JPH08301878A - 三フッ化ホウ素配位化合物およびオリゴヌクレオチドの合成方法 - Google Patents
三フッ化ホウ素配位化合物およびオリゴヌクレオチドの合成方法Info
- Publication number
- JPH08301878A JPH08301878A JP12968395A JP12968395A JPH08301878A JP H08301878 A JPH08301878 A JP H08301878A JP 12968395 A JP12968395 A JP 12968395A JP 12968395 A JP12968395 A JP 12968395A JP H08301878 A JPH08301878 A JP H08301878A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleoside
- boron trifluoride
- phosphoramidite
- reaction
- benzimidazole
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 新規な配位化合物およびそれを用いた核酸
化合物、特にオリゴヌクレオチドの優れた合成方法の提
供。 【構成】 ベンズイミダゾールと三フッ化ホウ素との
配位化合物および該化合物からなる核酸合成反応促進
剤。 【効果】 三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体
は酸素および湿気に対して安定であり室温保存が可能で
あるうえ、アセトニトリルに対する溶解性が高いという
優れた特性を有し、従来用いられていた核酸合成反応促
進剤に比較して遙かに優れた反応促進活性を示す。
化合物、特にオリゴヌクレオチドの優れた合成方法の提
供。 【構成】 ベンズイミダゾールと三フッ化ホウ素との
配位化合物および該化合物からなる核酸合成反応促進
剤。 【効果】 三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体
は酸素および湿気に対して安定であり室温保存が可能で
あるうえ、アセトニトリルに対する溶解性が高いという
優れた特性を有し、従来用いられていた核酸合成反応促
進剤に比較して遙かに優れた反応促進活性を示す。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ベンズイミダゾールと
三フッ化ホウ素との配位化合物およびそれを用いた核酸
化合物、特にオリゴヌクレオチドの合成方法に関するも
ので化学業界、医薬業界および農薬業界等で幅広く利用
されるものである。
三フッ化ホウ素との配位化合物およびそれを用いた核酸
化合物、特にオリゴヌクレオチドの合成方法に関するも
ので化学業界、医薬業界および農薬業界等で幅広く利用
されるものである。
【０００２】
【従来の技術】オリゴヌクレオチドなどの核酸化合物を
合成するためのヌクレオシドの縮合方法としては、ジエ
ステル法、トリエステル法、ホスファイト法、ホスホロ
アミダイト法、Ｈ−ホスホネート法(丹羽峰雄著、ＤＮ
Ａの化学合成法(化学と生物：実験ライン２２)、広川書
店(1992年))およびチオホスファイト法(T. Yoshida、K.
Kimura、United States Patent 4,808,708(1989年))が
知られている。このうち、ホスホロアミダイト法は、自
動合成機を用いて行う合成方法として広く用いられてお
り、また、この合成方法においては、合成反応促進剤と
して1H-テトラゾールが通常用いられている。しかし、
アンチセンス核酸法など最近の核酸化学の進歩にともな
い、修飾核酸を用いるホスホロアミダイト法による合成
反応において、1H-テトラゾールを用いるのでは充分に
反応を促進できない場合が増えてきている。このため、
1H-テトラゾールにかわる反応促進剤として、5-(p-ニト
ロフェニル)-1H-テトラゾール(B. C. Froehler、M. D.
Matteucci、Tetrahedron Lett. 24巻 3171、1983年)、5
-エチルチオ-1H-テトラゾール(R. Vinayak、Nucleic Ac
idsSymp. Series 31 巻 165、1994年)などがこれまでに
報告されている。これらの試薬は、1H-テトラゾールの
５位の炭素に電子吸引基を導入することでアゾール環の
電子密度を低下させ、アゾールの酸性度を高めるように
設計されたものであるが、経済性や有機溶媒に対する溶
解性において問題を残しているものである。
合成するためのヌクレオシドの縮合方法としては、ジエ
ステル法、トリエステル法、ホスファイト法、ホスホロ
アミダイト法、Ｈ−ホスホネート法(丹羽峰雄著、ＤＮ
Ａの化学合成法(化学と生物：実験ライン２２)、広川書
店(1992年))およびチオホスファイト法(T. Yoshida、K.
Kimura、United States Patent 4,808,708(1989年))が
知られている。このうち、ホスホロアミダイト法は、自
動合成機を用いて行う合成方法として広く用いられてお
り、また、この合成方法においては、合成反応促進剤と
して1H-テトラゾールが通常用いられている。しかし、
アンチセンス核酸法など最近の核酸化学の進歩にともな
い、修飾核酸を用いるホスホロアミダイト法による合成
反応において、1H-テトラゾールを用いるのでは充分に
反応を促進できない場合が増えてきている。このため、
1H-テトラゾールにかわる反応促進剤として、5-(p-ニト
ロフェニル)-1H-テトラゾール(B. C. Froehler、M. D.
Matteucci、Tetrahedron Lett. 24巻 3171、1983年)、5
-エチルチオ-1H-テトラゾール(R. Vinayak、Nucleic Ac
idsSymp. Series 31 巻 165、1994年)などがこれまでに
報告されている。これらの試薬は、1H-テトラゾールの
５位の炭素に電子吸引基を導入することでアゾール環の
電子密度を低下させ、アゾールの酸性度を高めるように
設計されたものであるが、経済性や有機溶媒に対する溶
解性において問題を残しているものである。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、ホス
ホロアミダイト法における反応促進剤としての活性が1H
-テトラゾールよりも高く、有機溶媒に対する溶解性が
大であり、かつ経済性および簡便性を兼ね備えた新し
い、核酸合成反応促進剤、特にホスホロアミダイト法に
よるオリゴヌクレオチドの合成方法のための反応促進剤
を開発し、該促進剤を用いた核酸合成法、特にホスホロ
アミダイト法によるオリゴヌクレオチドの合成方法を提
供することである。
ホロアミダイト法における反応促進剤としての活性が1H
-テトラゾールよりも高く、有機溶媒に対する溶解性が
大であり、かつ経済性および簡便性を兼ね備えた新し
い、核酸合成反応促進剤、特にホスホロアミダイト法に
よるオリゴヌクレオチドの合成方法のための反応促進剤
を開発し、該促進剤を用いた核酸合成法、特にホスホロ
アミダイト法によるオリゴヌクレオチドの合成方法を提
供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
の解決について鋭意研究の結果、新規なベンズイミダゾ
ールと三フッ化ホウ素の配位化合物がホスホロアミダイ
ト法の反応促進剤として優れていることを見出し本発明
を完成したのである。
の解決について鋭意研究の結果、新規なベンズイミダゾ
ールと三フッ化ホウ素の配位化合物がホスホロアミダイ
ト法の反応促進剤として優れていることを見出し本発明
を完成したのである。
【０００５】すなわち、本発明は、次の三つの発明から
なるものである。 1) ベンズイミダゾールと三フッ化ホウ素との配位化合
物に関する発明。 2) ベンズイミダゾールと三フッ化ホウ素との配位化合
物からなることを特徴とする核酸合成反応促進剤に関す
る発明。 3) ベンズイミダゾールと三フッ化ホウ素との配位化合
物の存在下にヌクレオシドホスホロアミダイトまたはヌ
クレオシドホスホノアミダイトとヌクレオシドを反応さ
せることを特徴とするオリゴヌクレオチドの合成方法に
関する発明。
なるものである。 1) ベンズイミダゾールと三フッ化ホウ素との配位化合
物に関する発明。 2) ベンズイミダゾールと三フッ化ホウ素との配位化合
物からなることを特徴とする核酸合成反応促進剤に関す
る発明。 3) ベンズイミダゾールと三フッ化ホウ素との配位化合
物の存在下にヌクレオシドホスホロアミダイトまたはヌ
クレオシドホスホノアミダイトとヌクレオシドを反応さ
せることを特徴とするオリゴヌクレオチドの合成方法に
関する発明。
【０００６】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
ベンズイミダゾールと三フッ化ホウ素との配位化合物
（以下三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体とい
う）は、下記構造式１で表すことが出来る化合物で、ル
イス塩基であるベンズイミダゾールの窒素上の孤立電子
対がルイス酸の空軌道に配位結合した化合物であり、ベ
ンズイミダゾールの解離可能な水素の酸性度がルイス酸
である三フッ化ホウ素との複合体形成によって上がって
いるのが特徴である。
ベンズイミダゾールと三フッ化ホウ素との配位化合物
（以下三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体とい
う）は、下記構造式１で表すことが出来る化合物で、ル
イス塩基であるベンズイミダゾールの窒素上の孤立電子
対がルイス酸の空軌道に配位結合した化合物であり、ベ
ンズイミダゾールの解離可能な水素の酸性度がルイス酸
である三フッ化ホウ素との複合体形成によって上がって
いるのが特徴である。
【０００７】
【式１】
【０００８】本発明の三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾ
ール錯体は、三フッ化ホウ素エーテル錯化合物とベンズ
イミダゾールとをハロゲン化アルカン溶媒中、モル比
１：１で反応させることにより容易に得ることができ
る。この際、エーテルとしては、ジエチルエーテル、テ
トラヒドロフランなどを用いることができ、三フッ化ホ
ウ素を室温でエーテルに溶かすことによりそのエーテル
錯体を得ることができる。また、ハロゲン化アルカンと
しては、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、
1,2-ジクロロエタンなどを用いることができる。このよ
うにして得られた三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール
錯体は酸素および湿気に対して安定であり室温保存が可
能であるうえ、アセトニトリルに対する溶解性が高いと
いう優れた特性を有する。
ール錯体は、三フッ化ホウ素エーテル錯化合物とベンズ
イミダゾールとをハロゲン化アルカン溶媒中、モル比
１：１で反応させることにより容易に得ることができ
る。この際、エーテルとしては、ジエチルエーテル、テ
トラヒドロフランなどを用いることができ、三フッ化ホ
ウ素を室温でエーテルに溶かすことによりそのエーテル
錯体を得ることができる。また、ハロゲン化アルカンと
しては、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、
1,2-ジクロロエタンなどを用いることができる。このよ
うにして得られた三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール
錯体は酸素および湿気に対して安定であり室温保存が可
能であるうえ、アセトニトリルに対する溶解性が高いと
いう優れた特性を有する。
【０００９】本発明の三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾ
ール錯体は、ホスホロアミダイト法によるヌクレオシド
の縮合によりオリゴヌクレオチドを合成する際の反応促
進剤として有効なものであるが、その他の核酸合成反応
の合成促進剤としても有効なものである。
ール錯体は、ホスホロアミダイト法によるヌクレオシド
の縮合によりオリゴヌクレオチドを合成する際の反応促
進剤として有効なものであるが、その他の核酸合成反応
の合成促進剤としても有効なものである。
【００１０】本発明の三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾ
ール錯体を用いて、ヌクレオシドホスホロアミダイトま
たはヌクレオシドホスホノアミダイトとヌクレオシドを
反応させるヌクレオシドの縮合反応について説明する。
ヌクレオシドホスホロアミダイトとヌクレオシドを反応
させるヌクレオシドの縮合反応、すなわちホスホロアミ
ダイト法オリゴヌクレオチド合成反応は前記した様に公
知の方法であり、以下の構造式２に示される必要に応じ
て、保護基で保護されたヌクレオシドのアミダイト試薬
と構造式３で示される必要に応じて、保護基で保護され
たヌクレオシドとを有機溶媒中で反応させる方法であ
る。
ール錯体を用いて、ヌクレオシドホスホロアミダイトま
たはヌクレオシドホスホノアミダイトとヌクレオシドを
反応させるヌクレオシドの縮合反応について説明する。
ヌクレオシドホスホロアミダイトとヌクレオシドを反応
させるヌクレオシドの縮合反応、すなわちホスホロアミ
ダイト法オリゴヌクレオチド合成反応は前記した様に公
知の方法であり、以下の構造式２に示される必要に応じ
て、保護基で保護されたヌクレオシドのアミダイト試薬
と構造式３で示される必要に応じて、保護基で保護され
たヌクレオシドとを有機溶媒中で反応させる方法であ
る。
【００１１】
【式２】
【００１２】
【式３】
【００１３】上記構造式２と３で示される、必要に応じ
て保護基で保護されたヌクレオシドのアミダイト試薬お
よびヌクレオシドとしては、ホスホロアミダイト法オリ
ゴヌクレオチド合成反応で用いられている公知のものが
そのまま例示されるが、それらの一部を具体的に示すと
以下の様なものである。すなわち、構造式２と３におけ
るＢ1およびＢ2が、核酸塩基または必要に応じて保護基
で保護をした核酸塩基から、ピリミジン塩基の場合には
１位の水素が、またプリン塩基の場合には９位の水素が
除去されたものであり、核酸塩基としては、例えば、チ
ミンおよびウラシルが、また保護基で保護する必要のあ
る核酸塩基としては、例えば、シトシン、アデニン、お
よびグアニンなどホスホロアミダイト法で通常使用され
るものを挙げることができる。ここで、核酸塩基の保護
基としては、シトシンの４位やアデニンの６位のＮに結
合させたアリルオキシカルボニル基、ベンジル基、フェ
ノキシアセチル基、第三ブチルフェノキシアセチル基、
グアニンの２位のＮに結合させたイソブチリル基、アリ
ルオキシカルボニル基、フェノキシアセチル基、第三ブ
チルフェノキシアセチル基など、ホスホロアミダイト法
で通常使用されるものを挙げることができる。Ｒ1〜Ｒ6
についても、下記に例示される様なホスホロアミダイト
法で通常使用されるものが適用される。Ｒ1としては、
フェニル、フェノキシ、2-クロロフェノキシ、アリルオ
キシ、2-シアノエトキシ、メトキシ、エトキシ、イソプ
ロポキシ、2-(2-ピリジル)エチル、3-(3-ピリジル)プロ
ポキシ、3-(4-ピリジル)プロポキシ、4-(2-ピリジル)ブ
トキシ、5-(2-ピリジル)ペントキシ、2-(2,2'-ビビリジ
ル)エトキシなどである。Ｒ2としては、二つあるそれぞ
れが同じか異なっていてもよくまた環状化合物であって
もよく、例えばイソプロピル、Ｏ(ＣＨ2ＣＨ2)2、メチ
ル、エチル、プロピル、フェニルなどである。Ｒ3は、
ＨまたはＯＲ7で、Ｒ7としては、アリルオキシカルボニ
ル、第三ブチルジメチルシリル、トリエチルシリル、ジ
フェニルメチルシリル、ジイソプロピルフェニルシリ
ル、メチル、フェニル、テトラヒドロピラニル、1-(メ
トキシ)-4-オキサシクロヘキシル、アセチル、ベンゾイ
ル、ピバロイル、p-トルエンスルホニルなどである。Ｒ
4としては、第三ブチルジメチルシリル、トリエチルシ
リル、ジフェニルメチルシリル、ジイソプロピルフェニ
ルシリル、メチル、フェニル、テトラヒドロピラニル、
1-(メトキシ)-4-オキサシクロヘキシル、アセチル、ベ
ンゾイル、ピバロイル、p-トルエンスルホニルなどであ
る。Ｒ5としては、アリルオキシカルボニル、ジメトキ
シトリチル、モノメトキシトリチル、第三ブチルジメチ
ルシリル、トリエチルシリル、ジフェニルメチルシリ
ル、ジイソプロピルフェニルシリル、メチル、フェニ
ル、テトラヒドロピラニル、1-(メトキシ)-4-オキサシ
クロヘキシル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、p-
トルエンスルホニルなどである。Ｒ6は、ＨまたはＯＲ8
で、Ｒ8としては、アリルオキシカルボニル、第三ブチ
ルジメチルシリル、トリエチルシリル、ジフェニルメチ
ルシリル、ジイソプロピルフェニルシリル、メチル、フ
ェニル、テトラヒドロピラニル、1-(メトキシ)-4-オキ
サシクロヘキシル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイ
ル、p-トルエンスルホニルなどである。
て保護基で保護されたヌクレオシドのアミダイト試薬お
よびヌクレオシドとしては、ホスホロアミダイト法オリ
ゴヌクレオチド合成反応で用いられている公知のものが
そのまま例示されるが、それらの一部を具体的に示すと
以下の様なものである。すなわち、構造式２と３におけ
るＢ1およびＢ2が、核酸塩基または必要に応じて保護基
で保護をした核酸塩基から、ピリミジン塩基の場合には
１位の水素が、またプリン塩基の場合には９位の水素が
除去されたものであり、核酸塩基としては、例えば、チ
ミンおよびウラシルが、また保護基で保護する必要のあ
る核酸塩基としては、例えば、シトシン、アデニン、お
よびグアニンなどホスホロアミダイト法で通常使用され
るものを挙げることができる。ここで、核酸塩基の保護
基としては、シトシンの４位やアデニンの６位のＮに結
合させたアリルオキシカルボニル基、ベンジル基、フェ
ノキシアセチル基、第三ブチルフェノキシアセチル基、
グアニンの２位のＮに結合させたイソブチリル基、アリ
ルオキシカルボニル基、フェノキシアセチル基、第三ブ
チルフェノキシアセチル基など、ホスホロアミダイト法
で通常使用されるものを挙げることができる。Ｒ1〜Ｒ6
についても、下記に例示される様なホスホロアミダイト
法で通常使用されるものが適用される。Ｒ1としては、
フェニル、フェノキシ、2-クロロフェノキシ、アリルオ
キシ、2-シアノエトキシ、メトキシ、エトキシ、イソプ
ロポキシ、2-(2-ピリジル)エチル、3-(3-ピリジル)プロ
ポキシ、3-(4-ピリジル)プロポキシ、4-(2-ピリジル)ブ
トキシ、5-(2-ピリジル)ペントキシ、2-(2,2'-ビビリジ
ル)エトキシなどである。Ｒ2としては、二つあるそれぞ
れが同じか異なっていてもよくまた環状化合物であって
もよく、例えばイソプロピル、Ｏ(ＣＨ2ＣＨ2)2、メチ
ル、エチル、プロピル、フェニルなどである。Ｒ3は、
ＨまたはＯＲ7で、Ｒ7としては、アリルオキシカルボニ
ル、第三ブチルジメチルシリル、トリエチルシリル、ジ
フェニルメチルシリル、ジイソプロピルフェニルシリ
ル、メチル、フェニル、テトラヒドロピラニル、1-(メ
トキシ)-4-オキサシクロヘキシル、アセチル、ベンゾイ
ル、ピバロイル、p-トルエンスルホニルなどである。Ｒ
4としては、第三ブチルジメチルシリル、トリエチルシ
リル、ジフェニルメチルシリル、ジイソプロピルフェニ
ルシリル、メチル、フェニル、テトラヒドロピラニル、
1-(メトキシ)-4-オキサシクロヘキシル、アセチル、ベ
ンゾイル、ピバロイル、p-トルエンスルホニルなどであ
る。Ｒ5としては、アリルオキシカルボニル、ジメトキ
シトリチル、モノメトキシトリチル、第三ブチルジメチ
ルシリル、トリエチルシリル、ジフェニルメチルシリ
ル、ジイソプロピルフェニルシリル、メチル、フェニ
ル、テトラヒドロピラニル、1-(メトキシ)-4-オキサシ
クロヘキシル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、p-
トルエンスルホニルなどである。Ｒ6は、ＨまたはＯＲ8
で、Ｒ8としては、アリルオキシカルボニル、第三ブチ
ルジメチルシリル、トリエチルシリル、ジフェニルメチ
ルシリル、ジイソプロピルフェニルシリル、メチル、フ
ェニル、テトラヒドロピラニル、1-(メトキシ)-4-オキ
サシクロヘキシル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイ
ル、p-トルエンスルホニルなどである。
【００１４】ヌクレオシドホスホロアミダイトとヌクレ
オシドを反応させるヌクレオシドの縮合反応、すなわち
ホスホロアミダイト法オリゴヌクレオチド合成反応は前
記した様に有機溶媒中で行われており、使用される溶媒
としては、アセトニトリル、プロピオニトリル、ブチロ
ニトリル等のアルキルニトリル類、ジクロロメタン、1,
1-ジクロロエタン、1,2-ジクロロエタン、トリクロロエ
タン等のハロゲン化アルキル、ジエチルエーテル、テト
ラヒドロフラン、1,2-ジメトキシエタン等のエーテル類
などであり、本発明においてもホスホロアミダイト法で
使用可能な溶媒を用いて反応させることができる。反応
は、１０℃から４０℃、好ましくは１５℃から３５℃、
さらに好ましくは２０℃から３０℃の温度下で行われ
る。反応させる際のヌクレオシドホスホロアミダイトと
ヌクレオシドのモル比は、ヌクレオシドを１とすると、
ヌクレオシドホスホロアミダイトは１乃至１０、好まし
くは１.２乃至２.０、さらに好ましくは１.５であり、
三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体の使用量も、
モル比で、ヌクレオシドを１として、１乃至３０、好ま
しくは２乃至５、さらに好ましくは３である。
オシドを反応させるヌクレオシドの縮合反応、すなわち
ホスホロアミダイト法オリゴヌクレオチド合成反応は前
記した様に有機溶媒中で行われており、使用される溶媒
としては、アセトニトリル、プロピオニトリル、ブチロ
ニトリル等のアルキルニトリル類、ジクロロメタン、1,
1-ジクロロエタン、1,2-ジクロロエタン、トリクロロエ
タン等のハロゲン化アルキル、ジエチルエーテル、テト
ラヒドロフラン、1,2-ジメトキシエタン等のエーテル類
などであり、本発明においてもホスホロアミダイト法で
使用可能な溶媒を用いて反応させることができる。反応
は、１０℃から４０℃、好ましくは１５℃から３５℃、
さらに好ましくは２０℃から３０℃の温度下で行われ
る。反応させる際のヌクレオシドホスホロアミダイトと
ヌクレオシドのモル比は、ヌクレオシドを１とすると、
ヌクレオシドホスホロアミダイトは１乃至１０、好まし
くは１.２乃至２.０、さらに好ましくは１.５であり、
三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体の使用量も、
モル比で、ヌクレオシドを１として、１乃至３０、好ま
しくは２乃至５、さらに好ましくは３である。
【００１５】
【作用】ホスホロアミダイトとヌクレオシドの縮合反応
(０.１Ｍ溶液、室温）における反応促進能力を公知の1H
-テトラゾールおよび5-(p-ニトロフェニル)-1H-テトラ
ゾールと比較すると、例えば、本発明の促進剤が反応を
完結させる時間が６分であるのに対し公知のものはそれ
ぞれ９０分、３０分要するのであり、本発明の促進剤は
非常に優れた反応促進作用を示す。また、本発明の促進
剤は、一般的なホスホロアミダイトだけでなく、反応性
の低いフェニルホスホロアミダイト等を用いた縮合反応
においても優れた反応促進作用を示すものである。
(０.１Ｍ溶液、室温）における反応促進能力を公知の1H
-テトラゾールおよび5-(p-ニトロフェニル)-1H-テトラ
ゾールと比較すると、例えば、本発明の促進剤が反応を
完結させる時間が６分であるのに対し公知のものはそれ
ぞれ９０分、３０分要するのであり、本発明の促進剤は
非常に優れた反応促進作用を示す。また、本発明の促進
剤は、一般的なホスホロアミダイトだけでなく、反応性
の低いフェニルホスホロアミダイト等を用いた縮合反応
においても優れた反応促進作用を示すものである。
【００１６】
【実施例】以下実施例に基づいてより詳細に説明する。 １. 三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体の合成 ベンズイミダゾール(１０g、８０.４６mmol)の塩化メチ
レン(５００mL)溶液に三フッ化ホウ素エチルエーテル錯
化合物(１０.４mL、８０.４６mmol)を滴下し、室温で１
０分攪拌した。生成した結晶を濾別し得られた結晶を塩
化メチレン(２L)で再結晶し、無色の結晶１５.２g(収率
９６％)を得た。下記の分析結果より該結晶は目的とす
る三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体であった。 融点：１３５−１３６℃ ＦＴＩＲ（ＫＢr)：３３０４、３１５６、２８６５、１
７９４、１６１８、１５４３、１５０３、１４３９、１
３２３、１２９４、１２６０、１１４６、１０８２、１
０３８、９１０、７４８、６８１、６１７cm-1 1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）：７.６５−７.９１(m,4H,aro
matic protons)、８.６５(s,1H,H-2)、８.９５(s,1H,N
H)ppm11 Ｂ ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）：１６.９５(q,J=11.7Hz)ppm (11Ｂ ＮＭＲの基準はＢ(ＯＣＨ3)3を０ppmにした。）13 Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）：１１４.５、１１５.４、１
１７.２、１２６.３、１２６.７、１２８.０、１４１.
２ppm 元素分析：実測値Ｃ＝４５.２１、Ｈ＝３.１９、Ｎ＝１
４.９７ 計算値Ｃ＝４５.２１、Ｈ＝３.２５、Ｎ＝１５.０７ 溶解性(対アセトニトリル)：２mol／L (1H-テトラゾール：０.５mol／L) (5-(p-ニトロフェニル)-1H-テトラゾール：０.１３mol
／L)
レン(５００mL)溶液に三フッ化ホウ素エチルエーテル錯
化合物(１０.４mL、８０.４６mmol)を滴下し、室温で１
０分攪拌した。生成した結晶を濾別し得られた結晶を塩
化メチレン(２L)で再結晶し、無色の結晶１５.２g(収率
９６％)を得た。下記の分析結果より該結晶は目的とす
る三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体であった。 融点：１３５−１３６℃ ＦＴＩＲ（ＫＢr)：３３０４、３１５６、２８６５、１
７９４、１６１８、１５４３、１５０３、１４３９、１
３２３、１２９４、１２６０、１１４６、１０８２、１
０３８、９１０、７４８、６８１、６１７cm-1 1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）：７.６５−７.９１(m,4H,aro
matic protons)、８.６５(s,1H,H-2)、８.９５(s,1H,N
H)ppm11 Ｂ ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）：１６.９５(q,J=11.7Hz)ppm (11Ｂ ＮＭＲの基準はＢ(ＯＣＨ3)3を０ppmにした。）13 Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）：１１４.５、１１５.４、１
１７.２、１２６.３、１２６.７、１２８.０、１４１.
２ppm 元素分析：実測値Ｃ＝４５.２１、Ｈ＝３.１９、Ｎ＝１
４.９７ 計算値Ｃ＝４５.２１、Ｈ＝３.２５、Ｎ＝１５.０７ 溶解性(対アセトニトリル)：２mol／L (1H-テトラゾール：０.５mol／L) (5-(p-ニトロフェニル)-1H-テトラゾール：０.１３mol
／L)
【００１７】２．ホスホロアミダイト類の合成 a) 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミジン 3'-(2-ク
ロロフェニル) N,N-ジイソプロピルホスホロアミダイト
の合成 下記構造式４で示される標記ホスホロアミダイトを以下
の手順で合成した。なお、下記構造式においてＤＭＴr
はジメトキシトリチル基、Ｔhはチミジン構造であるこ
とを示す。
ロロフェニル) N,N-ジイソプロピルホスホロアミダイト
の合成 下記構造式４で示される標記ホスホロアミダイトを以下
の手順で合成した。なお、下記構造式においてＤＭＴr
はジメトキシトリチル基、Ｔhはチミジン構造であるこ
とを示す。
【００１８】
【式４】
【００１９】三塩化リン(３４mL、０.３８９mol)に対し
て−７８℃で2-クロロフェノール(５０g、０.３８９mo
l)およびトリエチルアミン(５４mL、０.３８９mol)のジ
エチルエーテル(５０mL)溶液を滴下し、一晩かけて室温
まで昇温した。生じた塩酸トリエチルアミン塩を無水条
件下で濾別した後、減圧下ジエチルエーテルを留去し
た。得られた粗生成物を真空蒸留に供し、無色液体(沸
点７３℃／０.８mmHg)のジクロロ(2-クロロフェノキシ)
ホスフィン３９.５g(０.２３３mol／収率６０％)を得
た。ジクロロ(2-クロロフェノキシ)ホスフィン(４１.７
g、０.２４６mol)に対してジイソプロピルアミン(４９.
８g、０.４９２mol)ジエチルエーテル(５０mL)溶液を０
℃、１時間かけて滴下し、室温まで昇温した。生じた塩
酸ジイソプロピルアミン塩を無水条件下で濾別した後、
減圧下ジエチルエーテルを留去した。得られた粗生成物
を真空蒸留に供し、無色液体(沸点１２０℃／１.０mmH
g)のクロロ(2-クロロフェノキシ)ジイソプロピルアミノ
ホスフィン３５.９g(０.１２８mol／収率５２％)を得
た。クロロ(2-クロロフェノキシ)ジイソプロピルアミノ
ホスフィンのＮＭＲの測定結果は以下のとおりであっ
た。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１.１７−１.４０(m,12H,CH
(CH 3)2x2)、３.８０−４.０５(m,2H,CH(CH3)2x2)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１７２.５ppm (標準は８５
％リン酸) 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチルチミジン(２４５mg、０.
４５mmol)の塩化メチレン(５mL)懸濁液にジイソプロピ
ルエチルアミン(０.３５mL、２mmol)およびクロロ(2-ク
ロロフェノキシ)ジイソプロピルアミノホスフィン(１４
８mg、０.５２８mmol)を加え、室温で１２分攪拌した。
反応溶液を塩化メチレン(５０mL)で希釈し、飽和食塩水
(２０mL)で洗浄し、乾燥した。濃縮した後、得られた粗
生成物(３５０mg)をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
(６g、ヘキサン／酢酸エチル／ジイソプロピルアミン＝
１／１／痕跡量)で精製し、目的とする5'-O-p,p'-ジメ
トキシトリチル-チミジン 3'-(2-クロロフェニル) N,N-
ジイソプロピルホスホロアミダイト３１８mg(０.３９６
mmol／収率８８％)を得た。 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミジン 3'-(2-クロロ
フェニル) N,N-ジイソプロピルホスホロアミダイトの特
性 形状：無色アモルファス ＦＴＩＲ（ＫＢr)：３１８４、３０６３、２９６９、２
８３８、１６９４、１６０９、１５８４、１５１０、１
４７８、１３９９、１３６６、１２５２、１２００、１
１７９、１１２７、１０８０、１０３２cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ）：λmax ２３７nm(sh)、２６３nm(ε
=13000)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１.１２−１.２８(m,12H,CH
(CH 3)2x2) 、１.４３(s,3H,CH3)、２.３２−２.３８(m,
1H,H-2')、２.５０−２.５７(m,1H,H-2')、３.３２−
３.３６(m,1H,H-5')、３.４２−３.４７(m,1H,H-5')、
３.６９２−３.８３(m,2H,CH(CH3)2x2)、３.７８(s,6H,
OCH3x2)、４.２２−４.２３(dd,J=2.0,8.8Hz,1H,H-
4')、４.８４−４.８７(m,1H,H-3')、６.３８−６.４３
(m,1H,H-1')、６.７６−６.８３(m,4H, protons ortho
to OCH3 of DMTr)、６.８９−７.４１(m,13H,aromatic
protons)、７.５７、７.６２(two singles,1H,H-6)、
８.２９(br s,1H,NHCO)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１４８.１、１４８.５ppm
て−７８℃で2-クロロフェノール(５０g、０.３８９mo
l)およびトリエチルアミン(５４mL、０.３８９mol)のジ
エチルエーテル(５０mL)溶液を滴下し、一晩かけて室温
まで昇温した。生じた塩酸トリエチルアミン塩を無水条
件下で濾別した後、減圧下ジエチルエーテルを留去し
た。得られた粗生成物を真空蒸留に供し、無色液体(沸
点７３℃／０.８mmHg)のジクロロ(2-クロロフェノキシ)
ホスフィン３９.５g(０.２３３mol／収率６０％)を得
た。ジクロロ(2-クロロフェノキシ)ホスフィン(４１.７
g、０.２４６mol)に対してジイソプロピルアミン(４９.
８g、０.４９２mol)ジエチルエーテル(５０mL)溶液を０
℃、１時間かけて滴下し、室温まで昇温した。生じた塩
酸ジイソプロピルアミン塩を無水条件下で濾別した後、
減圧下ジエチルエーテルを留去した。得られた粗生成物
を真空蒸留に供し、無色液体(沸点１２０℃／１.０mmH
g)のクロロ(2-クロロフェノキシ)ジイソプロピルアミノ
ホスフィン３５.９g(０.１２８mol／収率５２％)を得
た。クロロ(2-クロロフェノキシ)ジイソプロピルアミノ
ホスフィンのＮＭＲの測定結果は以下のとおりであっ
た。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１.１７−１.４０(m,12H,CH
(CH 3)2x2)、３.８０−４.０５(m,2H,CH(CH3)2x2)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１７２.５ppm (標準は８５
％リン酸) 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチルチミジン(２４５mg、０.
４５mmol)の塩化メチレン(５mL)懸濁液にジイソプロピ
ルエチルアミン(０.３５mL、２mmol)およびクロロ(2-ク
ロロフェノキシ)ジイソプロピルアミノホスフィン(１４
８mg、０.５２８mmol)を加え、室温で１２分攪拌した。
反応溶液を塩化メチレン(５０mL)で希釈し、飽和食塩水
(２０mL)で洗浄し、乾燥した。濃縮した後、得られた粗
生成物(３５０mg)をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
(６g、ヘキサン／酢酸エチル／ジイソプロピルアミン＝
１／１／痕跡量)で精製し、目的とする5'-O-p,p'-ジメ
トキシトリチル-チミジン 3'-(2-クロロフェニル) N,N-
ジイソプロピルホスホロアミダイト３１８mg(０.３９６
mmol／収率８８％)を得た。 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミジン 3'-(2-クロロ
フェニル) N,N-ジイソプロピルホスホロアミダイトの特
性 形状：無色アモルファス ＦＴＩＲ（ＫＢr)：３１８４、３０６３、２９６９、２
８３８、１６９４、１６０９、１５８４、１５１０、１
４７８、１３９９、１３６６、１２５２、１２００、１
１７９、１１２７、１０８０、１０３２cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ）：λmax ２３７nm(sh)、２６３nm(ε
=13000)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１.１２−１.２８(m,12H,CH
(CH 3)2x2) 、１.４３(s,3H,CH3)、２.３２−２.３８(m,
1H,H-2')、２.５０−２.５７(m,1H,H-2')、３.３２−
３.３６(m,1H,H-5')、３.４２−３.４７(m,1H,H-5')、
３.６９２−３.８３(m,2H,CH(CH3)2x2)、３.７８(s,6H,
OCH3x2)、４.２２−４.２３(dd,J=2.0,8.8Hz,1H,H-
4')、４.８４−４.８７(m,1H,H-3')、６.３８−６.４３
(m,1H,H-1')、６.７６−６.８３(m,4H, protons ortho
to OCH3 of DMTr)、６.８９−７.４１(m,13H,aromatic
protons)、７.５７、７.６２(two singles,1H,H-6)、
８.２９(br s,1H,NHCO)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１４８.１、１４８.５ppm
【００２０】同様の手順にて下記構造式５で示されるホ
スホロアミダイトを収率８５％で合成した。
スホロアミダイトを収率８５％で合成した。
【００２１】
【式５】
【００２２】b) 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミ
ジン 3'-(2-クロロフェニル) モルホリノホスホロアミ
ダイトの合成 下記構造式６で示される標記ホスホロアミダイトを以下
の手順で合成した。なお、下記構造式においてＤＭＴr
はジメトキシトリチル基、Ｔhはチミジン構造であるこ
とを示す。
ジン 3'-(2-クロロフェニル) モルホリノホスホロアミ
ダイトの合成 下記構造式６で示される標記ホスホロアミダイトを以下
の手順で合成した。なお、下記構造式においてＤＭＴr
はジメトキシトリチル基、Ｔhはチミジン構造であるこ
とを示す。
【００２３】
【式６】
【００２４】1H-テトラゾール(５６８mg、８.１mmol)、
モルホリン(０.７８mL、８.９mmol)、2-クロロフェノー
ル(１.６８mL)のアセトニトリル(１０mL)溶液に5'-O-p,
p'-ジメトキシトリチル-チミジン 3'-ビスモルホリダイ
ト(１２.１mg、１６.２mmol) のアセトニトリル(１０m
L)溶液をキャニュラーを通して加え、室温で３０分攪拌
した。反応溶液を酢酸エチル(１５０mL)で希釈し、飽和
食塩水(１００mL)で洗浄し、乾燥した。濃縮した後、得
られた粗生成物(１３g)をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィ(１５０g、ヘキサン／酢酸エチル／モルホリン＝
１／２／痕跡量) で精製し、目的とする5'-O-p,p'-ジメ
トキシトリチル-チミジン 3'-(2-クロロフェニル) モル
ホリノホスホロアミダイト１１.２５g(１４.３mmol／収
率８８％) を得た。 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミジン 3'-(2-クロロ
フェニル) モルホリノホスホロアミダイトの特性 形状：無色アモルファス ＦＴＩＲ（ＫＢr)：３１６７、３０６１、２９５５、２
８３９、１６９１、１６０８、１５８４、１５１０、１
４７６、１３６８、１２５４、１１７７、１１１１、１
０３４cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ）：λmax ２３７nm(sh)、２６９nm(ε
=18800)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１.４３(s,3H,CH3)、２.３１
−２.４１(m,1H,H-2')、２.４８−２.６６(m,1H,H-
2')、３.１０−３.２６(m,4H,N(CH 2CH2)2O)、３.３４(d
d,J=3.7,10.6Hz,1H,H-5')、３.４２−３.６３(m,5H,H-
5',N(CH2CH2 )2O)、３.７６(s,6H,OCH2x2)、４.１７−
４.３０(m,1H,H-4')、４.８２−５.０１(m,1H,H-3')、
６.３９−６.４８(m,1H,H-1')、６.６５−６.８６(m,4
H, protons ortho to OCH3 of DMTr)、６.９５−７.４
０(m,13H,aromatic protons)、７.５８、７.６３(two s
inglets,1H,H-6) 、８.９−８.１(br s,1H,NHCO)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１４０.９、１４１.４ppm
モルホリン(０.７８mL、８.９mmol)、2-クロロフェノー
ル(１.６８mL)のアセトニトリル(１０mL)溶液に5'-O-p,
p'-ジメトキシトリチル-チミジン 3'-ビスモルホリダイ
ト(１２.１mg、１６.２mmol) のアセトニトリル(１０m
L)溶液をキャニュラーを通して加え、室温で３０分攪拌
した。反応溶液を酢酸エチル(１５０mL)で希釈し、飽和
食塩水(１００mL)で洗浄し、乾燥した。濃縮した後、得
られた粗生成物(１３g)をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィ(１５０g、ヘキサン／酢酸エチル／モルホリン＝
１／２／痕跡量) で精製し、目的とする5'-O-p,p'-ジメ
トキシトリチル-チミジン 3'-(2-クロロフェニル) モル
ホリノホスホロアミダイト１１.２５g(１４.３mmol／収
率８８％) を得た。 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミジン 3'-(2-クロロ
フェニル) モルホリノホスホロアミダイトの特性 形状：無色アモルファス ＦＴＩＲ（ＫＢr)：３１６７、３０６１、２９５５、２
８３９、１６９１、１６０８、１５８４、１５１０、１
４７６、１３６８、１２５４、１１７７、１１１１、１
０３４cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ）：λmax ２３７nm(sh)、２６９nm(ε
=18800)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１.４３(s,3H,CH3)、２.３１
−２.４１(m,1H,H-2')、２.４８−２.６６(m,1H,H-
2')、３.１０−３.２６(m,4H,N(CH 2CH2)2O)、３.３４(d
d,J=3.7,10.6Hz,1H,H-5')、３.４２−３.６３(m,5H,H-
5',N(CH2CH2 )2O)、３.７６(s,6H,OCH2x2)、４.１７−
４.３０(m,1H,H-4')、４.８２−５.０１(m,1H,H-3')、
６.３９−６.４８(m,1H,H-1')、６.６５−６.８６(m,4
H, protons ortho to OCH3 of DMTr)、６.９５−７.４
０(m,13H,aromatic protons)、７.５８、７.６３(two s
inglets,1H,H-6) 、８.９−８.１(br s,1H,NHCO)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１４０.９、１４１.４ppm
【００２５】同様の手順にて下記構造式７で示されるホ
スホロアミダイトを収率５８％で合成した。
スホロアミダイトを収率５８％で合成した。
【００２６】
【式７】
【００２７】c) N6-アリルオキシカルボニル-2'-O-t-
ブチルジメチルシリル-5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-
アデノシン 3'-アリルN,N-ジイソプロピルホスホロアミ
ダイトの合成 下記構造式８で示される標記ホスホロアミダイトを以下
の手順で合成した。なお、下記構造式においてＴＢＤＭ
Ｓはt-ブチルジメチルシリル基、ＤＭＴrはジメトキシ
トリチル基、ＡＤAOCはN6-アリルオキシカルボニルアデ
ノシン構造であることをを示す。
ブチルジメチルシリル-5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-
アデノシン 3'-アリルN,N-ジイソプロピルホスホロアミ
ダイトの合成 下記構造式８で示される標記ホスホロアミダイトを以下
の手順で合成した。なお、下記構造式においてＴＢＤＭ
Ｓはt-ブチルジメチルシリル基、ＤＭＴrはジメトキシ
トリチル基、ＡＤAOCはN6-アリルオキシカルボニルアデ
ノシン構造であることをを示す。
【００２８】
【式８】
【００２９】2'-O-t- ブチルジメチルシリル-5'-O-p,p'
-ジメトキシトリチル-アデノシン(３.０g、４.３９mmo
l)のテトラヒドロフラン(ＴＨＦ)(２０mL)溶液にトリメ
チルシリルイミダゾール(１.２７mL、６.５９mmol)を加
え、室温で１０分攪拌した。反応溶液を酢酸エチル(１
５０mL)で希釈し、飽和食塩水(１００mL)で洗浄し、乾
燥した。濃縮した後得られたトリメチルシリル体のＴＨ
Ｆ(２０mL)溶液に１.６２N塩化tert-ブチルマグネシウ
ム(５.５mL、８.７８mmol)ＴＨＦ溶液を滴下し、室温で
３０分攪拌した。アリルオキシカルボニル-1-ヒドロキ
シベンゾトリアゾール(１.３４g、６.９５mmol)ＴＨＦ
溶液を滴下し室温で３０分攪拌した。反応容器にメタノ
ール(５mL)を加え、酢酸エチル(１５０mL)で希釈し、飽
和塩化アンモニウム水溶液(１００mL)、飽和炭酸水素ナ
トリウム水溶液(１００mL)、飽和食塩水(１００mL)で洗
浄し、乾燥した。濃縮した後得られた粗アリルオキシカ
ルボニル体(４.２g)を１Mクエン酸メタノール溶液(２０
mL、２０mmol)で３０分処理し、反応溶液に水(５０mL)
を加え、酢酸エチル(１５０mL)で抽出し、飽和塩化アン
モニウム水溶液(１００mL)、飽和炭酸水素ナトリウム水
溶液(１００mL)、飽和食塩水(１００mL)で洗浄し、乾燥
した。濃縮した後得られた粗生成物(３.８g)をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィ(８０g、ヘキサン／酢酸エチ
ル／トリエチルアミン＝１／２／痕跡量)で精製し、目
的とする無色アモルファスのN6-アリルオキシカルボニ
ル-2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-p,p'-ジメトキ
シトリチル-アデノシン１.６０g(２.５０mmol／収率５
７％)を得た。 N6-アリルオキシカルボニル-2'-O-t-ブチルジメチルシ
リル-5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-アデノシンの特性 ＴＬＣ：Ｒf=０.４３(ヘキサン／酢酸エチル＝１／５) ＦＴＩＲ（ＫＢr)：３２６６、２９３２、２８５９、２
０４７、１７６１、１６１３、１５１０、１４６６、１
３０４、１２５４cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ）：λmax ２３５nm(ε=21200) 、２６
７nm(ε=15700)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：０.０３(s,3H,(CH3)2Si)、
０.１０(s,3H,(CH3)2Si)、０.９０(s,9H,(CH3)3C)、３.
２７(dd,J=3.7,10.6Hz,1H,H-5')、３.５３(dd,J=3.7,1
0.9Hz,1H,H-5')、３.７９(s,6H,OCH3x2)、４.１５−４.
３８(m,2H,H-3'andH-4')、４.７１(d,J=5.7Hz,2H,CH2=C
HCH 2)、４.９５(t,J=4.9Hz,1H,H-2')、５.３０(dd,J=1.
0,10.2Hz,1H,cis-CH 2=CHCH2)、５.４２(dd,J=1.0,17.2H
z,1H,trans-CH2=CHCH2)、５.８２−６.０３(m,3H,H-1'a
ndCH2=CHCH2)、６.７３(d,J=7.6Hz,4H, protons ortho
to OCH3 of DMTr)、７.１５−７.４５(m,9H,aromatic p
rotons of DMTr)、８.０５(s,1H,H-2)、８.６１(s,1H,H
-8)ppm N6-アリルオキシカルボニル-2'-O-t-ブチルジメチルシ
リル-5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-アデノシン(３１
３mg、０.４８８mmol)のアセトニトリル(２mL)溶液に1H
-テトラゾール(１７mg、０.２４４mmol)、ジイソプロピ
ルアミン(３８μL、０.２６９mmol)を加え、室温で１０
分攪拌した後、アリルオキシビス(ジイソプロピルアミ
ノ)ホスフィン(２２５μL)を加え、室温で３０分攪拌し
た。反応溶液を酢酸エチル(１００mL)で希釈し、飽和食
塩水(２０mL)で洗浄し、乾燥した。濃縮した後、得られ
た粗生成物(４４０mg)をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィ(１０g、ヘキサン／酢酸エチル／ジイソプロピルア
ミン＝２／１／痕跡量)で精製し、目的とするN6-アリル
オキシカルボニル-2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-
p,p'-ジメトキシトリチル-アデノシン 3'-アリルN,N-ジ
イソプロピルホスホロアミダイト４０４mg(０.４９mmol
／収率８８％)を得た。 N6-アリルオキシカルボニル-2'-O-t-ブチルジメチルシ
リル-5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-アデノシン 3'-ア
リルN,N-ジイソプロピルホスホロアミダイトの特性 形状：無色アモルファス ＴＬＣ：Ｒf=０.４８(ヘキサン／酢酸エチル＝１／１) ＦＴＩＲ（ＫＢr)：２９６４、２０４７、１７６５、１
６１１、１５１０、１４６４、１３６４、１３０４、１
２５２cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ）：λmax ２３６nm(ε=16500) 、２６
７nm(ε=14100)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：０.０４(s,3H,(CH3)2Si)、
０.１１(s,3H,(CH3)2Si)、０.９１(s,9H,(CH3)3C)、１.
２３−１.５１(m,12H,CH(CH 3)2x2) 、３.５３−３.６２
(m,1H,H-5')、３.７２−３.９０(m,3H,H-5',CH(CH3)2x
2)、３.９２(s,6H,OCH3x2)、４.１０−４.４６(m,2H,CH
2=CHCH 2O)、４.５７−４.７１(m,2H,H-3'and H-4') 、
４.７１(d,J=5.7Hz,2H,CH2=CHCH2)、４.９８(t,J=4.9H
z,1H,H-2')、５.１７−５.５５(m,5H,CH2=CHCH 2OCO,cis
-CH 2=CHCH2OCO,CH 2=CHCH2O)、５.６３(dd,J=1.0,17.4H
z,1H,trans-CH 2=CHCH2OCO)、５.８２−６.３４(m,3H,H-
1'and CH2=CHCH2x2)、７.０１(d,J=7.6Hz,4H, protons
ortho to OCH3 of DMTr)、７.４１−７.７３(m,9H,arom
atic protons of DMTr)、８.３７、８.３９(two single
ts,1H,H-2)、８.４５(br s,1H,NHCO)、８.８５、８.８
７(two singlets,1H,H-8)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１４８.９、１５１.１ppm
-ジメトキシトリチル-アデノシン(３.０g、４.３９mmo
l)のテトラヒドロフラン(ＴＨＦ)(２０mL)溶液にトリメ
チルシリルイミダゾール(１.２７mL、６.５９mmol)を加
え、室温で１０分攪拌した。反応溶液を酢酸エチル(１
５０mL)で希釈し、飽和食塩水(１００mL)で洗浄し、乾
燥した。濃縮した後得られたトリメチルシリル体のＴＨ
Ｆ(２０mL)溶液に１.６２N塩化tert-ブチルマグネシウ
ム(５.５mL、８.７８mmol)ＴＨＦ溶液を滴下し、室温で
３０分攪拌した。アリルオキシカルボニル-1-ヒドロキ
シベンゾトリアゾール(１.３４g、６.９５mmol)ＴＨＦ
溶液を滴下し室温で３０分攪拌した。反応容器にメタノ
ール(５mL)を加え、酢酸エチル(１５０mL)で希釈し、飽
和塩化アンモニウム水溶液(１００mL)、飽和炭酸水素ナ
トリウム水溶液(１００mL)、飽和食塩水(１００mL)で洗
浄し、乾燥した。濃縮した後得られた粗アリルオキシカ
ルボニル体(４.２g)を１Mクエン酸メタノール溶液(２０
mL、２０mmol)で３０分処理し、反応溶液に水(５０mL)
を加え、酢酸エチル(１５０mL)で抽出し、飽和塩化アン
モニウム水溶液(１００mL)、飽和炭酸水素ナトリウム水
溶液(１００mL)、飽和食塩水(１００mL)で洗浄し、乾燥
した。濃縮した後得られた粗生成物(３.８g)をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィ(８０g、ヘキサン／酢酸エチ
ル／トリエチルアミン＝１／２／痕跡量)で精製し、目
的とする無色アモルファスのN6-アリルオキシカルボニ
ル-2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-p,p'-ジメトキ
シトリチル-アデノシン１.６０g(２.５０mmol／収率５
７％)を得た。 N6-アリルオキシカルボニル-2'-O-t-ブチルジメチルシ
リル-5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-アデノシンの特性 ＴＬＣ：Ｒf=０.４３(ヘキサン／酢酸エチル＝１／５) ＦＴＩＲ（ＫＢr)：３２６６、２９３２、２８５９、２
０４７、１７６１、１６１３、１５１０、１４６６、１
３０４、１２５４cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ）：λmax ２３５nm(ε=21200) 、２６
７nm(ε=15700)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：０.０３(s,3H,(CH3)2Si)、
０.１０(s,3H,(CH3)2Si)、０.９０(s,9H,(CH3)3C)、３.
２７(dd,J=3.7,10.6Hz,1H,H-5')、３.５３(dd,J=3.7,1
0.9Hz,1H,H-5')、３.７９(s,6H,OCH3x2)、４.１５−４.
３８(m,2H,H-3'andH-4')、４.７１(d,J=5.7Hz,2H,CH2=C
HCH 2)、４.９５(t,J=4.9Hz,1H,H-2')、５.３０(dd,J=1.
0,10.2Hz,1H,cis-CH 2=CHCH2)、５.４２(dd,J=1.0,17.2H
z,1H,trans-CH2=CHCH2)、５.８２−６.０３(m,3H,H-1'a
ndCH2=CHCH2)、６.７３(d,J=7.6Hz,4H, protons ortho
to OCH3 of DMTr)、７.１５−７.４５(m,9H,aromatic p
rotons of DMTr)、８.０５(s,1H,H-2)、８.６１(s,1H,H
-8)ppm N6-アリルオキシカルボニル-2'-O-t-ブチルジメチルシ
リル-5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-アデノシン(３１
３mg、０.４８８mmol)のアセトニトリル(２mL)溶液に1H
-テトラゾール(１７mg、０.２４４mmol)、ジイソプロピ
ルアミン(３８μL、０.２６９mmol)を加え、室温で１０
分攪拌した後、アリルオキシビス(ジイソプロピルアミ
ノ)ホスフィン(２２５μL)を加え、室温で３０分攪拌し
た。反応溶液を酢酸エチル(１００mL)で希釈し、飽和食
塩水(２０mL)で洗浄し、乾燥した。濃縮した後、得られ
た粗生成物(４４０mg)をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィ(１０g、ヘキサン／酢酸エチル／ジイソプロピルア
ミン＝２／１／痕跡量)で精製し、目的とするN6-アリル
オキシカルボニル-2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-
p,p'-ジメトキシトリチル-アデノシン 3'-アリルN,N-ジ
イソプロピルホスホロアミダイト４０４mg(０.４９mmol
／収率８８％)を得た。 N6-アリルオキシカルボニル-2'-O-t-ブチルジメチルシ
リル-5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-アデノシン 3'-ア
リルN,N-ジイソプロピルホスホロアミダイトの特性 形状：無色アモルファス ＴＬＣ：Ｒf=０.４８(ヘキサン／酢酸エチル＝１／１) ＦＴＩＲ（ＫＢr)：２９６４、２０４７、１７６５、１
６１１、１５１０、１４６４、１３６４、１３０４、１
２５２cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ）：λmax ２３６nm(ε=16500) 、２６
７nm(ε=14100)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：０.０４(s,3H,(CH3)2Si)、
０.１１(s,3H,(CH3)2Si)、０.９１(s,9H,(CH3)3C)、１.
２３−１.５１(m,12H,CH(CH 3)2x2) 、３.５３−３.６２
(m,1H,H-5')、３.７２−３.９０(m,3H,H-5',CH(CH3)2x
2)、３.９２(s,6H,OCH3x2)、４.１０−４.４６(m,2H,CH
2=CHCH 2O)、４.５７−４.７１(m,2H,H-3'and H-4') 、
４.７１(d,J=5.7Hz,2H,CH2=CHCH2)、４.９８(t,J=4.9H
z,1H,H-2')、５.１７−５.５５(m,5H,CH2=CHCH 2OCO,cis
-CH 2=CHCH2OCO,CH 2=CHCH2O)、５.６３(dd,J=1.0,17.4H
z,1H,trans-CH 2=CHCH2OCO)、５.８２−６.３４(m,3H,H-
1'and CH2=CHCH2x2)、７.０１(d,J=7.6Hz,4H, protons
ortho to OCH3 of DMTr)、７.４１−７.７３(m,9H,arom
atic protons of DMTr)、８.３７、８.３９(two single
ts,1H,H-2)、８.４５(br s,1H,NHCO)、８.８５、８.８
７(two singlets,1H,H-8)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１４８.９、１５１.１ppm
【００３０】d) 2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-
p,p'-ジメトキシトリチルウリジン 3'-アリルN,N-ジイ
ソプロピルホスホロアミダイトの合成 下記構造式９で示される標記ホスホロアミダイトを以下
の手順で合成した。なお、下記構造式においてＴＢＤＭ
Ｓはt-ブチルジメチルシリル基、ＤＭＴrはジメトキシ
トリチル基、Ｕrはウリジン構造であることを示す。
p,p'-ジメトキシトリチルウリジン 3'-アリルN,N-ジイ
ソプロピルホスホロアミダイトの合成 下記構造式９で示される標記ホスホロアミダイトを以下
の手順で合成した。なお、下記構造式においてＴＢＤＭ
Ｓはt-ブチルジメチルシリル基、ＤＭＴrはジメトキシ
トリチル基、Ｕrはウリジン構造であることを示す。
【００３１】
【式９】
【００３２】2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-p,p'-
ジメトキシトリチルウリジン(１.６g、２.５２mmol)の
アセトニトリル(２mL)溶液に1H-テトラゾール(８９mg、
１.２７mmol)、ジイソプロピルアミン(２００μL、１.
４０mmol)を加え、室温で１０分攪拌した後、アリルオ
キシビス(ジイソプロピルアミノ)ホスフィン(０.９４m
L)を加え、室温で３０分攪拌した。反応溶液を酢酸エチ
ル(１００mL)で希釈し、飽和食塩水(１００mL)で洗浄
し、乾燥した。濃縮した後、得られた粗生成物(１.９g)
をシリカゲルカラムクロマトグラフィ(４０g、ヘキサン
／酢酸エチル／ジイソプロピルアミン＝２／１／痕跡
量)で精製し、目的とする2'-O-t-ブチルジメチルシリル
-5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-ウリジン 3'-アリルN,
N-ジイソプロピルホスホロアミダイト１.７７g(２.０９
mmol／収率８３％)を得た。2'-O-t-ブチルジメチルシリ
ル-5'-O-p,p'-ジメトキシトリチルウリジン 3'-アリル
N,N-ジイソプロピルホスホロアミダイトの特性 形状：無色アモルファス ＴＬＣ：Ｒf=０.４２(ヘキサン／酢酸エチル＝１／１) ＦＴＩＲ（ＫＢr)：３１９２、３０６１、２９６５、２
９３２、２８５８、１６９６、１６１１、１５１０、１
４６０、１３７９、１３０２、１２５４、１１８２、１
０３２cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ）：λmax ２３１nm(ε=26500) 、２６
３nm(ε=16900)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：０.０５(s,3H,(CH3)2Si)、
０.１２(s,3H,(CH3)2Si)、０.９１−１.１２(m,9H,(C
H3)3C)、３.５３−３.６２(m,2H,H-5',5")、３.９２(s,
6H,OCH3x2)、４.１０−４.４６(m,2H,CH2=CHCH 2O)、４.
５７−４.７１(m,2H,H-3'and H-4') 、４.７１(d,J=5.7
Hz,2H,CH2=CHCH 2)、４.９８(t,J=4.9Hz,1H,H-2')、５.
１７−５.５５(m,5H,CH2=CHCH 2OCO,cis-CH 2=CHCH2OCO,C
H 2=CHC2O)、５.６３(dd,J=1.0,17.4Hz,1H,trans-CH 2=CH
CH2OCO)、５.８２−６.３４(m,3H,H-1'and CH2=CHCH 2x
2)、７.０１(d,J=7.6Hz,4H, protons ortho to OCH3of
DMTr)、７.４１−７.７３(m,9H,aromatic protons of D
MTr)、８.３７、８.３９(twosinglets,1H,H-2)、８.４
５(br s,1H,NHCO)、８.８５、８.８７(two singlets,1
H,H-8)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１４８.５、１４９.７ppm
ジメトキシトリチルウリジン(１.６g、２.５２mmol)の
アセトニトリル(２mL)溶液に1H-テトラゾール(８９mg、
１.２７mmol)、ジイソプロピルアミン(２００μL、１.
４０mmol)を加え、室温で１０分攪拌した後、アリルオ
キシビス(ジイソプロピルアミノ)ホスフィン(０.９４m
L)を加え、室温で３０分攪拌した。反応溶液を酢酸エチ
ル(１００mL)で希釈し、飽和食塩水(１００mL)で洗浄
し、乾燥した。濃縮した後、得られた粗生成物(１.９g)
をシリカゲルカラムクロマトグラフィ(４０g、ヘキサン
／酢酸エチル／ジイソプロピルアミン＝２／１／痕跡
量)で精製し、目的とする2'-O-t-ブチルジメチルシリル
-5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-ウリジン 3'-アリルN,
N-ジイソプロピルホスホロアミダイト１.７７g(２.０９
mmol／収率８３％)を得た。2'-O-t-ブチルジメチルシリ
ル-5'-O-p,p'-ジメトキシトリチルウリジン 3'-アリル
N,N-ジイソプロピルホスホロアミダイトの特性 形状：無色アモルファス ＴＬＣ：Ｒf=０.４２(ヘキサン／酢酸エチル＝１／１) ＦＴＩＲ（ＫＢr)：３１９２、３０６１、２９６５、２
９３２、２８５８、１６９６、１６１１、１５１０、１
４６０、１３７９、１３０２、１２５４、１１８２、１
０３２cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ）：λmax ２３１nm(ε=26500) 、２６
３nm(ε=16900)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：０.０５(s,3H,(CH3)2Si)、
０.１２(s,3H,(CH3)2Si)、０.９１−１.１２(m,9H,(C
H3)3C)、３.５３−３.６２(m,2H,H-5',5")、３.９２(s,
6H,OCH3x2)、４.１０−４.４６(m,2H,CH2=CHCH 2O)、４.
５７−４.７１(m,2H,H-3'and H-4') 、４.７１(d,J=5.7
Hz,2H,CH2=CHCH 2)、４.９８(t,J=4.9Hz,1H,H-2')、５.
１７−５.５５(m,5H,CH2=CHCH 2OCO,cis-CH 2=CHCH2OCO,C
H 2=CHC2O)、５.６３(dd,J=1.0,17.4Hz,1H,trans-CH 2=CH
CH2OCO)、５.８２−６.３４(m,3H,H-1'and CH2=CHCH 2x
2)、７.０１(d,J=7.6Hz,4H, protons ortho to OCH3of
DMTr)、７.４１−７.７３(m,9H,aromatic protons of D
MTr)、８.３７、８.３９(twosinglets,1H,H-2)、８.４
５(br s,1H,NHCO)、８.８５、８.８７(two singlets,1
H,H-8)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１４８.５、１４９.７ppm
【００３３】同様の手順にて下記構造式１０で示される
ホスホロアミダイトを収率８６％で合成した。
ホスホロアミダイトを収率８６％で合成した。
【００３４】
【式１０】
【００３５】e) 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミ
ジン 3'-フェニルN,N-ジイソプロピルホスホノアミダイ
トの合成 下記構造式１１で示される標記ホスホノアミダイトを以
下の手順で合成した。なお、下記構造式においてＤＭＴ
rはジメトキシトリチル基、Ｔhはチミジン構造であるこ
とを示す。
ジン 3'-フェニルN,N-ジイソプロピルホスホノアミダイ
トの合成 下記構造式１１で示される標記ホスホノアミダイトを以
下の手順で合成した。なお、下記構造式においてＤＭＴ
rはジメトキシトリチル基、Ｔhはチミジン構造であるこ
とを示す。
【００３６】
【式１１】
【００３７】5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミジン
(１.５g、２.７５mmol)の塩化メチレン(１０mL)懸濁液
に1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(１.２mL、
８.２５mmol)、クロロフェニルジイソプロピルホスホノ
アミダイト(１.００g、４.１３mmol)を加え、室温で攪
拌した。１２時間後、反応溶液を塩化メチレン(１５０m
L)で希釈し、飽和食塩水(１００mL)で洗浄し、乾燥し
た。濃縮した後、得られた粗生成物をシリカゲルカラム
クロマトグラフィ(６０g、ヘキサン／酢酸エチル／ジイ
ソプロピルアミン＝２／１／痕跡量)で精製し、目的と
する5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミジン 3'-フェ
ニルN,N-ジイソプロピルホスホノアミダイト１.２７g
(１.４５mmol／収率６１％)を得た。 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミジン 3'-フェニル
N,N-ジイソプロピルホスホノアミダイトの特性 形状：無色アモルファス ＴＬＣ：Ｒf=０.３０(ヘキサン／酢酸エチル＝２／１) ＦＴＩＲ（ＫＢr)：２９６５、１６９４、１６０９、１
５１０、１４６４、１３６４、１２５２、１１７９、１
０３６cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ）：λmax ２３５nm(ε=25700) 、２６
７nm(sh)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：０.９４−１.１９(m,12H,CH
(CH 3)2x2)、１.３２、１.３４(two singlets,3H,6-C
H3)、２.２４−２.３２(m,1H,H-2')、２.４７−２.５２
(m,1H,H-2')、３.１７−３.４３(m,4H,H-5'x2,CH(CH3)2
x2)、３.６７、３.６９(two singlets,6H,OCH3x2) 、
４.１４−４.１７(m,1H,H-4')、４.７２−４.８５(m,1
H,H-3')、６.４０−６.４７(m,1H,H-1')、６.６７−６.
７５(m,4H, protons ortho to OCH3 of DMTr)、７.１３
−７.４９(m,9H, aromatic protons ofDMTr)、７.５
６、７.５８(two singlets,1H,H-6)、８.４−８.７(br
s,1H,NHCO)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１１７.４ppm 元素分析：実測値Ｃ＝６８.７０、Ｈ＝６.７２、Ｎ＝
５.５６ 計算値Ｃ＝６８.７０、Ｈ＝６.７０、Ｎ＝５.６０
(１.５g、２.７５mmol)の塩化メチレン(１０mL)懸濁液
に1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(１.２mL、
８.２５mmol)、クロロフェニルジイソプロピルホスホノ
アミダイト(１.００g、４.１３mmol)を加え、室温で攪
拌した。１２時間後、反応溶液を塩化メチレン(１５０m
L)で希釈し、飽和食塩水(１００mL)で洗浄し、乾燥し
た。濃縮した後、得られた粗生成物をシリカゲルカラム
クロマトグラフィ(６０g、ヘキサン／酢酸エチル／ジイ
ソプロピルアミン＝２／１／痕跡量)で精製し、目的と
する5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミジン 3'-フェ
ニルN,N-ジイソプロピルホスホノアミダイト１.２７g
(１.４５mmol／収率６１％)を得た。 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミジン 3'-フェニル
N,N-ジイソプロピルホスホノアミダイトの特性 形状：無色アモルファス ＴＬＣ：Ｒf=０.３０(ヘキサン／酢酸エチル＝２／１) ＦＴＩＲ（ＫＢr)：２９６５、１６９４、１６０９、１
５１０、１４６４、１３６４、１２５２、１１７９、１
０３６cm-1 ＵＶ（ＣＨ3ＯＨ）：λmax ２３５nm(ε=25700) 、２６
７nm(sh)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：０.９４−１.１９(m,12H,CH
(CH 3)2x2)、１.３２、１.３４(two singlets,3H,6-C
H3)、２.２４−２.３２(m,1H,H-2')、２.４７−２.５２
(m,1H,H-2')、３.１７−３.４３(m,4H,H-5'x2,CH(CH3)2
x2)、３.６７、３.６９(two singlets,6H,OCH3x2) 、
４.１４−４.１７(m,1H,H-4')、４.７２−４.８５(m,1
H,H-3')、６.４０−６.４７(m,1H,H-1')、６.６７−６.
７５(m,4H, protons ortho to OCH3 of DMTr)、７.１３
−７.４９(m,9H, aromatic protons ofDMTr)、７.５
６、７.５８(two singlets,1H,H-6)、８.４−８.７(br
s,1H,NHCO)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１１７.４ppm 元素分析：実測値Ｃ＝６８.７０、Ｈ＝６.７２、Ｎ＝
５.５６ 計算値Ｃ＝６８.７０、Ｈ＝６.７０、Ｎ＝５.６０
【００３８】３．ホスホロアミダイトあるいはホスホノ
アミダイトとヌクレオシドの縮合反応上記の様にして得
たホスホロアミダイトあるいはホスホノアミダイトとヌ
クレオシドとを以下の様にして縮合反応させた。ホスホ
ロアミダイトあるいはホスホノアミダイト(０.０３mmo
l)、ヌクレオシド(０.０２mmol)および反応促進剤(０.
０６mmol)の混合物をアセトニトリル(０.５mL)に溶解
し、室温で５分攪拌した後、１.５M t-ブチルハイドロ
パーオキサイドトルエン溶液(０.０５mmol、０.０７５m
mol)を加え、２分攪拌した。ヌクレオシドとしては、3'
-O-アリルオキシカルボニルチミジン(Ａ)と3'-O-ベンゾ
イルチミジン(Ｂ)を用いた。収率は反応溶液に内部標準
としてトリフェニルホスフィンオキシド(０.１M アセト
ニトリル溶液、０.２mL、０.０２mmol)を加えた溶液の
31Ｐ ＮＭＲを測定し、トリフェニルホスフィンオキシ
ドのピークと生成物のピークの積分面積比より検量線を
用いて決定した。単離収率は反応スケールを５倍にし、
粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ(６g、ヘ
キサン／酢酸エチル／ジイソプロピルアミン＝１／２／
痕跡量)で精製単離し決定した。
アミダイトとヌクレオシドの縮合反応上記の様にして得
たホスホロアミダイトあるいはホスホノアミダイトとヌ
クレオシドとを以下の様にして縮合反応させた。ホスホ
ロアミダイトあるいはホスホノアミダイト(０.０３mmo
l)、ヌクレオシド(０.０２mmol)および反応促進剤(０.
０６mmol)の混合物をアセトニトリル(０.５mL)に溶解
し、室温で５分攪拌した後、１.５M t-ブチルハイドロ
パーオキサイドトルエン溶液(０.０５mmol、０.０７５m
mol)を加え、２分攪拌した。ヌクレオシドとしては、3'
-O-アリルオキシカルボニルチミジン(Ａ)と3'-O-ベンゾ
イルチミジン(Ｂ)を用いた。収率は反応溶液に内部標準
としてトリフェニルホスフィンオキシド(０.１M アセト
ニトリル溶液、０.２mL、０.０２mmol)を加えた溶液の
31Ｐ ＮＭＲを測定し、トリフェニルホスフィンオキシ
ドのピークと生成物のピークの積分面積比より検量線を
用いて決定した。単離収率は反応スケールを５倍にし、
粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ(６g、ヘ
キサン／酢酸エチル／ジイソプロピルアミン＝１／２／
痕跡量)で精製単離し決定した。
【００３９】a) デオキシリボヌクレオシドホスホロア
ミダイトとヌクレオシドの縮合反応 エステル部位およびアミド部位のアルキル基の種類が異
なるホスホロアミダイト５−９とヌクレオシド１０およ
び１１との縮合反応を、反応促進剤として三フッ化ホウ
素−ベンズイミダゾール錯体と公知の1H-テトラゾール
を用いて行い、両促進剤の能力を比較したところ以下の
とおりであった。
ミダイトとヌクレオシドの縮合反応 エステル部位およびアミド部位のアルキル基の種類が異
なるホスホロアミダイト５−９とヌクレオシド１０およ
び１１との縮合反応を、反応促進剤として三フッ化ホウ
素−ベンズイミダゾール錯体と公知の1H-テトラゾール
を用いて行い、両促進剤の能力を比較したところ以下の
とおりであった。
【００４０】
【表１】
【００４１】表１における収率は31Ｐ ＮＭＲでの測定
値および単離収率（括弧内）を表示しものであり、アミ
ダイトは構造式の番号で示し、生成物ａ、ｂ、ｃは下記
構造式１２で表せるヌクレオシド二量体である。
値および単離収率（括弧内）を表示しものであり、アミ
ダイトは構造式の番号で示し、生成物ａ、ｂ、ｃは下記
構造式１２で表せるヌクレオシド二量体である。
【００４２】
【式１２】
【００４３】表１から明らかな様に、いずれの反応の場
合にも三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体の反応
促進能力が1H-テトラゾールのそれに優れる。特に三フ
ッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体の優位性は反応性
の低いモルホリダイトやo-クロロフェニルエステルであ
る７、４、６において顕著に現れている。なお、三フッ
化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体を用いた反応におい
て脱トリチル化は起こらず、また生成物中およびヌクレ
オシド二量体の窒素、酸素、リン原子への三フッ化ホウ
素の配位はみられなかった。
合にも三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体の反応
促進能力が1H-テトラゾールのそれに優れる。特に三フ
ッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体の優位性は反応性
の低いモルホリダイトやo-クロロフェニルエステルであ
る７、４、６において顕著に現れている。なお、三フッ
化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体を用いた反応におい
て脱トリチル化は起こらず、また生成物中およびヌクレ
オシド二量体の窒素、酸素、リン原子への三フッ化ホウ
素の配位はみられなかった。
【００４４】生成物のうちｃのo-クロロフェニル 5'-O-
p,p'- ジメトキシトリチル-チミジル(3'→5')3'-アリル
オキシカルボニルチミジンの特性 ＴＬＣ：Ｒf=０.５５(ヘキサン／酢酸エチル＝１／５)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１.２３−１.４２(m,3H,CH3x
3)、１.９９−２.３６(m,3H,H-2'x3)、２.６０−２.８
１(m,1H,H-2')、３.２２−３.４８(m,2H,H-5',5")、３.
６８(s,6H,OCH3x2)、４.０３−４.５８(m,4H,H-4'x2,H-
5',5")、４.５０−４.６３(m,2H,CH2=CHCH 2)、５.０１
−５.３８(m,4H,H-3'x2,CH 2=CHCH2)、５.７３−５.８７
(m,1H,CH2=CHCH2)、６.１０−６.１９(m,1H,H-1')、６.
２２−６.３１(m,1H,H-1')、６.６８−６.７８(m,4H, p
rotons ortho to OCH3 of DMTr)、６.９６−７.８９(m,
16H,aromatic protons of DMTr,H-5,H-6 of cytidine,H
-6of thymidine)、８.０８(s,1H,NHCO)、８.５９(s,1H,
NHCO)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：−０.９８、−０.９７ppm
p,p'- ジメトキシトリチル-チミジル(3'→5')3'-アリル
オキシカルボニルチミジンの特性 ＴＬＣ：Ｒf=０.５５(ヘキサン／酢酸エチル＝１／５)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：１.２３−１.４２(m,3H,CH3x
3)、１.９９−２.３６(m,3H,H-2'x3)、２.６０−２.８
１(m,1H,H-2')、３.２２−３.４８(m,2H,H-5',5")、３.
６８(s,6H,OCH3x2)、４.０３−４.５８(m,4H,H-4'x2,H-
5',5")、４.５０−４.６３(m,2H,CH2=CHCH 2)、５.０１
−５.３８(m,4H,H-3'x2,CH 2=CHCH2)、５.７３−５.８７
(m,1H,CH2=CHCH2)、６.１０−６.１９(m,1H,H-1')、６.
２２−６.３１(m,1H,H-1')、６.６８−６.７８(m,4H, p
rotons ortho to OCH3 of DMTr)、６.９６−７.８９(m,
16H,aromatic protons of DMTr,H-5,H-6 of cytidine,H
-6of thymidine)、８.０８(s,1H,NHCO)、８.５９(s,1H,
NHCO)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：−０.９８、−０.９７ppm
【００４５】b) リボヌクレオシドホスホロアミダイト
とヌクレオシドの縮合反応 2'-O-t-ブチルジメチルシリル基の立体障害のために反
応性の低下した前記構造式８および９で示されるホスホ
ロアミダイトと下記３種のヌクレオシドＣ、Ｄ、Ｅの縮
合反応を、反応促進剤として三フッ化ホウ素−ベンズイ
ミダゾール錯体と公知の1H-テトラゾールおよび5-エチ
ルチオテトラゾールを用いて行い、それらの促進剤の能
力を比較したところ以下のとおりであった。なお、反応
はヌクレオシド(１当量)、アミダイト(１.２当量)およ
び促進剤(２.４当量)を５分間反応させた。
とヌクレオシドの縮合反応 2'-O-t-ブチルジメチルシリル基の立体障害のために反
応性の低下した前記構造式８および９で示されるホスホ
ロアミダイトと下記３種のヌクレオシドＣ、Ｄ、Ｅの縮
合反応を、反応促進剤として三フッ化ホウ素−ベンズイ
ミダゾール錯体と公知の1H-テトラゾールおよび5-エチ
ルチオテトラゾールを用いて行い、それらの促進剤の能
力を比較したところ以下のとおりであった。なお、反応
はヌクレオシド(１当量)、アミダイト(１.２当量)およ
び促進剤(２.４当量)を５分間反応させた。
【００４６】
【表２】
【００４７】用いた３種のヌクレオシドＣ、Ｄ、Ｅは以
下のものである。 ヌクレオシドＣ：2',3',N6-トリアリルオキシカルボニ
ル-アデノシン ヌクレオシドＤ：2',3',N4-トリアリルオキシカルボニ
ル-シチジン ヌクレオシドＥ：2',3'-ジアリルオキシカルボニル-ウ
リジン
下のものである。 ヌクレオシドＣ：2',3',N6-トリアリルオキシカルボニ
ル-アデノシン ヌクレオシドＤ：2',3',N4-トリアリルオキシカルボニ
ル-シチジン ヌクレオシドＥ：2',3'-ジアリルオキシカルボニル-ウ
リジン
【００４８】表１における収率は31Ｐ ＮＭＲでの測定
値および単離収率（括弧内）を表示しものであり、生成
物ｄ、ｅ、ｆ、ｇは下記構造式１３で表せるヌクレオシ
ド二量体である。
値および単離収率（括弧内）を表示しものであり、生成
物ｄ、ｅ、ｆ、ｇは下記構造式１３で表せるヌクレオシ
ド二量体である。
【００４９】
【式１３】
【００５０】表２から明らかな様に、三フッ化ホウ素−
ベンズイミダゾール錯体を用いた場合ほぼ定量的に目的
生成物が得られたのに対し、公知の1H-テトラゾールお
よび5-エチルチオテトラゾールを用いた場合はいずれも
低い収率でしか得られなかった。
ベンズイミダゾール錯体を用いた場合ほぼ定量的に目的
生成物が得られたのに対し、公知の1H-テトラゾールお
よび5-エチルチオテトラゾールを用いた場合はいずれも
低い収率でしか得られなかった。
【００５１】生成物のうちのｅのアリルN6-アリルオキ
シカルボニル-2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-p,p'
-ジメトキシトリチル-アデニル(3'→5')N4,2',3'(トリ
ス-アリルオキシカルボニル)シチジンの特性 ＴＬＣ：Ｒf=０.５５(ヘキサン／酢酸エチル＝１／５)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：０.０５(s,3H,(CH3)2Si)、
０.１２(s,3H,(CH3)2Si)、０.９５−１.０８(m,9H,(C
H3)3C)、３.６２−４.９５(m,2H,H-5',5")、３.９０(s,
6H,OCH3x2)、４.６２−５.１３(m,14H,CH2=CHCH 2x5,H-
4'x2,H-5',5")、５.３２−５.３８(m,1H,H-3')、５.５
０−５.７８(m,13H,H-2'x2,H-3',CH 2=CHCH2)、６.０８
−６.４２(m,7H,H-1'x2,CH2=CHCH2x5)、７.０６−７.１
９(m,4H, protons ortho to OCH3 of DMTr)、７.４１−
７.８２(m,10H,aromatic protons of DMTr)、８.０７、
８.３９(two doublets,J=７.６Hz,1H,H-6)、８.３５−
８. ４２(br s,1H,NHCO)、８.５５、８.５６(two singl
ets,1H,H-2)、８.６３−８.８１(br s,1H,NHCO)、８.８
２、８.８４(two singlets,1H,H-8)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：−０.８７、−０.４４ppm
シカルボニル-2'-O-t-ブチルジメチルシリル-5'-O-p,p'
-ジメトキシトリチル-アデニル(3'→5')N4,2',3'(トリ
ス-アリルオキシカルボニル)シチジンの特性 ＴＬＣ：Ｒf=０.５５(ヘキサン／酢酸エチル＝１／５)1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：０.０５(s,3H,(CH3)2Si)、
０.１２(s,3H,(CH3)2Si)、０.９５−１.０８(m,9H,(C
H3)3C)、３.６２−４.９５(m,2H,H-5',5")、３.９０(s,
6H,OCH3x2)、４.６２−５.１３(m,14H,CH2=CHCH 2x5,H-
4'x2,H-5',5")、５.３２−５.３８(m,1H,H-3')、５.５
０−５.７８(m,13H,H-2'x2,H-3',CH 2=CHCH2)、６.０８
−６.４２(m,7H,H-1'x2,CH2=CHCH2x5)、７.０６−７.１
９(m,4H, protons ortho to OCH3 of DMTr)、７.４１−
７.８２(m,10H,aromatic protons of DMTr)、８.０７、
８.３９(two doublets,J=７.６Hz,1H,H-6)、８.３５−
８. ４２(br s,1H,NHCO)、８.５５、８.５６(two singl
ets,1H,H-2)、８.６３−８.８１(br s,1H,NHCO)、８.８
２、８.８４(two singlets,1H,H-8)ppm31 Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣl3）：−０.８７、−０.４４ppm
【００５２】c) ヌクレオシドフェニルホスホロアミダ
イトとヌクレオチドの縮合反応 三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体は反応性の低
い前記構造式１１で示されるフェニルホスホノアミダイ
トの活性化にも有効である。該ホスホノアミダイトと
3',N4-ジアリルオキシカルボニル-シチジンの縮合は室
温５分で完結し、t-ブチルハイドロパーオキサイドによ
る酸化を経て、下記構造式１４で示されるホスホノジエ
ステルを収率９５％で与えた。こらに対し、1H-テトラ
ゾールを用いる反応では同条件下縮合収率は６２％であ
り、反応完了までに約２時間を要した。
イトとヌクレオチドの縮合反応 三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体は反応性の低
い前記構造式１１で示されるフェニルホスホノアミダイ
トの活性化にも有効である。該ホスホノアミダイトと
3',N4-ジアリルオキシカルボニル-シチジンの縮合は室
温５分で完結し、t-ブチルハイドロパーオキサイドによ
る酸化を経て、下記構造式１４で示されるホスホノジエ
ステルを収率９５％で与えた。こらに対し、1H-テトラ
ゾールを用いる反応では同条件下縮合収率は６２％であ
り、反応完了までに約２時間を要した。
【００５３】
【式１４】
【００５４】d) 三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール
錯体を用いるオリゴヌクレオチドの固相合成 反応容器(尖形管)を減圧下で加熱乾燥(約４００℃)した
後、アルゴン置換し、その中へヌクレオシド(０.２μmo
l)を担持したＣＰＧ(controlled pore glass)を入れた
後、合成に用いる試薬を順次作用させた。縮合の段階で
三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体およびアミダ
イトを固体およびアモルファスの状態で尖形管に入れ、
新鮮な乾燥アセトニトリル(０.１mL)を加えて反応を行
わせた。その他の試薬は全て市販品を用い、シリンジを
通して注入、排出した。その合成サイクルは以下の表３
に示したとおりであり、合成は全て１μmolスケールで
行った。
錯体を用いるオリゴヌクレオチドの固相合成 反応容器(尖形管)を減圧下で加熱乾燥(約４００℃)した
後、アルゴン置換し、その中へヌクレオシド(０.２μmo
l)を担持したＣＰＧ(controlled pore glass)を入れた
後、合成に用いる試薬を順次作用させた。縮合の段階で
三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体およびアミダ
イトを固体およびアモルファスの状態で尖形管に入れ、
新鮮な乾燥アセトニトリル(０.１mL)を加えて反応を行
わせた。その他の試薬は全て市販品を用い、シリンジを
通して注入、排出した。その合成サイクルは以下の表３
に示したとおりであり、合成は全て１μmolスケールで
行った。
【００５５】
【表３】 注：促進剤は三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体(７mg)又は1H-テト ラゾール(３mg)であり合成は全て0.２μmolスケールであった。
【００５６】上記の方法によりＣＰＧ上に担持されたチ
ミジン(０.２μmmol)(構造的には下記構造式１５でしめ
される）を出発物質とし、シアノエチルホスホロアミダ
イト６をモノマー単位に用いて、促進剤として三フッ化
ホウ素−ベンズイミダゾール錯体を用いて合成したとこ
ろ、各ステップの平均縮合率９６.2％、通算収率７０.8
％(トリチル発色定量による)で(Tp)9Tを合成することが
できた。
ミジン(０.２μmmol)(構造的には下記構造式１５でしめ
される）を出発物質とし、シアノエチルホスホロアミダ
イト６をモノマー単位に用いて、促進剤として三フッ化
ホウ素−ベンズイミダゾール錯体を用いて合成したとこ
ろ、各ステップの平均縮合率９６.2％、通算収率７０.8
％(トリチル発色定量による)で(Tp)9Tを合成することが
できた。
【００５７】
【式１５】
【００５８】トリチル発色定量は、脱トリチル化の操作
の際、採取した反応溶液を濃縮し、過塩素酸−メタノー
ル（３：１）溶液(２５mL)で希釈し、可視−紫外吸収ス
ペクトルにおいて３９８nmの吸収の測定し、前のフラク
ションとの比により収率を求める方法である。
の際、採取した反応溶液を濃縮し、過塩素酸−メタノー
ル（３：１）溶液(２５mL)で希釈し、可視−紫外吸収ス
ペクトルにおいて３９８nmの吸収の測定し、前のフラク
ションとの比により収率を求める方法である。
【００５９】また、前記と同じくＣＰＧ上に担持された
チミジンを出発原料としてフェニルホスホノアミダイト
２４をモノマー単位として、同様にして反応させたとこ
ろ、下記構造式１６のTp(Ph)T を縮合収率９２％で合成
できた。なお、1H-テトラゾールを用いた場合の収率は
７６％であった。
チミジンを出発原料としてフェニルホスホノアミダイト
２４をモノマー単位として、同様にして反応させたとこ
ろ、下記構造式１６のTp(Ph)T を縮合収率９２％で合成
できた。なお、1H-テトラゾールを用いた場合の収率は
７６％であった。
【００６０】
【式１６】
【００６１】４．各種促進剤による縮合反応比較 5'-O-p,p'-ジメトキシトリチル-チミジン 3'-(2-クロロ
フェニル)モルホリノホスホロアミダイト(７８.８mg、
０.１mmol)、3'-O-t-ブチルジメチルシリル-チミジン
(７８.３mg、０.２mmol)、促進剤(０.２mmol)およびト
リフェニルホスフィンオキシド(２７.２mg、０.１mmol)
の混合物をアセトニトリル(0.１mL)に溶解し、反応溶液
を無水条件下でキャニュラーを通してＮＭＲ測定用チュ
ーブへすばやく移し、31Ｐ ＮＭＲを測定し、各時間に
おける生成物および出発物の収率をトリフェニルホスフ
ィンオキシドのピークと生成物のピークの積分面積比よ
り検量線を用いて決定した。促進剤として三フッ化ホウ
素−ベンズイミダゾール錯体、1H-テトラゾール、5-(p-
ニトロフェニル)-1H-テトラゾールおよび5-エチルチオ-
1H-テトラゾールを用いた場合の縮合収率の変化を図１
に、原料消費率を図２に示した。図において、白丸は本
発明の三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体、黒丸
は1H-テトラゾール、黒四角は5-(p-ニトロフェニル)-1H
-テトラゾール、白三角は5-エチルチオ-1H-テトラゾー
ルを用いた場合をそれぞれ示している。これらの図から
三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体を用いる反応
は、他の促進剤を用いる反応に比べて著しく速く、収率
も高いことが明らかである。
フェニル)モルホリノホスホロアミダイト(７８.８mg、
０.１mmol)、3'-O-t-ブチルジメチルシリル-チミジン
(７８.３mg、０.２mmol)、促進剤(０.２mmol)およびト
リフェニルホスフィンオキシド(２７.２mg、０.１mmol)
の混合物をアセトニトリル(0.１mL)に溶解し、反応溶液
を無水条件下でキャニュラーを通してＮＭＲ測定用チュ
ーブへすばやく移し、31Ｐ ＮＭＲを測定し、各時間に
おける生成物および出発物の収率をトリフェニルホスフ
ィンオキシドのピークと生成物のピークの積分面積比よ
り検量線を用いて決定した。促進剤として三フッ化ホウ
素−ベンズイミダゾール錯体、1H-テトラゾール、5-(p-
ニトロフェニル)-1H-テトラゾールおよび5-エチルチオ-
1H-テトラゾールを用いた場合の縮合収率の変化を図１
に、原料消費率を図２に示した。図において、白丸は本
発明の三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体、黒丸
は1H-テトラゾール、黒四角は5-(p-ニトロフェニル)-1H
-テトラゾール、白三角は5-エチルチオ-1H-テトラゾー
ルを用いた場合をそれぞれ示している。これらの図から
三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体を用いる反応
は、他の促進剤を用いる反応に比べて著しく速く、収率
も高いことが明らかである。
【００６２】
【発明の効果】本発明の三フッ化ホウ素−ベンズイミダ
ゾール錯体からなる核酸合成反応促進剤は、従来用いら
れていた核酸合成反応促進剤に比較して かに優れた反
応促進活性、特にホスホロアミダイト法によるオリゴヌ
クレオチドの合成方法における反応促進活性に優れ、各
種のオリゴヌクレオチドをより一層優位に合成すること
を可能とする優れた効果を奏するものであるばかりでな
く、本発明の核酸合成反応促進剤は、酸素および湿気に
対して安定であり室温保存が可能であるうえ、アセトニ
トリルに対する溶解性が高いという優れた特性を有し、
使用を容易にするという効果も併せ奏するものである。
ゾール錯体からなる核酸合成反応促進剤は、従来用いら
れていた核酸合成反応促進剤に比較して かに優れた反
応促進活性、特にホスホロアミダイト法によるオリゴヌ
クレオチドの合成方法における反応促進活性に優れ、各
種のオリゴヌクレオチドをより一層優位に合成すること
を可能とする優れた効果を奏するものであるばかりでな
く、本発明の核酸合成反応促進剤は、酸素および湿気に
対して安定であり室温保存が可能であるうえ、アセトニ
トリルに対する溶解性が高いという優れた特性を有し、
使用を容易にするという効果も併せ奏するものである。
【図１】図１は、各種促進剤を用いたホスホロアミダイ
トとヌクレオシドの反応収率を時間と対比した図であ
る。
トとヌクレオシドの反応収率を時間と対比した図であ
る。
【図２】図２は、各種促進剤を用いたホスホロアミダイ
トとヌクレオシドの反応における原料消費率の変化を示
した図である。図１、図２のいずれにおいても、白丸は
三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体、黒丸は1H-
テトラゾール、黒四角は5-(p-ニトロフェニル)-1H-テト
ラゾール、白三角は5-エチルチオ-1H-テトラゾールを用
いた場合をそれぞれ示している。
トとヌクレオシドの反応における原料消費率の変化を示
した図である。図１、図２のいずれにおいても、白丸は
三フッ化ホウ素−ベンズイミダゾール錯体、黒丸は1H-
テトラゾール、黒四角は5-(p-ニトロフェニル)-1H-テト
ラゾール、白三角は5-エチルチオ-1H-テトラゾールを用
いた場合をそれぞれ示している。
Claims (3)
- 【請求項１】 ベンズイミダゾールと三フッ化ホウ素と
の配位化合物。 - 【請求項２】 ベンズイミダゾールと三フッ化ホウ素と
の配位化合物からなることを特徴とする核酸合成反応促
進剤。 - 【請求項３】 ベンズイミダゾールと三フッ化ホウ素と
の配位化合物の存在下にヌクレオシドホスホロアミダイ
トまたはヌクレオシドホスホノアミダイトとヌクレオシ
ドを反応させることを特徴とするオリゴヌクレオチドの
合成方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12968395A JPH08301878A (ja) | 1995-04-28 | 1995-04-28 | 三フッ化ホウ素配位化合物およびオリゴヌクレオチドの合成方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12968395A JPH08301878A (ja) | 1995-04-28 | 1995-04-28 | 三フッ化ホウ素配位化合物およびオリゴヌクレオチドの合成方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08301878A true JPH08301878A (ja) | 1996-11-19 |
Family
ID=15015601
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12968395A Pending JPH08301878A (ja) | 1995-04-28 | 1995-04-28 | 三フッ化ホウ素配位化合物およびオリゴヌクレオチドの合成方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08301878A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000075157A1 (en) * | 1999-06-03 | 2000-12-14 | Abbott Laboratories | Oligonucleotide synthesis with lewis acids as activators |
-
1995
- 1995-04-28 JP JP12968395A patent/JPH08301878A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000075157A1 (en) * | 1999-06-03 | 2000-12-14 | Abbott Laboratories | Oligonucleotide synthesis with lewis acids as activators |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5878758B2 (ja) | Ｒｎａ及びその誘導体合成のための新規保護基 | |
| US7053207B2 (en) | L-ribo-LNA analogues | |
| JP5143872B2 (ja) | ホスホネートヌクレオシド誘導体 | |
| US6028182A (en) | Methylphosphonic acid esters, processes for their preparation, and their use | |
| EP0219342A2 (en) | Method and reagents for in vitro oligonucleotide synthesis | |
| US5936077A (en) | Solid phase synthesis of oligonucleotides | |
| JP2006248949A (ja) | ヌクレオシド誘導体、ヌクレオチド誘導体及びそれらの製造方法 | |
| JP4887500B2 (ja) | ヌクレオシド類似体またはその塩 | |
| JPH0787982A (ja) | 修飾オリゴデオキシリボヌクレオチド | |
| US5955600A (en) | Method for the synthesis of nucleotide or oligonucleotide phosphoramidites | |
| US5674856A (en) | Modified oligodeoxyribonucleoditides | |
| JP3985103B2 (ja) | 新規複合体及びオリゴヌクレオチドの合成方法 | |
| JPH08301878A (ja) | 三フッ化ホウ素配位化合物およびオリゴヌクレオチドの合成方法 | |
| JP3983691B2 (ja) | オリゴヌクレオチドの化学的合成法 | |
| JP7452549B2 (ja) | ホスホロアミダイト活性化剤 | |
| JP2008195648A (ja) | ４’−セレノヌクレオシド及び４’−セレノヌクレオチド | |
| JP7298866B2 (ja) | 核酸合成用固相担体及びそれを用いた核酸の製造方法 | |
| US6048975A (en) | Process for the chemical synthesis of oligonucleotides | |
| JP4170665B2 (ja) | フェニル基を有する核酸塩基アナログが導入された核酸 | |
| JP3518385B2 (ja) | ホスホルアゾリド化合物 | |
| WO1997041140A1 (en) | Modified oligonucleotides | |
| JP2000290185A (ja) | Ｔｇｇｇ配列を持つ修飾オリゴデオキシリボヌクレオチドを含有する抗エイズ剤 | |
| JPH07157496A (ja) | デオキシヌクレオシドの製造法 | |
| JPH10259192A (ja) | ホスホロチオエートジエステル化合物の製造法 | |
| JPH11246592A (ja) | Ｔｇｇｇ配列を持つ修飾オリゴデオキシリボヌクレオチド |