JPH1072448A - 新規複合体及びオリゴヌクレオチドの合成方法 - Google Patents
新規複合体及びオリゴヌクレオチドの合成方法Info
- Publication number
- JPH1072448A JPH1072448A JP23073396A JP23073396A JPH1072448A JP H1072448 A JPH1072448 A JP H1072448A JP 23073396 A JP23073396 A JP 23073396A JP 23073396 A JP23073396 A JP 23073396A JP H1072448 A JPH1072448 A JP H1072448A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- phosphoramidite
- benzimidazole
- nucleoside
- compound
- complex
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 新しい核酸合成反応促進剤、特にホスホロア
ミダイト法によるオリゴヌクレオチドの合成方法のため
の反応促進剤を開発することを課題とする。 【解決手段】 ベンズイミダゾール又はその類縁体とア
ルカンスルホン酸又はそのハロゲン置換体からなる新規
な複合体、特にベンズイミダゾールとトリフルオロメタ
ンスルホン酸又はメタンスルホン酸からなる新規な複合
体がホスホロアミダイト法の反応促進剤として優れてい
ることを見出した。また、本発明の核酸合成反応促進剤
は、酸素及び湿気に対して安定であり室温保存が可能で
あり、さらに、アセトニトリルに対する溶解性があり、
価格も高価ではないという点で優れている。特にベンズ
イミダゾールとトリフルオロメタンスルホン酸との複合
体は、液相合成・固相合成いずれにおいても使用できる
という優れた特性をも有している。
ミダイト法によるオリゴヌクレオチドの合成方法のため
の反応促進剤を開発することを課題とする。 【解決手段】 ベンズイミダゾール又はその類縁体とア
ルカンスルホン酸又はそのハロゲン置換体からなる新規
な複合体、特にベンズイミダゾールとトリフルオロメタ
ンスルホン酸又はメタンスルホン酸からなる新規な複合
体がホスホロアミダイト法の反応促進剤として優れてい
ることを見出した。また、本発明の核酸合成反応促進剤
は、酸素及び湿気に対して安定であり室温保存が可能で
あり、さらに、アセトニトリルに対する溶解性があり、
価格も高価ではないという点で優れている。特にベンズ
イミダゾールとトリフルオロメタンスルホン酸との複合
体は、液相合成・固相合成いずれにおいても使用できる
という優れた特性をも有している。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ベンズイミダゾー
ル(benzimidazole)又はその類縁体(benzimidazoles)と
アルカンスルホン酸又はそのハロゲン置換体からなる複
合体及びそれを用いた核酸化合物、特にオリゴヌクレオ
チドの合成方法に関するもので、化学、医薬及び農薬の
分野等で幅広く利用されるものである。
ル(benzimidazole)又はその類縁体(benzimidazoles)と
アルカンスルホン酸又はそのハロゲン置換体からなる複
合体及びそれを用いた核酸化合物、特にオリゴヌクレオ
チドの合成方法に関するもので、化学、医薬及び農薬の
分野等で幅広く利用されるものである。
【０００２】
【従来の技術】オリゴヌクレオチドなどの核酸化合物を
合成するためのヌクレオシドの縮合方法としては、ジエ
ステル法、トリエステル法、ホスファイト法、ホスホロ
アミダイト法、Ｈ−ホスホネート法(丹羽峰雄著、ＤＮ
Ａの化学合成法(化学と生物：実験ライン２２)、広川書
店(1992年))及びチオホスファイト法(T. Yoshida、K. K
imura、United States Patent 4,808,708(1989年))が知
られている。
合成するためのヌクレオシドの縮合方法としては、ジエ
ステル法、トリエステル法、ホスファイト法、ホスホロ
アミダイト法、Ｈ−ホスホネート法(丹羽峰雄著、ＤＮ
Ａの化学合成法(化学と生物：実験ライン２２)、広川書
店(1992年))及びチオホスファイト法(T. Yoshida、K. K
imura、United States Patent 4,808,708(1989年))が知
られている。
【０００３】このうち、ホスホロアミダイト法は、自動
合成機を用いて行う合成方法として広く用いられてお
り、また、この合成方法においては、合成反応促進剤と
して1H-テトラゾールが通常用いられている。
合成機を用いて行う合成方法として広く用いられてお
り、また、この合成方法においては、合成反応促進剤と
して1H-テトラゾールが通常用いられている。
【０００４】しかし、アンチセンス核酸法など最近の核
酸化学の進歩にともない、修飾核酸を用いるホスホロア
ミダイト法による合成反応において、1H-テトラゾール
を用いるのでは充分に反応を促進できない場合が増えて
きている。
酸化学の進歩にともない、修飾核酸を用いるホスホロア
ミダイト法による合成反応において、1H-テトラゾール
を用いるのでは充分に反応を促進できない場合が増えて
きている。
【０００５】このため、1H-テトラゾールにかわる反応
促進剤として、5-(p-ニトロフェニル)-1H-テトラゾール
（NPTと略する）(B. C. Froehler,M. D. Matteucci,Tet
rahedron Lett.,24 巻,3171,1983年)、5-エチルチオ-1H
-テトラゾール（ETTと略する）(R. Vinayak,Nucleic Ac
ids Symp.,Series,31 巻,165,1994年)などがこれまでに
報告されている。
促進剤として、5-(p-ニトロフェニル)-1H-テトラゾール
（NPTと略する）(B. C. Froehler,M. D. Matteucci,Tet
rahedron Lett.,24 巻,3171,1983年)、5-エチルチオ-1H
-テトラゾール（ETTと略する）(R. Vinayak,Nucleic Ac
ids Symp.,Series,31 巻,165,1994年)などがこれまでに
報告されている。
【０００６】これらの試薬は、1H-テトラゾールの５位
の炭素に電子吸引基を導入することでアゾール環の電子
密度を低下させ、アゾールの酸性度を高めるように設計
されたものであるが、経済性や有機溶媒に対する溶解性
において問題を残しているものである。
の炭素に電子吸引基を導入することでアゾール環の電子
密度を低下させ、アゾールの酸性度を高めるように設計
されたものであるが、経済性や有機溶媒に対する溶解性
において問題を残しているものである。
【０００７】さらに、比較的活性が高く、溶解性、経済
性に優れた三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体
（日本化学会第69春季年会、演題番号4 G5 25(1994
年)）が本発明者等により呈示されたが、このものは上
記のような優れた特性を有する反面、固相合成への適用
は難しく、さらに、アリール化したデオキシリボヌクレ
オシドホスホロジイソプロピルアミダイトやデオキシリ
ボヌクレオシドホスホロモルホリダイト、及び立体障害
の大きい保護基や置換基を２’水酸基に有するリボヌク
レオシド３’−ホスホロアミダイトなどの反応性の低い
ヌクレオシドホスホロアミダイトに対しては、反応を十
分に促進するという点では未だ完全に満足できるもので
はない。
性に優れた三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体
（日本化学会第69春季年会、演題番号4 G5 25(1994
年)）が本発明者等により呈示されたが、このものは上
記のような優れた特性を有する反面、固相合成への適用
は難しく、さらに、アリール化したデオキシリボヌクレ
オシドホスホロジイソプロピルアミダイトやデオキシリ
ボヌクレオシドホスホロモルホリダイト、及び立体障害
の大きい保護基や置換基を２’水酸基に有するリボヌク
レオシド３’−ホスホロアミダイトなどの反応性の低い
ヌクレオシドホスホロアミダイトに対しては、反応を十
分に促進するという点では未だ完全に満足できるもので
はない。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ホスホロア
ミダイト法における反応促進剤としての活性が1H-テト
ラゾールよりも高く、特に反応性の低いヌクレオシドホ
スホロアミダイトに対しても有効であり、かつ経済性及
び簡便性を兼ね備えた、新しい核酸合成反応促進剤、特
にホスホロアミダイト法によるオリゴヌクレオチドの合
成方法のための反応促進剤を開発し、該促進剤を用いた
核酸合成法、特にホスホロアミダイト法によるオリゴヌ
クレオチドの合成方法を提供することを課題とする。
ミダイト法における反応促進剤としての活性が1H-テト
ラゾールよりも高く、特に反応性の低いヌクレオシドホ
スホロアミダイトに対しても有効であり、かつ経済性及
び簡便性を兼ね備えた、新しい核酸合成反応促進剤、特
にホスホロアミダイト法によるオリゴヌクレオチドの合
成方法のための反応促進剤を開発し、該促進剤を用いた
核酸合成法、特にホスホロアミダイト法によるオリゴヌ
クレオチドの合成方法を提供することを課題とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意研究
の結果、ベンズイミダゾール又はその類縁体とアルカン
スルホン酸又はそのハロゲン置換体からなる新規な複合
体、特にベンズイミダゾールとトリフルオロメタンスル
ホン酸又はベンズイミダゾールとメタンスルホン酸から
なる新規な複合体がホスホロアミダイト法の反応促進剤
として優れていることを見出し本発明を完成した。
の結果、ベンズイミダゾール又はその類縁体とアルカン
スルホン酸又はそのハロゲン置換体からなる新規な複合
体、特にベンズイミダゾールとトリフルオロメタンスル
ホン酸又はベンズイミダゾールとメタンスルホン酸から
なる新規な複合体がホスホロアミダイト法の反応促進剤
として優れていることを見出し本発明を完成した。
【００１０】すなわち、本発明は、以下のものに関す
る。 ［１］ベンズイミダゾール又はその類縁体とアルカンス
ルホン酸又はそのハロゲン置換体からなる複合体、
［２］［１］記載の複合体を有効成分として含む核酸合
成反応促進剤、及び［３］［１］記載の複合体の存在下
にヌクレオシドホスホロアミダイト又はヌクレオシドホ
スホノアミダイトとヌクレオシドとを反応させることを
特徴とするオリゴヌクレオチドの合成方法。
る。 ［１］ベンズイミダゾール又はその類縁体とアルカンス
ルホン酸又はそのハロゲン置換体からなる複合体、
［２］［１］記載の複合体を有効成分として含む核酸合
成反応促進剤、及び［３］［１］記載の複合体の存在下
にヌクレオシドホスホロアミダイト又はヌクレオシドホ
スホノアミダイトとヌクレオシドとを反応させることを
特徴とするオリゴヌクレオチドの合成方法。
【００１１】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
【００１２】本発明の、ベンズイミダゾール又はその類
縁体とアルカンスルホン酸又はそのハロゲン置換体から
なる複合体としては、例えばベンズイミダゾールとトリ
フルオロメタンスルホン酸、又はベンズイミダゾールと
メタンスルホン酸からなる新規な複合体を挙げることが
でき、それぞれ下記構造式（１）又は（２）で表すこと
ができる化合物（それぞれ化合物（１）及び化合物
（２））で、ルイス塩基であるベンズイミダゾールの窒
素上の孤立電子対に水素イオンが結合した陽イオンと、
トリフルオロメタンスルホン酸又はメタンスルホン酸の
陰イオンとがイオン結合で複合体を形成している化合物
であり、ベンズイミダゾールの解離可能な水素の酸性度
が水素イオンの付加により増大しているのが特徴であ
る。
縁体とアルカンスルホン酸又はそのハロゲン置換体から
なる複合体としては、例えばベンズイミダゾールとトリ
フルオロメタンスルホン酸、又はベンズイミダゾールと
メタンスルホン酸からなる新規な複合体を挙げることが
でき、それぞれ下記構造式（１）又は（２）で表すこと
ができる化合物（それぞれ化合物（１）及び化合物
（２））で、ルイス塩基であるベンズイミダゾールの窒
素上の孤立電子対に水素イオンが結合した陽イオンと、
トリフルオロメタンスルホン酸又はメタンスルホン酸の
陰イオンとがイオン結合で複合体を形成している化合物
であり、ベンズイミダゾールの解離可能な水素の酸性度
が水素イオンの付加により増大しているのが特徴であ
る。
【００１３】
【化１】
【００１４】
【化２】 本発明の複合体は、例えばベンズイミダゾールとトリフ
ルオロメタンスルホン酸又はメタンスルホン酸とを等モ
ルずつ、室温下、ジクロロメタン中で混ぜ、エーテル中
より再結晶する方法等により、容易に得ることができ
る。
ルオロメタンスルホン酸又はメタンスルホン酸とを等モ
ルずつ、室温下、ジクロロメタン中で混ぜ、エーテル中
より再結晶する方法等により、容易に得ることができ
る。
【００１５】この際、ジクロロメタンの他に、クロロホ
ルム、四塩化炭素、1,2-ジクロロエタンなどを用いるこ
とができる。また、エーテル（ジエチルエーテル）の他
に、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、プ
ロパノール、ブタノールなどを用いることができる。
ルム、四塩化炭素、1,2-ジクロロエタンなどを用いるこ
とができる。また、エーテル（ジエチルエーテル）の他
に、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、プ
ロパノール、ブタノールなどを用いることができる。
【００１６】このようにして得られた複合体は、酸素及
び湿気に対して安定であり、室温保存が可能であるう
え、アセトニトリルに対する溶解性が高く、例えばベン
ズイミダゾールとトリフルオロメタンスルホン酸との複
合体のアセトニトリルに対する溶解性は０．４モル／
ｌ、ベンズイミダゾールとメタンスルホン酸との複合体
については０．１モル／ｌである。
び湿気に対して安定であり、室温保存が可能であるう
え、アセトニトリルに対する溶解性が高く、例えばベン
ズイミダゾールとトリフルオロメタンスルホン酸との複
合体のアセトニトリルに対する溶解性は０．４モル／
ｌ、ベンズイミダゾールとメタンスルホン酸との複合体
については０．１モル／ｌである。
【００１７】本発明におけるアルカンスルホン酸として
は、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、プロパンス
ルホン酸など、アルカンスルホン酸であればいかなるも
のでもよいが、低級アルカンのものが好ましく、特にメ
タンスルホン酸が好適に用いられる。また、本発明にお
いては、ベンズイミダゾールに代えてベンズイミダゾー
ル類縁体を、アルカンスルホン酸に代えてハロゲン化ア
ルカンスルホン酸を用いることができる。ベンズイミダ
ゾール類縁体としては、ベンズイミダゾール骨格を有す
るものが広く用いられるが、ベンズイミダゾールのベン
ゼン環又は５員環がアルキル基やハロゲンなどで置換さ
れている化合物などが挙げられる。例えば、２−クロロ
ベンズイミダゾール、２−ブロモベンズイミダゾール、
２−メチルベンズイミダゾール、２−フェニルベンズイ
ミダゾール、１−メチルベンズイミダゾールなどが好適
に用いられる。ハロゲン化アルカンスルホン酸として
は、アルキル基の１又は複数の水素がハロゲン原子で置
換されているいかなるものでもよく、置換ハロゲン原子
としてはフッ素、塩素などいかなるものでもよいがフッ
素が好ましく、特にフッ化メタンスルホン酸、その中で
もトリフルオロメタンスルホン酸が好適に用いられる。
は、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、プロパンス
ルホン酸など、アルカンスルホン酸であればいかなるも
のでもよいが、低級アルカンのものが好ましく、特にメ
タンスルホン酸が好適に用いられる。また、本発明にお
いては、ベンズイミダゾールに代えてベンズイミダゾー
ル類縁体を、アルカンスルホン酸に代えてハロゲン化ア
ルカンスルホン酸を用いることができる。ベンズイミダ
ゾール類縁体としては、ベンズイミダゾール骨格を有す
るものが広く用いられるが、ベンズイミダゾールのベン
ゼン環又は５員環がアルキル基やハロゲンなどで置換さ
れている化合物などが挙げられる。例えば、２−クロロ
ベンズイミダゾール、２−ブロモベンズイミダゾール、
２−メチルベンズイミダゾール、２−フェニルベンズイ
ミダゾール、１−メチルベンズイミダゾールなどが好適
に用いられる。ハロゲン化アルカンスルホン酸として
は、アルキル基の１又は複数の水素がハロゲン原子で置
換されているいかなるものでもよく、置換ハロゲン原子
としてはフッ素、塩素などいかなるものでもよいがフッ
素が好ましく、特にフッ化メタンスルホン酸、その中で
もトリフルオロメタンスルホン酸が好適に用いられる。
【００１８】本発明の複合体、特にベンズイミダゾール
とトリフルオロメタンスルホン酸、又はベンズイミダゾ
ールとメタンスルホン酸からなる複合体は、ホスホロア
ミダイト法によりオリゴヌクレオチドを合成する際の反
応促進剤として有効なものである。
とトリフルオロメタンスルホン酸、又はベンズイミダゾ
ールとメタンスルホン酸からなる複合体は、ホスホロア
ミダイト法によりオリゴヌクレオチドを合成する際の反
応促進剤として有効なものである。
【００１９】本発明の複合体を用いて、ヌクレオシドホ
スホロアミダイトとヌクレオシドを反応させる縮合反応
について説明する。
スホロアミダイトとヌクレオシドを反応させる縮合反応
について説明する。
【００２０】ヌクレオシドホスホロアミダイトとヌクレ
オシドを反応させる縮合反応、すなわちホスホロアミダ
イト法オリゴヌクレオチド合成反応は前述のように公知
の方法であり、一般的には以下の構造式（３）に示され
る、必要に応じて保護基で保護されたヌクレオシドのア
ミダイト試薬（化合物（３））と、構造式（４）で示さ
れる、必要に応じて保護基で保護されたヌクレオシド
（化合物（４））とを有機溶媒中で反応させる方法であ
る。
オシドを反応させる縮合反応、すなわちホスホロアミダ
イト法オリゴヌクレオチド合成反応は前述のように公知
の方法であり、一般的には以下の構造式（３）に示され
る、必要に応じて保護基で保護されたヌクレオシドのア
ミダイト試薬（化合物（３））と、構造式（４）で示さ
れる、必要に応じて保護基で保護されたヌクレオシド
（化合物（４））とを有機溶媒中で反応させる方法であ
る。
【００２１】
【化３】
【００２２】
【化４】 上記構造式（３）及び（４）で示される、必要に応じて
保護基で保護されたヌクレオシドのアミダイト試薬及び
ヌクレオシドとしては、ホスホロアミダイト法オリゴヌ
クレオチド合成反応で用いられている公知のものがその
まま例示されるが、それらの一部を具体的に示すと以下
のようなものである。
保護基で保護されたヌクレオシドのアミダイト試薬及び
ヌクレオシドとしては、ホスホロアミダイト法オリゴヌ
クレオチド合成反応で用いられている公知のものがその
まま例示されるが、それらの一部を具体的に示すと以下
のようなものである。
【００２３】すなわち、構造式（３）と（４）における
Ｂ1及びＢ2は、核酸塩基又は必要に応じて保護基で保護
をした核酸塩基から、ピリミジン塩基の場合には１位の
水素が、またプリン塩基の場合には９位の水素が除去さ
れたものであり、核酸塩基としては、例えば、チミン及
びウラシルが、また保護基で保護する必要のある核酸塩
基としては、例えば、シトシン、アデニン、及びグアニ
ンなどホスホロアミダイト法で通常使用されるものを挙
げることができる。ここで、核酸塩基の保護基として
は、シトシンの４位やアデニンの６位のＮに結合させた
アリルオキシカルボニル基、ベンゾイル基、ベンジル
基、アセチル基、フェノキシアセチル基、第三ブチルフ
ェノキシアセチル基、グアニンの２位のＮに結合させた
イソブチリル基、アリルオキシカルボニル基、フェノキ
シアセチル基、第三ブチルフェノキシアセチル基など、
ホスホロアミダイト法で通常使用されるものを挙げるこ
とができる。
Ｂ1及びＢ2は、核酸塩基又は必要に応じて保護基で保護
をした核酸塩基から、ピリミジン塩基の場合には１位の
水素が、またプリン塩基の場合には９位の水素が除去さ
れたものであり、核酸塩基としては、例えば、チミン及
びウラシルが、また保護基で保護する必要のある核酸塩
基としては、例えば、シトシン、アデニン、及びグアニ
ンなどホスホロアミダイト法で通常使用されるものを挙
げることができる。ここで、核酸塩基の保護基として
は、シトシンの４位やアデニンの６位のＮに結合させた
アリルオキシカルボニル基、ベンゾイル基、ベンジル
基、アセチル基、フェノキシアセチル基、第三ブチルフ
ェノキシアセチル基、グアニンの２位のＮに結合させた
イソブチリル基、アリルオキシカルボニル基、フェノキ
シアセチル基、第三ブチルフェノキシアセチル基など、
ホスホロアミダイト法で通常使用されるものを挙げるこ
とができる。
【００２４】Ｒ1〜Ｒ6についても、下記に例示されるよ
うなホスホロアミダイト法で通常使用されるものが適用
される。
うなホスホロアミダイト法で通常使用されるものが適用
される。
【００２５】Ｒ1としては、フェニル、フェノキシ、2-
クロロフェノキシ、アリルオキシ、2-シアノエトキシ、
メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、2-(2-ピリジル)
エチル、3-(3-ピリジル)プロポキシ、3-(4-ピリジル)プ
ロポキシ、4-(2-ピリジル)ブトキシ、5-(2-ピリジル)ペ
ントキシ、2-(2,2'-ビピリジル)エトキシなどである。
クロロフェノキシ、アリルオキシ、2-シアノエトキシ、
メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、2-(2-ピリジル)
エチル、3-(3-ピリジル)プロポキシ、3-(4-ピリジル)プ
ロポキシ、4-(2-ピリジル)ブトキシ、5-(2-ピリジル)ペ
ントキシ、2-(2,2'-ビピリジル)エトキシなどである。
【００２６】Ｒ2としては、二つあるそれぞれが同じで
あっても異なっていてもよく、例えば、イソプロピル、
メチル、エチル、プロピル、フェニルなどである。また
Ｒ2としては、それが環状であってもよく、例えば、Ｏ
（ＣＨ2ＣＨ2）2、（ＣＨ2）4、（ＣＨ2）5、（ＣＨ2）
7などである。
あっても異なっていてもよく、例えば、イソプロピル、
メチル、エチル、プロピル、フェニルなどである。また
Ｒ2としては、それが環状であってもよく、例えば、Ｏ
（ＣＨ2ＣＨ2）2、（ＣＨ2）4、（ＣＨ2）5、（ＣＨ2）
7などである。
【００２７】Ｒ3は、Ｈ又はＯＲ7で、Ｒ7としては、ア
リルオキシカルボニル、第三ブチルジメチルシリル、ト
リエチルシリル、ジフェニルメチルシリル、ジイソプロ
ピルフェニルシリル、メチル、フェニル、テトラヒドロ
ピラニル、1-(メトキシ)-4-オキサシクロヘキシル、ア
セチル、ベンゾイル、ピバロイル、p-トルエンスルホニ
ルなどである。
リルオキシカルボニル、第三ブチルジメチルシリル、ト
リエチルシリル、ジフェニルメチルシリル、ジイソプロ
ピルフェニルシリル、メチル、フェニル、テトラヒドロ
ピラニル、1-(メトキシ)-4-オキサシクロヘキシル、ア
セチル、ベンゾイル、ピバロイル、p-トルエンスルホニ
ルなどである。
【００２８】Ｒ4としては、第三ブチルジメチルシリ
ル、トリエチルシリル、ジフェニルメチルシリル、ジイ
ソプロピルフェニルシリル、メチル、フェニル、テトラ
ヒドロピラニル、1-(メトキシ)-4-オキサシクロヘキシ
ル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、p-トルエンス
ルホニルなどである。
ル、トリエチルシリル、ジフェニルメチルシリル、ジイ
ソプロピルフェニルシリル、メチル、フェニル、テトラ
ヒドロピラニル、1-(メトキシ)-4-オキサシクロヘキシ
ル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、p-トルエンス
ルホニルなどである。
【００２９】Ｒ5としては、アリルオキシカルボニル、
ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、第三ブチ
ルジメチルシリル、トリエチルシリル、ジフェニルメチ
ルシリル、ジイソプロピルフェニルシリル、メチル、フ
ェニル、テトラヒドロピラニル、1-(メトキシ)-4-オキ
サシクロヘキシル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイ
ル、p-トルエンスルホニルなどである。
ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、第三ブチ
ルジメチルシリル、トリエチルシリル、ジフェニルメチ
ルシリル、ジイソプロピルフェニルシリル、メチル、フ
ェニル、テトラヒドロピラニル、1-(メトキシ)-4-オキ
サシクロヘキシル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイ
ル、p-トルエンスルホニルなどである。
【００３０】Ｒ6は、Ｈ又はＯＲ8で、Ｒ8としては、ア
リルオキシカルボニル、第三ブチルジメチルシリル、ト
リエチルシリル、ジフェニルメチルシリル、ジイソプロ
ピルフェニルシリル、メチル、フェニル、テトラヒドロ
ピラニル、1-(メトキシ)-4-オキサシクロヘキシル、ア
セチル、ベンゾイル、ピバロイル、p-トルエンスルホニ
ルなどである。
リルオキシカルボニル、第三ブチルジメチルシリル、ト
リエチルシリル、ジフェニルメチルシリル、ジイソプロ
ピルフェニルシリル、メチル、フェニル、テトラヒドロ
ピラニル、1-(メトキシ)-4-オキサシクロヘキシル、ア
セチル、ベンゾイル、ピバロイル、p-トルエンスルホニ
ルなどである。
【００３１】ヌクレオシドホスホロアミダイトとヌクレ
オシドを反応させる縮合反応、すなわちホスホロアミダ
イト法オリゴヌクレオチド合成反応は一般に有機溶媒中
で行われており、使用される溶媒としては、アセトニト
リル、プロピオニトリル、ブチロニトリル等のアルキル
ニトリル類、ジクロロメタン、1,1-ジクロロエタン、1,
2-ジクロロエタン、トリクロロエタン等のハロゲン化ア
ルカン、テトラヒドロフラン等のエーテル類などであ
り、本発明においても同様にこれらの溶媒を用いて反応
させることができる。
オシドを反応させる縮合反応、すなわちホスホロアミダ
イト法オリゴヌクレオチド合成反応は一般に有機溶媒中
で行われており、使用される溶媒としては、アセトニト
リル、プロピオニトリル、ブチロニトリル等のアルキル
ニトリル類、ジクロロメタン、1,1-ジクロロエタン、1,
2-ジクロロエタン、トリクロロエタン等のハロゲン化ア
ルカン、テトラヒドロフラン等のエーテル類などであ
り、本発明においても同様にこれらの溶媒を用いて反応
させることができる。
【００３２】反応は、１０℃から４０℃、好ましくは１
５℃から３５℃、さらに好ましくは２０℃から３０℃の
温度下で行われる。
５℃から３５℃、さらに好ましくは２０℃から３０℃の
温度下で行われる。
【００３３】反応させる際のヌクレオシドホスホロアミ
ダイトとヌクレオシドのモル比は、ヌクレオシドを１と
すると、ヌクレオシドホスホロアミダイトは１〜１０、
好ましくは１.２〜２.０、さらに好ましくは１.２であ
り、本発明の複合体の使用量は、モル比で、ヌクレオシ
ドを１として、１〜３０、好ましくは１〜５、さらに好
ましくは１．２〜１．５である。
ダイトとヌクレオシドのモル比は、ヌクレオシドを１と
すると、ヌクレオシドホスホロアミダイトは１〜１０、
好ましくは１.２〜２.０、さらに好ましくは１.２であ
り、本発明の複合体の使用量は、モル比で、ヌクレオシ
ドを１として、１〜３０、好ましくは１〜５、さらに好
ましくは１．２〜１．５である。
【００３４】ホスホロアミダイトとヌクレオシドの縮合
反応(０.１Ｍ溶液、室温）における反応促進能力を、公
知の1H-テトラゾール又はNPTと比較すると、例えば、以
下の構造式（５）
反応(０.１Ｍ溶液、室温）における反応促進能力を、公
知の1H-テトラゾール又はNPTと比較すると、例えば、以
下の構造式（５）
【００３５】
【化５】 に示す反応性が低いヌクレオシド３’−ホスホロモルホ
リダイト（化合物（５））と以下の構造式（６）
リダイト（化合物（５））と以下の構造式（６）
【００３６】
【化６】 に示す５’−ＯＨ体のヌクレオシド（化合物（６））と
の反応を同一の条件下で行った場合（アミダイト：ヌク
レオシド：促進剤＝１．５：１：３、アセトニトリル
中、２５℃、５分）、1H-テトラゾール又はNPTを促進剤
として用いた場合の反応収率はそれぞれ５２％又は８４
％であるのに対し、ベンズイミダゾールとトリフルオロ
メタンスルホン酸の複合体を用いた場合には９８％であ
った。アミダイトの塩基を他の塩基にかえた場合、及び
アミダイトの種類やヌクレオシドの種類を他のものにか
えた場合にもほぼ同様の結果が得られ、本発明の促進剤
は非常に優れた反応促進作用を示す。とくに、本発明の
促進剤は、一般的なホスホロアミダイトに対して有効な
だけではなく、化学的要因や立体的要因から反応性が低
くなっているホスホロアミダイト等を用いた縮合反応に
おいても優れた反応促進作用を示すものである。
の反応を同一の条件下で行った場合（アミダイト：ヌク
レオシド：促進剤＝１．５：１：３、アセトニトリル
中、２５℃、５分）、1H-テトラゾール又はNPTを促進剤
として用いた場合の反応収率はそれぞれ５２％又は８４
％であるのに対し、ベンズイミダゾールとトリフルオロ
メタンスルホン酸の複合体を用いた場合には９８％であ
った。アミダイトの塩基を他の塩基にかえた場合、及び
アミダイトの種類やヌクレオシドの種類を他のものにか
えた場合にもほぼ同様の結果が得られ、本発明の促進剤
は非常に優れた反応促進作用を示す。とくに、本発明の
促進剤は、一般的なホスホロアミダイトに対して有効な
だけではなく、化学的要因や立体的要因から反応性が低
くなっているホスホロアミダイト等を用いた縮合反応に
おいても優れた反応促進作用を示すものである。
【００３７】
【実施例】以下実施例に基づいてより詳細に説明する。
【００３８】［実施例１］ ベンズイミダゾールとトリ
フルオロメタンスルホン酸の複合体（化合物（１））の
合成 ベンズイミダゾールとトリフルオロメタンスルホン酸と
を０．０４モルずつジクロロメタン（５０mL）溶液に０
℃で混ぜ、３０分間攪拌した。次いでジクロロメタンを
１０mLまで減圧留去させた後、複合体に２０mLのエーテ
ルを加え、これから再結晶して、目的物を得た。
フルオロメタンスルホン酸の複合体（化合物（１））の
合成 ベンズイミダゾールとトリフルオロメタンスルホン酸と
を０．０４モルずつジクロロメタン（５０mL）溶液に０
℃で混ぜ、３０分間攪拌した。次いでジクロロメタンを
１０mLまで減圧留去させた後、複合体に２０mLのエーテ
ルを加え、これから再結晶して、目的物を得た。
【００３９】融点：１８８−１９０℃ＦＴＩＲ（ＫＢｒ） ：３１４６、１６２２、１５３５、
１４５６、１２９９、１０３０、９５１、９３６、８４
１、７６２、６４２cm-1 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ） ：７．５３−７．５５（m,2H,
H-7）、７．７４−７．７６（m,2H,H-6）、９．２４
（S,1H,H-2）ppm元素分析 ：Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ8Ｈ7Ｆ3
Ｎ2Ｏ3Ｓ：Ｃ，３５．８３；Ｈ，２．６３；Ｎ，１０．
４４ Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３５．８３；Ｈ，２．５９；Ｎ，１
０．４０溶解性(対アセトニトリル) ：０．４モル／L ［実施例２］ ベンズイミダゾールとメタンスルホン酸
の複合体（化合物（２））の合成 ベンズイミダゾールとメタンスルホン酸とを０．０４モ
ルずつジクロロメタン（５０mL）溶液に０℃で混ぜ、３
０分間攪拌した。反応溶液に２０mLのエーテルを加え、
これから再結晶して、目的物を得た。
１４５６、１２９９、１０３０、９５１、９３６、８４
１、７６２、６４２cm-1 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ） ：７．５３−７．５５（m,2H,
H-7）、７．７４−７．７６（m,2H,H-6）、９．２４
（S,1H,H-2）ppm元素分析 ：Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ8Ｈ7Ｆ3
Ｎ2Ｏ3Ｓ：Ｃ，３５．８３；Ｈ，２．６３；Ｎ，１０．
４４ Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３５．８３；Ｈ，２．５９；Ｎ，１
０．４０溶解性(対アセトニトリル) ：０．４モル／L ［実施例２］ ベンズイミダゾールとメタンスルホン酸
の複合体（化合物（２））の合成 ベンズイミダゾールとメタンスルホン酸とを０．０４モ
ルずつジクロロメタン（５０mL）溶液に０℃で混ぜ、３
０分間攪拌した。反応溶液に２０mLのエーテルを加え、
これから再結晶して、目的物を得た。
【００４０】融点：２１４−２１５℃ＦＴＩＲ（ＫＢｒ） ：３１４６、１６２２、１５３５、
１４５６、１４１４、１２９９、１０３０、９５１、９
３６、８４１、７６２、６４０cm-1 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ） ：７．６４−７．６８（m,2H,
H-7）、７．８９−７．９２（m,2H,H-6）、９．４２
（S,1H,H-2）ppm元素分析 ：Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ8Ｈ10Ｎ2
Ｏ3Ｓ：Ｃ，４４．８５；Ｈ，４．７０；Ｎ，１３．０
８ Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４４．８４；Ｈ，４．７８；Ｎ，１
３．０７溶解性(対アセトニトリル) ：０．１モル／L以下 ［実施例３］ホスホロアミダイト類の合成 a) 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミジン 3'-(2-ク
ロロフェニル) モルホリノホスホロアミダイト（化合物
（７ｄ））の合成 下記構造式（７ｄ）で示される標記ホスホロアミダイト
を以下の手順で合成した。なお、下記構造式においてＤ
ＭＴrはジメトキシトリチル基、Ｔhはチミジン構造であ
ることを示す。
１４５６、１４１４、１２９９、１０３０、９５１、９
３６、８４１、７６２、６４０cm-1 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ） ：７．６４−７．６８（m,2H,
H-7）、７．８９−７．９２（m,2H,H-6）、９．４２
（S,1H,H-2）ppm元素分析 ：Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ8Ｈ10Ｎ2
Ｏ3Ｓ：Ｃ，４４．８５；Ｈ，４．７０；Ｎ，１３．０
８ Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４４．８４；Ｈ，４．７８；Ｎ，１
３．０７溶解性(対アセトニトリル) ：０．１モル／L以下 ［実施例３］ホスホロアミダイト類の合成 a) 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミジン 3'-(2-ク
ロロフェニル) モルホリノホスホロアミダイト（化合物
（７ｄ））の合成 下記構造式（７ｄ）で示される標記ホスホロアミダイト
を以下の手順で合成した。なお、下記構造式においてＤ
ＭＴrはジメトキシトリチル基、Ｔhはチミジン構造であ
ることを示す。
【００４１】
【化７】 1H-テトラゾール(５６８mg、８.１mmol)、モルホリン
(０.７８mL、８.９mmol)、2-クロロフェノール(１.６８
mL)のアセトニトリル(１０mL)溶液に5'-O-p,p'-ジメト
キシトリチル-チミジン 3'-ビスモルホリダイト(１２.
１mg、１６.２mmol) のアセトニトリル(１０mL)溶液を
キャニュラーを通して加え、室温で３０分攪拌した。反
応溶液を酢酸エチル(１５０mL)で希釈し、飽和食塩水
(１００mL)で洗浄し、乾燥した。濃縮した後、得られた
粗生成物(１３g)をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー(１５０g、ヘキサン／酢酸エチル／モルホリン＝１／
２／痕跡量)で精製し、目的とする5'-O-p,p'-ジメトキ
シトリチル-チミジン 3'-(2-クロロフェニル) モルホリ
ノホスホロアミダイト１１.２５g(１４.３mmol／収率８
８％）を得た。
(０.７８mL、８.９mmol)、2-クロロフェノール(１.６８
mL)のアセトニトリル(１０mL)溶液に5'-O-p,p'-ジメト
キシトリチル-チミジン 3'-ビスモルホリダイト(１２.
１mg、１６.２mmol) のアセトニトリル(１０mL)溶液を
キャニュラーを通して加え、室温で３０分攪拌した。反
応溶液を酢酸エチル(１５０mL)で希釈し、飽和食塩水
(１００mL)で洗浄し、乾燥した。濃縮した後、得られた
粗生成物(１３g)をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー(１５０g、ヘキサン／酢酸エチル／モルホリン＝１／
２／痕跡量)で精製し、目的とする5'-O-p,p'-ジメトキ
シトリチル-チミジン 3'-(2-クロロフェニル) モルホリ
ノホスホロアミダイト１１.２５g(１４.３mmol／収率８
８％）を得た。
【００４２】5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミジン
3'-(2-クロロフェニル) モルホリノホスホロアミダイト
（化合物（７ｄ））の特性形状 ：無色アモルファスＦＴＩＲ（ＫＢr) ：３１６７、３０６１、２９５５、２
８３９、１６９１、１６０８、１５８４、１５１０、１
４７６、１３６８、１２５４、１１７７、１１１１、１
０３４cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ） ：λmax ２３７nm(sh)、２６９nm(ε
=18800) 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：１.４３(s,3H,CH3)、２.３１
−２.４１(m,1H,H-2')、２.４８−２.６６(m,1H,H-
2')、３.１０−３.２６(m,4H,N(CH 2CH2)2O)、３.３４(d
d,J=3.7,10.6Hz,1H,H-5')、３.４２−３.６３(m,5H,H-
5',N(CH2CH2 )2O) 、３.７６(s,6H,OCH2x2)、４.１７−
４.３０(m,1H,H-4')、４.８２−５.０１(m,1H,H-3')、
６.３９−６.４８(m,1H,H-1')、６.６５−６.８６(m,4
H,DMTrのOCH3のオルト位プロトン)、６.９５−７.４０
(m,13H,芳香環プロトン)、７.５８、７.６３(2本のシン
グレット,1H,H-6) 、８.１−８.９(br s,1H,NHCO)ppm 31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：１４０.９、１４１.４ppm なお、化合物（７ａ）、（７ｂ）、及び（７ｃ）につい
ても化合物（７ｄ）を合成した方法と同様な方法で合成
した。
3'-(2-クロロフェニル) モルホリノホスホロアミダイト
（化合物（７ｄ））の特性形状 ：無色アモルファスＦＴＩＲ（ＫＢr) ：３１６７、３０６１、２９５５、２
８３９、１６９１、１６０８、１５８４、１５１０、１
４７６、１３６８、１２５４、１１７７、１１１１、１
０３４cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ） ：λmax ２３７nm(sh)、２６９nm(ε
=18800) 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：１.４３(s,3H,CH3)、２.３１
−２.４１(m,1H,H-2')、２.４８−２.６６(m,1H,H-
2')、３.１０−３.２６(m,4H,N(CH 2CH2)2O)、３.３４(d
d,J=3.7,10.6Hz,1H,H-5')、３.４２−３.６３(m,5H,H-
5',N(CH2CH2 )2O) 、３.７６(s,6H,OCH2x2)、４.１７−
４.３０(m,1H,H-4')、４.８２−５.０１(m,1H,H-3')、
６.３９−６.４８(m,1H,H-1')、６.６５−６.８６(m,4
H,DMTrのOCH3のオルト位プロトン)、６.９５−７.４０
(m,13H,芳香環プロトン)、７.５８、７.６３(2本のシン
グレット,1H,H-6) 、８.１−８.９(br s,1H,NHCO)ppm 31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：１４０.９、１４１.４ppm なお、化合物（７ａ）、（７ｂ）、及び（７ｃ）につい
ても化合物（７ｄ）を合成した方法と同様な方法で合成
した。
【００４３】b) 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミ
ジン 3'-(2-シアノエチル) N,N-ジイソプロピルホスホ
ロアミダイト（化合物（８））の合成 下記構造式（８）で示される標記ホスホロアミダイトを
以下の手順で合成した。なお、下記構造式においてＤＭ
Ｔrはジメトキシトリチル基、Ｔhはチミジン構造である
ことを示す。
ジン 3'-(2-シアノエチル) N,N-ジイソプロピルホスホ
ロアミダイト（化合物（８））の合成 下記構造式（８）で示される標記ホスホロアミダイトを
以下の手順で合成した。なお、下記構造式においてＤＭ
Ｔrはジメトキシトリチル基、Ｔhはチミジン構造である
ことを示す。
【００４４】
【化８】 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチルチミジン(２４５mg、０.
４５mmol)の塩化メチレン(５mL)懸濁液にジイソプロピ
ルエチルアミン(０.３５mL、２mmol)及びクロロ(2-シア
ノエチルアルコキシ)ジイソプロピルアミノホスフィン
を加え、室温で１２分間攪拌した。反応溶液をジクロロ
メタン(５０mL)で希釈し、飽和食塩水(２０mL)で洗浄
し、乾燥した。濃縮した後、得られた粗生成物(３５０m
g)をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(６g、ヘキサ
ン／酢酸エチル／ジイソプロピルアミン＝１／１／痕跡
量)で精製し、目的とする5'-O-p,p'-ジメ トキシトリチ
ル-チミジン 3'-(2-エチルアルコキシ) N,N-ジイソプロ
ピルホスホロアミダイトを収率８５％で得た。
４５mmol)の塩化メチレン(５mL)懸濁液にジイソプロピ
ルエチルアミン(０.３５mL、２mmol)及びクロロ(2-シア
ノエチルアルコキシ)ジイソプロピルアミノホスフィン
を加え、室温で１２分間攪拌した。反応溶液をジクロロ
メタン(５０mL)で希釈し、飽和食塩水(２０mL)で洗浄
し、乾燥した。濃縮した後、得られた粗生成物(３５０m
g)をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(６g、ヘキサ
ン／酢酸エチル／ジイソプロピルアミン＝１／１／痕跡
量)で精製し、目的とする5'-O-p,p'-ジメ トキシトリチ
ル-チミジン 3'-(2-エチルアルコキシ) N,N-ジイソプロ
ピルホスホロアミダイトを収率８５％で得た。
【００４５】5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミジン
3'-(2-シアノエチル) N,N-ジイソプロピルホスホロアミ
ダイト（化合物（８））の特性形状 ：無色アモルファス （８）は、1Ｈ ＮＭＲスペクトルにおいて亜リン酸の
２−シアノエチル部位の２種のメチレン水素とジイソプ
ロピルアミノ基のメチル水素及びメチン水素に帰属され
るピークが観察されること、31Ｐ ＮＭＲスペクトルに
おいてホスホロアミダイトのリン原子の化学シフトとし
て適切な領域である１４７．４ppmにピークが観察され
ることよりその構造を確認した。
3'-(2-シアノエチル) N,N-ジイソプロピルホスホロアミ
ダイト（化合物（８））の特性形状 ：無色アモルファス （８）は、1Ｈ ＮＭＲスペクトルにおいて亜リン酸の
２−シアノエチル部位の２種のメチレン水素とジイソプ
ロピルアミノ基のメチル水素及びメチン水素に帰属され
るピークが観察されること、31Ｐ ＮＭＲスペクトルに
おいてホスホロアミダイトのリン原子の化学シフトとし
て適切な領域である１４７．４ppmにピークが観察され
ることよりその構造を確認した。
【００４６】C) N6-アリルオキシカルボニル-2'-O-t-
ブチルジメチルシリル-5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-
アデノシン 3'-アリルN,N-ジイソプロピルホスホロアミ
ダイト（化合物（９））の合成 下記構造式（９）で示される標記ホスホロアミダイトを
以下の手順で合成した。なお、下記構造式においてＴＢ
ＤＭＳはt-ブチルジメチルシリル基、ＤＭＴrはジメト
キシトリチル基、ＡｄAOCはN6-アリルオキシカルボニル
アデノシン構造であることを示す。
ブチルジメチルシリル-5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-
アデノシン 3'-アリルN,N-ジイソプロピルホスホロアミ
ダイト（化合物（９））の合成 下記構造式（９）で示される標記ホスホロアミダイトを
以下の手順で合成した。なお、下記構造式においてＴＢ
ＤＭＳはt-ブチルジメチルシリル基、ＤＭＴrはジメト
キシトリチル基、ＡｄAOCはN6-アリルオキシカルボニル
アデノシン構造であることを示す。
【００４７】
【化９】 2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-p-モノメトキシト
リチル-アデノシン（３.０g、４.３９mmol）のテトラヒ
ドロフラン(ＴＨＦ)(２０mL)溶液にトリメチルシリルイ
ミダゾール(１.２７mL、６.５９mmol)を加え、室温で１
０分攪拌した。反応溶液を酢酸エチル(１５０mL)で希釈
し、飽和食塩水(１００mL)で洗浄し、乾燥した。濃縮し
た後得られたトリメチルシリル体のＴＨＦ(２０mL)溶液
に１.６２N塩化tert-ブチルマグネシウム(５.５mL、８.
７８mmol)ＴＨＦ溶液を滴下し、室温で３０分攪拌し
た。アリルオキシカルボニル-1-ヒドロキシベンゾトリ
アゾール(１.３４g、６.９５mmol)ＴＨＦ溶液を滴下し
室温で３０分攪拌した。反応容器にメタノール(５mL)を
加え、酢酸エチル(１５０mL)で希釈し、飽和塩化アンモ
ニウム水溶液(１００mL)、飽和炭酸水素ナトリウム水溶
液(１００mL)、飽和食塩水(１００mL)で洗浄し、乾燥し
た。濃縮した後、得られた粗アリルオキシカルボニル体
(４.２g)を１Mクエン酸メタノール溶液(２０mL、２０mm
ol)で３０分処理し、反応溶液に水(５０mL)を加え、酢
酸エチル(１５０mL)で抽出し、飽和塩化アンモニウム水
溶液(１００mL)、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(１０
０mL)、飽和食塩水(１００mL)で洗浄し、乾燥した。濃
縮した後、得られた粗生成物(３.８g)をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー(８０g、ヘキサン／酢酸エチル／
トリエチルアミン＝１／２／痕跡量)で精製し、目的と
する無色アモルファスのN6-アリルオキシカルボニル-2'
-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-p-モノメトキシトリ
チル-アデノシン１.６０g（２.５０mmol／収率５７％）
を得た。
リチル-アデノシン（３.０g、４.３９mmol）のテトラヒ
ドロフラン(ＴＨＦ)(２０mL)溶液にトリメチルシリルイ
ミダゾール(１.２７mL、６.５９mmol)を加え、室温で１
０分攪拌した。反応溶液を酢酸エチル(１５０mL)で希釈
し、飽和食塩水(１００mL)で洗浄し、乾燥した。濃縮し
た後得られたトリメチルシリル体のＴＨＦ(２０mL)溶液
に１.６２N塩化tert-ブチルマグネシウム(５.５mL、８.
７８mmol)ＴＨＦ溶液を滴下し、室温で３０分攪拌し
た。アリルオキシカルボニル-1-ヒドロキシベンゾトリ
アゾール(１.３４g、６.９５mmol)ＴＨＦ溶液を滴下し
室温で３０分攪拌した。反応容器にメタノール(５mL)を
加え、酢酸エチル(１５０mL)で希釈し、飽和塩化アンモ
ニウム水溶液(１００mL)、飽和炭酸水素ナトリウム水溶
液(１００mL)、飽和食塩水(１００mL)で洗浄し、乾燥し
た。濃縮した後、得られた粗アリルオキシカルボニル体
(４.２g)を１Mクエン酸メタノール溶液(２０mL、２０mm
ol)で３０分処理し、反応溶液に水(５０mL)を加え、酢
酸エチル(１５０mL)で抽出し、飽和塩化アンモニウム水
溶液(１００mL)、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(１０
０mL)、飽和食塩水(１００mL)で洗浄し、乾燥した。濃
縮した後、得られた粗生成物(３.８g)をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー(８０g、ヘキサン／酢酸エチル／
トリエチルアミン＝１／２／痕跡量)で精製し、目的と
する無色アモルファスのN6-アリルオキシカルボニル-2'
-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-p-モノメトキシトリ
チル-アデノシン１.６０g（２.５０mmol／収率５７％）
を得た。
【００４８】N6-アリルオキシカルボニル-2'-O-t-ブチ
ルジメチルシリル-5'-O-p-モノメトキシトリチル-アデ
ノシンの特性ＴＬＣ ：Ｒf=０.４３(ヘキサン／酢酸エチル＝１／５)ＦＴＩＲ（ＫＢr) ：３２６６、２９３２、２８５９、２
０４７、１７６１、１６１３、１５１０、１４６６、１
３０４、１２５４cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ） ：λmax ２３５nm(ε=21200) 、２６
７nm(ε=15700) 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：０.０３(s,3H,(CH3)2Si)、
０.１０(s,3H,(CH3)2Si)、０.９０(s,9H,(CH3)3C)、３.
２７(dd,J=3.7,10.6Hz,1H,H-5')、３.５３(dd,J=3.7,1
0.9Hz,1H,H-5')、３.７９(s,6H,OCH3x2)、４.１５−４.
３８(m,2H,H-3'及びH-4')、４.７１(d,J=5.7Hz,2H,CH2=
CHCH 2)、４.９５(t,J=4.9Hz,1H,H-2')、５.３０(dd,J=
1.0,10.2Hz,1H,cis-CH 2=CHCH2)、５.４２(dd,J=1.0,17.
2Hz,1H,トランス-CH2=CHCH2)、５.８２−６.０３(m,3H,
H-1'及びCH2=CHCH2)、６.７３(d,J=7.6Hz,4H,DMTrのOCH
3のオルト位プロトン)、７.１５−７.４５(m,9H,DMTrの
芳香環プロトン)、８.０５(s,1H,H-2)、８.６１(s,1H,H
-8)ppm N6-アリルオキシカルボニル-2'-O-t-ブチルジメチルシ
リル-5'-O-p-モノメトキシトリチル-アデノシン(３１３
mg、０.４８８mmol)のアセトニトリル(２mL)溶液に1H-
テトラゾール(１７mg、０.２４４mmol)、ジイソプロピ
ルアミン(３８μL、０.２６９mmol)を加え、室温で１０
分攪拌した後、アリルオキシビス(ジイソプロピルアミ
ノ)ホスフィン(２２５μL)を加え、室温で３０分攪拌し
た。反応溶液を酢酸エチル(１００mL)で希釈し、飽和食
塩水(２０mL)で洗浄し、乾燥した。濃縮した後、得られ
た粗生成物(４４０mg)をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィー(１０g、ヘキサン／酢酸エチル／ジイソプロピル
アミン＝２／１／痕跡量)で精製し、目的とするN6-アリ
ルオキシカルボニル-2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-
O-p,p'-ジメトキシトリチル-アデノシン 3'-アリルN,N-
ジイソプロピルホスホロアミダイト４０４mg(０.４９mm
ol／収率８８％)を得た。
ルジメチルシリル-5'-O-p-モノメトキシトリチル-アデ
ノシンの特性ＴＬＣ ：Ｒf=０.４３(ヘキサン／酢酸エチル＝１／５)ＦＴＩＲ（ＫＢr) ：３２６６、２９３２、２８５９、２
０４７、１７６１、１６１３、１５１０、１４６６、１
３０４、１２５４cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ） ：λmax ２３５nm(ε=21200) 、２６
７nm(ε=15700) 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：０.０３(s,3H,(CH3)2Si)、
０.１０(s,3H,(CH3)2Si)、０.９０(s,9H,(CH3)3C)、３.
２７(dd,J=3.7,10.6Hz,1H,H-5')、３.５３(dd,J=3.7,1
0.9Hz,1H,H-5')、３.７９(s,6H,OCH3x2)、４.１５−４.
３８(m,2H,H-3'及びH-4')、４.７１(d,J=5.7Hz,2H,CH2=
CHCH 2)、４.９５(t,J=4.9Hz,1H,H-2')、５.３０(dd,J=
1.0,10.2Hz,1H,cis-CH 2=CHCH2)、５.４２(dd,J=1.0,17.
2Hz,1H,トランス-CH2=CHCH2)、５.８２−６.０３(m,3H,
H-1'及びCH2=CHCH2)、６.７３(d,J=7.6Hz,4H,DMTrのOCH
3のオルト位プロトン)、７.１５−７.４５(m,9H,DMTrの
芳香環プロトン)、８.０５(s,1H,H-2)、８.６１(s,1H,H
-8)ppm N6-アリルオキシカルボニル-2'-O-t-ブチルジメチルシ
リル-5'-O-p-モノメトキシトリチル-アデノシン(３１３
mg、０.４８８mmol)のアセトニトリル(２mL)溶液に1H-
テトラゾール(１７mg、０.２４４mmol)、ジイソプロピ
ルアミン(３８μL、０.２６９mmol)を加え、室温で１０
分攪拌した後、アリルオキシビス(ジイソプロピルアミ
ノ)ホスフィン(２２５μL)を加え、室温で３０分攪拌し
た。反応溶液を酢酸エチル(１００mL)で希釈し、飽和食
塩水(２０mL)で洗浄し、乾燥した。濃縮した後、得られ
た粗生成物(４４０mg)をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィー(１０g、ヘキサン／酢酸エチル／ジイソプロピル
アミン＝２／１／痕跡量)で精製し、目的とするN6-アリ
ルオキシカルボニル-2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-
O-p,p'-ジメトキシトリチル-アデノシン 3'-アリルN,N-
ジイソプロピルホスホロアミダイト４０４mg(０.４９mm
ol／収率８８％)を得た。
【００４９】N6-アリルオキシカルボニル-2'-O-t-ブチ
ルジメチルシリル-5'-O-p-モノメトキシトリチル-アデ
ノシン 3'-アリルN,N-ジイソプロピルホスホロアミダイ
ト（化合物（９））の 特性形状 ：無色アモルファスＴＬＣ ：Ｒf=０.４８(ヘキサン／酢酸エチル＝１／１)ＦＴＩＲ（ＫＢr) ：２９６４、２０４７、１７６５、１
６１１、１５１０、１４６４、１３６４、１３０４、１
２５２cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ） ：λmax ２３６nm(ε=16500) 、２６
７nm(ε=14100) 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：０.０４(s,3H,(CH3)2Si)、
０.１１(s,3H,(CH3)2Si)、０.９１(s,9H,(CH3)3C)、１.
２３−１.５１(m,12H,CH(CH 3)2x2) 、３.５３−３.６２
(m,1H,H-5')、３.７２−３.９０(m,3H,H-5',CH(CH3)2x
2)、３.９２(s,6H,OCH3x2)、４.１０−４.４６(m,2H,CH
2=CHCH 2O)、４.５７−４.７１(m,2H,H-3'及びH-4') 、
４.７１(d,J=5.7Hz,2H,CH2=CHCH2)、４.９８(t,J=4.9H
z,1H,H-2')、５.１７−５.５５(m,5H,CH2=CHCH 2OCO,cis
-CH 2=CHCH2OCO,CH 2=CHCH2O)、５.６３(dd,J=1.0,17.4H
z,1H,トランス-CH 2=CHCH2OCO)、５.８２−６.３４(m,3
H,H-1'及びCH2=CHCH2x2)、７.０１(d,J=7.6Hz,4H,DMTr
のOCH3のオルト位プロトン)、７.４１−７.７３(m,9H,D
MTrの芳香環プロトン)、８.３７、８.３９(2本のシング
レット,1H,H-2)、８.４５(br s,1H,NHCO)、８.８５、
８.８７(2本のシングレット,1H,H-8)ppm 31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：１４８.９、１５１.１ppm d) 2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-p,p'-ジメトキ
シトリチルウリジン 3'-アリルN,N-ジイソプロピルホス
ホロアミダイト（化合物（１０））の合成 下記構造式（１０）で示される標記ホスホロアミダイト
を以下の手順で合成した。なお、下記構造式においてＴ
ＢＤＭＳはt-ブチルジメチルシリル基、ＤＭＴrはジメ
トキシトリチル基、Ｕrはウリジン構造であることを示
す。
ルジメチルシリル-5'-O-p-モノメトキシトリチル-アデ
ノシン 3'-アリルN,N-ジイソプロピルホスホロアミダイ
ト（化合物（９））の 特性形状 ：無色アモルファスＴＬＣ ：Ｒf=０.４８(ヘキサン／酢酸エチル＝１／１)ＦＴＩＲ（ＫＢr) ：２９６４、２０４７、１７６５、１
６１１、１５１０、１４６４、１３６４、１３０４、１
２５２cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ） ：λmax ２３６nm(ε=16500) 、２６
７nm(ε=14100) 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：０.０４(s,3H,(CH3)2Si)、
０.１１(s,3H,(CH3)2Si)、０.９１(s,9H,(CH3)3C)、１.
２３−１.５１(m,12H,CH(CH 3)2x2) 、３.５３−３.６２
(m,1H,H-5')、３.７２−３.９０(m,3H,H-5',CH(CH3)2x
2)、３.９２(s,6H,OCH3x2)、４.１０−４.４６(m,2H,CH
2=CHCH 2O)、４.５７−４.７１(m,2H,H-3'及びH-4') 、
４.７１(d,J=5.7Hz,2H,CH2=CHCH2)、４.９８(t,J=4.9H
z,1H,H-2')、５.１７−５.５５(m,5H,CH2=CHCH 2OCO,cis
-CH 2=CHCH2OCO,CH 2=CHCH2O)、５.６３(dd,J=1.0,17.4H
z,1H,トランス-CH 2=CHCH2OCO)、５.８２−６.３４(m,3
H,H-1'及びCH2=CHCH2x2)、７.０１(d,J=7.6Hz,4H,DMTr
のOCH3のオルト位プロトン)、７.４１−７.７３(m,9H,D
MTrの芳香環プロトン)、８.３７、８.３９(2本のシング
レット,1H,H-2)、８.４５(br s,1H,NHCO)、８.８５、
８.８７(2本のシングレット,1H,H-8)ppm 31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：１４８.９、１５１.１ppm d) 2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-p,p'-ジメトキ
シトリチルウリジン 3'-アリルN,N-ジイソプロピルホス
ホロアミダイト（化合物（１０））の合成 下記構造式（１０）で示される標記ホスホロアミダイト
を以下の手順で合成した。なお、下記構造式においてＴ
ＢＤＭＳはt-ブチルジメチルシリル基、ＤＭＴrはジメ
トキシトリチル基、Ｕrはウリジン構造であることを示
す。
【００５０】
【化１０】 2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-p,p'-ジメトキシト
リチルウリジン(１.６g、２.５２mmol)のアセトニトリ
ル(２mL)溶液に1H-テトラゾール(８９mg、１.２７mmo
l)、ジイソプロピルアミン(２００μL、１.４０mmol)を
加え、室温で１０分攪拌した後、アリルオキシビス(ジ
イソプロピルアミノ)ホスフィン(０.９４mL)を加え、室
温で３０分攪拌した。反応溶液を酢酸エチル(１００mL)
で希釈し、飽和食塩水(１００mL)で洗浄し、乾燥した。
濃縮した後、得られた粗生成物(１.９g)をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー(４０g、ヘキサン／酢酸エチル
／ジイソプロピルアミン＝２／１／痕跡量)で精製し、
目的とする2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-p,p'-ジ
メトキシトリチル-ウリジン 3'-アリルN,N-ジイソプロ
ピルホスホロアミダイト１.７７g(２.０９mmol／収率８
３％)を得た。
リチルウリジン(１.６g、２.５２mmol)のアセトニトリ
ル(２mL)溶液に1H-テトラゾール(８９mg、１.２７mmo
l)、ジイソプロピルアミン(２００μL、１.４０mmol)を
加え、室温で１０分攪拌した後、アリルオキシビス(ジ
イソプロピルアミノ)ホスフィン(０.９４mL)を加え、室
温で３０分攪拌した。反応溶液を酢酸エチル(１００mL)
で希釈し、飽和食塩水(１００mL)で洗浄し、乾燥した。
濃縮した後、得られた粗生成物(１.９g)をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー(４０g、ヘキサン／酢酸エチル
／ジイソプロピルアミン＝２／１／痕跡量)で精製し、
目的とする2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-p,p'-ジ
メトキシトリチル-ウリジン 3'-アリルN,N-ジイソプロ
ピルホスホロアミダイト１.７７g(２.０９mmol／収率８
３％)を得た。
【００５１】2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-p-モ
ノメトキシトリチルウリジン 3'-アリルN,N-ジイソプロ
ピルホスホロアミダイト（化合物（１０））の特性形状 ：無色アモルファスＴＬＣ ：Ｒf=０.４２(ヘキサン／酢酸エチル＝１／１)ＦＴＩＲ（ＫＢr) ：３１９２、３０６１、２９６５、２
９３２、２８５８、１６９６、１６１１、１５１０、１
４６０、１３７９、１３０２、１２５４、１１８２、１
０３２cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ） ：λmax ２３１nm(ε=26500) 、２６
３nm(ε=16900) 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：０.０５(s,3H,(CH3)2Si)、
０.１２(s,3H,(CH3)2Si)、０.９１−１.１２(m,9H,(C
H3)3C)、３.５３−３.６２(m,2H,H-5',5")、３.９２(s,
6H,OCH3x2)、４.１０−４.４６(m,2H,CH2=CHCH 2O)、４.
５７−４.７１(m,2H,H-3'及びH-4') 、４.７１(d,J=5.7
Hz,2H,CH2=CHCH 2)、４.９８(t,J=4.9Hz,1H,H-2')、５.
１７−５.５５(m,5H,CH2=CHCH 2OCO,cis-CH 2=CHCH2OCO,C
H 2=CHC2O)、５.６３(dd,J=1.0,17.4Hz,1H,トランス-CH 2
=CHCH2OCO)、５.８２−６.３４(m,3H,H-1,及びCH2=CHCH
2x2)、７.０１(d,J=7.6Hz,4H,DMTrのOCH3のオルト位プ
ロトン) 、７.４１−７.７３(m,9H,DMTrの芳香環プロト
ン)、８.３７、８.３９(2本のシングレット,1H,H-2)、
８.４５(br s,1H,NHCO)、８.８５、８.８７(2本のシン
グレット,1H,H-8)ppm 31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：１４８.５、１４９.７ppm 同様の手順にて下記構造式（１１）で示されるホスホロ
アミダイト（化合物（１１））を収率８６％で合成し
た。
ノメトキシトリチルウリジン 3'-アリルN,N-ジイソプロ
ピルホスホロアミダイト（化合物（１０））の特性形状 ：無色アモルファスＴＬＣ ：Ｒf=０.４２(ヘキサン／酢酸エチル＝１／１)ＦＴＩＲ（ＫＢr) ：３１９２、３０６１、２９６５、２
９３２、２８５８、１６９６、１６１１、１５１０、１
４６０、１３７９、１３０２、１２５４、１１８２、１
０３２cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ） ：λmax ２３１nm(ε=26500) 、２６
３nm(ε=16900) 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：０.０５(s,3H,(CH3)2Si)、
０.１２(s,3H,(CH3)2Si)、０.９１−１.１２(m,9H,(C
H3)3C)、３.５３−３.６２(m,2H,H-5',5")、３.９２(s,
6H,OCH3x2)、４.１０−４.４６(m,2H,CH2=CHCH 2O)、４.
５７−４.７１(m,2H,H-3'及びH-4') 、４.７１(d,J=5.7
Hz,2H,CH2=CHCH 2)、４.９８(t,J=4.9Hz,1H,H-2')、５.
１７−５.５５(m,5H,CH2=CHCH 2OCO,cis-CH 2=CHCH2OCO,C
H 2=CHC2O)、５.６３(dd,J=1.0,17.4Hz,1H,トランス-CH 2
=CHCH2OCO)、５.８２−６.３４(m,3H,H-1,及びCH2=CHCH
2x2)、７.０１(d,J=7.6Hz,4H,DMTrのOCH3のオルト位プ
ロトン) 、７.４１−７.７３(m,9H,DMTrの芳香環プロト
ン)、８.３７、８.３９(2本のシングレット,1H,H-2)、
８.４５(br s,1H,NHCO)、８.８５、８.８７(2本のシン
グレット,1H,H-8)ppm 31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：１４８.５、１４９.７ppm 同様の手順にて下記構造式（１１）で示されるホスホロ
アミダイト（化合物（１１））を収率８６％で合成し
た。
【００５２】
【化１１】 同様の手順にて下記構造式（１２）で示されるホスホロ
アミダイト（化合物（１２））を収率８５％で合成し
た。
アミダイト（化合物（１２））を収率８５％で合成し
た。
【００５３】
【化１２】 ［実施例４］ヌクレオシドの合成 前記構造式（６）で示される化合物（６）、下記構造式
（１３）
（１３）
【００５４】
【化１３】 で示される化合物（１３）、及び下記構造式（１４）
【００５５】
【化１４】 で示される化合物（１４）は、既知の方法（J.Am.Chem.
Soc.112巻,1691-1696頁（1990年））に従い、または参
考にして合成した。
Soc.112巻,1691-1696頁（1990年））に従い、または参
考にして合成した。
【００５６】［実施例５］ホスホロアミダイトとヌクレ
オシドの縮合反応 a)液相における縮合反応 上記のようにして得たホスホロアミダイトとヌクレオシ
ドとを以下のようにして縮合反応させた。
オシドの縮合反応 a)液相における縮合反応 上記のようにして得たホスホロアミダイトとヌクレオシ
ドとを以下のようにして縮合反応させた。
【００５７】ホスホロアミダイト(２．４mmol)、ヌクレ
オシド(２．０mmol)及び反応促進剤(２．４mmol)の混合
物をアセトニトリル(６mL)に溶解し、室温で５分攪拌し
た後、１.０M t-ブチルハイドロパーオキサイドトルエ
ン溶液(４mmol)を加え、５分攪拌した。
オシド(２．０mmol)及び反応促進剤(２．４mmol)の混合
物をアセトニトリル(６mL)に溶解し、室温で５分攪拌し
た後、１.０M t-ブチルハイドロパーオキサイドトルエ
ン溶液(４mmol)を加え、５分攪拌した。
【００５８】単離収率は、粗生成物をシリカゲルカラム
クロマトグラフィー(４０g、ヘキサン／酢酸エチル／ジ
イソプロピルアミン＝１／５／痕跡量)で精製単離し決
定した。
クロマトグラフィー(４０g、ヘキサン／酢酸エチル／ジ
イソプロピルアミン＝１／５／痕跡量)で精製単離し決
定した。
【００５９】以下の表１に示すデオキシリボヌクレオシ
ドホスホロアミダイトとヌクレオシドの縮合反応につい
て、反応促進剤としてベンズイミダゾール−トリフルオ
ロメタンスルホン酸複合体（化合物（１））、及び公知
の1H-テトラゾールとNPT（５−（ｐ−ニトロフェニル）
−１Ｈ−テトラゾール）を用いて行い、これら促進剤の
能力を比較したところ以下の通りであった。
ドホスホロアミダイトとヌクレオシドの縮合反応につい
て、反応促進剤としてベンズイミダゾール−トリフルオ
ロメタンスルホン酸複合体（化合物（１））、及び公知
の1H-テトラゾールとNPT（５−（ｐ−ニトロフェニル）
−１Ｈ−テトラゾール）を用いて行い、これら促進剤の
能力を比較したところ以下の通りであった。
【００６０】
【表１】 表１における収率は、単離収率を表示したものであり、
アミダイト、ヌクレオシド、及び生成物であるヌクレオ
シド２量体のうち、化合物（７ａ）、（７ｂ）、（７
ｃ）、（７ｄ）、（６）、（８）、（９）、（１０）、
（１１）、（１２）、（１３）、及び（１４）は既に示
した構造のものである。化合物（１５ａ）、（１５
ｂ）、（１５ｃ）、（１５ｄ）、（１６）、（１７）、
（１８）、（１９）、及び（２０）は以下の構造式で示
される。
アミダイト、ヌクレオシド、及び生成物であるヌクレオ
シド２量体のうち、化合物（７ａ）、（７ｂ）、（７
ｃ）、（７ｄ）、（６）、（８）、（９）、（１０）、
（１１）、（１２）、（１３）、及び（１４）は既に示
した構造のものである。化合物（１５ａ）、（１５
ｂ）、（１５ｃ）、（１５ｄ）、（１６）、（１７）、
（１８）、（１９）、及び（２０）は以下の構造式で示
される。
【００６１】
【化１５】
【００６２】
【化１６】
【００６３】
【化１７】
【００６４】
【化１８】
【００６５】
【化１９】
【００６６】
【化２０】 ここで、#1はホスホロアミダイト(０.０５mmol)、ヌク
レオシド(０.０３３mmol)及び反応促進剤(０.０５mmol)
の混合物をアセトニトリル(１mL)に溶解した場合の結果
である。#2は縮合反応を１分とした場合の結果である。
レオシド(０.０３３mmol)及び反応促進剤(０.０５mmol)
の混合物をアセトニトリル(１mL)に溶解した場合の結果
である。#2は縮合反応を１分とした場合の結果である。
【００６７】o-クロロフェニル 5'-O-p,p'- ジメトキシ
トリチル-チミジル(3'→5')3'-第３ブチルジメチルシリ
ルチミジン（化合物（１５ｄ））の特性ＴＬＣ ：Ｒf=０．４１（Hex：AcOEt=1:9） 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：０．０８(s,6H,Si(CH3)2)、
０．９０(s,9H,SiC(CH3)3)、１．４１(s,3H,5-CH3)、
１．８５(s,3H,5-CH3)、２．０−２．８０(m,4H,21及び
21)、３．２０−３．６０(m,2H,51)、３．８０(s,6H,OC
H3及びOCH3)、３．９０−４．７０(m,5H,31,41,41及び5
1)、５．３０−５．５０(m,1H,31)、６．２９(t,1H,J=
7.0Hz,11)、６．５０(t,1H,J=7.0Hz,11)、６．８０−
７．００(m,4H,ph)、７．１０−７．８０(m,15H,6,6及
びph)、９．７２(s,2H,NH及びNH)ppm 31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3） ：−７．０、−７．１ 表１から明らかなように、いずれの反応の場合にも、促
進剤であるベンズイミダゾール−トリフルオロメタンス
ルホン酸複合体による反応促進能力が、1H-テトラゾー
ル、又はNPTを用いた場合のそれらより優れていた。さ
らに、ETTを用いた場合よりも優れていることが別の実
験より分かった。
トリチル-チミジル(3'→5')3'-第３ブチルジメチルシリ
ルチミジン（化合物（１５ｄ））の特性ＴＬＣ ：Ｒf=０．４１（Hex：AcOEt=1:9） 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3） ：０．０８(s,6H,Si(CH3)2)、
０．９０(s,9H,SiC(CH3)3)、１．４１(s,3H,5-CH3)、
１．８５(s,3H,5-CH3)、２．０−２．８０(m,4H,21及び
21)、３．２０−３．６０(m,2H,51)、３．８０(s,6H,OC
H3及びOCH3)、３．９０−４．７０(m,5H,31,41,41及び5
1)、５．３０−５．５０(m,1H,31)、６．２９(t,1H,J=
7.0Hz,11)、６．５０(t,1H,J=7.0Hz,11)、６．８０−
７．００(m,4H,ph)、７．１０−７．８０(m,15H,6,6及
びph)、９．７２(s,2H,NH及びNH)ppm 31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3） ：−７．０、−７．１ 表１から明らかなように、いずれの反応の場合にも、促
進剤であるベンズイミダゾール−トリフルオロメタンス
ルホン酸複合体による反応促進能力が、1H-テトラゾー
ル、又はNPTを用いた場合のそれらより優れていた。さ
らに、ETTを用いた場合よりも優れていることが別の実
験より分かった。
【００６８】促進剤として化合物（２）を用いた場合に
も以下に示すように1H-テトラゾール、NPT、及びETTを
用いた場合よりも優れていた。すなわち、化合物（７
ｄ）と化合物（６）との縮合反応をアセトニトリルに溶
解した0.4M促進剤を用いて行った場合、反応は45分で終
了し、生成物として化合物（１５ｄ）が、９８％の収率
で得られた。それに対し、1H-テトラゾール、NPT、又は
ETTを用いた場合、同様な条件下でそれぞれ９０分、３
０分、又は４０分を要した。なお、促進剤として化合物
（１）を用いた場合は１分以内に反応が終了し、生成物
である化合物（１５ｄ）の収率は９８％であった。ま
た、反応時間を１分として比較した場合、促進剤として
化合物（２）を用いた場合の生成物（１５ｄ）の収率が
３３％であるのに対し、1H-テトラゾール又はNPTを用い
た場合、同様な条件下でそれぞれ１２％又は４７％であ
った。
も以下に示すように1H-テトラゾール、NPT、及びETTを
用いた場合よりも優れていた。すなわち、化合物（７
ｄ）と化合物（６）との縮合反応をアセトニトリルに溶
解した0.4M促進剤を用いて行った場合、反応は45分で終
了し、生成物として化合物（１５ｄ）が、９８％の収率
で得られた。それに対し、1H-テトラゾール、NPT、又は
ETTを用いた場合、同様な条件下でそれぞれ９０分、３
０分、又は４０分を要した。なお、促進剤として化合物
（１）を用いた場合は１分以内に反応が終了し、生成物
である化合物（１５ｄ）の収率は９８％であった。ま
た、反応時間を１分として比較した場合、促進剤として
化合物（２）を用いた場合の生成物（１５ｄ）の収率が
３３％であるのに対し、1H-テトラゾール又はNPTを用い
た場合、同様な条件下でそれぞれ１２％又は４７％であ
った。
【００６９】以上の例で明かなようにベンズイミダゾー
ル−トリフルオロメタンスルホン酸複合体及びベンズイ
ミダゾール−メタンスルホン酸複合体の優位性は、反応
性の低いモルホリダイト体やo-クロロフェニルエステル
体、及び2'-O-t-ブチルジメチルシリル基の立体障害の
ために反応性の低下した化合物において顕著に現れてい
る。
ル−トリフルオロメタンスルホン酸複合体及びベンズイ
ミダゾール−メタンスルホン酸複合体の優位性は、反応
性の低いモルホリダイト体やo-クロロフェニルエステル
体、及び2'-O-t-ブチルジメチルシリル基の立体障害の
ために反応性の低下した化合物において顕著に現れてい
る。
【００７０】なお、ベンズイミダゾール−トリフルオロ
メタンスルホン酸複合体及びベンズイミダゾール−メタ
ンスルホン酸複合体を用いた反応において脱トリチル化
は起こらず、またデオキシアデノシン誘導体やデオキシ
グアノシン誘導体を用いた反応でのデプリネーションも
認められなかった。
メタンスルホン酸複合体及びベンズイミダゾール−メタ
ンスルホン酸複合体を用いた反応において脱トリチル化
は起こらず、またデオキシアデノシン誘導体やデオキシ
グアノシン誘導体を用いた反応でのデプリネーションも
認められなかった。
【００７１】b) 固相での縮合反応 ABI社製381A機を用い、付属の標準プログラムで自動合
成した。その合成サイクルは以下の表２に示したとおり
であり、全て０．２μmolスケールで行った。
成した。その合成サイクルは以下の表２に示したとおり
であり、全て０．２μmolスケールで行った。
【００７２】
【表２】 上記の方法によりＣＰＧ上に担持されたチミジン(０.２
μmmol)(構造的には下記構造式で化合物（２１）として
示される）を出発物質とし、シアノエチルホスホロアミ
ダイト（化合物（８））をモノマー単位に用いて、促進
剤としてベンズイミダゾール−トリフルオロメタンスル
ホン酸複合体（化合物（１））を用いて合成したとこ
ろ、各ステップの平均縮合率99.1％、通算収率92.1％で
Ｔ（ｐＴ）9を合成することができた。
μmmol)(構造的には下記構造式で化合物（２１）として
示される）を出発物質とし、シアノエチルホスホロアミ
ダイト（化合物（８））をモノマー単位に用いて、促進
剤としてベンズイミダゾール−トリフルオロメタンスル
ホン酸複合体（化合物（１））を用いて合成したとこ
ろ、各ステップの平均縮合率99.1％、通算収率92.1％で
Ｔ（ｐＴ）9を合成することができた。
【００７３】
【化２１】 これらの収率は、トリチル発色定量法によって求めたも
のである。トリチル発色定量とは、脱トリチル化の操作
の際、採取した反応溶液を濃縮し、過塩素酸−メタノー
ル（３：１）溶液(２５mL)で希釈し、可視−紫外吸収ス
ペクトルにおいて４９８nmの吸収を測定し、前のフラク
ションにおける同様の値との比により収率を求める方法
である。
のである。トリチル発色定量とは、脱トリチル化の操作
の際、採取した反応溶液を濃縮し、過塩素酸−メタノー
ル（３：１）溶液(２５mL)で希釈し、可視−紫外吸収ス
ペクトルにおいて４９８nmの吸収を測定し、前のフラク
ションにおける同様の値との比により収率を求める方法
である。
【００７４】
【発明の効果】本発明のベンズイミダゾール又はその類
縁体とアルカンスルホン酸又はそのハロゲン置換体から
なる複合体、特にベンズイミダゾールとトリフルオロメ
タンスルホン酸との複合体（化合物（１））又はベンズ
イミダゾールとメタンスルホン酸との複合体（化合物
（２））である核酸合成反応促進剤は、従来用いられて
いた核酸合成反応促進剤に比較してはるかに優れた反応
促進活性、特にホスホロアミダイト法によるオリゴヌク
レオチドの合成方法における反応促進活性に優れ、各種
のオリゴヌクレオチド、特に化学的・立体的に反応性の
低いオリゴヌクレオチドに対し、それらを高収率で効率
よく合成することを可能とする優れた効果を奏するもの
であるばかりでなく、本発明の核酸合成反応促進剤は、
酸素及び湿気に対して安定であり室温保存が可能であ
る。さらにこれらは、アセトニトリルに対する溶解性が
あり、価格も高価ではないという特徴をも併せ持つもの
である。とくにベンズイミダゾールとトリフルオロメタ
ンスルホン酸との複合体（化合物（１））は、液相合成
・固相合成いずれにおいても使用できるという優れた特
性をも有するものである。
縁体とアルカンスルホン酸又はそのハロゲン置換体から
なる複合体、特にベンズイミダゾールとトリフルオロメ
タンスルホン酸との複合体（化合物（１））又はベンズ
イミダゾールとメタンスルホン酸との複合体（化合物
（２））である核酸合成反応促進剤は、従来用いられて
いた核酸合成反応促進剤に比較してはるかに優れた反応
促進活性、特にホスホロアミダイト法によるオリゴヌク
レオチドの合成方法における反応促進活性に優れ、各種
のオリゴヌクレオチド、特に化学的・立体的に反応性の
低いオリゴヌクレオチドに対し、それらを高収率で効率
よく合成することを可能とする優れた効果を奏するもの
であるばかりでなく、本発明の核酸合成反応促進剤は、
酸素及び湿気に対して安定であり室温保存が可能であ
る。さらにこれらは、アセトニトリルに対する溶解性が
あり、価格も高価ではないという特徴をも併せ持つもの
である。とくにベンズイミダゾールとトリフルオロメタ
ンスルホン酸との複合体（化合物（１））は、液相合成
・固相合成いずれにおいても使用できるという優れた特
性をも有するものである。
Claims (3)
- 【請求項１】 ベンズイミダゾール又はその類縁体とア
ルカンスルホン酸又はそのハロゲン置換体からなる複合
体。 - 【請求項２】 請求項１記載の複合体を有効成分として
含む核酸合成反応促進剤。 - 【請求項３】 請求項１記載の複合体の存在下にヌクレ
オシドホスホロアミダイト又はヌクレオシドホスホノア
ミダイトとヌクレオシドとを反応させることを特徴とす
るオリゴヌクレオチドの合成方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23073396A JP3985103B2 (ja) | 1996-08-30 | 1996-08-30 | 新規複合体及びオリゴヌクレオチドの合成方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23073396A JP3985103B2 (ja) | 1996-08-30 | 1996-08-30 | 新規複合体及びオリゴヌクレオチドの合成方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1072448A true JPH1072448A (ja) | 1998-03-17 |
| JP3985103B2 JP3985103B2 (ja) | 2007-10-03 |
Family
ID=16912454
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23073396A Expired - Lifetime JP3985103B2 (ja) | 1996-08-30 | 1996-08-30 | 新規複合体及びオリゴヌクレオチドの合成方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3985103B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005097817A3 (en) * | 2004-04-05 | 2006-05-04 | Alnylam Pharmaceuticals | Process and reagents for oligonucleotide synthesis and purification |
| JP2006131596A (ja) * | 2004-11-09 | 2006-05-25 | Univ Nagoya | ヌクレオチド及びその誘導体の製造方法 |
| JP2022065127A (ja) * | 2018-05-02 | 2022-04-26 | 株式会社ナティアス | オリゴヌクレオチド合成用セグメントおよびその製造方法、ならびにそれを用いたオリゴヌクレオチドの合成方法 |
-
1996
- 1996-08-30 JP JP23073396A patent/JP3985103B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005097817A3 (en) * | 2004-04-05 | 2006-05-04 | Alnylam Pharmaceuticals | Process and reagents for oligonucleotide synthesis and purification |
| JP2007531794A (ja) * | 2004-04-05 | 2007-11-08 | アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド | オリゴヌクレオチドの合成および精製に使用する方法および反応試薬 |
| US8058448B2 (en) | 2004-04-05 | 2011-11-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Processes and reagents for sulfurization of oligonucleotides |
| US8063198B2 (en) | 2004-04-05 | 2011-11-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Processes and reagents for desilylation of oligonucleotides |
| JP2006131596A (ja) * | 2004-11-09 | 2006-05-25 | Univ Nagoya | ヌクレオチド及びその誘導体の製造方法 |
| JP2022065127A (ja) * | 2018-05-02 | 2022-04-26 | 株式会社ナティアス | オリゴヌクレオチド合成用セグメントおよびその製造方法、ならびにそれを用いたオリゴヌクレオチドの合成方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3985103B2 (ja) | 2007-10-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7484951B2 (ja) | オリゴヌクレオチドの製造方法 | |
| JP5341956B2 (ja) | ボラノホスフェートモノマー | |
| CN112533892B (zh) | 烷氧基苯基衍生物、核苷保护体和核苷酸保护体、寡核苷酸制造方法以及取代基除去方法 | |
| JP2006248949A (ja) | ヌクレオシド誘導体、ヌクレオチド誘導体及びそれらの製造方法 | |
| JP2000095793A (ja) | ２’―ｏ―アルキル化グアノシン３’―ｏ―ホスホロアミダイト | |
| JPH0411555B2 (ja) | ||
| WO2011034072A1 (ja) | Rna及びその誘導体合成のための新規保護基 | |
| JP2003238586A (ja) | 立体規則性の高いジヌクレオシドホスホロチオエートの製造法 | |
| JP4887500B2 (ja) | ヌクレオシド類似体またはその塩 | |
| JPWO2020100826A5 (ja) | ||
| DE60109047T2 (de) | Synthone zur herstellung von oligonukleotiden | |
| JP3985103B2 (ja) | 新規複合体及びオリゴヌクレオチドの合成方法 | |
| JP3265548B2 (ja) | リボヌクレオチド還元酵素阻害剤の製法 | |
| JP2003012690A (ja) | 置換イミダゾール誘導体又は置換ベンズイミダゾール誘導体を用いたヌクレオチドの製造法 | |
| JP3983691B2 (ja) | オリゴヌクレオチドの化学的合成法 | |
| JP7452549B2 (ja) | ホスホロアミダイト活性化剤 | |
| JPH08301878A (ja) | 三フッ化ホウ素配位化合物およびオリゴヌクレオチドの合成方法 | |
| US6048975A (en) | Process for the chemical synthesis of oligonucleotides | |
| JP7298866B2 (ja) | 核酸合成用固相担体及びそれを用いた核酸の製造方法 | |
| JP2009256335A (ja) | ２’位にアルキル型保護基を有するリボ核酸の製造法 | |
| WO2021080021A1 (ja) | オリゴヌクレオチドを製造する方法 | |
| CA2362714A1 (en) | 2'-substituted rna preparation | |
| JP2006248956A (ja) | トリチル型化合物 | |
| JP4814084B2 (ja) | ボラノホスフェートモノマーおよびそれを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法 | |
| JPH0296589A (ja) | ヌクレオシド類 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070508 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20070510 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070522 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20070613 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20070626 |
|
| R150 | Certificate of patent (=grant) or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100720 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100720 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100720 Year of fee payment: 3 |