CN1686098A - 硫普罗宁冻干粉针注射剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及保肝药物硫普罗宁及其冻干粉针注射剂及其制备方法。本发明的硫普罗宁冻干粉针注射剂由活性成分硫普罗宁和药物可接受的载体成分组成，其中所述药物可接受的载体可以选自聚乙二醇、甘露醇、环糊精、可溶性淀粉、糖类物质、氯化钠、低分子右旋糖酐、苯甲酸或纤维类物质中的一种或多种，优选聚乙二醇，尤其优选聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000。本发明方法制备的冻干粉针注射剂具有很好的稳定性。

Description

硫普罗宁冻干粉针注射剂

                        技术领域

本发明涉及药物及其制剂领域，具体而言，本发明涉及保肝药物硫普罗宁及其冻干粉针注射剂及其制备方法。

                        背景技术

硫普罗宁(英文名称：Tiopronin)为一种代谢改善解毒剂，其分子式：C₅H₉NO₃S，分子量：163.20，结构式如下：

其主要用于慢性肝病的肝功能改善。该产品的口服和水针注射剂目前已经上市。现有注射剂为每1安瓿中装入2ml或5ml浓度5％的硫普罗宁钠盐的水溶液剂，由于硫普罗宁在水中稳定性差，易发生氧化反应，故水溶液注射剂存在储存时间短的弊端，使用有效期短，影响了该产品的安全和有效使用。粉针制剂可以解决上述问题。

本发明经过研究，发现采用冷冻干燥的方法将硫普罗宁制成注射用粉末制剂，不仅可以解决上述缺陷，而且本发明方法制备的冻干粉针注射剂具有很好的稳定性。

                      发明内容

本发明的目的是提供一种硫普罗宁冻干粉针注射剂；

本发明的另一目的是提供一种制备硫普罗宁冻干粉针注射剂的方法；

本发明还有一个目的是提供一种用硫普罗宁冻干粉针注射剂制备治疗肝炎药物的用途。

本发明的硫普罗宁冻干粉针注射剂由活性成分硫普罗宁和药物可接受的载体成分组成，其中所述药物可接受的载体可以选自聚乙二醇、甘露醇、环糊精、可溶性淀粉、糖类物质、氯化钠、低分子右旋糖酐、苯甲酸或纤维类物质中的一种或多种，优选聚乙二醇，尤其优选聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000。其中，硫普罗宁与药物可接受的载体之间的重量比可以是1-10∶1，优选10∶1。

本发明注射剂优选组成为活性成分硫普罗宁和聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000或聚乙二醇6000，其中硫普罗宁和聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000或聚乙二醇6000的重量比为1-10∶1，优选10∶1。本发明注射剂的规格为含活性化合物硫普罗宁1-1000mg，优选含活性化合物硫普罗宁50mg，100mg、200mg或400mg。

本发明的冻干粉针注射剂用以下方法制备：

本发明的硫普罗宁冻干粉针注射剂的制备方法包括下列步骤：

a.配制药液：即将活性成分硫普罗宁加注射用水溶解，加入药物可接受的载体混匀，加注射用水到规定量；

b.除热原：在步骤a的药液中加入注射剂用活性炭于0-100℃脱色30分钟滤过；

c.除菌：将步骤b的滤液用除菌滤器进行正压除菌滤过；

d.罐装：用管制西林瓶进行无菌灌装；

e.冻干：在低温真空下进行冷冻干燥。

以使用1000ml注射用水配制1000支硫普罗宁冻干粉针注射剂为例，制备硫普罗宁冻干粉针注射剂使用的物料重量范围是：

硫普罗宁                          5-500g

聚乙二醇2000(或其他可药用载体)    0.5-500g

注射用水                          1000ml

共制成冻干品                      1000支

具体步骤如下：

配制药液：

称取注射用硫普罗宁原料(硫普罗宁含量不得少于98.5％，含重金属不得过百万分之十五)，加注射用水，使其溶解，浓度为0.2g/ml。然后加入规定量的聚乙二醇混匀。再加注射用水至规定体积如1000ml，使硫普罗宁含量为0.1g/ml，聚乙二醇2000含量为0.01g/ml。

除热原：

上述药液中加入注射剂用活性炭(活性炭用量是硫普罗宁原料重量的0.1-1.0％)，在0-100℃脱色30分钟，过滤，收集滤液。

除菌：

将上述滤液按无菌操作法用除菌滤器进行正压除菌滤过，压力在0.1Mpa以下，用0.22μ微孔滤膜，滤过前应先进行起泡点试验，滤液送样进行热原检查和半成品含量检查然后分装。

罐装：

(1)管制西林瓶的处理：管制西林瓶规格为2ml，预处理时用0.1-1.0HCl液将管制西林瓶灌满，100℃下30分钟进行热处理，然后经超声波清洗机以纯化水、注射用水清洗，接着以洁净的压缩空气吹干，最后通过温度达350℃隧道烘箱灭菌，待温度降至60℃后移无菌室备用。

(2)灌装：在100级洁净度超净工作间进行灌装，半加塞。

冻干：

在专用冻干箱内，在-40℃以下预冻1.5-2小时，然后在-5-0℃、1.33Pa(0.01托)真空度下升华，在游离水分去除90％以后，加温干燥(最高温度不得过超过35℃)待温度曲线和真空曲线分别重合，即可视为冻干结束，冻干箱内自动全加塞。

封口：管制西林瓶分批从冻干箱取出，加铝盖即可。

说明：本品的pH为1.5-2.5，酸性较强，故管制西林瓶要经过酸处理，以提高管制西林瓶的稳定性和耐酸能力。

本发明的注射剂，使用时用2ml 5％NaHCO₃注射液(专用溶媒)溶解，加入到输液器中静脉注射，也和其他治疗肝病的药物或输液剂同时使用，一同注射，该注射剂可以每天使用，每日1-3次，一个疗程为7-10天。

本发明的注射剂具有稳定性好，疗效优良，使用方便的特点，比较水针具有更好的稳定性，以下通过实验说明本发明的有益效果。

一.硫普罗宁冻干粉针及硫普罗宁水针、硫普罗宁钠水针的初步稳定性试验研究

I、试验目的：

硫普罗宁做为治疗慢性迁延性肝炎的有效药物，国内外市场主要有两种剂型。A)片剂：日本参天制药株式会社的治尔乐100片和河南新谊药业股份有限公司的凯西莱片等，即硫普罗宁片(规格100mg)。B)水针剂：日本参天制药株式会社的5％硫普罗宁钠水针剂(规格2ml、5ml)。静脉注射水针剂比口服片剂具有起效快，生物利用度高，疗效好等优点。但因硫普罗宁(CH₃-CHSH-CONHCH₂COOH)结构中含有活泼-SH 巯基，水溶液中易氧化变质为二硫代物[结构式：(CH₃CH)₂SS(CONHCH₂COOH)₂]影响疗效，因此硫普罗宁水针剂稳定性较差。用特殊工艺将硫普罗宁制成冻干粉针剂，较好地解决了注射用硫普罗宁的稳定性，保证了产品质量，同时临床应用具有使用方便，起效快，生物利用度高，疗效好的优点。参照《医疗药日本医药品集》第9版(1985)P558<硫普罗宁钠5％水针剂>的方法制备了规格2ml的“5％硫普罗宁水针剂”、“5％硫普罗宁钠水针剂”。并且将这些制剂在40℃、60℃温度条件下完成了0-10天的影响因素稳定性试验，强光照射影响因素稳定性试验及室温留样稳定性试验；同时完成了本发明“硫普罗宁冻干粉针”的40℃、60℃温度条件下0-10天的影响因素稳定性试验，强光照射影响因素稳定性试验及室温留样稳定性试验。然后进行比较，考察“5％硫普罗宁水针剂”、“5％硫普罗宁钠水针剂”、“硫普罗宁冻干粉针”的产品稳定性。

II、样品的配制

A、5％硫普罗宁水针(2ml)：取50g针用硫普罗宁原料药，用注射用水定量稀释至1000ml，用2ml安瓿灌装成2ml针剂，封口，灭菌、灯检即得500支产品。

B、5％硫普罗宁钠水针剂

称取50g注射用硫普罗宁原料药，先用100ml注射用水溶解，再用10％NaHCO₃调pH6-7，然后再用注射用水定量稀释至1000ml用2ml安瓿灌装成2ml针剂，封口，灭菌灯检，即得500支产品。

C、100mg硫普罗宁冻干粉针

取50g注射用硫普罗宁原料药，25g聚乙二醇2000用注射用水溶解并稀释至1000ml，加入1.5g注射剂用活性炭，在60-80℃下0.5小时除热原，过滤，滤液用0.22μl滤膜正压过滤除菌，无菌室内收集无菌滤液，取2ml灌装入西林瓶中，冻干箱真空冻干，压盖，检查即得500支产品。

III、试验方法：

主要考察温度，强光照射等影响因素试验条件下0-10天样品的含量变化情况及样品中硫普罗宁氧化产物二硫化物用HPLC法测定含量变化情况。

A、含量的测定方法：

精密称取内容物适量(约相当于硫普罗宁300mg)加水30ml溶解后，加淀粉指示液1ml，用碘液(0.1mol/L)迅速滴定至溶液显浅兰紫色，并在30秒钟内不褪色。每1ml碘液(0.1mol/L)相当于16.32mg的C₅H₉NO₃S。

B、杂质(二硫代物)HPLC法含量测定

取内容物少量，用蒸馏水稀释成1mg/ml的供试液。HPLC色谱条件如下：

柱子：C18柱250×4.6mm    5um

流动相相：甲醇∶水＝3∶7用磷酸调pH2.5

检测波长：205nm

流速：1ml/分钟

进样量：5μl

硫普罗宁保留时间：4分钟。二流化物保留时间6分钟，归一化法测二硫代物杂质的含量。

IV、测定结果：

A、硫普罗宁冻干粉针稳定性试验

a、室温留样稳定性试验：(见表1)

表1

批号	检测时间	贮存时间(月)	含量测定％
				980503	98.05.09	0	99.30
98.08.09	3	99.33
			98.11.09		6	99.25
99.02.09	9	99.17
			99.05.09		12	99.19

说明室温留样一年硫普罗宁冻干粉针产品含量稳定。

b、40℃、60℃影响因素试验

40℃、60℃条件下硫普罗宁冻干粉针剂(100mg)考察10天，现将含量测定结果汇总如下：(见表2)

表2

时间(天)		0	1	3	5	10
							含量％	40℃	99.82	99.69	99.81	99.75	99.55
60℃	99.73	99.66	99.63	99.62	99.56
						杂质％		40℃	0.2％	0.3％	0.3％	0.3％	0.5％
60℃	0.2％	0.3％	0.4％	0.3％	0.5％

小结：40℃、60℃本品考察10天，含量指标稳定，产品质量在此考察条件下稳定。

c、强光照射影响因素稳定性试验

取硫普罗宁冻干粉针适量，置注射剂澄明度测定仪下，以3000LX光照度照射10天，于0、1、3、5、10天分别取样测定含量，同0天测定结果比较。测定结果见下表3：

表3

时间(天)	0	1	3	5	10
						含量％	99.90	99.80	99.30	98.40	98.30
杂质％	0.1	0.2	0.7	1.3	1.4
						HPLC法

本品经10天强光照射，含量测定无太大变化，符合质量标准规定，但从实测值看有逐步下降趋势，贮存时本品应避光保存。

d、高湿影响因素稳定性试验

本品为冻干制剂，严封于管制西林瓶中，湿度对其影响不大，故未做此项试验。

B、5％硫普罗宁水针剂(2ml)的稳定性考察试验：

a、室温留样长期稳定性考察试验

5％硫普罗宁水针剂室温留样一年，现将0、3、6、9、12月样品含量测定的结果如下表4：

表4：

批号	检测时间	贮存时间(月)	含量测定(％)
				980503	98.05.0998.08.0998.11.0999.02.0999.05.09	036912	99.5089.6080.3073.3069.90

说明5％硫普罗宁水针室温留样长期稳定性极差，留置一年，含量由初配时99.6％下降到68.90％，完全失去药用价值。不加抗氧化剂，5％硫普罗宁水针不能长期室温贮存。

b.40℃、60℃条件下5％硫普罗宁水针剂(2ml)考察试验

40℃、60℃条件下5％硫普罗宁水针剂(2ml)考察10天，现将含量测定结果汇总如下：(见表5)

表5

时间(天)		0	1	2	3	4	5	10
									含量％	40℃	99.50	97.8	98.9	97.6	96.4	96.0	90.5
60℃	99.50	97.6	98.8	96.6	95.6	94.7	90.4
								杂质％		40℃	0.3	1.1	1.5	2.3	3.6	5.0	8.7
60℃	0.4	2.1	3.8	3.4	4.3	5.6	11.5

可以看出40℃、60℃影响因素条件下5％硫普罗宁水溶液很不稳定，0天和10天相比含量由99.60％下降到91.50％、89.4杂质二硫化物由0.4％升至8.5％，10.5％，已失去药用价值。

c、强光照射影响因素稳定性试验

取5％硫普罗宁水针剂适量，置注射剂澄明度测定仪下，以3000LX光照度照射10天，于0、1、3、5、10天分别取样测定，同0天测定结果比较：测定结果见表6：

表6

时间(天)	0	1	3	5	10
						含量％	99.50	97.80	96.10	94.20	89.12
杂质％	0.4	2.0	3.1	5.7	10.6
						(HPLC法)

本品经10天强光照射，含量由99.60％下降到89.10％，杂质二硫代物由0.4％升到10.90％，已失去药用价值，故5％硫普罗宁水针剂强光条件下不稳定。

说明本品经10天强光照射，含量下降明显，已失去药用价值。

d、高湿影响因素稳定性试验

因本品为安瓿包装，湿度对其影响不大，故未做此项试验。

c、5％硫普罗宁钠水针剂(2ml)的稳定性试验

a、室温留样长期稳定性试验

5％硫普罗宁钠水针剂室温留样一年，现将0、3、6、9、12月样品

含量测定的结果如下表7：

表7

批号

检测时间

贮存时间(月)

含量测定(％)

980503

98.05.0998.08.0998.11.0999.02.0999.05.09

036912

99.6087.7081.1072.5063.72

说明5％硫普罗宁钠水针室温留样长期稳定性极差，留置一年，含量由初始的99.80％下降到64.70％，完全失去药用价值，不加抗氧化剂，特殊方法贮存，5％硫普罗宁钠水针不能长期贮存。

b.40℃、60℃、影响因素条件5％硫普罗宁钠水针剂(2ml)的稳定性试验

40℃、60℃、影响因素条件下0-10天5％硫普罗宁钠水针剂(2ml)的稳定性试验，含量测定结果如下：(见表8)

表8

时间(天)		0	1	2	3	4	5	10
									含量％	40℃	99.80	98.80	97.40	96.5	95.50	94.30	90.80
60℃	99.80	98.30	97.70	96.40	95.20	94.0	89.00
								杂质％		40℃	0.2	1.2	1.6	3.5	4.5	5.8	9.1
60℃	0.2	1.6	2.5	3.4	4.9	6.1	12

可以看出40℃、60℃影响因素条件下，5％硫普罗宁钠水针剂很不稳定，0天和10天相比含量由99.80％下降到90.80％和89.0％；杂质二硫化物由0.2％升至9.1％、11.0％。已失去药用价值。

c、强光照射影响因素稳定性试验

取5％硫普罗宁钠水针剂适量，置注射剂澄明度测定仪下，以3000LX光照度照射10天，于0、1、3、5、10天分别取样测定含量，同0天测定结果比较：测定结果见表9：

时间(天)	0	1	3	5	10
						含量％	99.70	97.10	96.30	93.80	87.40
杂质％	0.2	2.9	4.5	7.2	12.6
						(HPLC法)

本品经10天强光照射，含量由99.80％下降到87.30％，杂质二硫化物由0.2％升到12.80％，已失去药用价值，故5％硫普罗宁钠水针强光条件下不稳定。

d、高湿影响因素稳定性试验

因本品为安瓿包装，湿度对其影响不大，故未做此项试验。

V、结论：

a、硫普罗宁冻干粉针室温留样一年含量测定稳定，而5％硫普罗宁水针剂、5％硫普罗宁钠水针剂室温留样一年含量测定极不稳定，已失去药用价值。

b、40℃、60℃影响因素条件下硫普罗宁冻干粉针含量测定稳定，而5％硫普罗宁水针剂、5％硫普罗宁钠水针剂含量由初始0天的99.60％和99.80％到10天下降到90％，杂质二硫化物则由0.4％和0.2％升高到10％，产品含量严重不稳定，已失去药用价值。

c、3000LX硫普罗宁冻干粉针剂经10天强光照射，含量测定无太大变化，符合质量标准规定，但从实测值看有逐步下降趋势，贮存时本品应避光保存。5％硫普罗宁水针剂，5％硫普罗宁钠水针剂3000LX强光照射条件下极不稳定，已失去药用价值。

因此，硫普罗宁冻干粉针剂显然比5％硫普罗宁水针剂、5％硫普罗宁钠水针剂质量稳定，具有明显的稳定性优势。

二、对病毒性慢性肝损伤的疗效实验

受试药物：硫普罗宁针剂：100mg/支冻干剂，按实施例1中方法制备对照药品：维生素K₁针剂：100mg/支水针，无锡第七制药厂生产。批准文号：苏卫药准字(82)2689-2号，生产批号：930417。遮光、凉暗处保存。

给药方案：治疗组：按200mg/日剂量点硫普罗宁针剂，连续给药4周，停药后随访观察6个月。

对照组：按40mg/日剂量静点维生素K₁针，连续给药4周，停药后随访观察6个月。

观察指标：

1.症状：乏力、纳差、厌油、恶心呕吐、腹胀、尿黄、发热、肝区疼、鼻纽或齿龈出血等。治疗前以+、-表示症状有无，治疗中及治疗后以-、±，+，++表示症状消失、减轻、不变和加重，由主管医师于治疗前、治疗期间每2周、治疗毕6个月，分别观察记录；

2.体征：巩膜黄染、蜘蛛痣(数量)、肝掌、腹水、腹壁静脉曲张、肝界(上界、右肋下)、肝质地及触叩痛、脾界(左肋下)、下肢浮肿、以及体温、脉搏、血压、心肺等，由主管医师于治疗前、治疗期间每2周、治疗毕6个月，分别观察记录；

3.生化检查：SB(标准碳酸氢盐)、T(血清蛋白总量)、A/G(白球蛋白比例)、ALT(血清谷丙转氨酶)、ASL(谷草转氧酶)、Y-GT(谷氨酰胺转肽酶)、AKP(碱性磷酸酶)、胆固醇、BuN(尿素氮)等，治疗前、治疗期间每2周、治疗毕6个月分别检测、记录；

4.血清病毒学标志：HbeAg(乙型肝炎病毒表面抗原)/HbeAg(乙型肝炎病毒e抗原)、HbeAb(乙型肝炎病毒e抗体)、HbeAb(乙型肝炎病毒核心抗体)，治疗前后、治疗毕6个月分别检测、记录；

5.B超：观察肝脾、门静脉、脾静脉形态学情况，治疗前后各检查、记录一次。

6.心电图、血尿常规、尿三胆：治疗前后各检测、记录一次；

7.CT、MRI、胃镜等其它检查：由主管医师根据情况决定；

8.不良反应：由主管医师根据实际情况，每2周归纳记录一次；

9.记录患者饮酒史、饮酒习惯及饮酒量等。

10.疗效判断标准：按中华人民共和国卫生部颁布的《病毒性肝炎药物疗效评价标准》执行。

结果见表10和表11。

表10：用药后两组患者症状改善情况比较(％)

组别	例数	症状	消失	减轻部	总好转率(％)	P值
							治疗组对照组	10649	乏力	5212	3617	83.159.2	＜0.05
治疗组对照组	9646	纳差	377	3512	75.047.8	＜0.01
							治疗组对照组	9740	厌油恶心	338	3216	67.060.0
治疗组对照组	7632	腹胀	235	3010	69.746.9	＜0.05
							治疗组对照组	7837	黄疸	2510	3114	71.864.9
治疗组对照组	5928	肝痛	135	2010	55.953.6
							治疗组对照组	3920	肝大	92	145	59.035.0	＜0.01

注：例数指各组用药前相应症状阳性的患者数

症状消失减轻以停药6个月时症状改善情况为标准

表11：用药后两组肝功能指标改善情况比较(X±SD)

组别	例数	肝功	用药前	停药时	P值	停药半年	P值
								治疗组对照组*P值	10649	ALT(u)	139±49.3125±52.9	57±29.065±32.4	＜0.005＜0.05	81±36.385±35.7-	＜0.01＜0.05
治疗组对照组*P值	6531	AST(u)	95±26.896±29.3	50±18.555±22.1	＜0.01＜0.01	60±21.384±31.2＜0.05	＜0.05-
								治疗组对照组*P值	7432	r-GT(u)	110±36.2109±95.5-	52±21.565±23.4-	＜0.01＜0.05	65±24.480±30.9-	＜0.05＜0.05
治疗组对照组*P值	5925	T(g/L)	51±6.846±7.3-	86±7.845±6.3＜0.05	＜0.05	82±8.848±6.9＜0.05	＜0.05-
								治疗组对照组*P值	6932	A/G	1.2±0.311.3±0.20-	1.5±0.251.2±0.19＜0.05	＜0.05-	1.4±0.281.2±0.20＜0.05	＜0.05-
治疗组对照组*P值	7535	SB(umol/L)	63±25.457±19.1-	26±14.729±15.5-	＜0.01＜0.05	33±16.335±19.2-	＜0.05＜0.05

注：例数指用药前肝功异常病例数

P值分别为停药及停药半年时肝功指标与用药前比较

*P值为两组间肝功指标比较

三.硫普罗宁冻干粉针与硫普罗宁水针剂和硫普罗宁片剂的药理、药效及药代动力学的特点与比较

(一).硫普罗宁冻干粉针剂的药理及药效学研究实验

动物试验表明，本发明的硫普罗宁冻干粉针剂对TAA(硫代乙酰胺)、CCL₄(四氯化碳)所造成动物急性肝损伤模型中血清AST、ALT升高有降低作用，对慢性肝损伤模型引起的甘油三酯的蓄积有抑制作用。可以促进肝糖元合成，抑制胆固醇增高，有利于血清白蛋白/球蛋白比值回升。

下面的实验说明本发明的硫普罗宁冻干粉针剂对肝损伤的保护作用

1、实验目的

本试验主要观察MPG对CCL₄所致小鼠急性肝损伤的治疗作用。为临床应用提供科学依据。

2、试验材料

(1)受试药：硫普罗宁(MPG)

(2)阳性对照药：还原型谷胱甘肽(GSH)

(3)造模型药：四氯化碳(CCL₄)

(4)溶剂对照：碳酸氢钠(NaHCO₃)

(5)试验动物：昆明种健康小鼠，由河南医科大学动物中心饲养并提供，体重20±2g，雌、雄各半。

3、试验方法

将动物随机分成9组，每组30只，分别以ig(经口灌胃)、ip(腹腔注射)两种途径给药。各组用药剂量、方法均与对抗试验相同。各试验组在第一天用药后30分钟(除溶剂对照组外)ipCCL₄一次，继续用药至15天，同时在36小时、7天、15天分别自理各组动物10只。取血及剖取肝组织，进行生化及病理组织学检查。(检测的各项指标与对抗试验相同)。

4、试验结果

(1)给动物一次ipCCL₄后，CCL₄组及各个治疗组在15天内动物的存活情况见表12。

(2)给动物一次ipCCL₄与ipCCL₄后再用MPG治疗15天，各生化指标详见表13和表14。

(3)单用CCL₄组动物肝组织细胞出现明显的灶性炎症浸润，灶性坏死及肝小叶中央坏死，经用MPG治疗后的各组动物肝细胞，不同程度的损伤明显减轻，治疗7-15天后肝损伤细胞已基本恢复正常。MPG与GSH治疗组相比其结果基本相拟。见表15。

5、结论

(1)单用CCL₄组(模型组)：动物在15天内死亡率为23％，溶剂对照组ipCCL₄一次后，受试药大剂量组，(MPG、GSH)在15天的治疗中动物无一只死亡，小剂量组动物死亡分别为7％、3％。本试验结果表明本品具有降低由CCL₄所致急性肝损伤造成的死亡。

(2)单用CCL₄组，肝功能ALT、AST，明显增高，T值下降，A、C值倒置。用MPG治疗15天，分别在36小时、7天、15天处理各组动物测得ALT、AST均有不同程度降低，T值逐步升高。A、G值比值逐渐恢复正常。与单用CCL₄组相比，两者有明显差异；GSH的治疗作用与MPG相比，两者基本相拟。结果表明MPG具有加速肝损伤功能恢复的作用。

(3)单用CCL₄组与ipCCL₄后，用MPG进行治疗组迪相比，肝损伤面积明显缩小，并具有显著性差异。GSH与MPG的治疗作用两者无明显差异。结果表明MPG具有明显加速由CCL₄所致肝损伤细胞功能的恢复作用。

(二)硫普罗宁冻干粉针剂与硫普罗宁水针剂和硫普罗宁片剂的药代动力学特点及比较

给大鼠口服硫普罗宁片剂，自尿中排泄量较低(0.015％)，静脉注射硫普罗宁冻干粉针后尿中排泄量则明显增高(22.35％)，静脉注射后30分钟即可达到最大血药浓度；口服后60分钟达最大血药浓度，直至120分钟还可检出。说明注射用硫普罗宁冻干粉针剂比硫普罗宁片剂起效快，生物利用度高，疗效好。

在人体口服、肌肉注射后，尿中排泄量相近(肌注10-12％，15.47％)但肌注后排泄时间延长，需8-24小时，血浆水平较口服高但较静脉注射低，说明静注硫普罗宁冻干粉针比肌注硫普罗宁水针疗效好。

因此，改变给药途径，制备成静注的硫普罗宁冻干粉针比肌注硫普罗宁水针剂、口服硫普罗宁片剂具有起效快、生物利用度高、疗效好等优点。

表12：MPG对CCL₄所致动物死亡的影响

组别	剂量及用法(mg/kg/d)	动物数(只)	死亡数(只)	死亡率(％)
					溶剂对照组CCL4(0.25％)CCL4+GSHCCL4+MPGCCL4+MPG	20ml×15ip10ml×15ip250×15ip125×15ip250×15ip	3030303030	06120	020470
溶剂对照组CCL4+GSHCCL4+MPGCCL4+MPG	10ml×15ip150×15ip75×15ip150×15ip	30303030	1010	4040

注：各试验组+CCL₄的量均为0.25％的浓度10ml/kg，ip。

表13：MPG治疗CCL₄所致小鼠肝ALT、AST改变的影响

组别	剂量及用法(mg/kg/d)	动物(只)	ALT(u.X±SD)	AST(u.X±SD)
					36h     7d      15d	36h     7d     15d

溶剂对照CCL4(0.25％)CCL4+GSHCCL4+MPGCCL4+MPG	20ml×15ip10ml×15ip250×15ip125×15ip250×15ip	3030303030	43.5±4.2195.5±13.1△△152±12.1***163±17.3***122±12.1***	45.6±9.2126±13.8△△50±11.2***89±8.348±13.6***	48.3±8.351±12.146±12.056.7±6.548±4.2	60.5±8.721.3±12.1△△137±12.3***111±12.0***103±8.4***	66.3±13.3156±7.2△△76±3.9***73±8.7***75±4.0***	59.6±8.352±8.164±6.760±6.768±9.2
									溶剂对照CCL4+GSHCCL4+MPGCCL4+MPG	10ml×15ip150×15ip75×15ip150×15ip	30303030	46.7±6.2101±8.3***100±8.1***90±12.1***	45.6±6.176±7.7***83±8.8***78.9±9.1***	45.2±6.350.6±8.666±8.25.9±8.3	59.6±4.790±12.1***110±1838**100±8.2***	63±4.085±8.2***88±12.3***80±4.4***	63.8±4.660±9.577±9.262±12.6

**P＜0.05***  P＜0.01与CCL₄组相比；

△△P＜0.01，与溶剂对照组相比。

注：各试验组+CCL₄的量均为10ml/kg(0.25％)，ip一次。

表14：MPG治疗由CCL₄所致小鼠肝T、A、G改变的影响

组别	剂量及用法(mg/kg/d)	动物(只)	T(g/dl.X±SD)	A(g/dl.X±SD)	G(g/dl.X±SD)
						36h    7d     15d	36h    7d      15d

溶剂对照CCL4(0.25％)CCL4+GSHCCL4+MPGCCL4+MPG	20ml×15ip10ml×15ip250×15ip125×15ip250×15ip	3030303030	7.2±1.15.8±0.4△6.2±0.37.2±0.27.0±0.5	7.0±0.656±0.375±0.36.9±0.46.8±0.6	6.8±1.06.2±0.67.6±0.57.4±0.97.1±0.5	4.3±0.42.1±0.1△3.5±0.2**4.5±0.1**4.0±0.4**	4.6±0.32.2±0.3△4.2±0.5**4.2±0.2**3.9±0.3**	4.0±0.43.1±0.65.0±0.24.6±0.43.7±0.1	2.9±1.23.6±0.3△4.0±0.3**2.8±0.5**3.3±0.7**	2.6±0.835±0.1△3.4±0.52.9±0.4**3.2±0.6**	2.8±1.13.0±0.43.0±0.42.5±0.83.2±0.6
												溶剂对照CCL4+GSHCCL4+MPGCCL4+MPG	10ml×15ip150×15ip75×15ip150×15ip	30303030	7.4±0.16.8±0.77.2±0.27.1±0.7	7.0±0.27.3±0.67.5±0.27.3±0.8	7.0±0.37.5±0.57.1±0.67.2±0.3	4.4±0.34.0±0.3**3.5±0.2**3.9±0.1**	4.2±0.23.7±0.4**43.0±0.1**3.3±0.1**	4.2±0.14.4±0.2**4.2±0.1**4.3±0.3**	2.7±0.33.0±0.6**3.9±0.23.7±0.5	2.9±0.43.7±0.53.4±0.13.5±0.4	2.9±0.23.3±0.63.0±0.32.9±0.1

△P＜0.05，与溶剂对照组相比，**P＜0.05与CCL₄组相比；

注：各试验组+CCL₄的量均为10ml/kg(0.25％)，ip一次。

表15：MPG治疗CCL₄所致小鼠肝损伤的影响(7D)

组别	剂量及用法(mg/kg/d)	动物数(只)	肝损伤面积△(只)
				溶剂对照组	20ml×15ip	30	0

CCL4(0.25％)CCL4+GSHCCL4+MPGCCL4+MPG	10ml×15ip250×15ip125×15ip250×15ip	30303030	343±52.3151±23.7***150.5±38.4***109.5±31.6***
				溶剂对照组CCL4+GSHCCL4+MPGCCL4+MPG	10ml×15ip150×15ip75×15ip150×15ip	30303030	095.5±23.6***123±34.3***99±23.9***

***P＜0.01，均与CCL₄组相比。注：各试验组+CCL₄的量均为10ml/kg.ip。

△1、在光镜下以10/20放大照像。2、以10×8cm的透明塑料膜，分为900个小方格为单位，对上述照片中的病灶进行测量，比较各组的病灶大小。

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的百分数是重量百分数。

实施例1：制备硫普罗宁冻干粉针注射剂

硫普罗宁                 100g

聚乙二醇2000             10g

注射用水                 1000ml

共制成冻干品             1000支

制备工艺：

配制药液：

称取处方量的注射用原料(硫普罗宁含量不得少于98.5％，含重金属不得过百万分之十五)，加无菌无热原蒸馏水，使溶解，浓度为0.2g/ml。然后加入处方量的聚乙二醇2000，搅拌溶解。再加水至1000ml，使硫普罗宁含量为0.1g/ml，使聚乙二醇2000含量为0.01g/ml。

除热原：

上述药液中加入注射剂用活性炭(活性炭用量是硫普罗宁原料重量的0.1-1.0％)，室温下脱色30分钟，过滤，收集滤液。

除菌：

将上述药液按无菌操作法进行正压除菌滤过。压力在0.1Mpa以下，用0.22μ微孔滤膜，滤过前应先进行起泡点试验，滤液送样进行热原检查和半成品含量检查然后分装；

灌装：

管制西林瓶的处理：管制西林瓶，规格为2ml。预处理时用0.5-1.0HCl液将管制西林瓶灌满，管制西林瓶规格为2ml，先经超声波清洗机以纯化水、注射用水清洗，接着以洁净的压缩空气吹干，最后通过温度达350℃隧道烘箱灭菌，待温度降至60℃后移无菌室备用。

灌装：在100级洁净度超净工作间进行灌装，半加塞。

冻干：

在-40℃以下预冻2-5小时，然后在-5-0℃、1.33Pa(0.01托)真空度下升华，在游离水分去除90％以后，加温干燥(最高温度不得超过35℃)待温度曲线和真空曲线分别重合成，即可视为冻干结束，冻干箱内自动全加塞；

封口：管制西林瓶分批从冻干箱取出，加铝盖。

实施例2：制备硫普罗宁冻干粉针注射剂

硫普罗宁                 100g

聚乙二醇1000             10g

注射用水                 1000ml

共制成冻干品             1000支

制备方法除加入的辅料不同外，其他同实施例1

实施例3：制备硫普罗宁冻干粉针注射剂

硫普罗宁                  100g

聚乙二醇1500              10g

注射用水                  1000ml

共制成冻干品              1000支

制备方法除加入的辅料不同外，其他同实施例1

实施例4：制备硫普罗宁冻干粉针注射剂

硫普罗宁                  100g

聚乙二醇3000              10g

注射用水                  1000ml

共制成冻干品              1000支

制备方法除加入的辅料不同外，其他同实施例1

实施例5：制备硫普罗宁冻干粉针注射剂

硫普罗宁                    100g

聚乙二醇4000                10g

注射用水                    1000ml

共制成冻干品                1000支

制备方法除加入的辅料不同外，其他同实施例1

实施例6：制备硫普罗宁冻干粉针注射剂

硫普罗宁                    100g

聚乙二醇6000                10g

注射用水                    1000ml

共制成冻干品                1000支

制备方法除加入的辅料不同外，其他同实施例1

Claims (9)

1.一种治疗慢性肝病的硫普罗宁冻干粉针注射剂，其含有作为活性成分的硫普罗宁化合物和药物可接受的载体，其中药物可接受的载体为聚乙二醇，硫普罗宁化合物与聚乙二醇载体之间的重量比是1-10∶1。

2.根据权利要求1的冻干粉针注射剂，其中聚乙二醇是聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000或聚乙二醇6000。

3.根据权利要求2的冻干粉针注射剂，其中硫普罗宁化合物与聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000或聚乙二醇6000的重量比是5-10∶1。

4.根据权利要求3的冻干粉针注射剂，其中硫普罗宁化合物与聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000或聚乙二醇6000重量比是10∶1。

5.根据权利要求4的冻干粉针注射剂，其中硫普罗宁化合物的含量规格是1-1000mg。

6.根据权利要求5的冻干粉针注射剂，其中硫普罗宁化合物的含量规格是50mg、100mg、200mg或400mg。

7.根据权利要求6的冻干粉针注射剂，其中每支注射剂含有100mg硫普罗宁，10mg聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000或聚乙二醇6000。

8.一种权利要求1-7之一的冻干粉针注射剂的制备方法，包括下列步骤：

a.配制药液：将活性成分硫普罗宁加注射用水溶解，加入药物可接受的载体低聚乙二醇混匀，加注射用水到规定量；

b.除热原：在步骤a的药液中加入注射剂用活性炭于0-100℃脱色30分钟滤过；

c.除菌：将步骤b的滤液用除菌滤器进行正压或减压除菌滤过；

d.罐装：用管制西林瓶进行无菌灌装；

e.冻干：在低温真空下进行冷冻干燥。

9.根据权利要求8所述的冻干粉针注射剂的制备方法，其中的载体是聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000或聚乙二醇6000，除菌采用除菌滤器正压滤过法，压力在0.1Mpa以下。