CN110613712B - 中药组合物及其在治疗血管炎症和内皮损伤中的应用 - Google Patents

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Abstract

一种组合物，包括白藜芦醇、黄连素、姜黄素和青蒿琥脂及其药学上可接受的盐的活性成分。本发明提供的组合物，具有防治血管炎症和内皮损伤的作用，能促进血脂代谢，对肝肾功能及胆汁代谢功能产生保护及促进作用。

Description

中药组合物及其在治疗血管炎症和内皮损伤中的应用
技术领域
本发明涉及一种由多种中药材组成的组合物，尤其是涉及一种提取自中药材的活性单体成分配伍组合，以及在血管炎症、内皮损伤、调节机体血脂水平，减轻动脉粥样硬化程度及保护肝肾等方面的应用。
背景技术
血管内皮是一个多功能器官，主要在维持血管稳态、调节细胞的增殖及血管生成、预防血管内血栓形成、介导炎症与免疫反应等方面有重要作用。血管内皮损伤是冠心病、高血压和糖尿病等多种疾病发生、发展的重要病理基础。炎症、脂多糖、缺血-再灌注、氧化应激、各种物理化学因素等对血管内皮功能的损伤都具有重要影响。
血管内皮细胞是介于血流和血管壁组织之间的一层单核细胞，可通过自分泌、内分泌、旁分泌三种途径分泌一系列NO、PGI2、ET-1等血管活性物质发挥调节血管紧张性、抗血栓形成、抑制平滑肌细胞增殖及血管壁炎症反应等功能。NO是内皮细胞产生最重要的舒血管因子，由内皮细胞的NO合酶(eNOs)作用于L-精氨酸产生，NO可扩散至血管壁平滑肌细胞激活鸟氨酸环化酶，介导cGMP调控的血管舒张。血管内皮在受到一系列有害因素作用时，
内皮细胞受损导致所释放的舒血管因子和缩血管因子失衡，内皮细胞释放的舒血管因子减少，缩血管因子增多，打破血管平衡稳态，最终导致一系列心血管事件的发生。已证实，高血压、冠心病等患者内皮结构和功能严重受损。但内皮细胞损伤是一种可逆性改变，可通过运动、钙离子拮抗剂、血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素受体阻断剂、中医药和生活方式干预等措施修复内皮损伤。
中国发明专利申请201510546751.8公开了一种3，4-二羟基苯甲醛用于制备降血脂、治疗或/和预防与血脂偏高有关的血管内皮损伤、血管增生或动脉粥样硬化药物的用途。
中国发明专利申请201410843006.5公开了一种乳香提取物，可用于制备预防肥胖、长期抽烟、喝酒等不良生活习惯及慢性应激所致的血管内皮细胞结构破坏和功能失调，治疗血管内皮损伤、基质沉淀所致的血管壁增厚和管腔狭窄性心血管疾病的药物。
中国发明专利ZL200710079644.4公开了一种中药组合物，包括3～10人参、3～11水蛭、5～10土鳖虫、1～5乳香(制)、3～9赤芍、1～5降香、1～5檀香、3～9全蝎、3～12蝉蜕、1～3蜈蚣、1～7冰片和3-10酸枣仁(炒)等组成，提高机体内源性抗氧化系统的活性，多角度调节血管舒缩因子及其相关因素之间的稳态，发挥其抗血管内皮损伤，可以有效改善慢性疲劳综合症引起的血管内皮功能障碍，也可有效改善和治疗由此导致的疾病，尤其是易发生血管病变的高血压、高脂血症、动脉粥样硬化、心力衰竭和糖尿病等。
中国发明专利申请201810379433.0公开了一种百秋李醇在制备内皮非依赖的血管舒张剂中的用途，由百秋李醇为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂，具有与内皮非依赖的血管舒张作用，被用于治疗内皮损伤引起的心脑血管疾病。
中药材及活性单体被应用于防治内皮细胞损伤和炎症等方面得到炎症，其机制不仅能保护血管内皮功能、抑制炎症和氧化应激反应，还涉及改善脂质代谢紊乱，以及抗动脉粥样硬化的作用。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种组合物，其包括多种化合物，具有防治血管炎症和内皮损伤的作用。
本发明的另一个目的在于提供一种组合物，其包括提取自中药材的单体活性成分，具有防治血管炎症和内皮损伤的作用。
本发明的再一个目的在于提供一种组合物，以提取自中药材的单体为活性成分制成药物、食品或保健品，用于血管炎症和内皮损伤的防治。
本发明的又一个目的在于提供一种组合物，以提取自中药材的单体为活性成分制成药物、食品或保健品，在保护血管内皮功能、抑制炎症和氧化应激反应等方面的应用。
本发明的第五个目的在于提供一种组合物，以提取自中药材的单体为活性成分制成药物、食品或保健品，在改善脂质代谢紊乱，以及抗动脉粥样硬化的作用。
白藜芦醇(3，4，5-三羟基二苯乙烯，resveratrol)是一种多酚类物质，存在于葡萄、虎杖和桑椹等植物中。现代中医理论认为，虎杖、桑椹等药物其入胆经，具有保肝利胆，抗菌消炎、降压和降血脂等作用，而其有效成分即是白藜芦醇。
黄连素(berberine)是黄连中提取到的一种有效化学成分，其入心、肝、胆、脾、胃、大肠诸经，具有较强的清热、燥湿、泻火、解毒功效。《本草别录》云其“主五脏冷热，久下泄癖脓血；止消渴，大惊......调胃厚肠，益胆”。而现代研究表明，不同于他汀类的降血脂药物的作用机制，黄连素可以通过激活活化AMPK，从上游控制LDL受体表达来抑制肝脏内脂肪的合成。也有研究发现黄连素提取物可明显减少ApoE基因敲除小鼠主动脉易损板块内纤维帽数目，提示可能具有减少斑块破裂的作用，有利于稳定易损斑块。本发明研究人员前期研究黄连素可降低急性冠脉综合症患者体内炎症水平，其机制涉及抑制巨噬细胞NF-κB信号通路活化；同时，黄连素可通过抑制巨噬细胞中P38 MAPK信号通路活化下调MMP-9和EMMPRIN表达，抑制动脉粥样硬化进展。
姜黄素(curcumin)是从姜黄的根茎中提取出的一种植物单体成分，姜黄味辛、苦，性温。入肝脾二经，主要功用是活血化瘀、行气止痛。偏入肝经血分，破血兼理血中气滞，善破肝脾二经的血瘀气结。在我国自古即用作活血化瘀药，可用于治疗与腹痛、黄疸等相关的疾病。
青蒿琥酯(artesunate)是一种从青蒿中提取出的具有多种功效的化学药物成分，在中药理论中归胆经、肝经，具有清热解毒、抗炎、保肝的作用。青蒿为我国传统清热解毒药，青蒿中主要活性成分青蒿素及其衍生物青蒿琥酯具有多种抗炎免疫的作用。相关研究表明，青蒿素通过抑制核转录因子-κB(NF-κB)信号通路抑制单核/巨噬细胞活化及炎症因子表达，并且可通过抑制蛋白激酶C-δ(PKC-δ)/细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)/P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)信号通路下调巨噬细胞细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达。于此同时，青蒿素还通过干预黏附分子细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达进而抑制炎症因子刺激下单核细胞黏附至血管内皮细胞。
本发明所称的组合物，还包括各种与所含化合物或组合物相适应的药物辅料，以制成有利于给药(drug delivery)的剂型，如：但不仅限于水溶液注射剂、粉针剂、丸剂、散剂、片剂、贴剂、栓剂、乳剂、霜剂、凝胶剂、颗粒剂、胶囊剂、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂、缓释剂和控释剂等。这些药用辅料既可以是各种制剂中常规使用的，如：但不仅限于等渗剂、缓冲液、矫味剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂等；也可以是为了与所述物质相适应而选择使用的，如：乳化剂、增溶剂、抑菌剂、止痛剂和抗氧剂等，这类辅料能有效提高组合物所含化合物的稳定性和溶解性或改变化合物的释放速率和吸收速率等，从而改善各种化合物在生物体内的代谢，进而增强组合物的给药效果。此外，还可以为实现特定的给药目的或方式，如：缓释给药、控释给药和脉冲给药等，而使用的辅料，如：但不仅限于明胶、白蛋白、壳聚糖、聚醚和聚酯类高分子材料，如：但不仅限于，聚乙二醇、聚氨酯、聚碳酸酯及其共聚物等。所称的“有利于给药”的主要表现有：但不仅限于提高治疗效果、提高生物利用度、降低毒副作用和提高患者顺应性等。
在水溶液注射剂中，辅料一般包括等渗剂和缓冲液，以及必要的乳化剂(如：Tweeen-80、Pluronic和Poloxamer等)、增溶剂和抑菌剂等。此外，还包括含有药学上可接受的其它药用辅料，如：抗氧剂、pH调节剂和止痛剂等。
用于制取口服液体制剂的辅料一般包括溶剂，以及必要的矫味剂、抑菌剂、乳化剂和着色剂等。
用于制取片剂的辅料一般包括填充剂(如：淀粉、糖粉、糊精、乳糖、可压性淀粉、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙和甘露醇等)、粘合剂(如：乙醇、淀粉浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、明胶溶液、蔗糖溶液和聚乙烯吡咯烷酮的水溶液或醇溶液等)、崩解剂(如：干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮和交联羧甲基纤维素钠)和润滑剂(如：硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、氢化植物油、聚乙二醇4,000、聚乙二醇6,000和月桂醇硫酸镁等)等。
用于制取乳剂的辅料一般为水、油(如：脂肪酸)、乳化剂，以及必要的防腐剂和矫味剂等。
用于制取颗粒剂的辅料与片剂类似，但造粒过程不同。根据需要，将制得的颗粒剂与助流剂混合后装入胶囊即得胶囊剂。
本发明所称的“生物体”、“动物”或“患者”是指人、野生动物和家畜(Livestock)。野生动物为自然状态下未经人工驯化的动物。家畜是为了提供食物来源而人工饲养的动物，如：但不仅限于狗、猫、鼠、大鼠、仓鼠、猪、兔、奶牛、水牛、公牛、绵羊、山羊、鹅和鸡等。给予治疗的“患者”或“生物体”优先选择哺乳动物，尤其是人。
本发明所称的“预防”是指在未被临床标准认定的疾病前，各种用于防止疾病发生或发展的手段或措施，包括医学、物理或化学的方法，以阻止和降低疾病各种症状的发生或发展。
本发明所称的“治疗”是指为了阻止和降低疾病的发生或发展，使疾病病程的发展或加重得以抑制、遏制、减轻、改善、减缓、停止、延迟或反转，所描述的保持和/或用药时的疾病的、紊乱的或病理学状态的各种指标包括减轻或减少症状或并发症，或治愈或消除疾病、紊乱或状况。
本发明所称的“食品”是指包括本发明提供的各种化合物、组合物或提取物制成可食用的单一化合物或组合物。该种单一化合物或组合物的生产和制造应当符合相关食品安全标准，但是这些食品安全标准不得限定本发明。
本发明所称的“保健品”是指将包括本发明提供的各种化合物、组合物或提取物制成可食用的单一化合物或组合物以施于患者，起到对疾病进行预防和治疗的目的。其属于本发明所称的食品，但其生产、制造和销售还应当符合各种相关的要求、标准和规范。
本发明所称的“药物”是指可以用于预防或治疗某种疾病的单一化合物、多种化合物形成的组合物、中药材及其提取物，或指以单一化合物为主要活性成分的组合物或制剂(formulation)，还指由多种化合物为活性成分的组合物或制剂。“药物”应理解为不仅指根据一国之法律规定，通过其设立的行政机构审批并准予生产的产品，还指在为了获得通过审批和准予生产的过程中，所形成的含单一化合物为活性成分的各类物质形态。“形成”应理解为通过化学合成、生物转化或购买等途径获得。
一种组合物，包括白藜芦醇、黄连素、姜黄素和青蒿琥脂等活性成分。
另一种组合物，以白藜芦醇、黄连素、姜黄素和青蒿琥脂及其药学上可接受的盐为活性成分，还辅以各种辅料，制成食品、保健品和膏剂、丸剂、散剂和贴剂等药剂。
另一种组合物，其至少包括白藜芦醇1.25～2.5mg/kg×d、黄连素0.525～0.925mg/kg×d、姜黄素10.5～10.85mg/kg×d和青蒿琥脂4.25～8.25mg/kg×d。
另一种组合物，其按重量份，至少包括白藜芦醇11.25～22.5、黄连素7.5～17.5、姜黄素150～187.5和青蒿琥脂82.5～97.5。
本发明提供的组合物在制备预防和治疗血管炎症和内皮损伤的食品、保健品和药物中的应用。
本发明提供的组合物在制备降低血脂(包括胆固醇、甘油三酯和脂蛋白)的食品、保健品和药物中的应用。
本发明提供的组合物在制备肝肾功能及胆汁代谢功能产生保护及促进的食品、保健品和药物中的应用。
本发明提供的组合物在制备抗动脉粥样硬化的食品、保健品和药物中的应用。
本发明技术方案实现的有益效果：
本发明提供的组合物，包括白藜芦醇、黄连素、姜黄素和青蒿琥脂等活性成分，具有防治血管炎症和内皮损伤的作用，能促进血脂代谢，对肝肾功能及胆汁代谢功能产生保护及促进作用。
经验证，本发明提供的组合物还具有抗动脉粥样硬化的作用。可作为一线降脂药物的辅助治疗手段，一线降脂药物不耐受及出现副作用情况下的替代治疗药物的应用。
附图说明
图1为本发明药物剂量与大体标本斑块面积指标关系图；
图2为高脂饮食条件对各个给药组动物主动脉大体标本主动脉管腔内斑块面积的百分比结果图；
图3为高脂饮食条件对各个给药组动物主动脉大体标本动脉粥样硬化斑块面积的油红染色面积百分比的统计图(*p＜0.05)；
图4为高脂饮食条件对各个给药组动物主动脉根部瓣膜动脉粥样硬化斑块面积的油红染色面积百分比的统计图(*p＜0.05)；
图5为高脂饮食条件对各个给药组动物机体血脂水平统计图(*p＜0.05)；
图6高脂饮食条件对各个给药组动物肝肾功能(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血肌酐)的影响(*p＜0.05)。
具体实施方式
以下结合附图详细描述本发明的技术方案。本发明实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。
以下详尽描述本发明的技术方案。本发明的实施例仅说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。
本发明实施例所用中药单体及相关试剂除另有注明，均购自于西格玛-奥德里奇(Sigma-Aldrich)公司。
实施例1
中药单体组合物的实验分组安排
根据既往对于四种单体的常规使用剂量，将4种中药单体应用剂量分为零剂量、低剂量及高剂量(见表1)。
表1四种单体药物的剂量
运用正交试验建立正交表L9(34)分别将白藜芦醇、黄连素、姜黄素和青蒿琥酯4种中药分为三种浓度梯度水平(为零剂量、低剂量、高剂量)分成九组，分别制成高脂饲料+单体组合物制剂(见表2)。第十组高脂饲料+10mg/kg/d阿托伐他汀钙；第十一组普通饲料；第十二组：高脂饲料。将ApoE-/-小鼠108(6-8周)只，随机分为12组，每组9只，分别喂养上述12组饲料12-16周。用药组根据小鼠体重，通过灌胃手段给予水溶形式的相关单体组合药物或阿托伐他汀，普通饲料及高脂饲料组则给予单纯水溶剂。
表2正交表L9(34)-9组中药复方制剂
注：如表1，三种浓度梯度水平(“1”表示零剂量、“2”表示低剂量和“”3＝高剂量)。
高脂饲养的配方(36％脂肪供能)：繁殖鼠料67％，猪油12.4％，蔗糖9％，酪蛋白6.3％，胆固醇1.3％，胆盐0.2％，甲基硫氧嘧啶0.1％，预混料1.4％，麦芽糊精2.3％，合成后辐照灭菌保存。
实施例2
中药单体组合物水溶剂的制备
取聚乙二醇300(购自上海国药集团)及蒸馏水，以2∶3的体积比例配置溶液，根据小鼠体重，确定一组小鼠一周给药总剂量及一周给药总体积(100μl/只×天)。将每组小鼠对应的药物组合一周剂量和一周给药总体积量的水溶剂进行混合后按实验需求进行灌胃操作。
实施例3
通过正交试验确定中药单体混合物的最佳配伍成分及含量
以主动脉大体标本油红染色斑块面积百分比为正交试验结果的参考指标。以主动脉大体标本油红染色斑块面积百分比作为参考指标的正交试验结果如下(见表3和图1)：
表3因素水平表-主动脉大体标本油红染色斑块占标本面积百分比
注：如表1，三种浓度梯度水平(“1”表示零剂量、“2”表示低剂量和“”3＝高剂量)，K1即把每个因素1水平所有方案试验结果相加；K2即把每个因素2水平所有方案试验结果相加；K3即把每个因素3水平所有方案试验结果相加.并填在相应因素下方。为了直观分别计算各自的算数平均值，
Figure BDA0002243362640000072
各因素的极差R：即各因素
Figure BDA0002243362640000073
最大值减去最小值即为极差。
从表1和图1中可以很清晰的发现，对9个试验结果直接进行比较，找出最好方案，显然大体标本斑块面积百分比最低的方案为2方案，7个大体标本斑块面积百分比之和是0.7444，最佳方案为A1B2C2D2。经计算分析：最后极差分析结果，分析表明，极差越大的因素重要程度越高。因此影响主动脉大体标本油红染色区域占标本面积百分比因素主次顺序为黄连素R＝0.3811＞青蒿琥酯R＝0.3208＞姜黄素R＝0.2971＞白藜芦醇R＝0.2002，从图1可以推测出正交试验的最佳配方，即，大体标本染色区域面积百分比取越低值，减少主动脉大体标本油红染色区域占标本面积百分比的最佳配方为：A2B2C2D2具体浓度见表4。由于该方案是有正交试验通过9组预实验得出的结果，因此，需要通过正式试验来证明A2B2C2D2是否为最佳配方。可以确定正交试验的最佳配方，即：大体标本斑块面积百分比取低值，减少主动脉大体标本油红染色区域占标本面积百分比的最佳配方为：A2B2C2D2(具体浓度见表4)。
故通过极差分析对降低主动脉大体标本油红染色斑块占管腔面积百分比最佳配方详见表4。
表4降低主动脉大体标本油红染色斑块占管腔面积百分比最佳配方
Figure BDA0002243362640000081
实施例4
将ApoE-/-小鼠63只(6周～8周)，随机分为7组，每组9只，分别喂养高脂饲料(配方见实施例4，喂养12周～16周)。其中7组包括中药单体组合药组、四种中药单体各自作为单药组，及他汀组和纯高脂饮食组，共7组，每日通过灌胃途径给药，高脂饲料组予以水溶剂灌胃作为对照组，待实验周期结束，将小鼠处死，固定，暴露心脏，预冷PBS全身灌流2次；暴露并分离主动脉全段(包括心脏-主动脉弓-胸主动脉-腹主动脉)，取下后置于PBS中。小心剥离心脏及主动脉周围多余的组织，在主动脉根部离段心脏；将分离出的主动脉放入干净的培养皿中，使用1ml注射器从主动脉根部向管腔内注入油红染色；室温放置20分钟～30分钟，并保持血管外周湿润；用PBS以同样的方式缓慢冲洗管腔，洗去多余的染液；沿主动脉纵轴纵向剪开血管全段，平铺血管，暴露管腔内面，观察内皮表面粥样斑块的形成情况。用Image Pro Plus软件统计计算主动脉大体标本主动脉管腔内(从主动脉弓至腹主动脉全程)斑块的面积占整个管腔内膜面积的百分比，以阳性部分(红色)面积除以整个管腔面积。具体分组情况、给药剂量及大体标本斑块面积实验结果百分比等参见表5和图2。
表5单体药物组合物各组药物成分、剂量汇总及大体标本斑块面积百分比
Figure BDA0002243362640000091
注：如表5，表中“/”为该空格对应实验组配方中未加对应药物。
如表5及图2所示第1组(配方组)的油红染色面积占管腔面积百分比较第2至5组(各成分单药组)及第7组(单纯高脂喂养组)均明显下降，稍稍高于第6组(他汀组)水平，故多药联用的配方组较单药应用具有更显著的保护血管内皮及减轻巨噬细胞侵润的功能。
实施例5
主动脉根部CD68巨噬细胞染色验证实施例3中得出的通过正交实验所得出的中药单体组合物配方在抑制巨噬细胞趋化所介导的血管局部非特异性炎症作用。
主动脉根部组织经过48小时多聚甲醛固定后，将血管从固定液中取出，由于肾血管很小，将其用白色纱布包好放入脱水专用固定夹中，编好号。用自来水流水浸泡数小时以冲走甲醛后脱水。
(2)石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯I 15min-二甲苯II 15min-二甲苯III 15min-无水乙醇I 5min-无水乙醇II 5min-85％酒精5min-75％酒精5min-蒸馏水洗。
(3)抗原修复：组织切片置于盛满柠檬酸抗原修复缓冲液(PH 6.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火8min至沸，停火8min保温再转中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH 7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
(4)阻断内源性过氧化物酶：切片放入3％过氧化氢溶液(双氧水∶纯水＝1∶9)，室温避光孵育25min，将玻片置于PBS(PH 7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
(5)血清封闭：在组化圈内滴加3％BSA均匀覆盖组织，室温封闭30min。
(6)加一抗(CD68)：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加PBS按1∶100比例配好的一抗，切片平放于湿盒内4℃孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)
(7)加二抗：玻片置于PBS(PH 7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗(HRP标记)覆盖组织，室温孵育50min。
(8)DAB显色：玻片置于PBS(PH 7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，自来水冲洗切片终止显色。
(9)复染细胞核：Harris苏木素复染3min左右，自来水洗，1％的盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗，氨水返蓝，流水冲洗。
(10)脱水封片：将切片依次放入75％酒精5min-85％酒精5min--无水乙醇I 5min-无水乙醇II 5min-二甲苯I 5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。
(11)显微镜镜检，图像采集分析。
(12)计算主动脉根部管横断面管腔内CD68细胞(呈棕黄色的细胞)的数量总个数(见表6、图3)。
表6各组主动脉根部CD68染色巨噬细胞总数量
注：如表6，表中“/”为该空格对应实验组配方中未加对应药物。
如表6及图2所示第1组(配方组)的管腔内CD68+细胞数量较第2至5组(各成分单药组)及第7组(单纯高脂喂养组)均明显下降，与第6组(他汀组)水平无明显差异，故多药联用的配方组较单药应用具有更显著的保护血管内皮及减轻巨噬细胞侵润的功能，同时也佐证了实施例4的研究结果。
实施例6
将ApoE-/-小鼠63只(6周～8周)，随机分为7组，每组9只，分别喂养高脂饲料(配方见实施例4，喂养12周～16周)。其中7组包括中药单体组合药组、四种中药单体各自作为单药组，及他汀组和纯高脂饮食组，共7组，每日通过灌胃途径给药，高脂饲料组予以水溶剂灌胃作为对照组，待实验周期结束，将小鼠处死，固定，暴露心脏和预冷PBS全身灌流2次；暴露并分离主动脉全段(包括心脏-主动脉弓-胸主动脉-腹主动脉)，取下后置于PBS中。小心剥离心脏及主动脉周围多余的组织，在主动脉根部离段心脏，并将心脏保存在液氮中用于OCT包埋切片；冰冻切片室温干燥20分钟后置于湿盒中；将油红O染液滴到标本表面，避光、室温孵育20分钟。60％乙醇镜下分化至间质清晰；PBS洗2次，每次5分钟；甘油明胶封片。用ImagePro Plus软件统计计算主动脉根部粥样斑块的相对面积，以斑块面积与管腔横断面面积的百分比表示，用阳性部分(红色)面积除以管腔横断面面积。具体分组情况、给药剂量及冰冻切片斑块百分比实验结果等参见表7和图4。
表7单体药物组合物各组药物成分、剂量汇总及冰冻切片斑块百分比
Figure BDA0002243362640000111
注：如表7，表中“/”为该空格对应实验组配方中未加对应药物。
如表7及图4所示第1组(配方组)的斑块面积与管腔横断面面积的百分比较第2至5组(各成分单药组)及第7组(单纯高脂喂养组)均明显下降，稍稍高于第6组(他汀组)水平，故多药联用的配方组较单药应用具有更显著的保护血管内皮及减轻巨噬细胞侵润的功能，同时也佐证了实施例4的研究结果。
实施例7
将ApoE-/-小鼠63只(6周～8周)，随机分为7组，每组9只，分别喂养高脂饲料(配方见实施例4，喂养12周～16周)。其中7组包括中药单体组合药组、四种中药单体在清胆消斑散中的剂量，各自作为单药组，及他汀组和纯高脂饮食组，共7组，每日通过灌胃途径给药，高脂饲料组予以水溶剂灌胃作为对照组，待实验周期结束，取小鼠血浆并将样本统一送至本院临床检验科检查血浆中总胆固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)水平。具体分组情况、给药剂量及血脂水平实验结果参见表8和图5。
表8单体药物组合物各组药物成分、剂量汇总及血脂水平
Figure BDA0002243362640000121
注：如表8，表中“/”为该空格对应实验组配方中未加对应药物。
如表8及图5所示第1组(配方组)的血脂水平较第2至5组(各成分单药组)及第7组(单纯高脂喂养组)均明显下降，稍稍高于第6组(他汀组)水平，故多药联用的配方组较单药应用具有更显著的保护血管内皮及减轻巨噬细胞侵润的功能。
实施例8
将ApoE-/-小鼠63(6-8周)只，随机分为7组，每组9只，分别喂养高脂饲料(配方见实施例4，喂养12-16周)。其中7组包括中药单体组合药组、四种中药单体在清胆消斑散中的剂量，各自作为单药组，及他汀组和纯高脂饮食组，共7组，每日通过灌胃途径给药，高脂饲料组予以水溶剂灌胃作为对照组，待实验周期结束，取小鼠血浆并将样本统一送至本院临床检验科检查血浆中总谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase，GPT)、谷草转氨酶(glutamic-oxalacetic transaminase，GOT)和肌酐(creatinine，CREA)的水平等实验结果参见表9和图6。
表9单体药物组合物各组药物成分、剂量汇总及安全性指标水平
注：如表9，表中“/”为该空格对应实验组配方中未加对应药物。
如表9及图6所示第1组(配方组)的肝肾功能相关指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血肌酐)比较第2至5组(各成分单药组)及第7组(单纯高脂喂养组)均明显下降，更显著低于第6组(他汀组)水平，故多药联用的配方组较单药应用具有更显著的保护血管内皮及减轻巨噬细胞侵润的功能，在减少内皮损伤及巨噬细胞侵润的同时兼具了减少药物对肝肾功能影响的问题，也佐证了实施例4、5和6的结果。

Claims (3)

1.一种组合物在制备抗动脉粥样硬化的药物中的应用，其特征在于所述组合物的活性成分为白藜芦醇、黄连素、姜黄素和青蒿琥酯及其药学上可接受的盐，所述的白藜芦醇11.25mg～22.5mg、所述的黄连素7.5mg～17.5mg、所述的姜黄素150～187.5mg和所述的青蒿琥酯82.5mg～97.5mg。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的组合物还包括各种辅料，制成药剂。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述药剂为膏剂、丸剂、散剂和贴剂。
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植物化学物质通过Nrf2 及其相关蛋白防护/修复氧化应激损伤研究进展;贠可力等;《天然产物研究与开发》;20160615;全文 *
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