CN1742918A - 一种治疗急慢性盆腔炎的中药组合物及制备方法 - Google Patents

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CN1742918A CN 200410054167 CN200410054167A CN1742918A CN 1742918 A CN1742918 A CN 1742918A CN 200410054167 CN200410054167 CN 200410054167 CN 200410054167 A CN200410054167 A CN 200410054167A CN 1742918 A CN1742918 A CN 1742918A
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Abstract

本发明涉及一种治疗急慢性盆腔炎的中药组合物及制备方法。该中药组合物是以龙胆草、黄芩(炒)、栀子、大血藤、白花蛇舌草、路路通、生地黄、柴胡、川牛膝、香附(炒)、地龙和当归为原料提取获得的活性成分与药用辅料制成的口服制剂。本发明中药组合物根据中医药理论提供了具有清热解毒、利湿消肿、疏肝理气、活血化淤功效，特别适合于治疗急慢性盆腔炎的新型中药制剂。

Description

一种治疗急慢性盆腔炎的中药组合物及制备方法
技术领域
本发明涉及中药制药领域，具体涉及一种治疗急慢性盆腔炎的中药组合物及制备方法。
背景技术
盆腔炎为妇科常见病，发病率极高。急性盆腔炎若治疗不当或延误往往导致严重后果，严重者可危及生命，是不孕症、顽固性盆腔疼痛的最主要致病因素，故为妇科临床诊疗实践中最重要的病种之一。
急性盆腔炎和慢性盆腔炎急性期的现代医学治疗，主要手段是应用抗生素，但单纯应用抗生素的西医治疗对腹腔镜检查证实形成盆腔广泛粘连、严重双侧附件病变、明显的炎性包块、脓肿等的病例大多疗效不佳，多转为慢性或反复性盆腔炎，最终导致不孕症和顽固性盆腔疼痛等严重并发症。急性感染时盆腔组织十分脆弱，容易撕裂或穿孔，并且急性感染时手术可能加重感染，因此急性盆腔炎并不适合手术治疗，即便是保守性手术在年轻患者亦可能导致不孕症。
中医药治疗急性盆腔炎和慢性盆腔炎急性期具有见效快、疼痛缓解显著、促进炎性渗出、脓肿、包块的吸收、预防和化解粘连、缩短病程、并发症少且轻等独特疗效，并且毒副作用小而少，与西药联合应用能够明显缩短病程、减轻和减少后遗症。但是，目前中医妇科治疗此类疾病的中成药相对匮乏，临床用药疗效尚不令人十分满意，不能完全满足此类疾病的临床需要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于根据中医药理论，提供一种具有清热利湿，疏肝活血功能，用于急性盆腔炎和慢性盆腔炎治疗效果确切的中药组合物。
本发明公开的用于治疗急、慢性盆腔炎的中药组合物是以龙胆草、黄芩(炒)、栀子、大血藤、白花蛇舌草、路路通、生地黄、柴胡、川牛膝、香附(炒)、地龙和当归为原料提取获得的活性成份与药用辅料制成的口服制剂。
其中各生药重量百分比优选组成为：龙胆草5-10％、黄芩5-10％、栀子7-15％、大血藤10-18％、白花蛇舌草7-15％、路路通7-15％、生地黄5-10％、柴胡2-7％、川牛膝5-10％、香附5-10％、地龙10-18％和当归5-10％。
本发明所述口服制剂为药学上可接受的各种制剂形式，包括：颗粒剂、片剂、胶囊剂和口服液等。
本方面所要解决的另一技术问题在于提供上述中药组合物的制备方法。
本发明公开的治疗急、慢性盆腔炎的中药组合物的制备方法包括下列步骤：
1、取龙胆、黄芩、香附、当归加5-7倍量70％乙醇回流提取，合并提取液，浓缩回收乙醇至相对密度为1.10～1.15(60℃～70℃)的浸膏，备用；
2、取栀子、大血藤、白花蛇舌草、路路通、生地黄、柴胡、川牛膝、地龙药材加6-8倍量水浸泡后，煎煮提取，滤过，合并滤液并浓缩至相对密度为1.10～1.14(60℃～70℃)的浸膏，加乙醇使含醇量达60-80％，静置，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃～70℃)的浸膏；
3、合并步骤1和2制得的浸膏，与药用辅料按常规方法制成口服制剂。
古代医家普遍认为湿浊之邪损伤任带二脉，二脉失于约束，“津液涌而溢，发为带下”是盆腔炎发病的重要因素。中医理论认为带下病系湿邪为患，有“诸带不离乎湿”的说法，《傅青主女科》亦云：“夫带下俱是湿证”。《素问·太阴阳明论》曰：“伤于湿者，下先受之”，盆腔位居下焦，最易遭受湿邪侵袭而为病；至于感觉寒、热之邪，亦多挟湿为患；或脾肾阳虚，或肝郁脾虚，水湿内停，流于下焦而为病。《伤寒六书·宣明论》谓：“下部任脉，湿甚热，津液涌而溢，已为带下”，又如《妇科易知录》所言：“任脉积湿，湿盛生热，因不能生经化血，故腐败而生黄带，如产后经行之气胞脉空虚或素体虚弱，气血不足，病邪乘虚入侵，客于下焦，与气血相搏结，营卫不和以致发病”。
盆腔炎病机责于肝经湿热下注，兼有血瘀阻滞，湿热瘀血互结于肝经为其病机关键，故治以清泄肝经湿热兼以活血化瘀，俾肝经湿热得去，瘀血得除，则诸症自解。本发明处方本着扶正祛邪，标本兼治的治疗原则和指导思想，依清泄肝胆湿热兼活血化瘀之法而立。
本发明组方中以龙胆草、黄芩为君。龙胆草为龙胆科植物条叶龙胆Gentiana manshurica Kitag.、龙胆Gentiana scabra Bge.、三花龙胆Gentiana triflora pall.或坚龙胆Gentiana rigescens Franch.的干燥根及根茎，苦寒，入肝胆经，清热燥湿，尤善清下焦湿热。《主治秘诀》云其“治下部风湿及湿热”。《本草纲目》谓“相火寄在肝胆，有泻无补，故龙胆之益肝胆之气，正以其能泻肝胆之邪热也。《药品化义》之论尤精：“胆草专泻肝胆之火……，凡属肝经热邪为患，用之神妙。其气味厚重而沉下，善清下焦湿热”。
黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，味苦性寒，泻火燥湿。黄芩能以其苦寒直折以泄火，又可燥化肝胆经之湿浊。《本草经疏》云：“黄芩其性清肃，所以除邪；味苦所以燥湿；阴寒所以胜热，故主诸热，邪热与湿热也……折其本，则诸病自疗矣。”
《素问·至真要大论》曰：“湿淫于内，治以苦热，佐以酸淡，以苦燥之，以淡泄之”。栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoidesEllis的干燥成熟果实，味苦性寒，药性清降，降火祛热，主清三焦火邪，既入气，又入血，通泄之焦，使湿热之邪从小便去，于湿热兼有血瘀之证，用之尤妙。《本草通玄》：“仲景多用栀子、茵陈，取其利小便而蠲湿热也”。白花蛇舌草为茜草科植物白花蛇舌草Oldenlandiadiffusa(Willd.)Roxb.的干燥全草，苦寒清热解毒，利湿消肿，《泉州本草》言其“清热散瘀，消痛解毒”。大红藤为木通科植物大血藤Sargentodoxa cuneata(Oliv.)Rehd.et Wils.的干燥藤茎，味苦性平，入肝经，功可清热解毒，活血通络。一以助君臣清热泻火之功，兼可活血化瘀。路路通为金缕梅科植物枫香树Liquidambar formosana Hance的干燥成熟果穗，功能通络利水，以补本方诸药利湿功用之不及。以上四药，清肝火，利湿热，是为湿热实邪而设，共助君药龙胆、黄芩清肝泻火除湿之力，合用以为臣。
然肝主藏血，体阴而用阳，肝火内盛，则易伤阴血；苦寒渗利之品，亦可化燥伤阴，故又佐以生地黄养阴，补肝之体，使邪去而正不伤；肝主疏泄，升发条达，肝经湿热内郁，肝气不舒，苦寒降泄之品，也会抑郁肝性，故又以柴胡、香附疏畅肝胆，助肝之用。又因本证兼有瘀血，故佐以川牛膝、地龙、当归三味，通经络，化瘀血。川牛膝《中药志》谓其：“破血下降”，活血之外，本品尚能利湿，焉湿热之邪从下而去。以上六药共用为佐。
现代医学研究证明，本发明处方中龙胆中的主要有效成分龙胆苦苷在体内经肠道菌群作用可转化生成龙胆碱、龙胆醛而产生抗炎药效作用，黄芩中的主要有效成分黄芩苷具有较强的抗菌、消炎作用。栀子主要化学成分为环烯醚萜苷类和有机酸类等，环烯醚萜苷类有栀子苷、京尼平苷、京尼平苷酸等；有机酸类为苯丙酸衍生物与奎宁酸形成的酯如绿原酸等。栀子苷能抑制小鼠的醋酸扭体反应，并对二甲苯以及巴豆油致小鼠耳肿胀均有明显作用。白花蛇舌草具有抗菌、抗炎、抗变态反应作用。生地黄的化学成分主要为环烯醚萜苷类、β-谷甾醇、甘露醇等，其水煎剂和醇浸剂对大鼠实验性甲醛性关节炎有显著的消肿作用，试管实验表明地黄水浸剂对须疮癣菌、石膏样小芽胞癣菌和羊毛状小芽胞癣菌等多种真菌的生长有抑制作用。香附主含黄酮苷、挥发油等。香附中主要有效成分，对中枢和肠道平滑肌具有抑制作用，同时腹腔注射还有解热镇痛作用。川牛膝主含甾醇类成分，牛膝总皂甙对不同生理状态下的大鼠离体子宫均有兴奋作用；实验还证明，川牛膝有抗炎、镇痛等药理作用。当归为妇科要药，既能补血又能活血，其主要化学成分为挥发油和有机酸两部分。现代研究证明，当归具有促进吞噬细胞功能、抗变态反应、增强机体免疫功能和造血功能的作用，当归中的阿魏酸和当归多糖能明显促进单核吞噬细胞对刚果红的廓清率和增强腹腔巨噬细胞吞噬红细胞的能力等。
综上所述，本发明中药组合物全方相合，热得清，湿得利，瘀亦消，则诸证自除；且既补肝之体，又助肝之用，祛邪而不伤正，具有清热解毒、利湿消肿、疏肝理气、活血化瘀功效。
本发明根据组方中各生药的特性，合理设计了浸膏的提取方法，最大限度地提取了各组分的有效成份。由于组方中龙胆中主要有效成分龙胆苦苷的性质不稳定，受热时间长易分解破坏；黄芩中的黄芩苷溶于热水、乙醇，不溶于温水和冷水，若与其它药混煎后，滤过时易进入滤饼被作为杂质除去，损失较大，以及香附、当归中的主要有效成分多为醇溶性成分，因此，龙胆、黄芩、香附、当归采用70％乙醇回流提取，提取液经回收乙醇、沉淀、滤过后，滤液备用。而栀子、大血藤、生地黄、川牛膝、白花蛇舌草、地龙、柴胡和路路通中的有效成分均溶于水，因而采用水煎煮；但由于水提取的得膏率较高，制成制剂后的服用剂量大，且溶化性也不理想，因此，对水提取部分进行醇沉，以除去其中的淀粉、多糖等非药用成分。经采用正交实验分别对醇提、水提及醇沉工艺进行优化实验，并对成型工艺进行筛选研究，最后得出了上述制备工艺。同时采用薄层色谱法对制剂中的栀子苷、龙胆苦苷、地黄、川牛膝、当归和香附进行定性分析，采用高效液相法对黄芩苷含量进行测定，以保证制剂的质量。
用本发明中药组合物(龙芩盆腔舒颗粒)进行药效学研究，结果显示：龙芩盆腔舒颗粒高剂量(13.0g生药/kg)可明显降低大肠杆菌所致的慢性盆腔炎大鼠炎症病变，龙芩盆腔舒颗粒中(6.5g生药/kg)、高剂量(13.0g生药/kg)均可明显降低盆腔炎模型大鼠升高的全血粘度，尤其是在高切速下作用明显；龙芩盆腔舒颗粒低(2.5g生药/kg)、中(5.0g生药/kg)、高剂量组(10.0g生药/kg)均能明显减少小鼠扭体反应和次数，说明其有一定的镇痛效应，但对于热板致痛无明显影响；龙芩盆腔舒颗粒低、中、高三个剂量组和强的松组对二甲苯所致小鼠耳廓炎症有明显的抑制作用；中、高剂量对小鼠棉球肉芽肿湿、干重均有明显减轻作用；龙芩盆腔舒颗粒于白色念珠菌、酵母菌、乙型溶血性链球菌、金葡菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、厌氧链球菌、脆弱类杆菌有较好的体外抑制作用。
用本发明中药组合物(龙芩盆腔舒颗粒)进行毒理学研究结果显示：
急性毒性实验，在龙芩盆腔舒颗粒小鼠灌胃给药未测出LD50的情况下，24小时内灌胃三次，测得小鼠灌胃最大给药量为378g/kg，相当于拟临床人用量的371.80倍。
长期毒性试验，龙芩盆腔舒颗粒人拟临床用量约为1g生药/kg/天，疗程为两周。参照卫生部《中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学)》，设高、中、低三个剂量组和空白对照组，进行大鼠长期毒性试验，灌胃给药，给药容量为10ml/Kg，2次/日，连续三个月。高剂量组给药量为63g/kg，相当于拟临床人用量的63倍；中剂量31.5g/Kg，相当于拟临床人用量的31.5倍；低剂量组为15.75g/Kg，相当于拟临床人用量的15.75倍。末次给药后24小时活杀2/3大鼠，停药后两周再活杀余下大鼠，分别测定各组大鼠的血液学、血液生化学等指标，同时测定主要脏器系数，系统尸检和镜检。结果发现：龙芩盆腔舒颗粒高、中、低剂量组与空白组比较，连续给药三个月仅中、高剂量组大鼠有血Cr明显升高，说明有一定程度的肾功能损害，但停药两周后能恢复正常。在给药过程中，动物饮食、活动、排泄均未见明显异常，无一动物死亡。停药后各组动物在饮食、活动、排泄、精神状态等方面均未见明显差异；脏器系数、血液学检测结果虽有改变但均在正常范围；病理组织切片无特异性改变。停药后无迟缓性毒性发生。
以上实验表明，本发明中药组合物对大鼠慢性盆腔炎具有明显的治疗作用，并具有明显的抗炎、镇痛、抑菌的改善作用，急性毒性和长期毒性试验表明本品无明显毒性作用，口服安全。
附图说明
图1：龙芩颗粒对小鼠热板法痛阈提高百分率的影响
具体实施方式
实施例1
配方：
龙胆草    90g    黄芩(炒)    90g    栀子    100g    大血藤    150g
白花蛇舌草    120g    路路通    100g    生地黄    90g    柴胡    60g
川牛膝        90g     香附(炒)  90g     地龙      150g   当归    90g
制备：
取龙胆草、黄芩、香附、当归以70％乙醇为回流提取二次，每次2小时，第一次加五倍量乙醇，第二次加四倍量；合并乙醇提取液，回收乙醇，并浓缩至相对密度1.05(60℃测)，趁热滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.32～1.34(80℃测)，备用。另取栀子、大血藤、白花蛇舌草、路路通等其他药物加水煎煮二次，第一次加8倍量水，第二次加6倍量水，每次1.5小时，滤过，合并药液并浓缩至相对密度约1.10(80℃测)，加95％乙醇使含醇量达70％，静置48小时，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至相对密度1.32～1.34(80℃测)；与醇提浸膏合并。取浸膏1份、糖粉2份、糊精0.5份、甜菊糖0.2份，80％乙醇适量，混匀制粒，干燥，整粒，包装，即得。
实施例2质量检测
1、栀子苷、龙胆苦苷定性鉴别
取实施例1方法制得制剂10g，碾细，加甲醇30ml超声提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml溶解并转移至分液漏斗中，以乙醚萃取二次，每次20ml，乙醚液合并备用；水液加水饱和正丁醇萃取二次，每次30ml，合并正丁醇并以1％氨水洗二次，每次30ml，弃去氨液，正丁醇蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子苷、龙胆苦苷对照品，分别加甲醇制成每1ml含1.0mg溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，分别吸取栀子苷、龙胆苦苷对照品溶液、供试品溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以正丁醇-醋酸乙酯-水(4∶1∶5)的上层溶液为展开剂，展开14cm以上，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与栀子苷及龙胆苦苷对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点。
2、地黄鉴别
取上述1中的乙醚液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取地黄对照药材1g，加水煎煮两次，滤过，合并药液并浓缩至约10ml，加乙醇30ml沉淀，滤过，滤液蒸干，自“残渣加水20ml”起同供试品制备方法，制备对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取对照药材溶液10μl、供试品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶3∶0.5∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液。置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3、川牛膝鉴别
取川牛膝对照药材1g，加水煎煮两次，滤过，滤液合并，浓缩至20ml左右，加乙醚萃取两次，合并乙醚并蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，分别吸取对照药材溶液和上述2中的供试品溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-甲醇(9∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
4、当归、香附鉴别
取当归对照药材0.5g、香附对照药材1g，分别加70％乙醇20ml超声提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣分别加水20ml溶解，加乙醚萃取两次，合并乙醚并蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，分别制得当归对照药材溶液和香附对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取当归对照药材溶液2μl、香附对照药材溶液5μl、供试品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷10％硫酸乙醇，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与当归对照药材和香附对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点后。
5、黄芩苷含量测定
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-冰醋酸-水(48∶1∶52)为流动相，检测波长为274nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备：精密称取在60℃真空干燥4小时的黄芩苷对照品适量，加50％甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取实施例1制剂约10g，研细，精密称取1.0g，置100ml量瓶中，加50％甲醇适量，超声处理15分钟，放至室温，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得。
测定法：精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
黄芩按黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于4.0mg/g。
实施例3药效学研究
I.试验材料：
1.试验动物：
小鼠：昆明种，18-22g，♀性，江西医学院实验动物中心提供。
大鼠：SD雌性，体重为180-250克，江西医学院动物室提供。
2.药物：
龙芩颗粒浸膏：2.5g生药/g浸膏(比重为1.26)，人临床拟用剂量约为1克生药/Kg/d。
II.试验方法与结果：
一、对大肠杆菌所致的大鼠细菌性阴道炎的影响
试验目的：以一定量的大肠杆菌注入大鼠子宫造成慢性盆腔炎模型，给药后取出子宫进行肉眼观察和病理组织学观察，结合两者结果来评价药物的抗盆腔炎作用。
1.动物分组：随机分为6组，每组10只，即龙芩颗粒高(1.30g生药/ml)、中(0.65g生药/ml)、低剂量组(0.325g生药/ml)，妇炎康复颗粒组(1.50g生药/ml)、模型组和假手术组(蒸馏水)。
2.取健康普通级雌性未交配SD大鼠60只，体重180-220克，ip30mg/kg戊巴比妥钠麻醉，腹部常规消毒后，下腹正中切口，轻推开脏器，暴露子宫，注射器抽吸0.2ml临床新分离大肠杆菌菌液(107个/ml)，用四号针头于子宫分叉处避开血管小心进针入宫腔，缓慢推注0.2ml/只后，关闭腹腔，逐层缝合组织。另10只大鼠手术操作同上，仅不注射大肠杆菌悬液作为假手术组。手术后动物不予任何处置，正常喂养，自由摄食进水。造模后10天，将动物随机分为6组，每组10只动物，开始进行口服药物治疗，每天灌胃一次，每次10ml/kg，连续给药七天。模型组和假手术组灌服等容量蒸馏水。于末次给药后24h，30mg/kg戊巴比妥钠ip麻醉动物后，剖腹，腹主动脉取血进行全血粘度测定，然后肉眼观察子宫的大体变化，留取标本，进行病理形态学观察。
3.病理分级标准见表1：
                             表1病理分级标准
病变程度   宫腔粘连、闭塞或扩张   腔壁结构改变   上皮细胞变性坏死   内膜充血水肿   成纤维细胞增生
  正常轻度中度重度   -0～1/31/3～2/32/3～1   -++++++   -++++++   -++++++   -++++++
根据病理炎变程度，由轻到重分为四级：
腹壁结构：(-)各层清晰；(+)粘膜固有层腺体结构紊系统性不清或消失；(++)肌层与粘膜层界限不清；(+++)全层结构不清。
上皮细胞：(-)单层柱状；(+)细胞扁平或上皮细胞坏死脱落＜1/3；(++)细胞扁平或上皮脱落坏死＞1/3；(+++)完全坏死消失。
慢性炎细胞浸润：在测微网格10×20倍下数四个单位面积中淋巴细胞和解剖学细胞数，取其均值：(-)各层未见炎细胞；(+)仅在粘膜固有层有大量的炎细胞；(++)肌层亦可见炎细胞(20～30个)；(+++)全层皆有炎细胞，且数目＞30个。
成纤维细胞：(-)无增生；(+)仅在粘膜固有层有少量的成纤维细胞；(++)肌层亦可见成纤维细胞，且量较多；(+++)全层皆有成纤维细胞，且数目＞30个。
按照上述标准，将大鼠子宫总体病变分为四级。0组：无(+)；I组：宫腔粘连闭塞或扩张，及腔壁结构无变化。其余四项有2(+)以下；II组：宫腔粘连闭塞或扩张及腔壁结构改变中有2个(+)或1个(++)，其余四项有一个(++)或3个以上(+)；III组：宫腔粘连闭塞或扩张及腔壁结构改变中有2个(++)或1个(+++)，其余四项有一个(+++)或2个以上(++)。
4.结果见表2和表3：
                           表2大鼠子宫炎变程度比较(样本数n＝10)
组别   剂量(g/kg)   炎变程度分级   Ridit值 95％可信限
  -   I   II   III
  假手术组   8   2   0   0   0.178   0-0.325
  模型对照组   0   1   6   3   0.833   0.6505-1.0158△
  龙芩颗粒   3.25   0   5   4   1   0.619   0.4365-0.8015
  龙芩颗粒   6.5   0   6   4   0   0.565   0.3825-0.7475
  龙芩颗粒   13   2   5   3   0   0.403   0.2205-0.5855▲
  妇炎康复颗粒组   2   3   5   2   0   0.386   0.2305-0.5685▲
与空白对照组比较：△P＜0.05；与模型对照组比较：▲P＜0.05。
从上表可看出，龙芩颗粒高剂量和妇炎康复颗粒对大肠杆菌所致的大鼠慢性盆腔炎有很明显的改善作用。
           表3龙芩颗粒对慢性盆腔炎模型大鼠全血粘度的影响(mPa)
组别   剂量(g/kg)   动物数(n) 200S-1 100S-1 40S-1 20S-1 10S-1
空白对照组 10 5.46±0.46 6.43±0.69   8.30±0.96 9.93±1.36 11.87±1.93
  模型对照组   10   6.35±0.81△△△   7.70±1.11△△   10.12±1.55△△   12.85±2.06△△   16.01±2.55△△
  龙芩低剂组   3.25   10   6.32±0.62   7.71±0.75   10.31±1.04   12.73±1.12   15.19±1.29
  龙芩中剂组   6.5   10   5.71±0.46▲   6.88±0.72▲   9.23±1.16   11.47±1.45▲   13.90±1.70▲
  龙芩高剂组   13   10   5.64±0.31▲▲   7.22±0.74   9.41±0.88   11.60±1.31   14.43±1.96
  妇炎康复颗粒组 2 10 5.59±0.31▲▲ 7.11±0.48 9.27±0.80 11.25±0.80▲▲ 13.69±1.12▲▲
与空白对照组比较：△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型对照组比较：▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。
2.观察指标：雌性小鼠90只，将恒温水浴调节至55±0.5℃，金属盘底接触水面，加热后作为热刺激，用秒表记录小鼠自投入热板至出现舔后足的时间作为该鼠的痛阈值，以痛阈值在5-30秒内为合格，筛得小鼠共70只，按其痛阈值进行随机分组，分组同上，对照组给予生理盐水，其他各组均灌胃给予相应药物20ml/kg，每日给药一次，连续7天，于末次给药后30、60、120、240分钟分别测小鼠痛阈值，计算其痛阈提高百分率，痛阈提高率用下公式计算。结果见表5、表6和图1。
Figure A20041005416700151
                            表5龙芩颗粒对小鼠热板法致痛作用的影响
  组别   动物数   剂量(g生药/kg)   给药前(s)   给药后不同时间的舔足潜伏期(s)
30min 60min 120min 240min
  空白对照组龙芩低剂组龙芩中剂组龙芩高剂组杜冷丁   1010101010   NS5102020mg   16.38±2.2215.96±3.5716.35±3.7116.39±2.5816.42±2.70   18.35±4.9218.64±5.3417.93±3.7516.71±3.1725.42±4.61△   18.57±5.0919.42±6.7219.35±5.5117.35±3.0028.71±5.34△△   18.28±4.3520.64±5.8919.50±4.9218.14±4.1125.35±3.99△   18.35±3.821.07±7.3319.92±7.6218.28±5.4926.57±5.69△
与生理盐水组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01。
                        6 龙芩颗粒对小鼠热板法痛阈提率的影响
  组别   动物数   30分钟(％)   60分钟(％)   120分钟(％)  240分钟(％)
  对照组低剂量组中剂量组高剂量组杜冷丁组   1414141414   12.0216.799.661.9554.81   11.6721.6818.356.1274.84   13.3729.3219.2710.9554.38   14.4132.0221.8311.8061.81
与对照组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01。
图1显示龙芩颗粒对小鼠热板法痛阈提高百分率的影响。
从表5、6和图1可看出，杜冷丁组在给药后30分钟就能明显提高小鼠痛阈值，在60、90、120分钟时也作用明显，而龙芩颗粒不同从上表可以看出，龙芩颗粒中、高剂量及妇炎康复颗粒均可明显降低盆腔炎模型大鼠升高的全血粘度，尤其是在高切速下作用明显。
二、对小鼠镇痛作用的影响
(一)扭体法：
试验目的：采用小鼠腹腔注射化学药物，计算小鼠扭体反应的鼠数和次数，观察药物的镇痛作用。
1.动物分组：动物随机分为6组，每组10只，即龙芩颗粒低、中、高剂量组，杜冷丁组、模型组和对照组。
2.观察指标：模型组和对照组给予生理盐水，其他各组均灌胃给予相应药物20ml/kg，给药60分钟后，除对照组腹腔注射生理盐水，各鼠均腹腔注射0.6％醋酸0.2ml，观察10分钟内各组出现扭体反应小鼠只数(腹部内凹、伸展后肢、臀部抬高)和次数，结果见下表。
                       表4龙芩颗粒对小鼠镇痛作用的影响
  组别 动物数   剂量(g生药/kg)   出现扭体鼠数(只)   扭体次数(次)
  空白对照组   10   NS   0   0
  模型组龙芩低剂组龙芩中剂组龙芩高剂组杜冷丁   1010101010   NS5102020mg   10△△△10△△△10△△△10△△△2▲▲▲   24.20±6.88△△△18.60±6.63▲17.20±2.85▲▲14.80±2.14▲▲▲0.30±0.67▲▲▲
与空白组比较，△△△P＜0.001；与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001.
从上表可以看出，腹腔注射0.6％冰醋酸可致小鼠出现疼痛反应。模型组小鼠扭体反应次数明显增多，说明造模是成功的，除杜冷丁组可明显减少小鼠扭体反应次数和只数，龙芩颗粒低、中、高剂量组均能明显减少小鼠扭体反应和次数，说明其有一定的镇痛效应。
(二)热板法：
试验目的：采用热刺激，观察小鼠给予不同药物后舔后足的时间，作为衡量药物的镇痛效应的指标。
1.动物分组：动物随机分为5组，每组14只，即龙芩颗粒低、中、高剂量组，杜冷丁组、空白对照组(生理盐水)。剂量组对小鼠痛阈值无明显的提高作用，说明龙芩颗粒对热板法的镇痛作用不明显。
三、对小鼠抗炎作用的影响
(一)耳廓肿胀法：
试验目的：通过给小鼠耳廓涂二甲苯造成炎症模型后再给予药物，通过比较两耳的重量差来衡量药物的抗炎作用。
1.动物分组：动物随机分为6组，每组10只，即龙芩颗粒低、中、高剂量组，强的松组、妇炎康复颗粒组和对照组。
2.观察指标：对照组给予生理盐水，其他各组均灌胃给予相应药物20ml/kg，连续给药7天，末次给药60分钟后左耳廓涂100％二甲苯0.02ml/只，4小时后，将小鼠拉脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下两耳，用8mm直打孔器分别在同一部位打下圆耳片，扭力天平称重；每鼠左耳片减去右耳片重即为肿胀度。结果见下表。
                      表7龙芩颗粒对小鼠耳廓肿胀的影响
  组别 动物数   剂量(g生药/kg)   左耳重(mg)   右耳重(mg)   肿胀度
  空白对照组   10   NS   21.72±3.94   12.38±2.10   9.34±2.68
  妇炎康复颗粒组龙芩低剂组龙芩中剂组龙芩高剂组强的松   1010101010   35102020mg   19.75±2.2319.64±2.17▲19.70±1.82▲19.23±2.10▲18.26±2.07▲▲   12.21±1.1512.33±1.5212.20±1.1411.59±1.7711.90±1.82   7.54±2.407.32±1.48▲7.50±1.41▲7.63±1.49▲6.36±2.12▲▲
与生理盐水组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001.
从上表可以看出，除妇炎康廓肿胀度有明显减轻作用，说明龙芩颗粒低、中、高三个剂复颗粒组外，其他各组对小鼠耳量组和强的松组对二甲苯所致小鼠耳廓炎症有明显的抑制作用。
(二)棉球肉芽肿法：
试验目的：通过给小鼠植入棉球造成炎症模型后再给予药物，通过比较棉球的重量差来衡量药物的抗炎作用。
1.动物分组：动物随机分为6组，每组10只，即龙芩颗粒低、中、高剂量组，强的松组、妇炎康复颗粒组和对照组。
2.观察指标：乙醚麻醉后在无菌条件下将5mg重无菌棉球植入两侧腋下各一个，缝合伤口，对照组给予生理盐水，其他各组均灌胃给予相应药物20ml/kg，每日一次，连续给药7天；末次给药后60分钟后处死小鼠，剥离球肉芽称其湿重，在80℃烤箱中烘2小时后称重，为干重，结果见下表。
                         表8龙芩颗粒对小鼠棉球肉芽肿的影响
  组别 动物数   剂量(g生药/kg)   湿重(mg)   抑制率   干重   抑制率
  空白对照组   10   NS   98.59±12.41   22.60±3.81
  妇炎康复颗粒组龙芩低剂组龙芩中剂组龙芩高剂组强的松   1010101010   35102020mg   84.99±8.96▲▲▲97.36±8.0185.09±8.57▲▲▲82.24±6.72▲▲▲78.92±7.91▲▲▲   13.791.2513.6916.5819.95   18.05±1.57▲▲▲20.86±2.0217.59±1.64▲▲▲17.47±1.44▲▲▲16.85±1.87▲▲▲   20.137.7022.1722.7025.44
与生理盐水组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001.
从上表可以看出，除龙芩颗粒低剂量组外，其他各组对小鼠棉球肉芽肿湿、干重均有明显减轻作用，说明龙芩颗粒中、高二个剂量组、妇炎康复颗粒组和强的松组对炎症有明显的抑制作用。
四、体外抑菌试验
试验目的：采用一定的培养基对新近分离的细菌或霉菌进行培养，观察药物的体外抑菌作用。
(一)对盆腔炎常见致病菌抑制作用
龙芩颗粒，用双蒸水配制成浓度为3.15g生药/ml的黄褐色澄清液体，调整PH为7.2左右。煮沸30min消毒灭菌，4℃冰箱保存待用。妇炎康复颗粒，用双蒸水配制成浓度为3.89g生药/ml的黄褐色澄清液体，调整PH为7.2左右。煮沸30min消毒灭菌，4℃冰箱保存待用。先用菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、乙型溶血性链球菌、绿脓杆菌各7株均由江西省妇幼保健院提供(新近临床分离株)。大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌采用葡萄糖肉汤缓冲培养液，变形杆菌、乙型溶血性链球菌采用血清肉汤培养基。对照文献，采用试管二倍稀释法[6]：取灭菌的小试管10支置于试管架上，再以无菌操作每管加葡萄糖酚红肉汤培养基或1％血清葡萄糖酚红肉汤培养基1ml；无菌操作1ml，放入第1管中，混匀后吸取1ml放入第2管中，混匀后吸取1ml放入第二管中，混匀后吸取1ml放入第3管中，如此作倍量稀释到第九管，混匀后吸取1ml弃去，第10管不加抗菌药物作对照；每管(除第9管)加被检细菌菌液0.1ml，混匀后培养，第9管不加细菌菌液作药物对照；置37℃温箱中，培养18-24小时，观察结果根据被检细菌生长时分解葡萄糖产菌使酚红指示剂变色(红色变成黄色)来判断每管细菌生长情况，没有变色的试管细菌不生长，变色的试管细菌生长，然后把没有变色的最大稀释倍量的那管所含抗菌药物的浓度作为最小抑菌浓度(MIC)。
结果：龙芩颗粒对乙型溶血性链球菌MIC为0.79g生药/ml；对变形杆菌、大肠杆菌MIC为0.20g生药/ml；对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌MIC为0.395g生药/ml；妇炎康复颗粒对金葡菌、大肠杆菌、绿脓杆菌的MIC为0.486g生药/ml；变形杜菌为0.243g生药/ml，对乙型溶血性链球菌的MIC为0.972g生药/ml。
                  表9龙芩颗粒对5种菌株体外抑菌作用的结果
菌株   龙芩药液稀释度 MIC
  1∶2   1∶4   1∶8   1∶16   1∶32   1∶64   1∶128   1∶256   1∶512※   对照★
  乙型溶血性链球菌 - - + + + + + + - + 1∶4
  金黄色葡萄球菌   -   -   -   +   +   +   +   +   -   +   1∶8
  大肠杆菌   -   -   -   -   +   +   +   +   -   +   1∶16
  变形杆菌   -   -   -   -   +   +   +   +   -   +   1∶16
  绿脓杆菌   -   -   -   +   +   +   +   +   -   +   1∶8
※表示有药无菌的药物对照 ★表示有菌无药的细菌对照
             表10妇炎康复颗粒对5种菌株体外抑菌作用的结果
菌株   妇炎康复药液稀释度 MIC
  1∶2   1∶4   1∶8   1∶16   1∶32   1∶64   1∶128   1∶256   1∶512※   对照★
  乙型溶血性链球菌 - - + + + + + + - + 1∶4
  金黄色葡萄球菌   -   -   -   +   +   +   +   +   -   +   1∶8
  变形杆菌   -   -   -   -   +   +   +   +   -   +   1∶16
  大肠杆菌   -   -   -   +   +   +   +   +   -   +   1∶8
  绿脓杆菌 - - -   +   +   +   +   + -   +   1∶8
※表示有药无菌的药物对照 ★表示有菌无药的细菌对照
(二)龙芩颗粒对真菌的抑制作用
受试药物配制方法同前，白色念珠菌、酵母菌各7株由均由江西省妇幼保健院提供(新近临床分离株)，采用沙保弱氏培养基进行培养。试验操作、培养方法均同上述试验，结果见表11、12。
                   表11龙芩颗粒对真菌的体外抑制作用
菌株   龙芩药液稀释度 MIC
  1∶2   1∶4   1∶8   1∶16   1∶32   1∶64   1∶128   1∶256   1∶512※   对照★
  白色念珠菌   -   -   -   -   +   +   +   +    -   +   1∶8
  酵母菌   -   -   -   +   +   +   +   +    -   +   1∶8
※表示有药无菌的药物对照 ★表示有菌无药的细菌对照
                       表12妇炎康复颗粒对真菌的体外抑制作用
菌株   妇炎康复药液稀释度 MIC
  1∶2   1∶4   1∶8   1∶16   1∶32   1∶64   1∶128   1∶256   1∶512※   对照★
  白色念珠菌   -   -   -   +   +   +   +   +   -   +   1∶8
  酵母菌   -   -   -   +   +   +   +   +   -   +   1∶4
※表示有药无菌的药物对照 ★表示有菌无药的细菌对照
结果：龙芩颗粒对白色念珠菌MIC为0.20g生药/ml；对酵母菌MIC为0.395g生药/ml；妇炎康复颗粒对白念和酵母菌的MIC为0.486g生药/ml。
(三)龙芩颗粒对厌氧菌的抑制作用
受试药物配制方法同前，脆弱类杆菌、厌氧链球菌均由江西省妇幼保健院提供(新近临床分离株)。先按无菌操作把厌氧链球菌、脆弱类杆菌用10％小牛血清的葡萄糖肉汤培养基1∶1000稀释，配制成试验所需的菌液；加药完毕后将加药试管于真空干燥器中，用真空泵抽取干燥器内空气至真空状态(负压达0.1Torr)，再放置于35℃培养箱中培养48小时进行观察，结果见表13、14。
表13龙芩颗粒对厌氧菌的体外抑制作用
  菌株   龙芩药液稀释度  MIC
  1∶2   1∶4   1∶8   1∶16   1∶32   1∶64   1∶128   1∶256   1∶512※   对照★
  厌氧链球菌   -   -   -   +   +   +   +   +   -   +   1∶8
  脆弱类杆菌   -   -   +   +   +   +   +   +   -   +   1∶8
※表示有药无菌的药物对照 ★表示有菌无药的细菌对照
                   表14妇炎康复颗粒对厌氧菌的体外抑制作用
菌株   妇炎康复药液稀释度 MIC
  1∶2   1∶4   1∶8   1∶16   1∶32   1∶64   1∶128   1∶256   1∶512※   对照★
  厌氧链球菌   -   -   -   +   +   +   +   +   -   +   1∶8
  脆弱类杆菌   -   -   -   +   +   +   +   +   -   +   1∶4
※表示有药无菌的药物对照 ★表示有菌无药的细菌对照
结果：龙芩颗粒对脆弱类杆菌MIC为0.79g生药/ml；对厌氧链球菌MIC为0.395g生药/ml；妇炎康复颗粒对脆弱类杆菌和厌氧链球菌的MIC为0.486g生药/ml。
结论
1、龙芩颗粒中(6.5g生药/kg)、高剂量(13.0g生药/kg)及妇炎康复颗粒均可明显降低盆腔炎模型大鼠升高的全血粘度，尤其是在高切速下作用明显。
2、龙芩颗粒低(2.5g生药/kg)、中(5.0g生药/kg)、高剂量组(10.0g生药/kg)均能明显减少小鼠扭体反应和次数，说明其有一定的镇痛效应，但对于热板致痛无明显影响。
3、龙芩颗粒低、中、高三个剂量组和强的松组对二甲苯所致小鼠耳廓炎症有明显的抑制作用；中、高剂量对小鼠棉球肉芽肿湿、干重均有明显减轻作用。
4、龙芩颗粒于白色念珠菌、酵母菌、乙型溶血性链球菌、金葡菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、厌氧链球菌、脆弱类杆菌有较好的体外抑制作用。
实施例4
配方：
龙胆草        120g    黄芩(炒)    100g    栀子    140g    大血藤  200g
白花蛇舌草    180g    路路通      160g    生地黄  160g    柴胡    45g
川牛膝        180g    香附(炒)    180g    地龙    330g    当归    100g
制备：
取龙胆草、黄芩、香附、当归以70％乙醇为回流提取二次，每次2小时，第一次加五倍量乙醇，第二次加六倍量；合并乙醇提取液，回收乙醇，并浓缩至相对密度1.05(60℃测)，趁热滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.32～1.34(80℃测)，备用。另取栀子、大血藤、白花蛇舌草、路路通等其他药物加水煎煮二次，第一次加六倍量水，第二次加6倍量水，每次1.5小时，滤过，合并药液并浓缩至相对密度约1.10(80℃测)，加95％乙醇使含醇量达80％，静置48小时，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至相对密度1.32～1.34(80℃测)；与醇提浸膏合并。取部分浸膏干燥，得干膏粉，与剩余浸膏进行制粒，干燥，与适量辅料混匀，压制成1000片，包薄膜衣，包装，即得。
实施例5
配方：
龙胆草        120g    黄芩(炒)    90g    栀子    150g    大血藤  225g
白花蛇舌草    105g    路路通      180g   生地黄  75g     柴胡    75g
川牛膝        75g     香附(炒)    75g    地龙    150g    当归    120g
制备：
取龙胆草、黄芩、香附、当归以70％乙醇为回流提取二次，每次2小时，第一次加七倍量乙醇，第二次加五倍量；合并乙醇提取液，回收乙醇，并浓缩至相对密度1.05(60℃测)，趁热滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.32～1.34(80℃测)，备用。另取栀子、大血藤、白花蛇舌草、路路通等其他药物加水煎煮二次，第一次加7倍量水，第二次加8倍量水，每次1.5小时，滤过，合并药液并浓缩至相对密度约1.10(80℃测)，加95％乙醇使含醇量达70％，静置48小时，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至相对密度1.32～1.34(80℃测)；与醇提浸膏合并，加入适量甜菊糖，煮沸溶解，放冷，加入香精、防腐剂适量，加水至1000ml，搅匀，静置，滤过，灌封，灭菌，即得。

Claims (3)

1、一种治疗急慢性盆腔炎的中药组合物，其特征在于该组合物是以龙胆草、黄芩(炒)、栀子、大血藤、白花蛇舌草、路路通、生地黄、柴胡、川牛膝、香附(炒)、地龙和当归为原料提取获得的活性成份与药用辅料制成的口服制剂。
2、根据权利要求1所述的治疗急慢性盆腔炎的中药组合物，其特征在于其中活性成分原料重量百分比组成为：龙胆草5-10％、黄芩5-10％、栀子7-15％、大血藤10-18％、白花蛇舌草7-15％、路路通7-15％、生地黄5-10％、柴胡2-7％、川牛膝5-10％、香附5-10％、地龙10-18％和当归5-10％。
3、一种如权利要求1所述的治疗急慢性盆腔炎的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：
1)取龙胆、黄芩、香附、当归加5-7倍量70％乙醇回流提取，合并提取液，浓缩回收乙醇至相对密度为1.10～1.15的浸膏，备用；
2)取栀子、大血藤、白花蛇舌草、路路通、生地黄、柴胡、川牛膝、地龙药材加6-8倍量水浸泡后，煎煮提取，滤过，合并滤液并浓缩至相对密度为1.10～1.14的浸膏，加乙醇使含醇量达60-70％，静置，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至相对密度为1.10～1.15的浸膏；
3)合并步骤1)和2)制得的浸膏，与药用辅料按常规方法制成口服制剂。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN102600429A (zh) * 2012-03-29 2012-07-25 常熟市常福有机复合肥有限公司 治疗气滞血瘀型慢性盆腔炎中药组合物及制备方法
CN104367727A (zh) * 2014-11-19 2015-02-25 青岛祥翔生物医药科技有限公司 一种治疗湿热瘀结证型急性盆腔炎的中药
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