CN114796419B - 一种用于治疗急性胰腺炎的中药组合物及其应用 - Google Patents

一种用于治疗急性胰腺炎的中药组合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于治疗急性胰腺炎的中药组合物及其应用，属于中药技术领域。所述中药组合物由以下质量比的药物组成，姜黄：大黄：黄柏：麸炒苍术：厚朴：陈皮：胆南星：白芷：天花粉：醋制甘遂为2.5～3.5:2.5～3.5:2.5～3.5:1～2:1～2:1～2:1～1.5:2.5～3.5:5～6:1。采用本发明所述中药组合物，可以显著减轻急性胰腺炎症状，在临床配合中医、西医治疗急性胰腺炎，效果理想，可有效减少患者遭受到的困扰和痛苦，提高患者的生活质量，为不能口服中药患者提供了新的治疗途径。因此，本发明具有重大意义和广阔的市场前景。

Description

一种用于治疗急性胰腺炎的中药组合物及其应用
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种用于治疗急性胰腺炎的中药组合物及其应用。
背景技术
胰腺炎患者常由于消化道反应或需严格控制进水量致患者不能口服中药，且中药汤剂多味苦致使多数患者不愿按嘱服用。因此，近年来对外治法的研究也越来越受到重视。中药外敷使药品通过皮肤吸收到达全身，药至病所。此法不经过胃肠循环，虽吸收率可能较口服稍差，但是操作方便、病人依从性较好，尤其对胃肠道反应重的患者有很大的优势。
如意金黄散为临床经典名方。出自明代陈实功的《外科正宗》卷之一，收录于2015版《中国药典》(一部)。原书中记载由天花粉(上白，十斤)、黄柏(色重者)、大黄、姜黄(各五斤)、白芷(五斤)、紫浓朴、陈皮、甘草、苍术、天南星(各二斤)组成，具消肿止痛之功。治痈疽、发背、诸般疔肿、跌扑损伤、湿痰流毒、大头时肿、漆疮、火丹、肌肤赤肿、干湿脚气、妇女乳痈、小儿丹毒等。方中君药为苦寒解毒药，如大黄、黄柏；臣药为燥湿化痰行气的天南星、陈皮、厚朴和破血行气药，如姜黄；使药为辛温祛风燥湿、消肿止痛药，如白芷。现代临床应用方面，如意金黄散临床广泛应用于静脉炎、痛风性关节炎、骨折和软组织损伤、糖尿病足溃疡、带状疱疹。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种治疗急性胰腺炎的外治方法及药物组合。
本发明实现上述目的的技术解决方案是：
本发明提供了一种用于治疗急性胰腺炎的中药组合物，其中所述的有效成份由以下质量比的药物组成，姜黄：大黄：黄柏：麸炒苍术：厚朴：陈皮：胆南星：白芷：天花粉：醋制甘遂为2.5～3.5:2.5～3.5:2.5～3.5:1～2:1～2:1～2:1～1.5:2.5～3.5:5～6:1。
本发明药物为黄色散剂。
本发明所述的药物可以采用原药材按一定比例配伍，打粉过筛，用蒸馏水调和成膏状，涂布双层纱布上，制成外敷膏药。
本发明还提供了一种上述中药组合物在制备治疗急性胰腺炎的药物中的应用。
进一步地，上述技术方案中，所述急性胰腺炎包括哺乳动物患有的急性胰腺炎。
进一步地，上述技术方案中，所述哺乳动物包括人类。
进一步地，上述技术方案中，所述中药组合物混合打粉成为散剂，制备成膏状，采用腹部外敷的形式给药。
进一步地，上述技术方案中，所述腹部外敷的用药剂量为每平方分米面积载药重量1-3mg。
进一步地，上述技术方案中，所述中药组合物具有清热解毒、消肿逐水功效，能起到抗菌消炎、促进炎症代谢、减少渗出的作用，可用于急性胰腺炎。
本发明所述中药组合物相较于如意金黄散去掉了原方中甘草，增加醋制甘遂以增加消肿作用；为降低外用药皮肤不良反应，将苍术改为麸炒苍术，将天南星改为胆南星，所形成新的处方较原方起到增效减毒的作用。另根据背景技术记载，原方的已知用途不包含急性胰腺炎，本申请为原方的新用途，且疗效显著提高。
本发明提供的药物组合以天花粉、姜黄、大黄为君药，清热燥湿、破积消痈；以黄柏、白芷燥湿消肿，醋制甘遂燥湿逐水共为臣药，苍术、陈皮、厚朴、胆南星行气燥湿为佐药。全方共奏清热解毒、消肿逐水。可用于治疗急性胰腺炎。
发明有益效果
1.本发明所述中药组合物能减轻急性胰腺炎造成的胰腺损伤，抑制炎性因子的生成与释放。
2.采用本发明所述中药组合物，可以显著减轻急性胰腺炎症状，减少患者遭受到的困扰和痛苦，提高患者的生活质量，因此，本发明具有重大意义和广阔的市场前景。
3.本发明所述中药组合物以天然草本为主要成分，具有低敏性特性，不良反应少。
4.本发明所述中药组合物基于中医古籍记载经典方，经国家名中医凭借多年临床经验改良形成，具有权威性和真实性，患者接受度和信任度较高。
5.本发明所述中药组合物克服中医传统汤剂治疗易出现恶心、呕吐等肠胃道反应的缺陷，更改传统中药复方的性状，采用外敷法更便于提高患者治疗的依从性，临床使用更加安全有效。
6.本发明采用醋制甘遂，以增加消肿逐水，减少胰腺渗出。临床应用效果理想。甘遂为泻水消饮的要药，常用于治疗各种腹水。生甘遂有毒，但经醋制后，甘遂中毒性成分萜类成分在醋制过程中发生结构转化，毒性下降，但药效保留。
附图说明
图1为血清淀粉酶(a)和脂肪酶水平(b)。与对照组相比，**P<0.01，与模型组相比，##P<0.01。
图2为胰腺和肠组织病理损伤(图像放大100倍)。
图3为胰腺TNF-α水平(a)和IL-1βmRNA水平(b)。与对照组相比，**P<0.01，与模型组相比，##P<0.01。
图4为肠组织TNF-α水平(a)和IL-1βmRNA水平(b)。与对照组相比，**P<0.01，与模型组相比，##P<0.01。
具体实施方式
下述非限定性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
1.材料
1.1.实验动物
本实验中所使用的SPF级健康雄性成年Sprague Dawley(SD)大鼠全部购自大连医科大学实验动物中心。大鼠体重250-280g。实验动物于12小时昼夜循环的环境下适应性饲养1周，环境温度恒定在20-24℃，湿度维持在65-70％。
1.2.主要试剂与药品
牛磺胆酸钠购自北京索莱宝公司，α-淀粉酶和脂肪酶测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所，RNAiso Plus Total RNA提取试剂盒，Prime Script RT试剂盒，SYBRPremix Ex TaqTM II(Tli RNaseH Plus)购自艾科瑞生物公司。
2.方法
2.1.用于治疗急性胰腺炎的中药组合物外敷贴制备
姜黄、大黄、黄柏、麸炒苍术、厚朴、陈皮、胆南星、白芷、天花粉、醋制甘遂(质量比为2.5:2.5:2.5:1:1:1:1:2.5:5:1)，混合打粉，过60目筛，取过筛药粉50克，用50ml蒸馏水调和成膏状，涂布双层纱布上，以能完全遮盖纱布底色为度，每平方分米面积载药重量约1-3mg。将涂布药膏的纱布覆盖在患处(胰腺所在的皮肤处)，外用双层纱布覆盖，医用胶带固定。每日早晚两次贴敷，每次贴敷4小时，即待药膏变干变硬，可取下。
经试验，姜黄、大黄、黄柏、麸炒苍术、厚朴、陈皮、胆南星、白芷、天花粉、醋制甘遂质量比为3.5:3.5:3.5:2:2:2:1.5:3.5:6:1的效果同上。
2.2.动物模型与分组给药情况
24只SD大鼠随机分成3组，每组8只：假手术组、急性胰腺炎模型组、中药组合物治疗组。根据文献报道的方法选用经典的胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠法复制急性胰腺炎模型。大鼠术前12小时禁食不禁水，异氟烷吸入麻醉成功后取仰卧位，固定头部及四肢，手术部位脱毛备皮。在无菌操作下行上腹正中切口入腹，充分暴露术野，将十二指肠提出、展平，用动脉夹夹闭肝门处胰胆管。以1ml无菌注射器轻轻穿刺胰胆管汇合处，逆行注入5％牛磺胆酸钠溶液(0.1ml/100g)，注射速度0.1ml/min。注药过程中，左手轻轻压迫注射点3-5min，防止注射药物返流入肠道。观察胰腺有充血、水肿等病变后，退出针头，等待约2min左右打开动脉夹。将胰腺小心复位，逐层缝合关腹。假手术组以同样方式开腹，轻轻拨动胰腺后还纳腹腔。中药组合物治疗组待动物术后即刻腹部外敷中药组合物外敷贴。
实验大鼠于术后24小时经异氟烷吸入麻醉留取样本。大鼠取仰卧位将头部与四肢分别固定于鼠板上，垫高背部以充分暴露腹主动脉。常规消毒术区，沿腹正中线开腹，钝性游离腹主动脉，采用医用采血管采血。4℃，3500rpm，离心10min，取上层清液，于-80℃保存待检；取胰头和回盲部肠组织分别固定于4％多聚甲醛溶液中，用于组织病理学观察；剩余胰腺组织及远端结肠用生理盐水冲洗后，迅速置入液氮中，后转移至-80℃冰箱中保存备用。
2.3.检测指标与方法
2.3.1.血清淀粉酶检测
根据淀粉酶试剂盒说明书检测大鼠血清淀粉酶含量。底物缓冲液37℃预温5min，分别将假手术组(对照组)、急性胰腺炎模型组、中药组合物治疗组大鼠血清分为测定组与空白组。将测定组血清与底物缓冲液混匀，空白组只加底物缓冲液，37℃反应7.5min后，测定组和空白组每孔加入200μl预先充分混匀的碘应用液与去离子水，利用酶标仪检测660nm吸光值。大鼠血清淀粉酶含量计算公式如下：
2.3.2.血清脂肪酶检测
根据脂肪酶试剂盒说明书检测大鼠血清脂肪酶含量。标准96孔板中加入50μl稀释100倍后的血清，吸取已在37℃预温5分钟以上的底物缓冲液补充至总体积200μl，酶标仪420nm处读取吸光度值A1，将该96孔板静置于37℃恒温培养箱中孵育10分钟，取出，使用酶标仪读取吸光度值A2，求出2次吸光度差值(△A＝A1-A2)并计算酶活力。酶活力计算公式：
2.3.3.组织病理学检查
将固定于4％多聚甲醛溶液中的组织包埋入石蜡中，切成5μm左右的组织薄片并固定于经多聚赖氨酸处理的载玻片上，按照以下步骤对载玻片进行染色：70％乙醇浸泡10秒；焦碳酸二乙酯处理水浸泡5秒；添加RNA酶抑制剂的苏木素染色20秒；70％乙醇冲洗30秒；伊红Y溶解于100％乙醇中浸泡20秒；梯度酒精脱水，每个梯度浸泡30秒，最后将切片浸入二甲苯溶液中2分钟后取出，自来水冲洗3次。切片经苏木精&伊红(Hematoxylin&Eosin，HE)染色后于光镜下放大100倍进行组织病理学观察。
2.3.4.qPCR分析
向胰腺和肠组织中加入TRizol裂解液使样本充分裂解，取裂解液上清液置于另一EP管中，加入氯仿试剂涡旋混合至乳化呈乳白色。室温条件下，静置5分钟，12000g离心15分钟(4℃)后吸取上清液，与等体积的异丙醇试剂均匀混合，静置10分钟。离心弃上清液并于沉淀中加入1ml的75％乙醇，混合均匀。洗完RNA沉淀后，弃去液体，开盖低温至干燥，待乙醇挥发后加入RNase-free水溶解沉淀，即得到总RNA溶液。取少量总RNA溶液加入RNase-free水稀释，测定260nm、280nm和320nm下的吸光度值。取OD260/OD280在1.8-2.2之间的RNA样品供后续实验使用。按照试剂盒说明书，将总RNA溶液稀释成1μg/μl后进行逆转录反应，获得的cDNA保存于-20℃。所有引物均按照qPCR引物设计原则，由生工生物工程(上海)股份有限公司设计合成，具体引物序列如表1所示。按照试剂盒操作说明书进行qPCR反应，结果采用2-△△Ct法进行分析。
表1引物序列
2.3.5.统计学分析
利用GraphPad Prism 6.0软件(GraphPad；CA,USA)对统计数据进行分析，并以平均值±SEM表示。多组间差异比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)。P<0.05或P<0.01，差异具有统计学意义。
3.结果
3.1.本发明所述中药组合物降低急性胰腺炎大鼠血清酶学指标
与对照组相比，急性胰腺炎模型组大鼠血清淀粉酶和脂肪酶水平显著升高，本发明所述中药组合物能显著降低由急性胰腺炎引起的血清淀粉酶和脂肪酶水平升高。
3.2.本发明所述中药组合物减轻急性胰腺炎大鼠局部病损
大鼠胰腺组织病理学H&E染色，对照组大鼠胰腺组织结构清晰，腺泡小叶完整；而急性胰腺炎模型组大鼠胰腺组织出现大量的腺泡细胞坏死，间质性水肿、出血和炎性细胞浸润。本发明所述中药组合物外敷可缩小坏死区面积，减少炎性细胞浸润。此外，与对照组相比，急性胰腺炎大鼠肠组织肠上皮下间隙增大，绒毛明显稀疏或缺失。本发明所述中药组合物外敷可以改善急性胰腺炎大鼠肠组织损伤。
3.3.本发明所述中药组合物抑制急性胰腺炎大鼠胰腺和肠组织炎性因子表达
与对照组相比，急性胰腺炎模型组大鼠胰腺和肠组织中IL-1β和TNF-αmRNA表达水平显著升高，本发明所述中药组合物外敷可以显著降低急性胰腺炎大鼠胰腺和肠组织IL-1β和TNF-αmRNA的表达水平。
4.结论
急性胰腺炎是较常见的急腹症之一，有约20％的病例可能发展为重症急性胰腺炎，早期即可发生全身炎症反应综合征乃至多器官功能障碍综合征。尽管各种相关诊疗观念和技术不断改进，但重症急性胰腺炎仍以20-30％的死亡率高居急腹症之首。胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠能够模拟胆源性急性胰腺炎，是目前研究急性胰腺炎病理机制和药物的经典动物模型之一。应用本发明所述中药组合物外敷干预急性胰腺炎大鼠模型后，可明显降低血清淀粉酶和脂肪酶水平，改善胰腺和肠组织形态和病理学变化，抑制炎性因子的生成与释放，根据以上实验结果，证实本发明所述中药组合物具有治疗急性胰腺炎的用途。
SEQUENCE LISTING
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<120> 一种用于治疗急性胰腺炎的中药组合物及其应用
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<400> 2
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<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 3
atgggctccc tctcatcagt tcc 23
<210> 4
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 4
cctccgcttg gtggtttgct ac 22
<210> 5
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 5
gctgtgctat gttgccctag acttc 25
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 6
ggaaccgctc attgccgata gtg 23

Claims (1)

1.一种用于治疗急性胰腺炎的中药组合物在制备治疗急性胰腺炎的药物中的应用，其特征在于，所述急性胰腺炎包括哺乳动物患有的急性胰腺炎，所述哺乳动物包括人类，所述中药组合物混合打粉成为散剂，制备成膏状，采用腹部外敷的形式给药，所述腹部外敷的用药剂量为每平方分米面积载药重量1-3mg，所述中药组合物具有清热解毒、消肿逐水功效，能起到抗菌消炎、促进炎症代谢、减少渗出的作用，可用于急性胰腺炎；
所述中药组合物组成，姜黄：大黄：黄柏：麸炒苍术：厚朴：陈皮：胆南星：白芷：天花粉：醋制甘遂为2.5～3.5:2.5～3.5:2.5～3.5:1～2:1～2:1～2:1～1.5:2.5～3.5:5～6:1。
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张斯琪 等.如意金黄散的现代研究进展.《中成药》.2018,第第40卷卷(第第40卷期),411-415. *

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