CN114425058B - 一种治疗鼻炎的中药组合物及其制备方法、药物和制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明属于中医中药技术领域，尤其涉及一种治疗鼻炎的中药组合物及其制备方法、药物和制剂，按重量份数计，本发明提供的中药组合物包括如下组分：白牛胆18～36份、野菊花15～30份、桂枝10～20份、鹅不食草9～18份、细辛3～6份。本发明的中药组合物组方合理，相互协同增效。本发明的中药组合物可以抑制炎症因子IL‑1β、IL‑6、血管内皮舒张因子一氧化氮NO的表达。该中药组合物制得的药物和制剂起效快、体积小、使用方便、无任何副作用、有效缓解鼻炎病人的病症，适合治疗多种鼻炎。本发明中药组合物的制备工艺简单，适合大规模工业化生产。

Description

一种治疗鼻炎的中药组合物及其制备方法、药物和制剂
技术领域
本发明属于中医中药技术领域，尤其涉及一种治疗鼻炎的中药组合物及其制备方法、药物和制剂。
背景技术
炎症是机体对于损伤因子的一种防御反应，炎症反应是临床常见的一个病理过程，可以生于机体各部位的组织和器官，例如鼻炎、扁桃体炎、肺炎、肝炎、肾炎等。其中，鼻炎又称鼻腔炎性疾病，是病毒、细菌、变应原、各种理化因子以及某些全身性疾病引起的鼻腔黏膜的炎症，常见的分类有急性鼻炎、慢性鼻炎、过敏性鼻炎等。主要临床表现为鼻塞、流涕、味觉下降、鼻内血痂等症状，严重者造成听力减退，记忆力衰退等。
炎症因子属于细胞因子，在体内的炎症反应中起着至关重要的作用。常见的炎症细胞因子包括肿瘤坏死因子(TNF-а)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)等。TNF-а是炎症细胞因子的关键组成部分，它可诱导IL-1、IL-6细胞因子的释放，且能刺激细胞释放炎性介质如NO(一氧化氮)、氧自由基等，从而促进炎症反应的进程，因此研究炎症因子的抑制机理对于治疗炎症有着重要的意义。
目前，治疗鼻炎主要分西药和中药。常用西药一般为西药包括糖皮质激素类地塞米松和布地奈德、抗组胺类药物氯雷他定等，但具有一定的副作用，如嗜睡、口干等；常用的中药有通窍鼻炎颗粒、千柏鼻炎片等，但是中药抗炎机理阐述不清，作用效果欠佳。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种治疗鼻炎的中药组合物及其制备方法、药物和制剂。该中药组合物能抑制炎症因子IL-1β、IL-6、血管内皮舒张因子一氧化氮NO的表达，且通过制备方法制得的剂型能够缓解鼻炎患者的症状，治疗效率高。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了中药组合物，以重量份数计，包括如下组分：白牛胆18～36份、野菊花15～30份、桂枝10～20份、鹅不食草9～18份、细辛3～6份。
在本发明中，白牛胆(RadixEtRhizomaInulae Cappae)，又名山白芷，为菊科植物羊耳菊的干燥根及根茎，属祛风消肿药，具有祛风行气，消肿止痛、解毒的功效。
野菊花(Dendranthema indicum)，为菊科植物野菊的干燥头状花序，性微寒，具有疏散风热、消肿解毒功效。能治疗疔疮痈肿、咽喉肿痛、风火赤眼、头痛眩晕等病症。
桂枝(Cinnamomum cassiaPresl)，为樟科植物肉桂的干燥嫩枝，中医认为其具有发汗解表、散寒止痛、通阳化气功效。
鹅不食草(Centipeda minima)，为菊科天胡荽属植物鹅不食草的干燥全草。其味辛性温，归肺经，具有发散风寒，通鼻窍，止咳，解毒，止痒等功效。
细辛(Asarum sieboldiiMiq)，为马兜铃科、细辛属多年生草本，具有解表散寒，祛风止痛，通窍，温肺化饮功效。
在本发明一些具体实施方案中，以重量份数计，该中药组合物包括如下组分：白牛胆18份、野菊花15份、桂枝10份、鹅不食草9份、细辛3份。
本发明还提供了该中药组合物的制备方法，将配方量的白牛胆、野菊花、桂枝、鹅不食草、细辛分别粉碎，制得细粉，与乙醇水溶液混合，提取，收集提取液。
本发明提供的该中药组合物的制备方法，还包括收集提取液后进行浓缩和/或冷冻干燥的步骤。
在本发明一些具体实施方案中，粉碎的目数为80～100目。
在本发明一些具体实施方案中，乙醇水溶液的体积分数为90％，以g/ml计，细粉与乙醇水溶液的重量体积比为1：15。
在本发明一些具体实施方案中，浓缩于40～45℃的条件下，浓缩比为100:1。
在本发明一些具体实施方案中，冷冻干燥的真空度为0.08kPa，冷冻时间为24h。
本发明还提供了该中药组合物和制备方法制得的该中药组合物以及药学上可接受的辅料制得的药物和制剂。
作为优选，药物和制剂包括滴鼻剂、喷雾剂中的一种或多种。
本发明提供了中药组合物及其制备方法、药物和制剂，该中药组合物以重量份数计，包括如下组分：白牛胆18～36份、野菊花15～30份、桂枝10～20份、鹅不食草9～18份、细辛3～6份。本发明的技术效果为：
本发明的中药组合物采用纯天然草本中药独特配方和工艺精制而成，组方合理，相互协同增效，并采用常见药材作为原料，成本低廉，药源易寻，减轻患者的经济负担。该中药组合物可抑制炎症因子IL-1β、IL-6、血管内皮舒张因子一氧化氮NO的表达。该中药组合物制得的药物和制剂起效快、体积小、使用方便、无任何副作用、有效缓解鼻炎病人的病症，适合治疗多种鼻炎。本发明中药组合物的制备工艺简单，适合大规模工业化生产。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示不同配比中药组合物抑制炎症因子IL-1β的表达；
图2示不同配比中药组合物抑制炎症因子IL-6的表达；
图3示中药组合物抑制炎症因子IL-1β的表达；
图4示中药组合物抑制血管内皮舒张因子一氧化氮(NO)的含量。
具体实施方式
本发明公开了一种治疗鼻炎的中药组合物及其制备方法、药物和制剂，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
实施例1不同配比中药组合物的制备
本实施例对比了主要组分白牛胆、野菊花、桂枝、鹅不食草的不同克数配方的效果，配方组成包括以下组分：
表1不同克数配比的中药组合物
分组 白牛胆 野菊花 桂枝 鹅不食草 细辛
配比1 18 15 10 9 3
配比2 36 15 10 9 3
配比3 18 15 10 18 3
配比4 18 15 10 9 6
缺药 18 15 0 0 3
上述不同克数配比的在中药组合物的制备方法，具体制备步骤如下：
(1)将白牛胆、野菊花、桂枝、鹅不食草、细辛分别粉碎成80目粉末，按上述配比量称量混合后，制得细粉，与体积分数为90％，细粉体积15倍的乙醇水溶液混合，得到药物混合液。
(2)将药物混合液以标准索式提取法提取3h，得到提取液。
(3)将提取液于40～45℃的条件下，浓缩比为100:1，浓缩20min至体积为2mL，得到浓缩液，过滤。
(4)将上述过滤后的浓缩液放入冻干机减压冻干，冷冻干燥时间为24h，冷冻干燥真空度为0.08kPa，制得冻干粉。
对比例1
鹅不食草10g，以实施例1制备方法制备得到的冻干粉。
对比例2
西药地塞米松。
实施例2不同配比中药组合物抑制IL-1β和IL-6基因表达
通过上述实施例1不同克数配比的中药组合物制备方法制得的冻干粉，用DMSO溶剂溶解为一定浓度的母液，分别检测抑制炎症因子IL-1β和IL-6基因表达，具体实验过程如下：
(1)合成IL-1β和IL-6基因特异性引物对
根据NCBI公布的IL-1β(基因ID号：3553)和IL-6(基因ID号：3569)设计特异性引物对IL-1β和IL-6。
所述的引物对IL-1β和IL-6的序列为：
IL-1β:5’ATGATGGCTTATTACAGTGGCAA3’(如SEQ ID No.1所示)
IL-1β:3’GTCGGAGATTCGTAGCTGGA5’(如SEQ ID No.2所示)
IL-6:5’ACTCACCTCTTCAGAACGAATTG3’(如SEQ ID No.3所示)
IL-6:3’CCATCTTTGGAAGGTTCAGGTTG5’(如SEQ ID No.4所示)
(2)将THP1细胞以40万/孔铺于12孔板的5个孔中，每孔加入终浓度为100ng/mL的PMA，孵育细胞24h，将THP1细胞诱导为巨噬细胞。
药物处理组分别加入配比1、配比2、配比3、配比4(终浓度为100μg/mL)，阴性对照组加同等溶剂体积的DMSO，孵育细胞24h。
使用RNA裂解液(Sigma)裂解并提取各组RNA，之后使用反转录试剂盒(Thermo)将上述RNA分别反转录为cDNA。
以待测cDNA为模板，使用上述引物对IL-1β和IL-6，qPCR分别扩增IL-1β和IL-6基因。
qPCR扩增反应程序：95℃预变性3min；95℃变性3s；60℃退火30s；40个循环。
(3)数据处理
以阴性对照组的基因表达量为1，药物处理组基因表达量大于1为基因表达上调，小于1为下调，qPCR扩增结果如表2、图1和图2所示：
表2中药组合物抑制IL-1β和IL-6基因表达的qPCR结果(N＝2)
Figure BDA0003558076490000051
Figure BDA0003558076490000061
结果显示中药组合物的四组配比结果，均能抑制PMA诱导的巨噬细胞炎症因子IL-1β和IL-6的表达，且“配比1”在两个基因上均具有最强的抑制作用，以下实施例均以“配比1”作为优选的中药组合物抗炎方。
实施例3中药组合物对炎症因子IL-1β的抑制作用
本实施例对比了实施例1中配比1(以下简称配比1)、实施例1中的配比2(以下简称配比2)、缺药、对比例1和对比例2，对于LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型中炎症因子IL-1β的抑制作用，同时设置阴性对照组(加DMSO溶剂)、阳性对照组(只加LPS)，具体试验过程如下：
(1)合成IL-1β’基因特异性引物对
根据NCBI公布的IL-1β设计特异性引物对IL-1β’。
所述的引物对IL-1β’的序列为：
IL-1β’:5’GCAACTGTTCCTGAACTCAACT3’(如SEQ ID No.5所示)
IL-1β’:3’ATCTTTTGGGGTCCGTCAACT5’(如SEQ ID No.6所示)
(2)将RAW264.7细胞以40万/孔铺于12孔板的7个孔中：药物处理组分别加入配比1、配比2、缺药、对比例1(终浓度为100μg/mL)，以及对比例2(终浓度为10μM，对细胞抗炎作用的常用浓度)，阴性对照组加同等溶剂体积的DMSO，预处理细胞1h(阳性对照组不做处理)。
向上述除阴性对照组外的6组中分别加入LPS(终浓度为1μg/mL)刺激炎症发生，孵育细胞24h。
使用RNA裂解液(Sigma)裂解并提取各组RNA，之后使用反转录试剂盒(Thermo)将上述RNA分别反转录为cDNA。
以待测cDNA为模板，使用上述引物对IL-1β’，qPCR扩增IL-1β’基因。
qPCR扩增反应程序：95℃预变性3min；95℃变性3s；60℃退火30s；40个循环。
(3)数据处理
以阴性对照组的基因表达量为1，药物处理组基因表达量大于1为基因表达上调，小于1为下调，qPCR扩增结果如表3和图3所示：
表3药物对炎症因子IL-1β的qPCR结果(N＝2)
分组 IL-1β基因表达倍数均值 SD
阴性对照组 1.08 0.59
阳性对照组-LPS 2507.65 13.70
配比1 50.62 0.13
配比2 59.91 0.67
缺药 160.49 10.56
对比例1-鹅不食草 283.60 12.62
对比例2-地塞米松 190.12 5.39
结果显示，优选的中药组合物抗炎方“配比1”可以下调细胞炎症因子IL-1β的表达，具有极强的抗炎作用，其作用效果优于其他配比、缺药、鹅不食草和地塞米松处理组。
实施例4中药组合物对血管内皮舒张因子一氧化氮(NO)的抑制作用
本实施例对比了阴性对照组(加DMSO溶剂)、阳性对照组(只加LPS)、配比1、对比例2，对于LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型中血管内皮舒张因子一氧化氮(NO)的抑制作用，具体试验过程如下：
(1)将RAW264.7细胞以40万/孔铺于12孔板的4个孔中，分别加入配比1(终浓度为100μg/mL)、对比例2(终浓度为10μM)，阴性对照组加同等溶剂体积的DMSO，预处理细胞1h；
(2)向上述除阴性对照组外的3组中分别加入LPS(终浓度为1μg/mL)刺激炎症发生，孵育细胞24h。
(3)吸取培养基上清(1mL)，加入一氧化氮(NO)试剂盒(南京建成)内显色剂进行反应，在550nm酶标仪下读数，NO含量如表4和图4所示：
表4中药组合物抑制NO结果(N＝3)
Figure BDA0003558076490000071
Figure BDA0003558076490000081
结果显示优选的中药组合物抗炎方“配比1”可以明显抑制炎症细胞内NO含量，且作用效果明显优于常用西药地塞米松。
实施例5滴鼻剂的制备
将配比1制备得到的冻干粉制备成制剂，具体制备步骤如下：
(1)将10g冻干粉与0.1mL吐温20、0.1mL甘油、0.1mL甘氨酸混合，余量为去离子水补至100mL。
(2)每5mL分装，制得滴鼻剂。
实施例6喷雾剂的制备
将配比1制备得到的冻干粉制备成制剂，具体制备步骤如下：
(1)将10g冻干粉与0.1mL吐温20、0.1mL甘油、0.1mL甘氨酸混合，余量为去离子水补至100mL。
(2)每10mL分装，制得喷雾剂。
实施例7滴鼻剂的应用
将实施5制备的滴鼻剂，施用于13名鼻炎患者，使用方法为：仰头用手轻轻按压滴鼻小瓶，使3-5滴药液均匀分布于鼻腔内，每日2-3次。滴鼻剂的使用效果如表5所示：
表5滴鼻剂的应用
Figure BDA0003558076490000082
Figure BDA0003558076490000091
结果显示，滴鼻剂对鼻塞、打喷嚏、流鼻涕均具有良好的改善效果，治疗有效率为84.6％。(主要症状和评价参照2004年中华医学会耳鼻咽喉科学会《变应性鼻炎的诊治原则和推荐方案》)
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 博奥生物集团有限公司
清华大学
<120> 一种治疗鼻炎的中药组合物及其制备方法、药物和制剂
<130> MP21031465
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atgatggctt attacagtgg caa 23
<210> 2
<211> 20
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<400> 5
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<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
atcttttggg gtccgtcaac t 21

Claims (8)

1.一种治疗鼻炎的中药组合物，其特征在于，以重量份数计，由如下组分制成：
白牛胆18~36份、野菊花15~30份、桂枝10~20份、鹅不食草9~18份、细辛3~6份。
2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，以重量份数计，由如下组分制成：白牛胆18份、野菊花15份、桂枝10份、鹅不食草9份、细辛3份。
3.根据权利要求1或2所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，将配方量的白牛胆、野菊花、桂枝、鹅不食草、细辛分别粉碎，制得细粉，与乙醇水溶液混合，提取，收集提取液；
所述收集提取液后还包括浓缩和/或冷冻干燥的步骤。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述粉碎的目数为80~100目。
5.根据权利要求3至4任一项所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇水溶液的体积分数为90%，以g/ml计，所述细粉与所述乙醇水溶液的重量体积比为1：15；
所述浓缩于40~45℃的条件下，浓缩比为100:1；
所述冷冻干燥的真空度为0.08 kPa，冷冻时间为24 h。
6.根据权利要求1~2任一项所述的中药组合物、权利要求3~5任一项所述制备方法制得的中药组合物在制备预防和/或治疗鼻炎药物中的应用。
7.一种治疗鼻炎的药物，其特征在于，由如权利要求1~2任一项所述的中药组合物以及药学上可接受的辅料制备得到。
8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，所述药物剂型选自滴鼻剂、喷雾剂。
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