茯苓的提取物。在一个优选的实施方案中，所述药物组合物基本上由豆科植物补骨脂的提取物及多孔菌科真菌茯苓的提取物组成。在更优选的实施方案中，所述药物组合物由豆科植物补骨脂的提取物及多孔菌科真菌茯苓的提取物组成。在另一个优选的实施方案中，所述药物组合物是由补骨脂(豆科植物补骨脂的干燥成熟果实)提取物及茯苓(多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核)提取物组成。在较优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1至1∶7。在更优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1至1∶3。在一个更优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1至1∶2。在最优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1.5。
在另一个优选的实施方案中，所述补骨脂提取物包含80-99％的呋喃香豆素，其中，所述呋喃香豆素包含4-12％的补骨脂素和大约3-11％的异补骨脂素。在更优选的实施方案中，所述补骨脂提取物包含95％的呋喃香豆素，其中，所述呋喃香豆素含有大约7-9％的补骨脂素和6-8％的异补骨脂素。
在另一个优选的实施方案中，所述茯苓提取物含有大约57-62％的茯苓多糖。在另一个优选的实施方案中，所述药物组合物不包含选自下列的中草药：人参、黄芪、女贞子、丹参、制何首乌、麦冬、党参、白术、重楼、香附、苍术、防风、墨汉莲、蒺藜、紫草、甘草。
根据本发明的另一个方面，提供一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有呋喃香豆素和茯苓多糖，其中，所述呋喃香豆素包括补骨脂素和异补骨脂素。在一个优选的实施方案中，所述补骨脂素、异补骨脂素和茯苓多糖的含量比为7-9∶6-8∶86-93。
根据本发明的另一个方面，提供一种制备上述药物组合物的方法，包含：
a.提取补骨脂，形成补骨脂提取物；
b.提取茯苓，形成茯苓提取物；以及
c.合并所述补骨脂提取物和所述茯苓提取物。
在一个优选的实施方案中，其中补骨脂与茯苓是由下述重量配比制成：补骨脂1～2份，茯苓1～2份。在一个较优选的实施方案中，所述补骨脂与茯苓是由下述重量配比制成：补骨脂1～2份，茯苓1份。在一个更优选的实施方案中，所述补骨脂与茯苓是由下述重量配比制成：补骨脂2份，茯苓1份。
在另一个优选的实施方案中，所述步骤a.补骨脂的提取进一步包括：
i)以第一提取液提取所述补骨脂，形成一个第一提取溶液；
ii)以第二提取液提取所述第一提取溶液，形成一个包含残渣的第二提取溶液；以及
iii)从第二提取溶液中分离并干燥所述残渣；
其特征在于，所述提取液中的其中一个提取液是用高极性溶剂进行提取，而另一个提取液是用低极性溶剂进行提取。
在更优选的实施方案中，所述第一提取液是乙醇、甲醇或丙酮，而所述第二提取液是乙酸乙酯、二乙基醚、三氯甲烷或二氯甲烷。在更优选的实施方案中，所述第一提取液是55-75％(v/v)的乙醇，而所述第二提取液是80-100％的乙酸乙酯。在最优选的实施方案中，所述第一提取液是65％(v/v)的乙醇，而所述第二提取液是100％的乙酸乙酯。
在另一个优选的实施方案中，所述步骤b.茯苓的提取进一步包括：
i)以水对茯苓进行提取，以获得一个水溶性提取物以及一个非水溶性茯苓残渣；
ii)以碱性溶剂对所述非水溶性茯苓残渣进行提取以获得一个碱溶性的提取物；以及
iii)合并所述水溶性提取物及碱溶性提取物以形成所述茯苓提取物。
在较优选的实施方案中根据权利要求22所述的方法，步骤i)更进一步包括：
a.于水中煎煮所述茯苓以形成一个茯苓水溶液；
b.过滤并浓缩所述茯苓水溶液以形成一个浓缩的茯苓水溶液；
c.沉淀所述浓缩的茯苓水溶液以形成沉淀物；以及
d.分离并干燥所述沉淀物以形成茯苓水溶性提取物。
在更优选的实施方案中，步骤c.中所述沉淀物是藉由加入醇形成的。在更优选的实施方案中，所述醇为80-100％(v/v)的乙醇。在最优选的实施方案中，所述醇为95％(v/v)的乙醇。
在另一个较优选的实施方案中步骤(ii)进一步包括：
a.以碱性溶剂对所述茯苓残渣进行提取，以形成一个提取物溶液，其中所述提取物溶液的pH值＝11-13；
b.以酸来中和所述提取物溶液至pH值＝6-7，形成一个中和的提取物溶液；
c.沉淀所述中和的提取物溶液以形成沉淀物；
d.分离并干燥所述沉淀物以获得所述茯苓碱溶性提取物。
在较优选的实施方案中，所述碱性溶剂为1M的NaOH。在另一个更优选的实施方案中，所述沉淀是藉由加入醇而得的。在更优选的实施方案中，所述醇为80-100％(v/v)的乙醇。在最优选的实施方案中，所述醇为95％(v/v)的乙醇。
根据本发明的另一方面，提供一种营养补充品，包含补骨脂提取物及茯苓提取物。在一个优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1至1∶7。在一个较优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1至1∶3。在一个更优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1-1∶2。在一个最优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1.5。
根据本发明的另一方面，提供一种健康食品，包含补骨脂提取物及茯苓提取物。在一个优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1至1∶7。在一个较优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1至1∶3。在一个更优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1至1∶2。在一个最优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1.5。
根据本发明的另一方面，提供一种以补骨脂提取物与茯苓提取物作为制备治抑郁症药的应用。在一个优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比为1∶1至1∶7。在一个更优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比为1∶1至1∶3。在一个更优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1至1∶2。在一个最优选的实施方案中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比大约为1∶1.5。
附图说明
图1显示了根据本发明的一个方面提供的一个制备茯苓提取物的过程。
图2显示了标准补骨脂及异补骨脂的HPLC色谱图。
图3显示了根据本发明的另一个方面制备的补骨脂提取物的HPLC色谱图。
具体实施方式
本处所述的补骨脂与茯苓定义如下。
补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，是温肾壮阳类常用中药。其性味辛温，入肾经，主五劳七伤，温肾阳，治肾泄，通命门，暖丹田，敛精神。温肾壮阳中药可通过调节HPA轴功能和免疫功能而达到“补肾”、“定心”之功效。现代研究表明补骨脂含有香豆素类、黄酮类、挥发油类等等成分，具有调节中枢神经系统、神经内分泌系统、增强免疫、抗癌、抑制一氧化氮合酶等作用。在中医临床上常重用补骨脂治疗更年期综合征效果显着。国外临床研究证实补骨脂中香豆素类成分补骨脂素可通过抑制褪黑激素代谢治疗季节性情感障碍。
此处所用的“提取物”“药草提取物”或“草药提取物”指的是用本说明书所述的一般方法或等同方法从植物中提取出的活性成分。“水溶性提取物”指的是可溶于水的提取物。“碱溶性提取物”指的是可溶于碱性溶剂的提取物。
此处所用的“补骨脂提取物”在一般的情形下指的是利用特定提取方法，从补骨脂植物的干燥果实或补骨脂属植物中所分离提取出的组合物。优选的是指利用特定提取方法从补骨脂植物的干燥果实分离提取出的组合物。这种提取物包含呋喃香豆素、补骨脂素、异补骨脂素。
茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf.干燥菌核。汉代仲景方中重用茯苓以达到“宁心安神”的目的。茯苓主要含有茯苓多糖、三萜类有机酸等成分。茯苓水提取液对中枢神经系统有镇静作用。茯苓水提液可纠正胞浆内钙离子水平为茯苓治疗中枢神经系统疾病提供一定的科学依据。茯苓多糖具有免疫调节功能如增强自然杀伤细胞及淋巴因子活化的杀伤细胞活性、调节细胞因子水平、抑制肿瘤坏死因数等作用。
此处所用的“茯苓提取物”在一般的情况下指的是以特定的提取过程，从多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核、菌丝体、或茯苓属的真菌的其它部份分离出的活性组合物。优选的是以特定的提取过程从真菌茯苓的干燥菌核中分离出的活性组合物。这种提取物包括茯苓多糖。而茯苓多糖内含有茯苓聚糖、葡聚糖、茯苓糖、茯苓聚糖等。在此处所用的“茯苓多糖”指的是从茯苓提取出的多糖。
在此处所用的“高极性溶剂”指的是Snyder极性指数高于5的有机溶剂。“低极性溶剂”指的是Snyder极性指数低于5的有机溶剂。
抗抑郁效果
采用小鼠悬尾模型(Tail Suspension Test，TST)、小鼠强迫游泳模型(ForcedSwimming Test，FST)以及慢性温和压力模型(Chronic Mild Stress，CMS)来研究所述药物组合物的抗抑郁效果。这些模型特点如下：
小鼠悬尾模型
抑郁症的一个主要症状是动机行为的减少。悬尾实验模型中，悬尾小鼠为克服不正常体位而挣扎活动，这是小鼠的动机行为，但活动到一定时间后，出现间断性不动，显示“失望”状态。这里所指的不动性反映了一种被称之为“行为绝望和扭曲(behavioral despair and variant)”或“对强压环境适应的失败(failure to adaptto stress)”状态，是一种消极的无动机绝望状态。藉由测量悬尾一段时间后小鼠的不动时间，可以评价药物对小鼠抗抑郁的疗效。(不动时间越短，显示药物抗抑郁疗效越显著)。小鼠悬尾行为绝望模型对绝大多数抗抑郁药敏感，并且操作简单、快捷，因此被广泛用于抗抑郁药物的筛选。
小鼠强迫游泳模型
抑郁症的一个主要症状是动机行为的减少。强迫游泳模型中，小鼠被迫在一局限的空间内游泳，它们首先表现出挣扎和试图逃跑的动机行为，随后处于一种被称为“绝望”的不动状态。这里所指的不动性反映了一种被称之为“行为绝望和扭曲(behavioral despair and variant)”或“对强压环境适应的失败(failure to adaptto stress)”状态，是一种消极的无动机绝望状态。藉由测量强迫游泳一段时间后小鼠的不动时间，可以测得药物对小鼠抗抑郁的疗效。(不动时间越短，显示药物抗抑郁疗效越显著)。小鼠强迫游泳行为绝望模型对绝大多数抗抑郁药敏感，并且操作简单、快捷，因此被广泛用于该类药物的筛选。
慢性温和刺激(Chronic Mild Stress，CMS)模型
在慢性温和刺激模型中，用慢性温和程序刺激大鼠，可观察大鼠蔗糖摄入量的恢复、大脑单胺氧化酶-A(MAO-A)和单胺氧化酶-B(MAO-B)活性的抑制、皮质醇含量降低的程度来判断抗抑郁药物的有效性。
在慢性温和刺激模型中，大鼠在数星期之内依次接受多种温和刺激。用大鼠对甜味溶液摄入量的降低指标来评价慢性温和刺激对大鼠行为作用的效果。而抗抑郁药可拮抗该作用，其增加慢性温和刺激模型中大鼠对蔗糖的摄入量。进一步的研究显示，慢性温和刺激可引起大鼠生化及生理过程的损害。给予抗抑郁药物如三环类抗抑郁药、选择性5-羟色胺再摄取抑制剂、单胺氧化酶抑制剂等可改善慢性温和刺激对动物的损害，而非抗抑郁药物则在此模型中无效。此模型具有良好的预测有效性(因慢性刺激刺激导致的行为改变可由多种抗抑郁剂恢复)、外表有效性(几乎所有可表现的抑郁症状皆已表现)、直观有效性(慢性温和刺激导致一般性对奖赏反应减低，与郁症的核心症状“快感缺失”(anhedonia)相似(Willner P.1997)。
慢性温和刺激可降低动物蔗糖摄入量，提高其大脑单胺氧化酶-A(MAO-A)和单胺氧化酶-B(MAO-B)的活性以及血清皮质醇的水平。因此，能恢复动物的蔗糖摄入量、抑制大脑MAO-A和MAO-B的活性以及降低血清皮质醇水平的药剂被认为是有效的抗抑郁药。
实施例1
                        制备补骨脂提取物
药品和仪器
●补骨脂：于2001年五月购自中国江苏省药材公司，并由中国南京大学生命科学学院生物系鉴定。样本(No.NJ-34060)储存于南京大学生命科学学院植物标本馆，中国南京，邮编：210093。
●95％(v/v)乙醇：购自南京化学试剂一厂，产品编号：1370400201。
●65％(v/v)乙醇：将684ml的95％(v/v)乙醇加入316ml的水制备而成。
●100％乙酸乙酯：购自南京化学试剂一厂，产品编号：1370401001。
●渗漉筒(1000ml)：购自天津友丰技术玻璃有限公司。产品编号：119-02-10。
●分液漏斗(1000ml)：购自南京三爱玻璃仪器有限公司。产品编号：8543。
●旋转减压浓缩器：购自Buchi Labortechnik A G，Switzerland
将100g干燥的补骨脂磨成粉，加65％乙醇75mL拌匀，闷润2h后将药粉均匀装入渗漉筒里，继加65％乙醇200mL浸泡24h，然后再加1300ml 65％乙醇至所述渗漉筒中。按1.5mL/min的速度收集1500.0mL渗漉液。60℃减压浓缩至渗漉液无乙醇味，得250.0mL药液。再用250ml 100％乙酸乙酯萃取所述药液8次。收集乙酸乙酯层，于60℃减压浓缩，除去乙酸乙酯。将剩余的残渣于60℃减压干燥，即得补骨脂提取物12.10g。(得率12.10％)
实施例2.
                        制备茯苓提取物
药品和仪器
●茯苓：于2001年五月购自中国江苏省药材公司，并由中国南京大学生命科学学院生物系鉴定。样本(No.NU-62004)储存于南京大学生命科学学院植物标本馆，中国南京，邮编：210093。
●95％(v/v)乙醇：购自南京化学试剂一厂，产品编号：1370400201。
●氢氧化钠：购自南京化学试剂一厂。产品编号：1370500701。以40g的所述氢氧化钠溶于1000ml的水制备成1mol/L的氢氧化钠溶液。
●99％v/v醋酸：购自南京化学试剂一厂，产品编号：1370401201。将100ml所述醋酸加至900ml水中制备成10％醋酸。
●烧杯(2000ml)：购自中国上海申玻仪器公司。产品编号：SF-1101-15。
●烧杯(5000ml)：购自中国上海申玻仪器公司。产品编号：SF-1101-17。
●分液漏斗(1000ml)：购自南京三爱玻璃仪器有限公司。产品编号：8543。
●烧瓶(2000ml)：购自南京三爱玻璃仪器有限公司。产品编号：1117。
●球形冷凝管：购自北京玻璃仪器工厂。产品编号：yq230503。
●渗漉筒(1000ml)：购自天津友丰技术玻璃有限公司。产品编号：119-02-10。
●RE52-1旋转蒸发器：购自上海沪西分析仪器厂有限公司。
●HY30-01：电子真空干燥箱：购自中国福州市台江医疗器械厂。
●HH-S电热恒温水浴锅：购自中国江苏江苏省东台电器厂。
如图1所示，将100g茯苓研成粗粉，于步骤A中加1000mL蒸馏水至茯苓粗粉，浸泡0.5h后，以95-100℃煎煮2小时，过滤，得茯苓水溶液(I)以及茯苓残渣(I)。在步骤B中，再以步骤A同样的方法提取茯苓残渣(I)，得茯苓水溶液(II)、(III)和茯苓残渣(II)。在步骤C中，合并茯苓水溶液(I)、(II)、(III)，形成茯苓水溶液(IV)。茯苓水溶液(IV)在步骤D中用旋转蒸发器进行浓缩，获得300ml浓缩茯苓水溶液。在步骤E中，将840ml 95％乙醇搅拌加入所述浓缩茯苓溶液中，使其最终的乙醇浓度为70％(v/v)，在4℃条件下静置24h以形成沉淀。过滤，并将所得的沉淀物在60℃条件下进行减压干燥，获得1.23g干燥粉末状的茯苓提取物(III)以及茯苓水—乙醇溶液。在步骤F中，用1000ml 1M的氢氧化钠溶液浸泡茯苓残渣(II)10小时(室温)，然后过滤，获得茯苓的氢氧化钠提取溶液(I)(滤液)以及茯苓残渣(IV)。在步骤G中，用步骤F的方法再将茯苓残渣(IV)提取两次，得到茯苓残渣(V)以及茯苓的氢氧化钠提取溶液(II)、(III)。在步骤H中，合并茯苓的氢氧化钠提取溶液(I)、(II)、(III)形成2900ml茯苓的氢氧化钠提取溶液(IV)。在步骤I中，以10％醋酸中和茯苓的氢氧化钠提取溶液(IV)至pH-6，之后再搅拌加入8120ml 95％乙醇，并在4℃条件下静置24h以形成沉淀。过滤，并将所得沉淀在60℃条件下进行减压干燥，获得35.69g干燥粉末状的茯苓提取物(VI)。
将茯苓提取物(III)及(VI)合并，获得36.92茯苓提取物(产率36.92％)。
实施例3
                      分析补骨脂成分的方法
利用高效液相色谱仪(HPLC)配以紫外检测法，分析实施例1中所制备出来的补骨脂提取物的成分(补骨脂素及异补骨脂素)。此方法具有较低的检测下限，以及良好的准确性、精确性以及线性关系。
药品
光谱级的乙腈及甲醇购自美国International Laboratory(USA)。纯化水由Mili-Q系统(Millipore)制备。标准品补骨脂素及异补骨脂素购自中国药品生物制品鉴定所。标准品补骨脂素及异补骨脂素分别溶于甲醇溶液形成标准溶液，作为外标溶液。
仪器及色谱条件
用Agilent 1100液态色谱仪及光电二极管数组检测器(Diode Array Detector，DAD)进行色谱分析。采用Zorbax XDB RP-C18分析色谱柱(柱长：4.6mm i.d.×25cm，粒径：5μm)对补骨脂素及异补骨脂素进行HPLC分离，并选择RP-C18作为保护柱(柱长：4.6mm i.d.×1.25cm)。在使用前，将溶剂经过0.45μm HV型滤膜(Milipore)过滤，并以超声波水浴脱气20分钟。以乙腈-水(40∶60，v/v)为流动相，按1.0ml/min的流速进行洗脱，进样量为1.0μl，检测波长为246nm。所有色谱分析均在22℃下进行。
样品制备
精密称取15mg的补骨脂提取物，用甲醇溶解，并定容于25ml容量瓶中。在HPLC分析之前，先用微孔滤膜(0.45μm)滤过。
结果
HPLC分析结果表明样品中化合物均可达到基线分离的目的，并可在20分钟之内完成分析(补骨脂素保留时间为9.9分钟，异补骨脂素保留时间为10.6分钟)。图2为标准品补骨脂素及异补骨脂素的HPLC色谱图。图3为补骨脂提取物的HPLC色谱图。在对照品保留时间处无其它杂质峰干扰。比较图2与图3，根据标准品的保留时间和样品图谱峰相应位置，可知补骨脂提取物内含有补骨脂素及异补骨脂素。
采用最小二乘法进行数据回归处理，结果表明补骨脂素在0.00219-0.351μg范围具有良好的线性关系。异补骨脂素在0.00206-0.3301μg范围内具有良好的线性关系。补骨脂素及异补骨脂素的检测极限均为0.0003μg。补骨脂素最低检测量为0.0011μg，而异补骨脂素的最低检测量则为0.0010μg。
补骨脂素的线性回归方程：y＝7289.9-14.593x，r＝0.9998
异补骨脂素的线性回归方程：y＝7214.4-12.456x，r＝0.9997
其中，y＝峰面积比，x＝进样量(μg)，r＝相关系数
补骨脂素的分析
根据实施例1的步骤制备出五批补骨脂提取物。采用TLC比较以及比色法测定补骨脂提取物样品中总呋喃香豆素的含量，大约95％。
采用HPLC分析法，测定五批补骨脂提取物中补骨脂素及异补骨脂素含量。结果见表1。
表1五批补骨脂提取物中补骨脂素及异补骨脂素含量(mean±S.D.)
  补骨脂提取物   补骨脂素(％)   异补骨脂素(％)
  1   8.41±0.12   7.18±0.10
  2   8.36±0.11   7.68±0.06
  3   7.79±0.13   6.52±0.08
  4   7.53±0.09   6.26±0.12
  5   7.96±0.11   6.66±0.06
S.D.，标准差；五次测定的标准差
根据实施例1制备的补骨脂提取物含约8.01％补骨脂素及6.86％异补骨脂素。
实施例3.1
分析茯苓成分的方法
茯苓成分由苯酚硫酸法(phenol-sulfuric acid method)分析。苯酚硫酸法(Dubosis等，1956)是一种比色法反应。由于方法简便，常用于测定样品中糖类、寡糖、多糖以及其衍生物。
药品
●硫酸，95.5％，试剂级，购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，USA)。产品编号：32，050-1。
●试剂级苯酚，购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，USA)。产品编号：P4161。
●D-葡萄糖：购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，USA)。产品编号：G5250。
●5g/dl苯酚-水溶液：将5g再蒸馏酚溶解于100ml蒸馏水而得。
●10g/dl葡萄糖-水溶液：将10g葡萄糖溶解于100ml蒸馏水而得。
仪器
U-3000光谱光度计：Hitachi，Ltd.，日本东京。
样品制备
精密称取5mg茯苓提取物，用水溶解，并定容于100ml容量瓶中。
苯酚硫酸法
选择葡萄糖为标准品。按Dubosis等(1956)的基本操作流程进行测定。精密量取10g/dl的葡萄糖水溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1及1.2ml，分别加入试管内，再加水至补足，其最终体积为2ml(内含有20-120mg葡萄糖)。再加入1ml 5％(w/v)苯酚溶液。之后再快速沿液体表面加入浓硫酸5ml，以达到良好的混合效果。将试管静置10分钟，摇匀，放入25-30℃水浴中15分钟后，于490nm测定吸收度。以蒸馏水随行空白。
以葡萄糖对照品量为横坐标，吸收度为纵坐标，采用最小二乘法进行数据回归处理，其线性回归方程：
y＝0.0068+6.6929x，r＝0.9994
其中，y＝吸收度值，x＝葡萄糖量(mg)，r＝相关系数
茯苓提取物多糖的含量分析
采用苯酚硫酸法测定茯苓提取物的多糖。利用不同浓度D-葡萄糖(20-120mg)作为标准溶液绘制标准曲线。
精密量取2ml茯苓提取物溶液，分别加入试管内。同上，再加入5％(w/v)苯酚溶液1ml。之后再快速加入浓缩硫酸5ml。静置10分钟后摇匀，放入25-30℃水浴中15分钟后，于490nm测定吸收度。空白样品是由蒸馏水代替。以蒸馏水作为空白对照。根据标准曲线，计算样品中多糖的含量。五批茯苓提取物的样品结果见表2。
表2五批茯苓提取物中多糖含量测定
  茯苓提取物   茯苓多糖(％)
  1   60.31±1.39
  2   58.36±1.11
  3   59.19±1.48
  4   58.56±1.06
  5   59.95±1.19
实施例4
                                药剂的制备
本实施例中制备了如下几个组合物：
组合物I：补骨脂提取物∶茯苓提取物＝1∶1.5，相当于补骨脂∶茯苓＝2∶1。
组合物II：补骨脂提取物∶茯苓提取物＝1∶3，相当于补骨脂∶茯苓＝1∶1。
组合物III：补骨脂提取物∶茯苓提取物＝1∶6，相当于补骨脂∶茯苓＝1∶2。
这些组合物将进行下述动物生物活性评价实验。
                              实验1
材料
1.动物
ICR小鼠，雄性，26±2g，由江苏省实验动物中心提供，饲养在25±2℃室内，自由饮水进食，适应一周。所有动物实验程序皆遵照南京大学动物管理委员会或者中国动物管理委员会章程。
2.试剂
●根据实施例1步骤制备的补骨脂提取物
●根据实施例2步骤制备的茯苓提取物
●组合物I：补骨脂提取物∶茯苓提取物＝1∶1.5
●组合物II：补骨脂提取物∶茯苓提取物＝1∶3
●组合物III：补骨脂提取物∶茯苓提取物＝1∶6
●盐酸氟西汀(阳性对照组)：购自Sigma-Aldrich，(St.Louis，MO，USA)，产品编号：F132
●生理盐水(阴性对照组)：购自Sigma-Aldrich，(St.Louis，MO，USA)，产品编号：150-3
3.给药方式与剂量
每一组小鼠接受给药的方式与剂量如下：
●生理盐水(阴性对照组)：5ml/kg/day
●补骨脂提取物组：80mg/kg/day，50mg/kg/day，28.5mg/kg/day
●茯苓提取物组：171.5mg/kg/day，150mg/kg/day，120mg/kg/day
●组合物I组：200mg/kg/day
●组合物II组：200mg/kg/day
●组合物III组：200mg/kg/day
●盐酸氟西汀组：26mg/kg/day
小鼠给药前1.5h禁食不禁水。将上述药物溶于或者混悬于生理盐水制备所述浓度。按小鼠体重药。口服，每天一次，给药时间于每天13:00-14:00。
如表3与表4，小鼠给药时间分别为3天与7天。在给药期间未发现小鼠有不正常反应。在最后一次给药1h后进行行为实验。
方法
1.小鼠悬尾实验
参照Steru(1985)方法。夹住小鼠离尾端1cm的部位，将其倒挂于箱(30cm×30cm×25cm)中，头部离箱底约5cm，观察6min，计算后4min内小鼠悬尾的不动时间。
2.小鼠强迫游泳实验
参照Porsolt(1977)方法。将单只小鼠放入水深10cm烧杯(18cm×14cm)中，水温25±1℃。观察6min，计算后4min内小鼠游泳的不动时间。实验完毕，将动物试干，放在热吹风笼中15min，然后再放回饲养条件下。
3.统计学处理
所有数据均用Mean±S.E.M表示。采用ANOVA分析方法进行统计学检验。P＜0.05表示有显着性差异。同时采用Bonferroni alpha修正方法防止假阳性结果。
结果
对小鼠悬尾不动时间影响的结果见表3。对小鼠游泳不动时间影响的结果见表4。
                   表3对小鼠悬尾不动时间影响
 组别   剂量(mg/kg)          悬尾不动时间(秒)
  3天   7天
 阴性对照   -   108.9±13.7   112.4±10.9
 补骨脂提取物   80   67.4±8.6*   64.8±7.5*
  50   78.5±7.1*   74.0±5.9*
  28.5   85.5±6.5   90.2±6.2
 茯苓提取物   171.5   76.3±6.9*   68.4±6.0*
  150   79.6±5.6   88.3±9.6
  120   96.3±8.6   95.4±7.1
 组合物I   200   55.2±8.6**   49.1±4.6***
 组合物II   200   58.8±5.9**   64.0±10.9*
 组合物III   200   71.2±7.5*   62.2±5.0*
 盐酸氟西汀(阳性对照)   26   23.2±5.2*   28.8±6.4*
与控制组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.
                  表4对小鼠游泳不动时间影响
 组别   剂量(mg/kg)           游泳不动时间(秒)
  3天   7天
 阴性对照   -   116.8±11.7   121.8±10.9
 补骨脂提取物   80   66.5±8.2**   74.6±8.6**
  50   83.3±6.5*   76.6±10.1*
  28.5   89.2±8.6   85.5±6.5
 茯苓提取物   171.5   72.3±7.9*   75.4±6.0*
  150   87.3±6.6   84.7±6.3
  120   104.4±10.2   96.7±8.5
 组合物I   200   59.4±11.2**   64.3±9.5***
 组合物II   200   75.3±6.8*   74.0±9.6**
 组合物III   200   80.4±6.8*   76.3±10.5*
 盐酸氟西汀(阳性对照)   26   67.6±10.2*   67.1±8.9*
与控制组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.
结论
1.补骨脂提取物与茯苓提取物以合适比例制成的组合物，在合适剂量下，可有效降低悬尾小鼠及强迫游泳小鼠的不动时间。
2.组合物的效果从最强至最弱的排列为：组合物I＞组合物II＞组合物III。
                             实验2
        慢性温和刺激引起的大鼠抑郁行为和生化指标的研究
材料
1.动物
雄性Wistar大鼠(200±20)g，由江苏省实验动物中心提供。实验前在实验室适应1周，温度保持在25±2℃，12h/12h明/暗。除特殊刺激和要求外，动物单独一笼饲养，自由饮水摄食。所有动物实验程序皆遵照南京大学动物管理委员会或者中国动物管理委员会章程。
2.试剂
●组合物I：与实验1所用相同。即，补骨脂提取物∶茯苓提取物＝1∶1.5
●5-羟色胺(5-Hydroxytrptamine，5-HT)：用于单胺氧化酶-A(MAO-A)特异性底物，购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，USA)，产品编号：H 9523
●苯乙胺(β-phenylethylamine，β-PEA)：用于单胺氧化酶-B(MAO-B)特异性底物，购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，USA)，产品编号：P 2641
●盐酸氟西汀：购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，USA)，产品编号：F132
●生理盐水：阴性对照组用，购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，USA)，产品编号150-3
●蔗糖：购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，USA)，产品编号：S7903。蔗糖水溶液1％(w/v)是由10g蔗糖溶于1000ml水制成
●牛血清白蛋白(Bovine serum albumin)：购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，USA)，产品编号：P 0914
●乙酸正丁酯(Butyl acetate)：购自南京化学试剂有限公司，产品编号：1370401001
●环己烷：购自南京化学试剂有限公司，产品编号：1370400701
●氢氧化钠：购自南京化学试剂有限公司，产品编号：1370500701
●盐酸：购自南京化学试剂有限公司，产品编号：1370500101
●磷酸二氢钠：购自南京化学试剂有限公司，产品编号：1370503001
●磷酸氢二钠：购自南京化学试剂有限公司，产品编号：1370503101
●WH-3微型振荡器：为上海沪西分析仪器厂家产品。
●XHF-1高速分散器：为上海金达生化仪器有限公司产品。
●U-3000光谱光度计：Hitachi，Ltd.，日本东京。
●Eppendorf离心机：德国，5415R
●HH-S电热恒温水浴锅：为江苏省东台电器厂产品。
●GC-1200r放射免疫计数器：为科学技术工业公司(USTCTEK)产品。
3.给药方式与剂量
●空白生理盐水组(未受CMS刺激)：10ml/kg/day
●模型生理盐水组(受CMS刺激)：10ml/kg/day
●组合物I组(200)：200mg/kg/day
●组合物I组(150)：150mg/kg/day
●盐酸氟西汀组：10mg/kg/day
将上述物质溶于或者混悬于生理盐水制成所述浓度。根据小鼠体重给药。口服，每天一次，连续六周。CMS模型的各测定方法如下。
方法
1.蔗糖摄入量试验
大鼠适应一周后，对所有动物进行蔗糖基础摄入量训练，每周2次。每次在被剥夺食物和水14h后，供应1％蔗糖水溶液1h，称重。3周后大鼠的蔗糖摄入量基本稳定。(蔗糖摄入量的计算方式：摄入前的容器重(g)-摄入后的容器重(g))在以下整个实验中，每周进行一次蔗糖摄入量的测定(9:00a.m.-10:00a.m.)，方法同上。
2.CMS方法
经过三周的蔗糖基础摄入量训练后，将大鼠随机分为两个组，空白组(未受CMS刺激)和模型组(受CMS刺激)。模型组进行为期4周的低强度温和刺激，刺激包括：剥夺食物或水、斜笼45℃、间隔照明(明暗交替/2h)、污染鼠笼(底料中加入200mL水)、配对饲养、低强度频闪照明(150次/mim)。按上述顺序每周刺激两次，每次12～14h。
空白组饲养在另一室，与刺激组动物无任何接触，除每周一次在被剥夺食物和水14h后进行蔗糖摄入量的测定外，自由饮水摄食。
3.给药
动物经上述刺激4周后，其蔗糖摄入量显着减低。再进行随机分组，分别给予如下药物：
(1)组合物(I)组：剂量200mg/kg/day组合物(I)
(2)组合物(I)组：剂量150mg/kg/day组合物(I)
(3)盐酸氟西汀组：剂量10mg/kg/day盐酸氟西汀(阳性对照组)
(4)模型生理盐水组：剂量10ml/kg/day生理盐水(阴性对照组)
所有给药途径皆为口服。所有动物每天在10a.m.给药一次，连续给药6周。除空白组动物外，给药期间各组均同上刺激，并进行每周一次蔗糖摄入量的测定。
4.血液和脑组织取样
在最后一次测定蔗糖摄入量24h后，在10a.m.-11a.m.期间立即断头取全血，在4℃下离心(3000rpm)10min，取血清，于-20℃保存，用于皮质醇含量测定。在冰台上快速取动物全脑，用冷冻生理盐水冲洗净血液，于-80℃保存，用于单胺氧化酶A和B(MAO-A和MAO-B)活性测定。
5.MAO-A和MAO-B活性测定
大鼠脑部线粒体部分按Schurr及Livne(1976)述说方法制备。大鼠全脑MAO-A和MAO-B活性测定参照Yu等(2002)分光光度测定方法进行。
线粒体部分悬浮于9倍体积的冷磷酸二氢钠缓冲液(10mM，pH 7.4，含320mM蔗糖)在4℃下混合搅拌20分钟。所得混合物在4℃下以4000rpm转速离心10分钟，所得上清夜在4℃下以15000rpm再离心30分钟，得到蛋白质沉淀物。所述沉淀物在相同缓冲液再被悬浮。调节蛋白质浓度为1mg/ml。用改良Lowry(1951)法测定蛋白含量。牛血清白蛋白作标准品。在反应体系中，含有4mM的5-HT或2mM的β-PEA作为MAO-A及MAO-B的特异性底物。将10mM磷酸二氢钠缓冲液(pH 7.4)加入上述混合物中，至最终体积为1ml。反应在37℃下进行20分钟，加入1M盐酸终止反应。继以用4ml乙酸正丁酯(对MAO-A)或4ml环己烷(对MAO-B)分别萃取。在280nm及242nm处分别测定有机层中MAO-A及MAO-B活性。空白对照则是在反应前加入200μl 1M盐酸，其它步骤与上同。
6.皮质醇含量测定
采用放射性免疫方法进行皮质醇含量测定。按照厂商(厂商：北京福瑞生物技术公司，产品编号：FR-FJ-055)说明书操作进行。
7.统计学处理
所有数据均用Mean±S.E.M表示。采用ANOVA分析方法进行统计学检验。P＜0.05表示有显着性差异。同时采用Bonferronialpha修正方法防止假阳性结果。
结果
1.对蔗糖摄入量的影响
结果见表5。在整个实验过程中空白组的1％蔗糖水的摄入量未有明显变化，而模型组大鼠给药前蔗糖摄入量显着低于空白组，模型组中的阴性对照组在后期刺激中一直保持这种显着性地降低。
在模型组(CMS)的动物中，与0周比较，口服给予补骨脂提取物和茯苓提取物组合物组合物I(1∶1.5)及氟西汀均能不同程度逆转大鼠蔗糖摄入量的降低。给药2周后该组合物200mg/kg可显着提高模型组(CMS)动物蔗糖摄入量，给药4周后可恢复至正常。该组合物150mg/kg在给药3周后可显着升高蔗糖摄入量，给药5周后可恢复至正常。而氟西汀需要6周方可恢复动物蔗糖摄入量。表明在模型组(CMS)动物上组合物I(1∶1.5)作用强于氟西汀。
                                       表5.组合物I对蔗糖摄入量的影响
  组别   给药周期(周)
  0   1   2   3   4   5   6
  空白组(未受CMS刺激大鼠)   13.4±1.3   13.5±1.6   13.8±1.6   14.1±1.9   13.8±1.1   13.4±1.9   14.6±1.7
  模型组(受CMS刺激大鼠)
  阴性对照组   5.7±1.2**   6.2±1.3*   5.1±1.3**   6.8±1.6**   7.1±1.7**   6.6±0.8**   7.3±1.3**
  组合物I(200mg/kg)   5.8±1.8**   8.5±1.8**   9.5±1.4##   8.8±1.4**#   12.6±1.7##   12.3±1.3##   15.6±1.5##
  组合物I(150mg/kg)   6.0±1.3**   7.3±1.0**   7.4±1.5**   8.6±1.3**#   9.3±2.0*#   10.5±1.6##   12.7±1.9##
  盐酸氟西汀(10mg/kg)(阳性对照组)   5.3±1.4**   5.5±1.3**   5.9±1.4*   7.3±1.5**   8.9±1.1**#   10.4±1.3*##   13.9±1.3##
在每个时间点上与阴性对照组比较具统计显著性差异：*P＜0.01，**P＜0.001
在第0周与模型组中接受药物治疗动物比较具统计显著性差异：#P＜0.01，##P＜0.001
2.对MAO-A和MAO-B活性的影响
结果见表6。与正常动物空白组比较，CMS可以显着提高大鼠全脑MAO-A和MAO-B活性。口服给予补骨脂提取物和茯苓提取物组合物I(1∶1.5)200mg/kg和150mg/kg可显着抑制MAO-A和MAO-B活性，对MAO-A活性抑制率分别为45.49％和12.88％，对MAO-B活性抑制率分别为64.01％和46.28％。氟西汀也具有抑制作用，对MAO-A和MAO-B活性抑制率分别为16.43％和54.05％。
                       表6.组合物I对MAO-A和MAO-B活性的影响
  组  剂量   MAO活性(U/g蛋白质)   MAO抑制(％)
 (mg/kg)   A   B   A   B
  空白组(未受CMS刺激大鼠)  -   67.59±6.02   63.32±6.82
  模型组(受CMS刺激大鼠)
  阴性对照组   93.40±4.82##   118.60±9.56##
  组合物I  200   50.91±4.05**#   42.68±3.03***#   45.49   64.01
 150   81.37±5.62   63.71±7.70*   12.88   46.28
  盐酸氟西汀(阳性对照组)  10   78.05±3.68   54.50±3.56***#   16.43   54.05
与正常大鼠比较具统计显著性差异：#P＜0.05，##P＜0.01，
与受CMS刺激大鼠比较具统计显著性差异*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
3.对皮质醇水平的影响
结果见表7。与正常动物空白组比较，CMS可显着提高大鼠血清皮质醇水平。口服给予补骨脂提取物和茯苓提取物组合物I(1∶1.5)可显着降低CMS动物血清皮质醇水平，其中组合物200mg/kg可将CMS大鼠皮质醇水平恢复至正常。而在此实验条件下氟西汀未能显着改变CMS大鼠血清皮质醇水平。
             表7.组合物I对皮质醇水平的影响
  组   剂量(mg/kg)   皮质醇水平(ng/ml)
  空白组(未受CMS刺激大鼠)   -   18.46±0.53
  模型组(受CMS刺激大鼠)
  阴性对照组   -   32.5±0.41#
  组合物I   200   16.24±0.38**
  150   22.62±0.44*
  盐酸氟西汀(阳性对照组)   10   28.76±0.56
与正常大鼠比较具统计显著性差异：#P＜0.01
与受CMS刺激大鼠比较具统计显著性差异**P＜0.05，**P＜0.01
结论
1.补骨脂提取物和茯苓提取物组合物在合适比例及剂量下能有效恢复经CMS刺激大鼠的蔗糖摄入量的降低，与生理盐水组相比具有统计显著性差异。
2.补骨脂提取物和茯苓提取物组合物在合适比例及剂量下能有效抑制CMS引起大鼠的MAO-A和MAO-B活性的升高，与生理盐水组相比具有统计显著性差异。
3.补骨脂提取物和茯苓提取物组合物在合适比例及剂量下能有效降低CMS引起大鼠的皮质醇水平的增高，与生理盐水组相比具有统计显著性差异。
4.口服组合物I能逆转CMS刺激大鼠所产生行为和生化指标的异常。显着增加蔗糖摄入量，产生明显的抗抑郁效果。该组合物可能通过抑制MAO-A和MAO-B活性和下调下丘脑—垂体—肾上腺轴(HPA轴)功能亢奋等途径达到抗抑郁目的。具有抗抑郁效果的组合物I用于治疗老年性抑郁症效果更好。
虽然实施例1示范了一种制备补骨脂提取物的方法，仍有许多其它的方法可以得到补骨脂提取物。例如，将干燥的补骨脂100g研成粉，置入2500ml园底瓶，加65％乙醇800mL，在85-90℃水浴回流提取三次，每次1.5h，获得补骨脂提取溶液。所得提取液在60℃下减压浓缩(旋转减压浓缩器：BuchiLabortechnik A G，Switzerland)得250ml药液。再用250ml 100％乙酸乙酯萃取上述药液8次，合并乙酸乙酯层，于60℃减压浓缩，除去乙酸乙酯。将剩余的残渣于60℃减压干燥，即得补骨脂提取物12.21g(得率12.21％)。
制备本发明的组合物在以上叙述中得到示范。虽然，实施例列举了实施本发明的具体方式，本领域技术人员能够利用类似的其它方法制备本发明涵盖的组合物。
除非特别指明，所有本说明书所用的科学技术用语的含义与一般本领域技术人员所熟知的含义相同。对于所需的方法及材料，本发明仅列举了较佳实施方式，其它类似的方法及材料亦可适用于实施本发明。熟习制备中药的技术人员可以轻易地以上述的方法实施本发明。
虽然传统上，中药一般以干燥材料制备，应该要知道，干燥植物材料的目的只是为了储存、运输及后续处理方便用。干燥并非为了发挥草药的优点。因此，应该了解，以新鲜的所述草药植物一样可以实施本发明。以合适的比例及数量使用新鲜的植物材料制备中药，一样在本发明的范围之内。
另外要指出的是，虽然植物某些部位含有较高量的活性成分，本发明所公开的植物和真菌材料亦是根据中华人民共和国药典命名原则的特定植物和真菌部位。然而，活性成分也可能存在于同样植物和真菌的其它部位中。因此，在同样植物和真菌内的其它部位提取相关的活性成分亦在本发明的范围之内。也应了解，在药典中，一个植物属(genus)内的许多植物种(species)都归于同一类植物，而在同属内不同种的植物有时可以互相取代。
本领域技术人员应可知道如何以植物细胞及组织培养技术在试管内培养药草细胞及组织，并由这些细胞及组织中提取所需活性成分。因此，虽然本发明公开了如何从干燥植物和真菌部位提取活性成分，在植物细胞及组织中提取相关活性成分也属于本发明的范围。
一般的提取过程包括缩小药草材料的体积，然后再以合适提取液进行提取，例如以回流方式进行提取。药草提取物可以经由下列方式得到：将补骨脂或茯苓的整株植物、植物的叶、茎、根、菌核、菌丝体及/或果实浸泡于一个提取液中，或以提取液回流。提取液的种类不限。可用的提取液例如有机溶剂，如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙乙醇、...1，3丁二醇、甘油、丙酮、丁酮、乙酸乙酯、乙醚、氯仿、二氯甲烷以及水。溶剂可以单独使用，也可以混合使用。本发明较佳的实施方式是使用甲醇、乙醇、乙酸乙酯或这些溶剂与水混合使用。更佳的实施方式是使用乙醇或水与乙醇混合物，这是考虑到对生物体的安全性(低毒性)。
药草体积的缩小可以，但不限于，用以下方式达到：切、割、剪、剁、绞、捣碎、研磨、粉碎等。只要是缩小后能够增加药草表面积的方法皆可。所有达到这样目的的材料与方法都在本发明的范围之内。
虽然本发明叙述了一个实施本发明的例子，本领域的技术人员应知，这个实施例只是一个示范，还存在许多等同的其它步骤可用来实施本发明，且不偏离本发明的精神。
针对不同品种的哺乳动物、鱼或鸟类给药时，难免需要对药物、剂型、剂量、给药时间与间隔做出调整。有些情况下，低于本发明所述之最低剂量的剂量已远远足够。在另一些情况下，即使使用的剂量高于所述最高剂量，仍不会引起有害副作用，只要在给药前将较高的剂量在一天内分成多次较小的剂量，并分多次给药。
活性成分可以单独，或与其它药学可接受的载体或稀释剂混合，经由前述途径给药。给药可以一次或多次进行。活性成分可以藉由许多不同的剂型给药，例如药丸、胶囊、药锭、片剂、硬糖、粉末、喷雾、乳霜、药膏、栓剂、胶状物、凝胶、糊状物、乳液、软膏、悬浮液、可注射溶液、药酒、糖浆以及类似物。
载体包括固体稀释剂或填充物、无菌水媒介、各种无毒性有机溶剂等。口服药物组合物还可以适当的加甜味或香味。活性化合物在这些剂型内的浓度大约为5.0％至70％。
口服给药时，药丸可含有各种赋形剂，例如微晶纤维素、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸二钙、甘氨酸，亦可与各种崩解剂一起使用，例如淀粉(最好是玉米、土豆、木薯淀粉)、海藻酸、以及特定的硅化物，亦可与成粒粘合剂混合，例如聚乙烯基咯烷酮、蔗糖、骨胶以及阿拉伯胶。另外，还可加入润滑剂，例如硬脂酸镁、十二烷硫酸钠、滑石等，这些都是制备药丸良好的辅助剂。类似的固体组合物也可加于胶囊中作为填充物。优选的物质包括乳糖、奶糖以及高分子的聚乙二醇。
在制备水状悬浮物及/或药酒作口服给药用途时，活性化合物可以与多种甜味剂、香味剂、着色剂或染色剂混合。并且，如有需要，可与乳化剂及/或悬浮剂混合。亦可与稀释剂混合，例如水、乙醇、丙乙醇、甘油或其它类似的溶剂。
在制备非肠道注射剂型时，可将活性成分溶于芝麻油、花生油形成油溶液，或溶于丙乙醇中制成水溶液。水溶液必须经过适当缓冲(优选的pH值是大于8)，用于稀释的液体需为等压的。水溶液适合用来静脉注射。油溶液适合用来进行关节内、肌肉内或皮下注射。所有上述溶液的制备都在无菌状态下进行，并遵循一般技术人员熟知的标准制药技术。
另外，也可以局部的施予所述活性化合物。可用的方式包括：乳霜、凝胶、胶状物、糊状物、药膏、软膏以及类似物，以一般技术人员熟知的标准制药技术制备。
在对除了人类以外的动物，例如牛或家禽家畜给药时，活性化合物可以经由口服，例如灌药方式给药。
活性化合物亦可经由微脂粒输送系统给药，例如单层小微脂粒、单层大微脂粒、多层微脂粒等。微脂粒可由多种磷脂形成，例如胆固醇、硬脂胺、或磷脂酰胆碱。
在制备成营养补充品时，可以与其它不影响药物活性的食品混合。例如淀粉、葡萄糖、油脂、纤维素等。
本说明书所引用的参考资料，包括下面列举的资料，皆为整份资料的引用。
                               参考资料
Archer，J.，1973.Tests for emotionality in rats and mice：A review.AnimalBehavior 21，205-235.
Porsolt，R.D.，Bertin，A.，Jalfre，M.，1977.Behavioural despair in mice：a primaryscreening test for antidepressant.Archives Intemationales de Pharmacodynamie etde Therapie 229，327-336.
Steru L，Chermat R，Thierry B，Simon P.1985.The tail suspension test：a newmethod for screening antidepressants in mice.Psychopharmacology(Berl)85：367-370.
Lowry OH，Rosebrough NJ，Farr AL，Randall RJ.1951.Protein measurement withfolin phenol reagent.J.Biol.Chem.193，265-275.
Schurr，A.，Livne，A.，1976.Different inhibition of mitochondrial monoamineoxidase from brain by hashish components.Biochemical Pharmacology 25，1201-1203.
Yu，Z.F.，Kong，L.D.，Chen，Y.，2002.Antidepressant activity of aqueous extractsof Curcuma longa.Journal of Ethnopharmacology 83，161-165.
Willner P.1997.Validity，reliability and utility of the chronic mild stress model ofdepression：a 10-year review and evaluation.Psychopharmacology(Berl)134，319-29.

Claims (37)

1.一种治疗抑郁症的药物组合物，其特征在于所述组合物包含豆科植物补骨脂的提取物及多孔菌科真菌茯苓的提取物。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物基本上由豆科植物补骨脂的提取物及多孔菌科真菌茯苓的提取物组成。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物由豆科植物补骨脂的提取物及多孔菌科真菌茯苓的提取物组成。
4.根据权利要求1，2，或3所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物是由补骨脂(豆科植物补骨脂的干燥成熟果实)提取物及茯苓(多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核)提取物组成。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比为1∶1至1∶7。
6.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比为1∶1至1∶3。
7.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比为1∶1.5。
8.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述补骨脂提取物包含80-99％的呋喃香豆素，其中，所述呋喃香豆素包含4-12％的补骨脂素和3-11％的异补骨脂素。
9.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述补骨脂提取物包含95％的呋喃香豆素，其中，所述呋喃香豆素包含7-9％的补骨脂素和6-8％的异补骨脂素。
10.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述茯苓提取物包含50-70％的茯苓多糖。
11.一种治疗抑郁症的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含呋喃香豆素和茯苓多糖，其中，所述呋喃香豆素包括补骨脂素和异补骨脂素。
12.根据权利要求11所述的药物组合物，其特征在于，所述补骨脂素、异补骨脂素和茯苓多糖的含量比为7-9∶6-8∶86-93。
13.一种制备如权利要求4所述的药物组合物的方法，包含：
a.提取补骨脂，形成补骨脂提取物；
b.提取茯苓，形成茯苓提取物；以及
c.合并所述补骨脂提取物和所述茯苓提取物。
14.根据权利要求13的方法，其中补骨脂与茯苓是由下述重量配比制成：
补骨脂1～2份         茯苓1～2份。
15.根据权利要求13的方法，其中补骨脂与茯苓是由下述重量配比制成：
补骨脂1～2份         茯苓1份。
16.根据权利要求13的方法，其中补骨脂与茯苓是由下述重量配比制成：
补骨脂2份            茯苓1份。
17.根据权利要求13的方法，其中所述步骤a.补骨脂的提取进一步包括：
i)以第一提取液提取所述补骨脂，形成一个第一提取溶液；
ii)以第二提取液提取所述第一提取溶液，形成一个包含残渣的第二提取溶液；以及
iii)从第二提取溶液中分离并干燥所述残渣；
其特征在于，所述提取液中的其中一个提取液是高极性溶剂，而另一个提取液是低极性溶剂。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述第一提取液是乙醇、甲醇或丙酮。
19.根据权利要求17所述的方法，其中，所述第一提取液是55-75％(v/v)的乙醇。
20.根据权利要求17所述的方法，其中，所述第二提取液是乙酸乙酯、二乙基醚、三氯甲烷或二氯甲烷。
21.根据权利要求17所述的方法，其中，所述第二提取液是80-100％的乙酸乙酯。
22.根据权利要求17所述的方法，其中，所述步骤b.茯苓的提取进一步包括：
i)以水对茯苓进行提取，以获得一个水溶性提取物以及一个非水溶性茯苓残渣；
ii)以碱性溶剂对所述非水溶性茯苓残渣进行提取，以获得一个碱溶性的提取物；以及
iii)合并所述水溶性提取物及碱溶性提取物以形成所述茯苓提取物。
23.根据权利要求22所述的方法，其中步骤i)更进一步包括：
a.于水中煎煮所述茯苓以形成一个茯苓水溶液；
b.过滤并浓缩所述茯苓水溶液以形成一个浓缩的茯苓水溶液；
c.沉淀所述浓缩的茯苓水溶液以形成沉淀物；以及
d.分离并干燥所述沉淀物以形成茯苓水溶性提取物。
24.根据权利要求23所述的方法，其中步骤c中所述沉淀物是藉由加入醇形成的。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述醇为80-100％(v/v)的乙醇。
26.根据权利要求22所述的方法，其中步骤(ii)进一步包括：
a.以碱性溶剂对所述非水溶性茯苓残渣进行提取，以形成一个提取物溶液，其中所述提取物溶液的pH值＝11-13；
b.以酸来中和所述提取物溶液至pH值＝6-7，形成一个中和的提取物溶液；
c.沉淀所述中和的提取物溶液以形成沉淀物；
d.分离并干燥所述沉淀物以获得所述碱溶性提取物。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述碱性溶剂为1M的NaOH。
28.根据权利要求26所述的方法，其中所述沉淀是藉由加入醇而得的。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述醇为95％(v/v)的乙醇。
30.一种营养补充品，包含补骨脂提取物及茯苓提取物。
31.一种如权利要求30所述的营养补充品，其中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1至1∶7。
32.一种如权利要求30所述的营养补充品，其中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1至1∶3。
33.一种如权利要求30所述的营养补充品，其中，所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比约为1∶1.5。
34.补骨脂提取物与茯苓提取物作为制备治抑郁症药的应用。
35.如权利要求34所述的应用，其中所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比为1∶1至1∶7。
36.如权利要求34所述的应用，其中所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比为1∶1至1∶3。
37.如权利要求34所述的应用，其中所述补骨脂提取物与茯苓提取物的重量配比为1∶1.5。
CNA2005100595060A 2005-01-03 2005-03-25 治疗抑郁症的药物 Pending CN1799574A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/CN2005/002432 WO2006072213A1 (fr) 2005-01-03 2005-12-31 Preparations anti-depressives

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11/029,121 2005-01-03
US11/029,121 US20060147569A1 (en) 2005-01-03 2005-01-03 Anti-depression formulations

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1799574A true CN1799574A (zh) 2006-07-12

Family

ID=36640722

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2005100595060A Pending CN1799574A (zh) 2005-01-03 2005-03-25 治疗抑郁症的药物

Country Status (2)

Country Link
US (1) US20060147569A1 (zh)
CN (1) CN1799574A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115844773A (zh) * 2022-12-28 2023-03-28 华熙生物科技股份有限公司 一种茯苓提取物及其制备方法和应用

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2954700B1 (fr) * 2009-12-24 2012-02-03 Roquette Freres Utilisation de polysaccharides dans le traitement du stress et de l'anxiete
KR101318330B1 (ko) * 2011-05-24 2013-10-15 원광대학교산학협력단 우울증 예방 및 치료용 약학 조성물, 우울증 완화 및 개선용 건강기능식품 및 그 제조방법
CN102487627B (zh) * 2011-12-09 2013-11-13 四川农业大学 一种有效解除重楼种子休眠的方法
CN102552456B (zh) * 2012-01-12 2013-08-07 李遵清 一种治疗焦虑症的药剂
CN102526375A (zh) * 2012-02-03 2012-07-04 天津赛普瑞斯科技有限公司 饲料用抗高热病中草药组方
CN102688334A (zh) * 2012-06-18 2012-09-26 郑州牧业工程高等专科学校 一种增强家禽免疫功能的中西药合剂及其制备方法
CN102875562B (zh) * 2012-07-27 2015-04-29 天津中医药大学 制备补骨脂素和异补骨脂素或包含它们的提取物的方法
CN103070944A (zh) * 2013-01-22 2013-05-01 无锡正大畜禽有限公司 一种防治母畜产后综合症的中药组合物及其制备方法
CN104208610A (zh) * 2013-11-26 2014-12-17 赵凯 一种治疗失眠的中药
CN105362832A (zh) * 2015-12-10 2016-03-02 杨献美 一种制备治疗失眠症的中药制剂的方法
CN105362831A (zh) * 2015-12-10 2016-03-02 杨献美 一种治疗失眠症的中药制剂
CN106491631A (zh) * 2016-08-31 2017-03-15 成都煜泉绿健科技有限公司 一种复配多糖及其制备方法、应用
CN106509852B (zh) * 2016-11-04 2020-01-07 河北苓秀中药科技有限公司 水中自稳定分散性茯苓胶体的制备方法、保健食品及其制备方法
CN107184629A (zh) * 2017-06-23 2017-09-22 高楠 墨旱莲草有效成分的制备方法和应用
CN108420826B (zh) * 2018-06-14 2020-03-10 吉林大学 枸杞多糖在制备治疗或缓解抑郁症的药物中的用途及包含其的药物组合物
CN112336758B (zh) * 2020-11-05 2022-09-20 山西大学 一种柴胡提取组合物及其制备方法和在改善惊厥发作中的应用

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2708466B1 (fr) * 1993-06-30 1995-10-27 Lvmh Rech Utilisation d'un extrait de champignons Poria cocos Wolf pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique, notamment dermatologique pour le traitement de l'acné ou des peaux grasses.
US20020031559A1 (en) * 2000-03-08 2002-03-14 Liang Kin C. Herbal suppositories
AU2000272667A1 (en) * 2000-09-13 2002-04-29 Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co. Pharmaceutical composition treating gynecological blood stasis diseases, cardio and cerebral vascular diseases, respiratory diseases and the like
US20040043089A1 (en) * 2002-09-04 2004-03-04 Rabie A-Bakr M Buguzhi agent and composition and methods of preparing and administering the same

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115844773A (zh) * 2022-12-28 2023-03-28 华熙生物科技股份有限公司 一种茯苓提取物及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20060147569A1 (en) 2006-07-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1799574A (zh) 治疗抑郁症的药物
CN1925864A (zh) 治疗丙型肝炎的基于植物的药物
CN1520307A (zh) 一种治疗心绞痛的中药组合物及其制备方法与用途
CN1824763A (zh) 五脏滋补酒及其制备工艺
CN1730094A (zh) 治疗心血管病的姜、陈皮提取物的混合物
CN1490321A (zh) 槐角黄酮有效部位、生产方法及其应用
CN1899501A (zh) 一种治疗咽喉炎、扁桃体炎的中药复方制剂及其制备方法
CN1245198C (zh) 一种治疗糖尿病的中药组合物及其制备方法
CN101049324A (zh) 一种由银杏叶与葛根素制成的药物组合物
CN1557842A (zh) 玉竹多糖的提取方法、药物制剂制备方法及其用途
CN1649608A (zh) 显示提高轴突生长活性和神经营养作用的含有荒漠肉苁蓉y.c.ma提取物的组合物
CN1839932A (zh) 静脉给药的丹参新制剂及其制备方法
CN101032503A (zh) 治疗心血管疾病的中药有效成分组合物及质量控制方法
CN100341492C (zh) 一种参芪降糖软胶囊及其制备检测方法
CN1201805C (zh) 一种用于放化疗减毒增效的药物组合物及其制备方法
CN100335102C (zh) 治疗痛经的中药组合物及其制备方法
CN1823922A (zh) 含有冰片的药物组合物
CN1931233A (zh) 一种用于治疗心脑血管疾病的丹参和淫羊藿的药用组合物
CN1194743C (zh) 一种治疗类风湿性关节炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法
CN1650996A (zh) 一种药物组合物及其制备方法和应用
CN101041004A (zh) 一种新的抗肿瘤复方药物
CN1626103A (zh) 一种含三七总皂苷和淫羊藿苷的药物组合物及其用途
CN1210048C (zh) 一种银杏叶滴丸
CN101040934A (zh) 一种由山楂叶与红景天制成的药物组合物
CN1853701A (zh) 一种洋参生脉药物的有效部位及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1088257

Country of ref document: HK

AD01 Patent right deemed abandoned
C20 Patent right or utility model deemed to be abandoned or is abandoned
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: WD

Ref document number: 1088257

Country of ref document: HK