CN1733795A

CN1733795A - 一种从黄杞叶中提取落新妇甙的方法

Info

Publication number: CN1733795A
Application number: CN 200510093657
Authority: CN
Inventors: 宋云飞; 季永贤; 孙步祥; 梁远盛; 汤凌志; 李�杰
Original assignee: GUILIN LAIYIN BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: GUILIN LAIYIN BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date: 2005-09-01
Filing date: 2005-09-01
Publication date: 2006-02-15
Anticipated expiration: 2025-09-01
Also published as: CN100348610C

Abstract

本发明公开了一种从黄杞叶中提取落新妇甙的方法，它是一种以黄杞叶为原料，经提取溶媒提取、浓缩、分离纯化、结晶、干燥提取落新妇甙的方法，它以水或低碳醇如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、戊醇等作为溶媒；提取的方法采用水或低碳醇加热提取，也可以采用超声波提取、或者微波提取；分离纯化可以采用柱层析分离纯化。提取物中落新妇甙重量含量为60％以上(HPLC法测定：High Performance Liquid Chromatography，高效液相色谱)。本发明方法生产的落新妇甙含量高、避免了活性成分的损失、简化了生产工艺、缩短了生产周期。

Description

一种从黄杞叶中提取落新妇甙的方法

技术领域

本发明涉及一种黄杞叶提取物的制备方法，具体地说，涉及一种从黄杞叶中提取落新妇甙的方法。

背景技术

黄杞叶为胡桃科植物黄杞的干燥叶，该植物分布于广东、广西、云南等省，资源丰富，具有清热止痛之功效，用于治疗感冒发热、疝气腹痛。民间常作茶饮，可预防高血压、并有降血脂作用，从该植物或同属植物中分离得到落新妇甙等化学成分，具有抗癌作用。研究还表明，落新妇甙在机体抗排斥方面也发挥着重大作用：落新妇甙能使经植物血凝素激活的T淋巴细胞发生凋亡，并且能使肝炎肝脏周围浸润的活化T细胞发生凋亡，从而保护肝脏免受损害。落新妇甙诱导同种反应性T细胞凋亡，主要与其增强同种反应性T细胞Bax和Caspase-3的表达，降低Bcl-2表达诱导活化的T淋巴细胞凋亡而发挥抗排斥反应作用，随着对其抗排斥机制的进一步研究，将对发挥其在器官移植方面的优势有重大及深远意义。

通过查询资料，从黄杞叶中提取落新妇甙，一种方法是采用粉碎后的干叶，用60％乙醇回流提取3次，减压回收乙醇，浓缩物分别用石油醚、乙酸乙脂、正丁醇萃取；石油醚部分上硅胶柱用石油醚-乙酸乙脂梯度洗脱得到化合物，乙酸乙脂部分经Sephadex-LH2O(甲醇-水梯度洗脱)，对所得流份用反相硅胶柱色谱分离(甲醇-水洗脱)，干燥后得到一种含落新妇甙的提取物。此种方法得到落新妇甙，收率低、且落新妇甙中的有效成分含量不高，含有较多的杂质，其工艺方法急待改进。

发明内容

本发明需要解决的技术问题就在于克服现有技术中从黄杞叶中提取落新妇甙收率低、且落新妇甙中的有效成分含量不高，含有较多杂质的缺陷，提供一种从黄杞叶中提取落新妇甙的方法，本发明方法生产的落新妇甙含量高、避免了活性成分的损失、简化了生产工艺、缩短了生产周期。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

本发明一种从黄杞叶中提取落新妇甙的方法，它是一种以黄杞叶为原料，经提取溶媒提取、浓缩、分离纯化、结晶、干燥提取落新妇甙的方法。

本发明方法中所述黄杞叶可以为鲜黄杞叶和/或干黄杞叶。

本发明方法可以在提取前先将黄杞叶进行破碎，黄杞叶经破碎后有利于各种成分的充分溶出。

本发明所述提取方法为加热提取或超声波提取或微波提取。

本发明方法为加热提取时，提取次数是影响收率和含量的一个关键，一般提取次数为1～3次，根据试验，综合考虑提取设备使用空间的利用率及成品的有效物含量，提取次数最好为2次；溶媒用量为原料重量的3～15倍量，最佳为8倍；温度为40～100℃，提取时间为溶媒沸腾后1～3小时。

本发明方法所述超声波提取条件为工作频率15～80kHz，时间5～120min；微波提取条件为工作频率900～2500MHz，时间5～120min。

本发明所述黄杞叶醇提取后需要进行回收低碳醇处理，温度控制在60℃以下，真空度控制在0.06Mpa以上，回收低碳醇的药液与原料重量比应控制在1∶2～5之间。

本发明方法中所述提取溶媒为水或低碳醇。所述低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇或戊醇，所述低碳醇的重量浓度为1％～95％。

本发明所述分离纯化为柱层析分离纯化。

本发明所述柱层析分离纯化包括下列步骤：

1)提取液经浓缩(真空浓缩，温度控制在60摄氏度以下，真空度0.08MPa以上，浓缩至原来提取液体积的1/4-1/2)、回收低碳醇、离心(卧式离心机：4800r/min)后，直接进入大孔树脂柱，流速控制在0.5～1.5BV/hr左右；

2)用去离子水洗柱至流出液清澈，约3h；

3)用低碳醇洗柱至洗脱液澄清、透明，流速略慢于吸附的速度；

4)收集从大孔树脂柱中的流出的澄清、透明，略带醇味的洗脱液，用盐酸--镁粉作定性反应，收集洗脱液约是树脂量的1～3倍左右；

5)醇水洗脱液经浓缩(真空浓缩，温度控制在60摄氏度以下，真空度0.06～0.1MPa，浓缩至原来提取液体积的1/4-1/2)；

6)浓缩液放置24～72小时，析出大量的结晶，抽滤，用水洗至沉淀颜色为类白色，将沉淀物真空干燥，得落新妇甙。

其中所述低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇或戊醇，低浓度醇水溶液的浓度最低为体积浓度30％，高浓度醇水溶液的浓度最高为体积浓度95％；其中所述大孔树脂为以聚苯乙烯为骨架的材料，如DIAION品牌，型号为：D101、D130、AB-8或HP-20。

本发明方法生产的落新妇甙含量高，其重量含量为60％以上(HPLC法测定：High Performance Liquid Chromatography，高效液相色谱)，避免了活性成分的损失、提高了生产工艺、缩短了生产周期。

具体实施方式

实施例1

1)前处理：将鲜黄杞叶破碎；

2)提取：将原料与去离子水按1∶3比例混合装入提取罐，加热至沸腾后保持温度2小时，收取第一次提取料液，第二次提取再加入3倍量的去离子水，加热沸腾保温2小时，收取第二次提取料液。

3)减压浓缩：将提取液导入浓缩器中进行减压浓缩，温度控制在60摄氏度以下，真空度控制在0.06MPa以上。

4)离心：将浓缩后的提取液通过离心机离心。

5)浓缩、离心后的提取液直接进大孔树脂柱；大孔树脂柱为DIAION品牌，型号为D130。

6)用水洗柱至流出液清澈；

7)用乙醇洗柱至流出液无味；

8)收集从大孔树脂柱中的流出液，用盐酸--镁粉作定性反应；

9)洗脱液进行减压浓缩，浓缩至原料的一倍量左右；

10)浓缩液放置72小时，析出大量的结晶，抽滤，用水洗至沉淀颜色为类白色，将沉淀真空干燥，得落新妇甙。

实施例2

1)前处理：将拣选、剔除杂质后的干黄杞叶破碎。

2)提取：将合格的原料投入到洁净的提取罐中，加入10倍量65％(v/v)乙醇，第一次回流提取2h，从溶媒沸腾计时，控制温度80℃，保温到时，压出药液，第二次再加入8倍量65％(v/v)的乙醇回流提取3h，合并滤液；

3)回收乙醇：将提取的药液抽入浓缩罐中进行减压浓缩、回收乙醇，温度控制在60℃以下，真空度控制在0.06Mpa以上。回收至无醇味后，将药液压入储液罐；

4)加水，静置，冷却：回收乙醇的药液与原料比应控制在1∶4左右，不够则加水，静置，冷却；

5)离心：将冷却的药液用离心机离心，药液应是无任何沉淀物；

6)柱吸附：将离心后的药液进大孔树脂柱，树脂柱为DIAION品牌，型号为D101。

7)水洗：吸附完毕后，用去离子水进行水洗，水洗约3h左右。

8)洗脱：用60％(v/v)乙醇进行洗脱，收集略带醇味，且洗脱液澄清，透明，收集洗脱液约是树脂量的3倍左右；

9)浓缩：洗脱液进行减压浓缩，浓缩至原料的一倍量左右；

10)浓缩液放置48小时，析出大量的结晶，抽滤，用水洗至沉淀颜色为类白色，将沉淀真空干燥，得落新妇甙。

实施例3

1)前处理：将拣选、剔除杂质后的干黄杞叶和鲜黄杞叶破碎。

2)提取：将合格的原料与重量浓度为70％的乙醇按1∶8比例混合，进行超声波提取，提取条件为工作频率60kHz，时间90min，提取2次；

6)柱吸附：将离心后的药液进DIAION品牌，型号为AB-8的树脂柱；

7)水洗：吸附完毕后，用去离子水进行水洗，水洗约3h左右。

9)浓缩：洗脱液进行减压浓缩，浓缩至原料的一倍量左右；

实施例4

2)提取：将合格的原料与重量浓度为70％的乙醇按1∶8比例混合，进行微波提取，微波提取条件为工作频率900～2500MHz，时间5～120min，提取2次；

6)柱吸附：将离心后的药液进DIAION品牌，型号为HP-20的树脂柱；

7)水洗：吸附完毕后，用去离子水进行水洗，水洗约3h左右。

9)浓缩：洗脱液进行减压浓缩，浓缩至原料的一倍量左右；

Claims

1、一种从黄杞叶中提取落新妇甙的方法，其特征在于它是一种以黄杞叶为原料，经提取溶媒提取、浓缩、分离纯化提取落新妇甙的方法，提取物中落新妇甙重量含量为60％以上。

2、如权利要求1所述从黄杞叶中提取落新妇甙的方法，其特征在于：所述黄杞叶为鲜黄杞叶和/或干黄杞叶。

3、如权利要求1所述从黄杞叶中提取落新妇甙的方法，其特征在于：所述提取方法为加热提取或超声波提取或微波提取。

4、如权利要求3所述从黄杞叶中提取落新妇甙的方法，其特征在于：加热提取时提取溶媒为水或低碳醇，提取次数为1～3次，溶媒用量为原料重量的3～15倍量，温度为40～100℃，提取时间为溶媒沸腾后1～3小时。

5、如权利要求3所述从黄杞叶中提取落新妇甙的方法，其特征在于：超声波提取条件为工作频率15～80kHz，时间5～120min。

6、如权利要求3所述从黄杞叶中提取落新妇甙的方法，其特征在于：微波提取条件为工作频率900～2500MHz，时间5～120min。

7、如权利要求3-6之任一所述从黄杞叶中提取落新妇甙的方法，其特征在于：所述黄杞叶醇提取后进行回收低碳醇处理，温度控制在60℃以下，真空度控制在0.06Mpa以上，回收低碳醇的药液与原料重量比为1∶2～5。

8、如权利要求7所述从黄杞叶中提取落新妇甙的方法，其特征在于：所述低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇或戊醇。

9、如权利要求1所述从黄杞叶中提取落新妇甙的方法，其特征在于：所述分离纯化为柱层析分离纯化。

10、如权利要求9所述从黄杞叶中提取落新妇甙的方法，其特征在于：柱层析分离纯化包括下述步骤：

1)提取液经浓缩、回收低碳醇、离心后，直接进入大孔树脂柱，流速控制在0.5～1.5BV/hr左右；所述浓缩为真空浓缩，温度控制在60摄氏度以下，真空度0.08MPa以上，浓缩至原来提取液体积的1/4-1/2；所述离心采用卧式离心机，转速为4800r/min；

2)用去离子水洗柱至流出液清澈，时间为2.5-3.5h；

5)醇水洗脱液浓缩，所述浓缩为真空浓缩，温度控制在60℃以下，真空度为0.06～0.1MPa，浓缩至原来提取液体积的1/4-1/2；浓缩液放置24～72小时，析出大量的结晶，抽滤，用水洗至沉淀颜色为类白色，将沉淀物真空干燥。

11、如权利要求10所述的从黄杞叶中提取落新妇甙的方法，其特征在于：所述低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇或戊醇，低浓度醇水溶液的浓度最低为体积浓度30％，高浓度醇水溶液的浓度最高为体积浓度95％。

12、如权利要求10所述的从黄杞叶中提取落新妇甙的方法，其特征在于：所述大孔树脂为以聚苯乙烯为骨架的材料，型号为D101、D130、AB-8或HP-20。