CN1723956A - 一种治疗慢性胃炎、胃癌的药物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗慢性胃炎、胃癌的药物及其制备方法。本发明药物，含有桦褐孔菌的水提取物，所述水提取物是将桦褐孔菌子实体用水在80－90℃下回流提取得到的。其制备方法包括以下步骤：1)将粉碎桦褐孔菌子实体用水在80－90℃下回流，得到水提取液，干燥得到水提取物；2)将步骤1)所剩桦褐孔菌子实体用乙醇在70－80℃下回流，得到乙醇提取液，蒸干溶剂得到乙醇提取物；3)将步骤1)所得水提取物与步骤2)所得乙醇提取物按重量份数比1.5－2.5∶1混合，得到所述药物。本发明药物能有效提高机体免疫力，且没有任何毒副作用；对胃炎、胃癌等具有显著的疗效。本发明药物原料来源广泛，制备方法简单，成本低廉，具有广泛的临床实用价值和经济价值。
Description
技术领域
本发明涉及中药及其制备方法，特别是涉及一种治疗慢性胃炎、胃癌的药物及其制备方法。
背景技术
胃癌是世界上发病率最高的恶性肿瘤之一，多发生于社会经济水平较差地区或喜食腌制食品的人群。目前，胃癌的死亡率已居于我国恶性肿瘤之首，有效地防治胃癌前期病变，阻断其向癌发展，是预防胃癌、减少其发病率的根本措施和手段。研究表明，浅表性胃炎、萎缩性胃炎患者胃癌的发病率危险性显著增加。其中，萎缩性胃炎伴不完全型肠化生和中、重度异性增生为真正的癌前病变已是不争的事实。胃粘膜发生癌变有一个演变的过程，即：慢性胃炎演变为胃粘膜萎缩，再演变为肠化生，再演变为异型增生，再演变为胃癌。现代医学认为，胃癌前期病变与环境、免疫力下降、慢性酒精中毒、胆汁返流等因素有关。癌基因激活和抑癌基因的失活是肿瘤发生的分子基础，其中C-Ha-ras，cerb β-2，hast，EGFP等多种癌基因的激活和抑癌基因P53失活参与了胃癌的形成和发展。有关胃癌成因现代医学还认为，胃炎的改变与幽门螺旋杆菌(HP)的感染程度成正比，异型增生与炎症或幽门螺旋杆菌的感染有关。这是因为HP的存在引起胃粘膜炎症反应，反复刺激而致粘膜上皮发生异型增生。有关慢性胃炎目前西医缺乏理想的治疗方法。对于胃癌西医学主要采用手术，放疗、化疗等方法治疗，虽能取得一定的疗效，但不少患者待临床诊断明确时，已失去了手术治疗的较佳时机，只能依靠非手术治疗。现代放、化疗对骨髓免疫功能、肝肾功能等副作用较大，以致不少病人难以接受和坚持。中医药在该类疾病的治疗上已显示了独特的作用和优势。我国制药企业根据传统方药研制出多种中成药如胃萎安冲剂、平萎方、消胃炎散、化生平及防变灵I号等。这些药物对慢性胃炎的有效率均在80％以上。如陈炳初的平萎消异汤(黄芪、当归、川弓、丹参银花、黄连、莪术、徐长卿、肿节风片)在79例的临床治疗中总有效率为96.2％，抗肠化生率为76.71，抗异型增生率88.88％，抗腺体萎缩率73.2％。然而，上述中成药的组方十分复杂，其中有一些对人体有毒副作用，由于该类疾病的一个疗程一般在3-5个月，如此长期用药会对机体产生毒副作用。
桦褐孔菌(白桦茸)(Inonotus obliquus)属担子菌亚门、层菌纲、非褐菌目、多孔菌科、褐卧孔菌属，是一种生于桦树上的药用真菌，其子实体为黑色块状，主要分布于俄罗斯北部、北欧、日本(北海道)，我国的长白山和大兴安岭等北纬40°-50°的地区。该真菌在俄罗斯民间用来治疗多种疾病，俄罗斯Komsomlshi制药公司生产的桦褐孔精粉对糖尿病有显著的疗效，长期的动物实验及临床实验表明使用桦褐孔菌无任何毒副作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种疗效较高的治疗慢性胃炎、胃癌的药物及其制备方法。
本发明所提供的治疗慢性胃炎、胃癌的药物，它的活性成分是桦褐孔菌的水提取物，所述水提取物是将桦褐孔菌子实体用水在80-90℃下回流提取得到的。。
为了加强药物的疗效，药物中还可以含有桦褐孔菌的乙醇提取物，所述乙醇提取物是将桦褐孔菌子实体用乙醇在70-80℃下回流提取得到的。一般情况下采用水提后剩余的桦褐孔菌子实体残渣即可，乙醇的浓度以80-100％为宜。所述桦褐孔菌的水提取物与所述桦褐孔菌的乙醇提取物的重量份数比为1.5-2.5∶1。
在需要的时候，本发明的药物中还可以添加各种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等，必要时还可以加入香味剂、甜味剂等。
本发明药物的用量一般为20-30mg/公斤体重/天，3个月为一疗程。
本发明药物的制备方法，包括以下步骤：1)将粉碎桦褐孔菌子实体用水在80-90℃下提取，得到水提取液，干燥得到水提取物；2)将步骤1)所剩桦褐孔菌子实体用乙醇在70-80℃下回流，得到乙醇提取液，蒸干溶剂得到乙醇提取物；3)将步骤1)所得水提取物与步骤2)所得乙醇提取物按重量比1.5-2.5∶1混合，得到所述药物。
其中，步骤2)所述乙醇的体积百分浓度通常为80-100％。
各步提取过程可以采用多次提取，或者延长提取时间等方式来提高提取的得率。
本发明以桦褐孔菌子实体的水提取物为主体，佐以一定量的桦褐孔菌子实体乙醇提取物作为治疗慢性胃炎、胃癌的药物的活性成分，能有效提高机体免疫力，且没有任何毒副作用；该药物的动物实验和临床实验证实该药物对胃炎、胃癌等具有显著的疗效。本发明药物原料来源广泛，制备方法简单，成本低廉，具有广泛的临床实用价值和经济价值。
附图说明
图1为本发明药物对小鼠淋巴细胞增殖曲线
图2为本发明药物对小鼠T淋巴细胞生成IL-2的影响曲线
图3为本发明药物对荷瘤小鼠NK细胞活性的影响图
图4为本发明药物对S-180肉瘤的抑制作用图
具体实施方式
实施例1、本发明药物的制备
1)将桦褐孔菌子实体充分粉碎后，用90℃水提取48小时，其间每两小时收集一次提取液，合并提取液，冷冻干燥得黑色粉末，为水提取物，提取得率为46％；
2)将水提取后的子实体以95％食用乙醇在70℃回流提取10次，每次2小时，合并提取液，真空回收溶剂得到乙醇提取物，提取得率为10％；
3)将乙醇提取物和水提取物以1∶2的重量份数比混合，按常规方法制成片剂，每片60mg，其中含乙醇提取物20mg，水提取物40mg。
实施例2、本发明药物的制备
药物制备方法同实施例1，不同之处在于步骤1)水提取过程的温度为80℃；步骤2)所用乙醇浓度为80％，提取温度为80℃；步骤3)乙醇提取物与水提取物混合的比例为1∶2.5，按常规方法制成注射用粉针剂。
实施例3、本发明药物对免疫系统的影响
1、对小鼠淋巴细胞增殖的影响
取6-8周龄健康小鼠72只，分为6组(每组12只，♂/♀各半，自由取食、饮水)，1-5组分别灌胃给药20、60、100、140、180mg·kg-1·d-1剂量的本发明药物，另设空白对照组，每天灌胃等体积的生理氯化钠溶液。给药后的第5、10、15天分别取上述6组中的4只小鼠摘眼球放血，脱颈椎处死，无菌取脾，在37℃、5％CO2、以及84％的相对湿度下培养、收集脾淋巴细胞，在液体闪烁计数仪中测定每个孔的放射量，根据放射量对细胞数的标准曲线计算单位体积的细胞数，结果如图1所示。结果表明，5个剂量的本发明药物在给药的三个时间段中对小鼠淋巴细胞的增殖有不同的促进作用：剂量为20mg·kg-1·d-1时对小鼠淋巴细胞的增殖的促进作用不显著；而60mg·kg-1·d-1对小鼠淋巴细胞的增殖的促进作用在三个给药时间段中都表现出显著的促进作用，并呈现出给药时间和药理效应正相关系；剂量超过180mg·kg-1·d-1时，对小鼠淋巴细胞的增殖的促进作用下降。
2、对IL-2水平的影响
取6-8周龄健康KM小鼠72只，分为6组(每组12只，♂/♀各半，自由取食、饮水)，1-5组分别灌胃给药20、60、100、140、180mg·kg-1·d-1剂量的本发明药物；另设空白对照组，每天灌胃等体积的生理氯化钠溶液。按液体闪烁计数法测定稀释液中小鼠胸腺细胞的放射量。IL-2的活性以小鼠胸腺细胞的增值即放射量的大小来表示，结果如图2所示。结果表明，5个剂量的本发明药物可以显著地提升T-淋巴细胞IL-2释放的水平。
3、对荷瘤鼠脾细胞抗体生成的影响
取KM小鼠60只，分为6组，其中的5组接种S-180肉瘤(另一组为正常对照小鼠)。5组荷瘤小鼠中的3组分别灌胃100，250和500mg·kg-1·d-1剂量的本发明药物；另设空白对照组，每天灌胃等体积的生理盐水；环鳞酰胺阳性对照组，每天灌胃20mg·kg-1·d-1的环磷酰胺。5天后腹腔注射0.2ml 20％绵羊红细胞(约2×109/ml)，5天后无菌取脾脏，用PBS配成3.5×106/ml脾细胞悬液，于干净试管中依次加入1×107/ml绵羊红细胞、1∶10稀释的豚鼠血清、脾细胞悬液各1ml，37℃水浴1小时，2000转离心5分钟，取上清于413nm处测定吸光度。抗体生成率＝[标准管吸光度-样品管的吸光度]/标准管吸光度×100％。结果如表1所示。
结果表明，荷瘤小鼠脾脏抗体生成能力显著下降；使用本发明药物后，荷瘤小鼠脾脏抗体生成能力有显著地的提高。
表1.本发明药物对荷瘤KM鼠淋巴细胞转化能力及对脾细胞抗体生成的影响
| 组别 | 剂量(mg·kg-1·d-1) | 抗体生成率(％) |
| 正常小鼠对照荷瘤小鼠对照环磷酰胺阳性对照本发明药物剂量1本发明药物剂量2 | --20100250 | 16.58.9*9.113.0☆14.4☆ |
| 本发明药物剂量3 | 500 | 19.3☆ |
*P＜0.001(对正常小鼠)；☆P＜0.05；☆☆P＜0.01。
4、对荷瘤小鼠NK细胞杀死活性影响
取KM小鼠60只，分为6组，其中的5组接种S-180肉瘤(另一组为正常对照小鼠)。5组荷瘤小鼠中的3组分别灌胃100，250和500mg·kg-1·d-1剂量的本发明药物10天；另设空白对照组，每天灌胃等体积的生理盐水；环磷酰胺阳性对照组，灌胃20mg·kg-1·d-1的环磷酰胺10天。末次给药24小时后无菌取脾脏，制成脾细胞悬液，作为效应细胞；以Hela细胞作为靶细胞，用RPMI-1640完全培养基分别将效应细胞、靶细胞调至1×107/ml、2×105/ml，加入96孔板中，每孔100μl，使效应细胞∶靶细胞＝50∶1，另设效应细胞和靶细胞对照，每份标本设3个平行孔。置于37℃，5％CO2条件下杀伤4小时，加入MTT(5mg/ml)15μl，继续孵育3小时，每孔加100μl酸化异丙醇，吹打均匀，使紫色结晶完全溶解。于酶标仪570nm处测光密度(A值)。NK细胞活性按下式公式计算：NK细胞活性百分比＝[靶细胞A值-(实验组A值-效应细胞A值)]/靶细胞A值×100％，结果如图3所示。NK细胞是细胞免疫中的非特异性细胞，是机体免疫监视功能的重要执行者，先于T细胞发挥作用，它能非特异性杀伤肿瘤细胞，其杀伤作用毋须抗原预先致敏，也不需要抗体参加，不受MHC限制，为机体抗肿瘤的第一道防线。结果表明，荷瘤小鼠NK细胞的杀死活性与正常小鼠相比有显著地下降，说明荷瘤小鼠抗肿瘤的第一道防线已经大大减弱。三个剂量的本发明药物经过10天的给药，荷瘤小鼠的NK细胞的杀死活性有了显著地提高并超过正常对照鼠。
5、对免疫器官的影响
取KM小鼠60只，分为6组，其中的5组接种S-180肉瘤(另一组为正常对照小鼠)。5组荷瘤小鼠中的3组分别灌胃100，250和500mg·kg-1·d-1剂量的本发明药物10天；另设空白对照组，每天灌胃等体积的生理盐水；环鳞酰胺阳性对照组，灌胃20mg·kg-1·d-1的环鳞酰胺10天。末次给药后24小时杀死小鼠，取脾脏、胸腺，按常规方法计算胸腺指数和脾脏指数，结果如表2所示。荷瘤小鼠由于肿瘤的形成使免疫器官比正常小鼠小。结果表明，本发明药物能明显提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾脏指数，并在试验剂量中观察到量效正相关系。
表2.本发明药物对荷瘤小鼠免疫器官的影响(n＝10)
| 组别 | 剂量(mg/kg.d) | 胸腺指数(mg/g) | 脾脏指数(mg/g) |
| 正常小鼠对照S180荷瘤小鼠对照环磷酰胺阳性对照本发明药低剂量本发明药中剂量 | --20100250 | 3.79±0.582.17±0.63☆1.19±0.442.41±0.352.76±0.31* | 8.15±0.847.05±0.48☆6.56±0.738.87±0.63*8.90±0.64* |
| 本发明药高剂量 | 500 | 3.33±0.21* | 9.14±0.67* |
☆P＜0.05(对正常小鼠)；*P＜0.05(对S180荷瘤小鼠)。
实施例4、本发明药物体外抗肿瘤细胞活性
本发明药物以DMSO溶解，用RPM I-1640培养基配制使其终浓度为100，250，500μg/ml。在37℃，5％CO2的环境中培养24小时，按MTT方法检测本发明药物对对Hela细胞，肝癌细胞SMMC7721，胃癌细胞MGC-803，脾细胞，胎鼠成纤维细胞的毒性，结果如表3所示。结果表明，本发明药物对肿瘤细胞Hela细胞、肝癌细胞SMMC7721以及胃癌细胞MGC-803有显著的细胞毒性，其中高剂量组的抑制率达到90％以上；而对成纤维细胞、淋巴细胞(脾细胞)的毒性却很低，说明本发明药物对肿瘤细胞具有选择毒性。
表3.本发明药物对肿瘤细胞及正常细胞的毒性(MTT法，抑制率％，n＝5)
| 分组 | 剂量(μg/ml) | Hela细胞 | 肝癌细胞SMMC7721 | 胃癌细胞MGC-803 | 脾细胞 | 胎鼠成纤维细胞 |
| 生理盐水对照组小剂量组中剂量组高剂量组 | -100250500 | 075.389.895.7 | 065.174.090.3 | 069.777.298.7 | 001.32.1 | 01.93.85.8 |
实施例5、本发明药物对H22实体瘤小鼠肿瘤的抑制作用
取KM小鼠60只，分为5组，分别接种H22实体瘤。荷瘤小鼠中的3组以100，250和500mg·kg-1·d-1的剂量灌胃本发明药物14天。另设生理盐水对照组；和5-氟尿嘧啶阳性对照组，剂量为20mg·kg-1·d-1。末次给药24小时后取实体瘤称重，计算抑瘤率，结果如表4所示。结果表明，本发明药物对H22肉瘤有显著地抑制作用，剂量为500mg·kg-1·d-1的本发明药物抑瘤率达73.3％，超过经典的抗癌药物5-氟尿嘧啶。
表4 本发明药物对H22实体瘤小鼠肿瘤的抑制作用(n＝10)
组别 给药剂量 平均瘤重(g) 抑制率(％)
(mg/kg.d)
生理盐水对照组 - 2.356±0.459 -
5-氟尿嘧啶 20 0.704±0.221** 70.11
小剂量 100 1.304±0.394* 44.65
中剂量 250 0.971±0.130* 58.78
高剂量 500 0.629±0.144** 73.30
与生理盐水对照组相比，*P＜0.01，**P＜0.001。
实施例6、对S-180肉瘤的抑制作用
取KM小鼠60只，分为5组，分别接种S-180肉瘤。荷瘤小鼠中的3组以100，250和500mg·kg-1·d-1的剂量灌胃10天。另设空白对照组，灌胃相同体积的生理盐水；环磷酰胺对照组，剂量为20mg·kg-1·d-1。末次给药24小时后杀死小鼠，取肉瘤称重，结果如图4所示。结果表明，本发明药物对S-180肉瘤有显著地抑制作用，剂量为500mg·kg-1·d-1的本发明药物抑瘤率达59.5％，超过经典的抗癌药物环磷酰胺。
实施例7、本发明药物对促肿瘤细胞凋亡Bax基因和抑肿瘤细胞凋亡Bcl-2基因表达影响
细胞凋亡是肿瘤死亡的基本过程，也是抗肿瘤药物导致肿瘤死亡的基本过程。与细胞凋亡相关的基因有bcl-2和bax基因，其中bcl-2是抑制细胞凋亡基因，bax是促进细胞凋亡基因。细胞凋亡发生取决于bcl-2和bax的比例和其他抗凋亡蛋白，bcl-2和bsx的存在有bcl-2/bcl-2、bcl-2/bax和bax/bax等方式。
取KM小鼠60只，分为5组，分别接种S-180肉瘤，荷瘤小鼠中的3组以100，250和500mg·kg-1·d-1的剂量灌胃10天。另设空白对照组，灌胃相同体积的生理盐水；环磷酰胺对照组，剂量为20mg·kg-1·d-1。结果如表4所示。
结果表明，在生理盐水对照组中，荷瘤小鼠以bcl-2基因表达为主；而本发明药物可明显增强bax基因表达，并呈剂量依赖关系，说明本发明药物对S-180有显著抑制作用。
表4 本发明药物对S-180肉瘤bax/bcl-2基因表达的影响(阳性颗粒数/4×4mm)
| 组别 | 剂量(mg/kg.d) | Bax | Bcl-2 |
| 生理盐水对照环磷酰胺组本发明药物剂量1本发明药物剂量2 | -20100250 | 13±3.6167±6.5259±9.8309±12.7 | 191±23.795±5.915±1.999.6±9.8 |
| 本发明药物剂量3 | 500 | 498.6±13.4 | 83.7±7.0 |
实施例8、对慢性胃炎的治疗
本发明药物对79例慢性胃炎患者(40例浅表性胃炎患者，39例萎缩性胃炎患者)进行治疗，按每公斤体重10mg剂量每天分服药三次，3个月为1疗程，治疗期间停服其他药物。结果表明：40例浅表性胃炎患者中，39例自诉具有胃部不适、胃痛、恶心等症状，在服药的第二天便得到改善，1例在服药的第5天症状得到改善，服药一个疗程，症状基本消除。39例萎缩性胃炎患者治疗前，伴肠腺化生20例，伴I度不典型增生13例，轻度萎缩6例：服药治疗1个月，20例伴肠腺化生症状明显改善，12例不典型增生、6例轻度萎缩全部消失，总有效率为100％。
实施例9、对胃癌的治疗
以本发明药物为主治疗药物，对26例胃癌患者进行治疗，按每公斤体重10mg剂量每天分服药三次，3个月为1疗程，一般需服用2个疗程，半年复查1次胃镜。疗效标准：①显效：临床症状消失或基本消失，胃镜病理报告肠上皮化生和不典型增生消失或减轻2个级度以上；②有效：临床症状明显减轻，胃镜病理报告肠上皮化生和不典型增生减轻1个级度以上；③无效：临床症状无改善，胃镜病理报告无变化。治疗组26例中，12例显效，13例有效，无效1例，总有效率96.15％。
Claims (8)
1、一种治疗慢性胃炎、胃癌的药物，它的活性成分是桦褐孔菌的水提取物，所述水提取物是将桦褐孔菌子实体用水在80-90℃下提取得到的。
2、根据权利要求1所述的药物，其特征在于：所述药物还含有桦褐孔菌的乙醇提取物，所述乙醇提取物是将桦褐孔菌子实体用乙醇在70-80℃下回流提取得到的。
3、根据权利要求2所述的药物，其特征在于：所述桦褐孔菌子实体是经过水提后的子实体。
4、根据权利要求2所述的药物，其特征在于：所述乙醇的浓度为80-100％。
5、根据权利要求2或3或4所述的药物，其特征在于：所述桦褐孔菌的水提取物与所述桦褐孔菌的乙醇提取物的重量份数比为1.5-2.5∶1。
6、根据权利要求1或2或3或4所述的药物，其特征在于：所述药物的有效剂量为20-30mg/公斤体重/天。
7、权利要求3所述药物的制备方法，包括以下步骤：1)将粉碎桦褐孔菌子实体用水在80-90℃下回流，得到水提取液，干燥得到水提取物；2)将步骤1)所剩桦褐孔菌子实体用乙醇在70-80℃下回流，得到乙醇提取液，蒸干溶剂得到乙醇提取物；3)将步骤1)所得水提取物与步骤2)所得乙醇提取物按重量份数比1.5-2.5∶1混合，得到所述药物。
8、根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：步骤2)所述乙醇的浓度为80-100％。
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2004
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