CN1732965A - 艾滋病防治药物 - Google Patents

Abstract

本发明是一种艾滋病防治药物，是将下述重量份配比的原料混合，采用常规工艺制成胶囊、丸剂、片剂、口服液：甘草提取物甘草甜素140份，黄芩提取物黄芩甙150份～190份，贯叶连翘提取物金丝桃素120份～160份。本方面的优点在于产品的有效成分明确且显效快，有利于控制生产、产品质量稳定；产品合理的配方、精确的剂量和中药现代化的生产工艺；产品具有明显的高效、无毒、价廉的优势。

Description

艾滋病防治药物

所属技术领域：本发明属于医药制品领域，尤其是涉及一种艾滋病防治药物。

技术背景：艾滋病(AIDS)的迅速蔓延，不仅对人民的生命和健康构成严重威胁，而且严重阻碍经济及社会发展。美籍华人科学家何大一教授发明的联合药物疗法“鸡尾酒疗法”曾轰动一时，虽然对AIDS病人有确切的疗效，但因毒副作用较大、实用范围小、对HIV病毒(人类免疫缺陷病毒)携带者和早期AIDS患者不宜使用，更重要的是，这种治疗每年要花天文数字般的费用。目前AIDS药物主要针对HIV复制过程的关键酶-HIV逆转录酶(HIVRT)这一类的药物有六个品种，即齐多夫定、去肌苷、扎西他滨、司他夫定、拉米夫定及阿巴卡韦，其中齐多夫定是第一个上市的抗AIDS药物，也是治疗AIDS的首选药。另外美国默克公司的佳息患、施多宁，三共和华纳·兰伯特公司的R-escriptor，最早用于治疗艾滋病的AZT，美国食品及药物管理局(FDA)批准的双脱氧肌苷，与AZT合用的双脱氧胞苷，双脱氧双去氢胸苷等。这些药物一般用于艾滋病晚期，虽有一定疗效，但问题在于不能治愈AIDS患者，价格昂贵，有较大毒副作用和出现耐药变异病毒，且多数仅为短期有效，不能满足长期及终生用药的要求。应用天然药物治疗AIDS，具有疗效确切、副作用小、不容易产生耐药性、价格低廉、适合长期服用及至终生服用等方面的优势，是一个很有前途和价值的研究领域，为世界各国所瞩目。目前，复方小柴胡汤、理中汤、公明抗HIV、复方SH、乾坤宁、908口服掖、新血片等用于AIDS患者临床研究，实践证明，这些复方能激发人体T细胞、NK细胞、增强人体免疫功能，有的还能抑制HIV病毒。HIV病毒由三部分构成，酶、蛋白和基因。目前抗ADIS药物主要针对HIV复制过程的关键酶-HIV逆转录酶(HIVRT)及HIV蛋白酶(HIVPR)，前者又分为核苷类HIVRT抑制药(NRTI)及非核苷类HIVRT抑制药(NNRTI)。比如施多宁，其着力点为酶，而佳息患着力点为蛋白。在第十三届非洲艾滋病与性病国际会议中，中国科学家指出，面对艾滋病的蔓延，有着悠久历史的中医药可以充分发展标本兼治的特点。再者，中文医网报告，穿心莲、黄莲、淫羊藿、螃蜞菊、金银花、夏枯草、紫花地丁、贯众和苦参均有抑制艾滋病病毒的作用。但这些研究都不够成熟，有些仍需与西药合制，或只是直接从中药化合物中寻求疗效，中医方解渗透不够

发明内容：本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种高效、安全、价廉的艾滋病防治药物。

本发明的目的是通过下述方案来实现的：

本发明的艾滋病防治药物是将下述重量份配比的原料混合，采用常规工艺制成胶囊、丸剂、片剂、口服液：甘草提取物甘草甜素140份，黄芩提取物黄芩甙150份～190份，贯叶连翘提取物金丝桃素120份～160份。

上述甘草甜素提取物原料较好是采自中国北方，经过粉碎、乙醇浸提、萃取、浓缩和喷雾干燥等工艺加工而成，甘草甜素提取物的主要活性成分为甘草甜素，颜色呈白色，含量在95％以上，其余指标应符合《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》。

上述黄芩提取物原料较好是采自中国西部地区，经过粉碎、乙醇浸提、浓缩和喷雾干燥等工艺加工而成，提取物的颜色呈淡黄色，其活性成分黄芩甙含量在95％以上，其余指标应符合《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》。

贯叶连翘提取物原料较好是采自中国西北地区，经过粉碎、乙醇浸提、萃取、浓缩、柱过滤和喷雾等工艺加工而成，贯叶连翘提取物又称金丝桃素提取物的颜色呈黑色，其活性成分金丝桃素的含量较好在0.3～1.2％之间，其余指标应符合《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》。

本发明是发明人通过多年反复实践总结出来的科学实用的技术方案，本发明的优点在于：其一，产品的有效成分明确且显效快，有利于控制生产、产品质量稳定；其二，产品合理的配方、精确的剂量和中药现代化的生产工艺；其三，产品具有明显的高效、无毒、价廉的优势。

本发明的技术方案中，甘草甜素提取物的主要活性成分甘草甜素(包括甘草酸单钾盐、铵盐、钠盐等)可抑制HIV感染细胞中的病毒抗原的表面及HIV复制，可抑制HIV斑的形成和感染细胞的变性，从而有效地抑制HIV的繁殖，抑制率达98％。通过观察感染艾滋病的细胞中艾滋病毒的增殖情况，发现0.5mg/ml甘草甜素溶液可使98％以上的病毒增殖受到抑制；用0.125mg/ml的甘草甜素溶液，可使50％的病毒增殖受到抑制。甘草甜素对HIV具有非常明显的解毒增效作用。

甘草甜素的分子式结构如右图：

黄芩甙有较好的抑制逆转录酶(RT)作用，静滴黄芩甙可使P24r抗原降低，CD4细胞上升。黄芩甙具有广谱抗菌、消炎作用。

黄芩甙的分子式结构如右图：

金丝桃素在0.5g即可抑制EIAV的复制99.9％，而在遗传学上EIAV与HIV相似，实验证明，对HIV逆转录酶病毒有以下作用：干扰病毒的浸染和(或)传播，通过阻断HIV病毒的脱壳，出芽和装配而干扰逆转录酶病毒的复制；可有效地抑制病毒释放RT，但对RT无直接作用；而且，它可通过血脑屏障与西药协同合作。

金丝桃素的分子式结构如右图：

经中国中医药研究院对HIV-1作用的实验研究显示：本发明的艾滋病防治药物在31.25ug/ml～500ug/ml剂量范围内，对HIV-1感染细胞有一定的保护作用，表明其在此剂量范围内，对HIV-1的复制有抑制作用，抑制率为50.22％～77.61％，其50％有效浓度为28.98ug/ml，由于本发明的艾滋病防治药物对细胞的毒性很低，从而治疗指数很高，达到了66，说明本发明的艾滋病防治药物具有较强的抗HIV-1作用。通过初步验证，本发明的艾滋病防治药物对AIDS患者及HIV病毒携带者有理想治疗效果，产品通过干扰病毒的浸染和(或)传播，通过阻断HIV病毒的脱壳，出芽和装配而干扰逆转录酶病毒的复制；可有效地抑制病毒释放RT，能明显抑制HIV复制、抑制巨嗜细胞的形成、阻滞HIV的释放，并通过吞噬HIV的自然杀伤细胞(NK)的增加，从而达到提高人体免疫力、持续增加T4细胞量的作用。本发明的艾滋病防治药物不仅发力于酶、蛋白，而且着力于HIV病毒内部，从而破坏HIV病毒的基因组成和排列。这是本发明的艾滋病防治药物的技术关键，从而使其更具先进性。

与国外技术相比，本发明的艾滋病防治药物的技术源自中国有着数千年悠久历史的医术。艾滋病是发现才几十年的一种病毒性传染病，虽然中医历代文献中尚无其名，但根据其传播方式、流行情况、发病特点和临床表现等来看，与中医的某些病症病名，如瘟疫、虚痨等有类似之处，这种相关性为中医治疗艾滋病提供了理论依据和诊治经验。中医强调的是机体对致病因子的反应性和适应性，以提高机体免疫功能、阻断病情发展、延缓发病或减轻症状，从而提高患者生存质量、延长患者寿命。此外，辨证施治、因人而异是中医学的精髓，这对艾滋病患者也具有重要意义。本发明的艾滋病防治药物正是掌握了艾滋病病理、医理、药理的统一性研制出来的，为临床提供了一种高效、安全、价廉的抗艾(HIV)治疗药物，以其疗效独特，毒副作用低，价格适中的特点将在中医药领域内占有一席地位，为众多的艾滋病患者所接受；不仅为我国艾滋病患者解除疾苦，而且该胶囊技术含量高、有效成分确切、质量可控制，为走向国际市场提供了有利保证，市场空间不可估量，产业化前景亦十分巨大。

具体实施方式：下面是本发明的实施例。

实施例一

采用常规工艺将甘草甜素提取物140千克、黄芩甙提取物150千克、金丝桃素提取物160千克与乙醇混合，喷雾干燥，粉碎制粒，按每粒胶囊净重450毫克计装胶囊。

实施例二

采用常规工艺将甘草甜素提取物140千克、黄芩甙提取物190千克、金丝桃素提取物120千克与乙醇混合，喷雾干燥，粉碎制粒，按每粒胶囊净重450毫克计装胶囊。

实施例三

采用常规工艺将甘草甜素提取物140千克、黄芩甙提取物170千克、金丝桃素提取物145千克与乙醇混合，喷雾干燥，粉碎制粒，按每粒胶囊净重450毫克计装胶囊。

实施例四

将甘草甜素提取物140千克、黄芩甙提取物175千克、金丝桃素提取物150千克提取物与乙醇混合，喷雾干燥，粉碎制粒，按每粒胶囊净重450毫克计，采用常规工艺装胶囊。

实施例五

将甘草甜素提取物140千克、黄芩甙提取物180千克、金丝桃素提取物160千克混合，采用常规工艺制成片剂。

实施例六

将甘草甜素提取物140千克、黄芩甙提取物170千克、金丝桃素提取物155千克混合，采用常规工艺制成口服液、丸剂或压片。

下面为本发明的疗效情况简介：

一、材料和方法

细胞：MT-4细胞，由中国预防医学科学院病毒学研究所提供。

病毒：人类免疫缺陷病毒I型(HIV-1)，感染滴度为2×10⁴CCID₅₀，由中国预防医学科学院病毒学研究所提供。

 药物：按实施例一～六制备。

试剂：所有的噻唑兰即MTT

(3-(4，5-dimethylthylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide)，为美国进口试剂，以pH7.2PBS配制成0.7mg/ml溶液置4℃冰箱保存备用。其他如RPMI1640细胞培养液，96孔细胞培养板等，均为美国进口试剂和材料。

仪器：测定光密度所用酶标仪为法国生产的LP 400全自动酶标仪。

二、步骤：

1.药物对实验所用MT-4细胞的毒性作用

1)向全板各孔加入100ul含10％胎牛血清的1640细胞培养液；向第1列4孔加入药样100ul，用多头加样器吹打混匀，吸取100ul下移第2列，混匀，以此类推直至最后1列，弃去100ul，使各列呈2倍梯度稀释。留1列不加药作正常细胞对照。

2)将生长旺盛的MT-4细胞悬液100ul加入板中各孔，使每孔中含有10⁴个细胞。

3)置细胞板于37℃5％CO₂孵箱中，培养5天。

4)MTT染色试验(方法同下所述)。

5)计算药物对MT-4细胞的50％毒性浓度CC₅₀(方法见后)。

2.药物对HIV-1的作用

1)药样2倍稀释方法同上，设细胞对照和病毒对照。

2)将生长旺盛的MT-4细胞悬液50ul加入板中各孔，使每孔中10⁴含有个细胞。

3)将40TCID₅₀的HIV-1病毒液50ul，加入除正常细胞对照外的各孔中，置试验细胞板于37℃ 5％ CO₂孵箱中，培养5天后，进行MTT染色。

3.MTT染色试验：MTT试验的原理是，黄色的MTT被代谢旺盛的活细胞线粒体脱氢酶还原成兰色formazan的结晶，溶解后可用分光光度计测量光密度(OD)值，其兰色越深，OD值就越高，反映出活细胞的量就越多，因而可求出药物对病毒感染细胞的保护率。

1)用多头加样器向细胞板各孔加入30ulMTT溶液，加盖置于避光的37℃ 5％CO₂孵箱中培养3小时。

2)从培养箱中取出细胞板用8道加样器从每孔中移去170ul混合液，注意吸取时不得带出下部含有formazan结晶的MT-4细胞部分。

3)用多道加样器向各孔中加入100ul二甲基亚砜(DMSO)，以溶解formazan结晶，轻摇10分钟，使结晶完全溶解。

4)用酶标仪以550nm和625nm双波长读取吸收值(OD)，打印出结果。

5)结果计算：首先分别计算出各稀释度OD均值和标准差，再以下式计算各稀释度药物对HIV感染细胞的保护率：

达到50％保护的剂量，为50％有效剂量(ED₅₀)，或50％有效浓度(EC₅₀)。关于ED₅₀或EC₅₀的计算，可根据各稀释度的保护率，利用正规机率单位法(Bliss法)计算ED₅₀或EC₅₀的统计程序求出。对病毒感染细胞避免发生细胞病变(CPE)的保护率，就是对病毒感染细胞发生CPE的抑制率，即抑制率＝保护率。药物对细胞毒性CC₅₀的计算同EC₅₀，只是上述保护率公式中的HIV感染对照OD值应代入0。

三、实验结果

1.药物对细胞的毒性作用

按上述方法，将药物用1640液稀释若干浓度，测定其对实验所用MT-4细胞的50％毒性浓度，结果如表1。

       表1    药物对MT-4细胞的50％毒性浓度测定。

药物浓度(ug/ml)	OD均值	标准SD	存活细胞(％)
				50025012562.5Cell Ctrl	0.18150.19800.20800.22150.2149	0.03050.02150.0090.0.02590.0136	84.4792.1596.80103.08

以Bless法求得药物对MT-4细胞的50％毒性浓度CC₅₀＝1976.ug/ml。

2.药物对HIV-1感染细胞的保护作用

将药物用1640液配制成亚毒性浓度以下的若干个浓度，进行抗HIV-1实验。方法如上述，结果见表2。

        表2    药物对HIV-1感染细胞的保护作用

药物浓度(ug/ml)	OD均值	标准SD	保护率(％)(抑制率)
				50025012562.531.2515.63细胞对照病毒对照	0.10780.09050.11150.09730.09250.08230.12870.0520	0.01020.02020.03500.01470.00660.01240.01110.0094	72.7250.2277.6159.0252.8339.46

表中可见，药物的抑制率为50.22％～77.61％；以Biss法求得其抑制HIV-1的半数有效浓度EC₅₀＝28.98ug/ml，其治疗指数TI＝CC₅₀/EC₅₀＝1916.6/28.98＝66。

四、结论

以上实验结果显示，药物在31.25ug～500ug/ml剂量范围内，对HIV-1感染细胞有一定的保护作用，表明其在此剂量范围内，对HIV-1复制有抑制作用，抑制率为50.22％～77.61％，其50％有效浓度为28.98ug/ml，由于药物对细胞的毒性很低，从而治疗指数很高，达到了66，说明该药物具有较强的抗HIV-1作用。

Claims (1)

1、一种艾滋病防治药物，其特征在于：是将下述重量份配比的原料混合，采用常规工艺制成胶囊、丸剂、片剂、口服液：甘草提取物甘草甜素140份，黄芩提取物黄芩甙150份～190份，贯叶连翘提取物金丝桃素120份～160份。