CN1839862A - 一种治疗咽喉炎的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗咽喉炎的药物组合物，它是由鸢尾科植物鸢尾Iristectorum Maxim.总黄酮提取物为活性部分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂，其中，提取物总黄酮的百分含量以鸢尾苷C₂₂H₂₂O₁₁计算≥55％。本发明药物质量稳定、可控，且确定了其中的药效成分鸢尾苷、鸢尾甲苷A、鸢尾苷元、野鸢尾苷元，通过该四个成分的配比发挥了协同增效的作用。对导致急性咽喉炎和上呼吸道感染显著地抑制作用，该药物起效快，缓解症状迅速，咽喉肿痛导致的声音嘶哑者服药后几小时即可恢复正常语音，咽喉肿痛在数小时内明显减轻或消失，连续服药3～7天，即可痊愈，是一种疗效的速效药物，且成本低、得率高，为临床提供了一种新的药用选择。

Description

一种治疗咽喉炎的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗咽喉炎的药物组合物，具体地，是涉及中药提取物为活性部分的药物组合物及其制备方法，属中药领域。

背景技术

中医认为，急性咽喉炎属风热邪毒外袭，邪热壅塞肺脏所致的喉痹(急性咽炎)、急喉喑(急性喉炎)，是严重影响健康的常见病、多发病，往往伴随着感冒而产生。起病急，以咽喉肿痛、声音嘶哑、头痛发烧、咳嗽痰黄为主要症状，进一步加剧可出现咽喉、鼻粘膜水肿充血。现代医学证实：急性咽喉炎多为病毒所致，主要有流感病毒、副流感病毒、腺病毒、柯萨奇病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒等，抗菌素对此类病毒感染无效。临床治疗急性咽喉炎及此类上呼吸道感染常用的西药有金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林(病毒唑)、吗啉双胍(病毒灵)等。它们对引起急性咽喉炎的某些病毒有肯定的作用，但疗效较为单一，无抗菌消炎、解热镇痛、止咳作用，即对控制症状效果不理想，且均具较严重的毒副作用，如导致贫血、血小板和白细胞减少、血尿、头晕、共济失调、水肿、视力丧失、胃肠道反应、免疫抑制、腹泻以及肾功能损害等。治疗急性咽喉炎及上呼吸道感染的常用中药有穿心莲制剂系列、鱼腥草制剂系列、板兰根制剂系列、双黄连制剂系列以及其它清热解毒中药的复方制剂。这些中药制剂的特点是：不但对病毒有一定抑制作用，且具有消炎、退热镇痛等作用，但抗病毒作用不够显著，多为复方制剂，针对的具体适应症各不相同，质量不稳定，所含的有效部位或有效成分不明确，且服用、携带、保存均不便。

鸢尾是鸢尾科植物鸢尾Iris tectorum Maxim.的根茎。具有消积、破瘀、行水、解毒的作用。治疗食滞胀满，癓瘕积聚，膨胀、肿毒、痔瘘、跌打损伤。申请号：200410022293.X公开了鸢尾水提物，及在制备治疗口腔炎、咽喉炎及慢性支气管炎及解酒、减肥药物中的用途。该公开文献报道的是鸢尾的粗提物，适应症多，有效成分不明确。

发明内容

本发明的技术方案提供了一种治疗咽喉炎的药物组合物，它是以鸢尾总黄酮为活性部分制备而成的组合物，本发明的另一技术方案是提供了该药物组合物的制备方法。

本发明提供了一种治疗咽喉炎的药物组合物，它是由鸢尾科植物鸢尾(Iristectorum Maxim.)提取物为活性部分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂，其中，提取物中，总黄酮的百分含量以鸢尾苷(C₂₂H₂₂O₁₁)计算≥55％。

其中，所述的总黄酮中含有：鸢尾苷tectoridin、鸢尾甲苷A iristectorin A(又称野鸢尾苷iridin)、鸢尾苷元tectorigenin、野鸢尾苷元irigenin

tectoridin                                                iristectorin A

tectorigenin                                              ingenin。

进一步地，总黄酮中四个异黄酮成分的含量比鸢尾苷∶鸢尾甲苷A∶鸢尾苷元∶野鸢尾苷元为1∶0.1～0.4∶0.15～0.6∶0.03～0.1。

更进一步地，总黄酮中四个异黄酮成分的含量比鸢尾苷∶鸢尾甲苷A∶鸢尾苷元∶野鸢尾苷元为1∶0.18∶0.29∶0.056。

所述的鸢尾总黄酮是由下述方法提取制备：

a、取鸢尾科植物鸢尾(Iris tectorum Maxim.)药材，粉碎，加入70％乙醇回流提取，浓缩，得浸膏；

b、将a步骤的浸膏溶解入水中，过滤，滤液通过大孔吸附树脂柱；

c、用水洗涤脂柱，流出液弃去，至流出液呈近无色澄明溶液时，放干水，用75～90％乙醇洗脱，洗脱液过滤，浓缩即得本发明总黄酮。

其中，所述的鸢尾总黄酮的提取方法中b步骤所述的大孔吸附树脂柱的树脂量与原生药材的重量配比为：3∶1。

所述的制剂是：胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、口服液。

本发明还提供了该药物组合物的制备方法，包括如下步骤：

a、取鸢尾科植物鸢尾Iris tectorum Maxim.药材，粉碎，加入70％乙醇回流提取，浓缩，得浸膏；

b、将a步骤的浸膏溶解入水中，过滤，滤液通过大孔吸附树脂柱；

c、用水洗涤脂柱，流出液弃去，至流出液呈近无色澄明溶液时，放干水，用75～90％乙醇洗脱，洗脱液过滤，浓缩即得本发明总黄酮；

d、称取c步骤的总黄酮，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

本发明还提供了该药物组合物在制备治疗急、慢性咽喉炎的药物中的用途。

本发明还提供了该药物组合物在制备抗病毒、抗炎、镇痛、解热、止咳药物中的用途。

本发明药物质量稳定、可控，且确定了其中的药效成分鸢尾苷、鸢尾甲苷A、鸢尾苷元、野鸢尾苷元，通过该四个成分的配比发挥了协同增效的作用。对导致急性咽喉炎和上呼吸道感染的主要病毒如流感病毒、副流感病毒、腺病毒、柯萨其病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、疱疹病毒有显著地抑制作用，且具有显著的抗炎、消肿、解热镇痛作用，临床上作为急性咽喉炎的治疗药，该药物起效快，缓解症状迅速，咽喉肿痛导致的声音嘶哑者服药后几小时即可恢复正常语音，咽喉肿痛在数小时内明显减轻或消失，连续服药3～7天，即可痊愈，是一种速效药物，且成本低、得率高，为临床提供了一种新的药用选择。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

实施例1  本发明药物提取物鸢尾总黄酮的制备

(1)原生药粉碎成粗粉过20目筛，置于提取罐内，用70％乙醇加热回流提取三次，每次时间1.5小时，每次溶媒用量为药材量的4倍(v/w)，合并提取液，过滤，60℃减压回收乙醇，得比重1.2g/ml(50℃测定)的糖浆状物质(棕黄色浸膏)。其得率为投料量的49～51％(w/w)。将上述浸膏用相当于投料生药量的20倍量沸水(w/w)搅拌溶解，待溶液冷却至50℃时，让其通过已处理好的WLD型大孔吸附树脂罐(树脂量：原生药量3∶1，w/w)，流速控制在每100kg树脂每分钟5～10立升，流出液弃去，待流出液盐酸镁粉反应略显红色(取流出液1ml置5ml试管内，加入镁粉少许，再滴加盐酸，反应液显红色)，即刻用常水洗涤树脂床(流出液盐酸镁粉试验呈正反应的部分留待下批处理)，直至流出液呈近无色的澄明溶液。放干树脂床内的常水，用树脂量的2倍(w/w)80％乙醇洗脱，流速控制在每100kg树脂每分钟约5立升，收集洗脱液，60℃减压回收溶剂，得棕黄色浸膏(比重1.2g/ml，50℃时测定，其得率为药材量的29～31％)，60℃减压真空干燥，粉碎，过60目筛，得棕黄色粉末状物质(鸢尾总黄酮提取物，含量＞55％，含水量＜4％，收率为15～18％。

(2)原生药粗粉(20目)置多能提取罐内，用70％乙醇加热回流提取三次，每次2小时。溶剂用量为药材量的4倍(v/w)，合并三次提取液，过滤后60℃减压回收乙醇，得棕黄色浸膏。将此提取物搅拌溶于30倍量(w/w)沸水中，待溶液冷却至50～60℃，趁热通过已处理好的WLD型大孔吸附树脂柱(300×60cm)，完后继续以常水冲洗柱内树脂，弃去柱内流出液，至流出液已呈澄明时，放干柱内常水，用树脂量2.5倍(w/w)量的90％乙醇洗脱，收集洗脱乙醇液，60℃减压回收溶剂至残留物无醇味，残留物进行喷雾干燥，得总黄酮提取物黄色粉末(絮状)，含量(以鸢尾苷计)大于55％，含水量＜4％，收率为16～18％。

(3)原生药粗粉(20目)置多能提取罐内，用70％乙醇加热回流提取四次，首次提取3小时，乙醇用量为投料量的4倍(v/w)，其余三次每次提取1.5小时，溶剂用量为投料量的3倍(v/w)。合并四次提取液，用药膜蒸发器进行浓缩，回收乙醇，得黄棕色膏状物。将此膏状物趁热搅拌溶解于25倍量的沸水中，待其溶解完全后冷却至50～60℃，趁热通过已处理好的WLD型大孔吸附树脂柱(300×60cm)，完后继续以常水洗涤树脂，弃去柱内流出液。待柱内流出液已呈澄明时，放干柱内常水，用树脂量3倍(w/w)量的75％乙醇洗脱，收集洗脱乙醇液，过滤。滤液进行药膜浓缩回收乙醇。所得已无乙醇味的浸膏进行喷雾干燥，得鸢尾总黄酮提物(黄色粉末)，含量以鸢尾苷计大于55％，含水量小于4％，收率为15～17％。

实施例2  本发明药物胶囊剂的制备

本品为鸢尾总黄酮提取物直接填装制成的硬胶囊剂，每粒含鸢尾总黄酮以鸢尾苷(C2H22O11)计，不得少于180mg(本发明药物胶囊每粒填装提取物平均重量约为0.35g)。

原料：鸢尾总黄酮提取物350g，制备成1000粒本发明药物胶囊

(1)将干燥总黄酮提取物(含量＞55％)粉碎过60目筛，在相对湿度小于64％条件下，用手工或胶囊灌装机填装1号胶囊，控制内容物每粒约0.35g，制备1000粒。

(2)将鸢尾总黄酮提取物于60℃干燥(蒸气烘房)，待测其含水量＜4％时，粉碎过60目筛。准确称取细粉35kg，随机取样适量，按质量标准方法测定其总黄酮含量及鸢尾苷含量(总黄酮含量应大于55％，鸢尾苷含量应大于18％)，若总黄酮含量已超过65％，加入适量药用淀粉稀释，使其总黄酮含量在55～65％之间，鸢尾苷含量在18～25％之间。在胶囊剂灌装车间内，控制相对湿度小于64％，用胶囊灌装机将药粉填装1号胶囊，每粒装样量为0.35g，制备10万粒。尔后装瓶(100粒/瓶)，贴笺，送检，装箱入库。

实施例3  本发明药物片剂的制备

将干燥总黄酮提取物(含量＞55％)粉碎过60目筛，加入淀粉，制粒，整粒，压片即得。

实施例4  本发明药物的质量控制

[鉴别]

(1)取本品约25mg置于50ml容量瓶中，用70％乙醇溶解并定容，摇匀，作为A液(0.5ug/ul)。精密吸取A液1ml于50ml容量瓶中，用70％乙醇稀释并定容至刻度摇匀，作为B液。B液按分光光度法(中国药典2000版一部附录VA)，以70％乙醇为空白，于波长200～400nm范围内扫描，并记录光谱图，在266±1nm波长处有最大吸收。

(2)取对照品鸢尾苷5mg，置于50ml容量瓶中，加入70％乙醇溶解并稀释至刻度，此作为对照品溶液。照薄层层析法(中国药典2000版一部附录VIB)试验，吸取鉴别(1)项下A溶液和对照品溶液各10μl，平行点于硅胶GF₂₅₄薄层板上，以氯仿-甲醇-甲酸(10∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出晾干，在荧光灯下(254nm)观察，应显三个主斑点，在与对照品色谱相应位置上，显相同的斑点。

[检查]

炽灼残渣  取本品1g，依法检查(中国药典2000版一部附录IXJ)，炽灼残渣不得过2％。

重金属  取本品适量，经炽灼残渣有机破坏后，依法检查(中国药典2000版一部附录IXE第二法)，含重金属不得过百万分之十。

砷盐  取本品2.0g，加水25ml，依法检查(中国药典2000版一部附录IXF第二法)，含砷量不得过百万分之二。

苯、二甲苯、甲苯、苯乙烯、正庚烷、正癸烷、二乙烯基苯、乙基苯乙烯

照气相色谱法(中国药典2000版一部附录VIE)测定。

色谱条件与系统适用性试验  色谱柱采用HP-INNOWAX柱(即PEG 20M)，30m×0.5mm×1.0um。Tc＝40℃(5min)→5℃/min→80℃(3min)→20℃/min→200℃(3min)。检测器采用FID，t＝250℃，H₂＝35ml/min；尾吹N₂＝32ml/min；Air＝300ml/min。载气He2.7ml/min，线速度S＝20cm/s。(恒压)进样口的温度250℃。顶空瓶温度140℃，传输管温度150℃，加热平衡时间10min，顶空不分流进样。

对照品溶液的制备  精密称取正庚烷、苯、正癸烷、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯基苯、乙基苯乙烯适量，用二甲亚砜溶解并定容于10ml容量瓶中(2.5mg/ml)。再精密吸取此溶液10μl于10ml容量瓶中，用二甲亚砜定容至刻度，摇匀(2.5μg/ml)。吸取此溶于1ml封于顶空瓶中，即成对照品溶液。

供试品溶液的制备  取本品适量，精密称定。用1ml二甲亚砜封于顶空瓶中，供测定(0.5g/ml)。

测定法  分别吸取对照品溶液与供试品溶液各500μ1，注入气相色谱仪中，记录色谱图，同时以二甲亚砜作空白，计算即得。

本品含甲苯、二甲苯、苯乙烯、正庚烷、正癸烷、二乙烯基苯、乙基苯乙烯不得过十万分之二，苯不得过百万分之二。

[干燥失重]  取本品，在105℃干燥至恒重，减少重量不得超过6％(中国药典2000版一部附录IXG)。

[含量测定]

总黄酮

对照品溶液的制备  精密称定在105℃干燥至恒重的鸢尾苷对照品15mg，置于50ml容量瓶中，加70％乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。每1ml含鸢尾苷0.3mg。

供试品溶液的制备  精密称取105℃干燥至恒重的本品约25mg，置于50ml容量瓶中，加入70％乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。每1ml含本品0.5mg。

测定法  精密吸取对照品溶液与供试品溶液1ml，分别置于50ml容量瓶中，用70％乙醇稀释并定容至刻度，摇匀。按分光光度法(中国药典2000版一部附录VB)，在266nm波长处，以70％乙醇为空白，分别测定对照品与供试品溶液的吸收度，计算，即得。

本品按干燥品计算含总黄酮以鸢尾苷(C₂₂H₂₂O₁₁)计算，不得少于55％。

鸢尾苷

照高效液相色谱法(中国药典2000版一部附录VID)测定。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷(C₁₈)键合硅胶为填充剂，甲醇-0.5％醋酸(30∶70)为流动相；检测波长为266nm；柱温为室温，理论塔板数按对照品鸢尾苷峰计算，应不低于7000。

对照品溶液的制备  精密称取干燥至恒重的鸢尾苷对照品5mg，置于50ml量瓶内，加70％甲醇约40ml，用超声波振荡5～10min至溶解完全，续加70％甲醇至刻度，摇匀，即得(每ml中含鸢尾苷0.1mg)。

供试品溶液的制备  取已干燥至恒重的鸢尾总黄酮约20mg，精密称定。置于50ml量瓶中，加入70％甲醇液照“对照品溶液制备”项下方法配制成溶液，摇匀即得。

测定法  分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，即得。

本品按干燥品计算含鸢尾苷(C₂₂H₂₂O₁₁)，不得少于18％。

以下通过药效学试验证明本发明的药效。

试验例1  鸢尾苷元体外抗病毒实验报告

一、实验材料

(1)受试药

鸢尾苷元(鸢尾苷元)制成25mg/ml灭菌溶液，由四川省中药研究所提供。

(2).阳性对照药

病毒唑(三氮唑核苷注射液)，国药准字XF1990722，批号000402，100mg/ml，湖北宜药集团有限责任公司生产。

注射用穿琥宁，川卫药准字(1981)第006085号，批号981201，成都制药三厂生产40mg/ml。

(3).细胞株

HeP-2由四川省卫生防疫站提供，我室冻存、复苏、传代、细胞生长液均为10％小牛血清Eagles液。

Z-HL₁₆C细胞，由汕头生物工程应用研究所细胞工程研究室提供，我室传代，细胞生长液均为10％小牛血清Eagles液。

(4).病毒株

腺病毒(AdV_3、7、)呼吸道合胞病毒(RSV)，柯萨奇B组病毒(CoxBV)，单纯疱疹病毒(HSV₁)和流感病毒(_甲1、甲3)分别由首都儿科研究所和中国医学科学院病毒研究所提供，我室传代，实验前测TCID₅₀。

二、实验方法

(1)细胞毒性实验

取鸢尾苷元溶液(25mg/ml)用Hanks液作倍比稀释，作4个浓度药液细胞毒性实验(即25mg/ml、12.5mg/ml、6.25mg/ml、3.125mg/ml)，然后以无毒性细胞药物浓度开始作4个浓度药液抗病毒实验。同步取阳性对照药病毒唑、注射用穿琥宁用Hanks液稀释成4个浓度药液(25mg/ml、12.5mg/ml、6.25mg/ml、3.125mg/ml)分别取以上3药液各种不同浓度接种Hep-2、Z-HL₁₆C细胞各2管，加足Eagles液维持液(同步设细胞对照和空白对照)，置37℃温箱，逐日观察细胞毒性反应。

(2)抗病毒实验

采用直接灭活法，实验前确定各类病毒致细胞半数病变量(TCID₅₀/0.1ml)和各类药物对细胞无毒性反应界线，取100TCID₅₀和AdV_3、7、，RSV、CoxBV、HSV₁和流感_{甲1、 甲3}病毒分别与上述3种药物各类不同浓度的药液等量混合直接作用1小时后，分别取各类病毒和药物混合液分别接种Hep-2和Z-HL₁₆C细胞，待吸附45分钟后，加足细胞维持液(2％小牛血清Eagles)，同步设细胞对照、病毒对照和Hanks液作空白对照，置37℃温箱培养，(RSV病毒灭活实验管24小时后移放33℃旋转培养器)，逐日观察细胞病变。当病毒对照出现3+病变，细胞对照生长良好，形态正常，可终止试验。各类病毒是否被药物抑制，以细胞是否出现病变为指标，当细胞出现2+病变(≥50％细胞病变)，可判断该药液对病毒无抑制作用。

(3)实验结果

细胞毒性实验结果

鸢尾苷元溶液、病毒唑注射液、注射用穿琥宁3种药物25mg/ml、12.5mg/ml、6.25mg/ml、3.125mg/ml4种浓度药液对Hep-2、Z-HL₁₆C细胞均无任何毒性反应。空白对照、细胞对照均无毒性，细胞生长良好，形态正常。

抗病毒实验结果

鸢尾苷元溶液25mg/ml-12.5mg/ml药液对AdV_3、7、CoxBV及流感_甲3病毒、及25mg/ml-6.25mg/ml药液对RSV₁病毒均能完全抑制病毒引起细胞内病变作用。

病毒唑注射液25mg/ml-12.5mg/ml药液对流感_甲1、甲3、AdV₃均有抑制细胞内病变作用，25mg/ml-3.125mg/ml药液对RSV，25mg/ml-12.5mg/ml药液对CoxBV、AdV₇及HSV₁均有抑制细胞内病变作用，6.25mg/ml药液对AdV₇及CoxBV均有部份抑制细胞内病变作用。

穿琥宁注射液25mg/ml-12.5mg/ml药液对AdV_3、7均有抑制细胞内病变作用，25mg/ml药液对CoxBV及RSV均有抑制细胞内病变作用，12.5mg/ml药液对CoxBV及RSV有部份抑制细胞内病变作用。空白对照均不能抑制AdV₃等病毒细胞内病变作用。空白对照均不能抑制AdV₃等病毒引起细胞内病变作用。

鸢尾苷元溶液体外抗病毒实验与阳性对照药病毒唑、穿琥宁在药物浓度相同的情况下与空白对照同步进行，均采用直接灭活法，其结果提示：鸢尾苷元溶液对AdV_3、7型，流感_甲3型，CoxBV和RSV均有不同程度的抑制作用，对RSV抑制的最低药物浓度为6.25mg/ml。病毒唑注射液对AdV₃型等7种病毒均有抑制作用，对多数病毒的抑制作用的最低药物浓度可达0.3125mg/ml。注射用穿琥宁对AdV_3、7、CoxBV和RSV有不同程度的抑制作用，对AdV_3、7型的抑制作用的最低药物浓度可达12.5mg/ml。

本结果提示：病毒唑注射液对AdV等7种病毒的抑制作用均优于鸢尾苷元和穿琥宁。鸢尾苷元溶液对流感_甲3型、CoxBV和RSV的抑制作用均较优于穿琥宁。

试验例2  鸢尾苷体外抗病毒实验

1、实验材料

(1)药物：鸢尾苷(鸢尾苷)

受试药鸢尾苷(白色粉状)由四川省中药研究所提供。实验前用Hanks液配成100mg/ml原液。(加助溶剂二甲基亚枫帮助溶解)除菌。PH为7左右，将原液从1∶10开始作7个不同浓度的等比稀释，其药物含量为10mg/ml、5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml、0.62mg/ml、0.31mg/ml、0.15mg/ml，备用。

阳性对照药病毒唑(三氮唑核苷注射液100mg/ml)，鄂卫药准字(1991)第000042号，批号980605，宜昌市三峡制药厂生产，我院药房提供，实验前用Hanks液配成10mg/ml、5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml、0.62mg/ml、0.31mg/ml、0.15mg/ml，备用。阳性对照药穿琥宁注射液(40mg/支冻干品)，川卫药准字(1981)第000085号，批号981201，成都制药三厂生产，我院药房提供，实验前用Hanks液配制成与鸢尾苷、7个浓度相同的药液，备用。

空白对照  用Hanks液代替药液与xy、病毒唑、穿琥宁抗病毒实验同步进行。

(2)细胞株

Hela、HeP-2、MDCK(狗肾传代细胞)分别由成都生研所、四川省卫生防疫站和北京首都儿科研究所提供，我室复苏传代，生长液均为10％小牛血清Eagles液。

(3)病毒株

腺病毒(ADV)_3、7、11型，呼吸道合胞病毒(RSV)，流感病毒_甲1型_甲3型(FluA₁A₃)、单纯疱疹病毒(HSV)₁型、₂型，柯萨奇B组病毒(CoxBV)混合株，分别由北京首都儿科研究所、中国医学科学院病毒研究所和四川省卫生防疫站提供，我室传代，实验前测TCID₅₀。

2、实验方法

(1)细胞毒性实验

取鸢尾苷、病毒唑、穿琥宁药液7种不同浓度药液分别接种Hela、HeP-2、MDCK细胞，经吸附后加足2％小牛血清Eagles液维持液，置37℃温箱，逐日观察细胞毒性反应。同步设细胞对照。

(2)体外抗病毒实验

取鸢尾苷、病毒唑、穿琥宁药液7种不同浓度的药液和空白对照Hanks液分别与100TCID₅₀和AdV_3、7、11型，RSV、HSV₁、HSV₂，FluA₁、A₃及CoxBV等量混合，于室温下直接作用1小时，(同步设各类病毒，细胞对照)后，取各类药物，Hanks与病毒混合液，接种HeP-2细胞(抗FluA₁A₃接种MDCK细胞、抗RSV接种Hela细胞)，待吸附45分钟后，加足2％小牛血清维持液，全部置37℃温箱，抗RSV试验次日移放35℃旋转培养器外，其他抗病毒细胞管均继续于37℃环境中培养，逐日观察细胞病变，当病毒对照出现3+病变(≥75％细胞病变)细胞对照生长良好，形态正常，可终止试验。各类病毒是否被药物抑制，以细胞是否出现病变为指标，凡细胞出现2+病变(≥50％细胞病变，＜75％细胞病变＝可判断该药液对病毒无效)。

3、实验结果

(1)细胞毒性试验

受试药鸢尾苷10mg/ml药液对Hep-2、MDCK细胞可致部份细胞圆缩、皱缩、脱落外，其他6种浓度药液对Hela细胞无毒性反应。

对照药病毒唑、穿琥宁7种不同浓度药液对Hela、Hep-2、MDCK细胞均无任何毒性反应。

(2)抗病毒实验结果

受试药鸢尾苷5mg/ml-10mg/ml药液，对照药病毒唑0.31mg/ml-10mg/ml和穿琥宁2.5-10mg/ml药液对AdV₃型等9种病毒均有不同程度的抑制细胞内病变作用，空白对照均不能抑制AdV₃型等9种病毒细胞内病变。

结论

鸢尾苷10mg/ml药液对AdV₃型，HSV₁型等9种病毒均有抑制作用，5mg/ml药液对AdV₇型、RSV和HSV₂型等9种病毒均有抑制作用。其它浓度药液对AdV_3、7型均无抑制作用。

病毒唑2.5mg/ml-10mg/ml药液对AdV₃型等9种病毒均有抑制作用，1.25mg/ml药液对AdV₁₁型、RSV、AdV₃型、CoxBV及FluvA₁6种病毒均有抑制作用。其它浓度药液AdV_3、7型均无抑制作用。0.62mg/ml和0.31mg/ml药液对RSV有抑制作用，其他浓度药液对Adu₃型等无抑制作用。

穿琥宁10mg/ml药液对AdV₃型等9种病毒均有抑制作用，5mg/ml药液对AdV₃型、AdV₁₁型、RSV、HSV₂型、CoxBV有抑制作用。2.5mg/ml药液对FluVA₁、A₃均有抑制作用。其它浓度药液对AdV₃型均无抑制作用。

以上结果提示，受试药鸢尾苷、对照药病毒唑、穿琥宁均有不同程度对AdV₃型等9种病毒有抑制作用，病毒唑对AdV₃型等9种病毒的抗病毒作用较明显优于鸢尾苷和穿琥宁。

试验例3  鸢尾甲苷A药物体外抗病毒实验报告

1.实验材料

(1).药物：受试药鸢尾甲苷A(鸢尾甲苷A、白色粉状)由四川省中药研究所提供。实验前用Hanks液配成100mg/ml原液。(加二甲基亚砜帮助溶解)消毒除菌。PH为7左右，将原液从1∶10-1∶160作倍比稀释，1∶10药液为10mg/ml。阳性对照药、病毒唑(三氮唑核苷注射液100mg/ml)，鄂卫药准字(1991)第000042号，批号980605，宜昌市三峡制药厂生产，我院药房提供，实验前用Hanks液配成10mg/ml原液，将原液从1∶10-1∶160作倍比稀释，1∶10药液为1mg/ml。阳性对照药、穿琥宁注射液(40mg支冻干品)，川卫药准字(1981)第006085号，批号981201，成都制药三厂生产，我院药房提供，实验前用Hanks液作1∶10-1∶160作倍比稀释，1∶10药液为4mg/ml。空白对照用Hanks液代替药液，同步与受试药、阳性中西药对照进行。

(2).细胞株：Hela、HeP-2、MDCK(狗肾传代细胞)分别由成都生研所、四川省卫生防疫站和北京首都儿科研究所提供，我室复苏、传代、生长液均为10％小牛血清Eagles液。

(3).病毒株：腺病毒(AdV)_3、7、11型，呼吸道合胞病毒(HSV)，流感病毒(Flu.V)甲₁型甲₃型、单纯疱疹病毒(HSV)1型、2型，柯萨奇B组病毒(CoxBV)混合株，分别由北京首都儿科研究所、北京中国预防医科院病毒研究所和四川省卫生防疫站提供，我室传代，实验前测TCID₅₀。

2.实验方法

(1).细胞毒性实验

取1∶10-1∶160不同浓度的鸢尾甲苷A、病毒唑、穿琥宁药液、分别接种Hela、HeP-2、MDCK细胞、加足2％小牛血清Eagles液维持液，置37℃温箱、逐日观察各类细胞毒性反应。同步设各类细胞对照。

(2)抗病毒实验

取1∶10-1∶80四同浓度的鸢尾甲苷A、病毒唑、穿琥宁药液、各类药物不同浓度的药液分别直接与AdV_3、7、11型，RSV、HSV₁、HSV₂。Flu甲₁型甲₃型及CoxB组病毒等混合，于室温下直接作用1小时，(同步设各类病毒，各类细胞对照和空白对照(以hanks液代替药物)取各类药物不同浓度药液与各类不同病毒混合液，除Flu甲₁型甲₃型接种MDCK细胞、RSV接种Hela细胞外、其它病毒混合液均接种HeP-2细胞，加足2％小牛血清维持液，置37℃温箱培养，除抗RSV试验37℃培养24小时后，移放35℃旋转培养器(12转/小时)外其他抗病毒试验均继续置37℃培养，逐日观察细胞病变，当病毒对照出现3+(≥75％细胞病变)细胞对照生长良好，形态正常，可终止试验。各类病毒是否被抑制，以细胞是否出现病变为指标，当各类细胞出现2+病变(≥75％细胞病变)可判断该药液对病毒无效。

3.实验结果

(1).细胞毒性试验结果

鸢尾甲苷A药物1∶10药液对Hep-2、MDCK细胞可致部份细胞圆缩、皱缩脱落外，1∶10-1∶160药液对Hela细胞均无任何毒性反应。

对照药病毒唑、穿琥宁1∶10-1∶160药液对Hela、Hep-2、MDCK细胞均无任何毒性反应。

(2).抗病毒实验结果

取鸢尾甲苷A1∶10药液对AdV₃型、₁₁型、HSV₁型、CoxBV及流感_甲1型、_甲3型不管对何种细胞均能抑制细胞内病变，1∶20药液对AdV₇型，RSV和HSV均能抑制细胞病变；病毒唑1∶10药液对AdV₃型、₁₁型、CoxBV和流感_甲1型、_甲3型均有抑制细胞内病变作用。对HSV₁型有部份抑制细胞内病变作用，1∶20药液对HSv₂型有部份抑制作用，1∶40药液对RSV有抑制细胞内病变作用。穿琥宁1∶10药液对AdV₁₁型、HSV₂型、1∶20药液对AdV₃型，RSV₁和流感_甲1型、_甲3型均有抑制细胞内病变作用。对AdV₇型、HSV₁型及CoxBV均无抑制作用。

4.结论

鸢尾甲苷A1∶10药液(10mg/ml)对AdV_3·11型，HSV₁型CoxBV，流感_甲1型、_甲3型均有抑制细胞内病变作用，1∶20药液(5mg/ml)对AdV₇型，RSV、HSV₂均有抑制作用。

西药对照病毒唑1∶10药液(1mg/ml)对AdV_3·11型、HSV₁型CoxBV，流感_甲1型、_甲3型均有抑制作用，对HSV₁型有部份抑制作用。1∶20药液(0.5mg/ml)对HSV₂有部份抑制作用。1∶40药液(0.25mg/ml)对RSV有抑制作用。1∶10-1∶80药液AdV₇型无抑制作用。

中药对照穿琥宁1∶10药液(4mg/ml)对AdV_3·11型、RSV、HSV₂型及流感_甲1型、_甲3型有抑制作用。1∶20药液(2mg/ml)对AdV₃型、RSV，流感_甲1型、_甲3型均有抑制作用，1∶10-1∶80药液AdV₇型，HSV₁型、CoxBV均无抑制作用。

空白对照均不能抑制AdV_3、7、11型、RSV、HSV₁、HSV₂型，流感_甲1型、_甲3型病毒。

鸢尾甲苷A药物在体外组织细胞内对AdV_3、7、11型、RSV、HSV_1、2型CoxBV，流感_甲1型、_甲3型均有不同程度的抑制作用。其中对AdV₇、HSV₂型抑制作用均优于病毒唑和穿琥宁。

病毒唑对RSV的抑制作用均优于鸢尾甲苷A和穿琥宁药物。

穿琥宁对流感_甲1型、_甲3型的抑制作用均优于鸢尾甲苷A药物和病毒唑。

以下是药效学试验的受试药物、工具药阳性药：

1、受试药物

本发明药物胶囊为胶囊剂，由实施例3制备，囊内装定量药粉0.35g。临床用药拟定日服3次，1次3粒。急性咽喉炎疗程1周，慢性咽喉炎疗程2个月。成人平均以60公斤体重计，则日·公斤体重剂量为0.05g/kg。试验用药为中试制好备装胶囊的药粉，为黄色粉末。由四川省中药研究所中药化学研究室徐学民研究员等提供。试验前用0.5％西黄耆胶溶液配成所需浓度，以药粉重量g/ml表示，以药粉重量g/kgb.w.(体重)表示给药剂量。各批药粉的有效部分含量略有不同，各批平均在60％左右，不能超过±3％(即60±3％)，以此作为质量控制标准，以保持药效的稳定性。本批试验样品有效部分含量为59.55％。

2、工具药、阳性对照药、重要试剂、培养基等

阳性对照药：

病毒唑注射液：(100mg/ml)，鄂卫药准字(1983)第000229号，湖北天门制药厂生产，批号：990610。试验时作1∶10～1∶80等比稀释。

穿琥宁：冻干粉针剂，40mg/支，成都通德药业有限公司生产，批号：991101。试验前稀释成100mg/ml，再作1∶10～1∶80等比稀释。

阿斯匹林：中国医药公司重庆公司分装，批号：990507

西瓜霜：广西桂林三金药业集团公司生产，批号：9904248

氢化可的松：西南制药三厂出品，批号：991205

喉疾灵胶囊：广州白云山制药总厂阳春药厂生产，批号：980201。广州陈李济药厂生产，批号：9907314

盐酸吗啡：沈阳第一制药厂生产，批号：990802

金嗓子喉宝：广西金嗓子制药厂出品，批号：991001

磷酸可待因：中国医药公司青海制药厂生产。

急支糖浆：太极集团涪陵制药厂生产，批号：001016095

其它试剂药械：0.6％HAC生理盐水液；0.5％伊文思蓝生理盐水液；0.9％生理盐水，PH7.0～7.2；二甲苯(AR)，高压灭菌棉球；水解酪蛋白液体培养基(MH培养基)，含3％血清MH培养基

3.实验动物、细胞、病毒

小鼠：昆明种远交系(封闭群30代以上)，1级合格动物，合格证号为川实动管质(99)第30号。体重一般选18～22g之间。雌雄各半。动物数依实验内容而定，由四川省抗菌素工业研究所动物中心提供。

大鼠：SD种远交系(封闭群30代以上)，1级合格动物，合格证号：川实动管质(99)第32号。体重一般选180～220g之间。雌雄各半。动物数依实验内容而定(参阅实验方法部分)，由四川省抗菌素工业研究所动物中心提供。

细胞株：Hep-2细胞，由四川省人民医院检验科病毒室-85℃低温冻存，实验前复苏传代，生长液为10％小牛血清Eagles液，待细胞在试管形成单层后备用。

病毒：柯萨奇CoxB3型、腺病毒AdV3型，由北京首都儿科研究所提供，在四川省人民医院检验科病毒室复苏传代，试验前分别传代测定ICID₅₀/0.1ml。

试验例4  本发明药物的抗病毒试验研究

1.细胞毒性试验

取本发明药物、病毒唑、穿琥宁三种药物1∶10～1∶80药液(相当于10，5，2.5，1.25mg/ml)，分别接种于Hep-2细胞管，加2％小牛血清Eagles液维持，置37℃温箱，同步设细胞对照，逐日观察细胞反应。结果除本发明药物药液1∶10对Hep-2细胞可致少许皱缩外，1∶20～1∶80药液对Hep-2细胞均无任何毒性反应，病毒唑、穿琥宁对Hep-2细胞均无任何毒性反应。结果见表1。

                      表1  本发明药物及对照药对细胞毒性试验结果

药物	细胞	药物浓度(mg/ml)				细胞对照
							10	5	2.5	1.25
		本发明药物穿琥宁病毒唑	Hep-2Hep-2Hep-2	±--	---						---	---	---

注：-细胞无任何毒性反应

   ±表示出现少许皱缩

结果表明：本发明药物5，2.5，1.25mg/ml对Hep-2细胞无毒性，10mg/ml对Hep-2细胞3有轻微毒性。穿琥宁、病毒唑10，5，2.5，1.25mg/ml对Hep-2细胞均无毒性。

2.体外直接抗病毒试验

取本发明药物、病毒唑、穿琥宁三种药物四个浓度药液(1∶10、1∶20、1∶40、1∶80)，分别与100 TCID₅₀/0.1ml的CoxB3、AdV3病毒等量混合，置室温直接作用1小时。(同时分设病毒对照、细胞对照)取每种药物不同浓度液与CoxB3、AdV3等量混合液0.2ml，分别接种2支Hep-2细胞管(同步设病毒对照接种0.1ml)，待混合液、病毒吸附细胞45分钟后，于各管加足维持液，置37℃温箱，逐日观察细胞病变情况，待病毒对照出现3+病变时中止试验。凡细胞出现2+或2+以上病变＞50％者提示受试药不能抑制病毒；细胞不出现病变，提示药物对病毒有抑制作用；细胞出现1+以下病变，提示药物有部分抑制病毒作用。试验结果表明：在同样条件下，空白对照细胞生长良好无病变，病毒对照细胞出现严重病变(3+)，本发明药物1∶10、1∶20、1∶40(即10，5，2.5mg/ml)药液能完全抑制CoxB3致细胞病变；且本发明药物1∶10(即10mg/ml)完全抑制AdV3致细胞病变。西药对照药病毒唑只是在1∶10药液(即10mg/ml)能抑制CoxB3引起的病变，而对AdV3致细胞病变，1∶20、1∶40、1∶80(即5，2.5，1.25mg/ml)不能抑制细胞病变。中药阳性药穿琥宁1∶10、1∶20、1∶40(即10，5，2.5mg/ml)药液能抑制CoxB3致细胞病变，而各个试验浓度均不能抑制AdV3致细胞病变。以上结果表明：本发明药物药物在体外试验中有抗病毒作用，对柯萨奇病毒(CoxB3)优于病毒唑的抗病毒作用，与穿琥宁的作用一致；对腺病毒(AdV3)的作用优于穿琥宁的抗病毒作用，与病毒唑的作用一致。以上结果见表2。

                            表2  本发明药物的抗病毒作用

药物	病毒	药液浓度(mg/ml)				病毒对照	细胞对照
								10	5	2.5	1.25
		本发明药物	CoxBAdV3	(-)(-)	(-)(++)							(-)(+++)	(+++)(+++)	(+++)(+++)	--
穿琥宁	CoxB3AdV3					(-)(++)	(-)(++)	(-)(+++)	(+++)(+++)	(+++)(+++)	--
		病毒唑	CoxB3AdV3	(-)(-)	(++)(++)							(++)(++)	(+++)(+++)	(+++)(+++)	--

注：-表示细胞形态正常，无病变

    (-)表示药物完全抑制细胞病变

    (++)～(+++)表示细胞病变程度

3.细胞毒性试验

实验前用Hank液，将本发明药物(SG-2)、西药对照药病毒唑、中药对照药穿琥宁三药以1∶10～1∶160作等比稀释，最大浓度均为10mg/ml，依次是5，2.5，1.25，0.625mg/ml等不同浓度。分别取以上三药的不同浓度药液，接种子HeLa细胞，MDCK细胞，同时分别设不加药物的细胞对照，置37℃温箱，逐日观察细胞毒反应。结果表明：本发明药物1∶10～1∶60不同浓度的本发明药物(SG-2)、病毒唑、穿琥宁和空白对照(Hanks液)对HeLa，MDCK细胞均无任何毒性反应。见表3。

                          表3  本发明药物及对照药对细胞毒性试验结果

药物	细胞	药物浓度(mg/ml)					细胞对照
								1∶10	1∶20	1∶40	1∶80	1∶160
		本发明药物穿琥宁病毒唑空白对照	HeLaMDCKHeLaMDCKHeLaMDCKHeLaMDCK	--------	--------	--------							--------	--------	--------

注：-表示2实验试管(平行复管)均无任何毒性

4.抗病毒试验

取100TCID₅₀/0.1ml的呼吸道合胞病毒(RSV)，流感病毒甲1型、甲3型分别与本发明药物(SG-2)、病毒唑、穿琥宁1∶10～1∶80药液等量混合，室温作用1小时后，分别取上述各类病毒与药物混合直接接种HeLa和MDCK细胞，待细胞吸附1小时后，分别加入10％小牛血清生长液，同步设病毒、细胞对照和空白对照，置37℃温箱，逐日观察细胞病变情况。

实验结果表明：本发明药物1∶10，1∶20药液，即10mg/ml，5mg/ml对呼吸道合胞病毒(RSV)，流感病毒甲1型，以及1∶10，即10mg/ml对于流感病毒甲3型均能抑制细胞病毒，表明此浓度有抗病毒作用，对细胞有保护其免受病毒侵害的作用。病毒唑1∶40药液，即1.25mg/ml对RSV病毒，1∶10mg/ml对流感病毒甲1、甲3型有抑制细胞病变作用。穿琥宁1∶20药液即：5mg/ml对RSV、流感甲1、甲3型病毒均有抑制其病毒，保护细胞免受病毒损伤的作用。结果见表4。

                                    表4  本发明药物的抗病毒作用

药物	病毒	药液浓度(mg/ml)				病毒对照	细胞对照
								1∶10	1∶20	1∶40	1∶80
		本发明药物病毒唑穿琥宁空白对照	RSV流感甲1甲3RSV流感甲1甲3RSV流感甲1甲3RSV流感甲1甲3	---------+++++++++	--++-++++---+++++++++							+++++++-+++++++++++++++++++++	++++++++++++++++++++++++++++++++++++	++++++++++++++++++++++++++++++++++++	------------

注：“-”表示2管细胞无任何病变

    “++-+++”表示细胞病变程度

上述抗病毒实验证明，本发明药物对导致急性咽喉炎及急性上呼吸道感染的主要病毒如流感病毒、腺病毒、柯萨其病毒、呼吸道合胞病毒有显著地抑制作用，其作用与西药病病毒唑相当，强于市售药穿琥宁(穿心莲乙素琥珀酸半酯单钾盐，为中药治疗急性上呼吸道感染首选药)。

试验例5  本发明药物消炎作用的试验研究

1、本发明药物对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高(炎症)的影响试验

取体重20～25g小鼠60只，按体重随机分为6组，分别灌服本发明药物1.0，0.5，0.25g/kg，西药对照药组阿斯匹林0.1g/kg，中药对照药组西瓜霜片1.2g/kg，空白对照组灌服等体积的1％西黄蓍胶溶液。以上各组均在给药后1小时，各鼠尾静脉注射伊文思蓝生理盐水0.1ml/10g·bw，随即腹腔注射0.6％冰醋酸(HAC)0.2ml/只，20分钟后将小鼠拉脱颈椎处死，剪开腹部皮肤肌肉，用6ml生理盐水分数次洗涤腹腔，吸管吸出洗涤液，合并加入生理盐水至10ml，3000rpm离心15min，取上清液于UV-730生化分析仪590nm处比色测定，以OD值代表通透性，将结果进行统计比较。结果如表5。

               表5  本发明药物药粉对小鼠腹腔通透性的影响(X±SD)

组别	动物数(N)	剂量(g/kg)	腹腔毛细血管通透性OD值
				对照组本发明药物药粉本发明药物药粉本发明药物药粉西瓜霜片阿斯匹林	101010101010	-1.00.50.251.20.1	0.195±0.0840.072±0.033***0.085±0.049**0.060±0.034***0.092±0.045**0.063±0.026***

注：^**：P＜0.01，^***：P＜0.001(与对照组相比较)

实验结果显示：本发明药物1.0，0.5，0.25g/kg对腹腔注射HAC所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高有非常显著的抑制作用，与对照组相比较有极显著统计学差异(P＜0.01)，表明本发明药物药粉有非常显著的抑制此种炎症的作用。其作用比同剂量西瓜霜强。

2、本发明药物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

取体重18～22g小鼠60只，雌雄各半，按体重随机分为6组，3个给药组分别灌胃本发明药物1.0，0.5，0.25g/kg，西药阳性对照药组sc氢化可的松25mg/kg，中药对照药组ig喉疾灵0.66g/kg，空白对照组ig等体积1％西黄蓍胶溶液。各组分别在ig给药30分钟后，每只鼠右耳涂布二甲苯0.05ml致炎造型，隔4小时后，将小鼠拉脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径8mm打孔器分别在同一部位打下耳圆片，用精密扭力天平称重，以每鼠右耳片减去左耳片重量为肿胀度，将对照组和给药组的肿胀程度进行比较和统计学处理。结果如表6。

                     表6  本发明药物药粉对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(X±SD)

组别	动物数(N)	剂量(g/kg)	耳肿胀度(mg)
				对照组本发明药物本发明药物本发明药物喉疾灵氢考	101010101010	-1.00.50.250.660.025	9.20±2.786.70±3.426.35±2.56*5.55±4.24*8.60±2.426.17±2.65*

注：^*：P＜0.05(与对照组相比较)

实验结果显示：本发明药物0.5，0.25g/kg对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有显著的抑制作用，与对照组比较有显著差异(P＜0.05)，表明有显著的抗炎消肿作用。其作用强度超过同剂量喉疾灵。

3、本发明药物对角叉菜胶致大鼠脚肿胀的影响试验

取SD大鼠60只，按体重随机分为6组，每鼠左后足掌正面上端用圆珠笔作一清晰横线，用排水法测大鼠足造型前体积并记录，然后各组分别ig本发明药物0.125，0.25，0.5g/kg和喉疾灵0.33g/kg及sc氢化可的松25mg/kg，对照组ig等体积蒸馏水。1小时后用0.25ml注射器吸取配好的1％角叉菜胶液0.1ml，用4号针头注入大鼠左后脚跖皮下，然后分别于造型后1、2、4、6、8小时测定各大鼠左后足体积1次，计算鼠足肿胀百分率。

结果如表7。

                         表7  本发明药物药粉对大鼠脚肿胀的影响(X±SD，n＝10)

组别	剂量(g/kg)	致炎后不同时间肿胀百分率(％)
							1(h)	2(h)	4(h)	6(h)	8(h)
		对照组本发明药物本发明药物本发明药物喉疾灵氢考	-0.1250.250.50.330.025	18.77±5.5515.07±7.8714.31±8.8215.06±6.1913.51±10.2917.20±8.72	33.26±10.8025.26±10.5822.95±11.9228.82±10.4024.56±10.9814.67±8.69***	31.77±10.2216.56±13.54*8.01±11.71**27.42±10.8724.95±6.979.57±4.82***						27.71±9.979.83±10.68**7.49±12.28**23.59±10.4518.32±10.664.10±5.96***	20.65±6.497.77±11.31**6.43±8.97*19.82±11.8421.78±10.024.90±4.44***

注：^*：P＜0.05  ^**：P＜0.01  ^***：P＜0.001与对照组比较

从表7中可以看出本发明药物对大鼠角叉菜胶致大鼠脚肿胀有抑制作用，小、中、大剂量0.125、0.25、0.5g/kg组在测定的5个时间均较对照组肿胀度降低，中、小剂量组在4、6、8小时有非常显著降低(P＜0.01)。消肿作用虽低于氢化可的松，却明显高于中药对照药喉疾灵组，表明本发明药物有较好的消肿胀作用。

4、本发明药物对羧甲基纤维素囊中白细胞游出的影响试验

取SD大鼠60只，分为6组，各组分别ig本发明药物0.125、0.25、0.5g/kg，喉疾灵0.33g/kg及sc氢化可的松25mg/kg，对照组ig等体积蒸馏水。每天一次，连续3天，与此同时，第2天背颈部用5％硫化钠脱毛，第3天于无菌状态下向背颈部皮下注入8ml空气，形成圆形气囊，次日用消毒针头及注射器向气囊内注入羧甲基纤维素(CMC)液5ml/只，于注射后3小时及7.5小时吸取囊中CMC液各0.1ml，滴入3ml亮甲酚蓝染液中，混匀染色2分钟后滴于WBC计数板上，于显微镜下计数WBC，再换算成每囊内WBC总数，计算四角4个大方格内WBC数，根据公式(4个方格内的WBC总数÷4×10×20×10⁶＝WBC数/L)。结果如表8。

                           表8  本发明药物对羧甲基纤维素囊中白细胞游出的影响(X±SD)

组别	动物数(N)	剂量(g/kg)	CMC囊中WBC数(×109/L)
					3h	7.5h
			对照组本发明药物本发明药物本发明药物喉疾灵氢考	101010101010			-0.1250.250.50.330.025	27.06±9.5521.22±9.2821.70±8.8321.11±6.6923.42±6.1316.67±5.92*	49.04±10.6442.14±13.4934.47±17.70*36.73±13.21*44.67±14.3729.84±9.39***

    注：^*：P＜0.05，^***：P＜0.001与对照组比较

从表8中可以看出本发明药物药粉对大鼠羧甲基纤维素致炎诱发机体白细胞游出有一定抑制作用，本发明药物3个剂量组在测定的2个时间均较对照组WBC数减少，大、中剂量组在7.5小时能显著抑制白细胞向炎灶内聚集(P＜0.05)，减少程度虽不及氢化可的松，却明显高于中药对照药喉疾灵组，表明本发明药物药粉有抑制中期炎症反应的作用。

5、本发明药物对小鼠慢性炎症棉球肉芽肿的影响试验

取体重18～22g小鼠72只，雌雄各半。在每鼠胸部用碘酒消毒，75％酒精棉球脱碘后，在胸部切一小口，用眼科镊将5mg高压灭菌棉球从切口处植入皮下腋窝部，随即缝合皮肤。从手术当日开始给药，5个给药组分别ig本发明药物1.0、0.5、0.25g/kg，中药对照组ig喉疾灵0.66g/kg，西药对照组sc氢化可的松25mg/kg，空白对照ig等体积蒸馏水。以上各组均连续给药6天，第7天试验结束前称体重，然后脱颈椎处死，将植入棉球连同周围结缔组织一并取出，剔除脂肪组织，放入烘箱中60℃烘干12小时，在精密扭力天平上称重。将称得重量减去棉球原重量即得肉芽肿重量，以mg/10g·bw计算，并进行组间比较和统计学处理。结果如表9。

                         表9  本发明药物对小鼠慢性炎症棉球肉芽肿的影响(X±SD)

组别	动物数(N)	剂量(g/kg)	肉芽肿(mg/10g·bw)
				对照组本发明药物本发明药物本发明药物喉疾灵氢考	12912111010	-1.00.50.250.660.025	10.63±3.296.95±1.04***6.52±1.21**7.59±3.00*8.35±1.396.07±1.64**

注：^*：P＜0.05，^**：P＜0.01，^***：P＜0.001与对照组比较

实验过程中有鼠死亡，表中动物数为实验结束时动物数

实验结果显示：本发明药物1.0，0.5，0.25g/kg对小鼠棉球肉芽肿与对照组相比，有显著差异(P＜0.01或P＜0.05)，表明本发明药物3个剂量有明显抑制慢性炎症作用。中药对照药喉疾灵未见有明显作用。本发明药物药粉抗炎作用强于同剂量喉疾灵。

6、本发明药物药粉对大鼠慢性炎症棉球肉芽肿的影响试验

取体重140～160g SD大鼠一批，均为雄性，随机分为6组。在每鼠胸部用碘酒消毒，75％酒精棉球脱碘后，在胸部切一小口，用眼科镊将20mg高压灭菌棉球从切口处植入皮下腋窝部，随即缝合皮肤。从手术当日开始给药，5个给药组，分别ig本发明药物0.5，0.25，0.125g/kg；中药对照组ig喉疾灵0.33g/kg，西药对照组sc氢化可的松12.5mg/kg，空白对照组ig等体积蒸馏水。以上各组均连续给药6天，第7天实验结束前称体重一次，然后脱颈椎处死，将植入棉球连同周围结缔组织一并取出，剔除脂肪组织，放入烘箱中60℃烘干12小时，再在精密扭力天平上称出总重量。将称得重量减去棉球原重量即得肉芽肿重量，以mg/100g·BW计算，并进行组间比较和统计学处理。

结果如表10。

                     表10  本发明药物对大鼠慢性炎症棉球肉芽肿的影响(X±SD)

组别	动物数(N)	剂量(g/kg)	肉芽肿(mg/100g·BW)
				对照组本发明药物本发明药物本发明药物喉疾灵氢考	101010101010	-0.50.250.1250.330.0125	61.51±10.2546.75±2.46*52.83±12.8571.82±19.8057.71±16.7446.44±4.93*

^*：P＜0.05与对照组比较

实验结果显示：本发明药物药粉0.5g/kg对大鼠棉球肉芽肿与对照组相比有显著性差异(P＜0.05)，表明本发明药物药粉0.5g/kg有明显抑制慢性炎症作用，而0.25g/kg与对照组比较有一定缩小，但无统计学差异，表明其余剂量组抑制慢性炎症作用不明显，中药对照药喉疾灵组也未见有明显作用。本发明药物药粉作用强度超过喉疾灵。

试验例6  本发明药物镇痛作用试验研究

1、本发明药物对醋酸致小鼠疼痛作用的影响试验(扭体法)

取体重18～22g小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组，3个给药组分别ig本发明药物1.0，0.5，0.25g/kg；中药对照药金嗓子喉宝3.0g/kg，给药60分钟后每鼠ip0.5％HAC 0.2ml/只，观察15分钟内扭体次数。西药对照药sc盐酸吗啡10mg/kg，注射20分钟后ip HAC0.2ml/只，同法观察15分钟内扭体次数，将结果进行比较统计。结果如表12。

                       表12  本发明药物药粉对小鼠的镇痛作用(扭体法)(X±SD)

组别	动物数(N)	剂量(g/kg)	扭体数(X±SD)
				对照组本发明药物本发明药物本发明药物金嗓子喉宝盐酸吗啡	101010101010	-1.00.50.253.00.01	24.8±8.49.1±6.2**7.7±4.7**17.7±10.812.6±11.8*0.0±0.0***

注：^*：P＜0.05  ^**：P＜0.01  ^***：P＜0.001(与对照组相比较)

实验结果显示：本发明药物药粉1.0g/kg，0.5g/kg非常显著地抑制醋酸致小鼠疼痛的扭体次数，与对照组比较有非常显著统计学差异(P＜0.01)，说明本发明药物药粉有非常显著的镇痛作用；金嗓子喉宝3.0g/kg也显著抑制小鼠扭体次数(P＜0.05)；而盐酸吗啡皮下注射则极其显著抑制小鼠扭体次数(P＜0.001)，表明3种药物均有镇痛作用(化学法致痛，扭体法)，本发明药物药粉镇痛作用次于吗啡，但强过金嗓子喉宝。

2、本发明药物对热板致小鼠疼痛作用的影响试验(热板法)

将超级恒温水浴器调节至55±0.5℃，使热板预热10分钟。

首先筛选热敏合格小鼠：取18～22g雌性小鼠一批，每次放1只在热板上，小鼠自放在热板上至舔后足所需时间(秒)作为该鼠的痛阈值。凡阈值小于5秒或大于30秒或跳跃者弃之不用。将合格小鼠60只随机分为6组，重复测其正常痛阈值，取两次痛阈值平均值作为该鼠给药前痛阈值。然后给药，3个受试药组分别ig本发明药物0.25，0.5，1.0g/kg；中药对照药组ig喉疾灵0.66g/kg及西药对照药组sc盐酸吗啡10mg/kg；空白对照组ig等体积蒸馏水。分别于给药后15分、30分、60分、90分钟测定各小鼠的痛阈值。实验结束，将各组各时间平均痛阈值进行比较，作统计处理。结果如表13。

                        表13  本发明药物药粉对小鼠的镇痛作用(热板法)

组别	剂量(g/kg)	各组各测定时间痛阈值(s)(X±SD)
							药前	15min	30min	60min	90min
		对照组本发明药物本发明药物本发明药物喉疾灵盐酸吗啡	-0.250.51.00.660.01	15.25±2.4516.75±6.5015.25±6.4715.69±3.6815.00±4.4918.75±7.92	13.50±5.9620.00±16.9514.50±4.8716.00±6.9728.90±4.8743.70±18.86**	12.90±5.4219.80±15.4817.00±7.1922.20±14.9533.80±23.15*45.40±17.13**						13.60±6.4819.60±14.6224.40±19.8826.90±18.0321.80±20.4545.30±17.13**	14.20±3.9322.10±18.3629.70±20.03*27.20±17.85*30.30±23.5738.80±19.52**

注：^*：P＜0.05  ^**：P＜0.01(与对照组相比较)

实验结果表明：给药后各组的痛阈值均有提高，以盐酸吗啡组最为突出，各个测定时间均较给药前有非常显著提高(P＜0.01)；本发明药物药粉，大部分测定时间痛阈值较给药前均有较明显提高，且大、中剂量在给药后90分钟测定较对照有显著提高(P＜0.05)，表明本发明药物药粉对热刺激有显著的镇痛作用。

试验例7  本发明药物解热作用试验

取大鼠80只，每日用水银体温计测肛温2次(上、下午各一次)，连续2天，试验当日再测体温2次，选取体温波动不超过0.3℃的大鼠60只，随机分为6组，每组10只，各组分别ig本发明药物0.125，0.25，0.5g/kg和喉疾灵0.33g/kg及阿斯匹林25mg/kg，对照组ig等体积蒸馏水。给药同时于大鼠双后足两足跖间皮下注射1％角叉菜胶液各0.1ml/足，然后分别于2、4、6、8、10小时各测肛温一次，求出各测定时间体温变化的平均值，进行组间比较，结果进行统计。结果如表14。

                       表14  本发明药物药粉对大鼠角叉菜胶致热的解热作用

组别	剂量(g/kg)	动物数(N)	致热后不同小时体温增加值(℃)(X±SD)
								2(h)	4(h)	6(h)	8(h)	10(h)
			对照组本发明药物本发明药物本发明药物喉疾灵阿斯匹林	-0.1250.250.50.330.025	101010101010	-0.17±0.27-0.08±0.24-0.03±0.36-0.10±0.27-0.05±0.28-0.12±0.31	0.31±0.390.40±0.250.41±0.380.35±0.290.44±0.540.34±0.29						0.60±0.360.29±0.330.48±0.410.25±0.390.61±0.540.30±0.16*	0.52±0.480.22±0.340.51±0.580.18±0.420.41±0.640.21±0.18	0.54±0.220.40±0.470.50±0.420.27±0.30*0.56±0.540.27±0.23*

注：^*：P＜0.05  (与对照组相比较)

从表14中可以看出本发明药物药粉对大鼠角叉菜胶致热有一定解热作用，大、中、小剂量0.5、0.25、0.125g/kg组3个剂量组在绝大部分测定时间的体温平均值均低于对照组，大、小剂量组6、8、10小时体温较对照组降低更明显，明显强于中药对照药喉疾灵组，且大剂量10小时差异显著(P＜0.05)，表明本发明药物药粉有一定的解热作用。

试验例8  本发明药物药粉的止咳作用试验

购取昆明种小鼠60只，♀、♂各半，在四川省中药研究所清洁级动物室实验条件下，适应环境24小时，然后分6组，即：正常对照组同体积(与给药组同体积)蒸馏水，本发明药物1.0，0.5，0.25g/kg 3个剂量组，中药对照药急支糖浆20ml/kg组，西药对照药ig磷酸可待因30mg/kg，各组均连续给药3天，在末次给药40分钟，分别将小鼠置于倒置的500ml烧杯内，向烧杯内放置的小杯中注入0.15ml/只浓氨水，经氨气熏15秒钟，取出小鼠，计数小鼠2分钟时间内的咳嗽次数，并将结果进行统计处理，组间比较作差异显著性测定。结果如表15。

                   表15  本发明药物药粉对浓氨水引咳小鼠的止咳作用(X±SD)

组别	剂量	N	咳嗽次数(2min内)	P
					对照组本发明药物本发明药物本发明药物急支糖浆可待因	等体积1.0g/kg0.5g/kg0.25g/kg20ml/kg30mg/kg	101010101010	145±28.3121±13.4120±25.6128±14.7121±18.798±18.2	＜0.05＞0.05＞0.05＜0.05＜0.01

结果表明：可待因组咳嗽次数较对照组非常显著降低P(＜0.01)，急支糖浆组也比较对照组显著降低(P＜0.05)，表明西药对照药，中药对照药都有显著止咳作用；本发明药物3个剂量组的咳嗽次数都较对照组降低，大剂量组有显著差异(P＜0.05)，表明本发明药物药粉大剂量有显著止咳作用。

通过多种药效试验证明：

1.本发明药物药粉在体外试验有显著的抗病毒作用，本发明药物药粉10，5，2.5mg/ml能完全抑制柯萨奇病毒(CoxB)3致细胞病变，与同剂量穿琥宁作用一致，而病毒唑只有10mg/ml有此作用，5.0，2.5mg/ml未能抑制(CoxB)3致细胞病变；本发明药物药粉10mg/ml能抑制腺病毒(AdV)3型致细胞病变，与同剂量的病毒唑作用强度一致。而穿琥宁此浓度未表现抑制腺病毒的作用。

本发明药物药粉10，5mg/ml能完全抑制呼吸道合胞病毒(RSV)致细胞病变，此作用弱于病毒唑(病毒唑0.5mg/ml即可抑制RSV)，与穿琥宁作用一致，能抑制流感病毒甲1型致细胞病变，此作用与穿琥宁的作用一致却强过病毒唑的作用(病毒唑仅在10mg/ml时才有此作用)：本发明药物药粉10mg/ml能抑制流感病毒甲3型致细胞病变，此作用强度不及穿琥宁(穿琥宁5mg/ml即有此作用)却与病毒唑的作用一致，都是在浓度为10mg/ml时有抑制能抑制流感病毒甲3型致细胞病变作用。

2.本发明药物1.0，0.5，0.25g/kg对腹腔注射醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高有非常显著的抑制作用，表明有非常显著的抗炎性渗出作用，其作用强度比同剂量西瓜霜强。

3.本发明药物0.5，0.25g/kg对二甲苯致小鼠耳肿胀有显著的抑制作用，表明有显著的抗炎消肿作用，作用强度远超过同剂量喉疾灵。

4.本发明药物药粉0.5，0.25，0.125g/kg对角叉菜胶致大鼠脚肿胀有非常显著的抑制作用，表明本发明药物有很好的抗炎消肿作用，作用强度低于氢化可的松，显著高于喉疾灵。

5.本发明药物药粉0.5，0.25，0.125g/kg对羧甲基纤维素诱发机体白细胞游出有一定抑制作用，大、中剂量组在7.5小时能显著抑制白细胞游走(P＜0.05)，表明本发明药物有抑制炎症中期反应的作用，作用强度超过喉疾灵，不及氢化可的松。

6.本发明药物药粉1.0，0.5，0.25g/kg大、中、小3个剂量组对小鼠棉球肉芽肿均有显著的抑制作用，表明本发明药物有抑制慢性炎症作用，作用强度超过喉疾灵。

7.本发明药物药粉0.5g/kg对大鼠棉球肉芽肿有显著抑制作用，表明本发明药物有抑制慢性炎症作用，作用强度超过喉疾灵。

8.本发明药物药粉1.0，0.5g/kg非常显著地抑制醋酸致小鼠疼痛的扭体次数，表明本发明药物对化学剂致痛有非常显著的镇痛作用，其强度低于吗啡，超过金嗓子喉宝。

9.本发明药物药粉1.0，0.5，0.25g/kg对小鼠热刺激有显著的镇痛作用，强度低于吗啡与喉疾灵作用相当。

10.本发明药物药粉0.5，0.25，0.125g/kg对角叉菜胶致热大鼠有一定解热作用，强度超过喉疾灵。

11.本发明药物药粉1.0g/kg对浓氨水引咳的小鼠有显著的止咳作用。

结论：本发明药物有显著的抗病毒作用，能显著抑制柯萨奇病毒(CoxB3)和腺病毒(AdV3)的体外增殖，较西药抗病毒药病毒唑和中药抗病毒药穿琥宁的作用全面；本发明药物有显著的消炎作用，能显著地抑制动物的急性炎性渗出、肿胀(小鼠耳肿胀、大鼠足肿胀)，能显著地抑制中期炎症(白细胞游出)及慢性炎症(大、小鼠肉芽肿)；本发明药物有显著的镇痛作用，对化学剂致痛、热致痛均有镇痛作用；本发明药物有明显的解热作用和止咳作用。

综上所述，本发明药物能抗病毒、消炎、镇痛、解热、止咳，疗效确切、起效快，安全，对感冒、过度吸烟、化学刺激物等各类因素导致的急性咽喉炎或上呼吸道感染呈现出咽喉肿痛、声音嘶哑，头痛发烧，咳嗽痰黄或咽喉、鼻粘膜充血等症状有明显的治疗作用，主要症状可在3～7天即可痊愈。治疗急、慢性咽喉炎的药物。本发明药物的制备方法是从原生药材中分离纯化出有效部位总黄酮，采用大孔树脂吸附法，工艺先进，成本低、效率高、无三废，且附加值高，利润空间大，原生药材鸢尾目前价格低廉(4～5元/公斤)，采用本发明提取方法纯化总黄酮的收率为约15％，也就是每公斤原生药材可制备本发明药物胶囊剂400粒(0.35g/粒)，每粒胶囊的直接生产成本约为0.07元/粒，每吨药材可创产值28万元，若销售成本为销售收入的40％，每吨药材所生产的产品可获税利28-28×40％-2.8(生产成本)＝14万元，即积利为销售收入的50％。若每年处理250吨原生药材，税利即有3500万元(产量为1亿粒，产值与销售收入为7000万)，由此可见，本发明药物在商业上获得成功，是由于选择了低成本的原生药材，在本发明原料药物提取方法下，得率高，是由本发明的技术特征直接导致的，对本领域技术人员来说，是非显而易见的，为临床提供了一种新的药用选择。

Claims (10)

1、一种治疗咽喉炎的药物组合物，其特征在于：它是由鸢尾科植物鸢尾Iristectorum Maxim.总黄酮提取物为活性部分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂，其中，提取物中总黄酮的百分含量以鸢尾苷C₂₂H₂₂O₁₁计算≥55％。

2、根据权利要求1所述的治疗咽喉炎的药物组合物，其特征在于：所述的总黄酮中含有：鸢尾苷tectoridin、鸢尾甲苷A iristectorin A、鸢尾苷元tectorigenin、野鸢尾苷元irigenin。

3、根据权利要求2所述的治疗咽喉炎的药物组合物，其特征在于：总黄酮中四个异黄酮成分的重量配比鸢尾苷∶鸢尾甲苷A∶鸢尾苷元∶野鸢尾苷元为1∶0.1～0.4∶0.15～0.6∶0.03～0.1。

4、根据权利要求3所述的治疗咽喉炎的药物组合物，其特征在于：总黄酮中四个异黄酮成分的含量比鸢尾苷∶鸢尾甲苷A∶鸢尾苷元∶野鸢尾苷元为1∶0.18∶0.29∶0.056。

5、根据权利要求1～4任一项所述的治疗咽喉炎的药物组合物，其特征在于：所述的鸢尾总黄酮是由下述方法提取制备：

a、取鸢尾科植物鸢尾Iris tectorum Maxim.药材，粉碎，加入70％乙醇回流提取，浓缩，得浸膏；

b、将a步骤的浸膏溶解入水中，过滤，滤液通过大孔吸附树脂柱；

c、用水洗涤脂柱，流出液弃去，至流出液呈近无色澄明溶液时，放干水，用75～90％的乙醇洗脱，洗脱液过滤，浓缩即得本发明总黄酮。

6、根据权利要求5所述的治疗咽喉炎的药物组合物，其特征在于：所述的鸢尾总黄酮的提取方法中b步骤所述的大孔吸附树脂柱的树脂量与原生药材的重量配比为：3∶1。

7、根据权利要求1所述的治疗咽喉炎的药物组合物，其特征在于：所述的制剂是：胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、口服液。

8、一种制备权利要求1所述的治疗咽喉炎的药物组合物的方法，包括如下步骤：

a、取鸢尾科植物鸢尾Iris tectorum Maxim.药材，粉碎，加入70％乙醇回流提取，浓缩，得浸膏；

b、将a步骤的浸膏溶解入水中，过滤，滤液通过大孔吸附树脂柱；

c、用水洗涤脂柱，流出液弃去，至流出液呈近无色澄明溶液时，放干水，用75～90％乙醇洗脱，洗脱液过滤，浓缩即得总黄酮；

d、称取c步骤的总黄酮，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

9、权利要求1所述的药物组合物在制备治疗急、慢性咽喉炎的药物中的用途。

10、权利要求1所述的药物组合物在制备抗病毒、抗炎、镇痛、解热、止咳药物中的用途。