CN108586629A - 一种甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物提纯技术领域，且公开了一种甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用，包括以下步骤，预处理：将甘草加热60摄氏度烘干至衡重量，并且粉碎甘草过80目筛；热水提取：将粉碎后的甘草末加入热水进行提取，其中提取方式为甘草末和水1:30的添加，并且将混合物利用微波热水加热，加热至一百摄氏度三个小时，并且提取两次；浓缩：将热水提取中得到的两次液体进行混合，并且进行60摄氏度水浴浓缩。该甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用，通过利用简单的制备方法得到纯度较高的甘草多糖，大大降低了甘草多糖的生产成本，适合大面积推广，同时针对甘草多糖进行了分析和提纯，并且针对甘草多糖的理化性质和其他生物化学性质进行分析。

Description

一种甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用
技术领域
本发明涉及生物提纯技术领域，具体为一种甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用。
背景技术
抗生素自上世纪40年代开始在畜禽饲料中作为促生长剂使用以来，对畜牧生产做出了巨大的贡献；近年来随着健康观念的兴起，抗生素滥用带来的一系列问题随之出现；目前随着绿色、安全食品的推广，人们希望更安全有效的饲料添加剂代替抗生素已势在必行。中草药是一种纯天然的绿色药物，能防治疾病，且含有丰富的营养物质，副作用小，畜禽使用不易产生耐药性和残留，被认为是抗生素理想的替代品。同时从各种中草药中提取了大量生物活性多糖，发现其具有提高机体免疫力、抗菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤、延缓衰老等一系列作用，也广泛应用于医药、食品和保健品等领域。
关于甘草多糖(GP)的研究则多集中于乌拉尔甘草和光果甘草。在我国二十世纪六、七十年代仍没有关于GP及其药理作用的报道，直到1986年史勇等人对甘草GP在小鼠淋巴细胞的激活增殖效应及其免疫学活性才进行了报道；1989年赵秀英以甘草种子为原料分离和鉴定了GP。
目前国内对于甘草多糖的研究和应用较为不完善。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用，具备提取方便简单且纯度高，应用范围广成本低的优点，解决了目前国内对于甘草多糖的提纯较为不完善且对于动物的应用研究较少的问题。
(二)技术方案
为实现上述一种甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用提取方便简单且纯度高，应用范围广成本低的目的，本发明提供如下技术方案：一种甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用，包括以下步骤：
预处理：将甘草加热60摄氏度烘干至衡重量，并且粉碎甘草过80目筛；
热水提取：将粉碎后的甘草末加入热水进行提取，其中提取方式为甘草末和水1:30的添加，并且将混合物利用微波热水加热，加热至一百摄氏度三个小时，并且提取两次；
浓缩：将热水提取中得到的两次液体进行混合，并且进行60摄氏度水浴浓缩；
脱蛋白：向提取液中加入1/4倍体积的氯仿－正丁醇溶液，混合20min，3500rpm离心5min，中层白色絮状沉淀为蛋白质，故取上清，重复离心2-3次，至中间没有明显沉淀为止；
醇脱：脱蛋白完毕，向提取液中缓缓加入无水乙醇，边加边搅拌，使乙醇浓度为60％，静置过夜，4000rpm离心5min，倒掉上清，沉淀物用蒸馏水溶解，再用80％乙醇沉淀一次，沉淀物60℃干燥直至质量不再发生变化，即为甘草粗多糖。
优选的，所述应用范围包括如下方向
方向1，甘草多糖对雏鸡新城疫疫苗抗体滴度的影响；
方向2，甘草多糖对蛋鸡生产性能及蛋品质的影响；
方向3，甘草多糖对肉鸡生产性能的影响。
优选的，所述使用设备型号为紫外光谱仪(天美公司，UV1102PC型)；自动平衡离心机(北京医用离心机厂，LDZ5-2)；数显恒温水浴锅(国华，HH-4)；生化培养箱(HPS-250，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司)；超净工作台(SW-CJ-1F，苏州安泰空气技术有限公司)；手提式高压蒸汽灭菌锅(YXQ，上海医用核子仪器厂)；低温冰箱(新飞，BCD-213KA)；电子天平(上海天平仪器厂，FA1104型)。
优选的，所述方向1中的甘草多糖注射液包括1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL和20mg/mL四种浓度，并且甘草多糖水溶液经消毒、杀菌和热原试验，确认符合要求后，4℃保存待用。
优选的，所述方向3中的甘草多糖纯度为92.39％，使用时以石粉稀释100倍再混入配合饲料中。
优选的，所述甘草多糖为淡黄色粉末，极易溶于水；经测定甘草多糖提取率为18.59％，总糖纯度为92.39％，对所提甘草多糖进行定性分析，含有多糖和蛋白质、氨基酸，不含皂甙、黄酮类和生物碱等物质。
(三)有益效果
与现有技术相比，本发明提供了一种甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用，具备以下有益效果：
1、该甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用，通过利用简单的制备方法得到纯度较高的甘草多糖，大大降低了甘草多糖的生产成本，适合大面积推广，同时针对甘草多糖进行了分析和提纯，从而保证了分析的方便性，并且针对甘草多糖的理化性质和其他生物化学性质进行分析。
2、该甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用，通过采取了三个方向对于养鸡的应用保证了应用范围的广泛性和适用性。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用，包括以下步骤：
预处理：将甘草加热60摄氏度烘干至衡重量，并且粉碎甘草过80目筛；
热水提取：将粉碎后的甘草末加入热水进行提取，其中提取方式为甘草末和水1:30的添加，并且将混合物利用微波热水加热，加热至一百摄氏度三个小时，并且提取两次；
浓缩：将热水提取中得到的两次液体进行混合，并且进行60摄氏度水浴浓缩；
脱蛋白：向提取液中加入1/4倍体积的氯仿－正丁醇溶液，混合20min，3500rpm离心5min，中层白色絮状沉淀为蛋白质，故取上清，重复离心2-3次，至中间没有明显沉淀为止；
醇脱：脱蛋白完毕，向提取液中缓缓加入无水乙醇，边加边搅拌，使乙醇浓度为60％，静置过夜，4000rpm离心5min，倒掉上清，沉淀物用蒸馏水溶解，再用80％乙醇沉淀一次，沉淀物60℃干燥直至质量不再发生变化，即为甘草粗多糖。
优选的，所述应用范围包括如下方向
方向1，甘草多糖对雏鸡新城疫疫苗抗体滴度的影响；
方向2，甘草多糖对蛋鸡生产性能及蛋品质的影响；
方向3，甘草多糖对肉鸡生产性能的影响。
优选的，所述使用设备型号为紫外光谱仪(天美公司，UV1102PC型)；自动平衡离心机(北京医用离心机厂，LDZ5-2)；数显恒温水浴锅(国华，HH-4)；生化培养箱(HPS-250，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司)；超净工作台(SW-CJ-1F，苏州安泰空气技术有限公司)；手提式高压蒸汽灭菌锅(YXQ，上海医用核子仪器厂)；低温冰箱(新飞，BCD-213KA)；电子天平(上海天平仪器厂，FA1104型)。
优选的，所述方向1中的甘草多糖注射液包括1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL和20mg/mL四种浓度，并且甘草多糖水溶液经消毒、杀菌和热原试验，确认符合要求后，4℃保存待用。
优选的，所述方向3中的甘草多糖纯度为92.39％，使用时以石粉稀释100倍再混入配合饲料中。
优选的，所述甘草多糖为淡黄色粉末，极易溶于水；经测定甘草多糖提取率为18.59％，总糖纯度为92.39％，对所提甘草多糖进行定性分析，含有多糖和蛋白质、氨基酸，不含皂甙、黄酮类和生物碱等物质。
实施例一：甘草多糖注射液：本部分试验甘草多糖用去离子水稀释成4种浓度(GP-1，GP-5，GP-10和GP-20)：1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL和20mg/mL。制备的甘草多糖水溶液经消毒、杀菌和热原试验(中华人民共和国兽医药典委员会，2005)，确认符合要求后，4℃保存待用。
新城疫(ND)活疫苗和油疫苗均购自齐鲁动物保健品有限公司。
氯化钠注射液(山东鲁抗辰欣药业有限公司)；亚甲基兰、苏丹红、苯酚(上海科兴商贸有限公司)。
3.2.1.2试验动物及其分组和处理方法
试验1日龄海兰蛋雏鸡购自石家庄某孵化场，试验前饲养于60×60×100厘米铁丝鸡笼中(10只/笼)，室温控制在36±1℃，24h充足光照。随着试验进行，饲养室温度逐渐降低到室温，光照逐渐减少至12h/d，并保持不变。雏鸡饲料购自石家庄某饲料厂，饲料营养价值满足雏鸡生长需要。
500只7d雏鸡滴鼻接种新城疫(ND)活疫苗，随机分为5个试验组，每组100只，平均分为10个重复。雏鸡初始平均体重70.6g，抽检新城疫抗体滴度为4.3log2。1至4组雏鸡分别颈部皮下注射1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL和20mg/mL甘草多糖0.5mL，每日一次，连续3天。5组为空白组，用生理盐水代替不同剂量甘草多糖进行注射。在28d，各组雏鸡二次接种新城疫(ND)灭活苗，同时按照7d的处理方式给雏鸡注射甘草多糖和生理盐水。另外，在第一次接种后的0、7、14、21、28、35、42、49、56和63d，每组随机选择30只鸡(每重复3只)进行心脏采血并制备血清，用以分析新城疫血清抗体滴度。(具体试验安排和样品采集见表2)
表2试验方案设计表
注：1ND＝新城疫疫苗；2GP＝甘草多糖；
3.2.1.3新城疫血清抗体滴度测定方法
新城疫血清抗体滴度测定采用微量血凝抑制试验(FuandLiu,1997)，结果以log2形式表示。
3.2.1.4数据分析方法
结果以X±SD表示，应用SPSS13.0进行单因素方差分析，用LSD法进行组间多重比较。P<0.05表示差异显著。
3.2.2结果与分析：试验对雏鸡新城疫血清抗体滴度的影响见表3。
与对照组相比较，第一次接种14d后，GP-5、GP-10和GP-20组雏鸡新城疫抗体滴度均有显著提高(P<0.05)，GP-1组雏鸡新城疫抗体滴度则是在接种后21d才有显著提高(P<0.05)。而4个试验组在刚接种后的短期内，雏鸡新城疫抗体滴度虽有提高，但差异不显著(P≥0.05)。
表3对雏鸡血清新城疫抗体水平的影响1
注：1.结果以log2表示；2.GP-1、GP-5、GP-10、GP-20分别指不同剂量的甘草多糖，结果为同重复组取样雏鸡的几何平均值(n＝10,每重复取样3只)；3.表示时间计算从新城疫疫苗第一次接种开始；4.同列数字上标不同表示差异显着(P<0.05)。
GP-5与GP-1组雏鸡血清新城疫抗体滴度比较，除了第一次接种28d差异显著外(P<0.05)，整个试验期内差异均不显著(P≥0.05)。GP-10和GP-20组雏鸡新城疫抗体滴度与GP-1组相比较，接种后7d两者均差异不显著(P≥0.05)，接种后56dGP-20组差异不显著(P≥0.05)，其余试验期内各组均差异显著(P<0.05)。与GP-5组雏鸡新城疫抗体滴度相比，GP-10和GP-20组整个试验期内，只有GP-10组在56d和63d时差异显著(P<0.05)，其余试验期内各组均差异不显著(P≥0.05)。另外，试验也比较了GP-10和GP-20组之间雏鸡新城疫抗体滴度，发现两者均无明显差异(P≥0.05)。
总体上看，5个试验组雏鸡新城疫血清抗体滴度，在整个试验期内的变化呈现一定规律。第一次接种后，新城疫抗体滴度快速升高，直到35d之前，以后这种趋势逐渐变缓。另外，各试验组雏鸡血清新城疫抗体滴度均比生理盐水对照组高，特别是21d后，表现最为明显。而4个试验组中又以GP-1组最靠近生理盐水对照组，与其余3试验组有差异。GP-10和GP-20组新城疫抗体滴度数值差距不大，说明这两组之间差异不显著。
3.2.3讨论
新城疫血清抗体滴度是反映机体体液免疫的一个重要指标，常常反映疫苗使用效果。本研究中，甘草多糖4个剂量组与空白对照组相比较，新城疫血清抗体滴度均有显著提高。这表明雏鸡注射甘草多糖能显著提高其体液免疫。甘草多糖GP-1组和GP-5组相比，大部分时间新城疫血清抗体滴度均无明显差异，说明甘草多糖浓度在1mg/mL和5mg/mL时其效果没有显著差异；而当甘草多糖浓度提升到10mg/mL(GP-10)时，新城疫血清抗体滴度均有显著增加，说明甘草多糖在此浓度下效果较显著。但是，随着甘草多糖浓度提高到20mg/mL(GP-20)时，其功效并没有得到提升。中药的免疫调节作用呈现一定的量效关系，一般在小剂量有免疫增强作用，而大剂量时则效果并不提高甚至出现免疫抑制作用，因此要研究其作为佐剂的有效剂量范围。综合以上结果，甘草多糖对雏鸡新城疫抗体影响的最佳浓度为10mg/mL。另外研究发现：甘草多糖发挥免疫增强作用需要较长时间才能显现出来，且这种功效能持续较长时间。以上结果进一步证明甘草多糖是一种优秀的免疫增强剂，能长期、持续发挥作用，是一种理想免疫佐剂的选择。在提高雏鸡ND抗体滴度方面，10mg/mL是最佳使用浓度。
另外，从雏鸡新城疫抗体滴度的变化可以看出：10mg/mL和20mg/mL浓度的甘草多糖使用后抗体水平提升作用最为明显，表明甘草多糖能够促使机体尽快产生特异性抗体，并使之维持时间更长，故能提高疫苗的免疫效果。
3.2.4本试验小结
本试验通过观察甘草多糖对雏鸡新城疫疫苗免疫效果的影响，发现甘草多糖应用于雏鸡，能显著提高其新城疫抗体水平。同时从雏鸡新城疫血清抗体滴度的动态变化中可以看出：甘草多糖能促使机体尽快产生特异性抗体，并使之维持时间加长，以利于提高疫苗的免疫效果。通过试验表明：甘草多糖最佳使用浓度为10mg/mL，对雏鸡新城疫抗体滴度最大提升幅度达32.29％。
实施例二
3.3甘草多糖对蛋鸡生产性能及蛋品质的影响研究
3.3.1材料与方法
3.3.1.1甘草多糖饲喂量30mg/只/天
3.3.1.2试验动物及试验设计方案
试验选用19周龄罗曼褐壳蛋鸡600只，随机分为2个组，即对照组和甘草多糖饲喂组，每组6个重复，每重复50只。试验蛋鸡是从19周龄开始饲喂甘草多糖30mg/只/天(试验设计见表4)。试验选用的甘草多糖由本实验室自制。
表4试验方案设计表
3.3.1.3饲养管理方案
试验在河北某蛋鸡养殖企业进行，各组饲养管理方式相同。试验蛋鸡分上下两层阶梯笼养，各个重复均匀分布于鸡舍。自由采食与饮水，自然光照与人工光照相结合，自然通风和横向负压通风相结合。每日清晨8:30和下午14:30记录鸡舍温度和湿度，定期打扫卫生。每日清理鸡粪和捡蛋各两次，按常规程序进行鸡只免疫和栏舍消毒。
3.3.1.4试验日粮配方
试验日粮为玉米-豆粕-棉粕型商业日粮，试验日粮及营养水平见表5。
表5基础日粮组成及营养水平
注：*微量为每公斤全价料提供：Mn80mg；Zn80mg；Fe2.0g；Cu1.4g；I0.45mg；Se0.2mg。*多维为每公斤全价料提供：维生素A1200IU；硫胺素5.5mg；核黄素5.0mg；泛酸16mg；维生素B68.0mg；维生素B120.008mg；维生素D31500IU；维生素E25IU；维生素K31.0mg；生物素0.3mg；叶酸1.8mg；胆碱500mg。
3.3.1.5指标检测方法
3.3.1.5.1生产性能指标检测方法
每日08:30及17:30以重复为单位收集鸡蛋，记录蛋重、产蛋数、破(软)壳蛋数。每周统计各重复的饲料消耗量情况。计算平均蛋重、产蛋率、采食量、料蛋比、破、软壳蛋率及死淘率等。
平均产蛋率(％)＝总蛋数/(鸡数×天数)×100％
平均日采食量(g)＝总采食量/(鸡数×天数)
料蛋比＝总采食量/总蛋重
破(软)蛋率(％)＝破软蛋数/总蛋数×100％
3.3.1.5.2蛋品质指标检测方法
正式试验第35d时，从各个重复中抽取5个鸡蛋并编号，备测各项蛋品质指标。利用日本Robotmation公司的蛋壳强度测定仪(ModebⅡ)测定蛋壳强度，EMT-5200蛋品质测定仪测定蛋黄颜色、哈氏单位(HU)；日本FHK公司的蛋形指数测定仪测定蛋形指数；蛋壳厚度测定仪测定蛋壳厚度。蛋壳颜色指数测定方法参见《畜禽遗传资源调查技术手册》。
3.3.1.6数据分析方法
试验数据采用SPSS12.0软件统计分析。
3.3.2结果分析
3.3.2.1甘草多糖对蛋鸡生产性能的影响研究结果分析：甘草多糖对蛋鸡生产性能影响的结果见表6。
由表中可以看出，对照组在产蛋率、平均蛋重、采食量和料蛋比与试验组有差异，且差异显着(P<0.05)，破软蛋率上差异显着(P<0.05)。其中试验组比对照组产蛋率提高了5.26％，料蛋比降低了3.76％，破(软)蛋率降低了0.33％。即在基础日粮中添加30mgGP/只·天的甘草多糖能提高蛋鸡产蛋率、平均蛋重、采食量，同时降低料蛋比和破(软)蛋率。
表6甘草多糖对蛋鸡生产性能的影响
注：a,b同行数字上标不同表示差异显着(P<0.05)，A，B表示差异极显着(P<0.01)。
3.3.2.2甘草多糖对蛋鸡蛋品质的影响研究结果分析：甘草多糖对蛋鸡蛋品质影响的结果见表7。
从表7可以看出，对照组和试验组在蛋壳颜色和蛋形指数上差异显著(P＜0.05)，其它指标则差异不明显(P≥0.05)。因此在蛋鸡日粮中添加30mgGP/只·天的甘草多糖，能显著改善鸡蛋的蛋壳颜色和蛋形指数。
表7甘草多糖对蛋鸡蛋品质的影响
注：a，b同行数字上标不同表示差异显着(P<0.05)。
3.3.3本部分小结
在蛋鸡日粮中添加30mg/只·天甘草多糖可以显著提高蛋鸡的生产性能，改善鸡蛋品质，表明甘草多糖在蛋鸡生产中有良好的应用前景。
实施例三
3.4甘草多糖对肉鸡生产性能的影响研究
3.4.1材料与方法
3.4.1.1材料
甘草多糖由本课题组自制，经测定多糖纯度为92.39％，使用时以石粉稀释100倍再混入配合饲料中。
3.4.1.2试验动物与分组方法
试验采用单因子设计，将210只体重相近健康的1日龄AA公雏鸡，随机分为7组，每组3个重复，每个重复10只鸡(具体分组情况见表8)。试验期间每天观察鸡的采食情况和精神状态，以重复为单位计算其耗料量、记录死亡鸡只数。
表8试验设计与分组表
3.4.1.3试验日粮配方：日粮配方及营养水平见表9
表9日粮组成及营养水平(干物质基础)
注：①预混料为每千克基础日粮提供：维生素A1500IU；维生素D3200ICU；维生素E10mg；维生素K0.5mg；维生素B11.8mg；维生素B23.6mg；泛酸10mg；烟酸35mg维生素B63.5mg；叶酸0.55mg；VB120.01mg；生物素0.15mg；胆碱1300mg；锰60mg；锌40mg；铁80mg；铜8mg；碘0.35mg；硒0.15mg。②*为实测值，其它为计算值。
3.4.1.4饲养管理方案
试验各组在同1栋鸡舍进行常规饲养。采用三层立体式笼养，雏鸡入舍前饲养舍用福尔马林和高锰酸钾密闭熏蒸消毒，雏鸡自由采食饮水，饲养管理参照《AA+肉鸡饲养管理手册》执行。7日龄进行新城疫弱毒苗滴鼻点眼首免，14日龄进行法氏囊弱毒苗饮水免疫，21日龄新城疫弱毒Ⅳ系疫苗加强免疫，试验期为6周。鸡舍温度第一周32-35℃，第2周为30-32℃，以后每周下降2℃。4周后为自然温度条件下饲养，24h光照。
3.4.1.5生产性能测定方法
试验前所有雏鸡以重复为单位称重，并计算初始平均体重。在试验期的第3周和第6周末，鸡群禁食12h后进行空腹称重，计算0-3、3-6周龄鸡只的平均采食量、平均日增重以及单位增重的饲料消耗。
平均采食量(AFI)＝各试验阶段采食量/相应阶段鸡只数
平均日增重(ADG)＝试验阶段体重增加量/相应阶段天数
料重比(FGR)＝饲料消耗量/体重增加量
3.4.1.6数据处理方法
试验数据以平均值±标准误表示，采用SPSS13.0软件中的One-wayANOVA过程进行单因素方差分析，均值的多重比较采用Duncan′s法进行，以P<0.05作为差异显著性判断标准。
3.4.2结果与分析:表10、11、12分别为肉仔鸡平均采食量、平均日增重和料肉比的试验结果。
由表可以看出:在0-21日龄时，甘草多糖各剂量组平均采食量、平均日增重和料肉比与对照组相比均无显著变化(P>0.05)；在22-42日龄时，0.5％甘草多糖组其平均采食量、平均日增重和0.5％、1.0％、1.5％甘草多糖组料肉比与对照组相比无显著影响(P>0.05)；其余各剂量组平均采食量、平均日增重和料肉比均较对照组显著增加(P<0.05)；其中又以2.0％甘草多糖组效果最为明显，其平均采食量、平均日增重和料肉比相比其他各组均有显著变化(P<0.05)。
从全期(0-42日龄)来看，0.5％甘草多糖组其平均采食量、平均日增重和0.5％、1.0％、1.5％甘草多糖组料肉比与对照组相比无显著影响(P>0.05)；其余各剂量组平均采食量、平均日增重和料肉比均较对照组显著增加(P<0.05)；其中以2.0％甘草多糖组效果最为明显，其平均采食量、平均日增重和料肉比相比其他各组均有显著变化(P<0.05)。
表10甘草多糖对肉仔鸡平均采食量的影响(Kg)
注：同一列中,右肩标有相同字母者,差异不显著(P>0.05)；标有不同字母者，差异显著(P<0.05)下同。
表11甘草多糖对肉仔鸡平均日增重的影响(g)
表12甘草多糖对肉仔鸡料重比的影响
3.4.3讨论
本试验结果表明，甘草多糖对不同阶段肉仔鸡生产性能的影响不同。甘草多糖对21日龄肉仔鸡平均采食量、平均日增重和饲料转化率无显著影响，但试验后期42日龄时随甘草多糖添加量增加，肉仔鸡平均采食量逐渐减少，平均日增重逐渐提高，料肉比逐渐降低，添加2.0％甘草多糖达到最佳水平。从全期来看，2.0％甘草多糖添加量在减少平均采食量、增加平均日增重和降低料肉比三方面较其它各组均效果极显著，平均采食量较对照组降低5.22％，平均日增重较对照组增加9.41％，料肉比较对照组降低9.19％。
本试验结果也表明，甘草多糖的添加效果与添加剂量、添加时间长短有关，在生长前期甘草多糖的促生长效果可能尚未累积显现出来，而到试验后期表现出明显效果，在肉仔鸡饲料中添加以2.0％为宜。
4结论
4.1甘草经微波水提醇沉法分离、纯化后得到的甘草多糖为淡黄色粉末，极易溶于水；经测定甘草多糖提取率为18.59％，总糖纯度为92.39％；对所提甘草多糖进行定性分析，含有多糖和蛋白质、氨基酸，不含皂甙、黄酮类和生物碱等物质。
4.2甘草多糖应用于雏鸡，能显著提高新城疫抗体水平，并维持较长时间。甘草多糖最佳使用浓度为10mg/mL，对雏鸡新城疫抗体滴度最大提升幅度达32.29％。
4.3蛋鸡饲喂30mg/只·天甘草多糖能显著提高蛋鸡的生产性能，同时改善鸡蛋品质。
4.4应用2.0％甘草多糖能显著降低肉仔鸡饲料平均采食量、提高平均日增重和降低料肉比，平均采食量较对照组降低5.22％，平均日增重较对照组增加9.41％，料肉比较对照组降低9.19％。
本发明的有益效果是：在甘草多糖应用于养鸡生产研究中，观察其对鸡的生产性能和免疫作用过程中需要解决试验环境的问题，特别是大规模应用时要求养鸡场分布范围尽量广，鸡只数量大，代表性强，采用先进的提取、纯化工艺对甘草多糖进行分离，完成了对甘草多糖提取、纯化最佳工艺参数的改进，所得甘草多糖提取率和总多糖纯度分别为18.59％和92.39％。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用，其特征在于，包括以下步骤：
预处理：将甘草加热60摄氏度烘干至衡重量，并且粉碎甘草过80目筛；
热水提取：将粉碎后的甘草末加入热水进行提取，其中提取方式为甘草末和水1:30的添加，并且将混合物利用微波热水加热，加热至一百摄氏度三个小时，并且提取两次；
浓缩：将热水提取中得到的两次液体进行混合，并且进行60摄氏度水浴浓缩；
脱蛋白：向提取液中加入1/4倍体积的氯仿－正丁醇溶液，混合20min，3500rpm离心5min，中层白色絮状沉淀为蛋白质，故取上清，重复离心2-3次，至中间没有明显沉淀为止；
醇脱：脱蛋白完毕，向提取液中缓缓加入无水乙醇，边加边搅拌，使乙醇浓度为60％，静置过夜，4000rpm离心5min，倒掉上清，沉淀物用蒸馏水溶解，再用80％乙醇沉淀一次，沉淀物60℃干燥直至质量不再发生变化，即为甘草粗多糖。
2.根据权利要求1所述的一种甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用，其特征在于，所述应用范围包括如下方向
方向1，甘草多糖对雏鸡新城疫疫苗抗体滴度的影响；
方向2，甘草多糖对蛋鸡生产性能及蛋品质的影响；
方向3，甘草多糖对肉鸡生产性能的影响。
3.根据权利要求1所述的一种甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用，其特征在于，所述使用设备型号为紫外光谱仪(天美公司，UV1102PC型)；自动平衡离心机(北京医用离心机厂，LDZ5-2)；数显恒温水浴锅(国华，HH-4)；生化培养箱(HPS-250，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司)；超净工作台(SW-CJ-1F，苏州安泰空气技术有限公司)；手提式高压蒸汽灭菌锅(YXQ，上海医用核子仪器厂)；低温冰箱(新飞，BCD-213KA)；电子天平(上海天平仪器厂，FA1104型)。
4.根据权利要求2所述的一种甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用，其特征在于：所述方向1中的甘草多糖注射液包括1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL和20mg/mL四种浓度，并且甘草多糖水溶液经消毒、杀菌和热原试验，确认符合要求后，4℃保存待用。
5.根据权利要求2所述的一种甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用，其特征在于：所述方向3中的甘草多糖纯度为92.39％，使用时以石粉稀释100倍再混入配合饲料中。
6.根据权利要求1所述的一种甘草多糖的提取方法及其在养鸡生产中的应用，其特征在于：所述甘草多糖为淡黄色粉末，极易溶于水；经测定甘草多糖提取率为18.59％，总糖纯度为92.39％，对所提甘草多糖进行定性分析，含有多糖和蛋白质、氨基酸，不含皂甙、黄酮类和生物碱等物质。
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