CN1723216A - 亚磷酰胺的制造方法 - Google Patents

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CN1723216A CNA2003801054386A CN200380105438A CN1723216A CN 1723216 A CN1723216 A CN 1723216A CN A2003801054386 A CNA2003801054386 A CN A2003801054386A CN 200380105438 A CN200380105438 A CN 200380105438A CN 1723216 A CN1723216 A CN 1723216A
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Abstract

本发明能够减少以往方法中副产的亚磷酸三酯杂质的量，从而提供高纯度的亚磷酰胺制品。使用难以生成亚磷酸三酯的反应活化剂，通过抑制过量反应而以高纯度得到亚磷酰胺类。迄今为止虽然难以抑制亚磷酸三酯杂质的生成，但是根据本发明却可以以高纯度得到亚磷酰胺类。

Description

亚磷酰胺的制造方法
技术领域
本发明涉及亚磷酰胺的制造方法。更详细地讲，本发明涉及在制造由通式[4]表示的亚磷酰胺时，为减少由通式[5]表示的亚磷酸三酯组成的副产物的生成量，而开发出的用于提高亚磷酰胺生成选择性的反应活化剂。
(式中，R1表示碳原子数为1～4的烷基、被氰基取代的碳原子数为1～4的烷基或被甲硅烷基取代的碳原子数为1～4的烷基，R2表示被碳原子数为2～5的烷基取代的氨基或碳原子数为4～7的脂环状氨基，R4表示羟基的保护基，R5表示氢原子、卤原子、碳原子数为1～4的烷基或被取代的羟基，B表示核酸碱基或被保护的核酸碱基。)
Figure A20038010543800042
(式中，R1、R4和R5与上述的意思相同)。
背景技术
近年来随着基因组制药的进展，正在快速开发反义DNA医药等。随之作为原料的DNA低聚物、以及作为低聚物原料的亚磷酰胺类的需求也在增大。为了将亚磷酰胺用于医药品用途，需要制造极高纯度的制品。
迄今为止，亚磷酰胺类，例如在Nucleic Acids Res，12，p4051(1984)(或Nucleic Acids Res，18，p177(1987))上记载的方法那样，能够以亚磷酰二胺作为反应试剂，以四唑作为反应活化剂，采用与核苷的羟基反应的方法合成。此文献中，详细解析了反应中生成的杂质。在主要的杂质中，由水份引起的分解物，可以通过减少反应体系内的水份量来减少。但是，却很难减少由于反应中使用的活化剂的性质而生成的副产物。如式1
[式1]
Figure A20038010543800051
(式中，R1表示甲基或氰乙基，R2表示二异丙基氨基，R4表示4，4’-二甲氧基三苯甲基，B表示1-胸腺嘧啶基。)所示，过剩产物(由通式[5a]表示的亚磷酸三酯)是由于作为目的物的由通式[4a]表示的亚磷酰胺与由通式[3a]表示的原料核苷进一步反应而生成。虽然所记载的混入比例少到1％(NMR分析结果)，但是在反义医药等医药品用途中还必须将其进一步减少。亚磷酰胺类因不稳定而难于提纯，所以在反应阶段应当尽可能减少副产物。正如US4415732中记载的那样，四唑原本是为了合成如低聚物的亚磷酸三酯而开发，所以从由通式[4a]表示的亚磷酰胺至由通式[5a]表示的亚磷酸三酯的反应极快。是直到目前仍在低聚物合成中较多采用的活化剂。
Org.Process Res.Dev.4，p175(2000)或WO9962922上记载的方法中，为了改善四唑价格昂贵的缺点而采用了吡啶-三氟乙酸盐。然而，正如说明低聚物合成的有用性那样，与四唑同样亚磷酸三酯的生成能高。
为了利用于低聚物合成中，报道了代替四唑的许多活化剂。但是，为了以固相合成形式合成低聚物，需要在尽可能短时间内形成亚磷酸三酯，在这一点上与亚磷酰胺的选择性合成在目的上不同。也就是说，为了制造由通式[4a]表示的亚磷酰胺，由于需要降低由通式[5a]表示的亚磷酸三酯副产物的生成量，所以这些方法是不适宜的。典型的实例被记载在Tetrahedron Lett.(24)p3171(1983)之中。这篇论文报告的5-(4-硝基苯基)四唑，被设计为显著提高四唑的反应速度，能以极高的效率生成作为亚磷酸三酯的低聚物。而且虽然在图中也举例说明了用苯基四唑作为亚磷酸三酯合成的活化剂，但是记载有因溶解性差而被判断为没有进行活性评价的价值，因而并没有发现其能够选择性地合成亚磷酰胺这种作为活化剂的有用性。
因此，目前尚未开发出使得向由通式[5a]表示的亚磷酸三酯的反应难以进行，而能够选择性地合成由通式[4a]表示的亚磷酰胺这种活化剂。
发明内容
鉴于以往的问题，本发明的课题在于提供一种效率高且副反应少的亚磷酰胺的制造方法。
本发明人们针对上述课题进行深入研究的结果，发现5-苯基四唑能够选择性良好地生成亚磷酰胺，因而完成了本发明。
也就是说，本发明为，
(1)一种亚磷酰胺的制造方法，是以由通式[1]表示的化合物作为反应剂的制造方法，其特征在于，使用由通式[2]表示的取代四唑作为反应活化剂。
Figure A20038010543800061
(式中，R1表示碳原子数为1～4的烷基、被氰基取代的碳原子数为1～4的烷基或被甲硅烷基取代的碳原子数为1～4的烷基，R2表示被碳原子数为2～5的烷基取代的氨基或碳原子数为4～7的脂环状氨基。)
(式中，R3表示碳原子数为1～6的脂环状烷基、被碳原子数为1～4的烷基取代的芳基或未被取代的芳基。)
(2)如在(1)中记载的制造方法，其特征在于，以由通式[3]表示的核苷衍生物作为原料，合成由通式[4]表示的亚磷酰胺时，能够抑制由通式[5]表示的亚磷酸三酯的生成。
Figure A20038010543800071
(式中，R4表示羟基的保护基，R5表示氢原子、卤原子、碳原子数为1～4的烷基或被取代的羟基，B表示核酸碱基或被保护的核酸碱基。)
(式中，R1、R2、R4、R5和B与上述的意思相同。)
Figure A20038010543800073
(式中，R1、R2、R4和R5与上述的意思相同。)
(3)如在(1)或(2)中记载的制造方法，其中，通式[2]中R3是苯基。
(4)如在(1)～(3)中的任一项记载的制造方法，其中，通式[1]中R1是氰乙基，R2是二异丙氨基。
(5)如在(2)～(4)中的任一项记载的制造方法，其中，在通式[3]和[4]中，R4是4，4’-二甲氧基三苯甲基，R5是氢原子，B是1-胸腺嘧啶基、N4-苯甲酰基-1-胞嘧啶基、N6-苯甲酰基-9-腺嘌呤基或N2-异丁酰基-9-鸟嘌呤基。
按照本发明，采用可批量制造的方法，能够比以往方法更为高效地制造高纯度的亚磷酰胺类。
具体实施方式
以下详细说明本发明。
在由通式[1]表示的亚磷酰胺等中，R1中的碳原子数为1～4的烷基，例如可以举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基等。被氰基取代的碳原子数为1～4的烷基，例如可以举出2-氰乙基、2-氰丙基、2-氰基环丙基、2-氰丁基、2-氰基-2-甲丙基等，但是并不限于这些。R1中被甲硅烷基取代的碳原子数为1～4的烷基，例如可以举出2-三甲基甲硅烷基乙基、2-三甲基甲硅烷基丙基、2-三甲基甲硅烷基丁基、2-三甲基甲硅烷基-2-甲基丙基、2-三乙基甲硅烷基乙基、2-三乙基甲硅烷基丙基、2-三乙基甲硅烷基丁基、2-三乙基甲硅烷基-2-甲丙基、2-三异丙基甲硅烷基丁基、2-三异丙基甲硅烷基-2-甲丙基、2-三异丙基甲硅烷基乙基、2-三异丙基甲硅烷基丙基、2-三异丙基甲硅烷基丁基、2-三异丙基甲硅烷基-2-甲丙基、2-异丙基丁基、2-三异丙基甲硅烷基-2-甲丙基、2-(叔丁基二甲基甲硅烷基)乙基、2-(叔丁基二甲基甲硅烷基)丙基、2-(叔丁基二甲基甲硅烷基)丁基、2-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-2-甲丙基等，但是并不限于这些。R2中被碳原子数为2～5的烷基取代的氨基，例如可以举出二乙基氨基、乙基(异丙基)氨基、二(正丙基)氨基、二异丙氨基、二环丙基氨基、二(正丁基)氨基、二(仲丁基)氨基、二(异丁基)氨基、二(叔丁基)氨基、二(正戊基)氨基、二(异戊基)氨基、二(新戊基)氨基、二环戊基氨基等，但是并不限于这些。R2中碳原子数为4～7的脂环状氨基，例如可以举出吡咯烷基、2-甲基吡咯烷基、2，4-二甲基吡咯烷基、哌啶基、七亚甲基亚氨基等，但是并不限于这些。
在由通式[2]表示的取代四唑等中，R3中的碳原子数为1～6的脂环状烷基，例如可以举出环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。R3中的被碳原子数为1～4的烷基取代的芳基，表示被例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基取代的芳基，例如可以举出2-甲基苯基、2-乙基苯基、2-异丙基苯基、2-(2-丁基)苯基、2-(叔丁基)苯基、3-甲基苯基、3-乙基苯基、3-异丙基苯基、3-(2-丁基)苯基、3-(叔丁基)苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-异丙基苯基、4-(2-丁基)苯基、4-(叔丁基)苯基、2，6-二甲基苯基、2，6-二乙基苯基、2，6-二异丙基苯基、2，6-二(2-丁基)苯基、2，6-二(叔丁基)苯基、3-甲基-2-糠基、3-乙基-2-糠基、3-异丙基-2-糠基、3-(2-丁基)-2-糠基、3-(叔丁基)-2-糠基、4-甲基-2-糠基、4-乙基-2-糠基、4-异丙基-2-糠基、4-(2-丁基)-2-糠基、4-(叔丁基)-2-糠基、3，5-二甲基-2-糠基等，但是并不限于这些。R3中的未被取代的芳基，例如可以举出苯基、2-糠基、3-糠基、2-硫代苯基、3-硫代苯基等，但是并不限于这些。作为由通式[2]表示的取代四唑，特别优选5-苯基-1H-四唑。这些取代四唑，既可以作为与碱基的盐加入到反应中，也可以直接加入。作为形成盐的碱基，优选有机碱基，例如可以举出三乙胺、乙基二异丙胺、三(正丁基)胺、1-甲基哌啶、1-甲基吡咯烷等叔胺类或者二乙胺、二异丙胺、二(正丁基)胺、哌啶、吡咯烷等仲胺，但是并不限于这些。
由通式[3]表示的核酸衍生物中，作为R4中的羟基保护基，可以举出甲基、乙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、苄基、2-甲氧基苄基、3-甲氧基苄基、4-甲氧基苄基、2-甲基苄基、3-甲基苄基、4-甲基苄基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、苄氧基甲基、苄氧基乙基、乙酰氧基甲基、乙酰氧基乙基、苯甲酰氧基甲基、苯甲酰氧基乙基、甲氧基乙氧基乙基、炔丙基、烯丙基等烷基或在烷基前面进一步被取代的烷基、苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、4-苯基苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基等芳基、甲酰基、乙酰基、丙酰基、苯甲酰基、2-甲氧基苯甲酰基、3-甲氧基苯甲酰基、4-甲氧基苯甲酰基、2-甲基苯甲酰基、3-甲基苯甲酰基、4-甲基苯甲酰基、2-硝基苯甲酰基、3-硝基苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基、4-苯基苯甲酰基、2-氯代苯甲酰基、3-氯代苯甲酰基、4-氯代苯甲酰基等酰基、氨基羰基、二甲基氨基羰基、甲基氨基羰基、乙基氨基羰基、二乙基氨基羰基、苯基氨基羰基等尿烷基、甲磺酰基、乙磺酰基、苯磺酰基、2-甲基苯磺酰基、3-甲基苯磺酰基、4-甲基苯磺酰基、三氟甲磺酰基、三氯甲磺酰基等磺酸酯基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基等甲硅烷基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、4，4’-二甲氧基三苯甲基等三苯甲基。
R5中的卤原子，表示氟原子、氯原子、溴原子。碘原子。R5中的碳原子数为1～4的烷基，例如可以举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基等。
R5中被取代的羟基，表示被羧酸酯、磺酸酯、醚、尿烷、甲硅烷基等一般的能够形成羟基保护基的取代基取代的羟基。作为羟基保护基的实例，例如可以举出甲基、乙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、苄基、2-甲氧基苄基、3-甲氧基苄基、4-甲氧基苄基、2-甲基苄基、3-甲基苄基、4-甲基苄基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、苄氧基甲基、苄氧基乙基、乙酰氧基甲基、乙酰氧基乙基、苯甲酰氧基甲基、苯甲酰氧基乙基、甲氧基乙氧基乙基、炔丙基、烯丙基等烷基或在烷基前面进一步被取代的烷基、苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、4-苯基苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基等芳基、甲酰基、乙酰基、丙酰基、苯甲酰基、2-甲氧基苯甲酰基、3-甲氧基苯甲酰基、4-甲氧基苯甲酰基、2-甲基苯甲酰基、3-甲基苯甲酰基、4-甲基苯甲酰基、2-硝基苯甲酰基、3-硝基苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基、4-苯基苯甲酰基、2-氯代苯甲酰基、3-氯代苯甲酰基、4-氯代苯甲酰基等酰基、氨基羰基、二甲基氨基羰基、甲基氨基羰基、乙基氨基羰基、二乙基氨基羰基、苯基氨基羰基等尿烷基、甲磺酰基、乙磺酰基、苯磺酰基、2-甲基苯磺酰基、3-甲基苯磺酰基、4-甲基苯磺酰基、三氟甲磺酰基、三氯甲磺酰基等磺酸酯基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基等甲硅烷基。
作为R5的被取代的羟基的实例，例如可以举出甲氧基、乙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基、2-甲氧基苄氧基、3-甲氧基苄氧基、4-甲氧基苄氧基、2-甲基苄氧基、3-甲基苄氧基、4-甲基苄氧基、甲氧基乙基氧基、乙氧基乙基氧基、苄氧基甲氧基、苄氧基乙氧基、乙酰氧基甲氧基、乙酰氧基乙氧基、苯甲酰氧基甲氧基、苯甲酰氧基乙氧基、甲氧基乙氧基乙氧基、炔丙氧基、烯丙氧基、苯氧基、2-甲氧基苯氧基、3-甲氧基苯氧基、4-甲氧基苯氧基、4-苯基苯氧基、2-吡啶氧基、3-吡啶氧基、4-吡啶氧基、甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、苯甲酰氧基、2-甲氧基苯甲酰氧基、3-甲氧基苯甲酰氧基、4-甲氧基苯甲酰氧基、2-甲基苯甲酰氧基、3-甲基苯甲酰氧基、4-甲基苯甲酰氧基、2-硝基苯甲酰氧基、3-硝基苯甲酰氧基、4-硝基苯甲酰氧基、4-苯基苯甲酰氧基、2-氯代苯甲酰氧基、3-氯代苯甲酰氧基、4-氯代苯甲酰氧基、氨基羰氧基、二甲基氨基羰氧基、甲基氨基羰氧基、乙基氨基羰氧基、二乙基氨基羰氧基、苯基氨基羰氧基、甲磺酰氧基、乙磺酰氧基、苯磺酰氧基、2-甲基苯磺酰氧基、3-甲基苯磺酰氧基、4-甲基苯磺酰氧基、三氟苯磺酰氧基、三氯苯磺酰氧基、三甲基甲硅烷氧基、三乙基甲硅烷氧基、叔丁基二甲基甲硅烷氧基、叔丁基二苯基甲硅烷氧基等。
B中的核酸碱基，可以是天然型或非天然型的任何核酸碱基，例如可以举出1-胸腺嘧啶基、1-胞嘧啶基、9-腺嘌呤基、9-鸟嘌呤基、1-尿嘧啶基、5-氟-1-尿嘧啶基、5-三氟-1-胸腺嘧啶基、5-甲基-1-胞嘧啶基、6-氯-9-嘌呤基、2，6-二氨基-9-嘌呤基、7-腺嘌呤基、7-鸟嘌呤基、8-溴-9-腺嘌呤基、8-溴-9-鸟嘌呤基、2-氨基-9-嘌呤基、8-氮杂-9-腺嘌呤基、、8-氮杂-9-鸟嘌呤基、8-脱氮-9-腺嘌呤基、8-脱氮-9-鸟嘌呤基等，但是并不限于这些。
B中被保护的核酸碱基，可以是天然型或非天然型的任何核酸碱基被保护，作为保护基只要是通常使用的就没有特别限制。作为保护基，例如可以举出乙酰基、异丁酰基、苯甲酰基、二甲基氨基甲川基、二丁基氨基甲川基、棕榈酰基、苄氧基乙酰基等。作为被保护的核酸碱基，例如可以举出N4-苯甲酰基-1-胞嘧啶基、N4-乙酰基-1-胞嘧啶基、N6-苯甲酰基-9-腺嘌呤基、N2-异丁酰基-9-鸟嘌呤基等。
对于本发明方法中的反应溶剂，只要对反应没有影响就没有特别限制，但是优选醇类以外的非质子溶剂。例如可以举出乙腈、二氯甲烷、氯仿、THF、二甲氧基乙烷、乙酸乙酯、乙酸丁酯、己烷、环己烷、甲苯等。而且也可以使用这些溶剂的混合溶剂。
本发明方法中的反应温度，可以在从-30℃到使用溶剂的沸点之间的温度进行。特别优选处于-10℃～40℃之间。
反应剂的用量只要对后处理没有影响就没有特别限制，但是从经济上考虑，相对于原料的摩尔量优选为0.8～1.5当量。
反应活化剂的用量，相对于原料的摩尔量而言优选0.01～2当量，更优选0.1～1.5当量。
以下列举实施例具体说明本发明，但是本发明并不受这些实施例的限制。
实施例1
5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)胸腺定3’-O-(2-氰乙基N，N-二异丙基亚磷酰胺)的合成
将2.0克5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)胸腺定(含有0.5当量4-甲基-2-戊酮)与10毫升脱水乙腈混合，向在室温下搅拌的悬浮液中滴加1.22克2-氰乙基N，N，N’，N’-四异丙基亚磷酰胺(相对于原料的摩尔数为1.2当量)，进一步搅拌。然后加入0.05克5-苯基-1H-四唑(相对于原料的摩尔数为0.1当量)，在室温下搅拌8小时。
用高效液相色谱法(反相柱，洗脱液：水/乙腈＝5/5(TEAA250mM)，检测波长：254nm)对本反应液进行分析的结果，收率为97％。以标题化合物与由通式[5b]表示的副产物之比表示的反应选择性(标题化合物的HPLC面积％/副产物的HPLC面积％)为451。
Figure A20038010543800121
(式中，R1表示2-氰乙基，R4表示4，4’-二甲氧基三苯甲基，R5表示氢原子，B表示1-胸腺嘧啶。)
比较例1及2
5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胸腺定3’-O-(2-氰乙基N，N-二异丙基亚磷酰胺)的合成
采用与实施例1同样的方法，分别用0.024克四唑(相对于原料的摩尔数为0.1当量，比较例1)、0.068克吡啶-三氟乙酸盐(相对于原料的摩尔数为0.1当量，比较例2)，代替5-苯基-1H-四唑来进行反应。利用高效液相色谱法(反相柱，洗脱液：水/乙腈＝5/5(TEAA250mM)，检测波长：254nm)对8或24小时后的反应液进行分析，将结果示于表1。
表1
  实施例1   比较例1   比较例2
  反应选择性(8小时后)   451   265   281
  收率(％，8小时后)   94   94   64
  反应选择性(24小时后)   -   -   192
  收率(％，24小时后)  -   -   82
上表1中，反应选择性＝(标题化合物的HPLC面积％)/(副产物[5b]的HPLC面积％)。其中，在副产物[5b]的式中，R1表示2-氰乙基，R4表示4，4’-二甲氧基三苯甲基，R5表示氢原子，B表示1-胸腺嘧啶。
实施例2
5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-N6-苯甲酰基-2’-脱氧腺苷3’-O-(2-氰乙基N，N-二异丙基亚磷酰胺)的合成
将2.0克5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-N6-苯甲酰基-2’-脱氧腺苷与10毫升脱水乙腈混合，向在室温下搅拌的悬浮液中滴加1.10克2-氰乙基N，N，N’，N’-四异丙基亚磷酰胺(相对于原料的摩尔数为1.2当量)，进一步搅拌。然后加入0.53克5-苯基-1H-四唑(相对于原料的摩尔数为1.2当量)，在室温下搅拌2小时。
用高效液相色谱法(反相柱，洗脱液：水/乙腈＝5/5(TEAA250mM)，检测波长：254nm)对本反应液进行分析的结果，收率为96％。以标题化合物与由通式[5c]表示的副产物之比表示的反应选择性(标题化合物的HPLC面积％/副产物的HPLC面积％)为152。对96小时后的反应液进一步分析的结果，收率为99％，反应选择性为187。
Figure A20038010543800131
(式中，R1表示2-氰乙基，R4表示4，4’-二甲氧基三苯甲基，R5表示氢原子，B表示N6-苯甲酰基-9-腺嘌呤。)
实施例3
5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-N6-苯甲酰基-2’-脱氧腺苷3’-O-(2-氰乙基N，N-二异丙基亚磷酰胺)的合成
采用与实施例2同样的方法，改变5-苯基-1H-四唑的当量来进行反应。使用0.04克5-苯基-1H-四唑(相对于原料的摩尔数为0.1当量)，搅拌24小时。
用高效液相色谱法(反相柱，洗脱液：水/乙腈＝5/5(TEAA250mM)，检测波长：254nm)对本反应液进行分析的结果，收率为99％。以标题化合物与由通式[5c]表示的副产物之比表示的反应选择性(标题化合物的HPLC面积％/副产物的HPLC面积％)为699。
实施例4
5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-N6-苯甲酰基-2’-脱氧腺苷3’-O-(2-氰乙基N，N-二异丙基亚磷酰胺)的合成
采用与实施例2同样的方法，改变5-苯基-1H-四唑的当量来进行反应。使用0.22克5-苯基-1H-四唑(相对于原料的摩尔数为0.5当量)，搅拌8小时。
用高效液相色谱法(反相柱，洗脱液：水/乙腈＝5/5(TEAA250mM)，检测波长：254nm)对本反应液进行分析的结果，收率为99％。以标题化合物与由通式[5c]表示的副产物之比表示的反应选择性(标题化合物的HPLC面积％/副产物的HPLC面积％)为785。
比较例3～5
采用与实施例2同样的方法，分别用0.256克四唑(相对于原料的摩尔数为1.2当量，比较例3)、0.707克吡啶-三氟乙酸盐(相对于原料的摩尔数为1.2当量，比较例4)和0.689克5-(4-硝基苯基)-1H-四唑(相对于原料的摩尔数为1.2当量，比较例5)代替5-苯基-1H-四唑来进行反应。用高效液相色谱法(反相柱，洗脱液：水/乙腈＝5/5(TEAA250mM)，检测波长：254nm)分析96小时后的反应液，将结果示于表2。
表2
  实施例2   比较例3   比较例4   比较例5
  反应选择性   187   49   91   9
  收率(％)   99   99   92   79
比较例6～8
利用与实施例4同样的方法，分别用0.107克四唑(相对于原料的摩尔数为0.5当量，比较例6)、0.295克吡啶-三氟乙酸盐(相对于原料的摩尔数为0.5当量，比较例7)和0.291克5-(4-硝基苯基)-1H-四唑(相对于原料的摩尔数为0.5当量，比较例8)代替5-苯基-1H-四唑来进行反应。用高效液相色谱法(反相柱，洗脱液：水/乙腈＝5/5(TEAA250mM)，检测波长：254nm)分析96小时后的反应液，将结果示于表3。
表3
  实施例4   比较例6   比较例7   比较例8
  反应选择性   785   101   39   153
  收率(％)   99   99   92   98
上表3中，反应选择性＝(标题化合物的HPLC面积％)/(由通式[5c]表示的副产物的HPLC面积％)
实施例5
5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-N4-苯甲酰基-2’-脱氧胞嘧啶核苷3’-O-(2-氰乙基N，N-二异丙基亚磷酰胺)的合成
将2.0克5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-N4-苯甲酰基-2’-脱氧胞嘧啶核苷与10毫升脱水乙腈混合，向在室温下搅拌的悬浮液中滴加1.14克2-氰乙基N，N，N’，N’-四异丙基亚磷酰胺(相对于原料的摩尔数为1.2当量)，进一步搅拌。然后加入0.185克5-苯基-1H-四唑(相对于原料的摩尔数为0.4当量)，在室温下搅拌5小时。
用高效液相色谱法(反相柱，洗脱液：水/乙腈＝4/6(TEAA62.5mM)，检测波长：254nm)对本反应液进行分析的结果，收率为99％。以标题化合物与由通式[5d]表示的副产物之比表示的反应选择性(标题化合物的HPLC面积％/副产物的HPLC面积％)为284。
(式中，R1表示2-氰乙基，R4表示4，4’-二甲氧基三苯甲基，R5表示氢原子，B表示N4-苯甲酰基-1-胞嘧啶。)
比较例9及1O
N4-苯甲酰基-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞嘧啶核苷3’-O-(2-氰乙基N，N-二异丙基亚磷酰胺)的合成
采用与实施例5同样的方法，分别用0.088克(相对于原料的摩尔数为0.4当量，比较例9)四唑和0.244克吡啶-三氟乙酸盐(相对于原料的摩尔数为0.4当量，比较例10)代替5-苯基-1H-四唑来进行反应。用高效液相色谱法(反相柱，洗脱液：水/乙腈＝4/6(TEAA62.5mM)，检测波长：254nm)分析5小时后的反应液，将结果示于表4。
表4
  实施例5   比较例9   比较例10
 反应选择性(5小时后)   284   177   117
 收率(％，5小时后)   99   97   92
反应选择性＝(标题化合物的HPLC面积％)/(副产物[5d]的HPLC面积％)，其中，在副产物[5d]的式中，R1表示2-氰乙基，R4表示4，4’-二甲氧基三苯甲基，R5表示氢原子，B表示N4-苯甲酰基-1-胞嘧啶。

Claims (5)

1.一种亚磷酰胺的制造方法，是以由通式[1]表示的化合物作为反应剂的制造方法，其特征在于，使用由通式[2]表示的取代四唑作为反应活化剂，
式中，R1表示碳原子数为1～4的烷基、被氰基取代的碳原子数为1～4的烷基或被甲硅烷基取代的碳原子数为1～4的烷基，R2表示被碳原子数为2～5的烷基取代的氨基或碳原子数为4～7的脂环状氨基；
Figure A2003801054380002C2
式中，R3表示碳原子数为1～6的脂环状烷基、被碳原子数为1～4的烷基取代的芳基或未被取代的芳基。
2.根据权利要求1所述的制造方法，其特征在于，由通式[3]表示的核苷衍生物作为原料，合成由通式[4]表示的亚磷酰胺，
式中，R4表示羟基的保护基，R5表示氢原子、卤原子、碳原子数为1～4的烷基或被取代的羟基，B表示核酸碱基或被保护的核酸碱基；
式中，R1、R2、R4、R5和B与上述的意思相同。
3.根据权利要求1或2所述的制造方法，其中，通式[2]中R3是苯基。
4.根据权利要求1～3中的任一项所述的制造方法，其中，通式[1]中R1是氰乙基，R2是二异丙氨基。
5.根据权利要求2～4中的任一项所述的制造方法，其中，在通式[3]和[4]中，R4是4，4’-二甲氧基三苯甲基，R5是氢原子，B是1-胸腺嘧啶基、N4-苯甲酰基-1-胞嘧啶基、N6-苯甲酰基-9-腺嘌呤基或N2-异丁酰基-9-鸟嘌呤基。
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