CN1683317A - 百里酚和/或香芹酚的酯类化合物、制备方法及其药物活性组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及通式(I)的百里酚和/或香芹酚的酯类化合物，其中R1是甲基，R2是异丙基，R1和R2为对位；－O－(X)－O－与R1为邻位或与R2为邻位；X＝－CO－－CS－，－CO－(CH2)n－CO－，其中n＝0，1，2。该酯类化合物的药物活性组合物，用于治疗有关畜禽的寄生虫和细菌或耐药菌诱发的感染，是新一代畜禽药物。
Description
技术领域
本发明涉及酯类化合物及其药物化合物，特别是涉及百里酚和/或香芹酚的酯类化合物、制备方法及其药物活性组合物。
背景技术
近年来由于人类和畜禽广泛使用或滥用抗生素，耐药菌株日益增加，耐药菌株出现的速度超过研究新药应用于临床的速度，对人类造成严重威胁，WHO发出警告：《人类终有一日，常见的细菌感染而无药可救治》。这一客观事实出现，引起世界各国医药界广泛关注，从而，人们研究新的药途径又转向天然药物。在欧美各国，开展了广泛研究，发现植物的挥发油对25种常见的菌株有抑制作用，其中对植物牛至(Origanum VulgareL)的挥发油《牛至油Origano oil》有效成份百里酚和香芹酚特别受到关注，研究表明对某些菌具有抗菌活性。
同时牛至油也受到兽医界关注，动物和人体的病原菌和寄生虫，极其相似或完全相似，它对动物的细菌和寄生虫也有效。有人称牛至油是植物抗生素，与现代抗生素青霉素、链霉素和万古霉素同样有效。
然而天然牛至油(有效成份香芹酚/百里酚)使用过程中存在的问题：(a).由于天然牛至油、百里酚和香芹酚均属于挥发油，畜禽使用都制成预混剂，可能因挥发而损失，造成剂量不足，影响疗效。(b).天然牛至油、百里酚和香芹酚都是酚类化合物，易氧化变色，生成无效的醌类化合物，会影响药品质量和疗效。(c).香芹酚/百里酚口服时对胃肠道有灼烧痛觉。(d).天然牛至油有效成分香芹酚/百里酚都是酚类化合物，吸收慢、排泄快，影响体内的药代动力学过程。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术存在的问题，经发明人长期从事药物开发研究以及临床试验，特别关注耐药菌株诱发的疾病的治疗，开发提供具有突破性进步的药效高、成本低，用途广的新的百里酚和/或香芹酚的酯类化合物。
本发明的另一个目的提供该类百里酚和/或香芹酚的酯类化合物的制备方法。
本发明的还有另一个目的提供该酯类化合物的药物活性组合物。
本发明提供的百里酚和/或香芹酚的酯类化合物具有下列通式
其中R1是甲基，R2是异丙基，R1和R2
互为对位；-O-(X)-O-可与R1
为邻位或与R2为邻位，X＝-CO-，
-CS-，-CO-(CH2)n-CO-，其中n＝0，1，2。
本发明提供的百里酚和/或香芹酚的酯类化合物为
碳酸二-百里酯
碳酸二-香芹酯
硫代碳酸二-百里酯
硫代碳酸二-香芹酯
草酸二-百里酯
草酸二-香芹酯
碳酸百里香芹酯，硫代碳酸百里香芹酯，草酸百里香芹酯，丙二酸二-百里酯，丙二酸二-香芹酯，丁二酸二-百里酯，丁二酸二-香芹酯等。
本发明直接从牛至油有效成分—百里酚和香芹酚的结构着手，首先考虑合成前体化合物保护羟基，这类前体化合物为前体药物，要在体内酶的催化下，代谢产生有效的化合物才能发挥药效。酯酶在人和动物体内最普遍存在的一种酶。所以设计和合成百里酚和香芹酚的酯类化合物，其如通式(I)化合物，它是一类高沸点化合物或固体化合物，不易挥发；酚羟基受到保护，对日光、空气稳定，不易氧化变质；改善前体化合物在体内的药物动力学过程，从而能提高药效。经临床体内研究证实，为更好的抗菌化合物，特别是对耐药菌株有很好的疗效，而且对抗球虫的作用优于地克珠利，与妥曲珠利相当，成为新一代抗菌和抗寄生虫的新兽药，具有一药多用的特点。
本发明提供的百里酚和/或香芹酚的酯类化合物的制造方法包括(硫代)碳酸酯或二元酸酯的制造方法。
(硫代)碳酸酯制造方法：
①将百里酚和/或香芹酚溶于有机溶剂A中，溶解后在搅拌下，通或加入光气或三光气，或硫代光气，②在0～-10℃，滴入脱氢卤酸剂混合液(脱氢卤酸剂溶于有机溶剂A中)，加完后，再在室温搅拌2～4时，用薄层层析其中百里酚和/或香芹酚∶光气或硫代光气∶脱氢卤酸剂的摩尔比为2.1∶1∶3，或百里酚和/或香芹酚∶三光气∶脱氢卤酸剂的摩尔比为6.3∶1∶7。③反应毕，滤去固体物，用少量有机溶剂洗固体物，合并有机层，用饱和食盐水洗多次，再用无水硫酸钠干燥，回收有机溶剂后，若残留物为液体，可用减压蒸馏或分馏，制得纯品。若为固体可用有机溶剂B重结晶，得纯品。
或二元酸酯制造方法：
①将百里酚和/或香芹酚溶于有机溶剂A中，溶解后，在搅拌下加入二元酸酰氯，于0～-10℃下，②滴入溶于有机溶剂A的脱氢卤酸剂混合液，加完后，再在室温搅拌2～4时，其中百里酚和/或香芹酚∶二元酸酰氯∶脱氢卤酸剂的摩尔比为2.1∶1∶3，③反应毕，滤去固体物，用少量有机溶剂洗固体物，合并有机层，用饱和食盐水洗多次，再用无水硫酸钠干燥，回收有机溶剂后，残留物为液体，可用减压蒸馏或分馏，制得纯品。若为固体可用有机溶剂B重结晶，得纯品。
按照本发明提供的百里酚和/或香芹酚的(硫代)碳酸酯或二元酸酯的制造方法中，所述酯包括上述的碳酸二-百里酯、碳酸二-香芹酯、碳酸百里香芹酯、硫代碳酸二-百里酯、硫代碳酸二-香芹酯、硫代碳酸百里香芹酯、草酸二-百里酯、草酸二-香芹酯、草酸百里香芹酯、丙二酸二百里酯、丙二酸二-香芹酯、丙二酸百里香芹酯、丁二酸二-百里酯、丁二酸二-香芹酯、丁二酸百里香芹酯。
所述有机溶剂A为乙醚，石油醚，环己烷，正己烷，三氯甲烷，二氯甲烷等任何一种。
所述脱氢卤酸剂为：有机碱如吡啶，三乙胺，TEBA+NaOH等；无机碱如氢氧化钠，氢氧化钾，氢氧化钠+硫化钠混合液，碳酸钾等任一种。
所述重结晶有机溶剂B为乙酸乙酯、丙酮、甲醇加95％乙醇。
所述三光气为二一三氯甲基-碳酸酯，是一种无毒的固体，加热分解生成三分子光气，又名固体光气。
本发明提供的药物活性组合物包括下列通式(I)的酯类化合物及赋形剂或添加剂。
其中R1是甲基，R2是异丙基，R1和R2
互为对位；-O-(X)-O-可与R1
为邻位或与R2为邻位，X＝-CO-，
-CS-，-CO-(CH2)n-CO-，其中n＝0，1，2。
具体药物活性化合物为碳酸二-百里酯、碳酸二-香芹酯、硫代碳酸二-百里酯、硫代碳酸二-香芹酯、草酸二-百里酯、草酸二-香芹酯、碳酸百里香芹酯、硫代碳酸百里香芹酯、草酸百里香芹酯等，可以单独呈活性组分或以任何比例组成药物活性组合物，优选为3∶7的碳酸二-百里酯∶碳酸二-香芹酯或硫代碳酸二-百里酯∶硫代碳酸二-香芹酯或草酸二-香芹酯∶草酸二-百里酯。所述的赋形剂或添加剂是本领域内已知的，例如乙醇、玉米淀粉、吐温、β-环糊精、乙酸乙酯、PVP等。该药物活性组合物可以为例如预混剂制剂、溶液剂、包合物剂、微囊制剂等，或将上述形式制剂与饲料或饮水直接混配成混饲或禽类饮用水。随着这些药剂不同选用可不同赋形剂等。为了提高抗菌和抗寄生虫效果，鉴于人和动物的病原菌和寄生虫其相似或完全相似，直接从牛至油有效成分—百里酚和香芹酚的结构着手合成前体化合物，即为百里酚和/或香芹酚的上述酯类化合物，该酯类化合物在药学上称作前体化合物，体外无效，要在体内代谢生成有活性化合物。该前体药物要在体内酶的催化下，代谢产生有效的化合物才能发挥药效。酯酶在人和动物体内最普遍存在的一种酶。所以设计和合成百里酚和香芹酚的酯类化合物，其如通式(I)化合物，它是一类高沸点化合物或固体化合物，不易挥发；酚羟基受到保护，对日光、空气稳定，不易变质；改善前体化合物在体内的药物动力学过程，从而能提高药效。经体内研究证实，获得了更好的抗菌作用，特别是对耐药菌株有很好的疗效，而且对抗球虫的作用优于地克珠利，与妥曲珠利相当，具有突破性进步，成为新一代抗菌和抗寄生虫的新兽药。具有一药多用的特点。
本发明提供的百里酚和/或香芹酚的酯类化合物及药物活性组合物与天然牛至油、牛至油有效成分百里酚、香芹酚相比，硫代碳酸二-百里酯、硫代碳酸二-香芹酯、碳酸二-百里酯、碳酸二-香芹酯、草酸二-百里酯、草酸二-香芹酯等前体化合物具有以下特点：
1)药学上称作前体化合物为百里酚和香芹酚与碳酸、硫代碳酸、草酸等二元酸形成酚酯类化合物。游离的酚羟基不存在，不显示酚羟基的特征反应如：不显酸性，为中性化合物、对胃肠道无刺激性；不受日光和空气的氧化变质的影响。
2).前体化合物本身是一种非活性酯类化合物，人、畜和家禽必须在体内经酶的转化，使释放出活性成分，才产生药效和毒性反应，因此前体化合物的毒性很小，甚至实际无毒。
3).由于前体化合物是酯类化合物，所以脂溶性增加，在肠道内的吸收、体内的分布和代谢极大得到改善，比百里酚、香芹酚要好，提高了生物利用度，增强抗菌和抗球虫的作用和效果。
4).临床体内研究表明：牛至油有效成分百里酚、香芹酚单体或混合物，单独使用，只能抑制球虫作用；而如硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)的混合物具有协同作用，能单独用作抗球虫药。抗球虫作用与目前临床应用的两种最好的抗球虫药—地克珠利和妥曲珠利相比，它优于地克珠利，可与妥曲珠利相匹敌。并兼有抗菌作用，同时能治疗因球虫病引起并发的炎症；还有促生长的作用，是其它抗球虫药无法比拟的。
5).抗菌活性可与现代抗生素相提评论，对标准菌株和耐药菌株如沙门氏菌和大肠杆菌都很敏感性，
经口服硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)2×10-6；碳酸二-百里酯和碳酸二-香芹酯(3∶7)2×10-6的预混饲料来治疗沙门氏菌(标准菌株和耐药菌株)诱发全身的炎症，治疗五天，两者的死亡率为0％，病鸡治愈率均为100％。表明能对全身的标准菌株和耐药菌株所致的疾病有显著的疗效。而百里酚和香芹酚(3∶7))2×10-6的预混饲料，也经五天的治疗，病鸡死亡率为15％，治愈率为84.3％；明显低于前者。
以硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)100-200mg/kg混饲给药，能显著降低对多种抗菌药耐药的大肠杆菌感染雏鸡而导致的死亡率，显著改善鸡只的临床感染症状，降低治愈鸡只大肠杆菌分离率，对肌肉注射人工感染雏鸡大肠杆菌病具有显著疗效，显著优于氟哌酸、多西环素150mg/kg混饲给药。
6).其中硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)的前体化合物抗菌和抗球虫的作用最强，一药多用。
具体实施方式
本发明用下列实施例来进一步说明本发明，但本发明的保护范围并不限于下列实施例。
实施例1
百里酚的合成
400g无水三氯化铝悬浮在900g 1，2-二氯乙烷中，冷却至-9～-10℃，将216g间甲酚-1，2-二氯乙烷200g的混合液，滴入无水三氯化铝悬浮液中，温度保持-10℃，滴入174g 2-氯丙烷温度保持在-5～-10℃反应8～10小时，用簿层层析检测反应终点。将澄清反应液倒入碎冰中冰解后，再将冰解液倾入分液漏斗中，分出下层，水层用1，2-二氯乙烷提取三次每次50ml，合并有机层，有机层用水洗至中性，洗液用少量1，2-二氯乙烷提取一次，合并有机层，用饱和氯化钠溶液洗涤，再用无水硫酸钠干燥，得无水的桔黄色液体。
将液体浓缩回收1，2-二氯乙烷后，减压分馏，收采84～86℃/10mmHg馏份得百里酚纯品500g。放置后得结晶MP：49～51.5℃，D25℃0.9699，n201.5227。
H1MNRδppm：1.28501～1.28501(6HCH3-C-CH3)，3.30216(-CH3)
3.16918～3.22430(-CH-)，4.65913(ArH)
6.59585～6.59764(ArH)6.75714～6.77464(1H，ARH)
7.10609～7.12162(ArH AB峰)。
实施例2
香芹酚的合成
①柠檬烯亚硝酰氯制备
将40.8g柠檬烯(L-limonene)溶于40ml异丙醇中，将此溶液冷至10℃以下。将120ml浓盐酸溶于80ml异丙醇中，和20.7g亚硝酸钠饱和水溶液，通过滴液漏斗同时加入柠檬烯-异丙醇溶液中速度控制为反应温度低于10℃，搅拌15分钟，保温一小时过滤，用冷丁醇洗固体，得量为50g，再用氯仿-甲醇(1∶3)重结晶，熔点：103℃。
②香芹肟制备
40g柠檬烯的亚硝酰氯(粗品)，20ml二甲基甲酰胺(DMF)和125ml异丙醇置四颈瓶中回流30分钟，将反应夜倒入500ml冰水中，剧烈搅拌，在冰化了后过滤，固体用50ml冰水洗三次，用15ml冷异丙醇洗一次，干燥得27g，熔点66～69℃。
③香芹酮制备
取10gL-香芹肟和15％草酸水溶液100ml置四颈烧瓶中，搅拌回流2小时，接着水蒸气蒸馏，蒸馏液用乙醚提取，乙醚提取液用无水硫酸钠干燥，回收乙醚后，进行减压分馏，收集BP88～90℃/4mmHg馏分，得7g L-香芹酮。
④香芹酚制备
取15g L-香芹酮和40％稀硫酸47ml置四颈瓶中，加热回流、搅拌3小时，分去稀硫酸，有机层用水洗，洗去硫酸，水层合并，用乙醚提取，乙醚层与油层合并，再用水洗到中性，乙醚层用无水硫酸钠干燥，回收乙醚后，减压分镏收集RP：118～122℃/18mmHg，得11g纯香芹酚。d200.976，bp760237℃。长期低温放置固化，mp：0～3℃。
H1MNRδppm：1.18470～1.25054(6H，CH3-C-CH3)，3.30216(3H-CH3)，
3.16918-3.22430(-CH-)，4.65913(1H，ArH)
6.59585-6.59764(ArH)6.59585-6.59764(ArH)
6.75714-6.77464&7.10609-7.12162(ArH AB峰)。
实施例3
硫代碳酸二-百里酯制备
百里酚31.54g和氯仿300ml置四颈瓶中，搅拌下，温度控制在-6～-8℃滴加硫光气，再滴加氢氧化钠6g合含水硫化钠1.2g和81ml水的溶液，温度控制在-5～-7℃以下，滴毕，升至室温，继续搅拌2～4小时，用薄层层析控制反应终点，分出有机层，水层用氯仿提取两次，分去水层，氯仿层合并，用无水硫酸钠干燥，回收氯仿，残留液进行柱层分离。用1∶10的硅胶，以石油醚为展开剂，收集石油醚溶液，减压浓缩得棕红色粗品，再减压蒸镏，收集BP122～124℃/5mmHg的馏分，得精品30g，收率为50～51％。
D201.1285～1.1289，
UVmax(甲醇)202，203，204，248，
H1NMR：δPPM 1.24493～1.28009(12H，2CH3-C-CH3)，2.37001(6H，2AR-CH3)，
2.99897～3.05415(2H，2-CH-)，6.88962(2H，2ARH)，6.89135
～7.29762(4H 2 ARH AB峰)
实施例4
硫代碳酸二-香芹酯制备
香芹酚31.54g和氯仿300ml置四颈瓶中，搅拌下，温度控制在0℃滴加硫代光气10.3g再滴加氢氧化钠6g和含水硫化钠1.2g和81ml水的溶液，温度控制在-6～-8℃以下，滴毕，升至室温，继续搅拌2～4小时，用薄层层析控制反应终点，分出有机层，水层用氯仿提取两次，分去水层，氯仿层合并用无水硫酸钠干燥，回收氯仿，残留液，进行柱层分离。用1∶10的硅胶，以石油醚为展开，收集石油醚溶液，减压浓缩得深黄色粗品，减压蒸镏，收集BP：120～124℃/5mmHg的馏分，得精品32.4g，收率为52～53％。
D201.1229～1.1240，
uvmax(甲醇)201，204，203，
H1NMR：δPPM 1.23384～1.27862(12H，2CH3-C-CH3)，2.21434(6H，2 AR-CH3)，
2.89449～2.94976(2H，2-CH-)，6.92979～6.93315(2H，2 AR-H)，
7.0964～7.21989(4H，2 AR-H AB峰)。
实施例5
碳酸二-百里酯制备
百里酚31.54g和氯仿300ml置四颈瓶中，搅拌下，温度控制在0℃加三光气10.3g，再滴加氢氧化钠7.29g和含水硫化钠1.2g和81ml水的溶液，温度控制在-6～-9℃以下，滴毕，升至室温，继续搅拌2～4小时，用薄层层析控制反应终点，分出有机层，水层用氯仿提取两次，分去水层，氯仿层合并用无水硫酸钠干燥，回收氯仿，残留液进行柱层分离。用1∶10的硅胶，以石油醚为展开，收集石油醚溶液，回收石油醚，减压蒸馏，蒸去BP：80～90℃/5mmHg的低沸点物，得成品27～30g。放置一段时间，自然固化成白色晶形固体，mp：52～54℃收率为44.3～54％。
uvmax(甲醇)201，204，212，
H1NMR：δPPM 1.22384～1.26174(12H，2.CH3-C-CH3)，2.32473(6H，2 AR-CH3)，
3.14311～3.23493(2H，2，-CH-)，6.99892～7.02431(2H，2，
AR-H)，7.02757～7.21822(4H，2AR-H，AB峰)
实施例6
碳酸二-香芹酯制备
香芹酚31.45g和氯仿300ml置四颈瓶中，搅拌下，温度控制在0℃加三光气，再滴加氢氧化钠8.1g和含水硫化钠1.4g和81ml水的溶液，温度控制在-5～-7℃以下，滴毕，升至室温，继续搅拌6～8小时，用薄层层析控制反应终点，分出有机层，水层用氯仿提取两次，分去水层，氯仿层合并用无水硫酸钠干燥，回收氯仿，残留液进行柱层分离。用1∶50的硅胶，以石油醚为展开，收集石油醚溶液，回收石油醚，减压蒸镏，蒸去bp：80～90℃/5mmHg的低沸点，得成品27～30g，收率为44.3～54％。
uvmax(甲醇)202，204，205，
H1NMR：δPPM：1.22036～1.25046(12H，2.CH3-C-CH3)，2.27784(6H，2 AR-CH3)，
，2.8117～2.9410(2H，2-CH-)，7.01915(2H，2 AR-H)，7.02505～
7.22167(4H，AR-H，AB峰).
实施例7
草酸二-百里酯制备
将百里酚15.2g和草酰氯6.15g加入无水100ml石油醚中，冷却到0℃，在搅拌下，慢慢滴入吡啶7.7g和石油醚20ml混合液，温度控制在-4～-6℃，滴完后在室温搅拌4小时，用薄层层析控制终点。过滤除去盐酸吡啶，再用少量石油醚洗盐酸吡啶，合并有机层，用饱和碳酸钠洗，水洗至中性，石油醚层用无水硫酸钠干燥，蒸去石油醚，残留液冷却、结晶、过滤干燥，得粗品。经5-10倍量95％乙醇重结晶，得精品16g。Mp：54.5～57.5℃，收率18.28％。
VUmax(甲醇)：202，204，(nm)
H1NMR：δPPM：1.23523～1.24907(12H，2.CH3-C-CH3)，2.3574(6H，2 AR-CH3)，
306152.～3.11675(2H，2-CH-)，6.99723～6.999(2H，2ARH)，
7.09430～7.26561(4H，AR-H，AB峰).
实施例8
草酸二-香芹酯制备
将香芹酚15.2g和草酰氯6.15g加入无水100ml石油醚中，冷却到0℃，在搅拌下，慢慢滴入吡啶7.7g和石油醚20ml混合液，温度控制在-5～-7℃以下，滴完后在室温搅拌2～4小时，用薄层层析控制终点。过滤除去盐酸吡啶，再用少量石油醚洗盐酸吡啶，合并有机层，用饱和碳酸钠洗，水洗至中性，石油醚层用无水硫酸钠干燥，蒸去石油醚，残留液冷却、结晶、过滤干燥，得粗品。经5-10倍量95％乙醇重结晶，得精品16g。
Mp：59.0～61.5.℃。收率18.28％。
VUmax(甲醇)：202，204，(nm)
H1NMR：δPPM 1.2486～1.2625(12H，2.CH3-C-CH3)，2.2400(6H，2 AR-CH3)，
2.8736.～2.9423(2H，2-CH-)，7.0359～7.0388(2H，2 AR-H)，
7.0850～7.22467(4H，AR-H，AB峰)。
实施例9
5％预混剂制剂：
药品 5kg
95％乙醇 20L
玉米淀粉 95kg
将100℃烘干玉米淀粉置混合机中，开动混合机，再药品5kg溶于5 L95％乙醇溶液，慢慢加入混合机中，混合30分钟，待测定均匀度合格后，置烘箱中，60℃烘干，测定含量，合格后包装。所述药品是指硫代碳酸二-百里酯一硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)，以下实施例相同。
实施例10
5％溶液剂：
药品 5kg
95％乙醇 20L
10％吐温 1kg
蒸镏水加至 100kg
将5kg药品溶于20L的95％乙醇中，搅拌下加入10％吐温1kg，搅拌均匀后，再加蒸馏水至100kg，搅匀后，过滤，澄清溶液分装，成/100ml每瓶。
实施例11
5％包合物的：
药品 5kg
β-环糊精(药用) 20kg
蒸镏水 40kg
乙酸乙酯 5kg
玉米淀粉 75kg
将β-环糊精(药用)20kg和蒸镏水40kg混合加热至80℃，得透明的溶液，在搅拌下，加入药品乙酸乙酯溶液，进行充分搅拌后，冷却至室温，通冰盐水静止过夜，过滤，用水洗去未包合的β-环糊精，再用乙酸乙酯洗，干燥得包合物，再与淀粉混合成5％的混合物。
实施例12
5％的微囊制剂：
药品 5kg
PVP(药用) 95kg
将5kg药品和95kg PVP置微囊机中，加入一定量的溶剂，进行混合，测定均匀度，合格后干燥，除去溶剂，测定含量，合格后包装。用法与用量：
实施例13
抗球虫病药混饲：
将实施例9的5％的预混剂2Kg与1吨饲料混合均匀，成含100ppm的混合饲料供混饲用。
实施例14
抗菌药混饲：
将实施例9的5％的预混剂4Kg与1吨饲料混合均匀，成含200ppm的混合饲料供混饲用。
实施例15
抗球虫病药饮水：
将实施例10的5％的溶液剂2kg与1吨水混合均匀，配成含100ppm的饮水，供禽类饮水用。
实施例16
抗菌药饮用水
将实施例10的5％的溶液剂4kg与1吨水混合均匀，配成含200ppm的饮水，供禽类饮水用。
按照本发明提供的百里酚和/或香芹酚的酯类化合物的药物活性组合物毒理和药理特性
一、急性毒性试验
硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)对小鼠经口急性毒性死亡结果列表1
表1
组别 剂量(g/kg) 动物数 死亡总数 死亡率
1 3.180 10 10 100％
2 2.129 10 7 70％
3 1.418 10 3 30％
4 0.949 10 1 10％
5 0.647 10 0 0
根据表中结果可计算出硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)对小鼠的经口LD50为1.660g/kg， 95％可信限为1.387～1.986g/kg。由表1小鼠急性毒性试验结果表明，对小鼠的经口LD50为1.660g/kg，按国际急性毒性分级标准判断，硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)对小鼠的毒性级别为低毒，表明硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)毒性较低，安全范围大，故在兽医临床中可安全使用。
硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)对肉鸡经口急性毒性死亡结果列表2
表2
组别 剂量(g/kg) 动物数 死亡数 死亡率
1 12.128 10 10 100％
2 8.085 10 6 60％
3 5.390 10 5 50％
4 3.557 10 2 20％
5 2.372 10 1 10％
6 1.595 10 1 10％
7 1.067 10 0 0
根据表中结果可计算出硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)对肉鸡的经口LD50为5.395g/kg，95％可信限为4.285～6.792g/kg。
由表2肉鸡急性毒性试验结果表明，硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二香芹酯(3∶7)对肉鸡的经口LD50为5.395g/kg，按国际急性毒性分级标准(大鼠口服LD50数据)判断，硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)对肉鸡的毒性级别为实际无毒，表明硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)对鸡的毒性极低，安全范围大，故在兽医临床中可安全使用。
二、抗菌和抗球虫活性临床研究
1.《对雏鸡感染鸡白痢沙门氏菌标准菌株药效试验》
试验方法：
该研究使用7日龄雏鸡，各治疗组及感染对照组每只鸡胸部肌肉注射接种鸡白痢沙门氏菌菌液(109CFU/ml)，剂量根据预试结果确定为0.4-0.5ml/只。健康对照组接种同样量无菌生理盐水。
各治疗组鸡于肌注接种细菌后3小时，按表3给予混饲药物治疗，连续用药5天。健康对照、感染对照及给药结束后各组鸡给以空白不含药物全价饲料，饮水不限。
治疗用的化合物：硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)；碳酸二-百里酯和碳酸二-香芹酯(3∶7)，百里酚+香芹酚(3∶7)。六组用药组，剂量如表3；
临床观察：
停药后连续观察10天后剖检。接种鸡白痢沙门氏菌前后，认真观察鸡只的反应情况，并记录其临床症状，主要包括饮食欲、精神状况及粪便等，记录饲料消耗及死亡情况。对死亡鸡只进行剖检，并取肝进行细菌分离培养，革兰氏染色后镜检鉴定。
疗效评价指标：
死亡率：凡在试验期间，出现鸡白痢沙门氏菌感染的典型症状并死亡，尸体剖检，出现典型的病变，由肝脏分离出鸡白痢沙门氏菌，判定为感染死亡。根据死亡鸡只数计算各组的死亡率。
治愈率：凡在试验期间，经饮水给药后精神状况及食欲恢复正常，不出现白色稀便，粪便经分离培养未有沙门氏菌检出，判为治愈，根据治愈鸡，占整组试验鸡的比例计算治愈率。
增重：根据试验初和试验结束时各组鸡的体重，计算每只鸡增重，据此计算每组试验鸡，平均增重及标准差。
结果：
肌肉注射感染鸡白痢沙门氏菌的鸡，一般最初表现为厌食，嗜睡，姿态异常，拉白色稀粪，泄殖腔处，糊有白色粪便。肌注感染鸡白痢沙门氏菌后各组鸡只死亡时间见表4。取试验期间病死鸡肝脏接种于S.S琼脂培养基，37℃培养24小时后在S.S琼脂上长成无色半透明、圆形露珠样、针尖大小菌落。镜检为革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌。试验期间死亡鸡的剖检结果表明，多数鸡出现肝脏肿大，表面散在或密布灰白色针尖状或沙粒状坏死点，有的肺瘀血，肾脏稍肿，输尿管内有少量尿酸盐。
试验结束后，各组存活鸡只称重、全部剖杀，检查病变情况、分离病原菌。除感染对照组个别鸡只(3/9)仍有较明显鸡白痢沙门氏菌感染症状，如肝脏轻微肿大，质脆，表面散在少量灰白色针尖状或沙粒状坏死点，心包增厚，十二指肠轻微出血外，其他各治疗组鸡只均未发现肉眼可见的鸡白痢沙门氏菌感染症状。感染对照组取9只、其他组10只鸡取肝接种S.S琼脂培养基，进行细菌分离培养，37℃培养24小时后，除感染对照组(7/9)及香芹酚+百里酚低剂量组(2/10)部分鸡只分离到病原菌，并经革兰氏染色后镜检鉴定为鸡白痢沙门氏菌外，其他各治疗组均未分离到鸡白痢沙门氏菌。
统计各组鸡的死亡率、治愈率、增重结果见表5。
表3 各组试验鸡处理及体重
| 分组 | 数量(只) | 体重(X±SDg) | 处理 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)高剂量组 | 19 | 70.55±10.247 | 感染、200mg/kg混饲 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)低剂量组 | 19 | 68.46±10.220 | 感染、100mg/kg混饲 |
| 碳酸二-百里酯和碳酸二-香芹酯(3∶7)高剂量组 | 19 | 68.75±9.724 | 感染、200mg/kg混饲 |
| 碳酸二-百里酯和碳酸二-香芹酯(3∶7)低剂量组 | 19 | 69.39±11.542 | 感染、100mg/kg混饲 |
| 百里酚+香芹酚(3∶7)高剂量组 | 19 | 69.39±12.104 | 感染、200mg/kg混饲 |
| 百里酚+香芹酚(3∶7)低剂量组 | 19 | 69.32±12.135 | 感染、100mg/kg混饲 |
| 感染对照组 | 19 | 68.27±10.688 | 感染、不给药 |
| 健康对照组 | 19 | 70.00±12.065 | 不感染、不给药 |
表4 肌注感染鸡白痢沙门氏菌后各组鸡只死亡情况
| 组别 | 总数 | ＜24h | 24-48h | 48-72h | 72-96h | 96-120h | 120-144h | 144-168h | ＞168h |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)高剂量组 | 19 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)低剂量组 | 19 | 1 | 2 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 碳酸二-百里酯和碳酸二-香芹酯(3∶7)高剂量组 | 19 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 碳酸二-百里酯∶碳酸二-香芹酯(3∶7)低剂量组 | 19 | 1 | 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 百里酚+香芹酚(3∶7)高剂量组 | 19 | 2 | 1 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 百里酚+香芹酚(3∶7)低剂量组 | 19 | 2 | 2 | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 |
| 感染对照组 | 19 | 2 | 1 | 3 | 0 | 0 | 1 | 1 | 2 |
| 健康对照组 | 19 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
表5 药物对鸡白痢沙门氏菌感染疗效
| 组别 | 死亡数 | 死亡率(％) | 治愈率(％) | 15天增重(XISDg) |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)高剂量组 | 0 | 0 | 100 | 190.63±32.12 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)低剂量组 | 4 | 21.1 | 78.9 | 183.04±41.06 |
| 碳酸二-百里酯和碳酸二-香芹酯(3∶7)高剂量组 | 0 | 0 | 100 | 185.44±40.86 |
| 碳酸二-百里酯和碳酸和碳酸二香芹酯(3∶7)低剂量组 | 4 | 21.1 | 78.9 | 171.43±47.13 |
| 百里酚+香芹酚(3∶7)高剂量组 | 3 | 15.8 | 84.2 | 159.17±37.60 |
| 百里酚+香芹酚(3∶7)低剂量组 | 5 | 26.3 | 73.7 | 150.32±39.6 |
| 感染对照组 | 10 | 52.6 | - | 137.39±54.90 |
| 健康对照组 | 0 | 0.0 | - | 196.60±37.76 |
据表4、5可见，各药100、200mg/kg混饲均能较显著改善治愈鸡只的临床感染症状。
各药100、200mg/kg混饲均能较显著改善治愈鸡只的临床感染症状。
200mg/kg硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)、碳酸二-百里酯∶碳酸香芹酯(3∶7)高剂量混饲给药均能及时阻止由肌注鸡白痢沙门氏菌标准菌株诱发的雏鸡死亡，显著减少鸡白痢沙门氏菌标准株感染死亡率，具有显著疗效，显著优于100mg/kg混饲给药组，但各给药组鸡的临床症状及试验结束后剖检的病理变化均比感染对照组显著减轻，显著降低治愈鸡只鸡白痢沙门氏菌标准菌株分离率(P＜0.05)。
同时，硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸香芹酯(3∶7)及高、低剂量组增重均显著高于感染对照组(P＜0.05)，低于健康对照组，但增重与健康对照组比较无显著差异(P＞0.05)。硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)、碳酸二-百里酯和碳酸二-香芹酯(3∶7)及香芹酚+百里酚各给药组增重相当，无统计学意义上的差异(P＞0.05)。200mg/kg硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)、碳酸二-百里酯和碳酸二-香芹酯(3∶7)组混饲给药均能显著减少雏鸡感染鸡白痢沙门氏菌标准菌株导致的死亡率，显著改善鸡只的临床感染症状，降低治愈鸡只鸡白痢沙门氏菌标准菌株分离率，对肌肉注射沙门氏菌标准菌株诱发雏鸡白痢具有显著疗效，优于100mg/kg混饲给药组及香芹酚+百里酚100、200mg/kg混饲给药。
2.《对雏鸡感染耐药鸡白痢沙门氏菌药效试验》
治疗试验方法
用56只1日龄黄羽肉鸡，雌、雄兼有，由中国家禽研究所提供。用不含任何抗菌药物的全价饲料饲喂至7日龄。该群鸡试验前抽检，血清学检测禽鸡白痢沙门氏菌为阴性。试验前单羽称重，随机分组，共分4组，健康对照组20只，其他组每组18只。试验鸡分组见表6。
表6 各组试验鸡处理及体重
分组 数量 体重(X±SDg) 处理
(只)
硫代碳酸二-百里酯和硫 18 63.12±14.99 感染。200mg/kg混饲
代碳酸二-香芹酯(3∶7)
高剂量组200mg/kg
硫代碳酸二-百里酯和硫 18 62.94±6.65 感染。150mg/kg混饲
代碳酸二-香芹酯(3∶7)
低剂量组150mg/kg
感染对照组 18 61.97±11.70 感染。不给药
健康对照组 20 74.63±8.04 不感染。不给药
鸡白痢沙门氏菌临床分离株S997，由扬州大学兽医学院预防兽医学教研室提供。将斜面保存的鸡白痢沙门氏菌接种于S.S琼脂平板上，37℃培养16h后挑取单个菌落接种于LB培养基中，37℃震荡培养。使用前进行细菌计数，细菌浓度为6.4×109CFU/ml。
7日龄时各治疗组及感染对照组每只鸡胸部肌肉注射接种鸡白痢沙门氏菌菌液(6.4×109CFU/ml)，剂量为0.5ml/只。健康对照组接种无菌生理盐水。
各治疗组鸡于肌注接种细菌后2小时，按表6混饲给予药物治疗，连续用药5天。感染对照、健康对照鸡均给以空白不含药物全价饲料，饮水均不限。
临床观察
停药后连续观察7天后剖检。对死亡鸡只进行剖检，并取肝进行细菌分离培养，革兰氏染色后镜检鉴定。
疗效评价指标：同上述。
禽沙门氏菌病的药物对S997的敏感性试验
以纸片法测定十四种临床常用于控制禽沙门氏菌病的药物对S997的敏感性。结果表明，鸡白痢沙门氏菌临床分离株S997对各种药物均显示了不同程度的敏感性。结果见表7。
表7 鸡白痢沙门氏菌临床分离株S997对十四种抗菌药的药敏试验结果(抑菌圈直
径：mm)
药物 鸡白痢沙门氏菌临床分离株S997
庆大霉素 21.50
卡那霉素 20.08
阿米卡星 19.00
新霉素 18.21
氧氟沙星 0
环丙沙星 0
诺氟沙星 0
多西环素 11.05
四环素 8.44
氯霉素 7.23
阿莫西林 14.52
氨苄西林 14.28
痢特灵 19.27
磺胺甲基异恶唑 0
肌肉注射感染鸡白痢沙门氏菌S997的鸡，一般最初表现为厌食，嗜睡，姿态异常，拉白色稀粪，泄殖腔处糊有白色粪便。取试验期间病死鸡肝脏接种于S.S琼脂培养基，37℃培养24小时后在S.S琼脂上长成无色半透明、圆形露珠样、针尖大小菌落。镜检为革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌。试验期间死亡鸡的剖检结果表明，多数鸡肝脏表面散有灰白色针尖状坏死点，输尿管内有少量尿酸盐。
试验结束后，各组存活鸡只称重、全部剖杀，检查病变情况、分离病原菌(表8)。感染对照组个别鸡只(5/12)仍有较明显鸡白痢沙门氏菌感染症状，其他各治疗组鸡只均未发现肉眼可见的鸡白痢沙门氏菌感染症状。每组取10只鸡取肝接种S.S琼脂培养基，进行细菌分离培养，37℃培养24小时后，除感染对照组(5/12)部分鸡只分离到病原菌，并经革兰氏染色后镜检鉴定为鸡白痢沙门氏菌外，其他治疗组均未分离到鸡白痢沙门氏菌。
表8 试验结束后各组存活鸡只病变及分离病原菌情况
组别 剖检数 肝脏病变 十二指肠出 细菌分离阳性
血
硫代碳酸二-百里酯和硫 18 0 0 0/10
代碳酸二-香芹酯(3∶7)
高剂量组200mg/kg
硫代碳酸二-百里酯和硫 18 0 0 0/10
代碳酸二-香芹酯(3∶7)
低剂量组150mg/kg
感染对照组 12 2 3 5/10
健康对照组 20 0 0 0/10
表9 对耐药沙门氏菌诱发鸡白痢的疗效
死亡数 死亡率 治愈率 12天增重
组别
(％) (％) (X±SDg)
硫代碳酸二-百里酯和 0 0.0 100 130.49±23.97
硫代碳酸二-香芹酯
(3∶7)高剂量组200
mg/kg
硫代碳酸二-百里酯和 0 0.0 100 129.17±16.65
硫代碳酸二-香芹酯
(3∶7)低剂量组150
mg/kg
感染对照组 6 33.3 - 101.45±26.12
健康对照组 0 0.0 - 137.68±16.98
150、200mg/kg混饲给药均能显著减少雏鸡感染耐药鸡白痢沙门氏菌导致的死亡率(表9)，显著改善鸡只的临床感染症状，降低治愈鸡只鸡白痢沙门氏菌分离率，对肌肉注射人工感染雏鸡白痢具有显著疗效。
3.《对耐药大肠杆菌O78感染雏鸡的药效试验》
扬州大学兽医学院对耐药大肠杆菌感染雏鸡的药效试验，用140只1日龄三黄肉鸡，雌、雄兼有。由中国家禽研究所提供。用不含任何抗菌药物的全价饲料饲喂至7日龄。试验前单羽称重，随机分组每组20只。禽大肠杆菌O78，均经相应的生化鉴定后确定为导致鸡大肠杆菌病的致病性菌株(见表10)。将斜面保存的大肠杆菌接种于麦康凯琼脂平板上，37℃培养24h后挑取单个菌落接种于普通肉汤培养基中，37℃震荡培养。使用前以麦康凯琼脂平板进行细菌计数，细菌浓度为109CFU]/Ml.经注射感染大肠杆菌的鸡，一般最初表现为厌食，羽毛松乱、双翅下垂、精神沉郁，嗜睡，畏寒，呼吸困难，姿态异常，拉白色稀粪。肌注感染大肠杆菌后6小时开始死亡，各组鸡只死亡时间见表11。取病死鸡肝脏接种于麦康凯琼脂培养基，37℃培养16小时后在麦康凯琼脂上长成边缘整齐、稍凸起、表面光滑湿润，直径1.5-2毫米的粉红色菌落。取菌涂片、革兰氏染色、镜检见两端钝圆、短粗的阴性菌。
试验期间死亡鸡的剖检结果表明，多数鸡出现大肠杆菌性急性败血症症状：肝脏呈绿色，胸肌充血，肝脏边缘钝圆，个别还有各器官呈败血症变化；气囊壁浑浊、增厚，内容物黄绿色、有的混有干酪样物。个别心脏、肝脏有纤维素性渗出物，心包膜混浊，有的形成纤维素性包膜，也可见腹膜炎等病变。综上所述诊断为鸡大肠杆菌病。
试验结束后，各组存活鸡只称重、全部剖杀，检查病变情况、分离病原菌(表12)。除感染对照组个别鸡只(5/11)仍有较明显大肠杆菌感染症状外，其他各治疗组鸡只均未发现肉眼可见的大肠杆菌感染症状。每组取10只鸡无菌取肝接种麦康凯琼脂培养基，进行细菌分离培养，37℃培养24小时后，除感染对照组(5/11)部分鸡只分离到病原菌，并经革兰氏染色后镜检鉴定为大肠杆菌外，其他各治疗组(硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7))均未分离到大肠杆菌。
表10 三株大肠杆菌对十二种抗菌药的药敏试验结果(抑菌圈直径：mm)
药物 禽大肠杆菌O78 大肠杆菌-1 大肠杆菌-2
庆大霉素 24.04 0 0
链霉素 23.90 9.08 14.78
卡那霉素 23.24 0 0
阿米卡星 24.12 0 0
壮观霉素 21.38 17.26 16.00
环丙沙星 25.06 0 13.52
诺氟沙星 23.36 0 12.00
多西环素 18.67 0 7.64
氯霉素 25.54 0 19.92
阿莫西林 19.22 0 0
痢特灵 17.18 11.36 16.08
复方新诺明 18.50 0 0
统计各组鸡的死亡率、治愈率、增重结果见表13。
表11 肌注感染大肠杆菌后各组鸡只死亡情况
组别 总＜24h 24-48 48-72 72-96 96-12 120-14 144-16 ＞168h
数
h h h 0h 4h 8h
硫代碳酸二-百里 20 0 0 0 0 0 0 0 0
酯和硫代碳酸二-
香芹酯(3∶7)
高剂量(200
mg/kg)
硫代碳酸二-百里 20 0 0 0 0 0 0 0 0
酯和硫代碳酸二-
香芹酯(3∶7)中
剂量组(150
mg/kg)
硫代碳酸二-百里 20 0 0 0 0 0 0 1 0
酯和硫代碳酸二-
香芹酯(3∶7)低
剂量组(100
mg/kg)
诺氟沙星150 20 1 3 1 1 0 0 0 0
mg/kg
多西环素对照组 20 2 1 0 1 1 0 0 0
150mg/kg
感染对照组 20 4 3 1 0 1 0 0 0
健康对照组 20 0 0 0 0 0 0 0 0
表12 试验结束后各组存活鸡只病变及分离病原菌情况
组别 剖检数 肝脏病变 心包增厚 气囊炎 细菌分离阳
性
硫代碳酸二-百里酯和硫 20 0 0 0 0/20
代碳酸二-香芹酯(3∶7)
高剂量组(200mg/kg)
硫代碳酸二-百里酯和硫 20 0 0 1 0/20
代碳酸二-香芹酯(3∶7)
中剂量组(150mg/kg)
硫代碳酸二-百里酯和硫 19 0 0 1 0/19
代碳酸二-香芹酯(3∶7)
低剂量组(100mg/kg)
诺氟沙星对照组 14 0 0 4 2/14
(150mg/kg)
多西环素对照组 15 0 0 4 2/15
(150mg/kg)
感染对照组 11 5 5 10 5/11
健康对照组 20 0 0 0 0/20
统计各组鸡的死亡率、治愈率、增重结果见表13。
表13 对鸡的耐药大肠杆菌治疗效果
死亡数 死亡率 治愈率 12天增重
组别
(％) (％) (X±SDg)
硫代碳酸二-百里酯和 0 0.0 100.0 133.51±22.24
硫代碳酸二-香芹酯
(3∶7)
高剂量组(200mg/kg)
硫代碳酸二-百里酯和 0 0.0 100.0 131.12±27.39
硫代碳酸二-香芹酯
(3∶7)
中剂量组(150mg/kg)
硫代碳酸二-百里酯和 1 5.0 95.0 124.12±33.43
硫代碳酸二-香芹酯
(3∶7)
低剂量组(100mg/kg)
对照组诺氟沙星 6 30.0 70.0 119.53±25.86
(150mg/kg)
多西环素对照组 5 25.0 75.0 119.45±25.51
(150mg/kg)
感染对照组 9 45.0 - 95.66±22.03
健康对照组 0 0.0 - 137.68±16.98
据表11-13可见硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)临床以100-200mg/kg混饲给药均能较显著改善鸡只的临床感染症状，同时还能显著降低治愈鸡只大肠杆菌分离率(P＜0.05)。均能及时阻止由肌注致病性耐药大肠杆菌引起的雏鸡急性死亡，显著减少大肠杆菌感染死亡率，并显著改善由大肠杆菌感染引起的各种临床症状，对致病性耐药大肠杆菌引起的感染具有显著疗效，显著优于诺氟沙星及多西环素150mg/kg混饲给药组。
试验结束后剖检的病理变化均比感染对照组显著减轻(P＜0.05)。增重均显著高于感染对照组及诺氟沙星150mg/kg、多西环素150mg/kg混饲给药组(P＜0.05)，而与健康对照组比较无显著差异(P＞0.05)。而高、中剂量组增重相当，无统计学意义上的差异(P＞0.05)。
由此可见以硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)100-200mg/kg混饲给药，能显著减少雏鸡感染对多种抗菌药耐药大肠杆菌导致的死亡率，显著改善鸡只的临床感染症状，降低治愈鸡只大肠杆菌分离率，对肌肉注射人工感染雏鸡大肠杆菌病具有显著疗效，显著优于菌感染引起的各种临床症状，对致病性耐药大肠杆菌引起的感染具有显著疗效，显著优于诺氟沙星、多西环素150mg/kg混饲给药。
4.《抗鸡球虫活性研究》
用柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)感染17日龄鸡，每组20只，除不感染不给药组外，其他各组中每只鸡经嗉囊接种孢子化卵囊11×104个，接种12h后，开始给药，给药七天数，剖解观察实验结果表14。
表14各组的抗球虫指数
| 组别 | 剂量×10-6 | 相对增重率(％) | 存活率(％) | 病变值0-40 | 卵囊值0-40 | ACI |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7) | 50 | 81.86 | 80 | 28 | 1 | 132.86 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7) | 100 | 94.78 | 95 | 28.4 | 1 | 160.38 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7) | 150 | 92.93 | 90 | 26.7 | 1 | 155.23 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶9) | 50 | 90.35 | 65 | 35.7 | 1 | 118.65 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶9) | 100 | 77.72 | 70 | 36.7 | 0 | 111.02 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶9) | 150 | 98.75 | 80 | 20.0 | 1 | 157.75 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酸酯(1∶1) | 50 | 89.90 | 55 | 39.2 | 20 | 85.70 |
| 硫代碳酸二-百里酸酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶1) | 100 | 76.10 | 60 | 32.3 | 20 | 83.80 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶1) | 150 | 94.16 | 80 | 23.8 | 10 | 140.36 |
| 妥曲珠利 | 25 | 97.16 | 95 | 22.5 | 0 | 169.66 |
| 地克珠利 | 1 | 86.68 | 70 | 34.4 | 1 | 121.28 |
| 阴性对照 | - | 100.00 | 100 | 0.00 | 0 | 200.00 |
| 感染对照 | - | 50.66 | 55 | 40.0 | 40 | 25.66 |
结果表明：各剂量组中，硫代碳酸二-百里酯∶硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)100×10-6组ACI为160.38；高于其他两个剂量组；硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶9)各剂量组中，150×10-6组ACI为157.75，都好于其他两个剂量组；硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶1)各剂量组中，150×10-6ACI为140.36，好于其他两个剂量组；从百里酚和香芹酚的前体化合物来看，硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)100×10-6组100×10-6组最好。妥曲珠利25×10-6ACI为169.66，在本次试验中最高；地克珠利1×10-6组ACI 121.28，低于硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)100×10-6组100×10-6组。
感染后第20天杀剩余的鸡只，增重率，相对增重率，盲肠病变记分如表15：
表15
| 组别 | 剂量×10-6 | 增重率(％) | 相对增重率(％) | 盲肠病变记分(0～4) |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸香芹酯(3∶7) | 50 | 257 | 85.10 | 1.33 |
| 硫代碳酸二-百里酯-硫代碳酸二-香芹酯(3∶7) | 100 | 266 | 88.08 | 0.67 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7) | 150 | 225 | 74.50 | 0.50 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶9) | 50 | 239 | 79.15 | 1.33 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶9) | 100 | 244 | 80.79 | 0.67 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶9) | 150 | 265 | 87.75 | 0.50 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶1) | 50 | 161 | 55.00 | 1.67 |
| 硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶1) | 100 | 196 | 65.00 | 1.00 |
| 硫代碳酸百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶1) | 150 | 224 | 74.17 | 0.67 |
| 妥曲珠利 | 25 | 230 | 76.16 | 0.00 |
| 地克珠利 | 1 | 228 | 75.50 | 0.80 |
| 阴性对照 | - | 302 | 100 | 0.00 |
| 感染对照 | - | 151 | 50 | 2.00 |
结果表明：硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)各剂量组中，100×10-6组增重率最高为266％；略高于其他两个剂量组，从盲肠的恢复状况来看150×10-6组较好；在硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶9)各剂量组相对增重率为244％，好于其他两个剂量组，从盲肠的恢复状况来看150×10-6组较好；在硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶1)各剂量组中，150×10-6组增重率为224％，好于其他两个剂量组，从盲肠的恢复状况来看150×10-6组较好；妥曲珠利25×10-6组增重率为230％，低于硫代碳酸二-百里基酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)150×10-6组，硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)100×10-6组，高于硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二香芹酯(1∶1)150×10-6组，其盲肠的恢复状况最好；地克珠利1×10-6组增重率228％，低于硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶1)，高于硫代碳酸二-百里基酯和硫代碳酸二-香芹酯(1∶9)150×10-6组和100×10-6组，从盲肠的恢复状况来看没有硫代碳酸二百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)的好。
综上所述，试验感染的球虫卵囊数为每只鸡11×104个，由于球虫的毒力较强，感染对照的死亡率达到45％，感染比较严重，而且鸡群出现死亡的时间为感染后第5天，从总体来看，虽然每组的ACI值不高，但是相对于感染的严重程度来说，治疗效果还是很明显的。在百里酚和香芹酚的前体化合物中相比较，硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)较好；死亡率与妥曲珠利1×10-6的死亡率相同，同时两者的ACI分别为160.38、169.66，相差不是很大，由于妥曲珠利饮水给药吸收要较拌料好；硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯(3∶7)100×10-6组的死亡率低于地克珠利组，增重率明显高于地克珠利组，可能硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯是牛至油的前体化合物具有抗菌、促生长作用有关，ACI明显的高于地克珠利组别。
所以，百里酚和/或香芹的酯类化合物，优选为硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯是一种天然牛至油有效成份：百里酚和香芹酚的前体化合物，其疗效比天然牛至油好，毒性也极小，甚至可说无毒。它是新一代抗菌(特别对耐药菌株)和抗球虫的新兽药，可以代替或部份代替抗生素和现有的抗球虫药。
Claims (10)
1、一种通式(1)的百里酚和/或香芹酚的酯类化合物
其中R1是甲基，R2是异丙基，R1和R2
互为对位；-O-(X)-O-与R1
为邻位或与R2为邻位，X＝-CO-，-CS-，
-CO-(CH2)n-CO-，其中n＝0，1，2。
2、根据权利要求1的酯类化合物，其特征在于所述酯类化合物为碳酸二-百里酯、碳酸二-香芹酯、硫代碳酸二-百里酯、硫代碳酸二-香芹酯、草酸二-百里酯、草酸二-香芹酯、碳酸百里香芹酯、硫代碳酸百里香芹酯、草酸百里香芹酯、丙二酸二-百里酯、丙二酸二-香芹酯、丙二酸百里香芹酯、丁二酸二-百里酯、丁二酸二-香芹酯或丁二酸百里香芹酯。
3、一种权利要求1或2的酯类化合物的制备方法包括百里酚和/或香芹酚的硫代碳酸酯或碳酸酯制备：
①将百里酚和/或香芹酚溶于有机溶剂A中，溶解后，在搅拌下通加入光气或三光气，或硫代光气；②于0～-10℃滴入脱氢卤酸剂混合液，加完后再在室温搅拌2～4时；③反应毕后滤去固体物，用少量有机溶剂洗固体物，合并有机层，用饱和食盐水洗多次，再用无水硫酸钠干燥，回收有机溶剂残留物为液体用减压蒸馏或分馏，或为固体用有机溶剂B重结晶，得纯品；
或二元酸酯制备：
①将百里酚和/或香芹溶于有机溶剂A中，溶解后在搅拌下加入二元酸酰氯；②于0～-10℃下，滴入脱氢卤酸剂的混合液，加完后，在室温搅拌2～4时；③反应毕后滤去固体物，用少量有机溶剂洗固体物，合并有机层，用饱和食盐水洗多次，再用无水硫酸钠干燥，回收有机溶剂残留物为液体用减压蒸馏或分馏，或为固体用有机溶剂B重结晶，得纯品。
4、根据权利要求3的酯类化合物的制备方法，其特征在于所述百里酚和/或香芹酚∶光气或硫代光气∶脱氢卤酸剂的摩尔比为2.1∶1∶3或百里酚和/或香芹酚∶三光气∶脱氢卤酸剂的摩尔比为6.3∶1∶7。
5、根据权利要求3的酯类化合物的制备方法，其特征在于所述有机溶剂A为乙醚、石油醚、环己烷、正己烷、三氯甲烷或二氯甲烷；所述脱氢卤酸剂为有机碱及无机碱；所述重结晶有机溶剂B为乙酸乙酯、丙酮或甲醇和95％乙醇。
6、根据权利要求5的酯类化合物的制备方法，其特征在于所述有机碱为吡啶或三乙胺；所述无机碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钠-硫化钠混合液或碳酸钾。
7、一种药物活性组合物，包括下列通式(1)的酯类化合物及赋形剂或添加剂，
.其中R1为甲基，R2为异丙基，R1和R2
互为对位；-O-(X)-O-与R1为
邻位或与R2为邻位；X＝-CO-，-CS-，-CO-(CH2)n-CO-，
其中n＝0，1，2。
8、根据权利要求7的药物活性组合物，其特征在于所述通式(1)的酯类化合物为碳酸二-百里酯、碳酸二-香芹酯、硫代碳酸二-百里酯、硫代碳酸二-香芹酯、草酸二-百里酯、草酸二-香芹酯、丙二酸二-百里酯、丙二酸二-香芹酯、丁二酸二-百里酯、丁二酸二-香芹酯、碳酸百里香芹酯、硫代碳酸百里香芹酯、草酸百里香芹酯、丙二酸百里香芹酯或丁二酸百里香芹酯。
9、根据权利要求7或8的药物活性组合物，其特征在于硫代碳酸二-百里酯和硫代碳酸二-香芹酯比为3∶7；碳酸二-百里酯和碳酸二-香芹酯的比为3∶7；草酸二-百里酯和草酸二-香芹酯比为3∶7。
10、根据权利要求7的药物活性组合物，其特征在于所述药物活性组合物包括预混剂制剂、溶液剂、包合物剂或微囊制剂、抗球虫病药或抗菌药混饲、抗球虫病药或抗菌药饮用水。
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