CN103110677A - 一种西洋参提取物的制备方法及其在制备防治艾滋病药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种防治艾滋病的药物的制备方法及其应用,具体涉及西洋参提取物的制备方法及其在制备防治艾滋病的药物中的应用,可通过添加药学上可接受的载体,将西洋参提取物制备成口服制剂或注射剂,所述口服制剂的剂型优选为胶囊、片剂、滴丸剂、微丸剂、口服液或颗粒剂。药效学试验表明西洋参提取物能在不损伤免疫功能的前提下,有效阻断HIV感染,无副作用,从而实现对艾滋病的防治。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域,具体涉及一种西洋参提取物的制备方法及制药用途,更具体的涉及一种西洋参提取物在制备防治艾滋病药物中的应用。
背景技术
艾滋病即获得性免疫缺陷综合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome,AIDS),由人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)感染引起。导致被感染者免疫功能的部分或完全丧失,CD4+T淋巴细胞数量减少,功能降低,继而发生多系统、多器官、多病原体的复合感染(机会性感染)和肿瘤等。自世界上1981年(我国自1985年)出现第1例AIDS病人以来,艾滋病病毒在全球范围内的传播速度惊人,截至2011年底,我国累计报告HIV感染者和病人约78万人,约占世界上3400万感染者的2.3%。其中2011年新发感染者约4.8万人,因AIDS相关死亡约2.8万人。从HIV感染到AIDS发病需要经历很长一段时间,大致包括潜伏期、无症状期、最后发展成艾滋病期。鸡尾酒疗法是目前国际上通用的艾滋病治疗方法,该疗法以往仅用于艾滋病期的病人,无症状期HIV感染者几乎无药可用。虽然随着研究的进步,国内外均提倡CD4+T淋巴细胞<350/mm3的无症状期HIV感染者宜提早进行鸡尾酒疗法干预;但该疗法副作用大、病人难耐受,病毒变异及出现耐药性等问题尚无法解决,而且其并不能完全清除体内的艾滋病病毒,停药后病人马上出现反弹,如果早期就应用,更是存在病人的并发症多、后期无法继续治疗等诸多潜在危险。因此有相当数量的患者在无症状期不适宜或不能使用抗病毒治疗,只能任其发展至艾滋病期再治疗。
中医提出艾滋病系艾滋病毒邪侵袭机体,直伤本元之气,多脏受损(以脾肾为主),阴阳失调,痰瘀内生,险证丛生,最后致命元败亡、阴阳离决而死,艾滋病毒邪直伤本元之气为艾滋病的主要病机特点。因艾滋病临床多出现咳痰、泄泻、口糜、疱疹、瘰疬、身热不扬、胸脘痞闷、皮肤溃疡、舌苔腻或黄厚腻等湿性症状;且HIV/AIDS患者发病缓、病程长,邪深滞痼、粘滞难拔,故与温病中湿热病邪的特征相合。治疗上应扣其“正虚邪实”病机实质,予以培补元气,提高免疫力。同时,正气的培补应具有预见性,艾滋病湿热之毒邪易耗气伤阴,无症状期的证候调查结果也显示气阴两虚证居多,应以益气滋阴为主,阻其气阴耗伤,以延缓发病进程,“既病防变”。西洋参为五加科人参属植物西洋参Panax quinquefolium L.的干燥根,又名花旗参,西洋人参、洋参,在我国临床应用已有300多年的历史,并已载入中国药典。西洋参具有补气养阴,清热生津之功效,可用于气虚阴亏,内热,咳喘痰血,虚热烦倦,消渴,口燥咽干;而且其几乎无毒副作用,是法定的保健食品原料。现在研究已显示西洋参具有调节或增强已受损机体免疫力的作用。正因西洋参补气养阴的功效,及正向调节免疫力的独特医疗保健价值及毒副作用小、宜于长期服用的特点,均与艾滋病无症状期的治疗原则相符,切中要害,是一个非常有希望的防治艾滋病的药物。
西洋参中含有皂苷、脂肪酸类、聚炔类、甾醇类、黄酮类、挥发油类、糖类、氨基酸类及无机元素类等多种活性成分【西洋参化学成分及药理活性研究进展[J].特产研究,2007,(3):73-77】,其中人参皂苷是有效成分之一,如:中国药典2010年版规定西洋参中人参皂苷Rb1、Re及Rg1的总量不得少于2.0%。中国发明专利CN102000447A涉及“富含皂苷类物质的药材中提取有效成分的新方法”,并具体公开了皂苷类药材中有效成分提取方法的改进,其申请文件中明确记载将富含皂苷类物质的药材破碎后再提取,富含皂苷类物质的药材选自人参属植物,人参属植物选自人参、珠子参、竹节参、西洋参、三七。而该方法仍需要将人参属植物粉碎后置于闪式提取器中,粉碎过程中存在粉尘大,有损失,耗能等缺点,而且此项专利申请仅涉及人参属提取物的提取方法,并没有公开人参属提取物抗HIV病毒的药效学实验以及用于防治艾滋病的用途。中国发明专利CN101781351A涉及“一种从西洋参中提取人参皂苷Rb1的方法及其粉针剂”,其仅仅从西洋参中提取获得一种人参皂苷Rb1,体现不出中药多成分、多靶点的特色,更没有涉及西洋参提取物在制备防治艾滋病药物中的应用。中国发明专利CN10278998A涉及“一种用于治疗艾滋病无症状HIV感染期的中药片”,其中公开了一种包含西洋参在内共11味中药组成的中药片,该中药片可有效用于艾滋病无症状HIV感染期的治疗,其中西洋参为粉碎入药,此中药片虽然具有一定的药效,但由于该中药片共由11味中药组成,而中药复方的作用并不等同于方中几味中药功效的简单叠加,中药组合后会产生相生、相须、相杀、相畏等多种配伍作用,在众多的药味中究竟哪些中药针对艾滋病无症状HIV感染期的治疗发挥主要作用,哪些中药发挥次要作用或者不产生明显作用均是本领域技术人员无法获知的;即便西洋参是其中的有效组分之一,也只是将其粉末与其他10味中药进行配伍后达到“有效”的目的,且西洋参是全粉入药,并没有对西洋参中起效的活性成分进行追踪分析。发明人通过查阅国内外的专利及非专利文献,发现至今为止关于西洋参中哪些成分是防治艾滋病的活性成分以及如何从西洋参中提取出可以防治艾滋病的活性提取物,尚无人研究。
在天然药物化学领域,中药提取是指一种从天然粗材料中去除无用、获取生物活性精华的工艺过程。常用的提取方法少则花时1小时或数小时,多则花时数天乃至数十天,过程中的污染和浪费十分突出甚至惊人。因此,如何从西洋参中高效、节能、减少药材浪费的提取防治艾滋病的活性物质,并用于制备防治艾滋病的药物是现有技术中迫切需要解决的问题。
发明内容
针对上述情况,为克服现有技术缺陷,本发明目的之一在于,提供一种防治艾滋病的西洋参提取物的制备方法。可有效解决从西洋参中提取防治艾滋病的活性物质的技术问题。
本发明的技术方案是,在西洋参中加入重量体积比为6-50倍(重量体积是指固体物用g计,液体物用ml计,以下同)的丙酮(即1g的西洋参加6-50ml的丙酮),用组织破碎提取法提取3次,每次提取均为粉碎30秒,间歇2秒,再粉碎60秒,间歇2秒,再粉碎30秒,每次的提取液过滤,得滤液,合并3次的滤液,减压浓缩至干,得残渣,用与西洋参重量体积比为1:1的水溶解残渣(即水的用量为,1g西洋参按上述方法制得的残渣,用1ml的水溶解),经装有DiaionHP-20大孔吸附树脂的柱色谱(径高比为1:6),先用6倍量柱体积的去离子水洗脱,后用8倍量柱体积的质量浓度为95%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,减压回收溶剂至干,即得西洋参提取物,所述的丙酮为体积浓度为70%的丙酮。
本发明的另一目的在于,提供上述西洋参提取物在制备防治艾滋病药物中的应用,该药物能够有效用于防治艾滋病,实现对艾滋病的防治。
一种用于防治艾滋病的药物组合物,该药物组合物包含上述的西洋参提取物以及药学上可接受的载体;所述药物组合物为口服制剂或注射剂;所述口服制剂的剂型为胶囊、片剂、滴丸剂、微丸剂、口服液或颗粒剂。
本发明西洋参提取物制备的防治艾滋病药物在应用时,先试验提取物对具有免疫功能的T细胞的毒性,在其没有毒性的前提下,再以HIV病毒感染T细胞,经反复试验,结果证明本发明西洋参提取物治疗组不仅T细胞生长良好,而且病毒复制量显著减少。说明了本发明西洋参提取物能在不损伤免疫功能的前提下,有效阻断HIV感染,无副作用。
本发明的西洋参提取物可制备成胶囊、片剂、滴丸剂、微丸剂、口服液、颗粒剂和注射剂的形式,用作防治艾滋病的药物。
本发明的优势在于:
首先,本发明的提取方法与超声波提取方法相比,在无需粉碎药材的情况下,依然可在短时间内将有效成分提取出来,具有高效、节能、省时、环保、减少药材浪费的优势;
其次,进一步采用大孔吸附树脂柱层析纯化获得的本发明西洋参提取物,其对T细胞无毒、不影响T细胞生长,又能抗HIV-1感染,而且效果优于中药片对照药物,不但达到了筛选有效中药及找到活性物质的目的,同时本发明进一步优化了疗效,有效用于制备防治艾滋病的药物,用于防治艾滋病。
总之,本发明制备的西洋参提取物在防治艾滋病的应用中充分体现了天然药物扶正(不损伤有免疫功能的T细胞)、排毒(防治HIV感染)的多层次、多靶点的特色,在防治艾滋病方面具有重要的作用。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的技术方案作详细说明,其仅是对本发明实施方式的具体举例,不能被理解为是对本发明的限制。
实施例1:
西洋参加入6倍重量体积的丙酮,用组织破碎提取法提取3次,每次提取均为粉碎30秒,间歇2秒,再粉碎60秒,间歇2秒,再粉碎30秒,每次的提取液过滤,得滤液,合并3次的滤液,减压浓缩至干,得残渣,用西洋参与水重量体积比为1:1的水溶解残渣,经装有DiaionHP-20大孔吸附树脂的柱色谱,先用6倍量柱体积的去离子水洗脱,后用8倍量柱体积的质量浓度为95%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,减压回收溶剂至干,即得西洋参提取物。
实施例2:
西洋参加入15倍量重量体积的丙酮,用组织破碎提取法提取3次,每次提取均为粉碎30秒,间歇2秒,再粉碎60秒,间歇2秒,再粉碎30秒,每次的提取液过滤,得滤液,合并3次的滤液,减压浓缩至干,得残渣,用西洋参与水重量体积比为1:1的水溶解残渣,经装有DiaionHP-20大孔吸附树脂的柱色谱,先用6倍量柱体积的去离子水洗脱,后用8倍量柱体积的质量浓度为95%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,减压回收溶剂至干,即得西洋参提取物。
实施例3:
西洋参加入30倍重量体积的丙酮,用组织破碎提取法提取3次,每次提取均为粉碎30秒,间歇2秒,再粉碎60秒,间歇2秒,再粉碎30秒,每次的提取液过滤,得滤液,合并3次的滤液,减压浓缩至干,得残渣,用西洋参与水重量体积比为1:1的水溶解残渣,经装有DiaionHP-20大孔吸附树脂的柱色谱,先用6倍量柱体积的去离子水洗脱,后用8倍量柱体积的质量浓度为95%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,减压回收溶剂至干,即得西洋参提取物。
实施例4:
西洋参加入40倍重量体积的丙酮,用组织破碎提取法提取3次,每次提取均为粉碎30秒,间歇2秒,再粉碎60秒,间歇2秒,再粉碎30秒,每次的提取液过滤,得滤液,合并3次的滤液,减压浓缩至干,得残渣,用西洋参与水重量体积比为1:1的水溶解残渣,经装有DiaionHP-20大孔吸附树脂的柱色谱,先用6倍量柱体积的去离子水洗脱,后用8倍量柱体积的质量浓度为95%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,减压回收溶剂至干,即得西洋参提取物。
实施例5:
西洋参加入50倍重量体积的丙酮,用组织破碎提取法提取3次,每次提取均为粉碎30秒,间歇2秒,再粉碎60秒,间歇2秒,再粉碎30秒,每次的提取液过滤,得滤液,合并3次的滤液,减压浓缩至干,得残渣,用西洋参与水重量体积比为1:1的水溶解残渣,经装有DiaionHP-20大孔吸附树脂的柱色谱,先用6倍量柱体积的去离子水洗脱,后用8倍量柱体积的质量浓度为95%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,减压回收溶剂至干,即得西洋参提取物。
上述实施例制备的西洋参提取物,经试验验证,均具有防治艾滋病的作用,可有效用于制备防治艾滋病的药物,有关试验的具体情况如下:
试验例1:
按常规方法将1G5T细胞在含有10%胎牛血清(Hyclone)及青霉素和链霉素的RPMI-1640培养液中培养,培养条件为37°C,饱和湿度为5%CO2,培养生长24小时,加入西洋参提取物,使西洋参提取物的终浓度达到0.005-0.5mg/ml,作用24小时后,以台盼蓝染色排除法测定1G5T细胞的细胞活力,经测定,加入西洋参提取物作用24小时后的1G5T细胞的细胞活力均大于60%,均不抑制T细胞增殖,取上述作用24小时后的1G5T细胞以HBSS平衡盐溶液(Gibco-Brl公司)洗3次,每次HBSS平衡盐溶液的用量为RPMI-1640培养液体积量的1/2,将洗涤后的1G5T细胞以0.01MOI(multiplicity of infection,感染复数,是一个比值、没有单位,其含义是感染时病毒与细胞数量的比值,即病毒颗粒数/细胞数)的亲X4的HIV-1NL4-3(HIV-1X4-tropic NL4-3)病毒株感染1.5小时,被感染的细胞用HBSS平衡盐溶液(Gibco-Brl公司)洗3次,每次HBSS平衡盐溶液的用量为RPMI-1640培养液体积量的1/2,加入含有10%胎牛血清(Hyclone)及青霉素和链霉素的RPMI-1640培养液后,再加入西洋参提取物,使西洋参提取物的终浓度达到0.005-0.5mg/ml,在37°C,饱和湿度为5%CO2的条件下,继续培养3天后,以台盼蓝染色排除法和四唑盐(MTT)法测定细胞活力,以荧光素酶分析试剂盒测定荧光素酶表达,按照公式计算细胞存活率和本发明西洋参提取物对HIV感染T细胞的抑制率,其中,未治疗组指仅感染病毒的细胞;溶剂组为未感染病毒、未治疗的细胞,在加入本发明西洋参提取物的相应时间点仅加入溶解本发明西洋参提取物的二甲基亚砜溶剂;药物组为感染病毒、经本发明西洋参提取物治疗的细胞;
细胞存活率%=药物组光吸收值/溶剂组光吸收值×100%
得出实施例1-5中本发明西洋参提取物的终浓度在0.005mg/ml和0.5mg/ml之间时,第3天细胞存活率分别为75-98%、77-99%、76-99%、79-99%、78-100%,第3天对HIV感染T细胞的抑制率分别为29-51%、30-52%、28-53%、28-51%、30-50%。
试验例2:
本发明采用组织破碎提取法提取得到的西洋参提取物与采用超声波提取法提取得到的提取物相比,不但总浸膏得率高,而且更为重要的是本发明不用粉碎直接以饮片提取,无粉尘污染,又避免了粉碎后无法百分之百回收药材、及称量时容器残留药材粉末而导致的浪费,而且耗时不到9分钟;而采用超声波提取法提取的提取物在提取时,不仅需要粉碎过100目筛,而且耗时长达90min;本发明不仅步骤简单、对操作者无污染、药材能无损失提取,而且耗时不到超声波方法提取时的十分之一,大大节约了能源,提高了效率,减少药材浪费。
1)、总浸膏得率等指标的比较:
按下式计算总浸膏得率:总浸膏得率=100×(所得浸膏重量/西洋参取样量)。以高效液相测定人参皂苷Rb1、Rc、Rd、Rg1的含量。本发明采用组织破碎提取法与采用超声波提取法所得总浸膏得率、各人参皂苷含量及其他指标的比较,结果见表1。
表1西洋参二种提取方法各种指标的比较
由结果可知,与超声波提取法相比,组织破碎提取法所得提取物的得率略高,人参皂苷Rb1、Rc、Rd、Rg1的含量均高于超声提取法,且具有省时、高效、无粉尘污染等优势。
2)、纯化方法的选择
本发明提取过程中,经过大孔吸附树脂纯化色谱图杂峰较少,基线平稳且峰形较好,故采用大孔吸附树脂纯化法。
本发明采用了DiaionHP-20大孔吸附树脂洗脱纯化,而发表文献【西洋参总皂苷类成分的提取新工艺-组织破碎提取法[A].中国药学会中药和天然药专业委员会.中药与天然药高峰论坛暨第十二届全国中药和天然药物学术研讨会论文集[C],2012:2月409-410】并没有采用此树脂纯化;经过此步纯化,人参皂苷在本发明提取物中含有,而在水洗脱部位没有,相对富集了有效成分,因此本发明在公开有效成分的富集上要优于文献方法。
试验例3:
抗HIV-1实验
1.中药对照药物的制备
参照中国专利“CN10278998A”“一种用于治疗艾滋病无症状HIV感染期的中药片”制备中药对照药物,即西洋参65g粉碎备用,白术150g、防风115g、连翘115g碎断,提取芳香水256ml,再进行油水分离,得挥发油,提取挥发油后的药渣、与黄芪150g、女贞子150g、山茱萸115g、南沙参125g、紫草115g、白花蛇舌草150g和甘草60g七味药加水煎煮三次提取,第1次加水8倍量、提取2小时,第2、3次各加6倍量水、各提取1小时,合并三次提取液及提油后水液,静置48小时、滤过、减压浓缩至相对密度为1.20的稠膏,热风循环干燥,粉碎,加入上述备用的西洋参细粉及挥发油,混匀,即得。
2.抗HIV感染的分子药理学实验模型及试验
实验模型:HIV病毒主要攻击人体的辅助T淋巴细胞系统;一旦侵入机体细胞,病毒将会和细胞整合在一起终生难以消除。HIV分为HIV-1型和HIV-2型两种。HIV-1广泛分布于世界各地,是造成全世界HIV/AIDS流行的主要原因,HIV-2主要分布于非洲西部。由于HIV-1的感染力较强,是当今世界HIV流行的主要病毒株,因此使用HIV-1亚型作为研究对象。HIV-1的基因排列为LTR-gag-pol-vif-vpr-tat-rev-vpu-env-nef-LTR,两端是长末端重复序列(longterminal repeats,LTR),LTR兼有启动子和增强子的功能,宿主的细胞因子、病毒编码的调节蛋白以及超感染的其它病毒编码的调节蛋白,可以通过和LTR区结合来激活HIV-1的表达。因而,HIV-1LTR在病毒的复制和转录调节方面起着重要的作用。
1G5T细胞,为具有荧光素酶报告基因的HIV-1LTR载体稳定转染T细胞而得到的真核细胞。因为HIV-1LTR具有启动子的功能,所以可通过它来启动荧光素酶的表达,再通过荧光素酶的活性可以反映出启动子的强度;故而,用不同药物刺激1G5T细胞后,检测荧光值,通过荧光值的大小反映出药物对HIV-1启动子转录活性的影响,从而可筛选出具有针对HIV-1启动子为靶点、抗HIV的药物。
HIV-1病毒在感染细胞时,除了利用CD4与细胞结合,还需利用其他受体才能进入细胞。1996年证实HIV-1病毒可利化学趋化因子受体作为协同受体进入细胞。CXCR4和CCR5为与HIV-1进入细胞关系最密切的化学趋化因子受体。其中CXCR4在B和T细胞系等中高表达,被亲T细胞的病毒株利用;亲T细胞的CXCR4病毒株简写为亲X4的HIV-1(X4-tropic HIV-1)。NL4-3是典型的实验室X4-tropic HIV-1病毒株,并表达所有已知的HIV-1蛋白,常被用于感染T细胞的实验系统。
基于上述1G5T细胞和NL4-3病毒的知识,本发明使用马里奥·堪奇(Mario Canki)已经建立的分子药理学实验模型【Inhibition of highly productive HIV-1infection in T cells,primary humanmacrophages,microglia,and astrocytes by Sargassum fusiforme[J].AIDS Research and Therapy,2006,3:15】测定西洋参提取物和中药对照药物的抗HIV活性。
抗HIV试验:分别将西洋参提取物和中药对照药物作为药物按以下步骤进行测试:按常规方法将1G5T细胞在含有10%胎牛血清(Hyclone)及青霉素和链霉素的RPMI-1640培养液中培养,培养条件为37°C,饱和湿度,5%CO2,在培养介质中生长24小时,加入药物,使药物的终浓度达到0.005-0.5mg/ml,作用24小时后,以台盼蓝染色排除法测定1G5T细胞的细胞活力,如果加入药物作用24小时后,1G5T细胞的细胞活力小于60%,那么加入的药物标记为有毒性,而不适于进一步研究,取上述药物作用24小时后的1G5T细胞以HBSS平衡盐溶液(Gibco-Brl公司)洗3次,每次HBSS平衡盐溶液的用量为RPMI-1640培养液体积量的1/2,将洗涤后的1G5T细胞以0.01MOI的亲X4的HIV-1NL4-3(HIV-1X4-tropic NL4-3)病毒株感染1.5小时后,被感染的细胞用HBSS平衡盐溶液(Gibco-Brl公司)洗3次,每次HBSS平衡盐溶液的用量为RPMI-1640培养液体积量的1/2,加入含有10%胎牛血清(Hyclone)及青霉素和链霉素的RPMI-1640培养液后,再加入药物,使药物的终浓度达到0.005-0.5mg/ml,在37°C,饱和湿度为5%CO2的条件下,继续培养3天后,以台盼蓝染色排除法和四唑盐(MTT)法测定细胞活力,以荧光素酶分析试剂盒测定荧光素酶表达,按照公式计算细胞存活率和药物对HIV感染T细胞的抑制率,其中,未治疗组指仅感染病毒的细胞;溶剂组为未感染病毒、未治疗的细胞,在加入药物的相应时间点仅加入溶解药物的二甲基亚砜溶剂;药物组为感染病毒、经药物治疗的细胞;
细胞存活率%=药物组光吸收值/溶剂组光吸收值×100%
公式中药物组、未治疗组及溶剂组为各个组别的平均荧光值。其中未治疗组指仅感染病毒的细胞,因病毒整合入宿主细胞基因组,大量复制、增殖时,它的HIV-1LTR启动细胞的荧光素酶基因使之也大量表达,在使用荧光素酶分析试剂盒检测系统中,表现为荧光值最大;溶剂组为未感染病毒、未治疗的细胞,在加入药物的相应时间点仅加入溶解药物的二甲基亚砜溶剂,虽然细胞中有HIV-1LTR载体的稳定转染,但没有病毒感染,所以其荧光素酶基因没有被启动,荧光素酶表达很少,而仅具有很小的背景荧光值;药物组为感染病毒、经药物治疗的细胞,因药物治疗,阻止了病毒不断地感染宿主细胞再增殖,而仅是已感染病毒的细胞有荧光素酶表达,其荧光值介于未治疗组和溶剂组之间。二者的比值:药物组扣除溶剂组背景后的荧光值/未治疗组扣除溶剂组背景后的荧光值,为使用药物治疗后仍然感染病毒的细胞的比例,从总体中减去这个比例(1-已感染细胞的比值),再乘以100,即为未感染病毒的细胞占总体的百分比,换而言之即为抑制病毒感染的细胞的百分比。
3.实验结果
经以上测试,结果表明,将中药对照药物和本发明西洋参提取物分别加入1G5T细胞24h后的细胞活力均大于60%,说明他们均不抑制T细胞增殖,病毒感染后按上述的步骤再加入以上两种药物,感染3天后细胞活力和对HIV感染抑制的结果见表2。
表2西洋参提取物与中药对照药物的抗HIV活性研究结果
由表2可见,本发明西洋参提取物可抑制HIV感染T细胞,具有较好的抗HIV感染T细胞活性,优于中药对照药物。
经对本发明西洋参提取物多次反复进行试验,结果证明,本发明西洋参提取物对T细胞无毒、不影响T细胞生长,又能抗HIV-1感染,而且效果优于中国专利“CN10278998A”“一种用于治疗艾滋病无症状HIV感染期的中药片”,达到了筛选有效中药及找到活性物质的目的,为进一步优化治疗艾滋病的疗效提供了依据。
Claims (10)
1.一种西洋参提取物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)在西洋参中加入重量体积比为6-50倍的丙酮,用组织破碎提取法提取3次,每次提取均为粉碎30秒,间歇2秒,再粉碎60秒,间歇2秒,再粉碎30秒,每次的提取液过滤,得滤液,所述重量体积比是指固体物用g计,液体物用ml计;
(2)合并3次的滤液,减压浓缩至干,得残渣,用与西洋参重量体积比为1:1的水溶解残渣,经装有DiaionHP-20大孔吸附树脂的柱色谱,先用6倍量柱体积的去离子水洗脱,后用8倍量柱体积的质量浓度为95%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液;
(3)减压回收溶剂乙醇至干,即得西洋参提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,在步骤(1)中,所述的丙酮为体积浓度为70%的丙酮。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,在步骤(1)中,在西洋参中优选加入重量体积比为6、15、30、40或50倍的丙酮。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,在步骤(2)中,所述大孔吸附树脂的径高比为1:6。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的制备方法制备的西洋参提取物。
6.权利要求5所述的西洋参提取物在制备防治艾滋病药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途,其特征在于,所述西洋参提取物在不损伤免疫功能的前提下,有效阻断HIV感染,无副作用,从而实现对艾滋病的防治。
8.一种用于防治艾滋病的药物组合物,其特征在于,该药物组合物包含权利要求5所述的西洋参提取物以及药学上可接受的载体。
9.根据权利要求8所述的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物为口服制剂或注射剂。
10.根据权利要求9所述的药物组合物,其特征在于,所述口服制剂的剂型为胶囊、片剂、滴丸剂、微丸剂、口服液或颗粒剂。
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