CN111440221B - 一种以黄杞叶为原料制备得到的落新妇苷及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开的一种以黄杞叶为原料制备得到的落新妇苷及其制备方法，其方法包括以下步骤：将黄杞叶破碎成碎片，用乙酸乙酯进行多次微沸回流提取，合并提取液；回收提取液液中的乙酸乙酯，加去离子水，将提取液中残留的乙酸乙酯赶出，进行第一次结晶，过滤，得粗品；用乙醇将粗品溶解，加活性炭粉末，搅拌过滤，得滤液；将滤液过大孔吸附树脂柱，然后用乙醇洗脱，得流出液；在流出液中加乙酸乙酯，搅拌混匀，静置，取上清液，在上清液中加去离子水后，依次进行浓缩、第二次结晶，过滤，得晶体，洗涤，真空干燥，得产品。本发明提供的方法显著提高了落新妇苷的提取率和产品纯度；实现了低成本、快速、高效提取落新妇苷的目的，可用于工厂大量生产。

Description

一种以黄杞叶为原料制备得到的落新妇苷及其制备方法

技术领域

本发明涉及天然产物有效成份的提取技术领域，更具体地，涉及一种以黄杞叶为原料制备得到的落新妇苷及其制备方法。

背景技术

黄杞叶为胡桃科黄杞属植物黄杞(Engelhardia roxburghi-ana Wall)的干燥叶,主要分布在广东、广西、云南、福建等地,资源丰富。在广西等地,黄杞叶又被称为罗汉茶,具有清热解毒、生津止渴、解暑的功效，可以消除暑热、食滞、腹痛。落新妇苷、花旗松素和黄杞苷等二氢黄酮是黄杞叶中的主要活性成分，其中，落新妇苷的含量最高。现代研究表明，落新妇苷能够降低胆固醇，保护肝脏以及具有阵痛、抗水肿作用；落新妇苷还具有选择性免疫抑制等多种生物活性作用。

落新妇苷具有多种显著的生物学活性，包括抑制辅酶A还原酶，抑制醛糖还原酶，保护肝脏，镇痛，抗水肿等。近年又来有报道称落新妇苷有显著的选择性免疫抑制作用，且它的选择性作用与以往的免疫抑制剂相比具有明显优势，因此可以作为一种新的免疫抑制剂用于免疫相关疾病的治疗。

目前，在对黄杞叶落新妇苷的提取技术中，普遍存在着利用率低、制备产品纯度不高、技术工艺复杂、难以实现工业化生产等问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，以解决现有技术中存在的问题。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，包括以下步骤：

1)将原料黄杞叶破碎成碎片，用乙酸乙酯进行多次微沸回流提取，合并提取液；

2)回收提取液液中的乙酸乙酯，加去离子水，将提取液中残留的乙酸乙酯赶出，成为水相后，进行第一次结晶，过滤，得到粗品；

3)用乙醇将步骤2)所得粗品溶解，加入活性炭粉末，搅拌过滤，得滤液；

4)将步骤3)所得滤液过大孔吸附树脂柱，然后用乙醇洗脱，得到流出液；

5)在流出液中加入乙酸乙酯，搅拌混匀，静置，取上清液，在上清液中加去离子水后，依次进行浓缩、第二次结晶，过滤，得晶体，洗涤，真空干燥，即得产品。

优选的，步骤1)中，所述碎片为1～2mm；所述微沸回流提取的次数为3次，每次提取时，所述黄杞叶与乙酸乙酯的料液比为1g：5～6ml；提取时间为1.5～2.5小时。

优选的，步骤2)中，所述去离子水的加入量不高于1.5倍所述黄杞叶的重量；第一次结晶的温度为4～8℃，时间为7～8小时。

优选的，步骤3)中，所述粗品与所述乙醇的质量体积比为1g:5～7ml，所述乙醇的体积分数为50％。

优选的，步骤3)中，在加入所述活性炭粉末前，还包括将溶解粗品后的溶液水浴加热至60～65℃。

优选的，步骤3)中，所述活性炭粉末与所述粗品的质量比为2.5～3.5:100；所述搅拌时间为3～5分钟。

优选的，步骤4)中，所述大孔吸附树脂柱包括D101、AB-8和DA201；所述滤液过大孔吸附树脂柱速率为1.2～1.5Bv/h；所述乙醇洗脱的量为1.5～2Bv，洗脱速率为1.5～2Bv/h。

优选的，步骤5)中，所述流出液与所述乙酸乙酯的体积比为10:3；所述去离子水与所述乙酸乙酯的体积比为1:10；所述浓缩具体为真空浓缩回收乙酸乙酯。

优选的，步骤5)中，所述第二次结晶的温度为4～8℃，时间为4～5小时；所述洗涤为用5～15℃冷水冲洗过滤后得到的晶体；所述真空干燥的条件为真空度在-0.08～-0.1MPa之间，温度设定为60～65℃。

优选的，所述方法包括以下步骤：

1)将原料黄杞叶破碎成1～2mm碎片，用原料5倍量的乙酸乙酯进行3微沸回流提取，每次1.5小时，合并提取液；

2)回收提取液液中的乙酸乙酯，加不得高于原料1.5的去离子水，将提取液中残留的乙酸乙酯赶出，成为水相后，在4～8℃温度下结晶7～8小时，过滤，得到粗品；

3)用粗品6倍量的50％乙醇将粗品溶解，水浴加热至60～65℃后，加入粗品3％重量的活性炭粉末，搅拌3～5分钟后过滤，得到滤液；

4)将所得滤液以1.2～1.5Bv/h的速率过大孔吸附树脂，然后用1.5Bv50％的乙醇，以1.5～2Bv/h的速率洗脱，得到流出液；

5)在流出液中按照流出液与乙酸乙酯体积比为10:3的比例加入乙酸乙酯，搅拌混匀，静置，取上清液，在上清液中加入乙酸乙酯十分之一的去离子水，真空浓缩回收乙酸乙酯后在4～8℃环境下结晶4～5h，过滤，得到晶体，用5～15℃冷水冲洗晶体，最后真空干燥得到产品。

本发明还提供一种上述任一所述方法制备得到的落新妇苷。

本发明的有益效果为：

本发明主要通过乙酸乙酯提取、活性炭除杂、大孔吸附树脂除杂、低温结晶、萃取的方式提取纯化落新妇苷，并尽量减少损失，使得落新妇苷的提取收率可达75％以上，纯度可达95％以上；显著提高了落新妇苷的提取率和产品纯度；实现了低成本、快速、高效提取落新妇苷的目的，可用于工厂大量生产。

具体实施方式

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

实施例1

以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，包括以下步骤：

(1)将黄杞叶干叶500KG原料破碎成1～2mm碎片；加入2500L乙酸乙酯微沸回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液；

(2)回收提取液中的乙酸乙酯，加入500L去离子水，将提取液中残留的乙酸乙酯赶出，成为水相，在5℃温度下进行第一步结晶，结晶时长8h，过滤得粗品，湿重70KG左右；

(3)将粗品用420L50％乙醇溶解，水浴加热至65℃后加入2.1KG活性炭粉末，搅拌3分钟后过滤，得滤液；

(4)将滤液过1m3AB-8树脂柱，流速控制在1200L/h，用1500L50％乙醇以流速为1.5Bv/h洗柱，得到流出液1920L；

(5)按流出液与乙酸乙酯体积比为10:3的比例加入乙酸乙酯576L，充分搅拌，静置，取上清液乙酸乙酯；在乙酸乙酯中加入57.6L去离子水，真空浓缩回收乙酸乙酯，在5℃条件下结晶4h，过滤，过滤时用20L 5℃冷水冲洗晶体，将冲洗后的晶体在真空度在为-0.09MPa，温度为65℃条件下干燥完全，得产品约30KG，其落新妇苷的含量和收率等参数如下表1所示。

实施例2

以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，包括以下步骤：

(1)将黄杞叶干叶500KG原料破碎成1～2mm碎片；加入3000L乙酸乙酯微沸回流提取3次，每次2小时，合并提取液；

(2)回收提取液中的乙酸乙酯，加入600L去离子水，将提取液中残留的乙酸乙酯赶出，成为水相，在6℃温度下进行第一步结晶，结晶时长7h，过滤得粗品，湿重70KG左右；

(3)将粗品用500L50％乙醇溶解，水浴加热至60℃后加入2KG活性炭粉末，搅拌5分钟后过滤，得滤液；

(4)将滤液过1m³D101树脂柱，流速控制在1300L/h，用1500L50％乙醇以流速为1.7Bv/h洗柱，得到流出液2000L；

(5)按流出液与乙酸乙酯体积比为10:3的比例加入乙酸乙酯600L，充分搅拌，静置，取上清液乙酸乙酯；在乙酸乙酯中加入60L去离子水，真空浓缩回收乙酸乙酯，在6℃条件下结晶5h，过滤，过滤时用20L10℃冷水冲洗晶体，将冲洗后的晶体在真空度在为-0.08MPa，温度为62℃条件下干燥完全，得产品约30KG，其落新妇苷的含量和收率等参数如下表1所示。

实施例3

以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，包括以下步骤：

(1)将黄杞叶干叶500KG原料破碎成1～2mm碎片；加入2800L乙酸乙酯微沸回流提取3次，每次2.5小时，合并提取液；

(2)回收提取液中的乙酸乙酯，加入550L去离子水，将提取液中残留的乙酸乙酯赶出，成为水相，在7℃温度下进行第一步结晶，结晶时长6h，过滤得粗品，湿重70KG左右；

(3)将粗品用480L50％乙醇溶解，水浴加热至62℃后加入2.4KG活性炭粉末，搅拌4分钟后过滤，得滤液；

(4)将滤液过1m³AB-8树脂柱，流速控制在1500L/h，用1500L50％乙醇以流速为2.0Bv/h洗柱，得到流出液1980L；

(5)按流出液与乙酸乙酯体积比为10:3的比例加入乙酸乙酯594L，充分搅拌，静置，取上清液乙酸乙酯；在乙酸乙酯中加入59.4L去离子水，真空浓缩回收乙酸乙酯，在7℃条件下结晶4.5h，过滤，过滤时用20L15℃冷水冲洗晶体，将冲洗后的晶体在真空度在为-0.1MPa，温度为63℃条件下干燥完全，得产品约30KG，其落新妇苷的含量和收率等参数如下表1所示。

对比例1

以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，包括以下步骤：

(1)将黄杞叶干叶500KG原料破碎破碎成1～2mm碎片；加入2500L80％乙醇溶液微沸回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液；

(2)提取液回收乙醇，加入100L去离子水，将残留乙醇赶出，成为水相，在5℃温度下进行第一步结晶，结晶时长8h，过滤得粗品，湿重60KG左右；

(3)将粗品用420L50％乙醇溶解，水浴加热至65℃后加入2.1KG活性炭粉末，搅拌3分钟后过滤，得滤液；

(4)将滤液过1m³AB-8树脂柱，流速控制在1200L/h，用1500L50％乙醇以流速为1.5Bv/h洗柱，得到流出液1920L；

(5)按流出液与乙酸乙酯体积比为10:3的比例加入乙酸乙酯576L，充分搅拌，静置，取上清液乙酸乙酯；在乙酸乙酯中加入57.6L去离子水，真空浓缩回收乙酸乙酯，在5℃条件下结晶4h，过滤，过滤时用20L 5℃冷水冲洗晶体，将冲洗后的晶体在真空度在为-0.09MPa，温度为64℃条件下干燥完全，得产品约25KG，其落新妇苷的含量和收率等参数如下表1所示。

对比例2

以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，包括以下步骤：

(1)将黄杞叶干叶500KG原料破碎破碎成1～2mm碎片；加入5000L乙酸乙酯室温浸提8小时，得到提取液；

(2)提取液回收乙酸乙酯，加入500L去离子水，将残留乙酸乙酯赶出，成为水相，在5℃温度下进行第一步结晶，结晶时长8h，过滤得粗品，湿重50KG左右；

(3)将粗品用350L50％乙醇溶解，水浴加热至65℃后加入2KG活性炭粉末，搅拌3分钟后过滤，得滤液；

(4)将滤液过1m³AB-8树脂柱，流速控制在1200L/h，用1500L50％乙醇以流速为1.5Bv/h洗柱，得到流出液1850L；

(5)按流出液与乙酸乙酯体积比为10:3的比例加入乙酸乙酯555L，充分搅拌，静置，取上清液乙酸乙酯；在乙酸乙酯中加入55L去离子水，真空浓缩回收乙酸乙酯后，在5℃条件下结晶4h，过滤，过滤时用20L 5℃冷水冲洗晶体，将冲洗后的晶体在真空度在为-0.09MPa，温度为65℃条件下干燥完全，得产品约18KG，其落新妇苷的含量和收率等参数如下表1所示。

对比例3

以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，包括以下步骤：

(1)在黄杞叶完整叶500KG原料中加入5000L乙酸乙酯，微沸回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液；

(2)提取液回收乙酸乙酯，加入500L去离子水，将残留乙酸乙酯赶出，成为水相，在5℃温度下进行第一步结晶，结晶时长8h，过滤得粗品，湿重50KG左右；

(3)将粗品用350L 50％乙醇溶解，水浴加热至65℃后加入2KG活性炭粉末，搅拌3分钟后过滤，得滤液；

(4)将滤液过1m³AB-8树脂柱，流速控制在1200L/h，用1500L50％乙醇以流速为1.5Bv/h洗柱，得到流出液1850L；

(5)按流出液与乙酸乙酯体积比为10:3的比例加入乙酸乙酯550L，充分搅拌，静置，取上清液乙酸乙酯；在乙酸乙酯中加入55L去离子水，真空浓缩回收乙酸乙酯，在5℃条件下结晶4h，过滤，过滤时用20L 5℃冷水冲洗晶体，将冲洗后的晶体在真空度在为-0.08MPa，温度为65℃条件下干燥完全，得产品约20KG，其落新妇苷的含量和收率等参数如下表1所示。

对上述实施例1-3和对比例1-3所得产品进行检测分析，结果如下表1所示，其中，落新妇苷含量通过高效液相色谱测量得到，落新妇苷收率按照以下公式计算：

落新妇苷收率(％)＝[(产品重量(KG)×产品中落新妇苷含量(％))/(原料重量(KG)×原料中落新妇苷含量(％))]×100％

表1不同实施例和对比例原料参数和所得产品的参数

从表1可以看出，比例1相比实施例1，由于选用高纯度乙醇回流提取黄杞叶，增加了弱极性物质溶出，加大了后续脱活性炭及过大孔树脂吸附柱的压力，导致所得产品颜色偏黄，产品中落新妇苷含量仅＞80％，收率＞50％，含量和收率均偏低。

对比例2相比实施例1，选用乙酸乙酯室温浸提黄杞叶，使得产品落新妇苷含量＞90％，收率仅＞40％，无法达到理想收率，效率低。

对比例2相比实施例1，选用黄杞叶完整叶做原料，因叶片未破碎，使原料所占空间变大，提取溶媒大量增加，且产品落新妇苷含量＞90％，收率仅＞40％，收率低。

相比于对比例1-3，本发明提供的方法，所得产品落新妇苷的提取收率可达75％以上，纯度可达95％以上，显著提高了落新妇苷的提取率和产品纯度；实现了低成本、快速、高效提取落新妇苷的目的，可用于工厂大量生产。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (9)

1.一种以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将原料黄杞叶破碎成碎片，用乙酸乙酯进行多次微沸回流提取，合并提取液；

2)回收提取液中的乙酸乙酯，加去离子水，将提取液中残留的乙酸乙酯赶出，成为水相后，进行第一次结晶，过滤，得到粗品；第一次结晶的温度为4～8℃，时间为7～8小时；

3)用乙醇将步骤2)所得粗品溶解，加入活性炭粉末，搅拌过滤，得滤液；

4)将步骤3)所得滤液过大孔吸附树脂柱，然后用乙醇洗脱，得到流出液；

5)在流出液中加入乙酸乙酯，搅拌混匀，静置，取上清液，在上清液中加去离子水后，依次进行浓缩、第二次结晶，过滤，得晶体，洗涤，真空干燥，即得产品。

2.根据权利要求1所述的以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，其特征在于，步骤1)中，所述碎片为1～2mm；所述微沸回流提取的次数为3次，每次提取时，所述黄杞叶与乙酸乙酯的料液比为1g：5～6ml；提取时间为1.5～2.5小时。

3.根据权利要求1所述的以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，其特征在于，步骤2)中，所述去离子水的加入量不高于1.5倍所述黄杞叶的重量。

4.根据权利要求1所述的以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，其特征在于，步骤3)中，所述粗品与所述乙醇的质量体积比为1g:5～7ml，所述乙醇的体积分数为50％。

5.根据权利要求1所述的以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，其特征在于，步骤3)中，在加入所述活性炭粉末前，还包括将溶解粗品后的溶液水浴加热至60～65℃；所述活性炭粉末与所述粗品的质量比为2.5～3.5:100；所述搅拌时间为3～5分钟。

6.根据权利要求1所述的以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，其特征在于，步骤4)中，所述滤液过大孔吸附树脂柱速率为1.2～1.5Bv/h；所述乙醇洗脱的量为1.5～2Bv，洗脱速率为1.5～2Bv/h。

7.根据权利要求1所述的以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，其特征在于，步骤5)中，所述流出液与所述乙酸乙酯的体积比为10:3；所述去离子水与所述乙酸乙酯的体积比为1:10；所述浓缩具体为真空浓缩回收乙酸乙酯。

8.根据权利要求1所述的以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，其特征在于，步骤5)中，所述第二次结晶的温度为4～8℃，时间为4～5小时；所述洗涤为用5～15℃冷水冲洗过滤后得到的晶体；所述真空干燥的条件为真空度在-0.08～-0.1MPa之间，温度设定为60～65℃。

9.根据权利要求1所述的以黄杞叶为原料制备落新妇苷的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)将原料黄杞叶破碎成1～2mm碎片，用原料5倍量的乙酸乙酯进行3次微沸回流提取，每次1.5小时，合并提取液；

2)回收提取液中的乙酸乙酯，加不得高于原料1.5倍的去离子水，将提取液中残留的乙酸乙酯赶出，成为水相后，在4～8℃温度下结晶7～8小时，过滤，得到粗品；

3)用粗品6倍量的50％乙醇将粗品溶解，水浴加热至60～65℃后，加入粗品3％重量的活性炭粉末，搅拌3～5分钟后过滤，得到滤液；

4)将所得滤液以1.2～1.5Bv/h的速率过大孔吸附树脂，然后用1.5Bv50％的乙醇，以1.5～2Bv/h的速率洗脱，得到流出液；

5)在流出液中按照流出液与乙酸乙酯体积比为10:3的比例加入乙酸乙酯，搅拌混匀，静置，取上清液，在上清液中加入乙酸乙酯十分之一的去离子水，真空浓缩回收乙酸乙酯后在4～8℃环境下结晶4～5h，过滤，得到晶体，用5～15℃冷水冲洗晶体，最后真空干燥得到产品。