CN1654659A - 一种单子叶植物胆碱单加氧酶基因及其所编码的蛋白质 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种单子叶植物胆碱单加氧酶基因及其所编码的蛋白质，属于基因工程领域。水稻胆碱单加氧酶基因OsCMO的cDNA序列SEQ IDNO.1及其编码的氨基酸序列SEQ ID NO.2。本发明基因为单子叶植物中的首次报道，参与水稻甜菜碱的生物合成，mRNA表达分析表明该基因受高盐的诱导。转基因实验证明该基因的超量表达提高了烟草的耐盐性。OsCMO可作为目的基因导入植物，提高植物耐盐性。
Description
技术领域
本发明公开了一种单子叶植物胆碱单加氧酶基因及其所编码的蛋白质，属于基因工程领域，具体地讲涉及植物中编码甜菜碱合成途径的关键酶胆碱单加氧酶及其编码基因。
技术背景
植物在干旱、低温、高盐等胁迫条件下通过积累脯氨酸、甜菜碱、甘露醇等物质进行渗透调节。甜菜碱是细菌以及动植物生物体中起无毒渗透保护作用最主要的细胞相容性物质。分离和克隆甜菜碱合成途径中的相关基因并进行遗传转化，对提高植物抵御干旱、低温和高盐等非生物胁迫，保证粮食安全具有重要的意义。近年来有关甜菜碱生物合成及基因工程应用方面取得了较大的进展。甜菜碱是以胆碱为底物经过两步催化生成即胆碱——甜菜碱醛——甜菜碱，胆碱单加氧酶在负责催化第一步反应。胆碱单加氧酶为植物中所特有，1995年Burnet等才从菠菜叶片中纯化此酶，直到1997年在菠菜中首次克隆了编码单碱单加氧酶的基因，之后又在雁来红(Ling et al，2001)、山菠菜(沈义国等，2001)、甜菜(Russell et al，1998)克隆了此基因。
因为目前只在藜科和苋科植物中报道了胆碱单加氧酶基因，而且水稻、烟草、土豆等植物不能积累甜菜碱，很多研究人员认为其他植物尤其是水稻等单子叶植物中可能不存在胆碱单加氧酶基因(Nakamura et al，1997)。
发明内容
技术问题 本发明的目的在于公开一种单子叶植物胆碱单加氧酶基因及其所编码的蛋白质，该基因来自水稻，可作为目的基因导入植物，提高植物耐盐性，进行植物品种改良。
技术方案
本发明单子叶植物胆碱单加氧酶(OsCMO)基因，其核苷酸序列SEQ ID NO.1为：
GTGACTCGCCTCCTCTCTCCGATTCCCACGCCTCTGCGACTCGTGCGCCGGCGCCGGCGAT
GGCGATCGCGCAATCCGCGGCCGCGGTATCATCCGCCGCAAGAGCCTCCCGCCCAAGGCC
GACCCGCGCCGCGCCGCGCCGCATCGCCGCCTCCGCCTCCTCCGTGGCGCCGCCGGAGCC
CGCCGCGCGGCGCCTCGTGGCGGCGTTCGACCCGGCGGTCCCGCTGGCCTCCGCCGTGAC
GCCGCCGAGCGGGTGGTACACCGACCCGGACTTTCTCCGGCTCGAGCTCGACCGCGTCTT
CCTCCGCGGGTGGCAGGCTGTTGGCCACATATGGCAAGTCAAGAACCCAAATGACTACTT
CACAGGAAGACTTGGAAATGTAGAATTTGTCATATGTCGGGATGCAAATGGAGAACTCCAT
GCTTTTCACAACGTGTGTCGCCATCACGCCTCACTCCTTGCATGTGGAAGTGGTCAGAAG
ACTTGCTTCCAGTGCCCTTATCATGGCTGGACATATGGACTGGATGGAGTCCTCCTAAAAG
CCGCACAAATATCAGGAATCAAGAACTTCAACAAAAATGATTTTGGTCTCATTCCTATTAA
AGTGGCTACATGGGGGCCTTTTGTATTGGCCAAATTTGATAGTGGTTTCTCTCAAGAAACT
GCTGATAACACAGTTGGAGATGAATGGCTGGGTAGTGCTTCGGATCTGCTGAGTAGAAAT
GGCATTGACACCTCGTTGCCTCATATTTGCAGGCGAGAATATATAATTGAATGTAATTGGAA
GGTCTTTTGTGACAACTATCTGGATGGTGGCTATCATGTTCCATATGCGCATGGAACCCTAG
CATCTGGTCTACAGCTTCAATCCTACGAAACACATACATATGAAAGAGTTAGTGTTCAAAG
GTGTGAAAGTGTCCAAGCAGAACAAAATGATTTCGATCGCTTAGGGACAAAAGCTATCTA
TGCTTTTGTTTATCCAAACTTTATGATTAACAGGTATGGTCCATGGATGGACACTAATCTAG
TGGTCCCATTGGATGCAACCAGATGTAAAGTGATATTTGATTATTTCCTTGACAAGTCTCTT
ATGGACGACCAGAATTTTATTGAGAGCAGCTTAAAAGACAGCGAACAAGTACAGATGGAA
GACATTGCACTTTGCGAAGGAGTTCAGCGGGGCCTGGAATCACCAGCCTACAGTGTGGGA
AGATATGCACCATCAGTGGAGATGGCCATGCACCACTTCCACTGCCTCTTACATGCCAATC
TTAGTGGTGACTGGTGAGTGATTTCTATGTGCATATCTGATTGGATTTATGCATCACAAAAT
TTATGTGCATATCTGCAGTATTTTCATTACTTGTACATTGTAAAGTGAAAACACATAGGGAT
GTAATCAAACTGGTTCTTCAGTCTTCACATTTTGTCGAAAAAAAAAAAAAAA
上述的单子叶植物胆碱单加氧酶(OsCMO)基因来自水稻，其编码的蛋白质，来自水稻(Oryza sativa)，它具有如下所示的氨基酸序列SEQ ID NO.2：
MAIAQSAAAVSSAARASRPRPTRAAPRRIAASASSVAPPEPAARRLVAAFDPAVPLASAVTPPS
GWYTDPDFLRLELDRVFLRGWQAVGHIWQVKNPNDYFTGRLGNVEFVICRDANGELHAFH
NVCRHHASLLACGSGQKTCFQCPYHGWTYGLDGVLLKAAQISGIKNFNKNDFGLIPIKVATW
GPFVLAKFDSGFSQETADNTVGDEWLGSASDLLSRNGIDTSLPHICRREYIIECNWKVFCDNY
LDGGYHVPYAHGTLASGLQLQSYETHTYERVSVQRCESVQAEQNDFDRLGTKAIYAFVYPNF
MINRYGPWMDTNLVVPLDATRCKVIFDYFLDKSLMDDQNFIESSLKDSEQVQMEDIALCEGV
QRGLESPAYSVGRYAPSVEMAMHHFHCLLHANLSGDW
有益效果
1、本发明公开了一种单子叶植物胆碱单加氧酶基因(OsCMO基因)及其所编码的蛋白质。胆碱单加氧酶基因为单子叶植物中的首次报道，有望应用于单子叶植物的遗传改良。该基因来自水稻(Oryza sativa L.)，可作为目的基因导入植物，提高植物耐盐性，以进行植物品种改良。所编码的蛋白质具有耐盐功能。
2、本发明人提供的OsCMO基因功能是参予甜菜碱的生物合成。mRNA表达分析表明OsCMO基因无论在水稻幼苗的地上部还是地下部都在高盐(140mM NaCl)诱导条件下表达增强。
3、本发明的OsCMO基因来自水稻，具有适合于水稻等单子叶植物表达的优化密码子，其基因工程受体植物除了双子叶植物，如大豆、棉花、烟草等之外更加适合于水稻、玉米、小麦等单子叶植物。
4、利用本发明OsCMO基因作为目的基因构建植物表达载体，其中可用任何一种启动子例如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、Ubiquitin启动子或其它启动子，该表达载体中必要时可包括增强子，不论是转录增强子或翻译增强子。为了简化转化细胞的鉴定可使用选择性标记包括对抗生素抗性的酶，也可利用颜色变化(例如B-葡糖醛酸糖苷酶GUS)或发光(例如荧光素酶)来识别的化合物的酶类，也可用无标记选择。所用的表达载体可使用Ti质粒，Ri质粒，植物病毒载体等。转化方法可用经农杆菌介导法、基因枪法、花粉管通道法或其它方法转化植物。
具体实施方式
实施例1
选用水稻品种“韭菜青”(为太湖流域粳稻地方品种，为强耐盐品种)，待水稻幼苗长至3叶期后，用140mM NaCl进行处理，12小时后立即取叶片置于液氮中冷冻保存。取部分叶片，用研钵研碎，加入盛有裂解液的1.5mL EP管，充分振荡后，再移入玻璃匀浆器内。匀浆后移至1.5mL EP管中，抽提总RNA(TRIzolReagents，购自Invitrogen，USA)。用甲醛变性胶电泳鉴定总RNA质量，然后在分光光度计上测定RNA含量。根据菠菜胆碱单加氧酶基因的氨基酸序列检索水稻基因组数据库，经过EST比较和序列拼接得到440bp的水稻胆碱单加氧酶基因的片段序列，根据此序列分别设计5’和3’RACE引物(GSP5：TAGGAGGACTCCATCCAGTCCA和GSP3：GTGTGAAAGTGTCCAAGCAGAA)，采用SMART-RACE方法(购自Clonetech，USA)进行cDNA全长克隆，最终将RACE产物进行克隆、测序以及拼接获得了1451bp的水稻胆碱单加氧酶基因OsCMO1的cDNA序列(见SEQ ID NO.1)。
BLAST的结果及分子建模结果证明从水稻中新得到的基因确为一个编码胆碱单加氧酶基因，因为该基因编码产物为甜菜碱合成途径中的限速酶，推测此基因具有抗逆功能。根据实施例1获得的水稻胆碱单加氧酶基因的全长编码序列，进一步设计两端引物(P1：GATGGCGATCGCGCAATCCG，P2：AGAAATCACTCACCAGTCAC)以总RNA为模板，经反转录合成cDNA第一链后，用高保真Tag酶(购自Roche)进行PCR扩增。PCR程序如下：94℃预变性4分钟，94℃变性30s，56℃复性1min，72℃延伸1.5min，33个循环后，72℃5min。经过普通Tag酶(购自鼎国公司，北京)加A后克隆至pGEM-T载体(购自Promega)。委托上海生工公司测序后获得具有完整编码区的水稻胆碱单加氧酶基因OsCMO的cDNA序列。
实施例2
上述获得水稻胆碱单加氧酶基因OsCMO的cDNA序列SEQ ID NO.1其编码的蛋白质，来自水稻(Oryza sativa)，它氨基酸序列为SEQ ID NO.2，经在数据库中比较它的编码蛋白与菠菜、山菠菜、雁来红和甜菜胆碱单加氧酶的氨基酸相似性分别为50％、52％、51％、51％。(见SEQ ID NO.2)。OsCMO的N端的信号肽序列表明OsCMO定位于质体基质中，与菠菜胆碱单加氧酶最初在叶绿体中被分离的结果一致。以OsCMO搜索GenBank中现有水稻基因组(包括粳稻和籼稻)数据库，发现OsCMO为单拷贝基因。
实施例3
用实例1中设计的OsCMO两端引物P1、P2进行半定量RT-PCR分析水稻幼苗地上部与地下部的表达，结果表明，水稻幼苗地上部和地下部OsCMO的表达在140mM NaCl处理下6h显著增强，经灰度扫描分析，其mRNA表达量为对照的3倍，处理24h后有所减弱。说明OsCMO的表达与盐胁迫有关。
实验例4
根据实施例1得到的OsCMO的全长序列，设计扩增出完整编码阅读框的引物，并在上游和下游引物上分别引入限制性内切酶位点(这可视选用的载体而定，如插入pBI121载体的BamHI位点则设计引物为AGGATCCGATGGCGATCGCGCAATCCG，AGGATCCAGAAATCACTCACCAGTCAC)，以便构建表达载体。以实施例1中获得的扩增产物为模板，经PCR扩增后，将OsCMO的cDNA克隆至中间载体(如pGEM-T，promega)，进一步克隆到双元表达载体(如pBI121和改进的pCAMBIA1301)，在保证阅读框架正确的前提下鉴定好的表达载体，再将其转入农杆菌中，转入烟草或水稻。对获得的转基因植株进行PCR，Southern杂交以及RT-PCR验证后进行植物的耐盐性评价。将转基因植株的T2代和对照植株进行200mM NaCl的持续处理，观察他们的生长表现，结果表明转基因烟草在1.2％NaCl处理3天后能够在正常生长条件下恢复，而对照则死亡。
上述实施例表明本发明中克隆的单子叶植物来源的胆碱单加氧酶基因OsCMO，与菠菜中的同类蛋白相似性仅为51％，此类基因在单子叶植物或不能积累甜菜碱植物中的功能迄今未经描述。实验例3、4表明该基因与植物的盐胁迫密切相关。此类基因由于来源于单子叶植物，具有单子叶植物优化的密码子，与双子叶植物来源的胆碱单加氧酶基因相比，更加适合于水稻、玉米、小麦等单子叶作物的抗逆性遗传改良。
本发明人将从单子叶植物水稻(Oryza sativa L.)中克隆了一个cDNA，编码胆碱单加氧酶基因，命名为OsCMO。经在数据库中比较它的编码蛋白与菠菜、山菠菜、雁来红和甜菜胆碱单加氧酶的氨基酸相似性分别为50％、52％、51％、51％。OsCMO cDNA全长1451bp，含有1230bp的ORF，编码含410个氨基酸的蛋白质，5’-UTR为59bp，3’-UTR为159bp。OsCMO编码蛋白的N端信号肽序列表明其定位于叶绿体基质。
mRNA表达分析表明OsCMO无论在水稻幼苗的地上部还是地下部都在高盐(140mM NaCl)诱导条件下表达增强。转基因研究表明，将OsCMO基因转入烟草，转基因植株在正常条件下的长势类似对照而且基因过量表达的转基因植株比对照有明显高的耐盐性。该基因可作为目的基因导入植物，提高植物耐盐性，以进行植物品种改良。
综上所述，本发明人提供的OsCMO基因是首次在单子叶植物分离的新基因，其功能参予甜菜碱的生物合成。本发明所述的一种植物胆碱单加氧酶(基因)可能是来自所有植物包括山菠菜、菠菜、甜菜、雁来红、水稻等。这种蛋白质的氨基酸序列中的一种，OsCMO为首个单子叶植物胆碱单加氧酶基因。可利用本发明OsCMO基因作为目的基因构建植物表达载体，其中可用任何一种启动子例如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、Ubiquitin启动子或其它启动子，该表达载体中必要时可包括增强子，不论是转录增强子或翻译增强子。为了简化转化细胞的鉴定可使用选择性标记包括对抗生素抗性的酶，也可利用颜色变化(例如B-葡糖醛酸糖苷酶GUS)或发光(例如荧光素酶)来识别的化合物的酶类，也可用无标记选择。所用的表达载体可使用Ti质粒，Ri质粒，植物病毒载体等。转化方法可用经农杆菌介导法、基因枪法、花粉管通道法或其它方法转化植物。
本发明的OsCMO基因来自水稻，具有适合于水稻等单子叶植物表达的优化密码子，其基因工程受体植物除了双子叶植物，如大豆、棉花、烟草等之外更加适合于水稻、玉米、小麦等单子叶植物。
本发明涉及的序列及记号分列如下：
(1)SEQ ID NO.1的信息
(i)序列特征：
(A)长度：1451bp
(B)类型：核苷酸
(C)链性：单链
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：核苷酸
(iii)序列描述：SEQ ID NO.1
(2)SEQ ID NO.2的信息
(i)序列特征：
(A)长度：410a.a
(B)类型：氨基酸
(C)链性：单链
(D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(iii)序列描述：SEQ ID NO.2
序列表
<110>南京农业大学
<120>一种单子叶植物胆碱单加氧酶基因及其所编码的蛋白质
<141>2004-12-30
<160>2
<170>PatentIn version 3.1
<210>SEQ ID NO.1
<211>1451
<212>DNA
<213>水稻[Oryza sativa]
<221>CDS
<222>(60)..(1292)
<221>3′UTR
<222>(1293)..(1451)
<221>mRNA
<222>(1)..(1451)
<221>polyA_site
<222>(1437)..(1451)
<221>5′UTR
<222>(1)..(59)
<400>1
gtgactcgcc tcctctctcc gattcccacg cctctgcgac tcgtgcgccg gcgccggcg 59
atg gcg atc gcg caa tcc gcg gcc gcg gta tca tcc gcc gca aga gcc 107
Met Ala Ile Ala Gln Ser Ala Ala Ala Val Ser Ser Ala Ala Arg Ala
1 5 10 15
tcc cgc cca agg ccg acc cgc gcc gcg ccg cgc cgc atc gcc gcc tcc 155
Ser Arg Pro Arg Pro Thr Arg Ala Ala Pro Arg Arg Ile Ala Ala Ser
20 25 30
gcc tcc tcc gtg gcg ccg ccg gag ccc gcc gcg cgg cgc ctc gtg gcg 203
Ala Ser Ser Val Ala Pro Pro Glu Pro Ala Ala Arg Arg Leu Val Ala
35 40 45
gcg ttc gac ccg gcg gtc ccg ctg gcc tcc gcc gtg acg ccg ccg agc 251
Ala Phe Asp Pro Ala Val Pro Leu Ala Ser Ala Val Thr Pro Pro Ser
50 55 60
ggg tgg tac acc gac ccg gac ttt ctc cgg ctc gag ctc gac cgc gtc 299
Gly Trp Tyr Thr Asp Pro Asp Phe Leu Arg Leu Glu Leu Asp Arg Val
65 70 75 80
ttc ctc cgc ggg tgg cag gct gtt ggc cac ata tgg caa gtc aag aac 347
Phe Leu Arg Gly Trp Gln Ala Val Gly His Ile Trp Gln Val Lys Asn
85 90 95
cca aat gac tac ttc aca gga aga ctt gga aat gta gaa ttt gtc ata 395
Pro Asn Asp Tyr Phe Thr Gly Arg Leu Gly Asn Val Glu Phe Val Ile
100 105 110
tgt cgg gat gca aat gga gaa ctc cat gct ttt cac aac gtg tgt cgc 443
Cys Arg Asp Ala Asn Gly Glu Leu His Ala Phe His Asn Val Cys Arg
115 120 125
cat cac gcc tca ctc ctt gca tgt gga agt ggt cag aag act tgc ttc 491
His His Ala Ser Leu Leu Ala Cys Gly Ser Gly Gln Lys Thr Cys Phe
130 135 140
cag tgc cct tat cat ggc tgg aca tat gga ctg gat gga gtc ctc cta 539
Gln Cys Pro Tyr His Gly Trp Thr Tyr Gly Leu Asp Gly Val Leu Leu
145 150 155 160
aaa gcc gca caa ata tca gga atc aag aac ttc aac aaa aat gat ttt 587
Lys Ala Ala Gln Ile Ser Gly Ile Lys Asn Phe Asn Lys Asn Asp Phe
165 170 175
ggt ctc att cct att aaa gtg gct aca tgg ggg cct ttt gta ttg gcc 635
Gly Leu Ile Pro Ile Lys Val Ala Thr Trp Gly Pro Phe Val Leu Ala
180 185 190
aaa ttt gat agt ggt ttc tct caa gaa act gct gat aac aca gtt gga 683
Lys Phe Asp Ser Gly Phe Ser Gln Glu Thr Ala Asp Asn Thr Val Gly
195 200 205
gat gaa tgg ctg ggt agt gct tcg gat ctg ctg agt aga aat ggc att 731
Asp Glu Trp Leu Gly Ser Ala Ser Asp Leu Leu Ser Arg Asn Gly Ile
210 215 220
gac acc tcg ttg cct cat att tgc agg cga gaa tat ata att gaa tgt 779
Asp Thr Ser Leu Pro His Ile Cys Arg Arg Glu Tyr Ile Ile Glu Cys
225 230 235 240
aat tgg aag gtc ttt tgt gac aac tat ctg gat ggt ggc tat cat gtt 827
Asn Trp Lys Val Phe Cys Asp Asn Tyr Leu Asp Gly Gly Tyr His Val
245 250 255
cca tat gcg cat gga acc cta gca tct ggt cta cag ctt caa tcc tac 875
Pro Tyr Ala His Gly Thr Leu Ala Ser Gly Leu Gln Leu Gln Ser Tyr
260 265 270
gaa aca cat aca tat gaa aga gtt agt gtt caa agg tgt gaa agt gtc 923
Glu Thr His Thr Tyr Glu Arg Val Ser Val Gln Arg Cys Glu Ser Val
275 280 285
caa gca gaa caa aat gat ttc gat cgc tta ggg aca aaa gct atc tat 971
Gln Ala Glu Gln Asn Asp Phe Asp Arg Leu Gly Thr Lys Ala Ile Tyr
290 295 300
gct ttt gtt tat cca aac ttt atg att aac agg tat ggt cca tgg atg 1019
Ala Phe Val Tyr Pro Asn Phe Met Ile Asn Arg Tyr Gly Pro Trp Met
305 310 315 320
gac act aat cta gtg gtc cca ttg gat gca acc aga tgt aaa gtg ata 1067
Asp Thr Asn Leu Val Val Pro Leu Asp Ala Thr Arg Cys Lys Val Ile
325 330 335
ttt gat tat ttc ctt gac aag tct ctt atg gac gac cag aat ttt att 1115
Phe Asp Tyr Phe Leu Asp Lys Ser Leu Met Asp Asp Gln Asn Phe Ile
340 345 350
gag agc agc tta aaa gac agc gaa caa gta cag atg gaa gac att gca 1163
Glu Ser Ser Leu Lys Asp Ser Glu Gln Val Gln Met Glu Asp Ile Ala
355 360 365
ctt tgc gaa gga gtt cag cgg ggc ctg gaa tca cca gcc tac agt gtg 1211
Leu Cys Glu Gly Val Gln Arg Gly Leu Glu Ser Pro Ala Tyr Ser Val
370 375 380
gga aga tat gca cca tca gtg gag atg gcc atg cac cac ttc cac tgc 1259
Gly Arg Tyr Ala Pro Ser Val Glu Met Ala Met His His Phe His Cys
385 390 395 400
ctc tta cat gcc aat ctt agt ggt gac tgg tga gtgatttcta tgtgcatatc 1312
Leu Leu His Ala Asn Leu Ser Gly Asp Trp
405 410
tgattggatt tatgcatcac aaaatttatg tgcatatctg cagtattttc attacttgta 1372
cattgtaaag tgaaaacaca tagggatgta atcaaactgg ttcttcagtc ttcacatttt 1432
gtcgaaaaaa aaaaaaaaa 1451
<210>SEQ ID NO.2
<211>410
<212>PRT
<213>水稻[Oryza sativa]
<400>2
Met Ala Ile Ala Gln Ser Ala Ala Ala Val Ser Ser Ala Ala Arg Ala
1 5 10 15
Ser Arg Pro Arg Pro Thr Arg Ala Ala Pro Arg Arg Ile Ala Ala Ser
20 25 30
Ala Ser Ser Val Ala Pro Pro Glu Pro Ala Ala Arg Arg Leu Val Ala
35 40 45
Ala Phe Asp Pro Ala Val Pro Leu Ala Ser Ala Val Thr Pro Pro Ser
50 55 60
Gly Trp Tyr Thr Asp Pro Asp Phe Leu Arg Leu Glu Leu Asp Arg Val
65 70 75 80
Phe Leu Arg Gly Trp Gln Ala Val Gly His Ile Trp Gln Val Lys Asn
85 90 95
Pro Asn Asp Tyr Phe Thr Gly Arg Leu Gly Asn Val Glu Phe Val Ile
100 105 110
Cys Arg Asp Ala Asn Gly Glu Leu His Ala Phe His Asn Val Cys Arg
115 120 125
His His Ala Ser Leu Leu Ala Cys Gly Ser Gly Gln Lys Thr Cys Phe
130 135 140
Gln Cys Pro Tyr His Gly Trp Thr Tyr Gly Leu Asp Gly Val Leu Leu
145 150 155 160
Lys Ala Ala Gln Ile Ser Gly Ile Lys Asn Phe Asn Lys Asn Asp Phe
165 170 175
Gly Leu Ile Pro Ile Lys Val Ala Thr Trp Gly Pro Phe Val Leu Ala
180 185 190
Lys Phe Asp Ser Gly Phe Ser Gln Glu Thr Ala Asp Asn Thr Val Gly
195 200 205
Asp Glu Trp Leu Gly Ser Ala Ser Asp Leu Leu Ser Arg Asn Gly Ile
210 215 220
Asp Thr Ser Leu Pro His Ile Cys Arg Arg Glu Tyr Ile Ile Glu Cys
225 230 235 240
Asn Trp Lys Val Phe Cys Asp Asn Tyr Leu Asp Gly Gly Tyr His Val
245 250 255
Pro Tyr Ala His Gly Thr Leu Ala Ser Gly Leu Gln Leu Gln Ser Tyr
260 265 270
Glu Thr His Thr Tyr Glu Arg Val Ser Val Gln Arg Cys Glu Ser Val
275 280 285
Gln Ala Glu Gln Asn Asp Phe Asp Arg Leu Gly Thr Lys Ala Ile Tyr
290 295 300
Ala Phe Val Tyr Pro Asn Phe Met Ile Asn Arg Tyr Gly Pro Trp Met
305 310 315 320
Asp Thr Asn Leu Val Val Pro Leu Asp Ala Thr Arg Cys Lys Val Ile
325 330 335
Phe Asp Tyr Phe Leu Asp Lys Ser Leu Met Asp Asp Gln Asn Phe Ile
340 345 350
Glu Ser Ser Leu Lys Asp Ser Glu Gln Val Gln Met Glu Asp Ile Ala
355 360 365
Leu Cys Glu Gly Val Gln Arg Gly Leu Glu Ser Pro Ala Tyr Ser Val
370 375 380
Gly Arg Tyr Ala Pro Ser Val Glu Met Ala Met His His Phe His Cys
385 390 395 400
Leu Leu His Ala Asn Leu Ser Gly Asp Trp
405 410
Claims (2)
1.一种单子叶植物胆碱单加氧酶(OsCMO)基因，来自水稻(Oryza sativa)，命名为OsCMO基因，其核苷酸序列SEQ ID NO.1为：
GTGACTCGCCTCCTCTCTCCGATTCCCACGCCTCTGCGACTCGTGCGCCGGCGCCG
GCGATGGCGATCGCGCAATCCGCGGCCGCGGTATCATCCGCCGCAAGAGCCTCCCG
CCCAAGGCCGACCCGCGCCGCGCCGCGCCGCATCGCCGCCTCCGCCTCCTCCGTGG
CGCCGCCGGAGCCCGCCGCGCGGCGCCTCGTGGCGGCGTTCGACCCGGCGGTCCC
GCTGGCCTCCGCCGTGACGCCGCCGAGCGGGTGGTACACCGACCCGGACTTTCTCC
GGCTCGAGCTCGACCGCGTCTTCCTCCGCGGGTGGCAGGCTGTTGGCCACATATGG
CAAGTCAAGAACCCAAATGACTACTTCACAGGAAGACTTGGAAATGTAGAATTTGT
CATATGTCGGGATGCAAATGGAGAACTCCATGCTTTTCACAACGTGTGTCGCCATCA
CGCCTCACTCCTTGCATGTGGAAGTGGTCAGAAGACTTGCTTCCAGTGCCCTTATCA
TGGCTGGACATATGGACTGGATGGAGTCCTCCTAAAAGCCGCACAAATATCAGGAA
TCAAGAACTTCAACAAAAATGATTTTGGTCTCATTCCTATTAAAGTGGCTACATGGG
GGCCTTTTGTATTGGCCAAATTTGATAGTGGTTTCTCTCAAGAAACTGCTGATAACA
CAGTTGGAGATGAATGGCTGGGTAGTGCTTCGGATCTGCTGAGTAGAAATGGCATT
GACACCTCGTTGCCTCATATTTGCAGGCGAGAATATATAATTGAATGTAATTGGAAG
GTCTTTTGTGACAACTATCTGGATGGTGGCTATCATGTTCCATATGCGCATGGAACCC
TAGCATCTGGTCTACAGCTTCAATCCTACGAAACACATACATATGAAAGAGTTAGTG
TTCAAAGGTGTGAAAGTGTCCAAGCAGAACAAAATGATTTCGATCGCTTAGGGACA
AAAGCTATCTATGCTTTTGTTTATCCAAACTTTATGATTAACAGGTATGGTCCATGGA
TGGACACTAATCTAGTGGTCCCATTGGATGCAACCAGATGTAAAGTGATATTTGATTA
TTTCCTTGACAAGTCTCTTATGGACGACCAGAATTTTATTGAGAGCAGCTTAAAAGA
CAGCGAACAAGTACAGATGGAAGACATTGCACTTTGCGAAGGAGTTCAGCGGGGC
CTGGAATCACCAGCCTACAGTGTGGGAAGATATGCACCATCAGTGGAGATGGCCAT
GCACCACTTCCACTGCCTCTTACATGCCAATCTTAGTGGTGACTGGTGAGTGATTTC
TATGTGCATATCTGATTGGATTTATGCATCACAAAATTTATGTGCATATCTGCAGTATT
TTCATTACTTGTACATTGTAAAGTGAAAACACATAGGGATGTAATCAAACTGGTTCT
TCAGTCTTCACATTTTGTCGAAAAAAAAAAAAAAA。
2.权利要求1所述的一种单子叶植物胆碱单加氧酶基因所编码的蛋白质，来自水稻(Oryza sativa)，命名为OsCMO蛋白质，它具有如下所示的氨基酸序列SEQ ID NO.2：
MAIAQSAAAVSSAARASRPRPTRAAPRRIAASASSVAPPEPAARRLVAAFDPAVPLASAV
TPPSGWYTDPDFLRLELDRVFLRGWQAVGHIWQVKNPNDYFTGRLGNVEFVICRDAN
GELHAFHNVCRHHASLLACGSGQKTCFQCPYHGWTYGLDGVLLKAAQISGIKNFNK
NDFGLIPIKVATWGPFVLAKFDSGFSQETADNTVGDEWLGSASDLLSRNGIDTSLPHIC
RREYIIECNWKVFCDNYLDGGYHVPYAHGTLASGLQLQSYETHTYERVSVQRCESVQ
AEQNDFDRLGTKAIYAFVYPNFMINRYGPWMDTNLVVPLDATRCKVIFDYFLDKSLM
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