CN102688334A

CN102688334A - 一种增强家禽免疫功能的中西药合剂及其制备方法

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Publication number: CN102688334A
Application number: CN2012102002553A
Authority: CN
Inventors: 靳双星; 张桂枝; 侯春彬; 邢启银; 程璞; 田克虎
Original assignee: ZHENGZHOU HUSBANDRY ENGINEERING HIGHER TRAINING SCHOOL
Current assignee: ZHENGZHOU HUSBANDRY ENGINEERING HIGHER TRAINING SCHOOL
Priority date: 2012-06-18
Filing date: 2012-06-18
Publication date: 2012-09-26

Abstract

本发明属于禽用兽药，尤其涉及一种增强家禽免疫功能的中西药合剂及其制备方法。本发明涉及一种增强家禽免疫功能的中西药合剂，其特征是：有下列药物组成，按重量份数计，党参1~5份、白术1~4份、茯苓1~3份、鱼腥草1~3份、甘草1~3份、冰片0.01~0.05份、盐酸左旋咪唑0.004~0.006份、西咪替丁0.01~0.03份。本发明的中西药合剂，可通过饮水给药，免疫增强效果好，使用方便，生物利用度高。

Description

一种增强家禽免疫功能的中西药合剂及其制备方法

技术领域

本发明属于禽用兽药，尤其涉及一种增强家禽免疫功能的中西药合剂及其制备方法。

背景技术

近年来，由于长期大量滥用药物、不合理的疫苗接种、免疫抑制病的广泛存在以及各种应激因素导致禽疫苗免疫效果不佳、机体抵抗力下降，疫病显著增加，生产性能下降，给养禽业造成巨大的经济损失。因此，如何提高畜禽生产性能、增强机体免疫功能和抗病力已成为禽药研究的当务之急。临床上免疫增强剂种类较多，例如胸腺素、转移因子、白介素等，但这些免疫增强剂制作工艺十分复杂，价格昂贵，在临床上很难大规模推广应用。但左旋咪唑和西咪替丁价格低廉，可明显促进体液免疫和细胞免疫功能的作用。中草药以其毒性低、副作用小、多靶点、病原微生物对其不易产生耐药性等优点引起人们越来越多的关注。

发明内容

本发明是为了克服现有技术中的不足，为养禽业提供可通过饮水给药，价格低廉的一种增强家禽免疫功能的中西药合剂及其制备方法。

本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：一种增强家禽免疫功能的中西药合剂，其特征是：由下列药物组成（按重量份数计）：党参1~5份、白术1~4份、茯苓1~3份、鱼腥草1~3份、甘草1~3份、冰片0.01-0.05份、盐酸左旋咪唑0.004-0.006份、西咪替丁0.01-0.03份。

优选组分是：按重量份数计，党参2.5份、白术1.5份、茯苓1份、鱼腥草1.5份、甘草1份、冰片0.03份、盐酸左旋咪唑0.005份、西咪替丁0.02份。

一种增强家禽免疫功能的中西药合剂制备方法，其特征是：按以下步骤进行：

（1）按重量称取党参1~5份、白术1~4份、茯苓1~3份、鱼腥草1~3份、甘草1~3份、冰片0.01-0.05份、盐酸左旋咪唑0.003-0.006份、西咪替丁0.01-0.03份为原料；

（2）将党参、白术、茯苓、鱼腥草、甘草等药物混合煎煮2次，第一次煎煮1.5小时，第二次煎煮1小时，合并两次煎煮液，滤过，滤液静置12小时，取上清液，在60℃条件下，减压浓缩至比重约为1.1，待冷至室温，加入等量的乙醇，沉淀水溶性组分中的杂质，静置30分钟，除去沉淀物，回收乙醇，调节PH至中性，冰片用10ml乙醇溶解一并加入，同时加入盐酸左旋咪唑、西咪替丁等药物，1升药液中，加入吐温-80 5ml，苯甲酸钠1g，混匀即可。

所述中药均符合《中国兽药典》2010年版标准。

本发明组方原理：根据党参、白术、茯苓、鱼腥草、甘草各种中药的性、味、归、经、功能主治及中兽药 “正气存内，邪不可干”，“邪之所凑，其气必虚” 预防学说，在养殖过程中为了减少发病或者不发病，必须增强机体正气的力量，即提高机体的抵抗力或免疫力。因此本方的原则是以扶正为主兼顾祛邪。本方以党参甘温益气，健脾养胃为君药，白术健脾燥湿，加强益气助运之力为臣药，茯苓健脾渗湿，鱼腥草清热解毒兼有扶正作为佐药，甘草益气和中，调和诸药为使药。同时，冰片抑菌、抗炎和防腐作用；左旋咪唑和西咪替丁可明显促进体液免疫和细胞免疫功能的作用。诸药配合达到促进免疫器官的发育和淋巴细胞的增殖，增强机体的免疫功能，提高抗病力，提高疫苗免疫效果，改善生产性能。

本发明的有益效果：本发明为中西药合剂，可通过饮水给药，不但免疫增强效果好，而且克服了中药散剂必须通过拌料方式给药的缺陷，使用方便，生物利用度高。

具体实施方式

以下结合较佳实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详述如下。

实施例1：

一种增强家禽免疫功能的中西药合剂，由下列药物组成，每份按100g计，党参250g、白术150g、茯苓100g、鱼腥草150g、甘草100g、冰片3g、盐酸左旋咪唑0.5g、西咪替丁2g；

一种增强家禽免疫功能的中西药合剂制备方法，按以下步骤进行：

（1）按重量称取党参250g、白术150g、茯苓100g、鱼腥草150g、甘草100g、冰片3g、盐酸左旋咪唑0.5g、西咪替丁2g；

（2）将党参、白术、茯苓、鱼腥草、甘草等药物加水4000ml，混合煎煮2次，第一次煎煮1.5小时，第二次煎煮1小时，合并两次煎煮液，滤过，滤液静置12小时，取上清液，在60℃条件下，减压浓缩至比重约为1.1，待冷至室温，加入等量的乙醇，沉淀水溶性组分中的杂质，静置30分钟，除去沉淀物，回收乙醇，调节PH至中性，冰片用10ml乙醇溶解一并加入，同时加入盐酸左旋咪唑、西咪替丁等药物，加入吐温-80 5ml，苯甲酸钠1g，混匀即可。

实施例2：

一种增强家禽免疫功能的中西药合剂，由下列药物组成，每份按100g计，党参300g、白术250g、茯苓150g、鱼腥草250g、甘草100g、冰片4g、盐酸左旋咪唑0.6g、西咪替丁3g；

（1）按重量称取党参300g、白术250g、茯苓150g、鱼腥草250g、甘草100g、冰片4g、盐酸左旋咪唑0.6g、西咪替丁3g；

（2）将党参、白术、茯苓、鱼腥草、甘草等药物加水5000ml，混合煎煮2次，第一次煎煮1.5小时，第二次煎煮1小时，合并两次煎煮液，滤过，滤液静置12小时，取上清液，在60℃条件下，减压浓缩至比重约为1.1，待冷至室温，加入等量的乙醇，沉淀水溶性组分中的杂质，静置30分钟，除去沉淀物，回收乙醇，调节PH至中性，冰片用10ml乙醇溶解一并加入，同时加入盐酸左旋咪唑、西咪替丁等药物，加入吐温-80 7ml，苯甲酸钠1.2g，混匀即可。

实施例3：

一种增强家禽免疫功能的中西药合剂，由下列药物组成，每份按100g计，党参150g、白术100g、茯苓100g、鱼腥草200g、甘草100g、冰片3g、盐酸左旋咪唑0.4g、西咪替丁2g；

（1）按重量称取党参150g、白术100g、茯苓100g、鱼腥草100g、甘草100g、冰片3g、盐酸左旋咪唑0.4g、西咪替丁2g；

（2）将党参、白术、茯苓、鱼腥草、甘草等药物加水3000ml，混合煎煮2次，第一次煎煮1.5小时，第二次煎煮1小时，合并两次煎煮液，滤过，滤液静置12小时，取上清液，在60℃条件下，减压浓缩至比重约为1.1，待冷至室温，加入等量的乙醇，沉淀水溶性组分中的杂质，静置30分钟，除去沉淀物，回收乙醇，调节PH至中性，冰片用10ml乙醇溶解一并加入，同时加入盐酸左旋咪唑、西咪替丁等药物，加入吐温-80 4ml，苯甲酸钠0.8g，混匀即可。

临床试验：

1 材料与方法

1.1 试验样品本发明中西药合剂由党参、白术、茯苓、鱼腥草、甘草、冰片、盐酸左旋咪唑、西咪替丁组成。按照上述工艺制备。（1ml相当于原生药1g）；

1.2 主要试剂

1.2.1 RPMI1640培养液的制备在RPMI1640基础液（Gibco公司）中加入青霉素钠、链霉素、灭活的犊牛血清（BI公司），使基础液中青霉素和链霉素的含量均为100 IU/mL，灭活犊牛血清为10%，用0.22 μm滤膜过滤除菌；

1.2.2 ConA的制备伴刀豆素球蛋白A（ConA），Sigma公司生产。以RPMI1640培养液溶解，配成质量浓度为40 μg/mL，用0.22 μm滤膜过滤除菌；

1.2.3 台盼蓝染液的制备称取台盼蓝1 g，加至100 mL 超纯水溶解即为10 mg/mL的台盼蓝溶液。应用前与浓度为17 mg/mL NaC1溶液等量混合，6 000 r/min 离心10 min，取上清液即为5 mg/mL的台盼蓝染色液；

1.2.4 5 mg/mL MTT液的制备称取250 mg 四甲基偶氮唑蓝（MTT，Sigma公司）放入小烧杯中，加入50 mL RPMI1640培养液，在电磁力搅拌机上搅拌30 min，用0.22 μm滤膜过滤除菌；

1.2.5 鸡淋巴细胞分离液天津灏洋生物制品有限公司生产；

1.3 主要仪器 DG5033A 型酶联免疫检测仪（南京华东电子有限公司）；CO₂培养箱（美国 Revco公司）；显微镜（重庆光学仪器厂）；96孔微量细胞培养板（Sigma公司）；

1.4 试验动物与设计 1日龄健康AA雄性肉仔鸡，隔离饲养至7日龄，选取240只体重相近健康的肉仔鸡，随机分为4组，每组5个重复，每个重复12只鸡，分笼饲养。对照组正常饮水；试验1、2、3组从7日龄开始，饮水中分别添加0.5%、1.0%、1.5%的本发明中西药合剂，试验为期4周；

1.5 饲养管理试验鸡采用两阶段四层笼养，24 h光照、自由采食、自由饮水。整个饲养期分为 1～21 d为前期；22～35 d为后期2个阶段。基础日粮参照NRC（1994）肉仔鸡营养标准配制（见表1）。免疫程序：4组鸡均在7日龄1倍量点眼滴鼻接种新城疫~传染性支气管炎二联活疫苗；14日龄1.5倍量滴口接种法氏囊病中等毒力偏弱疫苗；21日龄3倍量饮水接种新城疫~传染性支气管炎二联活疫苗；28日龄3倍量饮水接种法氏囊病中等毒力偏强疫苗；

表1 试验基础日粮及营养成分

项目	1～21 d	22～35 d
			原料组成/%
玉米	56.3	59.6
			豆粕	35.9	33.0
植物油	3.5	3.5
			石粉	1.1	1.3
磷酸氢钙	1.9	1.3
			食盐	0.3	0.3
预混料	1.00	1.00
			合计	100	100
营养成分
			代谢能/（MJ·kg^~1）	12.72	12.86
粗蛋白/%	22.09	20.99
			钙/%	0.97	0.89
有效磷/%	0.46	0.35

注：预混料为每千克基础日粮提供：锌 60 mg，铁95 mg，锰80 mg，铜10 mg，碘 0.35 mg，硒0.3 mg，维生素A 10 000 IU，维生素D 2 500 IU，维生素E 30 IU，维生素K₃2 mg，维生素B_l212 μg，核黄素6 mg，尼克酸40 mg，泛酸12 mg，吡哆醇3 mg，生物素0.2 mg，氯化胆碱800 mg；

1.6 检测指标及测定方法

1.6.1 生长性能试验前（即7日龄）将所有雏鸡以重复为单位称重，并计算初始平均体重。于用药后的第14天（21日龄）、28天（35日龄），称重、结料，计算7~21日龄和22~35日龄的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和饲料转化率（FCR）。 1.6.2 免疫器官指数测定于14日龄、21日龄、28日龄和35日龄，每重复随机抽取2只体重相近健康的肉仔鸡，每个处理组共选10只鸡，分别称重，颈静脉放血致死，迅速摘取胸腺、脾脏和法氏囊，进行称重并计算其免疫器官指数；

免疫器官指数=免疫器官重量（g）/试验阶段体重（kg）

1.6.3 T淋巴细胞转化率

1.6.3.1 淋巴细胞的制备于35日龄，每重复随机抽取2只体重相近健康的肉仔鸡，每个处理组共选10只鸡，自心脏采血，肝素抗凝。在灭菌的离心管中加入2 mL鸡淋巴细胞分离液，然后沿管壁缓缓加入全血，盖上灭菌胶塞，用离心机离心（2 000 r/min）20 min；然后吸取白色云雾状的淋巴细胞层，转入无菌离心管加入RPMI1640培养液2 mL，吹散淋巴细胞，再离心20 min。重复上述操作，用RPMI1640培养液洗涤3次。最后一次离心结束后，吸取淋巴细胞，用5 mg/mL台盼蓝染液染色，进行活细胞计数，用RPMI1640培养液调整细胞含量为2×10⁷个/mL；

1.6.3.2 细胞培养取96孔微量细胞培养板，每孔加入50 μL含40 μg/mL ConA的RPMI1640，空白孔只加RPMI1640培养液。向每孔加入淋巴细胞悬液50 μL，使每孔中培养物总体积为100 μL，淋巴细胞终含量为1×10⁷个/mL，每份样品加4个孔（设4个重复）。细胞置于5%CO₂，37℃培养48 h；

1.6.3.3 T淋巴细胞转化率测定采用MTT法。在培养结束前3 h每孔加入10 μL MTT液，继续培养3 h。培养结束后，每孔加入100 μL DMSO溶液，加入后10 min内用酶联免疫检测仪在570 nm波长下测定OD值（即吸光值，ABS）。以刺激指数（SI）作为判断淋巴细胞增殖程度的参数。SI=（试验孔ABS ~空白孔ABS）/空白孔ABS×100%；

1.7 统计分析试验数据采用SPSS 12.0中 One~Way ANOVA过程进行单因素方差分析，并进行Duncan′s多重比较，以P<0.05作为差异显著性判断标准，结果以平均值 ±标准差表示；

2 结果与分析

2.1 肉鸡生长性能由表2可见，在肉仔鸡试验前期（7~21 d），各试验处理组间ADG、ADFI和FCR均无显著性差异（P＞0.05）。试验后期（22~35 d），试验1、2组的ADG、ADFI和FCR均显著高于对照组和试验3组（P＜0.05）。在整个试验阶段，试验1、2组的ADG、ADFI均显著高于对照组（P＜0.05）；试验1、2组的饲料利用率与对照组相比也有一定提高，但差异不显著（P＞0.05）；

表2 饮水中添加中西药合剂对肉仔鸡生产性能的影响

项目	对照组	试验1组	试验2组	试验3组
					7~21 d
ADG /g	40.43±1.74^a	40.35±1.89^a	39.58±2.01^a	39.07±1.56^a
					ADFI /g	68.21±2.45^a	67.94±3.12^a	67.03±2.91^a	66.21±2.67^a
FCR	1.69±0.04^a	1.68±0.08^a	1.69±0.06^a	1.69±0.07^a
					22~35 d
ADG /g	55.47±2.13^a	63.73±2.51^b	62.61±2.79^b	57.43±2.17^a
					ADFI /g	141.02±3.35^a	151.72±5.71^b	149.84±2.12^b	143.93±3.07^a
FCR	2.54±0.09^a	2.38±0.12^b	2.39±0.08^b	2.51±0.11^a
					7~35 d
ADG /g	47.95±1.98^a	52.04±2.14^b	51.09±2.45^b	48.25±1.69^a
					ADFI /g	104.62±2.77^a	109.83±3.94^b	108.44±4.63^b	105.07±3.52^a
FCR	2.18±0.10^a	2.11±0.11^a	2.12±0.10^a	2.18±0.11^a

注: 同行数据肩标相同小写字母者表示差异不显著（P＞0.05），不同小写字母者表示差异显著（P＜0.05）；

2.2 免疫器官指数的变化由表3可见，14日龄，试验1、2、3组胸腺指数显著或极显著高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）；试验2、3组脾脏指数显著高于对照组（P＜0.05）；试验1、2、3组法氏囊指数均高于对照组，但差异不显著（P＞0.05）。21日龄，试验2、3组胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数显著或极显著高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）。28日龄，试验1、2、3组法氏囊、脾脏指数显著或极显著高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）；试验2、3组的胸腺指数极显著高于对照组和试验1组（P＜0.01）；

表3 饮水中添加中西药合剂对肉仔鸡免疫器官指数的影响

项目	对照组	试验1组	试验2组	试验3组
					14日龄
胸腺指数/（g·kg^~1）	2.65±0.40^Aa	2.98±0.19^b	3.53±0.15^Bc	3.52±0.31^Bc
					脾脏指数/（g·kg^~1）	0.53±0.06^a	0.58±0.07^a	0.67±0.02^b	0.66±0.05^b
法氏囊指数/（g·kg^~1）	1.97±0.15^a	2.08±0.06^a	2.21±0.16^a	2.16±0.15^a
					21日龄
胸腺指数/（g·kg^~1）	3.49±0.15^A	3.50±0.23^A	4.23±0.26^B	4.11±0.24^B
					脾脏指数/（g·kg^~1）	0.68±0.02^A	0.69±0.03^A	0.77±0.02^B	0.79±0.01^B
法氏囊指数/（g·kg^~1）	2.26±0.15^a	2.48±0.03^a	2.69±0.10^b	2.64±0.04^b
					28日龄
胸腺指数/（g·kg^~1）	3.53±0.18^A	3.60±0.23^A	4.54±0.08^B	4.46±0.13^B
					脾脏指数/（g·kg^~1）	0.81±0.11^Aa	1.03±0.06^b	1.39±0.15^Bc	1.37±0.07^Bc
法氏囊指数/（g·kg^~1）	2.34±0.12^Aa	2.58±0.10^b	2.86±0.68^Bc	2.88±0.18^Bc

注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P＜0.05），不同大写字母表示差异极显著（P＜0.01）；

2.3 外周血T淋巴细胞增殖率的变化由表4可见，试验1、2、3组外周血T淋巴细胞增殖率均显著高于对照组（P＜0.05）。试验2、3组极显著高于对照组（P＜0.01），显著高于试验1组（P＜0.05），试验2组和试验3组相比差异不显著（P＞0.05）；

表4 饮水中添加中西药合剂对肉仔鸡T淋巴细胞增殖率的影响

项目	对照组	试验1组	试验2组	试验3组
					试验孔ABS均值	0.411±0.01	0.431±0.011	0.491±0.013	0.493±0.01
空白孔ABS均值	0.365±0.006	0.369±0.008	0.387±0.009	0.387±0.008
					T淋巴细胞增殖率/%	12.6±1.15^Aa	16.8±1.98^b	26.7±2.79^Bc	27.4±1.85^Bc

3 结论

实验结果表明，饮水中添加本发明的中西药合剂，可提高肉仔鸡的生长性能，促进免疫器官的发育和淋巴细胞的增殖，增强机体的免疫力。在实际生产中，为兼顾本发明中西药合剂的促生长和免疫增强两方面作用，建议在饮水中添加0.5%～1.0%的剂量。

Claims

1.一种增强家禽免疫功能的中西药合剂及其制备方法，其特征是：由下列药物组成（按重量份数计）：

党参1~5份、白术1~4份、茯苓1~3份、鱼腥草1~3份、甘草1~3份、冰片0.01-0.05份、盐酸左旋咪唑0.004-0.006份、西咪替丁0.01-0.03份。

2.根据权利要求1所述的增强家禽免疫功能的中西药合剂，其特征是：优选组分，按重量份数计，党参2.5份、白术1.5份、茯苓1份、鱼腥草1.5份、甘草1份、冰片0.03份、盐酸左旋咪唑0.005份、西咪替丁0.02份。

3.上述增强家禽免疫功能的中西药合剂制备方法，其特征按以下步骤进行：