CN1718583A

CN1718583A - 从亚麻根中制备脑苷脂类化合物的方法

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Publication number: CN1718583A
Application number: CN 200510068282
Authority: CN
Inventors: 秦海林; 母海成; 李志宏; 梁志; 张霞
Original assignee: LONGJING MINKANG BIOLOGICAL PRODUCT FACTORY
Current assignee: LONGJING MINKANG BIOLOGICAL PRODUCT FACTORY
Priority date: 2005-05-08
Filing date: 2005-05-08
Publication date: 2006-01-11
Anticipated expiration: 2025-05-08
Also published as: CN1329406C

Abstract

本发明公开了一种新的制备脑苷脂类化合物的方法，具体说，即从亚麻通过提取、分离和重结晶，制备脑苷脂类化合物β－胡萝卜苷、化合物1和化合物2。

Description

从亚麻根中制备脑苷脂类化合物的方法

技术领域

本发明涉及一种新的制备脑苷脂类化合物的方法，即从亚麻中提取脑苷脂类化合物。

背景技术

亚麻(Linum usitatissimum L.)为亚麻科亚麻属植物，广布全国各地。该植物为一年生草本，茎光洁平滑，株高0.75～1.20m。顶端有分枝，呈伞形；茎杆横截面呈圆形，呈灰绿色；亚麻叶灰绿色，互生，边缘呈线状披针形，叶密集、表面平坦，长2～3.5cm，宽2～4cm，叶基部渐窄，呈蓝绿色；花散生在花梗顶端，花梗直立，长2～7mm，总状花序或开放聚伞花序；萼片5枚，狭长或长卵形，长5～7mm，全缘，无蜜腺，边缘呈锯齿状，总萼片长为花瓣的1/2；花瓣蓝色、白色或淡红色，长约1cm以上，呈倒卵形；柱头呈线形，向下延伸至花柱的内侧；果实为具有5室的蒴果，卵球形，7～10mm长，由宿存粤包围，果皮不分裂；每个果实内种子不超过10粒，黄色或浅褐色到深褐色，有光泽，大小不等，干粒重3～12g。种子扁平，卵形，一端圆滑，另一端尖锐。

亚麻既是一种优良的纺织和油料作物，又具有多种药用功能。在纺织工业中，虽然与棉花、羊毛相比，亚麻纤维柔软性和弹性不足，但强力高，在麻类作物中强力仅次于苎麻。用特殊的纺织技术可将亚麻纤维纺成高支纱并织成精美的织物。亚麻种子含有20％-30％的蛋白质，用它可以榨出亚麻油。80％的亚麻油用于生产油漆。亚麻籽榨出油后，残留物可压制成亚麻饼，亚麻饼仍含3％-6％的亚麻油。因为蛋白质含量高，亚麻饼被认为是一种极好的牲畜饲料。在药用方面，主要使用其种子，具有润肠通便、养血祛风之功效，用于治疗肠燥便秘、过敏性皮炎、皮肤瘙痒等。

尽管文献记载亚麻根也可药用，但在有关的科学研究以及亚麻根化学成分研究方面，至今未见任何正式研究报道。脑苷脂是含糖、脂肪酸和鞘氨醇的类脂，其构造如下：

脑苷脂主要存在于动物界，植物中也有分布。脑苷脂的单体成分为白色无定型颗粒；研究表明，多数脑苷脂类化合物具有重要的生理活性，如抗肿瘤、免疫调节、抗HIV-1病毒、抗肝毒、抗溃疡，以及护肤、护发等作用，由于脑苷脂细胞膜结构成分，因此其活性作用一般较为温和，有望开发为防治一些慢性病的药物[桑已曙，闵知大，脑苷脂类化合物研究进展，中国生化药物杂志，2000，21(4)：211-213]。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的制备脑苷脂的方法。

为实现本发明的目的，本发明采用以下的技术方案：

包括如下步骤：

(a)亚麻(Linum usitatissimum L.)加溶剂提取，过滤，浓缩获得粗浸膏；

(b)粗浸膏用水溶解，用低极性的有机溶剂萃取，保留水层；

(c)上步获得的水层，用有机溶剂萃取，保留有机溶剂层，浓缩得中提物；

(d)总提物用硅胶柱分离，用洗脱液按极性递增进行洗脱，得到含有脑苷脂类化合物的流分；

(e)合并含有脑苷脂类化合物的流分，浓缩，用醇结晶得脑苷脂类化合物。

具体而言，

原料：亚麻(Linum usitatissimum L.)植株，所述的亚麻植株包括从亚麻种子，种子发芽，分苗期、枞形期、快速生长期、现雷开花期、成熟期等亚麻生长的全过程，优选的是成熟期的亚麻植株。成熟期又分为绿熟期、黄熟初期、黄熟期、完熟期四个阶段，更优选的是黄熟阶段的亚麻植株。所述的亚麻植株包括亚麻的根、茎、叶、花、果实和种子等各个部分，还包括亚麻的原茎，以及亚麻原茎抽取纤维后的茎屑；优选的亚麻植株是亚麻地下部分，即亚麻的根。

原料可以适度干燥。

为提高提取的效率；亚麻原料可以适当粉碎，以利于增大与溶剂的接触面积，提高效率。

提取：

亚麻原料的提取溶剂选自水、醇类、其他常用有机溶剂、或水与醇类的混合物。优选的溶剂是水与醇类的混合物，例如含有醇1-95％(体积比)的水。优选的醇类包括甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等。常用有机溶剂包括醋酸乙酯、氯仿、石油醚等。

为保证提取的效果，提取时使用溶剂量为原药重量的3-14倍；每次加入提取溶剂的量，要没过药材原料。提取可以在静态或动态条件下进行，优选在动态条件下进行。为了提高提取的效率，可以使用超声波等。提取的温度是从室温(例如20℃)到溶剂回流温度的范围内，优选在回流的温度下。提取可连续或间歇进行，间歇提取时可重复1-4次。

提取结束后，过滤，使用本领域的常规技术回收溶剂得粗浸膏。

粗浸膏用水溶解。然后用低级性的有机溶剂萃取以除去粗浸膏中的低级性成分，优选的低级性有机溶剂包括氯仿、苯、环己烷、石油醚、溶剂油、烷基醇、醋酸乙酯；更优选的是醋酸乙酯。所用的低级性有机溶剂量可以是粗浸膏醇溶液的1-6倍。萃取的次数为2-5遍，优选是3-4次。第一次萃取完成后弃去低级性有机溶剂部分，保留水层。

获得水溶液再用有机溶剂萃取，保留有机溶剂层，弃去水层以除去水溶性成分。有机溶剂优选使用正丁醇。可以萃取1-6次，优选是3-5次，更优选是3次。每次萃取使用的有机溶剂的量是水体积的0.1-5倍，优选是0.2-1.5倍。合并有机溶剂萃取液并选用NaHCO₃水溶液萃取、再用H₂O洗涤至中性。最后浓缩蒸干得总提物。

总提物用少量有机溶剂溶解，优选是甲醇，用2-13倍重量的硅胶拌样，用硅胶柱色谱法分离，分离用硅胶的重量是上样量的8-80倍，优选是10-30倍，硅胶的规格可以是柱色谱或薄层色谱用硅胶，优选是200-300目柱色谱硅胶。硅胶柱的洗脱液可以使用极性从小到大的溶剂洗脱，优选的洗脱液是氯仿、醋酸乙酯或二氯甲烷-乙醇或甲醇混合溶剂，其体积比例可以从50∶1开始，逐步增加乙醇或甲醇的含量，以提高极性。当氯仿∶甲醇按体积比调为25∶1时，不久即洗脱得到含本发明化合物的洗脱流分。

分别回收各洗脱流份的洗脱溶剂，并用甲醇溶解后，放置，含有本发明化合物的流份即有结晶析出，并可用有机溶剂如甲醇等重结晶，得脑苷脂类化合物，为白色无定型粉末。当然也可以使用其他方法检测本发明化合物的流出，例如：核磁共振技术等。

也可以合并含有脑苷脂类化合物的洗脱流份，浓缩。残余物用少量甲醇或乙醇溶解，放置，结晶，过滤，得脑苷脂类化合物。

本发明的优点：

本发明将现有技术中亚麻生产过程中作为作为废弃物的亚麻根、亚麻茎屑是作为原料加以利用，提取具有多种生理活性的脑苷脂类化合物，实现了资源的综合利用。

具体实施方式

下面的实施例及药物活性实验用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。

实施例

26kg亚麻根经粉碎成粒度为1×1cm²目后，用6倍量95％乙醇回流提取3次(2h，1h×2)，滤取提取液，合并，浓缩至膏状，用4000mL蒸馏水溶解，依次用乙酸乙酯萃取三次(2000mL、1500mL×2)、正丁醇萃取三次(2000mL、1500mL×2)；得到的正丁醇萃取液浓缩至约3000mL，然后用5％碳酸氢钠水溶液萃取3次(1500mL，1000mL×2)，再用水萃取至中性(1000mL×2)，减压回收正丁醇，得棕色正丁醇提取物，即为粗的脑苷脂提取物(31g)。

取30g用10倍量200～300目硅胶进行柱色谱分离，用三氯甲烷/甲醇(100∶1～5∶1)溶剂体系进行梯度洗脱，每250ml收集1份，¹H NMR检测，合并相同流分，在61-69份得β-胡萝卜苷(980mg)；在100-110和115-130份得到的化合物经¹HNMR检测分别为脑苷脂类化合物1(110mg)和2(70mg)。

结构鉴定：

化合物1，白色无定型粉末，其IR谱显示羟基(3300cm^-1)和氨基(1630cm^-1)吸收峰。ESIMS中的离子峰866[M+Na]⁺，848[M-H₂O+Na]⁺，704[M-162+Na]⁺，686[M-180+Na]⁺表明其分子量为843，与文献[吴彤，孔德云，李惠庭.深绿山龙眼中二个新的植物脑苷的结构鉴定，药学学报，2004，39(7)：525-527]报道的已知化合物3一致。化合物1的¹H NMR谱与3非常相似(表1)，主要差别是1的¹H NMR谱中，烯键质子信号δ5.57(1H，dt，J＝15.5，6.0Hz，H-8)，5.46(1H，dt，J＝15.5，6.5Hz，H-9、)的偶合常数为反式偶合。IR谱中964cm^-1的吸收也表明反式双键的存在。1的¹³C和DEPT NMR谱与3也极为相似，除在δ22.9-33.5范围内的多个亚甲基信号外，还显示1个较强的甲基共振信号，2个连氧的亚甲基信号，11个次甲基共振信号和1个季碳信号。1的甲醇酸水解得到长链脂肪酸甲酯，其EIMS中的离子峰398[M]⁺，339[M-COOCH₃]⁺表明为二十四碳酸甲酯。结合¹H-¹H COSY，TOCSY，HSQC，HMBC谱的分析，确证化合物1的结构如下所示。

Table 1 ¹HNMR and ¹³C NMR data of compound 1(500MHz，C₅D₅N)

Carbon	δ_H	δ_C	¹H-¹H COSY	HMBC
Carbon	δ_H	δ_C	¹H-¹H COSY	HMBC	123456891011～151617181′2′3′4′5′～21′22′23′241″2″3″4″5″6″NH	4.66dd(11.0，6.5)4.48dd(11.6，4.5)5.23m4.24，dd(6.5，4.5)～4.15m2.23，m1.85m1.75m1.99m5.57dt(15.5，6.0)5.46dt(15.5，65)2.05m1.23～1.33m1.23-1.33m1.23-1.330.87t(6.5)4.54dt(6.5，2.5)1.95m2.15m1.69m1.23～1.33m1.23～1.33m1.23～1.33m0.87t(6.5)4.91d(8.0)3.96t(8.0)4.15m4.15m3.82m4.45，dd(11.5，2.0)4.30dd(11.5，5.0)8.15d(9.5)	70.451.775.872.434.026.633.0a130.6b130.8b33.3a29.5～30.032.123.014.3175.672.435.525.829.5～30.032.123.014.3105.575.178.471.478.562.6	2-H2-H1-H，3-H2-H，4-H3-H，5-H4-H8-H7-H，9-H8-H，10-H3′-H2′-H2″-H1″-H，3″-H2″-H，4″-H3″-H，5″-H4″-H，6″-H5″-H5″-H2-H	1-C3-C，1-C，1′-C1-C，2-C，4-C，5-C3-C，6-C7-C，9-C，10-C7-C，8-C，10-C16-C，17-C3′-C，1′-C22′-C，23′-C1-C，3″-C，5″-C3″-C，1″-C5″-C6″-C1″-C，6″-C，4″-C5″-C，4″-C

化合物2，白色无定型粉末，ESIMS m/z：736[M+Na]⁺，¹H NMR(400MHz，C₅D₅N)δ：0.87(6H，t，J＝5.6Hz，CH₃×2)，3.90(1H，m，H-5″)，4.02(1H，t，J＝8.0Hz，H-2″)，4.21(2H，m，H-1a，3″，4″)，4.35(1H，dd，J＝12.0，5.6Hz，H-6″a)，4.51(1H，dd，J＝12.0，2.4Hz，H-6″b)，4.57(1H，dd，J＝7.6，3.6Hz，H-2′)，4.71(1H，dd，J＝10.4，6.0Hz，H-1b)，4.75(1H，t，J＝6.4Hz，H-3)，4.81(1H，m，H-2)，4.92(1H，d，J＝7.6Hz，H-1″)，5.48(2H，m，H-8，9)，5.89(1H，dt，J＝15.2，6.0Hz，H-5)，5.99(1H，dd，J＝15.2，5.6Hz，H-4)，8.35(1H，d，J＝8.0Hz，NH)；¹³C NMR(100MHz，C₅D₅N)δ：69.9(C-1)，54.3(C-2)，72.4(C-3)，132.1(C-4)，131.8(C-5)，32.9(C-6)，32.8(C-7)，131.0(C-8)，129.8(C-9)，32.6(C-10)，175.7(C-1′)，72.1(C-2′)，35.5(C-3′)，14.2(C-18，16′)，105.4(C-1″)，75.0(C-2″)，78.4(C-3″)，71.4(C-4″)，78.3(C-5″)，62.5(C-6″)。其甲醇酸水解得到长链脂肪酸甲酯，EIMSm/z：286[M]⁺，227[M-COOCH₃]⁺，表明为十六碳酸甲酯。以上数据与文献[.Shibuya H，Kawashima K，Sakagami M，et al.Sphingolipids andglycerolipids.I.Chemical structures and ionophoretic activities ofsoyacerebrosides I and II from Soybean，Chem Pharm Bull，1990，38(11)：2933-2938.]一致，因此鉴定化合物2的结构如下所示。

Claims

1、一种脑苷脂类化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(b)粗浸膏用水溶解，用低极性的有机溶剂萃取，保留水层；

2、根据权利要求1的制备方法，其特征在于，所述的亚麻(Linumusitatissimum L.)是亚麻根。

3、根据权利要求1的制备方法，其特征在于，所述的脑苷脂类化合物选自β-胡萝卜苷、化合物1、化合物2。

1:8E

3:8Z

化合物1和3

2

化合物2

4、据权利要求1的制备方法，其特征在于，步骤(a)中所述的溶剂选自水、醇、或两者的混合物。

5、根据权利要求4的制备方法，其特征在于，所述的醇包括甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇。

6、根据权利要求1的制备方法，其特征在于，步骤(b)中所述的有机溶剂包括氯仿、苯、环己烷、石油醚、溶剂油、烷基醇、醋酸乙酯。

7、根据权利要求1的制备方法，其特征在于，步骤(c)中所述的有机溶剂是正丁醇。

8、根据权利要求1的制备方法，其特征在于，步骤(d)中的所述的硅胶重量的是上样量的8-80倍，硅胶的规格是200-300目。

9、根据权利要求1的制备方法，其特征在于，步骤(d)中的洗脱液是氯仿、醋酸乙酯或二氯甲烷-乙醇或甲醇混合溶剂，其体积比例可以从50∶1开始，逐步增大甲醇或乙醇的含量。

10、根据权利要求1的制备方法，其特征在于，步骤(e)中所述的醇选自甲醇或乙醇。