JP2000095793A - ２’―ｏ―アルキル化グアノシン３’―ｏ―ホスホロアミダイト - Google Patents

２’―ｏ―アルキル化グアノシン３’―ｏ―ホスホロアミダイト

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JP2000095793A JP11293153A JP29315399A JP2000095793A JP 2000095793 A JP2000095793 A JP 2000095793A JP 11293153 A JP11293153 A JP 11293153A JP 29315399 A JP29315399 A JP 29315399A JP 2000095793 A JP2000095793 A JP 2000095793A
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マッギー，ダニエル，ピーター・クロード
Phillip D Cook
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Charles John Guinosso
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 新規な２’−Ｏ−アルキル化ヌクレオシドお
よびヌクレオシド類似体を提供すること。 【解決手段】 構造： 【化１】 （式中ＸはＲ1−（Ｒ2）nであり；Ｒ1はＣ1−Ｃ20アル
キル、Ｃ2−Ｃ20アルケニルまたはＣ2−Ｃ20アルキニル
であり；Ｒ2は、例えばケト、ニトロソ、トリフルオロ
メチル、トリフルオロメトキシ等の置換基であり；およ
びｎは１から６までの整数である）を有する化合物。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【関連特許出願】本特許出願は、1992年10月27日提出の
米国特許出願第967,267号の一部継続出願であり、その
特許出願は1992年7月23日提出の米国特許出願第918,362
号および1991年1月11日提出の特許出願US91/00243号の
一部継続出願であり、特許出願US91/00243号は、1990年
1月11日提出の特許出願第643,358号および1990年8月13
日提出の特許出願第566,977号の一部継続出願である。
これらの出願は本出願の譲受人に譲渡されており、これ
らの特許文献をすべて参照文献としてここに引用する。
【０００２】
【発明の属する技術分野】本発明は2'-O-アルキルウリ
ジンおよびシチジンホスホロアミダイトの製造方法に関
する。本発明はまた、2'-O-アルキル、3'-O-アルキルお
よび2',3'-ジ-O-アルキル 2,6-ジアミノプリンリボシ
ド、2'-O-アルキルグアノシンおよび2'-O-アルキルグア
ノシン類似体、これらの化合物のホスホロアミダイトの
製造方法およびこれらの使用法に関する。
【０００３】
【従来の技術】数多くのオリゴヌクレオチド類似体が製
造されている。これまで合成されたオリゴヌクレオチド
の一つの群は2'-O-置換オリゴヌクレオチドである。そ
のようなオリゴヌクレオチドはある種の独特かつ有用な
性質を有している。ギャップを持つ2'修飾ホスホロチオ
エートオリゴヌクレオチドと題され1991年12月24日に提
出された米国特許出願第814,961号（本出願の譲受人に
譲渡されており、全内容が参照文献としてここに引用さ
れている）においては、2'置換ヌクレオチドがオリゴヌ
クレオチドに導入され、相補標的鎖へのオリゴヌクレオ
チドの結合が増強される一方、標的鎖を破壊するＲＮア
ーゼＨの発現を可能にしている。
【０００４】最近の論文（Sproat, B.S., Beijer, B. a
nd Iribarren, A., Nucleic AcidsResearch, 1990, 18:
41）において、著者らは”プレｍＲＮＡスプライシング
およびスプライセオソームの構造研究のための有用なア
ンチセンスプローブ”としての2'-O-メチル置換オリゴ
ヌクレオチドの更なる使用を示している。
【０００５】2'-O-メチルおよびエチルヌクレオチドな
らびにこれらの製造方法は、多くの著者により報告され
ている。Robins, M.J., Naik, S.R. and Lee, A.S.K.,
J. Org.Chem., 39:1891 (1974)はジアゾメタンによる塩
化第一スズ触媒モノメチル化を経る2'-O-および3'-O-メ
チルグアノシンの低収量合成を報告している。その後、
Robins, M.J., Hansske,F. and Bernier, S.E., Can.
J. Chem., 59:3360 (1981)により報告されているごと
く、”アデノシン、シチジンおよびウリジンの2'-O-お
よび3'-O-メチルエーテル合成のための簡便で高収量の
方法が考案された．．．．しかしながら、グアノシンで
は著しく困難である”。前述の論文において、著者らは
2'-O-および3'-O-メチルグアノシンの改良合成法を報告
している。グアノシンの代わりに2,6-ジアミノ-9-（β-
D-リボフラノシル）プリン（2-アミノアデノシン）の塩
化第一スズ触媒ジアゾメタンメチル化を達成することに
より合成法が改良された。ジアミノプリン部分は次にア
デノシンデアミナーゼにより対応するグアノシン部分に
還元された。Singer and Kusmierek, Biochemistry 15:
5052 (1976)による別のジアゾ化反応においては、グア
ノシンのジアゾエタン処理の結果、2'および3'-O-エチ
ルグアノシンの混合物が得られたことが報告されてい
る。このアルキル化では複素環式塩基もアルキル化され
ている。アルキル化生成物は塩基で処理して複素環式塩
基からエチル基が除去された。得られた生成物はグアノ
シンと同一のＵＶスペクトルを持つが、グアノシンのＲ
ｆとは異なったＲｆを持つことから同定された。
【０００６】2'-O-メチルヌクレオシドの別の改良合成
がInoue, H.,Hayase,Y.Imura, A.,Nu cleic Acids Resea
rch,15:6131(1987)により報告されている。この合成法
はＡｇ 2Ｏ存在下にＣＨ3Ｉを使用している。この方法は
グアノシンを除いたすべての通常のヌクレオチドに対し
て有用であることが証明されている。これらの著者によ
り報告されているごとく、グアノシンはこの合成法では
処理できない。従って、これらの著者は、ここでもジア
ゾメタンを用いてグアノシンの2'-O-メチル化を行わな
ければならなかった。グアニン塩基部分のアミノ官能性
のメチル化を避けるため、グアニン塩基部分はイソブチ
リル基で保護された。さらに、糖部分の3'-O官能性のメ
チルエステル化を避けるため、糖部分の３’および５’
ヒドロキシル両方の保護にＴＩＰＤＳ（テトライソプロ
ピルジシロキサン）が使用された。
【０００７】Sproat et al.（上記文献）およびSproat,
B.S., Iribarren, A.M., Garcia,R.G. and Beijer,
B., Nucleic Acids Research, 19:733 (1991)は2'-メチ
ルグアノシン（および2'-O-アリルグアノシン）の合成
を提出している。Sproat et al.のこれら両方の論文に
おいては、2'-O-メチルグアノシンおよび2'-O-アリルグ
アノシンの別の合成経路が示されている。彼らは従来知
られていた合成法に対してこの別の合成法を”非常に毒
性でありかつ爆発する可能性のある試薬ジアゾメタンの
使用を避け”また、”酸化銀／ヨウ化メチルを使用する
より優れている”と特徴付けている。Sproat et al.の
合成法と同じ方法がB.S. Sproat and A.I.Lamond, "2'-
O-メチルオリゴリボヌクレオチド：合成および応用”Ol
igonucleotides and Analogs, F.Eckstein編（IRL Pres
s,1991）に報告されており、2'-O-メチルリボヌクレオ
シド-3'-O-ホスホロアミダイトの合成が記載されてい
る。ここに記載されているウリジンホスホロアミダイト
合成ではアルキル化に先だって出発ヌクレオシドの塩基
および糖の両方の保護を必要としている。塩基および糖
の保護基がウリジンの適所に導入された後にのみアルキ
ル化される。アルキル化後、塩基保護基が除去され、続
いて5'-O-ジメトキシトリチル化およびホスファイト化
（phosphitylation）される。SproatおよびLamondによ
り記載されているウリジンホスホロアミダイト合成は、
塩基および糖が保護された2'-O-メチルウリジン類似体
を利用している（すなわち必要としている）。この類似
体は次に保護シチジン類似体に変換され、糖から保護基
が除去され、類似体はジメトキシトリチル化され最後に
ホスファイト化される。SproatおよびLamondの教示によ
るグアノシンホスホロアミダイト合成は、3'および5'糖
ヒドロキシル基が保護された2-アミノ-6-クロロヌクレ
オシドから出発している。このヌクレオシドは2,6-ジク
ロロ誘導体に変換される。ジクロロ化合物は次に2'-O-
アルキル化される。O-アルキル化後、ジクロロ化合物は
ジアジド中間体に変換される。ジアジド中間体は次にジ
アミノ中間体に変換される。このジアミノ中間体は次に
脱アミノ化されてグアノシン類似体となる。グアノシン
類似体の2-アミノ基は保護された後ジメトキシトリチル
化され最後にホスファイト化される。このグアノシン法
はまたSproat,et.al.,Nucleic Acids Research, 1991 1
9:733により報告されている。
【０００８】上記の合成法は複数の工程および多くの試
薬による処理を含んでいる（ウリジンに対して９の異な
った試薬処理、シチジンに対しては１０およびグアノシ
ンに対しては１２）。シチジンおよびグアノシン化合物
に対して必要とされる少なくとも一つの試薬は入手が容
易ではなく従って非常に高価な試薬である。
【０００９】別のグループは他の2'-O-アルキル化ヌク
レオシドの製造を教示している。2'-O-メチルチオメチ
ルグアノシンがHansske, F.,Madej,D.and Robins,M.J.,
Tetrahedron, 40:125 (1987)により報告されている。そ
れはグアノシンの9-β-D-アラビノフラノシルグアニン
（すなわちグアノシンのアラビノ類似体）への変換の際
の酸化工程の小副成物として産生された。2'-O-メチル
チオメチル部分の付加は酸化工程で使用したＤＭＳＯ溶
媒からのアルチファクトである。2,6-ジアミノプリンリ
ボシドの2'-O-メチルチオメチル誘導体もHansske et a
l.の論文に報告されている。それもまたＤＭＳＯ溶媒か
らのアルチファクトとして得られている。
【００１０】さらに、Gladkaya, et al., Khim. Prir.
Soedin.,1989, 4, 568,は、N1-メチル-2'-O-（テトラヒ
ドロピラン-2-イル）および2'-O-メチル グアノシンを
開示する。Sport, et al., Nucleic Acids Research, 1
991, 19, 733,は、2'-O-アリルグアノシンの製造を教示
する。グアノシンのアリル化はさらに別の合成経路を必
要とした。Iribarren, et al., Proc. Natl. Acad. Sc
i., 1990,87,7747,もまた2'-O-アリルオリゴリボヌクレ
オチドについて研究している。Iribarren, et al.は、
オリゴリボヌクレオチドに2'-O-メチル-、2'-O-アリル-
および2'-O-ジメチルアリル-置換ヌクレオチドを取り込
ませ、これらのＲＮＡ類似体のアンチセンス分析におけ
る影響を研究した。Iribarrenは、2'-O-アリル含有オリ
ゴリボヌクレオチドはＲＮＡおよびＤＮＡ特異的ヌクレ
アーゼのいずれによる消化に対しても耐性であり、ＲＮ
Ａ／ＤＮＡに二重の特異性を持つヌクレアーゼに対して
は2'-O-メチルオリゴリボヌクレオチドよりわずかに強
い耐性を示すことを見いだした。しかしながら、Iribar
renは、2'-O-ジメチルアリル含有オリゴリボヌクレオチ
ドは2'-O-メチルオリゴリボヌクレオチドと比べて相補
ＲＮＡ配列へのハイブリッド形成が劣っていることを見
いだした。従って、Iribarrenは、アルキル化ＲＮＡプ
ローブ（特に、2'-O-アリルシチジン含有オリゴリボヌ
クレオチドより優れたもの）を製造するためのさらなる
試みにおいては、５未満の炭素原子を含む2'-O-アルキ
ル基に限られるべきであることを示唆している。
【００１１】2'-O-アルキル置換ヌクレオチドを含むあ
る種のオリゴヌクレオチドは、ヒトの医薬として使用す
るための有力な候補である。長鎖アルキル基を持つもの
（すなわち４またはそれ以上の炭素原子）は特に有用で
ある。例えば、長鎖アルキル基は鎖ハイブリッド形成に
より反対側の鎖に対して官能基を適当な配位に適応させ
るであろう。従って、場合によっては、2'-O-長鎖アル
キルグアノシンヌクレオチド等の2'-O-長鎖アルキルヌ
クレオチドが非常に望ましい。大規模な治療試験での使
用および最終的にヒト医薬として使用するには、大量の
これらのオリゴヌクレオチドが合成されなければならな
い。大量のオリゴヌクレオチドのためには、オリゴヌク
レオチドの合成に使用される大量の2'-O-アルキルヌク
レオシドホスホロアミダイトが必要とされる。従って、
そのようなオリゴヌクレオチドの合成に使用される出発
ホスホロアミダイトの価格および純度の両方を考慮に入
れなくてはならない。一般的前提として、合成工程の数
が増加すると製造費用が増加する。さらに、工程の数が
増加すると品質管理の問題が増大する。この観点から、
ヌクレオシドおよびヌクレオシドホスホロアミダイトを
合成するための新規かつ改良された方法に対する強い要
望が存在することは明かである。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】2'-O-アルキル化ヌク
レオシドおよびヌクレオシド類似体の合成法を提供する
のが本発明の目的である。
【００１３】2'-O-および3'-O-アルキル化2,6-ジアミノ
プリンリボシド化合物の合成法を提供するのが本発明の
目的である。2'-O-アルキルヌクレオシドホスホロアミ
ダイトの新規かつ改良された合成法を提供するのが本発
明の目的である。
【００１４】2'-O-アルキルグアノシンホスホロアミダ
イトの新規かつ改良された合成法を提供するのが本発明
の目的である。2'-O-アルキルシチジンホスホロアミダ
イトの新規かつ改良された合成法を提供するのが本発明
の目的である。
【００１５】2'-O-アルキルウリジンホスホロアミダイ
トの新規かつ改良された合成法を提供するのが本発明の
目的である。2,6-ジアミノ-9-（2'-O-アルキル-β-D-リ
ボフラノシル）プリンホスホロアミダイトの新規かつ改
良された合成法を提供するのが本発明の目的である。
【００１６】本発明の改良されたホスホロアミダイト合
成を利用する新規かつ改良されたオリゴヌクレオチド合
成を提供するのが本発明の目的である。本明細書および
特許請求の範囲から、当業者にはこれらおよびその他の
目的が明らかになるであろう。
【００１７】
【課題を解決するための手段】本発明は構造：
【００１８】
【化６】
【００１９】I （式中ＸはＲ1−（Ｒ2）nであり；Ｒ1はＣ3−Ｃ20アル
キル、Ｃ4−Ｃ20アルケニルまたはＣ2−Ｃ20アルキニル
であり；Ｒ2はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケ
ト、カルボキシル、ニトロ、ニトロソ、ニトリル、トリ
フルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキ
ル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、
Ｏ−アリール、Ｓ−アリール、ＮＨ−アリール、Ｏ−ア
ラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミ
ノ、Ｎ−フタルイミド、イミダゾール、アジド、ヒドラ
ジノ、ヒドロキシルアミノ、イソシアネート、スルホキ
シド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリル、
アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、
レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリア
ミド、ポリアルキレングリコール、ポリエーテル、オリ
ゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、ま
たはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良する
ための基であり；およびｎは０から約６までの整数であ
る）を有する化合物を含む。
【００２０】本発明の別の実施態様においては、構造：
【００２１】
【化７】
【００２２】II （式中ＸはＲ1−（Ｒ2）nであり；Ｒ1はＣ3−Ｃ20アル
キルであり；Ｒ2はＮＨ2、Ｈ−イミダゾール、Ｎ−フタ
ルイミドであり；Ｙはヒドロキシル保護基であり；Ｚは
リン酸または活性化されたリン酸基であり；Ｑ1および
Ｑ2は独立してＨまたはグアノシン保護基であり；およ
びｎは０から約６までの整数である）を有する化合物も
提供される。
【００２３】本発明のさらに別の実施態様においては、
構造：
【００２４】
【化８】
【００２５】III （式中ＸはＲ1−（Ｒ2）nであり；Ｒ1はＣ3−Ｃ20アル
キル、Ｃ4−Ｃ20アルケニルまたはＣ2−Ｃ20アルキニル
であり；Ｒ2はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケ
ト、カルボキシル、ニトロ、ニトロソ、ニトリル、トリ
フルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキ
ル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、
Ｏ−アリール、Ｓ−アリール、ＮＨ−アリール、Ｏ−ア
ラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミ
ノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アジド、ヒドラ
ジノ、ヒドロキシルアミノ、イソシアネート、スルホキ
シド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリル、
アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、
レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリア
ミド、ポリアルキレングリコール、ポリエーテル、オリ
ゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、ま
たはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良する
ための基であり；およびｎは０から約６までの整数であ
る）を有する化合物が提供される。
【００２６】本発明には式I、IIおよびIIIの化合物のよ
うな、2'-Oおよび3'-O-モノアルキルまたは2',3'-ジ-O-
アルキル置換グアノシン化合物の製造のための簡便な方
法もまた含まれる。これまでジアゾメタンによる製造法
を除いてグアノシンの直接アルキル化は難しいことが示
されている。本発明は2,6-ジアミノ-9-（β-D-リボフラ
ノシル）プリン（すなわち2,6-ジアミノプリンリボシド
または2-アミノアデノシン）の直接2'および3'-O-アル
キル化を提供し、それは次に2'-O-アルキル化2,6-ジア
ミノプリンリボシドを脱アミノ化して対応する2'-O-ア
ルキル化グアノシンとすることにより達成される。所望
ならば、このアルキル化はヌクレオシドのヘテロ環式ま
たは糖部分のいずれにも保護基を使用することなく実施
できる。さらにメチルアルキル化生成物のみを得るであ
ろうジアゾメタンの使用と異なり、本発明で実施される
アルキル化はメチルアルキル化のみに制限されるわけで
はなく、多くのアルキル置換グアノシンおよび2,4-ジア
ミノプリンリボシド化合物を得るために使用できる。式
Ｒ−Ｌ（式中、Ｒはアルキル基であり、Ｌは脱離基であ
る）を有し本発明において使用される必要な化合物は、
市販品として入手可能であるか、文献に既知であるか、
または、既知の文献化合物と類似の方法により製造でき
る。
【００２７】本発明の２工程アルキル化法はSproat et
al.の６工程法とさらに区別される。前に参照したNucle
ic Acids Research, 18:41(1990)およびNucleic Acids
Research, 19:733(1991)の論文を参照されたい。これら
の方法においては、2-アミノ-6-クロロプリンリボシド
は最初に3'および5'位の両方が保護されなければなら
ず、2,6-ジクロロ誘導体へ変換され、6プリン位が保護
され、2'-O-メチルまたは2'-O-アリル誘導体に誘導さ
れ、2,6-ジアミノ誘導体へ変換され、3'および5'位の両
方が脱保護され、そして最終的に脱アミノ化して2'-O-
メチルまたは2'-O-アリルグアノシン生成物が得られ
る。
【００２８】本発明の方法に従うと、2,6-ジアミノ-9-
（β-D-リボフラノシル）プリンのリボフラノシル糖部
分の2'または3'（または2'および3'の両方）ヒドロキシ
ルからプロトンの除去を達成するのに十分に強い塩基の
存在下、式Ｒ−Ｌ（式中、Ｒはアルキル基であり、Ｌは
脱離基である）を有する適当な化合物により、2,6-ジア
ミノ-9-（β-D-リボフラノシル）プリン上で直接アルキ
ル化を行う。Ｒ−Ｌ基または塩基の量を化学量論量（ま
たは当量）に制限することによりアルキル化をモノアル
キル化に制限できる。もしくは過剰のＲ−Ｌ基および塩
基を使用して2'および3'位の両方を同時にアルキル化す
ることにより、ジアルキル化（2'および3'位の両方に）
が実施できる。
【００２９】理論に束縛されることを望むものではない
が、アルキル化は3'位に比べて2'位で優先することが観
察されている。一般的に2'と3'アルキル化生成物は約
７：３から約８：２の比であることが得られている（Ｔ
ＬＣにより決定された）。ＴＬＣならびに分取的規模の
クロマトグラフィーにおいて、一般的に2'生成物は3'生
成物より速いＲｆを有する。2'-O-および3'-O-生成物を
お互いにまたは2'-O-、3'-O-ジアルキル化生成物から分
離するためにこのＲｆの相違を利用することができる。
従って、2'および3'アルキル化生成物は、所望ならばシ
リカゲルクロマトグラフィー等の方法により分離でき
る。
【００３０】一般的にプロピルより長いアルキル基に対
しては、2'生成物に対する3'生成物の脱アミノ化の速度
を2'-O-および3'-O-生成物の分離にさらに利用できる。
すなわち、2'-O-および3'-O-アルキル化2,6-ジアミノ-9
-（β-D-リボフラノシル）プリンの混合物をアデノシン
デアミナーゼで脱アミノ化させる。2'-O-生成物の酵素
的脱アミノ化は3'-O-生成物の脱アミノ化より容易に起
こる。この脱アミノ化の速度の相違を利用し、より遅い
または脱アミノ化されていない3'生成物〔すなわち、2,
6-ジアミノ-9-（3'-O-アルキル化-β-D-リボフラノシ
ル）プリン〕から脱アミノ化された2'生成物（すなわ
ち、2'-O-アルキル化グアノシン）を分離することがで
きる。さらに、結晶化等の方法を用いて2'-O-アルキル
化ジアミノプリンリボシド生成物を対応する3'-O-アル
キル化ジアミノプリンリボシド生成物から分離すること
により、2'生成物を対応する3'生成物から分離した。
【００３１】アルキル化に使用される好適な塩基は水素
化ナトリウムである。別の適当な塩基を使用してもよい
が、そのような塩基は2,6-ジアミノプリンリボシド出発
物質の2'（または3'）ヒドロキシル部分からプロトンを
除去するのに十分な塩基強度を持っていなくてはならな
い。理論に束縛されることを望むものではないが、一般
的には2,6-ジアミノプリンリボシド出発物質の2'ヒドロ
キシル部分のプロトンのｐＫaよりも約１０ｐＫa大きな
ｐＫa値を持つ塩基が使用されるであろう。特に、水素
化ナトリウムのｐＫbよりも大きなｐＫbを持つ塩基が便
宜上選択されるであろう。そのような塩基はMarch,J. A
dvanced Organic Chemistry, Wiley-Interscience, Jho
n Wiley & Sons, New York,1985,の220ページ、表１に
与えられているような塩基の群から選択できる。
【００３２】本発明のアルキル化反応は典型的にはＤＭ
Ｆを溶媒として実施される。他の適した溶媒としては、
ＤＭＳＯ、Ｎ−メチルピロリドンおよびスルホロンが挙
げられる。
【００３３】好適には脱アミノ化はデアミナーゼ酵素を
使用して達成される。特に好適であるものはアデノシン
デアミナーゼである。特に使用に適したものは、Sigma
Chemical Company,St.Louis,MO、から入手可能なアデノ
シンデアミナーゼ タイプIIである。別の脱アミノ試薬
を用いてもよい。本発明の脱アミノ反応は、典型的には
有機溶媒および水性緩衝液を含む混合溶媒中で実施され
る。有機溶媒として使用するのに適しているものは、Ｄ
ＭＳＯ、Ｎ−メチルピロリドンおよびスルホロンであ
る。本発明の好適な実施態様では、脱アミノ化はＤＭＳ
Ｏを有機溶媒として使用して達成される。水性緩衝液と
しての使用に適したものは、デアミナーゼ酵素を使用す
るｐＨ範囲に適合するｐＨを持つ緩衝液である。好適で
あるものはリン酸ナトリウムおよびトリス緩衝液等のリ
ン酸緩衝液である。
【００３４】3'生成物をなくすことにより3'生成物に対
する2'生成物の割合を高めるため、2,6-ジアミノプリン
リボシドの糖部分の3'および5'ヒドロキシルの保護にＴ
ＩＰＤＳ（テトライソプロピルシロキサン）保護基を使
用する。同様に、塩基安定性の非移動性2'-O-保護基の
使用により、排他的3'生成物を得ることができる。その
ような塩基安定性の非移動性2'-O-保護基には、テトラ
ヒドロピラニル（ＴＨＰ）、4-メトキシテトラヒドロピ
ラン-4-イル（Ｍｔｈｐ）、1-［（2-クロロ-4-メチル）
フェニル-4-メトキシピペリジン-4-イル（Ｃｔｍｐ）、
トリフェニルメチル（トリチル）、モノ-、ジ-およびト
リ-メトキシトリチルおよびその他の類似の保護基が含
まれるが、それらに限られるわけではない。
【００３５】本発明に従うと、2'-O-アルキル化グアノ
シン、シチジン、およびウリジンホスホロアミダイトを
含む2'-O-アルキル化ヌクレオシドホスホロアミダイト
を製造するための改良された方法も提供される。
【００３６】本発明の方法に従うと、2'-O-アルキル化
グアノシン 3'-O-ホスホロアミダイトの製造は、2,6-ジ
アミノ-9-（リボフラノシル）プリンをアルキル化して
2,6-ジアミノ-9-（2'-O-アルキル化リボフラノシル）プ
リンを生成させ；該2,6-ジアミノ-9-（2'-O-アルキル化
リボフラノシル）プリンを脱アミノ化して2'-O-アルキ
ル化グアノシンを形成し；該2'-O-アルキル化グアノシ
ンの5'-ヒドロキシル部分を保護し；および該5'-保護2'
-O-アルキル化グアノシンの3'-位をホスファイト化する
工程を含む。
【００３７】さらに本発明に従うと、非保護シチジンを
アルキル化して2'-O-アルキル化シチジンを形成し；該
2'-O-アルキル化シチジンの5'-ヒドロキシル部分を保護
し；および該5'-保護2'-O-アルキル化シチジンの3'-位
をホスフファイト化する工程により、2'-O-アルキル化
シチジン 3'-O-ホスホロアミダイトを製造することがで
きる。
【００３８】2'-O-アルキル化ウリジン3'-O-ホスホロア
ミダイトは、ウリジンを酸化ジアルキルスズで処理して
ウリジンの2',3'-O-ジアルキルスタニレン誘導体を生成
させ；該ウリジンのスタニレン誘導体をアルキル化して
2'-O-アルキル化ウリジンを生成させ；該2'-O-アルキル
化ウリジンの5'-ヒドロキシル部分を保護し；および該
5'-保護2'-O-アルキル化ウリジンの3'-位をホスファイ
ト化する工程を含む方法により製造することができる。
【００３９】2'-O-アルキル化グアノシンの3'-O-ホスホ
ロアミダイトおよび2,6-ジアミノ-9-（2'-O-アルキル-
β-D-リボフラノシル）プリンは、２−ＮＨ2，５’−Ｏ
Ｈ保護2'-O-アルキルグアノシンまたは２−ＮＨ2、６−
ＮＨ2および５’−ＯＨ保護2,6-ジアミノ-9-（2'-O-ア
ルキル-β-D-リボフラノシル）プリンを、２−シアノエ
チルＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノクロロホスフィン等
の当業者には既知の市販品として入手可能な試薬とを反
応させることにより、本発明のいくつかの実施態様で提
供されるであろう。
【００４０】ＮＨ2部分（おのおの２−または２−およ
び６−ＮＨ2）および５’−ＯＨ部分を保護し、続いて
シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノクロロホス
フィンと反応させる等の、本分野では既知の方法によ
り、2'-O-アルキル化グアノシンおよび2'-O-アルキル-
2,6-ジアミノプリンリボシドをその３’−ＯＨ位でホス
ファイト化してホスホロアミダイトを得ることができ
る。
【００４１】ここで提供されるような本発明の化合物
は、当業者には既知の方法によりオリゴマー内に取り込
ませることができる。本発明の方法に従うと、2,6-ジア
ミノ-9-（リボフラノシル）プリンをアルキル化して2,6
-ジアミノ-9-（2'-O-アルキル化リボフラノシル）プリ
ンを生成させ；該2,6-ジアミノ-9-（2'-O-アルキル化リ
ボフラノシル）プリンを脱アミノ化して2'-O-アルキル
化グアノシンを生成させ；該2'-O-アルキル化グアノシ
ンの5'-ヒドロキシル部分を保護し；該5'-保護2'-O-ア
ルキル化グアノシンの3'-位をホスファイト化して2'-O-
アルキル化グアノシン3'-O-ホスホロアミダイトを生成
させ；およびホスホロアミダイトカップリング条件を使
用して該2'-O-アルキル化グアノシン3'-O-ホスホロアミ
ダイトをオリゴヌクレオチドの5'-ヒドロキシル部分と
カップリングさせる工程を含む方法により、オリゴヌク
レオチド内に少なくとも一つの2'-O-アルキル化グアノ
シンヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを製造する
ことができる。
【００４２】さらに本発明に従うと、オリゴヌクレオチ
ドの配列内に少なくとも一つの2'-O-アルキル化シチジ
ンヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの製造法が提
供され、該方法は、シチジンをアルキル化して2'-O-ア
ルキル化シチジンを提供し；該2'-O-アルキル化シチジ
ンの5'-ヒドロキシル部分を保護し；該5'-保護2'-O-ア
ルキル化シチジンの3'-位をホスファイト化して2'-O-ア
ルキル化シチジン 3'-O-ホスホロアミダイトを生成さ
せ；およびホスホロアミダイトカップリング条件を使用
して該2'-O-アルキル化シチジン 3'-O-ホスホロアミダ
イトをオリゴヌクレオチドの５’−ヒドロキシル部分と
カップリングさせる工程を含む。
【００４３】さらに本発明に従うと、オリゴヌクレオチ
ドの配列内に少なくとも一つの2'-O-アルキル化ウリジ
ンヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの製造法が提
供され、該方法は、ウリジンを酸化ジアルキルスズで処
理してウリジンの2',3'-O-ジアルキルスタニレン誘導体
を生成させ；該スタニレン誘導体をアルキル化して2'-O
-アルキル化ウリジンを生成させ；該2'-O-アルキル化ウ
リジンの5'-ヒドロキシル部分を保護し；該5'-保護 2'-
O-アルキル化ウリジンの3'-位をホスファイト化して2'-
O-アルキル化ウリジン 3'-O-ホスホロアミダイトを生成
させ；およびホスホロアミダイト化学を使用して該2'-O
-アルキル化ウリジン 3'-O-ホスホロアミダイトをオリ
ゴヌクレオチドの5'-ヒドロキシル部分とカップリング
させる工程を含む。
【００４４】さらに本発明に従うと、オリゴヌクレオチ
ドの配列内に少なくとも一つの2'-O-アルキル化 2,6-ジ
アミノ-9-（β-D-リボフラノシル）プリンヌクレオチド
を含むオリゴヌクレオチドの製造法が提供され、該方法
は、2,6-ジアミノ-9-（β-D-リボフラノシル）プリンを
アルキル化して2'-O-アルキル化 2,6-ジアミノ-9-（β-
D-リボフラノシル）プリンを提供し；該2'-O-アルキル
化 2,6-ジアミノ-9-（β-D-リボフラノシル）プリンの
5'-ヒドロキシル部分を保護し；該5'-保護2'-O-アルキ
ル化 2,6-ジアミノ-9-（β-D-リボフラノシル）プリン
の3'-位をホスファイト化して2'-O-アルキル化 2,6-ジ
アミノ-9-（β-D-リボフラノシル）プリン 3'-O-ホスホ
ロアミダイトを生成させ；およびホスホロアミダイト化
学を使用して該2'-O-アルキル化 2,6-ジアミノ-9-（β-
D-リボフラノシル）プリン 3'-O-ホスホロアミダイトを
オリゴヌクレオチドの5'-ヒドロキシル部分とカップリ
ングさせる工程を含む。
【００４５】本発明のオリゴマーは、少なくとも一つの
構造：
【００４６】
【化９】
【００４７】（式中ＸはＲ1−（Ｒ2）nであり；Ｒ1はＣ
3−Ｃ20アルキル、Ｃ4−Ｃ20アルケニルまたはＣ2−Ｃ
20アルキニルであり；Ｒ2はハロゲン、ヒドロキシル、
チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニトロソ、ニ
トリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、
Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジ
アルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール、ＮＨ−アリー
ル、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキ
ル、アミノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アジ
ド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、イソシアネー
ト、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィ
ド、シリル、アリール、複素環式、炭素環式、インター
カレーター、レポーター分子、コンジュゲート、ポリア
ミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエ
ーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良する
ための基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特
性を改良するための基であり；Ｔ3およびＴ5は独立して
ＯＨまたは該構造に連結されている該オリゴヌクレオチ
ドまたはオリゴヌクレオシドのさらなるヌクレオチドま
たはヌクレオシドであり；およびｎは０から約６までの
整数である）を有するサブユニットを含んでいてもよ
い。
【００４８】本発明のさらに別の実施態様においては、
本発明のオリゴマーは少なくとも一つの構造：
【００４９】
【化１０】
【００５０】（式中ＸはＲ1−（Ｒ2）nであり；Ｒ1はＣ
1−Ｃ20アルキル、Ｃ2−Ｃ20アルケニルまたはＣ2−Ｃ
20アルキニルであり；Ｒ2はハロゲン、ヒドロキシル、
チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニトロソ、ニ
トリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、
Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジ
アルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール、ＮＨ−アリー
ル、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキ
ル、アミノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アジ
ド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、イソシアネー
ト、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィ
ド、シリル、アリール、複素環式、炭素環式、インター
カレーター、レポーター分子、コンジュゲート、ポリア
ミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエ
ーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良する
ための基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特
性を改良するための基であり；Ｔ3およびＴ5は独立して
ＯＨまたは該構造に連結されている該オリゴヌクレオチ
ドまたはオリゴヌクレオシドのさらなるヌクレオチドま
たはヌクレオシドであり；およびｎは０から約６までの
整数である）を有するサブユニットを含んでいてもよ
い。
【００５１】そのようなオリゴマーおよびオリゴヌクレ
オチドは、固相合成または当業者には既知の他の手段に
より製造されるであろう。本発明の文脈において、術
語”ヌクレオシド”は互いに連結されている（標準的に
は糖上の”アノマー”炭素で）糖および塩基を示す。α
およびβ糖の両方とも本発明に包含されている。本発明
の好適な実施態様において、ヌクレオシド糖はペントフ
ラノシル糖であるが、炭素環式または4'-デオキシ-4'-
チオ糖類似体等のその他の糖も使用されるであろう。
【００５２】本発明の文脈において、術語”オリゴヌク
レオチド”または”オリゴマー”とは、天然のホスホジ
エステル結合により連結された天然に存在する塩基およ
びフラノシル基から形成されるポリヌクレオチドを示し
ている。もちろん、本発明のオリゴヌクレオチドは少な
くとも一つの2'-O-アルキルグアノシンまたはその誘導
体を含んでいるであろう。従って、この術語は実際上、
天然に存在するサブユニットまたはそれらに近い同族体
から形成された天然に存在する化学種または合成種を意
味している。術語”オリゴヌクレオチド”または”オリ
ゴマー”はまた、天然に存在するオリゴヌクレオチドと
類似の部分を有するが、天然に存在しない部分も有する
部分も表している。従って、オリゴヌクレオチドは変形
された糖、変形された塩基部分または変形された糖間結
合を有していてもよい。これらの例としては、ホスホロ
チオエートおよび当該分野での使用が知られているその
他の硫黄含有化学種がある。いくつかの好適な実施態様
に従うと、オリゴヌクレオチドの少なくともいくつかの
ホスホジエステル結合は、オリゴヌクレオチドの安定
性、またはメッセンジャーＲＮＡが位置している細胞の
領域内へ浸透するオリゴヌクレオチドの能力を増強させ
るように機能する構造により置換されている。そのよう
な置換は、好ましくはホスホロチオエート結合、ホスホ
トリエステル、メチルホスホネート結合、短鎖アルキル
またはシクロアルキル構造または短鎖複素原子または複
素環式構造を含む。その他の好適な置換は、ＣＨ2−Ｎ
Ｈ−Ｏ−ＣＨ2、ＣＨ2−Ｎ（ＣＨ3）−Ｏ−ＣＨ2、ＣＨ
2−Ｏ−Ｎ（ＣＨ3）−ＣＨ2、ＣＨ2−Ｎ（ＣＨ3）−Ｎ
（ＣＨ3）−ＣＨ2およびＯ−Ｎ（ＣＨ3）−ＣＨ2−ＣＨ
2構造（ホスホジエステル糖間結合がこれらの構造で置
き換えられている）である。モルホリノ構造もまた好適
である。Summerton,J.EおよびWeller,D.D.,1991年7月23
日に発行された米国特許第5,034,506号。蛋白質−核酸
（ＰＮＡ）主鎖等の他の好適な実施態様においては、オ
リゴヌクレオチドのホスホジエステル主鎖はポリアミド
主鎖に置き換えられており、塩基は直接的にまたは間接
的にポリアミド主鎖のアザ窒素原子に結合されている。
P.E.Nielsen,et al.,Science 1991 254 1497。別の好適
な実施態様に従うと、ホスホジエステル結合は同時に実
質的に非イオン性および非キラルであるその他の構造ま
たは、キラルおよび鏡像異性体に特異的である構造で置
換されている。当業者は本発明の実施に使用するための
他の結合を選択することができるであろう。
【００５３】オリゴヌクレオチドはまた、少なくともい
くつかの修飾された塩基形を含む化学種を含むことがで
きる。従って、天然で通常観察される以外のプリンおよ
びピリミジンを用いてもよい。適した塩基は米国特許第
3,687,808号に記載されているが、それらに制限される
わけではない。同様に、本発明の本質的教義から離れな
い限り、本発明の2'-O-アルキル修飾に加えて、ヌクレ
オチドサブユニットのフラノシル部上での修飾もまた有
効であろう。そのような修飾の例は2'-ハロゲン-置換ヌ
クレオチドである。本発明において有用である糖部分の
２’位での修飾のいくつかの特定の例は、ＯＨ、ＳＨ、
ＳＣＨ3、Ｆ、ＯＣＮ、Ｏ（ＣＨ2）nＮＨ2、Ｃｌ、Ｂ
ｒ、ＣＮ、ＣＦ3、ＯＣＦ3、Ｓ−または、Ｎ−アルキ
ル；Ｓ−または、Ｎ−アルケニル；ＳＯＣＨ3、ＳＯ2Ｃ
Ｈ3；ＯＮＯ2；ＮＯ2；Ｎ3；ＮＨ 2；ヘテロシクロアル
キル；ヘテロシクロアルカリール；アミノアルキルアミ
ノ；ポリアルキルアミノ；置換シリル、ＲＮＡ切断基；
コンジュゲート；レポーター基；インターカレーター；
オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための
基；またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改
良するための基、および同様な特性を持つその他の置換
基である。シクロブチル等の糖模倣体もまたペントフラ
ノシル基の代わりに使用できる。オリゴヌクレオチドは
本発明の精神に矛盾しないかぎりその他の修飾を含んで
いてもよい。そのようなオリゴヌクレオチドは天然のオ
リゴヌクレオチドとは構造的には異なっているにもかか
わらず、機能的には交換できるものとして最もよく表現
される。オリゴヌクレオチド中のサブユニットとして有
効に機能する限り、全てのそのようなオリゴヌクレオチ
ドは本発明に包含される。
【００５４】好ましくは、本発明のオリゴヌクレオチド
は約６から約５０ヌクレオチドの長さである。本発明の
より好適な実施態様においては、オリゴヌクレオチドは
約１２から約２０ヌクレオチドの長さである。
【００５５】さらに本発明で使用される限り、術語”ア
ルキル化”とは本発明のヌクレオシドホスホロアミダイ
トの前駆体へのアルキル、アルケニルまたはアルキニル
部分、好ましくはアルキル部分の付加を意味している。
ヌクレオシド糖の２’位のアルキル化は、エーテル結合
を介して糖の２’位へアルキル部分を連結する。
【００５６】好適なアルキル部分には、非置換および置
換直鎖Ｃ1−Ｃ20アルキルおよび非置換および置換分岐
鎖Ｃ1−Ｃ20アルキルが含まれる。好適なアルケニル基
には非置換および置換直鎖Ｃ2−Ｃ20アルケニルおよび
非置換および置換分岐鎖Ｃ2−Ｃ20アルケニルが含まれ
る。好適なアルキニル基には非置換および置換直鎖Ｃ2
−Ｃ20アルキニルおよび非置換および置換分岐鎖Ｃ2−
Ｃ20アルキニルが含まれる。従って、好適なアルキル化
基には、Ｃ1からＣ20の直鎖または分岐鎖低級アルキル
または置換低級アルキル、Ｃ2からＣ20の直鎖または分
岐鎖低級アルケニルまたは置換低級アルケニル、Ｃ2か
らＣ20の直鎖または分岐鎖低級アルキニルまたは置換低
級アルキニルが含まれるが、それらに制限されるわけで
はない。
【００５７】本発明のアルキル基には、メチル、エチ
ル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチ
ル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシ
ル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサ
デシル、オクタデシル、ノナデシルおよびエイコシル、
イソプロピル、２ーブチル、イソブチル、２ーメチルブ
チル、イソペンチル、２ーメチルーペンチル、３−メチ
ルペンチル、２−エチルヘキシルおよび２−プロピルペ
ンチル等のＣ1−Ｃ20直鎖および分岐鎖アルキルが含ま
れるがそれらに制限されるわけではない。アルケニル基
にはビニル、アリル、およびクロチルを含む（しかしそ
れらに制限されるわけではない）、上記アルキル基から
誘導される不飽和基が含まれるが、それらに制限される
わけではない。アルキニル基にはエチニルおよびプロパ
ルギルを含む（しかしそれらに制限はされるわけではな
い）、上記アルキル基から誘導される少なくとも一つの
三重結合を含む不飽和基が含まれる。
【００５８】上記の置換基にはハロゲン（Ｃｌ，Ｂｒ，
Ｆ）、ヒドロキシル（ＯＨ）、チオール（ＳＨ）、ケト
（Ｃ＝Ｏ）、カルボキシル（ＣＯＯＨ）、ニトレート
（ＯＮＯ2）、ニトロ（ＮＯ2）、ニトロソ（ＮＯ）、ニ
トリル（ＣＮ）、トリフルオロメチル（ＣＦ3）、トリ
フルオロメトキシ（ＯＣＦ3）、Ｏ−アルキル、Ｓ−ア
ルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アラル
キル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ（Ｎ
Ｈ2）、アジド（Ｎ3）、ヒドラジノ（ＮＨＮＨ2）、ヒ
ドロキシルアミノ（ＯＮＨ2）、イソシアネート（ＯＣ
Ｎ）、スルホキシド（ＳＯ）、スルホン（ＳＯ2）、ス
ルフィド（Ｓ−）、ジスルフィド（Ｓ−Ｓ）、シリル、
複素環式、脂環式、炭素環式、インターカレーター、レ
ポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミ
ド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌ
クレオチドの薬力学的特性を改良するための基、および
オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するため
の基が含まれるが、必然的にそれらに制限されるわけで
はない。そのような化合物には、3-ペンテン-2-オン、3
-メチル-2-ブタノール、2-シアノオクチル、3-メトキシ
-4-ヘプタナール、3-ニトロブチル、4-イソプロポキシ
ドデシル、4-アジド-2-ニトロデシル、5-メルカプトノ
ニル、4-アミノ-1-ペンテニルならびにその他の置換基
が含まれる。これらの置換基はブロックまたは保護され
た形で導入し、後に脱保護して元の置換化合物にするこ
とができる。例えば、アミノ置換の保護形としてのフタ
ルイミド基の使用が以下に例示されている。
【００５９】その他の適した置換基には、コレステロー
ル、リン脂質、ビオチン、フェナントロリン、フェナジ
ン、フェナントリジン、アントラキノン、アクリドン、
ピレン、スチルベン、オキサゾロ−ピリドカルバゾー
ル、アントラキノン、フェナトリジン、フェナジン、ア
ジドベンゼン、ソラーレン、ポルフィリン、コール酸、
葉酸、フルオレセイン、ローダミン、クマリンおよび色
素類を含むインターカレーター、レポーター基、レポー
ター酵素およびコンジュゲート；ステロイド、親油性分
子、ペプチド、蛋白質、ビタミン、ＲＮＡ切断複合体、
金属キレーター、アルキル化剤および架橋剤が含まれ
る。
【００６０】一つの特に好適である置換基はＣＦ3であ
る。さらに特に好適な置換基はフタルイミドおよびイミ
ダゾールである。先に指摘したごとく、フタルイミド基
の使用は保護されたアミノ官能性をアルキル基上に導入
することを可能にする。オリゴヌクレオチド合成の中間
体として本発明に従って製造されたグアノシン類似体を
利用すると、オリゴヌクレオチド合成完了後、フタルイ
ミド基を除去して、オリゴヌクレオチド配列内のグアノ
シンヌクレオチドにつなぎ留められたアミノ官能性を得
ることができる。アルキル官能性上の置換基としてのイ
ミダゾール部の使用は、オリゴヌクレオチド配列内のグ
アノシンヌクレオチド上に示唆された核酸切断官能性
（イミダゾール）を導入することになる。
【００６１】アリール基にはフェニル、トリル、ベンジ
ル、ナフチル、アントラシル、フェナントリル、ピレニ
ルおよびキシリルが含まれるが、それらに制限されるわ
けではない。ハロゲンにはフッ素、塩素および臭素が含
まれる。好適な複素環式基にはイミダゾール、テトラゾ
ール、トリアゾール、ピロリジン、ピペリジン、ピペラ
ジンおよびモルホリンが含まれるが、それらに制限され
るわけではない。アミンには一級およびニ級アミンおよ
びフタルイミドのような”マスクされたアミン”を含
む、上記すべてのアルキル、アルケニル、アルキニル、
およびアリール基のアミンが含まれる。アミンにはま
た、ポリアルキルアミノ化合物およびアミノプロピルア
ミンのようなアミノアルキルアミン、およびさらにイミ
ダゾール−１，２ または４−イル−プロピルアミンの
ような複素環−アルキルアミンを含むことも意味するつ
もりである。ＲＮＡ切断複合体とは、例えば、インター
カレーターまたはＲＮＡの小溝（minor groove）に結合
する基であろう。インターカレーターとは、オリゴヌク
レオチドの近くの塩基間にそれ自身を挿入する分子であ
る。レポーター分子とは、全体の分子の同定を視覚的に
またはその他の方法で助ける分子である。架橋剤は効果
的に二つの基を連結する。
【００６２】本発明に適した脱離基には塩素、臭素およ
びヨウ素等のハライド、トシル、ブロシル、ノシル、メ
シルおよびトリフィル等のスルホネートおよびオキソニ
ウムイオンが含まれる。本発明の好適な実施例におい
て、脱離基はハライドである。さらにその他の適した脱
離基が当業者にはよく知られている。
【００６３】本発明の方法に従うと、アルキル化は塩
基、好ましくは水素化ナトリウム等の水素化金属の存在
下で好適に実施される。ウリジンの2',3'-O-ジアルキル
スタニレン誘導体のアルキル化は、金属ハライド等の塩
の存在下で好適に実施される。本発明のいくつかの実施
態様においてはフッ化セシウムおよびヨウ化ナトリウム
が好適である。さらに、5'ヒドロキシル保護基として好
適であるのはジメトキシトリチル基である。ホスファイ
ト化試薬は好適にはビス-N,N-ジイソプロピルアミノシ
アノエチルホスファイトであり、ホスファイト化反応は
好適にはN,N-ジイソプロピルアミノ-ヒドロテトラゾリ
ド（hydrotetrazolide）の存在下で実施される。
【００６４】ウリジンのアルキル化を達成するには、2'
3'-O-（ジブチルスタニレン）ウリジンがアルキル化さ
れる。ジブチルスタニレン誘導体はWagner,D., Verheyd
en,J.P.H. and Moffat,J.G., J. Org. Chem. 1974, 39:
24の方法を使用して酸化ジブチルスズとの反応によりウ
リジンから一工程で製造された。これらの著者により指
摘されているごとく、2'3'-ジ-O-（ジブチルスタニレ
ン）ヌクレオシドはアルキル化に対して活性化されてい
る。ジブチルスタニレン誘導体を用いることにより、ウ
ラシル塩基を同時にアルキル化する事なく糖ヒドロキシ
ルのアルキル化が達成される。従って、ジブチルスタニ
レン基は保護基としてではなく活性化基として働いてい
る。
【００６５】N4-ベンゾイル-5'-O-（4,4'-ジメトキシト
リフェニルメチル）-2'-O-メチルシチジン 3'-O-β-シ
アノエチル-N,N-ジイソプロピルアミノホスホロアミダ
イトの合成には、中間体N4-ベンゾイル-2'-O-メチルシ
チジンの製造に二つの方法が比較された。方法ＡではＴ
ＩＰＳ−Ｃｌ試薬で3'-5'部位を保護して2'位上でのみ
メチル化を可能とする。方法Ｂ（本発明の好適な方法）
ではシチジンを直接メチル化し、続いて得られた2'およ
び3'異性体の混合物を分離する。全収率は同程度であ
る。方法Ｂを用いると、2'-O-異性体は混合物から結晶
化可能であり、濾過し、残った母液は2'および3'異性体
の分離に先だってジメトキシトリチル化工程に供する
か、もしくは、アルキル化シチジンの全部をジメトキシ
トリチル化工程に供し、2'異性体の分離はこの工程後に
のみ行うことができる。
【００６６】グアノシンのアルキル化の達成には、2',6
-ジアミノプリンが例えば1992年10月27日に出願された
代理人摘要録番号ISIS-710に記載されている方法により
アルキル化される。
【００６７】本発明のホスホロアミダイトのアミノ部分
は、そのようなホスホロアミダイトに対して現在使用さ
れている種々のアミンから選択できる。そのようなアミ
ンには種々の米国特許（主にM.Caruthersおよびその共
同研究者）に記載されているように脂肪族およびヘテロ
アリールアミンの両方が含まれる。これらの特許には19
87年5月26日に発行された米国特許第4,668,777号、1984
年7月3日に発行された第4,458,066号、1983年11月15日
に発行された第4,415,732号、1985年2月19日に発行され
た第4,500,707号（これらは全てここに参照文献として
引用されている）が含まれる。一つの好適なアミノ基は
ジイソプロピルアミノである。
【００６８】ホスホロアミダイトのアミノ部分に加え、
ホスホジエステルおよびホスホロチオエート結合に対し
て追加のリン保護基が使用される。一つの好適な保護基
はシアノエチル基である。その他のリン保護基としては
メトキシおよび2-（メチルスルホニル）エチルが挙げら
れる。さらに、通常ホスホロアミダイトカップリング化
学に対して活性化剤が使用される。一つの好適な活性化
剤はN,N-ジイソプロピルアミノヒドロテトラゾリドであ
る。これらの機能を果たすその他の適切な基は先に示し
た特許ならびに1988年2月16日に発行された米国特許第
4,725,677号およびBerner,S., Muhlegger,K.,and Selig
er, H., Nucleic Acids Research 1989,17:853; Dahl,
B.H., Nielsen,J. and Dhal,O., Nucleic Acids Resear
ch 1987,15:1729; および Nielson,J. Marugg,J.E., Va
n Boom,J.H., Honnens,J., Taagaard,M. and Dahl,O.,
J. Chem.Research 1986, 26（これらは全てここに参照
文献として引用されている）に記載されている。
【００６９】ホスホロチオエート結合での使用に対して
はボウケージ試薬がBeaucage,S.L.and Caruthers,M.H.,
Tetrahedron Letters 1981, 22:1859ならびにZon,G. a
ndStec,J., Phosphorothioate oligonucleotides: Olig
onucleotides and AnalogsAPractical Approach; Eckst
ein,F. Ed.; IRL Press, Oxford, 1991（元素状硫黄に
よる硫化もまた記載されている）に記載されている。
【００７０】アンチセンス療法では標的ＲＮＡまたはＤ
ＮＡと特異的にハイブリッド形成可能なオリゴヌクレオ
チドが使用される。本発明のオリゴヌクレオチドは好適
には標的領域に特異的にハイブリッド形成可能である。
ここで”特異的にハイブリッド形成可能”とは標的ＤＮ
ＡまたはＲＮＡと安定なデュープレックスを形成するこ
とができることを意味している。標的ＤＮＡまたはＲＮ
Ａとの結合、または安定なデュープレックス形成によ
り、アンチセンスオリゴヌクレオチドはこれらの核酸の
遺伝的発現を選択的に阻害でき、または標的ＤＮＡまた
はＲＮＡの破壊または遺伝子発現の活性化等のいくつか
の他の出来事を誘導することができる。標的とされたＲ
ＮＡの破壊はＲＮアーゼＨ活性化またはオリゴヌクレオ
チドへの鎖切断基の連結により達成することができる。
アンチセンス療法は本分野では既知である。例えば、”
乳頭腫ウイルスのアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害
剤”と題され1991年12月3日に出願されたPCT/US91/0572
0および”ヘルペスウイルスの影響を調節するためのオ
リゴヌクレオチド療法”と題され1991年2月25日に出願
されたPCT/US91/01327を参照されたい。
【００７１】本発明のいくつかの実施態様では、本発明
の化合物のオリゴヌクレオチド部分は標的配列と少なく
とも６０％は相補的である。本発明の好適な実施態様で
は、本発明の化合物のオリゴヌクレオチド部分は標的配
列と少なくとも８０％は相補的である。標的配列に対し
本発明の化合物のオリゴヌクレオチド部分が１００％相
補的であるのが最も好適である。本発明の好適な実施態
様においては、オリゴヌクレオチド部分はカンジダ（Ca
ndida）、乳頭腫ウイルス、エプスタイン バーウイル
ス、ライノウイルス、肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイ
ルス、単純ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス
およびサイトメガロウイルスからのＤＮＡまたはＲＮＡ
と特異的にハイブリッド形成することができる。
【００７２】選択された蛋白質をコードしている選択さ
れたＲＮＡまたはＤＮＡ配列と、該蛋白質をコードして
いる該選択されたＲＮＡまたはＤＮＡ配列に特異的にハ
イブリッド形成可能なヌクレオチド塩基配列を有する本
発明の2'-O-アルキルグアノシンまたは2,6-ジアミノプ
リン含有オリゴヌクレオチドとを接触させることによ
り、本発明の2'-O-アルキルグアノシン含有オリゴヌク
レオチドおよび2,6-ジアミノプリン含有オリゴヌクレオ
チドを蛋白質の産生の調節に使用することができる。
【００７３】本発明のオリゴヌクレオチドは診断、治療
および研究試薬として使用できる。治療に使用するため
には、望ましくない蛋白質の産生により特徴づけられる
疾患を持つ動物と、該蛋白質をコードしている選択され
たＲＮＡまたはＤＮＡ配列に特異的にハイブリッド形成
可能なヌクレオチド塩基配列を有する本発明のオリゴヌ
クレオチドとを接触させる。
【００７４】
【実施例】以下の実施例は本発明を例示しているが、本
発明を制限するものではない。種々の実施例において、
命名4,4'-ジメトキシトリフェニルメチルおよびジメト
キシトリチルは本発明の種々のヌクレオシドおよびヌク
レオチドの5'-ヒドロキシル部分上に位置するＤＭＴ保
護基を参照するために同じ意味で使用される。
【００７５】ＮＭＲスペクトルは下記の装置で測定され
た：1Ｈ−ＮＭＲ：Varian Gemini-200(199.975 MHz),13
Ｃ−ＮＭＲ：Varian Gemini-200(50.289 MHz)。ＮＭＲ
スペクトルは重水素化クロロホルム（テトラメチルシラ
ンを内部標準として）またはジメチルスルホキシドーｄ
6を溶媒として用いて記録した。以下の略号が個々のシ
グナルの多重度を示している：ｓ＝シングレット、ｄ＝
ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、ＡＢ
ｑ＝ａｂカルテット、ｍ＝マルチプレット、ｄｄ＝ダブ
ルダブレット、ｂｒ ｓ＝ブロードなシングレット。マ
ススペクトルは、ファブイオン化（7 kV Xe 原子）を用
いVG 70-SEQ装置（VG analytical,Fisons)により得られ
た。カラムクロマトグラフィーのための溶媒比は容量／
容量により与えられている。特に指定しない限り、溶媒
の留去は真空下（60トール）３０℃で実施された。融点
は未補正のまま報告されている。
【００７６】実施例１ 2,6-ジアミノ-9-（β-D-リボフラノシル）プリン Robins,M.J.,Hanske,F.およびBeriner,S.E., Can. J. C
hem.,59:3360(1981)により記載されている方法の改良法
に従って、グアノシン水和物（49g、Aldrich Chemical
Co.）、トルエン（200ml），ヘキサメチルジシラザン
（160ml、4.3当量）およびトリフルオロメタンスルホン
酸（3.7ml）をステンレス鋼パールボンベに入れる。ボ
ンベを密封し、１７０℃の油浴に約１／３沈めて５日間
加熱する。ボンベはドライアイスーアセトン中で冷却し
て開いた。内容物はメタノール（ＭｅＯＨ）を用いて２
リットルの丸底フラスコに移し、溶媒はBuchiiエバポレ
ーターで蒸発させた。残渣に１：１ Ｈ2Ｏ／ＭｅＯＨ
（600ml）を加え生じる褐色の懸濁液は４ー５時間還流
した。得られた懸濁液はBuchiiエバポレーターで蒸発さ
せてメタノールを除去した（約１／２の容量まで）。追
加のＨ2Ｏ（約300ml）を加え、混合物を加熱して活性炭
処理し、セライト濾過パッドを通して濾過した。冷却に
より結晶が生成した。濾過して固形物を単離し、Ｈ2Ｏ
で洗浄して真空下９０℃で乾燥すると生成物を黄褐色固
形物として得た（43.7g、収率８９％）。この化合物の
ＵＶおよびＮＭＲスペクトルを文献値と比較した。
【００７７】Robins, et al（上記文献）の方法のこの
変法は、シラザン試薬および出発物質のグアノシン水和
物に水和されている水から反応系中でアンモニア分子が
発生されるので反応混合物に液体アンモニアを使用する
必要がない。さらに、クロロトリメチルシランの使用
（反応を無水条件下で実施し、予備的エバポレーション
または、パールボンベの開放および再密封を乾燥窒素雰
囲気下で行う必要がある）が必要とされない。
【００７８】実施例２ 2,6-ジアミノ-9-（2'-O-プロピル-β-D-リボフラノシ
ル）プリンおよび2,6-ジアミノ-9-（3-O-プロピル-β-D
-リボフラノシル）プリン 乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（150ml）に溶解
した2,6-ジアミノ-9-（β-D-リボフラノシル）プリン
（10.5g）に水素化ナトリウム（ＮａＨ）（2.1g）を加
えた。１０分間撹拌後、ヨードプロパン（6ml）を加え
た。この溶液を４５分間室温で撹拌した後さらにＮａＨ
（600mg）を添加した。反応混合物は一夜撹拌し、エタ
ノール（ＥｔＯＨ）（5ml）の添加により反応を停止さ
せた。反応混合物は真空下蒸発させ、残渣を１０％Ｍｅ
ＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2に懸濁し、５→１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ
2Ｃｌ2を溶出液として用いるシリカゲルクロマトグラフ
ィーにより精製した。2',3'-ジ-O-プロピル生成物が最
初に溶出し、続いて2'-O-プロピル生成物および次ぎに
3'-O-プロピル生成物が溶出した。2'-O-プロピル生成物
を含む分画を集め、溶媒を留去すると粗発泡体を得た。
この発泡体をＨ2Ｏ（40ml）から結晶化させ、冷Ｈ2Ｏで
洗浄して乾燥させると2.9gの2'-O-プロピル化合物が得
られた。母液を蒸発させて再クロマトグラフィーを行
い、結晶化させるとさらに2.4gの2'-O-プロピル化合物
が得られた。第二の母液を蒸発させると、4gの2'および
3'-O-プロピル化合物の混合物が油状物として得られ
た。主生成物として3'-O-プロピル生成物を含む分画を
蒸発させ、残渣を水から結晶化させた。（2',3'-ジ-O-
プロピル化合物の単離および同定は下記実施例１７を参
照されたい。）2,6-ジアミノ-9-（2'-O-プロピル-β-D-
リボフラノシル）プリン1 Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ 6） δ ０．７６（ｔ，３，
ＣＨ 3），１．４（ｔｑ，２，ＣＨ 2），３．３（ｍ，
１，Ｈ−５''，＋ＨＤＯ），３．６５−３．４５（ｍ，
３，Ｈ−５’，Ｏ−ＣＨ 2），３．９（ｍ，１），４．
２５（ｂｒ ｍ，１），４．３８（ｄｄ，１），５．１
（ｂｒ ｄ，１，３’−ＯＨ），５．４５（ｂｒｔ，
１，５’−ＯＨ），５．７５（ｂｒ ｓ，２，６−Ｎ
Ｈ 2），５．３８（ｄ，１，Ｈ−１’），６．７７（ｂ
ｒ ｓ，２，２−ＮＨ 2）および７．９５（ｓ，１，Ｈ−
８）．元素分析 Ｃ13Ｈ20Ｎ6Ｏ4・1/2Ｈ2Ｏとして、計
算値：Ｃ，４６．９１；Ｈ，６．２；Ｎ，２５．２５、
実測値：Ｃ，４７．０９；Ｈ，６．３７；Ｎ，２５．３
３。
【００７９】2,6-ジアミノ-9-（3'-O-プロピル-β-D-リ
ボフラノシル）プリン1 Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ 6） δ ０．７５（ｔ，３，
ＣＨ 3），１．４（ｔｑ，２，ＣＨ 2），３．２７−３．
５（ＡＢＸ ２，Ｏ−ＣＨ 2−），３．５および３．６
（ＡＢＸ，２，Ｈ−５’），３．９（ｍ，１），４．２
２（ｍ，１），４．３５（ｍ，１），５．１（ｂｒ
ｄ，１，２’−ＯＨ），５．４５（ｂｒ ｔ，１，５’
−ＯＨ），５．７５（ｂｒ ｓ，２，６−ＮＨ 2），５．
８（ｄ，１，Ｈ−１’），６．８（ｂｒ Ｓ，２ＣＨ 2，
２−Ｈ 2）および７．９５（Ｓ，１，Ｈ−８）。
【００８０】実施例３ 2'-O-プロピルグアノシン 2,6-ジアミノ-9-（2'-O-プロピル-β-D-リボフラノシ
ル）プリンおよび2,6-ジアミノ-9-（3'-O-プロピル-β-
D-リボフラノシル）プリンの混合物（4.6g）およびアデ
ノシンデアミナーゼ（200mg, Sigma Chemicals タイプI
I）を0.1Mトリス緩衝液（150ml,pH7.4）、ＤＭＳＯ（10
0ml）および0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（10ml）中で
一夜室温で撹拌した。さらに0.1Mリン酸ナトリウム緩衝
液（30ml）およびＤＭＳＯ（20ml）に溶解したアデノシ
ンデアミナーゼ（140mg）を加え、反応液をさらに２４
時間撹拌した。真空下溶媒を蒸発させ、残渣を５→２０
％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いるシリカゲルフラッシュ
クロマトグラフィーを行った。生成物含有分画を真空下
蒸発させ、Ｈ2Ｏから結晶化すると2.6gの生成物を得
た、ｍ．ｐ．＞２７０℃分解。1Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ
−ｄ 6） δ ０．７５（ｔ，３，ＣＨ 3），１．４２（ｔ
ｑ，２，ＣＨ 2），３．３−３．６（ｍ，４，Ｈ−
５’，Ｏ−ＣＨ2），３，８５（ｍ，１），４．２
（ｍ，１），４．２３（ｍ，１），５．１０（ｔ，１，
５’−ＯＨ），５．１３（ｄ，１，３’−ＯＨ），５．
７５（ｄ，１，Ｈ−１’），６．４５（ｂｒ Ｓ，２，
ＮＨ 2），７．９５（ｓ，１，Ｈ−８） および １０．
６７（ｂｒ ｓ，１，ＮＨ）。元素分析 Ｃ13Ｈ19Ｎ5Ｏ5
として、計算値：Ｃ，４７．９９；Ｈ，５．８９；Ｎ，
２１．５３ 実測値：Ｃ，４７．９０，Ｈ，５．８５；
Ｎ，２１．４４。
【００８１】実施例４ N2-イソブチリル-2'-O-プロピルグアノシン ピリジン（50ml）に溶解した2'-O-プロピルグアノシン
（3.6g）を氷浴で冷却し、塩化トリメチルシリル（8.4m
l,６当量）を加えた。反応混合物を３０分間撹拌し塩化
イソブチリル（5.8ml,５当量）を加えた。反応液を４時
間撹拌しその間に室温まで暖めた。溶液を冷却し、Ｈ2
Ｏ（10ml）を加えさらに３０分間撹拌した。濃ＮＨ4Ｏ
Ｈ（10ml）を加え、溶液は真空下蒸発させた。残渣は生
成物の溶出に１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いるシリ
カゲルクロマトグラフィーにより精製した。生成物含有
分画を蒸発させ、２．５ｇの生成物を発泡体として得
た。分析用試料はＣＨ2Ｃｌ2→６％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃ
ｌ2で溶出するシリカでの再クロマトグラフィーを行っ
た。1Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ 6） δ ０．７５（ｔ，
３，ＣＨ 3），１．１３［ｄ，６，ＣＨ（ＣＨ 3）2］，
１．４（ｍ，２，ＣＨ 2），２．７５［ｍ，１，ＣＨ
（ＣＨ 3）2］，３．５２（ｍ，６，ＯＣＨ２），３．３
６および３．６（ＡＢＸ，２，Ｈ−５’），３．９５
（ｍ，１），４．２６（ｍ，１），４．３３（ｍ，
１），５．０７（ｔ，１，５’−ＯＨ），５．１８
（ｄ，１，３’−ＯＨ），５．９（ｄ，１，Ｈ−
１’），８．２５（ｓ，１，Ｈ−８），１１．６５（ｂ
ｒ ｓ，１，ＮＨ）および１２．１（ｂｒ ｓ，１，Ｎ
Ｈ）。元素分析Ｃ17Ｈ25Ｎ5Ｏ6・1/2Ｈ2Ｏとして、計算
値：Ｃ，５０．４９；Ｈ，６．４８；Ｎ，１７．３２
実測値：Ｃ，５０．８１；Ｈ，６．６２；Ｎ，１７．０
４。
【００８２】実施例５ N2-イソブチリル-5'-ジメトキシトリチル-2'-O-プロピ
ルグアノシン N2-イソブチリル-2'-O-プロピルグアノシン（2.64g）を
ピリジンと共沸させた後ピリジン（180ml）に可溶化し
た。室温で撹拌しながら塩化ジメトキシトリチル（2.4
g,1.1当量）およびジメチルアミノピリジン（50mg）を
加えた。反応混合物は一夜撹拌した後真空下蒸発させ
た。残渣をＣＨ2Ｃｌ2／２ｘ希Ｎａ2ＣＯ3に分配させ
た。有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、蒸発させた。残渣
はシリカゲルクロマトグラフィー（１：１ ＥｔＯＡｃ
／Ｈｅｘ→５％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ，１％ＴＥＡ）に
より精製し、４．１ｇの生成物を得た。1Ｈ ＮＭＲ
（ＤＭＳＯ−ｄ 6） δ ０．７８（ｔ，３，ＣＨ 3），
１．１２［ｄ，６，ＣＨ（ＣＨ 3）2］，１．４６（ｍ，
２，ＣＨ 2），２．７５［ｍ，１，ＣＨ（ＣＨ 3）2］，
３．３５および３．５５（ＡＢＸ，２，Ｈ−５’），
３．７３（ｓ，６，ＯＣＨ 2），４．０（ｍ，１），
４．３（ｍ，１），４．４（ｍ，１），５．１８（ｄ，
１，３’−ＯＨ），５．９３（ｄ，１，Ｈ−１’），
６．８，７．２，７．３６（ｍ，１３，ＤＭＴｒ），
８．１３（ｓ，１，Ｈ−８），１１．６３（ｂｒ ｓ，
１，ＮＨ）および１２．１（ｂｒ ｓ，１，ＮＨ）。元
素分析 Ｃ38Ｈ42Ｎ5Ｏ8・Ｈ 2Ｏとして、計算値：Ｃ，６
３．８３；Ｈ，６．２０；Ｎ，９．８０ 実測値：Ｃ，
６４．２２；Ｈ，６．３５；Ｎ，９．５５。
【００８３】実施例６ N2-イソブチリル-5'-ジメトキシトリチル-2'-O-プロピ
ルグアノシン 3'-β-シアノエチル-N,N-ジイソプロピル
ホスホロアミダイト N2-イソブチリル-5'-ジメトキシトリチル-2'-O-プロピ
ルグアノシン（4.1g）、ビス-（N,N-ジイソプロピルア
ミノ）-2-シアノエチルホスファイト（3.7ml,2当量）お
よびN,N-ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（0.
5g,0.5当量）のＣＨ2Ｃｌ2溶液を室温で一夜撹拌した。
溶液を希Ｎａ2ＣＯ3続いて希Ｎａ2ＣＯ3／ＮａＣｌと分
配させ、ＭｇＳＯ4で乾燥した。真空下溶媒を蒸発さ
せ、残渣はシリカゲルクロマトグラフィー（120g,１％
ＴＥＡを含むＥｔＯＡｃ）により精製し、５．２ｇの生
成物を発泡体として得た。31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ
１５０．５，１５０．８。
【００８４】実施例７ 2,6-ジアミノ-9-（2'-O-ペンチル-β-D-リボフラノシ
ル）プリンおよび2,6-ジアミノ-9-（3'-O-ペンチル-β-
D-リボフラノシル）プリン 実施例２の方法により、2,6-ジアミノ-9-（β-D-リボフ
ラノシル）プリン（10g）が水素化ナトリウム（1.7g,1.
2当量）およびブロモペンタン（5.3ml,1.2当量）のＤＭ
Ｆ（90ml）溶液で処理された。シリカゲルクロマトグラ
フィーにより以下の化合物が得られた。最初に溶出する
成分（同定はされていないが2,3-ジ-（O-ペンチル）化
合物と信じられる）は油状物として単離された（700m
g）。発泡体として単離された次の成分（3.3g）がＭｅ
ＯＨから結晶化され２．８ｇの2,6-ジアミノ-9-（2'-O-
ペンチル-β-D-リボフラノシル）プリンを得た。固形物
として単離された第三の成分（200mg）はＭｅＯＨから
結晶化され８０ｍｇの2,6-ジアミノ-9-（3'-O-ペンチル
-β-D-リボフラノシル）プリンを得た。第一および第二
の成分の混合物を含む分画を蒸発させ、残渣をＭｅＯＨ
から結晶化させてさらに９００ｍｇの2'-O-化合物を得
た。別の分画から2'-O-ペンチルおよび3'-O-ペンチル化
合物の混合物を１．２ｇ得た。
【００８５】2,6-ジアミノ-9-（2'-O-ペンチル-β-D-リ
ボフラノシル）プリン1 Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ 6） δ ０．７５（ｔ，３，
ＣＨ 3），１．１６（ｍ，４，ＣＨ 2），１．３９（ｍ，
２，ＣＨ 2），３．５３（ｍ，２，ＣＨ 2），３．３およ
び３．６（ＡＢＸ，２，Ｈ−５’），３．９３（ｂｒ
ｓ，１），４．２３（ｍ，１），４．３８（ｍ，１），
５．１（ｄ，１ ３’−ＯＨ），５．５（ｔ，１，５’
−ＯＨ），５．７５（ｂｒ ｓ，２，６−ＮＨ 2），５．
８２（ｄ，１，Ｈ−１’），６．８（ｂｒ ｓ，２，２
−ＮＨ 2）および７．９３（ｓ，１，Ｈ−８）。
【００８６】2,6-ジアミノ-9-（3'-O-ペンチル-β-D-リ
ボフラノシル）プリン1 Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ 6） δ ０．８７（ｔ，３，
ＣＨ 3），１．３（ｍ，４，ＣＨ 2），１．５５（ｍ，
２，ＣＨ 2），３．５（ｍ，２，Ｏ−ＣＨ 2），３．６
（ｍ，２，Ｈ−５’），３．８６（ｍ，１），３．９５
（ｍ，１），４．６（ｍ，１），５．３２（ｂｒ ｄ，
１，２’−ＯＨ），５．４６（ｂｒ ｔ，１，５’−Ｏ
Ｈ），５．７０（ｄ，１，Ｈ−１’），５．７５（ｂｒ
ｓ，２，６−ＮＨ 2），６．７６（ｂｒ ｓ，２，２−
ＮＨ 2）および７．９３（ｓ，１，Ｈ−８）。
【００８７】実施例８ 2'-O-ペンチルグアノシン 実施例３の方法に従い0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（50
ml,pH6.0）およびＤＭＳＯ（25ml）中、３５℃にて2,6-
ジアミノ-9-（2'-O-ペンチル-β-D-リボフラノシル）プ
リン（1.9g）をアデノシンデアミナーゼ（２回に分けて
添加ー最初に50mg、２回目に80mg）で処理すると１．４
ｇの生成物を得た。1Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ 6） δ
０．８（ｔ，３，ＣＨ 3），１．１６（ｍ，４，２ｘＣ
Ｈ 2），１．４（ｍ，２，ＣＨ 2），３．３８，３．６
（ｍ，４，ＯＣＨ 2，Ｈ−５’），３，９３（ｓ，１、
Ｈ−４’），４．２８（ｍ，２，Ｈ−２’，Ｈ−
３’），５．１７（ｂｒ，２，５’，３’−ＯＨ），
５．８（ｄ，１，Ｈ−１’），６．５３（ｂｒ Ｓ，
２，ＮＨ 2），８．０（ｓ，１，Ｈ−８）および１０．
６８（ｂｒ，１，ＮＨ）。
【００８８】実施例９ N2-イソブチリル-2'-O-ペンチルグアノシン 実施例４の方法に従いピリジン（35ml）に溶解した2'-O
-ペンチルグアノシン（2.3g）を塩化トリメチルシリル
（4.15ml,5当量）および塩化イソブチリル（3.4ml,5当
量）で処理し生成物を発泡体として得た（2.3g）。分析
用試料はＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘから結晶化させた。ｍ．
ｐ．１７８−１８０℃。1Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ 6）
δ ０．７５（ｔ，３，ＣＨ 3），１．１［ｍ，１０，
２ｘＣＨ 2，ＣＨ（ＣＨ 3）2］，１．４（ｍ，２，Ｃ
Ｈ 2），２．７４［ｍ，１，ＣＨ（ＣＨ 3）2］，３．５
６（ｍ，４，ＯＣＨ 2，Ｈ−５’），３．９３（ｍ，
１、Ｈ−４’），４．２５（ｍ，１），４．３４（ｍ，
１），５．０５（ｔ，１，５’−ＯＨ），５．１７
（ｄ，１，３’−ＯＨ），５．８８（ｄ，１，Ｈ−
１’），８．２７（ｓ，１，Ｈ−８），１１．６５（ｂ
ｒ ｓ，１，ＮＨ）および１２．０５（ｂｒ ｓ，１，Ｎ
Ｈ）。元素分析 Ｃ19Ｈ29Ｎ5Ｏ6として、計算値：Ｃ，
５３．８９；Ｈ，６．９０；Ｎ，１６．５４ 実測値：
Ｃ，５３．７５；Ｈ，６．９２；Ｎ，１６．４０。
【００８９】実施例１０ N2-イソブチリル-5'-ジメトキシトリチル-2'-O-ペンチ
ルグアノシン 実施例５の方法に従いピリジン（50ml）中でN2-イソブ
チリル-2'-O-ペンチルグアノシン（2.3g）を塩化ジメト
キシトリチル（1.7g,1.1当量）およびジメチルアミノピ
リジン（触媒として100mg）で処理すると、発泡体とし
て生成物が得られた（2.9g）。1Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ
−ｄ 6） δ ０．８３（ｔ，３，ＣＨ 3），１．２［ｍ，
１０，２ｘＣＨ 2，ＣＨ（ＣＨ 3）2］，１．４８（ｍ，
２，ＣＨ 2），２．７８［ｍ，１，ＣＨ（ＣＨ 3）2］，
３．４，３．６（ｍ，４，ＯＣＨ 2，Ｈ−５’），３．
７５（ｓ，６，ＯＣＨ 3），４．０７（ｍ，１），４．
２７（ｍ，１），４．４２（ｍ，１），５．２（ｂｒ
ｄ，１，３’−ＯＨ），５．９５（ｄ，１，Ｈ−
１’），６．８５，７．２５，７．３８（ｍ，１３，Ｄ
ＭＴｒ），８．１５（ｓ，１，Ｈ−８），１１．６７
（ｂｒ ｓ，１，ＮＨ）および１２．１（ｂｒ ｓ，１，
ＮＨ）。元素分析 Ｃ40Ｈ47Ｎ5Ｏ8・1/2Ｈ2Ｏとして、
計算値：Ｃ，６５．３８；Ｈ，６．５８；Ｎ，９．５３
実測値：Ｃ，６５．３７；Ｈ，６．５９；Ｎ，９．３
９。
【００９０】実施例１１ N2-イソブチリル-5'-ジメトキシトリチル-2'-O-ペンチ
ルグアノシン 3'-β-シアノエチル-N,N-ジイソプロピル
ホスホロアミダイト 実施例６の方法に従いN2-イソブチリル-5'-ジメトキシ
トリチル-2'-O-ペンチルグアノシン（1.7g）をビス-
（N,N-ジイソプロピルアミノ）-2-シアノエチルホスフ
ァイト（1.48g）およびN,N-ジイソプロピルアンモニウ
ムテトラゾリド（200mg）で処理して生成物を得た（1.4
g）。31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3） δ １５０．５，１５
０．８５。
【００９１】実施例１２ 2,6-ジアミノ-9-（2'-O-ノニル-β-D-リボフラノシル）
プリン 実施例２の方法に従いＤＭＦ（700ml）中で2,6-ジアミ
ノ-9-（β-D-リボフラノシル）プリン（50g,180ミリモ
ル）を水素化ナトリウム（8.8g,220ミリモル）およびブ
ロモノナン（59g,54.4ml,285ミリモル）で処理すると
（ＮａＨ添加の間、ＤＭＦ中のジアミノ化合物は氷浴で
冷却された）８３ｇの粗生成物を得た。５０ｇの粗生成
物がシリカゲルクロマトグラフィーで精製された。2'-O
-ノニルおよび3'-O-ノニル生成物を含む分画が合併さ
れ、2'および3'生成物の７７：２３混合物が得られた
（29g）。純粋な2'-O-ノニル生成物はクロマトグラフィ
ーにより得られる。1Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ 6） δ
０．９５（ｔ，３，ＣＨ 3），１．１７［ｍ，１２，Ｏ
−ＣＨ2−ＣＨ2−（ＣＨ 2）6］，１．４２［ｍ，２，Ｏ
−ＣＨ2−ＣＨ 2−（ＣＨ2）6］，３．２７−３．７０
（ｍ，２，Ｈ−５’），３．５０−３．７０［ｍ，２，
Ｏ−ＣＨ 2（ＣＨ2）7］，３．９５（ｍ，１，Ｈ−
４’），４．２４（ｍ，１，Ｈ−３’），４．４０
（ｍ，１，Ｈ−２’），５．１０（ｄ，１，３’−Ｏ
Ｈ，Ｊ＝５Ｈｚ），５．５０（ｔ，１，５’−ＯＨ，Ｊ
＝６Ｈｚ），５．７６（ｓ，２，２−ＮＨ 2），５．８
３（ｄ，１，Ｈ−１’，Ｊ＝６Ｈｚ），６．８１（ｓ，
２，６−ＮＨ 2）および７．９６（ｓ，１，Ｈ−８）。
【００９２】実施例１３ 2'-O-ノニルグアノシン 実施例３の方法に従い0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（50
ml,pH7.4）、0.1Mトリス緩衝液（1800ml,pH7.4）および
ＤＭＳＯ（1080ml）中、2,6-ジアミノ-9-（2'-O-ノニル
-β-D-リボフラノシル）プリンおよび2,6-ジアミノ-9-
（3'-O-ノニル-β-D-リボフラノシル）プリンの混合物
（約８０：２０の混合物、29g）をアデノシンデアミナ
ーゼ（1.6g）で処理すると６０ｇの生成物を油状物とし
て得た。分析用生成物はシリカゲルクロマトグラフィー
およびＥｔＯＡｃからの再結晶により精製された。1Ｈ
ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ 6） δ ０．９６（ｔ，３，ＣＨ
3，Ｊ＝７Ｈｚ），１．１７［ｍ，１２，Ｏ−ＣＨ2−Ｃ
Ｈ2−（ＣＨ 2）6］，１．４２［ｍ，２，Ｏ−ＣＨ2−Ｃ
Ｈ 2−（ＣＨ2）6］，３．２７−３．６１［ｍ，４，Ｈ
−５’，Ｏ−ＣＨ 2（ＣＨ2）7］，３，９５（ｍ，１、
Ｈ−４’），４．１０−４．１３（ｍ，２，Ｈ−２’，
Ｈ−３’），５．１３−６．０６（ｍ，２，３’−ＯＨ
５’−ＯＨ），５．８０（ｄ，１，Ｈ−１’，Ｊ＝
６．４Ｈｚ），６．４７（Ｓ，２，２−ＮＨ 2），７．
９８（ｓ，１，８−Ｈ）および１０．６４（ｓ，１，Ｎ
1アミド）。元素分析 Ｃ19Ｈ31Ｎ5Ｏ5として、計算値：
Ｃ，５５．７３；Ｈ，７．６３；Ｎ，１７．１０ 実測
値：Ｃ，５５．６７；Ｈ，７．６６；Ｎ，１７．０２。
【００９３】実施例１４ N2-イソブチリル-2'-O-ノニルグアノシン 実施例４の方法に従いピリジン（360ml）に溶解した2'-
O-ノニルグアノシン（14.7g）を塩化トリメチルシリル
（23.4ml）および塩化イソブチリル（30.6ml）で処理
し、粗生成物を得た（37g）。粗物質はシリカゲルクロ
マトグラフィー（９０／１０ ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨで溶
出）により精製され、ＥｔＯＡｃから再結晶して１４．
６ｇの生成物が得られた。ｍ．ｐ．１６８−１６９℃。
1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ 6） δ ０．８５［ｔ，３，
ＣＨ 3（ノニル）］，１．１４［ｍ，１８，Ｏ−ＣＨ2−
ＣＨ2−（ＣＨ 2）6，ＣＨ（ＣＨ 3）2］，１．４０
［ｍ，２，Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ 2−（ＣＨ2）6］，２．７９
［ｍ，１，ＣＨ（ＣＨ3）2］，３．３１−３．６３
［ｍ，４，Ｈ−５’，Ｏ−ＣＨ 2（ＣＨ2）7］，３．９
６（ｍ，１、Ｈ−４’），４．２７−４．３７（ｍ，
２，Ｈ−２’，Ｈ−３’），５．１０（ｔ，１，５’−
ＯＨ，Ｊ＝５Ｈｚ），５．１８（ｄ，１，３’−ＯＨ
，Ｊ＝４Ｈｚ），５．９１（ｄ，１，Ｈ−１’，Ｊ＝
６．６Ｈｚ），８．３１（ｓ，１，８−Ｈ），１１．７
３（ｓ，１，Ｃ2アミド）および１２．１１（ｓ，１，
Ｎ1アミド）。元素分析 Ｃ23Ｈ37Ｎ5Ｏ6として、計算
値：Ｃ，５７．６０；Ｈ，７．７８；Ｎ，１４．６０
実測値：Ｃ，５７．６３；Ｈ，７．９２；Ｎ，１４．６
２。
【００９４】実施例１５ N2-イソブチリル-5'-ジメトキシトリチル-2'-O-ノニル
グアノシン 実施例５の方法に従いピリジン（200ml）中でN2-イソブ
チリル-2'-O-ノニルグアノシン（14.6g,30.4ミリモ
ル））を塩化ジメトキシトリチル（12.1g,1.1当量）で
処理するとクロマトグラフ前は１６ｇの、クロマトグラ
フ後は１１．５ｇの紫色の発泡体を得た。1Ｈ ＮＭＲ
（ＤＭＳＯ−ｄ 6） δ ０．８４［ｔ，３，ＣＨ 3（ノニ
ル），Ｊ＝７Ｈｚ］，１．１６［ｍ，１８，Ｏ−ＣＨ2
−ＣＨ2−（ＣＨ 2）6，ＣＨ（ＣＨ 3）2］，１．４３
［ｍ，２，Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ 2−（ＣＨ2）6］，２．７７
［ｍ，１，ＣＨ（ＣＨ3）2］，３．１８−３．６３
［ｍ，４，Ｈ−５’，Ｏ−ＣＨ 2（ＣＨ2）7］，３．７
４（ｓ，６，ＤＭＴｒ Ｏ−ＣＨ 3），４．０６（ｍ，
１、Ｈ−４’），４．２７（ｍ，１，Ｈ−３’），４．
４２（ｍ，１，Ｈ−２’），５．１９（ｄ，１，３’−
ＯＨ，Ｊ＝５Ｈｚ），５．９４（ｄ，１，Ｈ−１’，Ｊ
＝５．７Ｈｚ），６．８３−７．３８（ｍ，１３，ＤＭ
Ｔｒ芳香族），８．１４（ｓ，１，Ｈ−８），１１．６
５（ｓ，１，Ｃ2アミド）および１２．１１（ｓ，１，
Ｎ1アミド）。元素分析 Ｃ4 4Ｈ55Ｎ5Ｏ8として、計算
値：Ｃ，６７．５９；Ｈ，７．２７；Ｎ，８．９６ 実
測値：Ｃ，６７．５９；Ｈ，７．１１；Ｎ，８．８０。
【００９５】実施例１６ N2-イソブチリル-5'-ジメトキシトリチル-2'-O-ノニル
グアノシン 3'-β-シアノエチル-N,N-ジイソプロピルホ
スホロアミダイト 実施例６の方法に従いN2-イソブチリル-5'-ジメトキシ
トリチル-2'-O-ノニルグアノシン（2.1g）をビス-（N,N
-ジイソプロピルアミノ）-2-シアノエチルホスファイト
（1.5g）およびN,N-ジイソプロピルアンモニウムテトラ
ゾリド（0.2g）で処理して生成物を得た（2.0g）。31Ｐ
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3） δ １５０．７および１５０．４
（ジアステレオマー）。
【００９６】実施例１７ 2,6-ジアミノ-9-（2',3'-ジ-O-プロピル-β-D-リボフラ
ノシル）プリン ＤＭＦ中、2,6-ジアミノ-9-（β-D-リボフラノシル）プ
リン（10g）,ＮａＨ（3g）および1-ブロモプロパン（10
ml）を使用して実施例２の方法を繰り返した。反応溶媒
を蒸発後、反応生成物をシリカゲルクロマトグラフィー
で精製した。より遅く移動する４．３ｇの2'-O-プロピ
ル生成物が発泡体として得られた。この発泡体を水から
結晶化させると３．６ｇの生成物が得られた。ｍ．ｐ．
１６５−１６７℃。1 Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ 6）δ
０．８０および０．９２（ｔ，６，ＣＨ 3），１．６お
よび１．４５（ｍ，４，ＣＨ 2），３．７−３．４５
（ｂｒｍ，６），４．０７（ｍ，２），４．５（ｄｄ，
１），５．５５（ｂｒ ｔ，１，５’−ＯＨ），５．８
（ｂｒ ｓ，２，６−ＮＨ 2），５．８５（ｄ，１，Ｈ−
１’），６．８４（ｂｒ ｓ，２，２−ＮＨ 2）および
８．０（ｓ，１，Ｈ−８）。元素分析Ｃ16Ｈ26Ｎ6Ｏ4と
して計算値：Ｃ，５２．４５；Ｈ，７．１５；Ｎ，２
２．９４ 実測値：Ｃ，５２．１８；Ｈ，７．１９；
Ｎ，２２．７５。
【００９７】実施例１８ N2,N6-ジイソブチリル-2,6-ジアミノ-9-（2'-O-プロピ
ル-β-D-リボフラノシル）プリン 実施例４の方法に従い、ピリジン（36ml）中、2,6-ジア
ミノ-9-（2'-O-プロピル-β-D-リボフラノシル）プリン
（2.0g）を塩化トリメチルシリル（3.9ml,5当量）およ
び塩化イソブチリル（3.2ml,5当量）で処理すると、シ
リカゲルクロマトグラフィー後に発泡体を得た。発泡体
をＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘから結晶化させて２．２ｇの生成
物を得た。ｍ．ｐ．１４０−１４２℃。1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ
ＭＳＯ−ｄ 6）δ ０．７７（ｔ，３，ＣＨ 3），１．０
７，１．１６［ｄ，１２，２ｘＣＨ（ＣＨ 3）2］，１．
５（ｍ，２，ＣＨ 2），２．９，３．０３［ｍ，２，２
ｘＣＨ（ＣＨ 3）2］，３．４（ｍ，１，Ｈ−５’’），
３．５８（ｍ，３，ＯＣＨ 2，Ｈ−５’），３．９５
（ｍ，１，Ｈ−４’），４．３（ｍ，１），４．５
（ｍ，１），５．０２（ｔ，１，５’−ＯＨ），５．２
（ｄ，１，３’−ＯＨ），６．０３（ｄ，１，Ｈ−
１’），８．５８（ｓ，１，Ｈ−８），１０．３９（ｂ
ｒ ｓ，１，ＮＨ）および１０．５７（ｂｒ ｓ，１，Ｎ
Ｈ）。
【００９８】実施例１９ N2,N6-ジイソブチリル-2,6-ジアミノ-9-（5'-O-ジメト
キシトリチル-2'-O-プロピル-β-D-リボフラノシル）プ
リン 実施例５の方法に従いピリジン（50ml）中でN2,N6-ジイ
ソブチリル-2,6-ジアミノ-9-（2'-O-プロピル-β-D-リ
ボフラノシル）プリン（1.9g）を塩化ジメトキシトリチ
ル（1.5g,1.1当量）およびジメチルアミノピリジン（触
媒として20mg）で処理すると、発泡体として生成物が得
られた（2.8g）。
【００９９】1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ 6）δ ０．７９
（ｔ，３，ＣＨ 3），１．０７，１．１６［ｄ，１２，
２ｘＣＨ（ＣＨ 3）2］，１．５（ｍ，２，ＣＨ 2），
２．９，３．０３［ｍ，２，２ｘＣＨ（ＣＨ3）2］，
３．５８（ｍ，３，ＯＣＨ 2，Ｈ−５’），４．１５
（ｍ，１，Ｈ−４’），４．４（ｍ，１），４．６
（ｍ，１），５．１５（ｄ，１，３’−ＯＨ），６．１
５（ｄ，１，Ｈ−１’），６．８−７．３５（ｍ，１
３，ＤＭＴｒ），８．５（ｓ，１，Ｈ−８），１０．３
（ｂｒ ｓ，１，ＮＨ）および１０．５７（ｂｒ ｓ，
１，ＮＨ）。
【０１００】実施例２０ N2,N6-ジイソブチリル-2,6-ジアミノ-9-（5'-O-ジメト
キシトリチル-2'-O-プロピル-β-D-リボフラノシル）プ
リン 3'-β-シアノエチル-N,N-ジイソプロピルホスホロ
アミダイト N2,N6-ジイソブチリル-2,6-ジアミノ-9-（5'-O-ジメト
キシトリチル-2'-O-プロピル-β-D-リボフラノシル）プ
リン（2.6g）をビス-（N,N-ジイソプロピルアミノ）-2-
シアノエチルホスファイト（1.7g）およびN,N-ジイソプ
ロピルアンモニウムテトラゾリド（300mg）で室温で一
夜処理した。反応混合物は希Ｎａ2ＣＯ 3／ＣＨＣｌ2続
いてＮａ2ＣＯ3／ＮａＣｌと分配させ、ＭｇＳＯ4で乾
燥した。有機層を蒸発させると発泡体を得た。発泡体を
ＣＨ2Ｃｌ2（約8ml）に溶解してゆっくりヘキサン（500
ml）に加えた。固形物を濾過し、乾燥させると生成物が
粉末として得られた（3.1g）。31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣ
ｌ3）δ １５０．８および１５１．３。
【０１０１】実施例２１ 2,6-ジアミノ-9-［2'-O-［（N-フタルイミド）プロパ-3
-イル］-β-D-リボフラノシル］プリンおよび2,6-ジア
ミノ-9-［3'-O-［（N-フタルイミド）プロパ-3-イル］-
β-D-リボフラノシル］プリン ＤＭＦ（20g）中、2,6-ジアミノ-9-（β-D-リボフラノ
シル）プリン（14.2g）を水素化ナトリウム（3g,1.5当
量）およびN-（3-ブロモプロピル）フタルイミド（5.3m
l,1.5当量）にて一夜７０℃で処理した。反応混合物を
Ｈ2Ｏおよびヘキサン（１ｘ）間に分配し、次に水層を
ＣＨ2Ｃｌ2で４回抽出した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥
し、蒸発させて残渣を得た。この残渣はＭｅＯＨ／ＣＨ
2Ｃｌ2で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより
精製された。最初に2'-O-（N-フタルイミド）プロピル
生成物、続いて混合分画および次に3'-O-（N-フタルイ
ミド）プロピル生成物が溶出された。各分画を蒸発させ
ると全て発泡体として3.4gの2'-O-（N-フタルイミド）
プロピル生成物、3.0gの2'および3'生成物の混合物およ
び1.4gの3'-O-（N-フタルイミド）プロピル生成物が得
られた。3'-O-（N-フタルイミド）プロピル生成物はＥ
ｔＯＡｃ／ＭｅＯＨから結晶化されて２７０ｍｇの固形
物が得られた。
【０１０２】2,6-ジアミノ-9-［2'-O-［（N-フタルイミ
ド）プロパ-3-イル］-β-D-リボフラノシル］プリン1 Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ 6）δ １．８（ｔｑ，２，−
ＣＨ 2−），３．４−３．５８（ｍ，６，２ｘＣＨ 2，Ｈ
−５’），３．９（ｍ，１），４．２６（ｍ，１），
４．３７（ｍ，１），５．０５（ｂｒ ｄ，１，３’−
ＯＨ），５．４（ｂｒ ｔ，１，５’−ＯＨ），５．７
２（ｂｒ ｓ，２，ＮＨ 2），５．８（ｂｒｄ，１，Ｈ−
１’），６．７５（ｂｒ ｓ，２，ＮＨ 2），７．８（ｂ
ｒ ｓ，４，Ａｒ）および８．９３（ｓ，１，Ｈ−
８）。
【０１０３】2,6-ジアミノ-9-［3'-O-［（N-フタルイミ
ド）プロパ-3-イル］-β-D-リボフラノシル］プリン ｍ．ｐ．２２０−２２２℃，1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ
6）δ １．８５（ｔｑ，２，−ＣＨ−Ｎ），３．６−
３．６７（ｍ，４，−Ｏ−ＣＨ 2，Ｈ−５’），３．８
５（ｍ，１），３．９２（ｍ，１），４．６（ｍ，
１），５．３３（ｄ，１，２’−ＯＨ），５．４５（ｂ
ｒ ｔ，１，５’−ＯＨ），５．６５（ｄ，１，Ｈ−
１’），５．７３（ｂｒ ｓ，２，ＮＨ 2），６．７５
（ｂｒ ｄ，２，ＮＨ 2），７．８−７．８５（ｍ，４，
Ａｒ）および７．８５（ｓ，１，Ｈ−８）。元素分析
Ｃ21Ｈ23Ｎ7Ｏ6として、計算値：Ｃ，５３．７３；Ｈ，
４．９４；Ｎ，２０．８８ 実測値：Ｃ，５３．５９；
Ｈ，４．８９；Ｎ，２０．６３。
【０１０４】実施例２２ 2'-O-［（N-フタルイミド）プロパ-3-イル］グアノシン 実施例３の方法に従い0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（3m
l,pH7.4）、0.05Mトリス緩衝液（65ml,pH7.4）およびＤ
ＭＳＯ（45ml）中、2,6-ジアミノ-9-［2'-O-［（N-フタ
ルイミド）プロパ-3-イル］-β-D-リボフラノシル］プ
リン（3.1g）をアデノシンデアミナーゼ（200mg）にて
５日間室温で処理した。シリカゲルクロマトグラフィー
からの生成物含有分画を蒸発させると、濃縮に伴い白色
結晶が生成した。結晶を濾過し、ＭｅＯＨで洗浄すると
１．１ｇの生成物が得られた。分析用試料はＭｅＯＨか
ら再結晶された。ｍ．ｐ．１９２−１９４℃。1Ｈ ＮＭ
Ｒ（ＤＭＳＯ−ｄ 6）δ １．８２（ｍ，２，ＣＨ 2），
３．４５−３．６７（ｍ，６，Ｈ−５’，ＯＣＨ 2，Ｎ
ＣＨ 2），３．９（ｍ，１），４．３（ｍ，２，Ｈ−
２’，Ｈ−３’），５．１（ｍ，２，５’および３’−
ＯＨ），５．８（ｄ，１，Ｈ−１’），６．５（ｂｒ
ｓ，２，ＮＨ 2），７．８３（ｓ，４，フタル），７．
９８（ｓ，１，Ｈ−８）および１０．５（ｂｒ ｓ，
１，ＮＨ）。元素分析Ｃ21Ｈ22Ｎ6Ｏ7・1/2Ｈ2Ｏとし
て、計算値：Ｃ，５２．６１；Ｈ，４．８３；Ｎ，１
７．５３ 実測値：Ｃ，５２．５２；Ｈ，４．７８；
Ｎ，１７．３８。
【０１０５】実施例２３ N2-イソブチリル-2'-O-［（N-フタルイミド）プロパ-3-
イル］グアノシン 実施例４の方法に従い、ピリジン（35ml）中、2'-O-
［（N-フタルイミド）プロパ-3-イル］グアノシン（7.2
g、粗生成物）を塩化トリメチルシリル（11.6ml,5当量）
および塩化イソブチリル（8ml,5当量）で処理すると発
泡体として生成物を得た。分析用試料はＥｔＯＡｃから
の結晶化により得られた。ｍ．ｐ．１６６−１６８℃。
1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ 6）δ １．１５［ｄ，６，−
ＣＨ（ＣＨ 3）2］，１．８５（ｍ，２，ＣＨ 2），２．
８［ｍ，１，ＣＨ（ＣＨ3）2］，３．４５−３．７
（ｍ，６，Ｈ−５’，ＯＣＨ 2，ＮＣＨ 2），３．９５
（ｍ，１），４．３４（ｍ，１），４．４（ｍ，１），
５．１２（ｔ，１，５’−ＯＨ），５．１８（ｄ，１，
３’−ＯＨ）５．９（ｄ，１，Ｈ−１’），７．８３
（ｓ，４，フタル），８．３（ｓ，１，Ｈ−８），１
１．６５（ｂｒ ｓ，１，ＮＨ）および１２．１（ｂｒ
ｓ，１，ＮＨ）。元素分析 Ｃ25Ｈ28Ｎ6Ｏ8として、計
算値：Ｃ，５４．６４；Ｈ，５．３２；Ｎ，１５．２９
実測値：Ｃ，５４．４６；Ｈ，５．３９；Ｎ，１４．
９８。
【０１０６】実施例２４ N2-イソブチリル-5'-ジメトキシトリチル-2'-O-［（N-
フタルイミド）プロパ-3-イル］グアノシン 実施例５の方法に従いピリジン（50ml）中でN2-イソブ
チリル-2'-O-［（N-フタルイミド）プロパ-3-イル］グ
アノシン（1.2g）を塩化ジメトキシトリチル（820mg,1.
1当量）およびジメチルアミノピリジン（触媒として20m
g）で処理され、溶出液として１：１ Ｈｅｘ／ＥｔＯＡ
ｃ、次にＥｔＯＡｃ続いて５％ＭｅＯＨ／１％ＴＥＡ含
有ＥｔＯＡｃが用いられた。生成物含有分画を蒸発させ
ると生成物が発泡体として得られた（1.7g）。1Ｈ ＮＭ
Ｒ（ＤＭＳＯ−ｄ 6）δ １．１［ｄ，６，−ＣＨ（ＣＨ
3）2］，１．８５（ｍ，２，ＣＨ 2），２．７５［ｍ，
１，ＣＨ（ＣＨ3）2］，３．４５−３．７（ｍ，６，Ｈ
−５’，ＯＣＨ 2，ＮＣＨ 2），３．７５（ｓ，６，ＯＣ
Ｈ 3），４．０（ｍ，１），４．３２（ｍ，１），４．
４（ｍ，１），５．２（ｄ，１，３’−ＯＨ），５．９
３（ｄ，１，Ｈ−１’），６．８３，７．２，７．３５
（ｍ，１３，ＤＭＴｒ），７．７８（ｓ，４，フタ
ル），８．１５（ｓ，１，Ｈ−８），１１．６（ｂｒ
ｓ，１，ＮＨ）および１２．０５（ｂｒ ｓ，１，Ｎ
Ｈ）。元素分析 Ｃ46Ｈ46Ｎ6Ｏ10として、計算値：Ｃ，
６４．１８；Ｈ，５．６２；Ｎ，９．７６ 実測値：
Ｃ，６４．４２；Ｈ，５．７８；Ｎ，９．５３。
【０１０７】実施例２５ N2-イソブチリル-5'-ジメトキシトリチル-2'-O-［（N-
フタルイミド）プロパ-3-イル］グアノシン 3'-β-シア
ノエチル-N,N-ジイソプロピルホスホロアミダイト 実施例６の方法に従いN2-イソブチリル-5'-ジメトキシ
トリチル-2'-O-［（N-フタルイミド）プロパ-3-イル］
グアノシン（1.6g）をビス-（N,N-ジイソプロピルアミ
ノ）-2-シアノエチルホスファイト（１．４８ｇ）およ
びN,N-ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（200m
g）で処理し生成物を得た（2.0g）。31ＰＮＭＲ（ＣＤ
Ｃｌ3）δ １５０．９。
【０１０８】実施例２６ N2-ジメチルアミノメチリデン-5'-ジメトキシトリチル-
2'-O-［（N-フタルイミド）プロパ-3-イル］グアノシン ＤＭＦ中、2'-O-［（N-フタルイミド）プロパ-3-イル］
グアノシン（900mg）をN,N-ジメチルホルムアミド ジメ
チルアセタール（2ml）で処理した。反応混合物は２時
間撹拌し、５２℃で高真空下蒸発させた。残渣を一度ピ
リジンと共沸させた後にピリジン溶液とした。塩化ジメ
トキシトリチル（713mg,1.1当量）およびジメチルアミ
ノピリジン（触媒として20mg）を加えた。反応混合物は
一夜撹拌し、Ｎａ2ＣＯ3／ＣＨ2Ｃｌ2に分配し、ＭｇＳ
Ｏ4で乾燥させ、実施例５に従ってシリカゲルクロマト
グラフィーにより精製すると１．７ｇの生成物が灰色が
かった白色の固形物として得られた。1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭ
ＳＯ−ｄ 6）δ １．８８（ｍ，２，ＣＨ 2），３．１
［ｄ，６，Ｎ＝ＣＨＮ（ＣＨ3）2］，３．３（ｍ，２，
Ｈ−５’），３．６７（ｍ，４，ＯＣＨ 2，ＮＣ2），
３．７８（ｓ，６，２ｘＯＣＨ 3），４．０（ｍ，１、
Ｈ−４’），４．３５（ｍ，２，Ｈ−２’，Ｈ−
３’），５．２（ｄ，１，３’−ＯＨ），５．９５
（ｄ，１，Ｈ−１’），６．８５，７．２５，７．３９
（ｍ，１３，ＤＭＴｒ），７．８５（ｓ，４，フタ
ル），７．９５（ｓ，１，Ｈ−８），８．５［ｓ，１，
Ｎ＝ＣＨＮ（ＣＨ3）2］および１１．３９（ｓ，１，Ｎ
Ｈ 2）。元素分析 Ｃ45Ｈ45Ｎ7Ｏ9・１／２Ｈ2Ｏとして
計算値：Ｃ，６４．５８；Ｈ，５．５４；Ｎ，１１．７
１ 実測値：Ｃ，６４．１０；Ｈ，５．６５；Ｎ，１
１．４７。
【０１０９】実施例２７ N2-ジメチルアミノメチリデン-5'-ジメトキシトリチル-
2'-O-［（N-フタルイミド）プロパ-3-イル］グアノシン
3'-β-シアノエチル-N,N-ジイソプロピルホスホロアミ
ダイト N2-ジメチルアミノメチリデン-5'-ジメトキシトリチル-
2'-O-［（N-フタルイミド）プロパ-3-イル］グアノシン
（1.7g）、ビス-（N,N-ジイソプロピルアミノ）-2-シア
ノエチルホスファイト（1.4ml）およびN,N-ジイソプロ
ピルアンモニウムテトラゾリド（170mg）を室温で一夜
撹拌した。反応混合物はＣＨ2Ｃｌ2およびＮａ2ＣＯ
3（２ｘ）間に分配させた。有機層はＭｇＳＯ4で乾燥
し、蒸発させると油状物を得た。油状物を最小量のＣＨ
2Ｃｌ2に溶解してヘキサン（約900ml）に滴加すると生
成物が沈澱した。固形物を分離し、乾燥させると２．１
ｇの生成物が得られた。31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ
１５０．４，１５０．６。
【０１１０】実施例２８ 2,6-ジアミノ-9-［2'-O-［（N-フタルイミド）ペンタ-5
-イル］-β-D-リボフラノシル］プリン ＤＭＦ（６０ｍｌ）中、2,6-ジアミノ-9-（β-D-リボフ
ラノシル）プリン（6.7g）を水素化ナトリウム（1.3g）
およびN-（5-ブロモペンチル）フタルイミド（7.8g,1.1
当量）で３日間室温で処理した。反応混合物をＨ2Ｏお
よびＣＨ2Ｃｌ2間に分配し、次にＣＨ2Ｃｌ2で４回抽出
した。合併した有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、蒸発させ
た。この残渣は５％→１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2で溶
出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製され
た。2'-O-（N-フタルイミド）ペンチル含有分画を集
め、蒸発させると２．２ｇの生成物が黄色発泡体として
得られた。分析用試料はＥｔＯＨから結晶化された。1
Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ 6）δ１．２（ｍ，２，−ＣＨ
2−），１．４７（ｍ，４，２ｘＣＨ 2），３．５５，
３．６５（ｍ，６，Ｏ−ＣＨ 2，Ｈ−５’，ＮＣＨ 2），
３．９５（ｍ，１），４．２８（ｍ，１），４．４
（ｍ，１），５．１３（ｄ，１，３’−ＯＨ），５．５
（ｔ，１，５’−ＯＨ），５．７７（ｂｒ ｓ，２，６
−ＮＨ 2），５．８４（ｂｒ ｄ，１，Ｈ−１’），６．
８（ｂｒ ｓ，２，２−ＮＨ 2），７．８６（ｍ，４，フ
タル）および７．９５（ｓ，１，Ｈ−８）。元素分析
Ｃ23Ｈ27Ｎ7Ｏ6として計算値：Ｃ，５５．５０；Ｈ，
５．４７；Ｎ，１９．７１ 実測値：Ｃ，５５．４４；
Ｈ，５．５１；Ｎ，１９．３０。
【０１１１】実施例２９ 2'-O-［（N-フタルイミド）ペンタ-5-イル］グアノシン 実施例３の方法に従い0.1Mトリス緩衝液（60ml,pH7.
4）、0.1MＮａＰＯ4緩衝液（2ml,pH7.4）およびＤＭＳ
Ｏ（40ml）中、2,6-ジアミノ-9-［2'-O-［（N-フタルイ
ミド）ペンタ-5-イル］-β-D-リボフラノシル］プリン
および2,6-ジアミノ-9-［3'-O-［（N-フタルイミド）ペ
ンタ-5-イル］-β-D-リボフラノシル］プリン異性体の
混合物（2.2g）がアデノシンデアミナーゼ（60mg）によ
り５日間室温にて処理された。シリカゲルクロマトグラ
フィーからの生成物含有分画を蒸発させると、生成物
（1.0g）が粗白色固形物として得られた。分析用試料は
ＭｅＯＨを加えることにより結晶化させて調製された。
ｍ．ｐ．１７８−１８０℃。1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ
6）δ １．２４（ｍ，２，ＣＨ 2），１．５（ｍ，４，
２ｘＣＨ 2），３．５−３．６（ｍ，６，Ｈ−５’，Ｏ
ＣＨ 2，ＮＣＨ 2），３．８７（ｍ，１、Ｈ−４’），
４．２５（ｍ，２，Ｈ−２’，Ｈ−３’），５．１
（ｍ，２，５’および３’−ＯＨ），５．７８（ｄ，
１，Ｈ−１’），６．５（ｂｒ ｓ，２，ＮＨ 2），７．
８４（ｍ，４，フタール），７．９８（ｓ，１，Ｈ−
８）および１０．６７（ｂｒ ｓ，１，ＮＨ）。元素分
析 Ｃ23Ｈ26Ｎ6Ｏ7・1/2Ｈ2Ｏとして計算値：Ｃ，５
４．４３；Ｈ，５．３６；Ｎ，１６．５６ 実測値：
Ｃ，５４．７９；Ｈ，５．２４；Ｎ，１６．６１。
【０１１２】実施例３０ N2-イソブチリル-2'-O-［（N-フタルイミド）ペンタ-5-
イル］グアノシン 実施例４の方法に従い、ピリジン（35ml）中、2'-O-
［（N-フタルイミド）ペンタ-5-イル］グアノシン（1.6
g、粗生成物）を塩化トリメチルシリル（2.0ml,5当量）
および塩化イソブチリル（1.68ml,5当量）で処理すると
発泡体として生成物を得た。この発泡体はＥｔＯＡｃと
２回共沸させ、続いてＥｔＯＡｃを加え加熱することに
より白色結晶が得られた（950mg）。ｍ．ｐ．２０２−
２０４℃。1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ 6）δ １．１
［ｄ，６，−ＣＨ（ＣＨ 3）2］，１．１７（ｍ，２，Ｃ
Ｈ 2），１．４３（ｍ，４，２ｘＣＨ 2），２．７４
［ｍ，１，ＣＨ（ＣＨ3）2］，３．４５−３．５５
（ｍ，６，Ｈ−５’，ＯＣＨ 2，ＮＣＨ 2），３．９
（ｍ，１），４．２５（ｍ，１），４．３（ｍ，１），
５．０７（ｔ，１，５’−ＯＨ），５．１５（ｄ，１，
３’−ＯＨ），５．８７（ｄ，１，Ｈ−１’），７．８
（ｓ，４，フタル），８．２７（ｓ，１，Ｈ−８），１
１．６７（ｂｒ ｓ，１，ＮＨ）および１２．０６（ｂ
ｒ ｓ，１，ＮＨ）。元素分析 Ｃ2 7Ｈ32Ｎ6Ｏ8・1/2Ｈ2
Ｏとして、計算値：Ｃ，５６．１４；Ｈ，５．７６；
Ｎ，１４．５５ 実測値：Ｃ，５６．４５；Ｈ，５．７
４；Ｎ，１４．４１。
【０１１３】実施例３１ N2-イソブチリル-5'-ジメトキシトリチル-2'-O-［（N-
フタルイミド）ペンタ-5-イル］グアノシン 実施例５の方法に従いピリジン（50ml）中でN2-イソブ
チリル-2'-O-［（N-フタルイミド）ペンタ-5-イル］グ
アノシン（0.95g）を塩化ジメトキシトリチル（620mg,
1.1当量）およびジメチルアミノピリジン（触媒として2
0mg）で処理され、溶出液として１％ＴＥＡ含有ＥｔＯ
Ａｃ続いて５％ＭｅＯＨ ＥｔＯＡｃ／１％ＴＥＡ含有
ＣＨ2Ｃｌ2が用いられた。生成物含有分画を蒸発させる
と生成物が発泡体として得られた（1.4g）。1Ｈ ＮＭＲ
（ＤＭＳＯ−ｄ 6）δ １．１４［ｄ，６，−ＣＨ（ＣＨ
3）2］，１．２５（ｍ，２，ＣＨ 2），１．５３（ｍ，
４，２ｘＣＨ 2），２．７７［ｍ，１，ＣＨ（Ｃ
Ｈ3）2］，３．３−３．６（ｍ，６，Ｈ−５’，ＯＣＨ
2，ＮＣＨ 2），３．７５（ｓ，６，ＯＣＨ 3），４．０
７（ｍ，１），４．３３（ｍ，１），４．４（ｍ，
１），５．１８（ｄ，１，３’−ＯＨ），５．９４
（ｄ，１，Ｈ−１’），６．８３，７．２，７．５３
（ｍ，１３，ＤＭＴｒ），７．８（ｓ，４，フタル），
８．１５（ｓ，１，Ｈ−８），１１．６（ｂｒ ｓ，
１，ＮＨ）および１２．１（ｂｒ ｓ，１，ＮＨ）。元
素分析Ｃ48Ｈ50Ｎ6Ｏ10・1/2Ｈ2Ｏとして計算値：Ｃ，
６５．５２；Ｈ，５．８４；Ｎ，９．５５ 実測値：
Ｃ，６５．５５；Ｈ，５．９４；Ｎ，９．２０。
【０１１４】実施例３２ 2,6-ジアミノ-9-［3',5'-O-（テトライソプロピルジシ
ロキサン-1,3-ジイル）-β-D-リボフラノシル］プリン 2,6-ジアミノ-9-（β-D-リボフラノシル）プリン（10.5
g）のピリジン（100ml）懸濁液に1,3-ジクロロテトライ
ソプロピルジシロキサン（ＴＩＰＤＳ，12.6g）を加え
た。反応液は室温で３時間撹拌し、さらに１．３ｇの1,
3-ジクロロテトライソプロピルジシロキサンを加えて一
夜撹拌した。反応混合物を氷水に注ぎ、不溶性生成物を
濾過して集めた。分析用試料はＥｔＯＡｃ／ヘキサンか
ら再結晶した、ｍ．ｐ．１７０−１７２℃。元素分析
Ｃ22Ｈ40Ｎ6Ｏ5Ｓｉ2・1/2Ｈ2Ｏとして、計算値：Ｃ，
４９．５；Ｈ，７．７４；Ｎ，１５．７実測値：Ｃ，４
９．５７；Ｈ，７．８２；Ｎ，１５．５９。
【０１１５】実施例３３ 2,6-ジアミノ-9-［3',5'-O-（テトライソプロピルジシ
ロキサン-1,3-ジイル）-2-O-メチル-β-D-リボフラノシ
ル］プリン 2,6-ジアミノ-9-［3',5'-O-（テトライソプロピルジシ
ロキサン-1,3-ジイル］-β-D-リボフラノシル］プリン
（8.8g）のＤＭＦ（120ml）溶液およびヨウ化メチル（3
ml,3当量）の混合物を氷浴で冷却し、ＮａＨ（油中６０
％，1.0g,1.5当量）を加えた。２０分後、反応をＭｅＯ
Ｈで停止させて飽和ＮＨ4ＣｌおよびＣＨ2Ｃｌ2間に分
配させた。有機層を１回ＮＨ4Ｃｌで洗浄し、ＭｇＳＯ4
で乾燥して蒸発させた。残渣は熱ＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏから
結晶化させて生成物を結晶として得た（8.5g）。ｍ．
ｐ．８７−８９℃。1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ 6）δ
１．０５（ｍ，２８，ＴＩＰＤＳ），３．５７（ｓ，
３，ＯＣＨ 3），３．９８（ｍ，１，Ｈ−４’），３．
９２および４．０７（ＡＢＸ，２，Ｈ−５’），４．１
３（ｄ，１），４．６（ｄｄ，１，Ｈ−３’），５．７
６（ｂｒ ｓ，２，ＮＨ 2），５．８（ｓ，１，Ｈ−
１’），６．７７（ｂｒ ｓ，２，ＮＨ 2）および７．７
７（ｓ，１，Ｈ−８）。
【０１１６】実施例３４ 2,6-ジアミノ-9-（2'-O-メチル-β-D-リボフラノシル）
プリン 2,6-ジアミノ-9-［3',5'-O-（テトライソプロピルジシ
ロキサン-1,3-ジイル］-2'-O-メチル-β-D-リボフラノ
シル］プリン（8.5g）のＴＨＦ（50ml）溶液にフッ化テ
トラブチルアンモニウムの１Ｍ ＴＨＦ溶液（Aldrich,2
0ml）を加えた。反応混合物は２時間撹拌して濾過し
た。フィルターケーキを２回ＥｔＯＡｃで洗浄して風乾
すると４．０ｇの粗生成物が得られた。分析用試料は熱
ＭｅＯＨから結晶化された。ｍ．ｐ．１３３−１３５
℃。1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ 6）δ ３．３（ｓ，３，
ＯＣＨ 3），３．５８（ｍ，２，Ｈ−５’），３．９８
（ｍ，１，Ｈ−４’），４．２８（ｍ，２，Ｈ−２’，
Ｈ−３’），５．２３（ｂｒ ｓ，１，３’−ＯＨ），
５．４８（ｂｒ ｔ，１，５’−ＯＨ），５．７７（ｂ
ｒｓ，２，ＮＨ 2），５．８２（ｓ，１，Ｈ−１’），
６．８３（ｂｒ ｓ，２，ＮＨ 2）および７．９５（ｓ，
１，Ｈ−８）。元素分析 Ｃ11Ｈ16Ｎ6Ｏ4・1/2Ｈ2Ｏと
して、計算値：Ｃ，４３．２８；Ｈ，５．６１；Ｎ，２
７．５２ 実測値：Ｃ，４３．５１；Ｈ，５．６２；
Ｎ，２７．２６。
【０１１７】実施例３５ 2'-O-メチルグアノシン 0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（200ml,pH7.4）およびＤ
ＭＳＯ（25ml）中、室温で４日間にて2,6-ジアミノ-9-
（2'-O-メチル-β-D-リボフラノシル）プリン（9.5g）
をアデノシンデアミナーゼ（タイプII、Sigma）で処理
した。得られた懸濁液を冷却して濾過し、得られるフィ
ルターケーキをＨ2Ｏで洗浄し乾燥すると白色固形物が
得られた（4.0g）。固形物を熱Ｈ2Ｏから再結晶すると
２．９ｇの生成物が得られた。ｍ．ｐ．２３６−２３８
℃。1Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ 6）δ ３．３（ｓ，
３，ＯＣＨ 3），３．５３および３．６（ＡＢＸ，２，
Ｈ−５’），３，８７（ｍ，１、Ｈ−４’），４．１５
（ｍ，１，Ｈ−２’）４．２５（ｍ，１，Ｈ−３’），
５．１３（ｔ，１，５’−ＯＨ），５．２３（ｄ，１，
３’−ＯＨ），５．８（ｄ，１，Ｈ−１’），６．４８
（ｂｒ ｓ，２，ＮＨ 2），７．９６（ｓ，１，Ｈ−８）
および１０．６８（ｂｒ ｓ，１，ＮＨ）。元素分析 Ｃ
11Ｈ15Ｎ5Ｏ5・1/2Ｈ2Ｏとして、計算値：Ｃ，４３．１
４；Ｈ，５．２６；Ｎ，２２．８６ 実測値：Ｃ，４
３．５９；Ｈ，５．３４；Ｎ，２３．０４。
【０１１８】実施例３６ N2-イソブチリル-2'-O-メチルグアノシン ピリジン（100ml）に溶解した2'-O-メチルグアノシン
（3.5g）を塩化トリメチルシリル（9ml,6当量）および
塩化イソブチリル（6.2ml）により室温で４日間処理し
た。反応混合物を氷浴で冷却しＨ2Ｏ（20ml）を加えさ
らに２０分間撹拌を続けた。ＮＨ4ＯＨ（20ml）を加え
３０分間撹拌した後反応混合物を蒸発させた。残渣をＨ
2Ｏ中で摩砕して濾過し、濾液を実施例４の方法に従っ
てシリカゲルクロマトグラフィーにより精製すると生成
物を灰色がかった白色の固形物として得る（1.5g）。1
Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ 6） δ １．１［ｄ，６，Ｃ
Ｈ（ＣＨ 3）2］，２．７７［ｍ，１，ＣＨ（Ｃ
Ｈ 3）2］，３．３３−３．６（ｍ，５，ＯＣＨ 3，Ｈ−
５’），３．９３（ｍ，１、Ｈ−４’），４．２２
（ｍ，１），４．３（ｍ，１），５．１（ｔ，１，５’
−ＯＨ），５．２８（ｄ，１，３’−ＯＨ），５．９
（ｄ，１，Ｈ−１’），８．２８（ｓ，１，Ｈ−８）お
よび１１．９（ｂｒ ｓ，１，ＮＨ）。
【０１１９】実施例３７ N2-イソブチリル-5'-ジメトキシトリチル-2'-O-メチル
グアノシン 実施例５の方法に従いピリジン（50ml）中でN2-イソブ
チリル-2'-O-メチルグアノシン（1.5g）を塩化ジメトキ
シトリチル（1.5g,1.1当量）およびジメチルアミノピリ
ジン（触媒として100mg）で処理すると、発泡体として
生成物が得られた（2.6g）。1Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−
ｄ 6） δ １．１４［ｄ，６，ＣＨ（ＣＨ 3）2］，２．
７５［ｍ，１，ＣＨ（ＣＨ 3）2］，３．５（ｍ，２，Ｈ
−５’），３．７４（ｓ，６，ＯＣＨ 3），４．０５
（ｍ，１），４．３３（ｍ，１），５．２６（ｄ，１，
３’−ＯＨ），５．９５（ｄ，１，Ｈ−１’），６．８
３，７．２，７．３５（ｍ，１３，ＤＭＴｒ），８．１
５（ｓ，１，Ｈ−８），１１．６（ｂｒ ｓ，１，Ｎ
Ｈ）および１２．１（ｂｒ ｓ，１，ＮＨ）。
【０１２０】実施例３８ N2-イソブチリル-5'-ジメトキシトリチル-2'-O-メチル
グアノシン 3'-β-シアノエチル-N,N-ジイソプロピルホ
スホロアミダイト 実施例６の方法に従いN2-イソブチリル-5'-ジメトキシ
トリチル-2'-O-メチルグアノシン（20g）をビス-（N,N-
ジイソプロピルアミノ）-2-シアノエチルホスファイト
（10.8g）およびN,N-ジイソプロピルアンモニウムテト
ラゾリド（1.6g）で処理して生成物を得た（15.7g）。
31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3） δ １４８．９７および１４
７．９６。
【０１２１】実施例３９ N2,N6-ジイソブチリル-2,6-ジアミノ-9-（2'-O-メチル-
β-D-リボフラノシル）プリン 実施例４の方法に従い、ピリジン（20mｌ）中、2,6-ジ
アミノ-9-（2'-O-メチル-β-D-リボフラノシル）プリン
（700mg）を塩化トリメチルシリル（2.1ml，7当量）お
よび塩化イソブチリル（1.25ml,5当量）で処理すると、
シリカゲルクロマトグラフィー後に発泡体を得た（900m
g）。
【０１２２】実施例４０ N2,N6-ジイソブチリル-2,6-ジアミノ-9-（5'-O-ジメト
キトリチル-2'-O-メチル-β-D-リボフラノシル）プリン 実施例５の方法に従いピリジン（30ml）中でN2,N6-ジイ
ソブチリル-2,6-ジアミノ-9-（2'-O-メチル-β-D-リボ
フラノシル）プリン（900mg）を塩化ジメトキシトリチ
ル（1.0g）およびジメチルアミノピリジン（触媒として
20mg）で処理すると、反応生成物が発泡体として得られ
た（700mg）。1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ 6）δ ０．９
６−１．１６［ｍ，１２，２ｘＣＨ（ＣＨ 3）2］，２．
９および３．０５［ｍ，２，２ｘＣＨ（ＣＨ3）2］，
３．１８および３．３７（ＡＢＸ，２，Ｈ−５’），
３．３８（ｓ，３，ＯＣＨ 3），３．７（ｓ，６，ＯＣ
Ｈ 3），４．０５（ｍ，１，Ｈ−４’），４．４４
（ｍ，２，Ｈ−２’，Ｈ−３’），５．２４（ｄ，１，
３’−ＯＨ），６．０６（ｄ，１，Ｈ−１’），６．７
８，７．２，７．３３（ｍ，１３，Ａｒ），８．２２
（ｓ，１，Ｈ−８），１０．３（ｂｒ ｓ，１，ＮＨ）
および１０．５７（ｂｒ ｓ，１，ＮＨ）。
【０１２３】実施例４１ N2,N6-ジイソブチリル-2,6-ジアミノ-9-（5'-O-ジメト
キトリチル-2'-O-メチル-β-D-リボフラノシル）プリン
3'-β-シアノエチル-N,N-ジイソプロピルホスホロアミ
ダイト N2,N6-ジイソブチリル-2,6-ジアミノ-9-（5'-O-ジメト
キトリチル-2'-O-メチル-β-D-リボフラノシル）プリン
（600mg）をビス-（N,N-ジイソプロピルアミノ）-2-シ
アノエチルホスファイト（500μg）およびN,N-ジイソプ
ロピルアンモニウムテトラゾリド（80mg）で室温にて一
夜処理した。反応混合物は希Ｎａ2ＣＯ3／ＣＨＣｌ2続
いてＮａ2ＣＯ3／ＮａＣｌに分配させ、ＭｇＳＯ4で乾
燥した。有機層を蒸発させると発泡体を得た（500m
g）。31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ １５１．１（ダブレ
ット）。
【０１２４】実施例４２ 2,6-ジアミノ-9-（2'-O-オクタデシル-β-D-リボフラノ
シル）プリン ＤＭＦ（1 l）に2,6-ジアミノ-9-（β-D-リボフラノシ
ル）プリン（50g,180ミリモル）および水素化ナトリウ
ム（7g）を加えて２時間沸騰させた。１５０℃でヨード
オクタデカン（100g）を加え、反応混合物は放置してＲ
Ｔまで冷却した。反応混合物はＲＴで１１日間撹拌し
た。溶媒を留去し、残渣は５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2で
溶出するシリカゲルクロマトグラフィーで精製された。
生成物を含む分画を蒸発させると生成物が得られた（11
g）。1Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ 6）δ ０．８４（ｔ，
３，ＣＨ 2），１．２２［ｍ，３２，Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2
−（ＣＨ 2）16］，１．８６（ｍ，２，Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ
2−），３．２５（ｍ，２，Ｏ−ＣＨ 2−），３．９３
（ｄ，１，４’Ｈ），４．２５（ｍ，１，３’Ｈ），
４．３８（ｔ，１，２’Ｈ），５．０８（ｄ，１，３’
−ＯＨ），５．４８（ｔ，１，５’−ＯＨ），５．７５
（ｓ，２，６−ＮＨ 2），５．８４（ｄ，１，１’−
Ｈ），６．８（ｓ，２，２−ＮＨ 2）および７．９５
（ｓ，１，８−Ｈ）。
【０１２５】実施例４３ 2'-O-オクタデシルグアノシン 実施例３の方法に従い0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（50
ml,pH7.4）、0.1Mトリス緩衝液（1000ml,pH7.4）および
ＤＭＳＯ（1000ml）中、2,6-ジアミノ-9-（2'-O-オクタ
デシル-β-D-リボフラノシル）プリン（10g）がアデノ
シンデアミナーゼ（1.5g）で処理された。３日目、５日
目および７日目に追加のアデノシンデアミナーゼ（各
々、500mg,880mgおよび200mg）を加えた。反応液は総計
で９日間撹拌され、シリカゲルクロマトグラフィーによ
る精製により生成物が得られた（2g）。分析用試料はＭ
ｅＯＨから再結晶された。1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−
ｄ 6）δ０．８４（ｔ，３，ＣＨ 3），１．２２［ｓ，３
２，Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2−（ＣＨ 2）16］，５．０７
（ｍ，２，３’−ＯＨ ５’−ＯＨ），５．７８（ｄ，
１，１’−Ｈ），６．４３（ｓ，２，ＮＨ 2），７．９
７（ｓ，１，８−Ｈ）および１０．６４（ｓ，１，ＮＨ
2）。元素分析 Ｃ28Ｈ49Ｎ5Ｏ5として、計算値：Ｃ，６
２．８０；Ｈ，９．１６；Ｎ，１２．９５ 実測値：
Ｃ，６２．５４；Ｈ，９．１８；Ｎ，１２．９５。
【０１２６】実施例４４ N2-イソブチリル-2'-O-オクタデシルグアノシン 実施例４の方法に従いピリジン（150ml）に溶解した2'-
O-オクタデシルグアノシン（1.9g）が塩化トリメチルシ
リル（2g,5当量）および塩化イソブチリル（2g,5当量）
で処理された。粗生成物はシリカゲルクロマトグラフィ
ー（３％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃで溶出）により精製され
１．２ｇの生成物が得られた。1Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ
−ｄ 6） δ ０．８５（ｔ，３，ＣＨ 3），１．１５
［ｍ，３８，Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2−（ＣＨ 2）16，ＣＨ
（ＣＨ 3）2］，２．７７［ｍ，１，ＣＨ（ＣＨ3）2］，
４．２５（ｍ，２，２’Ｈ，３’Ｈ），５．０８（ｔ，
１，５’−ＯＨ），５．１２（ｄ，１，３’−ＯＨ），
５．８７（ｄ，１，１’Ｈ），８．２７（ｓ，１，８−
Ｈ），１１．６８（ｓ，１，ＮＨ 2）および１２．０８
（ｓ，１，ＮＨ 2）。元素分析 Ｃ32Ｈ55Ｎ5Ｏ6として、
計算値：Ｃ，６３．４７；Ｈ，９．０９；Ｎ，１１．５
７ 実測値：Ｃ，６３．５３；Ｈ，９．２０；Ｎ，１
１．５２。
【０１２７】実施例４５ 2,6-ジアミノ-9-［2'-O-（イミダゾール-1-イル）ブチ
ル-β-D-リボフラノシル］プリン 2,6-ジアミノ-9-（β-D-リボフラノシル）プリン（5.0
g）のＤＭＦ（400ml）溶液を水素化ナトリウム（0.78
g）で処理した。さらに３０分撹拌後追加の水素化ナト
リウム（２．６ｇ）を加え、続いて直ちにブロモブチル
ーイミダゾール（9.9g）のＤＭＦ（25ml）溶液を加え
た。反応混合物は一夜撹拌した後Ｈ2Ｏで反応を停止さ
せた。反応混合物はセライトを通して濾過し、蒸発させ
ると油状の生成物を得た。ＴＬＣは異性体の混合物であ
ることを示した。
【０１２８】実施例４６ 2'-O-（イミダゾール-1-イル）ブチルグアノシン 実施例３の方法に従い0.1Mトリス緩衝液（pH7.4）、0.1
MＮａＰＯ4緩衝液（pH7.4）およびＤＭＳＯ中、2,6-ジ
アミノ-9-［2'-O-（イミダゾール-1-イル）ブチル-β-D
-リボフラノシル］プリンおよび2,6-ジアミノ-9-［3'-O
-（イミダゾール-1-イル）ブチル-β-D-リボフラノシ
ル］プリンの混合物がアデノシンデアミナーゼにより９
日間ＲＴにて処理された。生成物含有分画がシリカゲル
クロマトグラフィーにより精製され、生成物含有分画を
蒸発させることにより生成物が得られた。
【０１２９】実施例４７ N2-イソブチリル-2'-O-（イミダゾール-1-イル）ブチル
グアノシン 実施例４の方法に従い、ピリジン中、2'-O-（イミダゾ
ール-1-イル）ブチルグアノシンを塩化トリメチルシリ
ル（5当量）および塩化イソブチリル（5当量）で処理す
ると生成物が得られた。
【０１３０】実施例４８ N2-イソブチリル-5'-ジメトキシトリチル-2'-O-（イミ
ダゾール-1-イル）ブチルグアノシン 実施例５の方法に従いピリジン中でN2-イソブチリル-2'
-O-（イミダゾール-1-イル）ブチルグアノシンを塩化ジ
メトキシトリチル（1.1当量）およびジメチルアミノピ
リジン（触媒として）で処理された。シリカゲルクロマ
トゲラフィー後、生成物含有分画を蒸発させることによ
り生成物が得らるであろう。
【０１３１】実施例４９ 2',3'-O-ジブチルスタニレンウリジン Wagner, et al., J. Org. Chem. 1974, 39, 24,のプロ
トコールを使用し、無水メタノール中、ウリジン（45g,
0.184モル）を酸化ジ−ｎ−ブチルスズ（45g,0.181モ
ル）と加熱還流した。溶媒を濾過し、得られた2',3'-O-
ジブチルスタニレン-ウリジンを真空下１００℃で４時
間乾燥させると８１ｇの収量であった（93%）。
【０１３２】実施例５０ 2'-O-［ペンチル-ω-（N-フタルイミド）］ウリジン 2',3'-O-ジブチルスタニレン-ウリジンは真空下Ｐ2Ｏ5
上で１２時間乾燥させた。この化合物（20g,42.1ミリモ
ル）の無水ＤＭＦ（500ml）溶液に、25g（84.2ミリモ
ル）のＮ（５−ブロモペンチル）フタルイミド（Trans
World Chemicals,Rockville,Maryland）および12.75g
（85ミリモル）のフッ化セシウム（ＣｓＦ）を加えた。
混合物は室温で７２時間撹拌した。反応混合物を蒸発さ
せ、続いて一度トルエンと共沸させて残渣をＥｔＯＡｃ
および水（各々400ml）間に分配させた。ＥｔＯＡｃ層
を濃縮し、シリカゲルカラム（700g）に加えた。ＣＨ2
Ｃｌ2−ＣＨ3ＯＨ（２０：１、ｖ／ｖ）で溶出すると、
O-ペンチル-ω-N-フタルイミドウリジンの2'-および3'-
異性体の混合物を含む分画が得られた（50%の収量）。
【０１３３】実施例５１ 5'-O-ジメトキシトリチル-2'-O-［ペンチル-ω-（N-フ
タルイミド）］ウリジン 2'-O-［ペンチル-ω-（N-フタルイミド）］ウリジンの
異性体混合物を乾燥ピリジン中、室温で塩化ＤＭＴと６
時間反応させた。ＣＨ3ＯＨを過剰のＤＭＴ−Ｃｌのの
分解に使用し、０．５％Ｅｔ3Ｎ含有ＣＨ2Ｃｌ2および
水に分配させた。有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、残渣
はシリカカラムに加えた。カラムをＣＨ2Ｃｌ2：ＣＨ3
ＯＨ（２０：１、ｖ／ｖ）で溶出すると、生成物の2'お
よび3'異性体が分離された。
【０１３４】実施例５２ 5'-O-ジメトキシトリチル-2'-O-［ペンチル-ω-（N-フ
タルイミド）］ウリジン-3'-O-β-シアノエチル N,N-ジ
イソプロピルホスホロアミダイト 5'-O-ジメトキシトリチル-2'-O-［ペンチル-ω-（N-フ
タルイミド）］ウリジンをテフロン撹拌子を含む乾燥丸
底フラスコに加えた。フラスコはアルゴンでパージし
た。ヌクレオシドを溶解するのに十分量の無水メチレン
クロリドをフラスコに加えた。前もって真空乾燥したN,
N-ジイソプロピルアミノヒドロテトラゾリド（600mg,0.
014モル）をアルゴン下で加えた。ビス-N,N-ジイソプロ
ピルアミノ-シアノエチルホスファイトはシリンジから
加えられた。反応液はアルゴン雰囲気下、２５℃で１６
時間撹拌された。反応完了により反応液を分液ロートに
移した。反応フラスコはメチレンクロリドで洗い出した
（2x50ml）。合併させた有機層は２回飽和炭酸水素ナト
リウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで
乾燥させ、蒸発させた後１％トリエチルアミンを含むト
ルエンを加えた。得られたホスホロアミダイトは３：１
→１：１ ヘキサン／１％トリエチルアミン含有酢酸エ
チルで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィ
ーにより精製された。選択された分画を合併し、減圧下
濃縮して乾燥すると白色発泡体が得られた。31Ｐ−ＮＭ
Ｒ（ＣＤＣｌ3、Ｈ3ＰＯ4標準）は正しいジアステレオ
マーであることを示した。
【０１３５】実施例５３ 2'-O-ペンチルウリジン 実施例５０および５１の方法を使用し、ＤＭＦ（90ml）
中で2',3'-O-ジブチルスタニレン-ウリジン（19.1g）を
ブロモペンタン（17ml,1.3当量）およびヨウ化ナトリウ
ム（4.5g）で処理した。ＣＨ3ＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2 ５％→
１０％を使用するシリカゲルカラムでの精製により、生
成物の2'および3'異性体の混合物が黒ずんだ油状物とし
て得られた（９．８ｇ）。
【０１３６】実施例５４ 5'-O-ジメトキシトリチル-2'-O-ペンチルウリジン 実施例５１の方法に従い、2'-O-ペンチルウリジンおよ
び3'-O-ペンチルウリジンの混合物（9.8g）を塩化ジメ
トキシトリチル（10.5g）と反応させた。粗生成物はシ
リカゲルカラム（1000g）で精製された。Ｈｅｘ．−Ｅ
ｔＯＡｃ（３：１→１：１）による溶出により５．５ｇ
の2'-O-ペンチル異性体および３ｇの3'-O-ペンチル異性
体が得られた。Ｃ35Ｈ37Ｎ2Ｏ8・1/2Ｈ2Ｏとして、計算
値：Ｃ，６７．５１；Ｈ，６．５５；Ｎ，４．５ 実測
値：Ｃ，６７・４８；Ｈ，６．５５；Ｎ，４．５。
【０１３７】実施例５５ 5'-O-ジメトキシトリチル-2'-O-ペンチルウリジン-3'-O
-（β-シアノエチル N,N-ジイソプロピルホスホロアミ
ダイト） 保護5'-O-ジメトキシトリチル-2'-O-ペンチルウリジン
（4.6g.0.007モル）をテフロン撹拌子を含む乾燥丸底フ
ラスコに加えた。フラスコはアルゴンでパージした。ヌ
クレオシドを溶解するのに十分量の無水メチレンクロリ
ドをフラスコに加えた。前もって真空乾燥したN,N-ジイ
ソプロピルアミノヒドロテトラゾリド（600mg,0.014モ
ル）をアルゴン下で加えた。ビス-（N,N-ジイソプロピ
ルアミノ）-シアノエチルホスファイト（4.5g,4.7ml,2
当量）はシリンジから加えられた。反応液はアルゴン雰
囲気下、２５℃で１６時間撹拌された。反応完了をＴＬ
Ｃにより確認後反応液を分液ロートに移し、反応フラス
コはメチレンクロリドで洗い出した（2x50ml）。合併さ
せた有機層は２回飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄
した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させ
た後１％トリエチルアミンを含むトルエンを加えた。得
られたホスホロアミダイトは３：１→１：１ヘキサン／
酢酸エチル（１％トリエチルアミン含有）で溶出するシ
リカゲルフラッシュクロマトグラフィー（300g）により
精製された。選択された分画を合併し、減圧下濃縮して
乾燥すると２．６７ｇの生成物を白色発泡体として得
た。31Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、Ｈ3ＰＯ4標準）は正し
いジアステレオマーであることを示した。
【０１３８】実施例５６ 2'-O-メチルウリジン 実施例４９の方法に従い、ウリジン（8.5g）が酸化ジブ
チルスズ（8.2g,1当量）で処理された。得られた2',3'-
O-ジブチルスタニレンウリジンが実施例５０に従ってヨ
ードメタン（16ml）により４２℃で処理され、2'および
3'アルキル化生成物の混合物が発泡体として得られた
（3.5g）。
【０１３９】実施例５７ 5'-O-（4,4'-ジメトキシトリフェニルメチル）-2'-O-メ
チルウリジン 2'-O-メチルウリジン（8.0g,0.031モル）をピリジン（1
00ml）と減圧下蒸発させて油状物とした。この残渣に4,
4'-ジメトキシトリフェニルメチルクロリド（ＤＭＴ−
Ｃｌ，11.5g,0.34モル）およびピリジン（100ml）を加
えた。混合物は２５℃で１．５時間撹拌し、続いてメタ
ノール（10ml）を添加して３０分で反応を停止させる。
混合物は減圧下濃縮し、残渣をシリカゲル（250g）のク
ロマトグラフィーにかける。ヘキサン−酢酸エチルート
リエチルアミン（８０：２０：１）、続いて酢酸エチル
ートリエチルアミン（９９：１）で溶出させた。適当な
分画を合わせ減圧下蒸発させ乾燥すると（２５℃／０．
２ｍｍＨｇで１時間）１７．４ｇ（100%）の黄褐色の発
泡体が得られた；ＴＬＣ純度９８％（Ｒｆ ０．２３，
ヘキサンー酢酸エチル ４：１）；ＰＭＲ（ＤＭＳＯ）
δ１１．４（Ｈ−Ｎ3），７．７８（Ｈ−６），７．６
−６．８（Ｂｚ），５．８（Ｈ−１’），５．３（Ｈ−
５’），５．２５（ＨＯ−３’），３．７（ＣＨ3Ｏ−
Ｂｚ），３．４（ＣＨ3Ｏ−２’）。
【０１４０】実施例５８ 5'-O-（4,4'-ジメトキシトリフェニルメチル）-2'-O-メ
チルウリジン-3'-O-（β-シアノエチル N,N-ジイソプロ
ピルホスホロアミダイト） 生成物は5'-O-（4,4'-ジメトキシトリフェニルメチル）
-2'-O-メチルウリジンから実施例５４に従って製造され
た。クロマトグラフィー溶出液として酢酸エチルーヘキ
サンートリエチルアミン（５９：４０：１）が使用され
生成物を発泡体として６０％の収率で与えた。均質なジ
アステレオマー、Ｒｆ０．５８；０．４４［酢酸エチル
ーヘキサンートリエチルアミン（５９：４０：１）］。
31Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、Ｈ3ＰＯ4標準）δ１４８．
１１；１４８．６１（ジアステレオマー）。
【０１４１】実施例５９ 2'-O-プロピルウリジン 実施例４９の方法に従い、ウリジン（10g）が酸化ジブ
チルスズ（10.2g,1当量）で処理された。得られた2',3'
-O-ジブチルスタニレンウリジンが実施例５０に従って
ヨードメタン（8ml、2当量）により１１０℃で処理さ
れ、2'および3'異性体の混合物を発泡体として与えた
（5.5g）。
【０１４２】実施例６０ 5'-O-（4,4'-ジメトキシトリフェニルメチル）-2'-O-プ
ロピルウリジン 2'-O-プロピルウリジンおよび3'-O-プロピルウリジンの
混合物（3.6g）を実施例５１に従って塩化ジメトキシト
リチル（4.2g,1.0当量）と反応させた。残渣はＨｅｘ／
ＥｔＯＡｃ（１：１、１％トリエチルアミン）で溶出す
るシリカゲルでクロマトグラフを行なった。適当な分画
を合わせ、減圧下蒸発させて乾燥すると４．２ｇの白色
発泡体を得る。元素分析Ｃ33Ｈ36Ｎ2Ｏ8・1/2Ｈ2Ｏとし
て、計算値：Ｃ，６７．３３；Ｈ，６．１６；Ｎ，４．
７６ 実測値：Ｃ，６７．１５；Ｈ，６．２４；Ｎ，
４．４４。
【０１４３】実施例６１ 5'-O-（4,4'-ジメトキシトリフェニルメチル）-2'-O-プ
ロピルウリジン-3'-O-（β-シアノエチル N,N-ジイソプ
ロピルホスホロアミダイト） 生成物は中間体5'-O-（4,4'-ジメトキシトリチル）-2'-
O-プロピルウリジン（470mg）から実施例５４に従って
製造され、発泡体として得られた（477mg）。
【０１４４】実施例６２ 2'-O-ノニルウリジン 実施例４９の方法に従い、ウリジン（22.5g）が酸化ジ
ブチルスズ（22.5g,1当量）で処理された。得られた2',
3'-O-ジブチルスタニレンウリジンが実施例５０に従っ
てヨードノナン（11ml、1.3当量）により１３０ー１４０
℃で処理され、2'および3'異性体を油状物として与えた
（11.2g）。
【０１４５】実施例６３ 5'-O-（4,4'-ジメトキシトリフェニルメチル）-2'-O-ノ
ニルウリジン 2'-O-ノニルウリジンおよび3'-O-ノニルウリジンの混合
物（11.2g）を実施例５１に従って塩化ジメトキシトリ
チル（10.5g）と反応させた。残渣はＨｅｘ／ＥｔＯＡ
ｃ（３：１→１：１、１％トリエチルアミン）で溶出す
るシリカゲルでクロマトグラフを行なった。適当な分画
を合わせ、減圧下蒸発させて乾燥すると５．２ｇの白色
発泡体を得る。分析用試料はトルエン／ＥｔＯＡｃ
（３：１、１％トリエチルアミン）を用いて再クロマト
グラフされた。元素分析Ｃ39Ｈ48Ｎ2Ｏ8として、計算
値：Ｃ，６９．６２；Ｈ，７．１９；Ｎ，４．１６ 実
測値：Ｃ，６９．６６；Ｈ，７．１８；Ｎ，４．０６。
【０１４６】実施例６４ 5'-O-（4,4'-ジメトキシトリフェニルメチル）-2'-O-ノ
ニルウリジン-3'-O-（β-シアノエチル N,N-ジイソプロ
ピルホスホロアミダイト） 生成物は中間体5'-O-（4,4'-ジメトキシトリチル）-2'-
O-ノニルウリジン（3.1g）から実施例５４に従って製造
され、発泡体として得られた（2.49g）。
【０１４７】実施例６５ 2'-O-ヘキセニルウリジン 実施例４９の方法に従い、ウリジン（10.5g）が酸化ジ
ブチルスズ（10.5g,1当量）で処理された。得られた2',
3'-O-ジブチルスタニレンウリジンが実施例５０に従っ
て6-ブロモヘキセン（3.5ml、1.2当量）およびヨウ化ナ
トリウム（3.3g、1当量）により１１５℃で処理され、2'
および3'異性体を発泡体として与えた（3.3g）。
【０１４８】実施例６６ 5'-O-（4,4'-ジメトキシトリフェニルメチル）-2'-O-ヘ
キセニルウリジン 2'-O-ヘキセニルウリジンおよび3'-O-ヘキセニルウリジ
ンの混合物（3.1g）を実施例５１に従って塩化ジメトキ
シトリチル（3.5g,1.1当量）と反応させた。残渣はＨｅ
ｘ／ＥｔＯＡｃ（３：１→１：１、１％トリエチルアミ
ン）で溶出するシリカゲルでクロマトグラフを行なっ
た。適当な分画を合わせ、減圧下蒸発させて乾燥すると
２．３ｇの白色発泡体を得る。元素分析 Ｃ36Ｈ40Ｎ2Ｏ
8・1/2Ｈ2Ｏとして、計算値：Ｃ，６７．８０；Ｈ，
６．４８；Ｎ，４．３９ 実測値：Ｃ，６８．７７；
Ｈ，６．４１；Ｎ，４．４５。
【０１４９】実施例６７ 5'-O-（4,4'-ジメトキシトリフェニルメチル）-2'-O-ヘ
キセニルウリジン-3'-O-（β-シアノエチル N,N-ジイソ
プロピルホスホロアミダイト） 生成物は中間体5'-O-（4,4'-ジメトキシトリチル）-2'-
O-ヘキセニルウリジンから実施例５４に従って製造され
た。
【０１５０】実施例６８ 5'-O-ジメトキシトリチル-2'-O-［ヘキシル-ω-（N-フ
タルイミド）］ウリジン-3'-O-（β-シアノエチル N,N-
ジイソプロピルホスホロアミダイト） 実施例５０から５２と類似の方法により、N-（6-ブロモ
ヘキシル）フタルイミド（N-フタルイミド置換ヘキシル
基）がウリジンの2'-位に導入され続いてのジメトキシ
トリチル化およびホスファイト化により表記ヌクレオチ
ドを与える。
【０１５１】実施例６９ 5'-O-ジメトキシトリチル-2'-O-［デシル-ω-（N-フタ
ルイミド）］ウリジン-3'-O-（β-シアノエチル N,N-ジ
イソプロピルホスホロアミダイト） 実施例５０から５２と類似の方法により、N-（10-ブロ
モデシル）フタルイミド（N-フタルイミド置換デシル
基）がウリジンの2'-位に導入され続いてのジメトキシ
トリチル化およびホスファイト化により表記ヌクレオチ
ドを与える。
【０１５２】実施例７０ N4-ベンゾイル-2'-O-メチルシチジン、方法Ａ 工程１．3',5'-O-［（1,1,3,3-テトライソプロピル）-
1,3-ジシロキサンジイル］シチジン シチジン（40g,0.165モル）および1,3-ジクロロ-1,1,3,
3-テトライソプロピルジシロキサン（ＴＩＰＳ−Ｃｌ，
50g,0.159モル）を乾燥ピリジン（250ml）に撹拌しなが
ら加えた。２５℃で１６時間撹拌後、反応液を減圧下濃
縮して油状物とした。油状物をメチレンクロリド（800m
l）に溶解し飽和炭酸水素ナトリウム（2x300ml）で洗浄
した。有機層はシリカゲル（200g）洗浄カラムを通過さ
せる。生成物はメチレンクロリドーメタノール（９７：
３）による溶出により回収された。適当な分画を合わ
せ、減圧下蒸発させ２５℃／０．２ｍｍＨｇで１時間乾
燥させると５９．３ｇ（７７％）の油状物が得られた。
ＴＬＣ純度９５％（Ｒｆ ０．５９、酢酸エチルーメタ
ノール ９：１）。生成物は酢酸エチルから白色結晶と
して結晶化されるであろう、ｍｐ２４２ー２４４℃。４
１ ＰＭＲ（ＤＭＳＯ）ｄ ７．７（Ｈ−６），５．６
８（Ｈ−５），５．６１（ＨＯ−２’），５．５５（Ｈ
−１’）。 工程２．N4-ベンゾイル-3',5'-O-［（1,1,3,3-テトライ
ソプロピル）-1,3-ジシロキサンジイル］シチジン 3',5'-O-［（1,1,3,3-テトライソプロピル）-1,3-ジシ
ロキサンジイル］シチジン（58g,0.12モル）およびトリ
エチルアミン（15.6g,0.16モル）のジメチルアセトアミ
ド（400ml）溶液を撹拌しながら５℃にて塩化ベンゾイ
ル（18.5g,0.13モル）を３０分以上かけて加えた。混合
物は１６時間放置して室温まで暖めた後、撹拌しながら
氷水（3.5L）に注いだ。生じた固形物を集め、氷水で洗
浄し（3x500ml），４５℃／０．２ｍｍＨｇで５時間乾
燥させると７７ｇ（100%）の固形物が得られた。ＴＬＣ
純度 約９０％（Ｒｆ ０．６３、クロロホルムーメタノ
ール ９：１）；ＰＭＲ（ＣＤＣｌ3）ｄ ８．３２（Ｈ
−６）；ｍｐ１００ー１０１℃。 工程３．N4-ベンゾイル-2'-O-メチル-3',5'-O-［（1,1,
3,3-テトライソプロピル）-1,3-ジシロキサンジイル］
シチジン N4-ベンゾイル-3',5'-O-［（1,1,3,3-テトライソプロピ
ル）-1,3-ジシロキサンジイル］シチジン（166g,0.25モ
ル，純度90%）、酸化銀（150g,0.65モル）およびトルエ
ン（300ml）の混合物を減圧下蒸発させた。さらにトル
エン（500ml）を加え、100mlをさらに蒸発させた。窒素
雰囲気下、ヨウ化メチルを一度に加え反応液は４０℃で
１６時間撹拌した。銀塩を集め酢酸エチルで洗浄した
（3x150ml）。合併した濾液は減圧下濃縮した。残渣を
最小量のメチレンクロリドに溶解し、シリガゲル（1 k
g）に加えてヘキサンー酢酸エチル（３：２→１：１）
で溶出した。適当な分画を合わせ、減圧下濃縮し、４５
℃／０．２ｍｍＨｇで１時間乾燥させると１１１ｇ（66
%）の油状物が得られた。ＴＬＣ純度 約９０％（Ｒｆ
０．５９、ヘキサンー酢酸エチル ３：２）。ＰＭＲ
（ＣＤＣｌ3）ｄ ８．８（ｂｒ ｓ，１，Ｈ−Ｎ4），
８．４０（ｄ，１，Ｈ−６），８．０−７．４（ｍ，
６，Ｈ−５およびＢｚ），５．８６（ｓ，１，Ｈ−
１’），３．７４（ｓ，３，ＣＨ3Ｏ−２’）。 工程４．N4-ベンゾイル-2'-O-メチルシチジン N4-ベンゾイル-2'-O-メチル-3',5'-O-［（1,1,3,3-テト
ライソプロピル）-1,3-ジシロキサンジイル］シチジン
（111g,0.18モル）のメタノール（160ml）およびテトラ
ヒドロフラン（640ml）溶液をフッ化テトラブチルアン
モニウム（368ml,1Mテトラヒドロフラン溶液）で処理し
た。反応液は２５℃で１６時間撹拌した。アンバーライ
トＩＲＣ−５０樹脂でｐＨを７に調節した。混合物を濾
過し、樹脂は熱メタノール（２ｘ２００ｍｌ）で洗浄し
た。合わせた濾液を減圧下濃縮し、シリカゲル（175g）
に吸着させ、シリカゲルでクロマトグラフを行った（50
0g，酢酸エチルーメタノール １９：１→４：１）。適
当な分画を合わせ、減圧下濃縮し、４０℃／０．２ｍｍ
Ｈｇで２時間乾燥させると２８ｇ（42.4%、シチジンか
ら21.5%）の固形物が得られた。ＴＬＣ 均質（Ｒｆ
０．３７、酢酸エチル）。ｍｐ １７８−１８０℃（エ
タノールから再結晶）。ＰＭＲ（ＣＤＣｌ3）ｄ１１．
２２（ｂｒ ｓ，１，Ｈ−Ｎ4），８．５５（ｄ，１，Ｈ
−６），８．１−７．２（ｍ，６，Ｈ−５およびＢ
ｚ），５．８９（ｄ，１，Ｈ−１’），５．２（ｍ，
２，ＨＯ−３’，５’）、３．４８（ｓ，３，ＣＨ3Ｏ
−２’）。
【０１５３】実施例７１ N4-ベンゾイル-2'-O-メチルシチジン、方法 Ｂ 工程１．2'-O-メチルシチジン シチジン（100g,0.41モル）は暖かいジメチルホルムア
ミド（65℃,1125ml）に溶解された。撹拌しながらこの
溶液を０℃まで冷却した。ゆっくりし、安定した窒素ガ
スの流れを反応を通して確保する。水素化ナトリウム
（油中に６０％、３回ヘキサンで洗浄，18g,0.45モル）
を加え混合物は０℃で４５分間撹拌した。ヨウ化メチル
（92.25g,40.5ml,0.65モル）のジメチルホルムアミド
（400ml）溶液を０℃で４時間以上かけて少しずつ添加
した。混合物は２５℃で７時間撹拌した後濾過した。濾
液を減圧下濃縮して乾固させ続いてメタノール（2x200m
l）と共沸させた。残渣はメタノール（350ml）に溶解し
た。溶液はシリカゲル（175g）に吸着させ蒸発乾固させ
た。この混合物はジクロロメタン（500ml）とスラリー
状としシリカゲルカラム（1kg）の上端にのせた。カラ
ムはジクロロメタンーメタノールの濃度勾配で溶出させ
た（１０：１→２：１）。より極性の低い2',3'-ジメチ
ル副産物を除き、同時に溶出される2'および3'-O-メチ
ル生成物含有分画を合わせ減圧下蒸発させるとシロップ
状が得られた。シロップは最小量の熱エタノール（約15
0ml）に溶解し、放置して２５℃まで冷却させた。生じ
た沈澱物（2'より不溶性）を集めエタノール（2x25ml）
で洗浄し乾燥すると１５．２ｇの純粋な2'-O-メチルシ
チジンを得る；ｍｐ２５２−２５４℃；ＴＬＣ 均質
（Ｒｆ０．５０、ジクロロメタンーメタノール ３：
１、３’異性体のＲｆ０．５０およびジメチル生成物は
０．８０）。濾液を蒸発させると１８ｇの異性体および
ヨウ化ナトリウムの混合物が得られる。 工程２．N4-ベンゾイル-2'-O-メチルシチジン 純粋な2'-O-メチルシチジン（15.2g,0.060モル）を安息
香酸無水物（14.7g,0.12モル）のジメチルホルムアミド
（200ml）溶液に溶解した。溶液は２５℃で４８時間撹
拌した後減圧下蒸発乾固させた。残渣はメタノール（2x
200ml）と摩砕して集め、その後１０分間暖かいエーテ
ル（300ml）と摩砕した。固形物を集め熱2ープロパノー
ル（50ml）で摩砕し４℃で１６時間放置した。固形物を
集め乾燥すると１７ｇの生成物が得られた。2'-O-メチ
ルシチジン粗濾液残渣（18g）が上記のごとくジメチル
ホルムアミド（250ml）中で安息香酸無水物（17.3g,0.0
76モル）で処理され同様に摩砕されるとさらに６．７ｇ
の純粋な生成物が得られ総計で２３．７ｇ（シチジンか
ら１６％）の固形物が得られた。；ＴＬＣ 均質（Ｒｆ
０．２５、クロロホルムーメタノール ５：１、方法Ａ
を使用して作製された物質と同時にスポット）。
【０１５４】実施例７２ N4-ベンゾイル-5'-O-（4、4'-ジメトキシトリフェニルメ
チル）-2'-O-メチルシチジン N4-ベンゾイル-2'-O-メチルシチジン（28g,0.077モル）
をピリジン（400ml）と一緒に減圧下蒸発させて油状物
とした。この残渣に4,4'-ジメトキシトリフェニルメチ
ルクロリド（ＤＭＴ−Ｃｌ，28.8g,0.085モル）および
ピリジン（400ml）を加えた。混合物は２５℃で２時間
撹拌した後メタノール（10ml）を加えて３０分で反応を
停止させた。この混合物は減圧下濃縮し、残渣はシリカ
ゲルでクロマトグラフを行った（500g、ヘキサンー酢酸
エチルートリエチルアミン ６０：４０：１、続いて酢
酸エチルートリエチルアミン ９９：１）。適当な分画
を合わせ、減圧下濃縮し、４０℃／０．２ｍｍＨｇで２
時間乾燥させると２６ｇ（７４％）の発泡体が得られ
た；ＴＬＣ 均質（Ｒｆ ０．４５、酢酸エチル）；ＰＭ
Ｒ（ＤＭＳＯ）ｄ １１．３（Ｈ−Ｎ4），８．４−６．
９（Ｈ−６，Ｈ−５，Ｂｚ），５．９５（Ｈ−１’），
５．２（ＨＯ−３’），３．７（ｓ，６，ＣＨ3Ｏーｔ
ｒｉｔ．），３．５（ｓ，３、ＣＨ3Ｏ−２’）。
【０１５５】実施例７３ N4-ベンゾイル-5'-O-（4、4'-ジメトキシトリフェニルメ
チル）-2'-O-メチルシチジン-3'-O-（β-シアノエチル
N,N-ジイソプロピルホスホロアミダイト） この生成物は中間体化合物N4-ベンゾイル-5'-O-（4、4'-
ジメトキシトリフェニルメチル）-2'-O-メチルシチジン
（22.0g,0.0333モル）から出発する実施例３８の方法に
従って合成され、クロマトグラフィー溶出液として酢酸
エチルーヘキサンートリエチルアミン（５９：４０：
１）を用いると生成物が８３％の収率で固形発泡体とし
て得られた（23.6g）；ＴＬＣ 均質ジアステレオマー
（Ｒｆ ０．４６；０．３３、酢酸エチルーヘキサンー
トリエチルアミン ５９：４０：１）；31ＰーＮＭＲ
（ＣＤ3ＣＮ，Ｈ3ＰＯ4標準）ｄ１５０．３４：１５
１．０２（ジアステレオマー）。
【０１５６】実施例７４ 2'-0-ノニルシチジン シチジン（10.1g,0.0415モル）、水素化ナトリウム（2.
0g,1.2当量）、ヨードノナン（9.8ml,1.2当量）をＤＭ
Ｆ（100ml）中で実施例７１、工程１の方法に従って反
応させ、2'および3'異性体が付着性の発泡体として得ら
れた（11.6g）。
【０１５７】実施例７５ N4-ベンゾイル-2'-0-ノニルシチジン 2'-0-ノニルシチジンおよび3'-0-ノニルシチジンの混合
物（11.5g）が実施例７１、工程２の方法によりN4-ベン
ゾイル-2'-0-ノニルシチジンに変換された。
【０１５８】実施例７６ N4-ベンゾイル-5'-O-（ジメトキシトリチル）-2'-0-ノ
ニルシチジン N4-ベンゾイル-2'-O-ノニルシチジン（2.67g,0.0056モ
ル）が実施例７２の方法に従って塩化ジメトキシトリチ
ル（2.0g,1.1当量）で処理されて，４．２ｇの純粋な生
成物を与えた。元素分析 Ｃ46Ｈ53Ｎ3Ｏ8・1/2Ｈ2Ｏと
して、計算値：Ｃ，７０．３９；Ｈ，６．９３；Ｎ，
５．３５ 実測値：Ｃ，７１．２０；Ｈ，６．８８；
Ｎ，５．４１。
【０１５９】実施例７７ N4-ベンゾイル-5'-O-（ジメトキシトリチル）-2'-0-ノ
ニルシチジン-3'-O-（β-シアノエチル N,N-ジイソプロ
ピルホスホロアミダイト） 本生成物は中間体化合物N4-ベンゾイル-5'-O-（4,4'-ジ
メトキシトリフェニルメチル）-2'-0-ノニルシチジン
（4.1g,0.0053モル）から出発し、実施例３８の方法に
従ってビス-N,N-ジイソプロピルアミノ-シアノエチルホ
スファイト（3.3ml）およびN,N-ジイソプロピルアミノ
ヒドロテトラゾリド（450mg）で処理して製造された。
本生成物はシリカゲルカラムからクロマトグラフィー溶
出液としてヘキサン−ＥｔＯＡｃ（３：１→１：１、１
％トリエチルアミン）を用いて溶出され、生成物が固形
発泡体として得られた（4.21g）。31ＰーＮＭＲ（ＣＤ3
ＣＮ，Ｈ3ＰＯ4標準）はジアステレオマーを示した。
【０１６０】実施例７８ 2'-0-ペンチルシチジン シチジン（10g,0.041モル）、水素化ナトリウム（2.4g,
1.5当量）、ブロモペンタン（7.6ml,1.5当量）をＤＭＳ
Ｏ（90ml）中で実施例７１、工程１の方法に従って反応
させ、2'および3'異性体を発泡体として得た（7.6g）。
【０１６１】実施例７９ N4-ベンゾイル-2'-0-ペンチルシチジン 2'-0-ペンチルシチジンおよび3'-0-ペンチルシチジンの
混合物（7.5g）が実施例７１、工程２の方法によりN4-
ベンゾイル-2'-0-ペンチルシチジンに変換された。
【０１６２】実施例８０ N4-ベンゾイル-5'-O-（ジメトキシトリチル）-2'-0-ペ
ンチルシチジン N4-ベンゾイル-2'-0-ペンチルシチジン（3.0g,0.007モ
ル）が実施例７２の方法に従って塩化ジメトキシトリチ
ル（2.7g,1.1当量）で処理されて，３．５ｇの純粋な生
成物を与えた。元素分析 Ｃ42Ｈ45Ｎ3Ｏ8・1/2Ｈ2Ｏと
して、計算値：Ｃ，６９．２１；Ｈ，６．３６；Ｎ，
５．７６ 実測値：Ｃ，６９．５１；Ｈ，６．３０；
Ｎ，５．７１。
【０１６３】実施例８１ N4-ベンゾイル-5'-O-（ジメトキシトリチル）-2'-0-ペ
ンチルシチジン-3'-O-（β-シアノエチル N,N-ジイソプ
ロピルホスホロアミダイト） 本生成物は中間体化合物N4-ベンゾイル-5'-O-（4,4'-ジ
メトキシトリフェニルメチル）-2'-0-ペンチルシチジン
（3.5g,0.0048モル）から出発し、実施例３８の方法に
従ってビス-N,N-ジイソプロピルアミノ-シアノエチルホ
スファイト（2.9g,3.1ml,2当量）およびN,N-ジイソプロ
ピルアミノヒドロテトラゾリド（400mg,0.5当量）で処
理して製造された。本生成物はシリカゲルカラムからク
ロマトグラフィー溶出液としてヘキサン−ＥｔＯＡｃ
（３：１→１：１、１％トリエチルアミン）を用いて溶
出され、生成物が固形発泡体として得られた（3.24
g）。31ＰーＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ，Ｈ3ＰＯ4標準）はジア
ステレオマーを示した。
【０１６４】実施例８２ 2'-0-プロピルシチジン ＤＭＦ（150ml）中、シチジン（16.5g,0.068モル）を水
素化ナトリウム（4.5g）およびブロモプロパン（15ml）
で室温にて３日間処理した。得られた反応混合物は直接
次の工程に使用した（実施例８３参照）。
【０１６５】実施例８３ N4-ベンゾイル-2'-0-プロピルシチジン 氷浴中の実施例８２の2'-O-プロピルシチジン反応混合
物にピリジン（60ml）および塩化トリメチルシリル（60
ml）を加えた。反応液は３０分間撹拌し、続いて塩化ベ
ンゾイル（55ml）を加えた。生じた反応混合物は２．５
時間撹拌した後、氷浴で冷却した。Ｈ2Ｏ（100ml）およ
び濃ＮＨ4ＯＨ（100ml）が加えられた。３０分間撹拌
後、反応混合物を蒸発させて残渣をＨ2ＯおよびＣＨ2Ｃ
ｌ2間に分配させた。有機層は一度希Ｎａ2ＣＯ3で、一
度希ＨＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥して蒸発させ
た。得られた残渣はシリカゲルカラム（150g）に加え、
最初にＣＨ2Ｃｌ2で、次に５から１０％のＭｅＯＨを含
むＣＨ2Ｃｌ2を溶出溶媒として溶出した。生成物を含有
する分画を蒸発させると発泡体となった。発泡体をＥｔ
ＯＡｃ/ヘキサンから結晶化させると反応生成物の結晶
がいくつかのバッチで得られた（総計で6.5g）。
【０１６６】実施例８４ N4-ベンゾイル-5'-O-（ジメトキシトリチル）-2'-0-プ
ロピルシチジン N4-ベンゾイル-2'-O-プロピルシチジン（3.0g,0.007モ
ル）が実施例７２の方法に従って塩化ジメトキシトリチ
ル（1.5g）で処理されて，１．５ｇの純粋な生成物を与
えた。元素分析 Ｃ40Ｈ42Ｎ3Ｏ8・1/2Ｈ2Ｏとして、計
算値：Ｃ，６８．４５；Ｈ，６．１８；Ｎ，５．９９
実測値：Ｃ，６８．３９；Ｈ，５．９９；Ｎ，５．９
５。
【０１６７】実施例８５ N4-ベンゾイル-5'-O-（ジメトキシトリチル）-2'-0-プ
ロピルシチジン-3'-O-（β-シアノエチル N,N-ジイソプ
ロピルホスホロアミダイト） 本生成物は中間体化合物N4-ベンゾイル-5'-O-（4,4'-ジ
メトキシトリフェニルメチル）-2'-0-プロピルシチジン
（3.8g,0.0055モル）から出発し、実施例３８の方法に
従ってビス-N,N-ジイソプロピルアミノ-シアノエチルホ
スファイト（3.5ml,2当量）およびN,N-ジイソプロピル
アミノヒドロテトラゾリド（500mg,0.5当量）で処理し
て製造された。本生成物はシリカゲルカラムからクロマ
トグラフィー溶出液としてヘキサン−ＥｔＯＡｃ（１：
１、１％トリエチルアミン）を用いて溶出され、生成物
が固形発泡体として得られた（4.72g）。31ＰーＮＭＲ
（ＣＤ3ＣＮ，Ｈ3ＰＯ4標準）はジアステレオマーを示
した。
【０１６８】実施例８６ N2,N6-ジイソブチリルアミノ-9-（2'-O-メチル-β-D-リ
ボフラノシル）プリン N2,N6-ジアミノ-9-（2'-O-メチル-β-D-リボフラノシ
ル）プリン（1.6g,5.39ミリモル，実施例３４参照）を
ピリジン（25ml）と共沸した。残渣をピリジン（40ml）
に懸濁して氷浴で冷却し、塩化トリメチルシリル（4.8m
l）を加えた。反応混合物を３０分撹拌した後塩化ブチ
リル（2.8ml,5当量）を添加した。得られた反応混合物
は室温で４時間撹拌した。撹拌しながらＨ2Ｏ（10ml）
および濃ＮＨ4ＯＨ（10ml）を加えて反応を停止させ
た。３０分後、反応混合物を蒸発させ、残渣をシリカゲ
ルカラムで精製した（生成物の溶出にＣＨ2Ｃｌ2→１０
％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いて）。適当な分画を蒸発
させると生成物が油状物として得られた（2.4g）。
【０１６９】実施例８７ N2,N6-ジイソブチリルアミノ-9-（5'-O-ジメトキシトリ
チル-2'-O-メチル-β-D-リボフラノシル）プリン N2,N6-ジイソブチリルアミノ-9-（2'-O-メチル-β-D-リ
ボフラノシル）プリン（2.4g）をピリジン（25ml）と共
沸し、ピリジンに再溶解した。塩化ジメトキシトリチル
（1.8g,1当量）およびジメチルアミノピリジン（5mg）
を加え、得られた溶液は一夜室温で撹拌した。一部溶媒
を留去して残渣をＣＨ2Ｃｌ2および希Ｎａ2ＣＯ3間に分
配させた。有機層を希Ｎａ2ＣＯ3で洗浄し、ＭｇＳＯ4
で乾燥して蒸発させた。残渣は１％トリエチルアミンを
含むヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：１）で溶出するシリカ
ゲルカラムで精製した。適当な分画を蒸発させると生成
物が発泡体として得られた（2.4g）。
【０１７０】実施例８８ N2,N6-ジイソブチリルアミノ-9-［5'-O-ジメトキシトリ
チル-2'-O-メチル-3'-O-（β-シアノエチル N,N-ジイソ
プロピルホスホロアミド）-β-D-リボフラノシル］プリ
ン N2,N6-ジイソブチリルアミノ-9-（5'-O-ジメトキシトリ
チル-2'-O-メチル-β-D-リボフラノシル）プリン（1.7
g,0.0023モル）をビス-N,N-ジイソプロピルアミノ-シア
ノエチルホスファイト（1.48ml,2当量）およびN,N-ジイ
ソプロピルアミノヒドロテトラゾリド（200mg）で一夜
室温にて処理した。反応混合物は希Ｎａ2ＣＯ3／ＣＨ2
Ｃｌ2間に分配させ，有機層をＭｇＳＯ4で乾燥して蒸発
させた。残渣はシリカゲルカラムに加え、ヘキサン／Ｅ
ｔＯＡｃ（３：１→１：１、１％トリエチルアミンを含
む）で溶出すると生成物が固形発泡物として得られた
（1.73g）。31ＰーＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ，Ｈ3ＰＯ4標準）
はジアステレオマーを示した。
【０１７１】実施例８９ オリゴヌクレオチド合成 本発明のヌクレオシドホスホロアミダイトが一度合成さ
れたら、それらは次にApplied Biosystems Inc. 380Bま
たはMilliGen/Biosearch 7500または8800のような標準
固相自動化核酸合成機により合成されたオリゴヌクレオ
チド内へ取り込ませることができる。所望のオリゴヌク
レオチドを提供するためこれらの合成機は標準ホスホロ
アミダイトカップリングの化学を使用している（例え
ば、M.Caruthers, Oligonucleotides. Antisense Inhib
itors of Gene Expression., pp.7-24, J.S.Cohen, e
d., CRC Press,Inc. Boca Raton, FL, 1989を参照され
たい）。ボーケージ試薬（例えば、J. Am. Chem. Soc.
1990,112,1253を参照されたい）または元素状硫黄（例
えば、Tetrahedron Letters 1981, 22, 1859を参照され
たい）も同様にホスホロチオエートオリゴヌクレオチド
の提供に使用できる。
【０１７２】実施例９０ Ａ．2'-修飾オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーシ
ョンの熱力学の評価 本発明の2'-修飾オリゴヌクレオチドが、これらに相補
的なＲＮＡまたはＤＮＡ配列にハイブリダイズする能力
は、熱溶融分析により決定することができる。ＲＮＡ相
補鎖は,Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼにおよび、Applied Bi
osystems, Inc.380Bにより合成されたテンプレート・プ
ロモータＤＮＡから合成する。ＲＮＡ種は、ＦＰＬＣ
（LKB Pharmacia, Inc）を用いてイオン交換により精製
する。天然アンチセンス・オリゴヌクレオチドまたは特
定の位置に2'-O-アルキルグアノシンを含むものを化学
量論的濃度でＲＮＡまたはＤＮＡ相補鎖に加え、２本鎖
からランダムコイルへの転移における吸収（２６０ｎ
ｍ）深色性をGilford ResponseII分光光度計を用いてモ
ニターする。これらの測定は、０．１Ｍまたは１．０Ｍ
のイオン強度を得るため１０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐ
Ｈ７．４）、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、およびＮａＣｌの
緩衝液中で実施する。データは、１／Ｔｍ対ｌｎ［Ｃ
ｔ］（ここでＣｔは全オリゴヌクレオチド濃度）を表わ
すグラフにより分析することができる。
【０１７３】この分析から熱力学パラメータを決定す
る。形成されたヘテロ２本鎖の２本鎖の安定性に関して
得られた情報に基づき、オリゴヌクレオチド類似体中へ
の2'-O-アルキルグアノシンの配置を、そのヘリックス
安定性に対する効果について評価する。ハイブリッドの
安定性を著しく変化させる修飾は、自由エネルギー（デ
ルタＧ）の減少を示し、これらの修飾のアンチセンス
オリゴヌクレオチドとしての有用性に関する決定を行
う。 Ｂ．2'-修飾オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーシ
ョンの正確性 2'-O-アルキルグアノシン修飾アンチセンスオリゴヌク
レオチドの、絶対的特異性をもって標的ｍＲＮＡとハイ
ブリダイズする能力は、全細胞ＲＮＡの存在下における
精製標的ｍＲＮＡのノーザンブロット分析により示すこ
とができる。標的ｍＲＮＡは、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼ
プロモーターの下流に配置された標的ｍＲＮＡのｃＤＮ
Ａを含むベクターから合成する。合成したｍＲＮＡをア
ガロースゲル中で電気泳動し、適当な支持膜（ニトロセ
ルロース等）に転移させる。この支持膜をブロッキング
して、32Ｐ−標識したアンチセンスオリゴヌクレオチド
をプローブとして用いる。ストリンジェンシーは、ブロ
ットを繰り返し、より高い温度において、またはより低
いイオン強度の洗浄緩衝液により洗浄することにより決
定する。ヘテロ２本鎖の形成の存在を評価するためにオ
ートラジオグラフィーを行い、オートラジオグラムをレ
ーザー密度計（LKB Pharmacia, Inc.）により定量化す
る。全細胞ＲＮＡを標準的方法により単離し、アガロー
ス電気泳動、膜転移、および標識した2'-修飾オリゴヌ
クレオチドをプローブとして用いて分析することによ
り、ハイブリッド形成の特異性を決定する。ストリンジ
ェンシーは修飾していないアンチセンス・オリゴヌクレ
オチドについてあらかじめ決定し、特異的に標的とする
ｍＲＮＡのみが2'-修飾オリゴヌクレオチドとヘテロ２
本鎖を形成しうる条件を用いた。
【０１７４】実施例９１ーヌクレアーゼ耐性 Ａ．血清および細胞質ヌクレアーゼに対する2'-修飾オ
リゴヌクレオチドの耐性の評価 血清ヌクレアーゼに対する天然のホスホロチオエートお
よび2'-修飾オリゴヌクレオチドの耐性は、このオリゴ
ヌクレオチドを種々の濃度のウシ胎児血清またはヒト成
人血清を含む培養液中でインキュベートすることにより
評価された。標識したオリゴヌクレオチドを種々の時間
インキュベートし、プロテアーゼＫで処理し、次に２０
％ポリアクリルアミド尿素変性ゲルにおける電気泳動、
およびそれに続くオートラジオグラフィーによって分析
する。オートラジオグラムをレーザー密度計で定量化す
る。修飾の位置および既知のオリゴヌクレオチドの長さ
に基づいて、特定の2'-修飾がヌクレアーゼ分解に及ぼ
す影響を決定することができる。細胞質ヌクレアーゼに
ついては、ＨＬ６０細胞株が使用された。ポスト・ミト
コンドリア上清を密度差遠心分離により調製し、標識し
たオリゴヌクレオチドをこの上清中で種々の時間インキ
ュベートした。インキュベートの後、血清核酸溶解分解
について上述したように、分解についてオリゴヌクレオ
チド類似体を評価する。オートラジオグラフィーの結果
を、未修飾ホスホロチオエートと2'-修飾オリゴヌクレ
オチドとの比較のために定量化した。 Ｂ．特定のエンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアー
ゼに対する2'-修飾オリゴヌクレオチドの耐性の評価 天然のおよび2'-修飾オリゴヌクレオチドの、特定のヌ
クレアーゼ（エンドヌクレアーゼ、３'，５'−エキソヌ
クレアーゼおよび５'，３'−エキソヌクレアーゼ）に対
する耐性の評価を行い、修飾結合の分解に対する実際の
効果を決定した。修飾オリゴヌクレオチドを、種々の選
択されたヌクレアーゼに特異的な限定された反応緩衝液
中でインキュベートした。生成物をプロテアーゼＫで処
理した後、尿素を加え、尿素を含む２０％ポリアクリル
アミドゲルによる分析を実施した。ゲル生成物はステイ
ンズオール試薬（Sigma Chemical Co.）で染色して可視
化した。レーザー密度計を用いて分解の程度を定量化し
た。特定のヌクレアーゼについて、2'-修飾の効果を決
定し、血清および細胞質系から得られた結果と比較し
た。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 クック，フィリップ・ダン アメリカ合衆国カリフォルニア州92069, サン・マーコス，アヴィラー・コート 641 (72)発明者 グイノッソ，チャールズ・ジョン アメリカ合衆国カリフォルニア州92083, ヴィスタ，エンシノ・ドライヴ 313

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 構造： 【化１】 （式中ＸはＲ1−（Ｒ2）nであり；Ｒ1はＣ1−Ｃ20アル
    キル、Ｃ2−Ｃ20アルケニルまたはＣ2−Ｃ20アルキニル
    であり；Ｒ2は、ケト、ニトロソ、トリフルオロメチ
    ル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキ
    ル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、
    Ｓ−アリール、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−
    アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ、Ｎ−フタルイ
    ミド、イミダゾール、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシ
    ルアミノ、イソシアネート、スルフィド、ジスルフィ
    ド、シリル、複素環式、インターカレーター、レポータ
    ー分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポ
    リアルキレングリコール、またはポリエーテルであり；
    およびｎは１から６までの整数である）を有する化合
    物。
  2. 【請求項２】 Ｒ1がＣ4−Ｃ20アルキルである請求項１
    に記載の化合物。
  3. 【請求項３】 構造： 【化２】 （式中ＸはＲ1−（Ｒ2）nであり；Ｒ1はＣ3−Ｃ20アル
    キルであり；Ｒ2はＮＨ2、イミダゾールまたはＮ−フタ
    ルイミドであり；Ｙはヒドロキシル保護基であり；Ｚは
    リン酸または活性化されたリン酸基であり；Ｑ1および
    Ｑ2は独立してＨまたはグアノシン保護基であり；およ
    びｎは１から６までの整数である）を有する化合物。
  4. 【請求項４】 構造： 【化３】 （式中ＸはＲ1−（Ｒ2）nであり；Ｒ1はＣ4−Ｃ20アル
    ケニルまたはＣ2−Ｃ20アルキニルであり、そしてｎは
    ０であるか；あるいは、Ｒ1はＣ1−Ｃ20アルキル、Ｃ2
    −Ｃ20アルケニルまたはＣ2−Ｃ20アルキニルであり、
    そしてｎは１から６であり；Ｒ2はハロゲン、ヒドロキ
    シル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニトロ
    ソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメト
    キシ、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、
    Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール、ＮＨ−
    アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−ア
    ラルキル、アミノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、
    アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、イソシアネ
    ート、スルフィド、ジスルフィド、シリル、複素環式、
    炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、コン
    ジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレン
    グリコール、またはポリエーテルであり；およびｎは０
    から６までの整数である）を有する化合物。
  5. 【請求項５】 ２’−Ｏ−（Ｎ−フタルイミド）−ペン
    チルグアノシン、または２’−Ｏ−（イミダゾール−１
    −イル）ブチルグアノシンである化合物。
  6. 【請求項６】 構造： 【化４】 （式中ＸはＲ1−（Ｒ2）nであり；Ｒ1はＣ1−Ｃ20アル
    キル、Ｃ2−Ｃ20アルケニルまたはＣ2−Ｃ20アルキニル
    であり；Ｒ2は、ケト、ニトロソ、トリフルオロメチ
    ル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキ
    ル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、
    Ｓ−アリール、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−
    アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ、イミダゾー
    ル、Ｎ−フタルイミド、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキ
    シルアミノ、イソシアネート、スルフィド、ジスルフィ
    ド、シリル、複素環式、インターカレーター、レポータ
    ー分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポ
    リアルキレングリコール、またはポリエーテルであり；
    Ｔ3およびＴ5は独立してＯＨまたは該構造に連結された
    該オリゴヌクレオチドのさらなるサブユニットであり；
    およびｎは１から６までの整数である）を有するサブユ
    ニットを少なくとも一つ含むオリゴヌクレオチド。
  7. 【請求項７】 インビトロでまたはヒト以外の動物にお
    いて蛋白質の合成を調節する方法であって、構造： 【化５】 （式中ＸはＲ1−（Ｒ2）nであり；Ｒ1はＣ1−Ｃ20アル
    キル、Ｃ2−Ｃ20アルケニルまたはＣ2−Ｃ20アルキニル
    であり；Ｒ2は、ケト、ニトロソ、トリフルオロメチ
    ル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキ
    ル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、
    Ｓ−アリール、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−
    アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ、イミダゾー
    ル、Ｎ−フタルイミド、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキ
    シルアミノ、イソシアネート、スルフィド、ジスルフィ
    ド、シリル、複素環式、インターカレーター、レポータ
    ー分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポ
    リアルキレングリコール、またはポリエーテルであり；
    Ｔ3およびＴ5は独立してＯＨまたは該構造に連結された
    オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオシドのさらな
    るヌクレオチドまたはヌクレオシドであり；およびｎは
    １から６までの整数である）を有するサブユニットを少
    なくとも一つ含むオリゴヌクレオチドを、該蛋白質をコ
    ードしているｍＲＮＡと特異的にハイブリッド形成させ
    ることを含む方法。
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