JP4814084B2

JP4814084B2 - ボラノホスフェートモノマーおよびそれを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法

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Publication number: JP4814084B2
Application number: JP2006510627A
Authority: JP
Inventors: 猛和田; 和彦西郷; 護清水
Original assignee: Chiralgen Ltd
Current assignee: Wave Life Sciences Japan Inc
Priority date: 2004-03-05
Filing date: 2005-02-04
Publication date: 2011-11-09
Anticipated expiration: 2025-02-04
Also published as: JPWO2005085272A1

Description

本発明は、ボラノホスフェートモノマー及びそれの製造方法並びにボラノホスフェートモノマーを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法に関する。

現在遺伝子治療の分野で注目されている手法の一つにアンチセンス法がある。アンチセンス法とは、ｍＲＮＡに相補的な塩基配列を持つアンチセンス分子を用いてＤＮＡから転写されたｍＲＮＡと選択的に二重鎖を形成させ、標的とするタンパク質合成のみを制御する方法である。
ここで、アンチセンス分子が有効に機能するための必要条件として、第一に高い細胞膜透過性を有していること、第二に細胞内でヌクレアーゼによる加水分解を受けにくいこと、第三に特定のｍＲＮＡとのみ選択的に安定な二重鎖を形成できることなどが挙げられる。
しかし、天然型のアンチセンス分子は、生体内に導入されると、ヌクレアーゼにより速やかに加水分解される上、細胞膜透過性が低いという問題点がある。そこで、より有用なアンチセンス分子の設計及びその効率的な製造方法の開発が求められていた。
これまで多くのアンチセンス分子が設計され、合成されてきたが、その中で現在、実用化に向けて研究されているホスホロチオエートＤＮＡには、細胞毒性がある、選択性が低いといった問題点があった。
近年、新しい骨格のアンチセンス分子であるボラノホスフェートオリゴマーが開発されている。この分子は、例えば、
（１）リン原子がボランに配位しているため、天然型のものと比較して脂溶性が高く、高い細胞膜透過性が期待できる、
（２）ヌクレアーゼに対する耐性が高い、
（３）標的ｍＲＮＡに対する選択性が高い、
（４）ボラノホスフェートＤＮＡとＲＮＡが形成する二重鎖がＲＮａｓｅＨの基質となり、標的ｍＲＮＡが効果的に分解される、
（５）ホウ素中性子補捉療法（ＢＮＣＴ）への応用が期待できる、
といった有利な特徴を持つことで知られており、実用的なアンチセンス分子として注目されてきている

本発明者らは、従来開発されたボラノホスフェートオリゴマーに見られた問題点、即ち、
（ｉ）鎖を延長するたびにボラノ化を繰り返し行わなければならない、
（ｉｉ）ボラノ化試薬による核酸塩基部位への副反応
といった問題点を排除した手法、即ち、下記式で示される、予めボラノ化したモノマーを用いてオリゴヌクレオチドを合成する手法を報告してきた（日本化学会第７８回年会予稿集７４６頁（２０００年）、日本化学会第７９回年会予稿集９４２頁（２００１年）、日本化学会第８１回年会予稿集９３７頁（２００２年）、アンチセンスＤＮＡ／ＲＮＡ研究会予稿集４８頁（２００２年）、日本化学会第８３回年会予稿集９４４頁（２００３年）、ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．４３（２００２）４２３７）。

［式中、ＤＭＴｒは、ジメトキシトリチル基を示す。］
しかしながら、この手法によれば、上記問題点（ｉ）及び（ｉｉ）は解決されるものの、リン原子上の保護基を除去する際に、オリゴヌクレオチドが分解してしまうという致命的な問題が生ずることがわかった。
そこで、上記問題点（ｉ）及び（ｉｉ）を解決しつつ、かつ実用に耐えうるボラノホスフェートオリゴマーを提供する手法が望まれていた。
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意検討した結果、リン原子上の保護基としてシアノエチル基を用いることで、オリゴヌクレオチドを分解させずに保護基を除去することができることを見出し、更に、このような嵩高い保護基を用いることによってオリゴマーの縮合が阻害されることを見出し、この点については、塩基と、特殊な縮合剤との存在下で縮合反応をさせることにより解決できることを見出し、本発明を完成させた。
即ち、本発明の第１態様では、下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーが提供される。

［式中、Ｂ^１は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ^１は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、Ｒ^２は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
本発明の第２態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを製造する方法の一態様が提供される。即ち、本発明の第２態様では、下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーの製造方法であって、

［式中、Ｂ^１は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ^１は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、Ｒ^２は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
シアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、下記式（４ａ）又は、下記式（４ｂ）で示される縮合剤存在下、

［式中、Ａ^１、Ａ^２、Ａ^３、Ａ^４、Ａ^５及びＡ^６は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ_１〜Ｃ_１０アルキル基であり、ただし、Ａ^１、Ａ^２、Ａ^３、Ａ^４、Ａ^５及びＡ^６のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ^７−は、求核性のないアニオン種であり、Ｑ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］

［式中、Ａ^１１、Ａ^１２、Ａ^１３及びＡ^１４は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ_１〜Ｃ_１０アルキル基であり、ただし、Ａ^１１、Ａ^１２、Ａ^１３及びＡ^１４のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ^１５−は、求核性のないアニオン種であり、Ｓ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］
下記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と、

下記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体と

［式中、Ｂ^１、Ｒ^１及びＲ^２は、上記の意味を有する。］
を反応させ反応生成物を得る工程と、前記反応生成物とトリエチルアミンとを反応させる工程とを含むことを特徴とする、ボラノホスフェートモノマーの製造方法が提供される。
本発明の第２態様において、前記ボラノホスホリル化剤が、トリス−２−シアノエチルホスファイトをボラノ化して下記式で示されるトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートを得、

得られたトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートとトリエチルアミンを反応させることにより得られることが好ましい。
本発明の第３態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを用いた二量体の製造方法の一態様が提供される。即ち、本発明の第３態様では、下記一般式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと

［式中、Ｂ^１は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ^１は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、Ｒ^２は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
上記式（１）中のシアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、下記式（４ａ）又は、下記式（４ｂ）で示される縮合剤存在下、

［式中、Ａ^１１、Ａ^１２、Ａ^１３及びＡ^１４は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ_１〜Ｃ_１０アルキル基であり、ただし、Ａ^１１、Ａ^１２、Ａ^１３及びＡ^１４のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ^１５−は、求核性のないアニオン種であり、Ｓ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］
下記一般式（５）で示されるヌクレオシド誘導体と

［式中、Ｂ^２は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ^３は、保護基を表し、Ｒ^４は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
を反応させ、下記一般式（６）で示される二量体を製造する方法が提供される。

［式中、Ｂ^１、Ｂ^２、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４は、前記と同義を表す。］
本発明の第３態様では、前記強塩基が、下記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体であってもよい。

［式中、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３及びＸ^４は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル基であり、Ｘ^５、Ｘ^６、Ｘ^７、Ｘ^８、Ｘ^９及びＸ^１０は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、電子供与基である。］
この場合、前記式（７ａ）中、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３及びＸ^４が、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、メチル基、又は、エチル基であり、Ｘ^５、Ｘ^６、Ｘ^７、Ｘ^８、Ｘ^９及びＸ^１０が、水素原子、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル基、又はＣ_１〜Ｃ_１０アルコキシ基であることが好ましい。
また、本発明の第３態様では、前記縮合剤が前記式（４ａ）で示される化合物であってもよく、この場合は、前記式（４ａ）中のＱ環基が、置換基を有していてもよいイミダゾリル基、置換基を有していてもよいトリアゾリル基、置換基を有していてもよいテトラゾリル基、又は、置換基を有しても良いベンゼン環若しくは置換基を有しても良いピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であり、Ａ^７−が、ＰＦ_６ ⁻、ＢＦ_４ ⁻、ＣｌＯ_４ ⁻、ＣＦ_３ＳＯ_２Ｏ⁻、又は、（ＣＦ_３ＳＯ_２）_２Ｎ⁻であることが好ましい。
また、本発明の第３態様では、前記縮合剤が前記式（４ｂ）で示される化合物であり、前記強塩基が下記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体であってもよい。

［式中、Ｙ^１は、水素原子、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル基、又は、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ基であり、Ｙ^２及びＹ^３は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル基である。］
この場合、前記式（４ｂ）中のＳ環基が、置換基を有していてもよいイミダゾリル基、置換基を有していてもよいトリアゾリル基、置換基を有していてもよいテトラゾリル基、又は、置換基を有しても良いベンゼン環若しくは置換基を有しても良いピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であり、Ａ^１５−が、ＰＦ_６ ⁻、ＢＦ_４ ⁻、ＣｌＯ_４ ⁻、ＣＦ_３ＳＯ_２Ｏ⁻、又は、（ＣＦ_３ＳＯ_２）_２Ｎ⁻であることが好ましく、また、前記式（７ｂ）中、Ｙ^１が水素原子、又は、メチル基であり、Ｙ^２及びＹ^３が、メチル基であることが好ましい。
本発明の第４態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法の一態様が提供される。即ち、下記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体と、

［式中、Ｂ^１及びＢ^２は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ^１は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、Ｒ^２及びＲ^４は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基であり、Ｒ^３は、保護基であり、ｎは１以上の整数を示す。］
脱保護試薬とを反応させて、Ｒ^１を脱離させた後、上記式（８）中のシアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、下記式（４ａ）、又は、下記式（４ｂ）で示される縮合剤存在下、

［式中、Ａ^１１、Ａ^１２、Ａ^１３及びＡ^１４は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ_１〜Ｃ_１０アルキル基であり、ただし、Ａ^１１、Ａ^１２、Ａ^１３及びＡ^１４のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ^１５−は、求核性のないアニオン種であり、Ｓ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］
下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと

［式中、Ｂ^１、Ｒ^１及びＲ^２は、上記と同義である。］
を反応させることを特徴とする、下記式（９）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法が提供される。

［式中、Ｂ^１、Ｂ^２、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４及びｎは、前記と同義を表す。］
本発明の第４態様において、反応が固相で行われることが好ましい。
本発明により、従来開発されたボラノホスフェートオリゴマーに見られた問題点を解決しつつ、かつ実用に耐えうるボラノホスフェートオリゴマーを提供することが可能となる。本発明により得られるボラノホスフェートオリゴマーはアンチセンス分子として有用である。

本発明の第１態様では、下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーが提供される。

［式中、Ｂ^１、Ｒ^１及びＲ^２は、上記の意味を有する。］
上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーは、リン原子上の保護基がシアノエチル基であるため、アンモニア等を用いて保護基を除去する場合、シアノエチル基はβ脱離によって除去される。このため、当該ボラノホスフェートモノマーを用いてオリゴマーを得た後にこの保護基を除去しても、オリゴマーを分解させることはない。したがって、本発明により、実用に耐えうるボラノホスフェートオリゴマーを提供することが可能となる。
上記式中、Ｂ^１は、チミン、シトシン、ウラシル等のピリミジン塩基；アデニン、グアニン等のプリン塩基；または５−メチルシトシン、５−フルオロウラシル、５−ヒドロキシメチルシトシン等のそれらの誘導体を表す。
溶媒への溶解度を向上させるために、塩基部位に、ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、イソブチリル（ｉＢｕ）、フェノキシアセチル（ＰＡＣ）、４−（ｔ−ブチル）フェノキシアセチル（ＢＰＡ）、アリルオキシカルボニル（ＡＯＣ）、２−［（ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）メチル］ベンゾイル（ＳｉＯＭＢ）、２−（アセチルメチル）ベンゾイル（ＡＭＢ）、２−アジドベンゾイル（ＡＺＭＢ）、ジフェニルカルバモイル（ＤＰＣ）、フェニルアセチル（ＰＡ）等の保護基を導入してもよい。
本発明の第１態様において、Ｂ^１は、シトシン、チミン、アデニン、グアニンまたはそれらの誘導体、あるいはそれらに保護基が導入されたものであることが好ましい。
上記式中、Ｒ^１は、ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）、又は、モノメトキシトリチル基である。
本発明の第１態様において、Ｒ^１は、ジメトキシトリチル基であることが好ましい。
上記式中、Ｒ^２は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。
本明細書において、「アルコキシ基」としては、制限するわけではないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペンチルオキシ等を挙げることができる。
本明細書において、「アルケニルオキシ基」としては、制限するわけではないが、ビニルオキシ、アリルオキシ、１−プロペニルオキシ、イソプロペニルオキシ、２−メチル−１−プロペニルオキシ、２−メチルアリルオキシ、２−ブテニルオキシ等を挙げることができる。
本明細書において、「アシルオキシ基」としては、制限するわけではないが、Ｃ_１−６アルキル−カルボニルオキシ（たとえばメチルカルボニルオキシ、エチルカルボニルオキシ等）、Ｃ_６−１０アリール−カルボニルオキシ（たとえばベンゾイルオキシ）などが挙げられる。
本明細書において、「トリアルキルシリルオキシ基」としては、制限するわけではないが、トリメチルシリルオキシ基、トリエチルシリルオキシ基などを挙げることができる。
本発明の第１態様において、Ｒ^２は、水素原子、アルコキシ基、トリアルキルシリルオキシ基であることが好ましい。
本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーをＲＮＡ誘導体合成のために使用する場合には、Ｒ^２はトリアルキルシリルオキシ基であることが好ましく、ｔ−ブチルジメチルシリル基であることがより好ましい。
本発明の第２態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを製造する方法の一態様が提供される。即ち、本発明の第２態様では、シアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、所定の縮合剤存在下、下記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と、下記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させ反応生成物を得る工程と、前記反応生成物とトリエチルアミンとを反応させる工程とを含むことを特徴とする、下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーの製造方法が提供される。

［式中、Ｂ^１、Ｒ^１及びＲ^２は、上記の意味を有する。］
本発明の第２態様において、上記式中のＢ^１、Ｒ^１及びＲ^２についての説明は、本発明の第１態様〜第２態様においてしたのと同様である。
本発明の第２態様では、下記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤が用いられる。

また、本発明の第２態様では、下記一般式（３）で示されるヌクレオシド誘導体が用いられる。

［式中、Ｂ^１、Ｒ^１及びＲ^２は、上記の意味を有する。］
本発明の第２態様において、使用される上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤の量は、ボラノホスホリル化反応を定量的に進行させるために、上記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体１モルに対して１モル〜３モル用いることが好ましく、１．２モル〜１．５モル用いることが更に好ましい。
また、本発明の第２態様では、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と、上記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させる際に、シアノエチル基をβ脱離させない強塩基が用いられる。
本明細書において、「シアノエチル基をβ脱離させない強塩基」としては、例えば、解離したプロトンのみを捕捉し、かつ捕捉する側に平衡が偏っている塩基を挙げることができる。
このような強塩基の一態様として、例えば、下記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体を挙げることができる。

上記式（７ａ）中、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３及びＸ^４は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル基である。
本明細書において、「Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル基」としては、制限するわけではないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル等を挙げることができる。
本発明において、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３及びＸ^４は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、メチル基、又は、エチル基であることが好ましい。
上記式（７ａ）中、Ｘ^５、Ｘ^６、Ｘ^７、Ｘ^８、Ｘ^９及びＸ^１０は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、電子供与基である。
本明細書において、「電子供与基」としては、制限するわけではないが、水素原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アミノ基、ジアルキルアミノ基、アルキル基、アリール基などを挙げることができる。
本明細書において、「アリール基」としては、制限するわけではないが、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、インデニル、ビフェニリル、アントリル、フェナントリル等を挙げることができる。
本発明の第２態様において、Ｘ^５、Ｘ^６、Ｘ^７、Ｘ^８、Ｘ^９及びＸ^１０は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル基、又はＣ_１〜Ｃ_１０アルコキシ基であることが好ましく、水素原子、メチル基、エチル基、メトキシ基、ジメチルアミノ基であることがより好ましい。
また、本明細書において、「シアノエチル基をβ脱離させない強塩基」の他の態様としては、例えば、下記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体を挙げることができる。

上記式（７ｂ）中、Ｙ^１は、水素原子、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル基、又は、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ基である。また、Ｙ^２及びＹ^３は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル基である。
ピリジンはその窒素原子求核性ゆえボランを脱離させてしまうが、２，６−位にアルキル基を導入することで、求核性のない化合物とすることができる。
本発明の第２態様において、Ｙ^１は、水素原子又はＣ_１〜Ｃ_１０アルキル基であることが好ましく、水素原子又はメチル基であることがより好ましい。
本発明の第２態様において、Ｙ^２及びＹ^３は、メチル基であることが好ましい。
本発明の第２態様において、反応を完結させるために、シアノエチル基をβ脱離させない強塩基は、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤に対して過剰量用いることが好ましい。例えば、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤１モルに対して５モル以上用いることが好ましく、７モル〜２０モル用いることが更に好ましい。
また、本発明の第２態様では、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と、上記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させる際に、縮合剤が用いられる。
本発明で用いられる縮合剤は、リン原子上の保護基がシアノエチル基のように嵩高い基であっても縮合反応が進行するものである必要がある。このような縮合剤の一態様として、下記式（４ａ）で示される縮合剤を挙げることができる。

上記式（４ａ）中、Ａ^１、Ａ^２、Ａ^３、Ａ^４、Ａ^５及びＡ^６は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ_１〜Ｃ_１０アルキル基（例えば、メチル基、エチル基であることが好ましい）であり、Ａ^１、Ａ^２、Ａ^３、Ａ^４、Ａ^５及びＡ^６のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよい。
本明細書において、「飽和環又は不飽和環」としては、４員環〜１０員環の飽和環又は不飽和環であることが好ましく、４員環〜７員環の飽和環又は不飽和環であることが更に好ましく、５員環の飽和環又は不飽和環であることが特に好ましい。
例えば、下記式で表されるように、Ａ^１及びＡ^２、Ａ^３及びＡ^４、並びに、Ａ^５及びＡ^６が、それぞれ互いに架橋して５員飽和環を形成する場合、Ａ^２及びＡ^３、並びに、Ａ^５及びＡ^６が架橋して５員飽和環を形成し、Ａ^１及びＡ^４がメチル基である場合などを好ましく挙げることができる。

［式中、Ａ^７−及びＱ環基は、上記の意味を有する。］
上記式（４ａ）中、Ａ^７−は、求核性のないアニオン種である。
本明細書において、「求核性のないアニオン種」としては、例えば、ＰＦ_６ ⁻、ＢＦ_４ ⁻、ＣｌＯ_４ ⁻、ＣＦ_３ＳＯ_２Ｏ⁻、又は、（ＣＦ_３ＳＯ_２）_２Ｎ⁻を挙げることができる。
本発明の第２態様において、Ａ^７−は、ＰＦ_６ ⁻又はＢＦ_４ ⁻であることが好ましい。
上記式（４ａ）中、Ｑ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。
本明細書において、「炭化水素芳香環」としては、例えば、ベンゼンのような単環式炭化水素芳香環；ビフェニル、トリフェニル、ナフタレン、インデン、アントラセン、フェナントレンのような多環式炭化水素芳香環を挙げることができる。
本明細書において、「窒素含有芳香環」としては、例えば、ピロール、イミダゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジンのような単環式窒素含有芳香環；インドール、キノリン、イソキノリン、プリン、シンノリン、キノキサリン、キナゾリジン、フタラジン、カルバゾール、アクリジン、フェナジン、フェナントリジンのような多環式窒素含有芳香環を挙げることができる。
本明細書において、窒素原子を２以上含む５員環基としては、例えば、ピロリル基、イミダゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基を挙げることができる。
本発明の第２態様において、Ｑ環基で示される「炭化水素芳香環」、「窒素含有芳香環」、「窒素原子を２以上含む５員環基」には、置換基が導入されていてもよい。この置換基としては、例えば、Ｃ_１〜Ｃ_１０炭化水素基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、フェニル、ナフチル、インデニル、トリル、キシリル、ベンジル等）、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等）、Ｃ_６〜Ｃ_１０アリールオキシ基（例えば、フェニルオキシ、ナフチルオキシ、ビフェニルオキシ等）、ニトロ基、シアノ基、トリフルオロメチル基、水酸基、又はハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）などを挙げることができる。この場合、置換基は、置換可能な位置に１個以上導入されていてもよく、好ましくは１個〜４個導入されていてもよい。置換基数が２個以上である場合、各置換基は同一であっても異なっていてもよい。
本発明の第２態様において、Ｑ環基は、置換基を有していてもよいイミダゾリル基、置換基を有していてもよいトリアゾリル基、置換基を有していてもよいテトラゾリル基、又は、置換基を有しても良いベンゼン環若しくは置換基を有しても良いピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であることが好ましく、ニトロ基、ハロゲン原子、シアノ基若しくはトリフルオロメチル基等の電子吸引型の置換基を有するイミダゾリル基、トリアゾリル基若しくはテトラゾリル基、又は、ピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であることがより好ましい。
また、本発明の第２態様で用いられる縮合剤の他の態様として、下記式（４ｂ）で示される縮合剤を挙げることができる。

上記式（４ｂ）中、Ａ^１１、Ａ^１２、Ａ^１３及びＡ^１４は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ_１〜Ｃ_１０アルキル基（例えば、メチル基、エチル基であることが好ましい）であり、Ａ^１１、Ａ^１２、Ａ^１３及びＡ^１４のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよい。
例えば、下記式で表されるように、Ａ^１２及びＡ^１３が、互いに架橋して５員飽和環を形成し、Ａ^１１及びＡ^１４がメチル基である場合などを好ましく挙げることができる。

［式中、Ａ^１５−及びＳ環基は、上記の意味を有する。］
上記式（４ｂ）中、Ａ^１５−は、求核性のないアニオン種である。
本発明の第２態様において、Ａ^１５−は、ＰＦ_６ ⁻又はＢＦ_４ ⁻であることが好ましい。
上記式（４ｂ）中、Ｓ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。
本発明の第２態様において、Ｓ環基で示される「炭化水素芳香環」、「窒素含有芳香環」、「窒素原子を２以上含む５員環基」には、置換基が導入されていてもよい。この置換基としては、例えば、Ｃ_１〜Ｃ_１０炭化水素基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、フェニル、ナフチル、インデニル、トリル、キシリル、ベンジル等）、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等）、Ｃ_６〜Ｃ_１０アリールオキシ基（例えば、フェニルオキシ、ナフチルオキシ、ビフェニルオキシ等）、ニトロ基、シアノ基、トリフルオロメチル基、水酸基、又はハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）などを挙げることができる。この場合、置換基は、置換可能な位置に１個以上導入されていてもよく、好ましくは１個〜４個導入されていてもよい。置換基数が２個以上である場合、各置換基は同一であっても異なっていてもよい。
本発明の第２態様において、Ｓ環基は、置換基を有していてもよいイミダゾリル基、置換基を有していてもよいトリアゾリル基、置換基を有していてもよいテトラゾリル基、又は、置換基を有しても良いベンゼン環若しくは置換基を有しても良いピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であることが好ましく、ニトロ基、ハロゲン原子、シアノ基若しくはトリフルオロメチル基等の電子吸引型の置換基を有するイミダゾリル基、トリアゾリル基若しくはテトラゾリル基、又は、ピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であることがより好ましい。
本発明の第２態様において、使用される縮合剤の量は、縮合反応を定量的に進行させるために、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤１モルに対して、１モル〜２０モル用いることが好ましく、１．５モル〜１０モル用いることが更に好ましく、２モル〜３モル用いることが更になお好ましい。
本発明の第２態様において、縮合剤が前記式（４ａ）で示される化合物である場合には、強塩基としては、より塩基性の強い上記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体を用いることが好ましい。
また、本発明の第２態様において、縮合剤が前記式（４ｂ）で示される化合物である場合には、強塩基としては、より塩基性の強い上記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体を用いてもよいし、やや塩基性が弱い上記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体を用いてもよい。アニオン化したヌクレオシド誘導体と縮合剤との反応を避ける観点からは、やや塩基性が弱い上記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体を用いることが好ましい。
また、本発明の第２態様では、続いて、ボラノホスホリル化剤とヌクレオシド誘導体とを反応させ得られた反応生成物を単離精製した後に、トリエチルアミンとを反応させる。これにより、リン原子上のシアノエチル基が一つ除去され、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーを得ることができる。
本発明の第２態様において、反応を完結させるために、トリエチルアミンは、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤に対して過剰量用いることが好ましい。例えば、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤１モルに対して５モル以上用いることが好ましく、７モル〜２０モル用いることが更に好ましい。
本発明の第２態様において、典型的には、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と上記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体の溶液に、縮合剤と強塩基を加えて攪拌し、得られた生成物を単離精製した後に、トリエチルアミンを反応させることで、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーを得る。具体的には、下記のスキームに従って進むと考えられる。

［式中、Ｂ^１、Ｒ^１及びＲ^２は、上記の意味を有する。］
本発明の第２態様において、溶媒としては上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と上記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体および縮合剤が溶解できるものが好ましい。たとえば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等を挙げることができ、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであることが好ましい。
本発明の第２態様において、反応温度としては、−３０℃〜５０℃が好ましく、０℃〜４０℃がさらに好ましく、１５℃〜３０℃が更になお好ましい。所望により、光を遮断して反応を進行させてもよい。
本発明の第２態様において、圧力は、大気圧であることが好ましい。雰囲気は、アルゴン等の不活性ガス雰囲気であることが好ましい。
本発明の第２態様で用いられる上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤は、例えば、トリス−２−シアノエチルホスファイトをＢＨ_３・ＴＨＦ錯体、ＢＨ_３・ＳＭｅ_２錯体等でボラノ化してトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートを得て、得られたトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートとトリエチルアミンを反応させることにより得ることができる。

ボラノホスホリル化剤の製造方法において、使用されるＢＨ_３・ＴＨＦ錯体、ＢＨ_３・ＳＭｅ_２錯体等のボラノ化剤の量は、ボラノ化反応を定量的に進行させるために、トリス−２−シアノエチルホスファイト１モルに対して１モル〜２モルであることが好ましく、１．２モル〜１．５モルであることが更に好ましい。
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、反応を完結させるために、トリエチルアミンは、得られたトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートに対して過剰量用いることが好ましい。例えば、トリス−２−シアノエチルボラノホスフェート１モルに対して、５モル以上用いることが好ましく、７モル〜２０モル用いることが更に好ましい
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、典型的には、トリス−２−シアノエチルホスファイトの溶液にＢＨ_３・ＴＨＦ錯体を加えて攪拌し、得られた反応生成物を単離精製した後に、トリエチルアミンと反応させることで、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤を得る。
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、溶媒としてはトリス−２−シアノエチルホスファイトが溶解できるものが好ましい。たとえば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを挙げることができ、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであることが好ましい。
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、反応温度としては、−３０℃〜５０℃が好ましく、０℃〜４０℃がさらに好ましく、１５℃〜３０℃が更になお好ましい。所望により、光を遮断して反応を進行させてもよい。
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、圧力は、大気圧であることが好ましい。また、雰囲気は、アルゴン等の不活性ガス雰囲気であることが好ましい。
本発明の第３態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを用いた二量体の製造方法の一態様が提供される。即ち、本発明の第３態様では、下記一般式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと、上記式（１）中のシアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、所定の縮合剤存在下、下記一般式（５）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させ、下記一般式（６）で示される二量体を製造する方法が提供される。

［式中、Ｂ^１、Ｒ^１、Ｒ^２は、上記の意味を有する。］
上記式中、Ｂ^１、Ｒ^１及びＲ^２についての説明は、本発明の第１態様〜第２態様においてしたのと同様である。
本発明の第３態様では、下記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体を用いる。

上記式（５）中、Ｂ^２は、チミン、シトシン、ウラシル等のピリミジン塩基；アデニン、グアニン等のプリン塩基；または５−メチルシトシン、５−フルオロウラシル、５−ヒドロキシメチルシトシン等のそれらの誘導体を表す。
溶媒への溶解度を向上させるために、塩基部位に、ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、イソブチリル（ｉＢｕ）、フェノキシアセチル（ＰＡＣ）、４−（ｔ−ブチル）フェノキシアセチル（ＢＰＡ）、アリルオキシカルボニル（ＡＯＣ）、２−［（ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）メチル］ベンゾイル（ＳｉＯＭＢ）、２−（アセチルメチル）ベンゾイル（ＡＭＢ）、２−アジドベンゾイル（ＡＺＭＢ）、ジフェニルカルバモイル、フェニルアセチル等の保護基を導入してもよい。
本発明の第３態様において、Ｂ^２は、シトシン、チミン、アデニン、グアニンまたはそれらの誘導体、あるいはそれらに保護基が導入されたものであることが好ましい。
上記式（５）中、Ｒ^３は、保護基を表す。
本明細書において、保護基としては、二量体の製造方法が固相反応である場合には固相反応用の保護基（担体）を、液相反応の場合は液相反応用の各種保護基を挙げることができる。
本明細書において、液相反応用の保護基としては、アルキル基、アルケニル基、アシル基、置換基を有していてもよいシリル基、アルコキシアシル基、アリールオキシアシル基等を挙げることができる。
本明細書において、「アルケニル基」としては、制限するわけではないが、ビニル、アリル、１−プロペニル、イソプロペニル、２−メチル−１−プロペニル、２−メチルアリル、２−ブテニル等を挙げることができる。
本明細書において、「アシル基」としては、制限するわけではないが、Ｃ_１−６アルキル−カルボニル（たとえばメチルカルボニル、エチルカルボニル等）、Ｃ_６−１０アリール−カルボニル（たとえばベンゾイル）などが挙げられる。
本明細書において、「置換基を有していてもよいシリル基」としては、制限するわけではないが、ｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔ−ブチルジフェニルシリル基などを挙げることができる。
本明細書において、「アルコキシアシル基」としては、制限するわけではないが、Ｃ_１−６アルコキシ−Ｃ_１−６アルキル−カルボニル（たとえばメトキシメチルカルボニル、エトキシエチルカルボニル等）、Ｃ_１−６アルコキシ−Ｃ_６−１０アリール−カルボニル（たとえばメトキシベンゾイル）などが挙げられる。
本明細書において、「アリールオキシアシル基」としては、制限するわけではないが、Ｃ_６−１０アリールオキシ−Ｃ_１−６アルキル−カルボニル（たとえばフェノキシアセチル、フェノキシエチルカルボニル等）、Ｃ_６−１０アリールオキシ−Ｃ_６−１０アリール−カルボニル（たとえばフェノキシベンゾイル）などが挙げられる。
本明細書において、固相反応用の担体としては、たとえば、アミノアルキル化された孔径が制御された多孔性ガラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｐｏｒｅｇｌａｓｓ：ＣＰＧ）、アミノアルキル化された高架橋性ポリスチレン（ＨＣＰ）といった固相法に用いられる公知の高分子担体であって、できるだけ膨潤性がなく、過剰に用いた試薬を洗浄によって簡単に除去できるものを特に制限なく挙げることができる。
担体とヌクレオシドの水酸基はコハク酸エステル、シュウ酸エステル、フタル酸エステル等のリンカーを介して結合していてもよい。
本発明の第３態様において、Ｒ^３は、二量体の製造方法が固相反応である場合には、ＣＰＧ又はＨＣＰ、あるいはリンカーを有する担体であることが好ましく、二量体の製造方法が液相反応である場合には、ベンゾイル基、フェノキシアセチル基であることが好ましい。
上記式（５）中、Ｒ^４は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。
本発明の第３態様において、Ｒ^４は、水素原子、メトキシ基、又はアシルオキシ基であることが好ましい。
本発明の第３態様において、反応が固相反応の場合には、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーは、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体に対して過剰量用いることが好ましい。例えば、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーは、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体１モルに対して１モル〜５０モル用いることが好ましく、１０モル〜４０モル用いることが更に好ましく、２０モル〜３０モル用いることが更になお好ましい。
本発明の第３態様において、反応が液相反応の場合には、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーは、縮合反応を定量的に進行させるために、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体１モルに対して１モル〜３モル用いることが好ましく、１．２モル〜１．５モル用いることが更に好ましい。
また、本発明の第３態様では、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させるに際して、シアノエチル基をβ脱離させない強塩基が用いられる。
本発明の第３態様において、強塩基の説明は、本発明の第２態様においてしたのと同様である。
本発明の第３態様において、反応が液相、固相のいずれの場合であっても、反応を完結させるために、シアノエチル基をβ脱離させない強塩基は、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーに対して過剰量用いることが好ましい。例えば、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー１モルに対して５モル以上用いることが好ましく、７モル〜２０モル用いることが更に好ましい。
また、本発明の第３態様では、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させるに際して、所定の縮合剤が用いられる。
本発明の第３態様において、当該所定の縮合剤の説明は、本発明の第２態様においてしたのと同様である。
本発明の第３態様において、使用される縮合剤は、反応が液相、固相のいずれの場合であっても、縮合反応を定量的に進行させるために、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー１モルに対して、１モル〜２０モル用いることが好ましく、１．５モル〜１０モル用いることが更に好ましく、２モル〜３モル用いることが更になお好ましい。
本発明の第３態様においても、本発明の第２態様と同様に、縮合剤が前記式（４ａ）で示される化合物である場合には、強塩基としては、より塩基性の強い上記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体を用いることが好ましい。
また、本発明の第３態様において、縮合剤が前記式（４ｂ）で示される化合物である場合には、強塩基としては、より塩基性の強い上記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体を用いてもよいし、やや塩基性が弱い上記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体を用いてもよい。アニオン化したヌクレオシド誘導体と縮合剤との反応を避ける観点からは、やや塩基性が弱い上記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体を用いることが好ましい。
本発明の第３態様において、典型的には、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体の溶液に、縮合剤と強塩基を加えて攪拌することで、上記式（６）で示される二量体を得る。
本発明の第３態様において、溶媒としては上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体および縮合剤が溶解できるものが好ましい。たとえば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを挙げることができ、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであることが好ましい。
本発明の第３態様において、反応温度としては、−３０℃〜５０℃が好ましく、０℃〜４０℃がさらに好ましく、１５℃〜３０℃が更になお好ましい。所望により、光を遮断して反応を進行させてもよい。
本発明の第３態様において、圧力は、大気圧であることが好ましい。雰囲気は、アルゴン等の不活性ガス雰囲気であることが好ましい。
本発明の第４態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法の一態様が提供される。即ち、下記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体と、脱保護試薬とを反応させて、Ｒ^１を脱離させた後、上記式（８）中のシアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、所定の縮合剤存在下、下記式（５）で示されるボラノホスフェートモノマーとを反応させることを特徴とする、下記式（９）で示されるオリヌクレオチド誘導体の製造方法が提供される。

［式中、Ｂ^１、Ｂ^２、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４は、上記の意味を有する。］
本発明の第４態様にしたがって脱保護反応及び縮合反応を繰り返すことで、任意の鎖長までオリゴヌクレオチド鎖を延長することができる。また、任意の核酸塩基を有するボラノホスフェートモノマー（１）を用いることで任意の塩基配列を有するオリゴマーを合成することができる。
本発明の第４態様において、上記式中、Ｂ^１、Ｂ^２、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４についての説明は、本発明の第１態様〜第３態様においてしたのと同様である。
本発明の第４態様において、まず、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体と脱保護試薬とを反応させて、Ｒ^１を脱離させる。
ここで、上記式（８）中、ｎは、１以上の整数を示し、１〜１００であることが好ましく、１０〜７０であることがより好ましく、１０〜３０であることが更に好ましい。
本発明の第４態様において、脱保護試薬は、たとえば、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸を好ましく挙げることができる。
本発明の第４態様において、脱保護試薬は、反応を完結させるために、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体１モルに対して、２モル〜１００モル用いることが好ましく、５モル〜５０モル用いることが更に好ましく、１０モル〜２０モル用いることが更になお好ましい。
本発明の第４態様において、脱保護反応によって生成するトリチルカチオンがボラノホスフェートに作用して分解反応を引き起こす恐れがあるため、脱保護反応は、トリチルカチオンを還元する試薬（トリチルカチオンスカベンジャー）存在下で行うことが好ましい。このような試薬としては、トリエチルシラン、ＢＨ_３・ピリジン錯体を挙げることができる。
本発明の第４態様において、トリチルカチオンを還元する試薬は、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体に対して、大過剰用いることが好ましい。例えば、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体１モルに対して、２モル〜１００モル用いることが好ましく、５モル〜５０モル用いることが更に好ましく、１０モル〜２０モル用いることが更になお好ましい。
本発明の第４態様において、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体と脱保護試薬とを反応させてＲ^１を脱離させた後、本発明の第３態様にかかる縮合反応と同様の縮合反応を行い、上記式（９）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体を製造する。
本発明の第４態様において、オリゴヌクレオチド誘導体の製造方法が固相反応である場合には、使用される上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーの量は、縮合反応を定量的に進行させるために、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体１モルに対して１モル〜５０モル用いることが好ましく、１０モル〜４０モル用いることが更に好ましく、２０モル〜３０モル用いることが更になお好ましい。
本発明の第４態様において、オリゴヌクレオチド誘導体の製造方法が液相反応である場合には、使用される上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーの量は、縮合反応を定量的に進行させるために、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体１モルに対して１モル〜３モル用いることが好ましく、１．２モル〜１．５モル用いることが更に好ましい。
本発明の第４態様で用いられる強塩基は、本発明の第２態様で説明したのと同様である。
本発明の第４態様において、強塩基は、反応が液相、固相のいずれの場合であっても、反応を定量的に進行させるために、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーに対して過剰量用いることが好ましい。例えば、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー１モルに対して５モル以上用いることが好ましく、７モル〜２０モル用いることが更に好ましい。
本発明の第４態様で用いられる縮合剤は、本発明の第３態様で説明したのと同様である。
本発明の第４態様において、縮合剤は、反応が液相、固相のいずれの場合であっても、反応を定量的に進行させるために、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー１モルに対して、１モル〜２０モル用いることが好ましく、１．５モル〜１０モル用いることが更に好ましく、２モル〜３モル用いることが更になお好ましい。
本発明の第４態様において、典型的には、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体の溶液に、脱保護試薬を加え、反応生成物を得る。次いで、反応生成物の溶液に、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体を加え、強塩基及び縮合剤を添加し、攪拌してオリゴヌクレオチド誘導体（９）を得る。
本発明の第４態様において、溶媒としては上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体および縮合剤が溶解できるものが好ましい。たとえば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを挙げることができ、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであることが好ましい。
であることが好ましい。
本発明の第４態様において、反応温度としては、−３０℃〜５０℃が好ましく、０℃〜４０℃がさらに好ましく、１５℃〜３０℃が更になお好ましい。所望により、光を遮断して反応を進行させてもよい。
本発明の第４態様において、圧力は、大気圧であることが好ましい。雰囲気は、アルゴン等の不活性ガス雰囲気であることが好ましい。
本発明の第４態様によって任意の鎖長を有するオリゴヌクレオチド誘導体が得られた場合には、まず、５’−末端のＲ^１を本発明の第４態様において説明した脱保護反応によって除去する。
次いで、得られた５’−位に遊離の水酸基を有するオリゴマーから、リン原子上の保護基である２−シアノエチル基をＤＢＵ（１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−ウンデカ−７−エン）等で除去する。次いで、アンモニアで処理することにより、核塩基の保護基およびＲ^４で示される担体が除去され、ボラノホスフェートオリゴマーが得られる。

以下、本発明を実施例に基づいて説明する。ただし、本発明は、下記の実施例に制限されるものではない。
反応に用いた溶媒は、市販のものを蒸留した後ナトリウムまたはモレキュラーシーブ４Ａで乾燥したものを用いた。その他の試薬は市販のものをそのまま用いた。
各種分析機器は、以下に示した機種を用いた。
^１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（^１Ｈ−ＮＭＲ）：バリアンＭｅｒｃｕｒｙ３００（３００ＭＨｚ）
^３１Ｐ−核磁気共鳴スペクトル（^３１Ｐ−ＮＭＲ）：バリアンＭｅｒｃｕｒｙ３００（１２１．５ＭＨｚ）
カラムクロマトグラフィーに充填するシリカゲルには、ＫＡＮＴＯＣＨＥＭＩＣＡＬのＳｉｌｉｃａＧｅｌ６０Ｎを用いた。
参考例１
トリス−２−シアノエチルボラノホスフェートの調製

トリス−２−シアノエチルホスファイト（２４．７ｇ，１０２．４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ溶液（１０３ｍＬ）に、アルゴン雰囲気下で、ＢＨ_３・ＴＨＦ／ＴＨＦ（１２１．５ｍＬ，１１３ｍｍｏｌ）の０．９３Ｍ溶液を０℃で滴下にて加えた。反応混合物を１時間室温にて攪拌し、反応混合物を減圧下で乾燥させた。残渣をシリカゲルカラムで精製した（１５０ｇ）。カラムクロマトグラフィーは、酢酸エチルを用いて行った。トリス−２−シアノエチルボラノホスフェートを含む部分を集めて減圧下で乾燥させ、表題化合物を無色油状物質として得た（２２．９ｇ，８８％）。
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ４．３１（６Ｈ，ｍ），２．７９（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ_３）；^３１ＰＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ１１９．８−１１６．９（ｍ）．
参考例２
トリエチルアンモニウムビス−２−シアノエチルボラノホスフェートの調製

参考例１で得たトリス−２−シアノエチルボラノホスフェート（２２．８ｇ，８９．４ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（８９．４ｍＬ）に、アルゴン雰囲気下で、Ｅｔ_３Ｎ（１２４ｍＬ，８９４ｍｍｏｌ）を室温で滴下にて加え、昇温させ、還流した。１時間攪拌した後、反応混合物を室温まで冷却した。残渣を減圧下で乾燥させ、無水トルエン及びＣＨＣｌ_３で共沸を繰り返し、表題化合物を無色油状物質として得た（２７．１ｇ，定量的）。
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ１２．５８（１Ｈ，ｂｓ），４．１４−４．０４（４Ｈ，ｍ），３．０７（６Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），２．７４−２．６６（４Ｈ，ｍ）１．３４（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ_３）；^３１ＰＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ９６．６４（ｑ，Ｊ_ＰＢ＝１２７．３７Ｈｚ）
参考例１〜参考例２の反応スキームを下記に示す。

［式中、「ＣＥ」はシアノエチル基を表す。］
参考例３
ビス−２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^６−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシン−３’−イルボラノホスフェート

５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^６ベンゾイル−２’−デオキシアデノシン（１．３１ｇ，２．００ｍｍｏｌ）及び参考例２で得られたトリエチルアンモニウムビス−２−シアノエチルボラノホスフェート（０．７３０ｇ，２．４０ｍｍｏｌ）を、無水ピリジンによる共沸、次いで無水トルエンによる共沸を繰り返すことで乾燥させた後、無水アセトニトリル（２０．０ｍＬ）に溶解させた。溶液に、引き続いて、２，６−ルチジン（２．３０ｍＬ，２０．０ｍｍｏｌ）、ＰｙＮＴＰ（トリス（ピロリジン−１−イル）３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール−１−イルホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）（２．４０ｇ，４．８０ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間攪拌した後、反応混合物をＣＨＣｌ_３（５０ｍＬ）で希釈した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３（３ｘ５０ｍＬ）で洗浄し、水層をＣＨＣｌ_３（２ｘ５０ｍＬ）で逆抽出した。有機層及び洗浄液を集めて、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で乾燥させた。残渣を無水トルエンで共沸を繰り返し、シリカゲルカラムで精製した（１００ｇ）。カラムクロマトグラフィーは、酢酸エチルを用いて行った。ビス−２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^６−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシン−３’−イルボラノホスフェートを含む部分を集めて、減圧下で乾燥させ、表題化合物を無色泡状物として得た（１．２９ｇ，７７％）。
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ９．０３（１Ｈ，ｂｓ），８．７２（１Ｈ，ｓ），８．１７（１Ｈ，ｓ），８．０７−７．１８（１４Ｈ，ｍ），６．８１（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．５２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｍ），４．３８（１Ｈ，ｍ），４．２９−４．１７（４Ｈ，ｍ），３．７８（６Ｈ，ｓ），３．４４（２Ｈ，ｍ），２．８２−２．５７（６Ｈ，ｍ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ_３）；^３１ＰＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ１２０．０−１１６．８（ｍ）．
参考例４
ビス−２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^４−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イルボラノホスフェート

参考例３と同様の手順を行った。但し、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^６ベンゾイル−２”−デオキシアデノシンの代わりに、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^４−ベンゾイル−２’−デオキシシチジンを用いた。表題化合物を無色泡状物として得た（粗生成物）。
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ８．６６（１Ｈ，ｓ），８．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．９４−７．１８（１５Ｈ，ｍ），６．８６（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ），６．３４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），５．１６−５．０６（１Ｈ，ｍ），４．３５−４．２９（１Ｈ，ｍ），４．２５−４．１３（２Ｈ，ｍ），３．７８（６Ｈ，ｓ），３．５１−３．４７（２Ｈ，ｍ），２．９４−２．３７（４Ｈ，ｍ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ_３）；^３１ＰＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ１１９．８−１１６．４（ｍ）．
参考例５
ビス−２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ^６−ジフェニルカルバモイル−Ｎ^２−フェニルアセチル−２’−デオキシグアノシン−３’−イルボラノホスフェート

参考例３と同様の手順を行った。但し、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^６ベンゾイル−２’−デオキシアデノシンの代わりに、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ^６ジフェニルカルバモイル−Ｎ^２フェニルアセチル−２’−デオキシグアノシンを用いた。表題化合物を淡黄色泡状物として得た（収率９０％）。
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ８．１０（１Ｈ，ｓ），７．９１（１Ｈ，ｓ），７．４６−７．１４（２４Ｈ，ｍ），６．７８（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．４１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），５．２１（１Ｈ，ｍ），４．３２（１Ｈ，ｍ），４．２２−４．０８（４Ｈ，ｍ），３．９８（２Ｈ，ｓ，ＣＨ_２ｏｆＰａ），３．７４（６Ｈ，ｓ），３．４６−３．３１（２Ｈ，ｍ），２．９９−２．５０（６Ｈ，ｍ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ_３）；^３１ＰＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ１１９．０２−１１５．６１（ｍ）．
参考例６
ビス−２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^３−ベンゾイルチミジン−３’−イルボラノホスフェート

参考例３と同様の手順を行った。但し、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^６ベンゾイル−２’−デオキシアデノシンの代わりに、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^３ベンゾイルチミジンを用いた。表題化合物を無色泡状物として得た（収率９８％）。
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ７．９５，７．９３（２Ｈ，ｍ），７．７２（１Ｈ，ｓ），７．６８−７．２１（１２Ｈ，ｍ），６．８７（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．４５，６．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ_{１’，２’}／Ｊ_{１’，２”}＝５．７Ｈｚａｎｄ８．７Ｈｚ），５．２１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），４．２９−４．１１（５Ｈ，ｍ），３．８０（６Ｈ，ｓ），３．４８−３．４４（２Ｈ，ｍ，５’−Ｈａｎｄ５”−Ｈ），２．８２−２．４６（６Ｈ，ｍ），１．４６（３Ｈ，ｓ，５−ＣＨ_３），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ_３）；^３１ＰＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ１１８．７９−１１５．４８（ｍ）．
実施例１
トリエチルアンモニウム２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^６−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシン−３’−イルボラノホスフェート

参考例３で得たビス−２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^６−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシン−３’−イルボラノホスフェート（１．２９ｇ，１．５３ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（２ｍＬ）に、アルゴン雰囲気下で、Ｅｔ_３Ｎ（２．８ｍＬ，２０ｍｍｏｌ）を室温にて滴下により加えた。反応混合物を１時間、室温にて攪拌し、反応混合物を減圧下で乾燥させた。残渣をシリカゲルカラム（４０）で精製した。カラムクロマトグラフィーの溶出は、０．５％Ｅｔ_３Ｎを含むＣＨ_２Ｃｌ_２によって行い、メタノール（０−４％）により勾配を与えた。トリエチルアンモニウム２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^６−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシン−３’−イルボラノホスフェートを含む部分を集めて乾燥させた。過剰なＥｔ_３Ｎは、無水トルエンによって数回共沸させることにより除去し、表題化合物を無色泡状物質として得た（６９８．６ｍｇ，５１％）。
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ９．１８（１Ｈ，ｂｓ），８．７１（１Ｈ，ｓ，８−Ｈ），８．２０（１Ｈ，ｓ），８．０２，８．０５（２Ｈ，２ｍ），７．６５−７．１５（１２Ｈ，ｍ），６．７９（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．５８（１Ｈ，ｍ），５．１４（１Ｈ，ｍ），４．４３（１Ｈ，ｍ），４．０８−３．９１（２Ｈ，ｍ），３．７７（６Ｈ，ｓ），３．４１（２Ｈ，ｍ），３．０４（６Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．９６−２．４６（４Ｈ，ｍ），１．３１（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３５Ｈｚ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ_３）；^３１ＰＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ９８．５５−９３．８０（ｍ）．
実施例２
トリエチルアンモニウム２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^６−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イルボラノホスフェート

実施例１と同様の手順で行った。但し、参考例３で得たビス−２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^６−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシン−３’−イルボラノホスフェートの代わりに、参考例４で得たビス−２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^４−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イルボラノホスフェートを用いた。表題化合物を無色泡状物として得た（収率５６％，２段階）。
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ１２．５０（１Ｈ，ｂｓ），８．７０（１Ｈ，ｂｓ），８．２４（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．９０，７．８７（２Ｈ，２ｍ），７．６５−７．１１（１３Ｈ，ｍ），６．９４−６．７９（４Ｈ，ｍ），６．３６−６．２６（１Ｈ，ｍ），５．０４（１Ｈ，ｍ），４．４１−４．３１（１Ｈ，ｍ），４．００−３．８８（２Ｈ，ｍ），３．７９（６Ｈ，ｓ），３．５２−３．４４（２Ｈ，ｍ），３．０４（６Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），２．９０−２．７８（１Ｈ，ｍ），２．７２−２．４７（２Ｈ，ｍ），２．３９−２．２４（１Ｈ，ｍ），１．３１（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ_３ｏｆＥｔ_３ＮＨ^＋），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ_３）；^３１ＰＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ９８．９３−９３．６７（ｍ）．
実施例３
トリエチルアンモニウム２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ^６−ジフェニルカルバモイル−Ｎ^２−フェニルアセチル−２’−デオキシグアノシン−３’−イルボラノホスフェート

実施例１と同様の手順で行った。但し、参考例３で得たビス−２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^６−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシン−３’−イルボラノホスフェートの代わりに、参考例５で得たビス−２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ^６−ジフェニルカルバモイル−Ｎ^２−フェニルアセチル−２’−デオキシグアノシン−３’−イルボラノホスフェートを用いた。表題化合物を無色泡状物として得た（収率９０％）。
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ１２．５２（１Ｈ，ｂｓ），８．０８（１Ｈ，ｂｓ），８．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．５１−７．０９（２４Ｈ，ｍ），６．７５（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．４５，６．４１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ_{１’，２’}／Ｊ_{１’，２”}＝６．３Ｈｚａｎｄ１２．９Ｈｚ），５．１０（１Ｈ，ｍ），４．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ），４．０７−３．８６（４Ｈ，ｍ），３．６９（６Ｈ，ｓ），３．３８−３．２８（２Ｈ，ｍ），２．９８（６Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），２．８７−２．４４（４Ｈ，ｍ），１．２６（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ_３）；^３１ＰＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ９９．０９−９３．２３（ｍ）．
実施例４
トリエチルアンモニウム２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^３−ベンゾイルチミジン−３’−イルボラノホスフェート

実施例１と同様の手順で行った。但し、参考例３で得たビス−２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^６−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシン−３’−イルボラノホスフェートの代わりに、参考例６で得たビス−２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^３−ベンゾイルチミジン−３’−イルボラノホスフェートを用いた。表題化合物を無色泡状物として得た（収率７４％）。
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ１２．４２（１Ｈ，ｂｓ），７．９７−７．２０（１６Ｈ，ｍ），６．８４（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．４６，６．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ_{１’，２’}／Ｊ_{１’，２”}＝５．７Ｈｚａｎｄ８．１Ｈｚ），５．２１−５．１０（１Ｈ，ｍ，３’−Ｈ），４．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，４’−Ｈ），４．０３−３．８６（２Ｈ，ｍ），３．７９（６Ｈ，ｓ），３．４５−３．４２（２Ｈ，ｍ），２．９６（６Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．６８−２．３９（４Ｈ，ｍ），１．３９，１．３５（３Ｈ，２ｓ），１．２５（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ_３）；^３１ＰＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ９８．３１−９３．５９（ｍ）．
実施例５
２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^４−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル３’−ベンゾイル−Ｎ^３−ベンゾイルチミジン−５’−イルボラノホスフェート

３’−Ｏ−ベンゾイル−Ｎ^３−ベンゾイルチミジン（４５．０ｍｇ，０．１００ｍｍｏｌ）及び実施例２で得られたトリエチルアンモニウム２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^６−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イルボラノホスフェート（１０３．９ｍｇ，０．１２０ｍｏｌ）を、無水ピリジンによる共沸、次いで無水トルエンによる共沸を繰り返すことで乾燥させた後、無水ＣＨ_３ＣＮ（１．００ｍＬ）に溶解させた。溶液に、引き続いて、２，６−ルチジン（１１６μＬ，１．００ｍｍｏｌ）、ＰｙＮＴＰ（１２０ｍｇ，０．２４０ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間攪拌した後、反応混合物をＣＨＣｌ_３（１０ｍＬ）で希釈した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３（３ｘ１０ｍＬ）で洗浄し、水層をＣＨＣｌ_３（２ｘ１０ｍＬ）で逆抽出した。有機層及び洗浄液を集めて、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で乾燥させた。残渣をシリカゲルカラムで精製した（１０ｇ）。カラムクロマトグラフィーの溶出は、ＣＨ_２Ｃｌ_２を用いて行い、メタノール（０−１．５％）により勾配を与えた。
２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^４−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル３’−Ｏ−ベンゾイル−Ｎ^３−ベンゾイルチミジン−５’−イルボラノホスフェートを含む部分を集めて、減圧下で乾燥させ、表題化合物を無色泡状物として得た（１１３．４ｍｇ，９５％）。
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ８．２０−８．１３（１Ｈ，ｍ），８．０６−７．１６（２６Ｈ，ｍ），６．９１−６．８２（４Ｈ，ｍ），６．５４−６．４６（１Ｈ，ｍ），６．３４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），５．５５−５．４０（１Ｈ，ｍ），５．２３−５．１４（１Ｈ，ｍ），４．５４−４．０９（６Ｈ，ｍ），３．９３−３．６４（６Ｈ，ｍ），３．５６−３．４６（２Ｈ，ｍ），３．０６−２．３５（６Ｈ，ｍ），２．０１，１．９９（３Ｈ，２ｓ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ_３）；^３１ＰＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ１２１．２１−１１７．５５（ｍ）．
参考例３〜実施例５の反応スキームを下記に示す。

［式中、「ＣＥ」はシアノエチル基を表す。］
実施例６
Ｎ^４−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル３’−ベンゾイル−Ｎ^３−ベンゾイルチミジン−５’−イルボラノホスフェート

５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^３−ベンゾイルチミジンの３’−水酸基にサクシニルリンカーを介してＣＰＧに担持させた固相担体（２９．２ｍｇ、０．５μｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２−Ｅｔ_３ＳｉＨ（１：１，ｖ／ｖ）の３％ＤＣＡ（ジクロロ酢酸）溶液で各５秒間・３回洗い、次いで無水ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液、無水ＣＨ_３ＣＮ溶液で各０．５ｍｌ×３回洗い、減圧乾燥した。１０分後、ＭＮＴＰ（１，３−ジメチル−２−ピロリジン−１−イル−２−（３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−１，３，２−ジアザホスホリジニウムヘキサフルオロホスフェート）（８．７ｍｇ、１０μｍｏｌ）、実施例２で得られたトリエチルアンモニウム２−シアノエチル５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^６−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イルボラノホスフェート（８．９ｍｇ、２０μｍｏｌ）を加え、再び減圧乾燥した。０．５Ｍ２，６−ルチジン／ＣＨ_３ＣＮ溶液を１００μｌ加え、３分間攪拌した（二量体の合成）。
その後無水ＣＨ_３ＣＮ溶液、無水ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液で洗浄し、ＣＨ_２Ｃｌ_２−Ｅｔ_３ＳｉＨ（１：１，ｖ／ｖ）の３％ＤＣＡ溶液で各５秒間・３回洗浄した（ジメトキシトリチル基の除去）。
次に無水ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液、無水ＴＨＦ溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／無水酢酸／ＴＨＦ溶液（２：１：７、ｖ／ｖ／ｖ）溶液を加え、３０秒攪拌した。その後無水ＴＨＦ溶液、無水ＣＨ_３ＣＮ溶液で洗浄し、０．２ＭＤＢＵ／ＣＨ_３ＣＮ溶液を加え、５分間攪拌した（２−シアノエチル基の除去）。
その後無水ＣＨ_３ＣＮ溶液で洗浄し、減圧乾燥後、アンモニア・メタノール溶液０．５ｍｌを加え、密栓をする。室温で１２時間攪拌した後、吸引濾過を行ないＣＰＧと濾別し減圧乾燥後、水（３ｍＬ）で希釈した（担体の除去）。
反応混合物をジエチルエーテル（５ｘ３ｍＬ）で洗浄し、エーテル層を水（１ｘ３ｍＬ）で逆抽出した。水層及び洗浄液を集めて、減圧下で乾燥させた（生成物の精製）。
残渣を逆相ＨＰＬＣで分析した。（０−１５％アセトニトリルの０．１Ｍ酢酸アンモニウムバッファー（ｐＨ７．０）による線形勾配、４５分、５０℃、流速１ｍｌ／分）ＨＰＬＣのピークの積分値より算出した収率は９５％。
実施例７
ボラノホスフェート４量体及び１２量体の合成
（１）４量体の合成
５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ^３−ベンゾイルチミジンの３’−水酸基にサクシニルリンカーを介してＣＰＧに担持させた固相担体（０．５μｍｏｌ）に対し、下記表１に示した合成サイクルにより、ボラノホスフェート４量体ｄ（Ｃ_ＰＢＡ_ＰＢＧ_ＰＢＴ）を合成した。

表１−ステップ１０で脱保護した粗精製の４量体に対し、吸引濾過を行いＣＰＧと濾別し減圧乾燥後、水（３ｍＬ）で希釈した。反応混合物をジエチルエーテル（５×３ｍＬ）で洗浄し、エーテル層を水（１×３ｍＬ）で逆抽出した。水層及び洗浄液を集めて、減圧下で乾燥させた。陰イオン交換ＨＰＬＣにより分離精製後、Ｃ_１８逆相カラムカートリッジで脱塩を行ったところ、単離収率３０％で、目的とするボラノホスフェート４量体；ｄ（Ｃ_ＰＢＡ_ＰＢＧ_ＰＢＴ）を得ることができた。
（２）１２量体の合成
５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ３−ベンゾイルチミジンの３’−水酸基にサクシニルリンカーを介してＣＰＧに担持させた固相担体（０．５μｍｏｌ）に対し、表１に示した合成サイクルにより、ボラノホスフェート１２量体ｄ（Ｃ_ＰＢＡ_ＰＢＧ_ＰＢＴ）_３を合成した。
上記表１−ステップ１０で脱保護した粗精製の１２量体に対し、吸引濾過を行ないＣＰＧと濾別し減圧乾燥後、水（３ｍＬ）で希釈した。反応混合物をジエチルエーテル（５×３ｍＬ）で洗浄し、エーテル層を水（１×３ｍＬ）で逆抽出した。水層及び洗浄液を集めて、減圧下で乾燥させた。１５％ＰＡＧＥ／７ＭＵｒｅａ（１ｍｍ厚、４０×２０ｃｍ）により精製を行なったところ、単離収率１６％で、目的とするボラノホスフェート１２量体；ｄ（Ｃ_ＰＢＡ_ＰＢＧ_ＰＢＴ）_３を得ることができた。
実施例７における合成スキームを以下に示す。

上記表１及び合成スキーム中、「モノマー」「ＭＮＴＰ」「ＤＭＡＮ」の構造式は下記の通りである。

本発明により、ボラノホスフェートオリゴマーが提供される。本発明により得られるボラノホスフェートオリゴマーはアンチセンス分子として有用であり、試薬又は医薬品として利用することが可能である。

Claims

下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーの製造方法であって、

［式中、Ｂ¹は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、
Ｒ¹は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、
Ｒ²は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
シアノエチル基をβ脱離させない下記式（７ａ）又は、下記式（７ｂ）で示される強塩基、及び、下記式（４ａ）で示される縮合剤存在下、

［式中、Ｘ¹、Ｘ²、Ｘ³及びＸ⁴は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、メチル基、又は、エチル基であり、Ｘ⁵、Ｘ⁶、Ｘ⁷、Ｘ⁸、Ｘ⁹及びＸ¹⁰は、水素原子、Ｃ₁〜₁₀アルキル基、又はＣ₁〜₁₀アルコキシ基である］

［式中、Ｙ¹は、水素原子、又は、Ｃ₁〜₁₀アルキル基であり、
Ｙ²及びＹ³は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ₁〜₁₀アルキル基である。］

［式中、Ａ¹及びＡ²、Ａ³及びＡ⁴、並びに、Ａ⁵及びＡ⁶が、それぞれ互いに架橋して５員飽和環を形成するか、あるいは、Ａ²及びＡ³、並びに、Ａ⁵及びＡ⁶が架橋して５員飽和環を形成し、かつＡ¹及びＡ⁴がメチル基であり、Ａ^7-は、求核性のないアニオン種（ただし、該アニオン種は、ＰＦ₆ ^-、ＢＦ₄ ^-、ＣｌＯ₄ ^-、ＣＦ₃ＳＯ₂Ｏ^-、又は、（ＣＦ₃ＳＯ₂）₂Ｎ^-である）であり、
Ｑ環基は、ニトロ基、ハロゲン原子、シアノ基、若しくはトリフルオロメチル基を置換基として有するトリアゾリル基である。］
下記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と、

下記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体と

［式中、Ｂ¹、Ｒ¹及びＲ²は、上記の意味を有する。］
を反応させ反応生成物を得る工程と、前記反応生成物とトリエチルアミン又は１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−ウンデカ−７−エンとを反応させる工程とを含むことを特徴とする、ボラノホスフェートモノマーの製造方法。
前記ボラノホスホリル化剤が、トリス−２−シアノエチルホスファイトをボラノ化して下記式で示されるトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートを得、

得られたトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートとトリエチルアミン又は１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−ウンデカ−７−エンを反応させることにより得られることを特徴とする、請求項１に記載のボラノホスフェートモノマーの製造方法。
請求項１に記載の式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと
請求項１に記載の式（７ａ）又は式（７ｂ）で示される強塩基、及び、請求項１に記載の式（４ａ）で示される縮合剤存在下、
下記一般式（５）で示されるヌクレオシド誘導体と

［式中、Ｂ²は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、
Ｒ³は、保護基を表し、
Ｒ⁴は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
を反応させ、下記一般式（６）で示される二量体を製造する方法。

［式中、Ｂ¹、Ｂ²、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³及びＲ⁴は、前記と同義を表す。］
前記式（７ｂ）中、Ｙ¹が水素原子、又は、メチル基であり、Ｙ²及びＹ³が、メチル基である、請求項２又は４に記載の方法。
下記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体と、

［式中、Ｂ¹及びＢ²は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、
Ｒ¹は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、
Ｒ²及びＲ⁴は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基であり、
Ｒ³は、保護基を表し、
ｎは１以上の整数を示す。］
脱保護試薬とを反応させて、Ｒ¹を脱離させた後、請求項１に記載の式（７ａ）又は式（７ｂ）で示される強塩基、及び、請求項１に記載の式（４ａ）で示される縮合剤存在下、
請求項１に記載の式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと反応させることを特徴とする、下記式（９）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法。

［式中、Ｂ¹、Ｂ²、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴及びｎは、前記と同義を表す。］
反応が固相で行われることを特徴とする、請求項６に記載のオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法。
請求項３ないし請求項６のいずれか１項に記載の方法における、下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーの使用。

［式中、Ｂ¹は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、
Ｒ¹は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、
Ｒ²は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、
又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］