CN1291020C - 小麦TaGI1基因及其克隆与应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及小麦中TaGI1基因的克隆、重组及功能分析与应用，属于分子生物学和生物技术领域。从小麦的小穗中提取总RNA，然后将2微克总RNA反转录成cDNA。根据GI(拟南芥)和OsGI(水稻)中保守的核苷酸序列，设计一对兼并引物，进行常规聚合酶链式反应(PCR)，PCR产物连接到pGEM-T载体上，转化DH5α细胞，进行序列测定。然后进行3′和5′末端快速扩增获得全长的cDNA。测序结果发现扩增出三条同源性很高的序列，分别命名为TaGI1、TaGI2和TaGI3。进一步利用TaGI1全长cDNA构建正义表达载体，转化拟南芥。转基因拟南芥比对照野生型拟南芥提早一周左右开花。因此，该基因转化小麦、水稻等作物，将会调节其生长发育周期，对其产量和育种能够产生重大影响，具有非常重要的经济效益和社会效益。

Description

小麦TaGI1基因及其克隆与应用

(一)技术领域：

本发明涉及小麦中TaGI1基因的克隆、重组、功能分析及其应用，属于分子生物学和生物技术领域。

(二)背景技术：

植物由营养生长阶段向生殖生长阶段的转变，即成花转变，是植物完成整个生活周期的关键步骤。植物开花时间受内在发育信号和外部的环境信号共同控制。近些年来的研究表明，主要有四条途径控制开花，分别为光周期促进途径、自主促进途径、春化促进途径和GA促进途径。以拟南芥和水稻等模式植物为对象，参与光周期促进途径的一些重要基因，如GI、CO，相继被克隆出来。拟南芥GI基因突变后导致了其突变体在长日照条件下延迟开花(Koornneef et al.，Mol.Gen.Genet-1991，229：57-66)。Curtis等人将拟南芥GI基因的片断反向转入萝卜中，结果造成了转基因萝卜抽苔和开花均延迟(Curtis et al.，Transgenic Res.2002，11：249-256)。水稻的GI基因(OsGI)转入水稻中过量表达以后使转基因水稻无论在长日照条件下还是在短日照条件下都晚开花(Hayama et al.Nature 2003，422：719-22)。研究证明，GI基因在植物体内的表达水平直接影响着植物的开花时间，进而影响植物的生育周期。因此，可以利用植物转基因技术来调节植物的生长发育周期。

长日照植物小麦是世界上重要的粮食作物之一。传统的主要育种手段之一是引种，也就是把外地或外国优良的作物品种引入当地，作为推广品种或是育种材料应用。但是小麦要完成从种子到种子的一个生长发育周期，必须通过春化阶段和光照阶段，否则就不能正常结实获取产量。但是由于全球各地的光照、温度等气候条件差异很大，所以引种工作受到很大的限制。如果能够利用生物技术手段调节小麦的生长发育周期，那么引种的范围就能够极大的扩大。

鉴于以上所述，本发明利用反转录-聚合酶链式反应从小麦中分离出三个GI基因的同源基因。进一步构建TaGI1的正义表达载体，转化模式植物拟南芥，转基因植株较野生型对照开花时间提前一周左右。该基因可以用于植物遗传转化，调节植物的生长发育周期。

(三)发明内容：

本发明首次从小麦中分离出三个TaGI基因的全长cDNA，分别命名为TaGI1、TaGI2、TaGI3，并将TaGI1全长cDNA连接到表达载体上，利用农杆菌浸染转化拟南芥，获得的转基因植株的开花时间比野生型对照提前一周左右。

小麦TaGI1(AF543844)基因的开放阅读框架为3465bp，编码1155aa。将这个基因编码的氨基酸序列在GeneBank里进行检索发现，这个基因与GI(拟南芥，AY682088)和OsGIP(水稻，AJ133787)有较高的同源性(见附图1)，其数值为63％和87％的氨基酸同源性。该结果表明这个基因为拟南芥GI基因在小麦中的同源基因。该基因序列如下：

序列表

(1)SEQ ID NO.1的信息

(a)序列特征

*长度：4012碱基对

*类型：核酸

*链型：双链

*拓扑结构：线性

(b)分子类型：cDNA

(c)假设：否

(d)反义：否

(e)最初来源：小麦

(f)序列描述：SEQ ID NO.1

   1 ctccgtattg gagcgctcct gaccgagaga cgttaagcgc ctatggttgg aactggttga    60

  61 tatgatatct ggtcacattg tgggatgcaa tcccccctta gtggggggtg attgaagaag   120

 121 tcaacaatag gaggacttgc atcttgctga agttttctgc ttctgagttt cttgagcagg   180

 181 ctcttaaact accaagtatg tcagtgtcaa atgggaagtg gattgatggg ctccagttct   240

 241 catcactgtt ctggcccccg ccacacgatg tgcagcagaa acaggcacaa attttagcct   300

 301 atgtcgagta ctttgggcag ttcacatctg acagcgagca attcccggag gatgtagctc   360

 361 agctaattca aagttgctat ccatcaaaag aaaagcggtt ggtagatgaa gtattagcaa   420

 421 cttttgttct ccatcaccct gaacatggtc atgcagttgt acatccaatt ctttcacgca   480

 481 tcatagatgg gacactgagt tatgatagtc atggttcccc attcaattcc ttcatctctt   540

 541 tatttaccca aagttctgag aaagagtact cagagcagtg ggccttggcc tgtggagaaa   600

 601 ttcttagagt tctaactcac tacaacaggc caatctttaa agttgcagac tgtaaccacc   660

 661 agatcagacc aggccacagc aagttgtttt gcacagagaa agcaattact cttccaggaa   720

 721 atgaacccga agggaagcca ttgaggccat tatctccttg gatcacagat attgtgctaa   780

 781 ctgcaccttt gggcattaga agcgactatt ttagatggtg tggtggagtt atgggaaaat   840

 841 acgcagctgg tggagaattg aagcctccaa caactgctta cagccgagga gctggcaagc   900

 901 acccacaact catgccatcc accccaagat gggctgttgc caatggagct ggagttattt   960

 961 taagtgtctg tgatgaggaa gtagctcgtt atgagacagc aaacttaacc gcggcagctg  1020

1021 ttcccgccct tctgctacct ccaccgacaa cacccttgga tgagcatttg gtggcagggc  1080

1081 taccccctct cgaaccatac gctcgcttgt ttcatagata ctacgcaatt gccacaccaa  1140

1141 gtgctacgca aagattgctt tttggtcttc ttgaagcacc accgtcatgg gctccagatg  1200

1201 cacttgatgc agcagttcag cttgttgaac tccttcgggc agctgaagat tatgctactg  1260

1261 gcatgcggct tccaaaaaat tggttgcatc ttcatttctt gcgtgcgatt ggaactgcaa  1320

1321 tgtctatgag ggctggtatt gctgctgata cagctgctgc gttgcttttt cgcatactat  1380

1381 cccaaccaat gttgcttttt cctccactaa ggcatgctga aggagttgaa gtgcaacatg   1440

1441 aaccactggg tggctatgta tcatcataca aaagacagct ggaagttcct gcatctgaaa   1500

1501 ccacaattga tgccactgca caaggcattg cttccttgct gtgtgctcat ggtcctgatg   1560

1561 ttgagtggag aatatgtacc atctgggaag ctgcctatgg tttgttacct ctgaattcat   1620

1621 cagcagttga tttacccgaa atcgttgtag ctgctccgct tcagccacct actttgtcat   1680

1681 ggagcctata cttgccactg ttgaaagtat ttgagtatct acctcgtgga agtccatctg   1740

1741 aagcatgcct tatgagaata tttgtggcaa cagttgaagc tatactcaga agaactttcc   1800

1801 cttcggaaac ctctgaatca tctaaaagac caagaagtca atccaagaac cttgctgttg   1860

1861 ctgaactccg tacgatgata cattcactct ttgttgaatc atgtgcttca atgaaccttg   1920

1921 cttcccggtt gttgtttgta gtattaactg tttgcgtcag tcatcaagct ttgccagggg   1980

1981 gcagcaaaag accaactggt agtgaaaacc attcttctga ggaggccact gaggacccaa   2040

2041 gattaaccaa tggaagaaat agggtcaaga agaaacaagg gcctgttggt acatttgact   2100

2101 cgtatgtgct ggccgctgtt tgtgccttat cttgcgagct tcagctgttc cctatccttt   2160

2161 gcaagagcgc aacaaactca aatgtaaaag actctataaa gatcctgaag cctggaaaaa   2220

2221 acaatgggat cagtaatgag ctacagaaca gcattagctc agcaattctc catactcgta   2280

2281 gaattcttgg catcctggaa gctcttttct ccttgaagcc atcatcagtt ggtacctcct   2340

2341 ggaactatag ttcaaatgag atagttgcag cggctatggt tgccgctcat gcttctgagt   2400

2401 tatttcgccg gtcgaaggca tgcctaaatg cactatcttc cctgaagcga tgtaagtggg   2460

2461 atgctgagat ttctaccagg gcatcatccc tctaccattt gatcgacttg catggtaaaa   2520

2521 ctgtgtcctc catcgtgaac aaagctgagc ctctagaagc tcacctgact tttacatcag   2580

2581 taaagagaga tgatgaacaa cacattgagg aaaatggcac cagctcatcg ggtagtggca   2640

2641 acttggaaaa gaagaatggt tcagcctcac acatgaaaaa tggtttgtca agaccactct   2700

2701 tgaaatgctc agaagaggct aggcgaaatg gtaatgttgc aagtacatcc gggaaagttc   2760

2761 ctgcaacttt acaggctgaa gcttctgatt tggcgaactt ccttaccatg gataggaatg   2820

2821 gcggttatcg aggctctcag actctcctaa gatctgttat ctcagaaaaa caggaactaa   2880

2881 gcttctctgt tgtctcattg ctctggcata agcttattgc atctcctgaa acgcagatgt   2940

2941 ctgcagaaag tacatcagct catcaaggtt ggagaaaggt tgtagatgct ctttgtgatg   3000

3001 ttgtttcagc ctcaccagcc aaggcttcaa ctgctattgt tctgcaggct gagaaggacc   3060

3061 tacagccctg gattgctcga gatgatgagg aaggtcagaa gatgtggaga gtcaaccagc   3120

3121 gaatagttaa actgatagct gagcttatga ggaaccatga tagcccagaa gcattgataa   3180

3181 ttcttgctag tgcttcagac cttctgcttc gtgctacaga tgggatgctt gttgatggtg   3240

3241 aagcttgtac cttgcctcag ttagagctcc tggaagtaac tgctagagct attcatctca   3300

3301 tcgttgaatg gggagaccca ggtgtagcag ttgctgatgg cctctcaaat ctgttaaagt   3360

3361 gccgtctatc gcctaccatc cgctgcctct cccacgctag cgcacacgta cgtgcgctca   3420

3421 gcatgtccgt cctccgtgac atcttgaaca gtggaccact aggttccact aagatcattc   3480

3481 aaggcgagca acggaatggc atccaaagcc cgacctacca atgcgcggca gcaaacacgg   3540

3541 tgaactggca agcggatgtc gagagatgta tagactggga agcccgcagc cgccgcgcca   3600

3601 ccgggatgac cctcgccttc ctcaccgctg cggctaacga gctcggctgc ccccttcctt   3660

3661 gctgacaagg ccatatttgg agctgacaat cagcgacact tgacagttgg cgcgagcagt   3720

3721 tgctgcatgg tcagcgagca ggatggctaa ttaatccctt gctcaaggat ggcttcccag   3780

3781 tctgccctgc ccccatgatg tgattcaaaa ctgatgtata ttagctgatg ttcccaatca   3840

3841 tacggagctt tgctcccccg gtgtgatttt aacttgcaat ctgacgttag atgttcaagc   3900

3901 atattgaaac tgcttgtgct gtaacttgta ttcatgatgt aaccgaaaga tgtccgctat   3960

3961 ggtaaatgaa gacatgtcat ttttcgttct ccaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa           4012

(2)SEQ ID NO.2的信息

(a)序列特征

*长度：1155氨基酸

*类型：氨基酸

*链型：单链

*拓扑结构：线性

(b)分子类型：蛋白质

(c)序列描述

0001 MSVSNGKWID GLQFSSLFWP PPHDVQQKQA QILAYVEYFG QFTSDSEQFP EDVAQLIQSC     60

0061 YPSKEKRLVD EVLATFVLHH PEHGHAVVHP ILSRIIDGTL SYDSHGSPFN SFISLFTQSS    120

0121 EKEYSEQWAL ACGEILRVLT HYNRPIFKVA DCNHQIRPGH SKLFCTEKAI TLPGNEPEGK    180

0181 PLRPLSPWIT DIVLTAPLGI RSDYFRWCGG VMGKYAAGGE LKPPTTAYSR GAGKHPQLMP    240

0241 STPRWAVANG AGVILSVCDE EVARYETANL TAAAVPALLL PPPTTPLDEH LVAGLPPLEP    300

0301 YARLFHRYYA IATPSATQRL LFGLLEAPPS WAPDALDAAV QLVELLRAAE DYATGMRLPK    360

0361 NWLHLHFLRA IGTAMSMRAG IAADTAAALL FRILSQPMLL FPPLRHAEGV EVQHEPLGGY    420

0421 VSSYKRQLEV PASETTIDAT AQGIASLLCA HGPDVEWRIC TIWEAAYGLL PLNSSAVDLP    480

0481 EIVVAAPLQP PTLSWSLYLP LLKVFEYLPR GSPSEACLMR IFVATVEAIL RRTFPSETSE    540

0541 SSKRPRSQSK NLAVAELRTM IHSLFVESCA SMNLASRLLF VVLTVCVSHQ ALPGGSKRPT    600

0601 GSENHSSEEA TEDPRLTNGR NRVKKKQGPV GTFDSYVLAA VCALSCELQL FPILCKSATN    660

0661 SNVKDSIKIL KPGKNNGISN ELQNSISSAI LHTRRILGIL EALFSLKPSS VGTSWNYSSN    720

0721 EIVAAAMVAA HASELFRRSK ACLNALSSLK RCKWDAEIST RASSLYHLID LHGKTVSSIV    780

0781 NKAEPLEAHL TFTSVKRDDE QHIEENGTSS SGSGNLEKKN GSASHMKNGL SRPLLKCSEE    840

0841 ARRNGNVAST SGKVPATLQA EASDLANFLT MDRNGGYRGS QTLLRSVISE KQELSFSVVS    900

0901 LLWHKLIASP ETQMSAESTS AHQGWRKVVD ALCDVVSASP AKASTAIVLQ AEKDLQPWIA    960

0961 RDDEEGQKMW RVNQRIVKLI AELMRNHDSP EALIILASAS DLLLRATDGM LVDGEACTLP   1020

1021 QLELLEVTAR AIHLIVEWGD PGVAVADGLS NLLKCRLSPT IRCLSHASAH VRALSMSVLR   1080

1081 DILNSGPLGS TKIIQGEQRN GIQSPTYQCA AANTVNWQAD VERCIDWEAR SRRATGMTLA   1140

1141 FLTAAANELG CPLPC                                                    1155

从小麦幼叶中提取基因组DNA，然后分别用不同的限制性内切酶进行酶切，以TaGI1的一段序列为模板合成探针进行Southern杂交分析。结果显示在小麦基因组中存在三个GI基因的同源基因，这三个基因也就是TaGI1、TaGI2和TaGI3(附图3)。另外，通过对于不同的小麦组织器官进行的Northen杂交分析表明，TaGI1基因在除胚乳外的各个组织器官中均有表达(见附图2)。

利用渗透法转化拟南芥，收获的种子在含卡那霉素的LB固体培养基上筛选，将筛选出的抗性苗在GM培养基上与野生型共同培养。结果表明，与野生型相比，转基因植株在长日照和短日照条件下均提早开花(见附图4)。

根据上述技术，从小麦中分离到了TaGI1、TaGI2、TaGI3基因，TaGI1基因的过量表达能导致转基因拟南芥提前一周左右开花。小麦是世界性的重要粮食作物，将该基因转入小麦使其表达能够调节小麦的生长发育周期和开花时间，具有非常重要的经济效益和社会效益。

(四)附图说明：

图1小麦中TaGI1、TaGI2、TaGI3与拟南芥中GI和水稻中OsGIP的氨基酸同源性比较。

图2TaGII基因在不同组织器官中的Northern杂交。R(根)，S(茎)，L(叶)，SP(小穗原基)，Spi(小穗)，Em(胚)，En(胚乳)。

图3TaGI基因Southern杂交。X，Xba I；B，BamH I；N，NdeI。

图4转基因拟南芥在长日照和短日照条件下均提早开花。

(五)具体发明实施方式：

实施方式1：小麦TaGI1基因的克隆方法

(1)RNA的提取：采用一步法或RNAkit提取总RNA

(2)A第一条链的合成：取2μg总RNA，加入5×反应缓冲液4μl，10mM脱氧核糖核酸(dNTP)2μl，核糖核酸酶抑制剂(40-200u/μl)0.5μl，引物oligodT(1μg/μl)1μl，反转录酶(10u/μ)2μl，42℃反应60分钟，85℃放置10分钟终止反应，稀释至200μl。

(3)PCR反应：聚合酶链式反应(PCR)试剂与条件为：

首先将下列试剂混在一起：

10×反应缓冲液                5μl

脱氧核苷酸混合物(dNTP)        4μl

正向引物(5μM)                4μl

反向引物(5μM)                4μl

模板cDNA                      4μl

TaqDNA聚合酶                  0.5μl

总体积                        50μl

PCR反应条件为：94℃3分钟；然后进入下列循环：94℃1分钟，56℃1分钟，72℃1分钟，共35个循环；最后72℃延伸10分钟。

(4)基因克隆：取2μlPCR产物与pGEM-T载体进行连接，操作步骤按Promega公司产品pGEM-T and pGEM-T easy Vector system说明书进行。然后连接产物转化大肠杆菌DH5α菌株，在表面涂5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D—半乳糖苷和X-gal的含氨苄青霉素(100μg/ml)的LB平板上生长过夜。挑取白色菌落，在LB液体培养基中培养过夜。

(5)质粒DNA的提取：碱法提取质粒DNA。

(6)序列测定：本工作在大连宝生物工程公司进行。

(7)5′序列的分离：按Clontech公司的SMAR TRACE cDNA Amplification

Kit说明书进行

(8)同源检索：利用BLAST软件将分离出的序列与基因银行中的序列进行比较。

实施方式2：小麦TaGI1基因的核苷酸序列和氨基酸序列分别见“发明内容”部分

实施方式3：表达载体的构建

(1)根据分离出的TaGI1基因的核苷酸序列，设计引物：

正向引物：5′-TATTCTAGACGAGGTGGCGACCGGCATGG-3′

反向引物：5′-GACGAGCTCCTTAACTACGGTCTTCTGC-3′

以根的总RNA反转录的cDNA为模板，进行聚合酶链式反应。

(2)取2μl PCR与pGEM-T载体进行连接，操作步骤按Promega公司产品pGEM-T and pGEM-T easy Vector system说明书进行。然后转化大肠杆菌DH5α菌株，在表面涂5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷和X-gal的含氨苄青霉素(100μg/ml)的LB平板上生长过夜。挑取白色菌落，在LB液体培养基中培养过夜。碱法提取质粒DNA，进行序列测定。

(3)用BamH1限制性内切酶将该基因从pGEM-T载体上切下，与相同酶酶切的pROKII连接。连接产物转化DH5α细胞，然后在含氨苄青霉素的LB固体平板上培养，对菌落进行PCR鉴定和质粒DNA的酶切分析。

(4)将构建好的表达载体转化农杆菌GV3101。

实施方式4：基因功能分析

(1)种植拟南芥。

(2)挑取鉴定好的农杆菌单克隆于含50μg/ml卡那霉素的LB液体培养基中，28℃振荡培养。

(3)离心收集菌体，沉淀用渗透培养基(5％蔗糖，0.1M MgCl₂，0.5％SilwetL-77)悬浮，菌液OD₆₀₀在0.8左右。

(4)将拟南芥花序浸入渗透液中，浸泡5分钟。

(5)收获的种子在筛选培养基(1×MS盐，1％蔗糖，pH 5.7，0.8％琼脂，卡那霉素30μg/ml)筛选，得到抗性植株。

(6)将T3代纯合株系种子种于GM培养基上培养，同时种野生型作对照，植株抽花序时统计莲座叶的数目以测量开花时间。结果见附图4。

序列表

<110>山东农业大学

<120>小麦TaGI1基因及其克隆与应用

<160>1

<170>patent In 3.1

<210>1

<211>4012

<212>DNA

<213>小麦(Triticum aestivum L.)

<221>1-4012

<400>1

ctccgtattg gagcgctcct gaccgagaga cgttaagcgc ctatggttgg aactggttga     60

tatgatatct ggtcacattg tgggatgcaa tcccccctta gtggggggtg attgaagaag    120

tcaacaatag gaggacttgc atcttgctga agttttctgc ttctgagttt cttgagcagg    180

ctcttaaact accaagtatg tcagtgtcaa atgggaagtg gattgatggg ctccagttct    240

catcactgtt ctggcccccg ccacacgatg tgcagcagaa acaggcacaa attttagcct    300

atgtcgagta ctttgggcag ttcacatctg acagcgagca attcccggag gatgtagctc    360

agctaattca aagttgctat ccatcaaaag aaaagcggtt ggtagatgaa gtattagcaa    420

cttttgttct ccatcaccct gaacatggtc atgcagttgt acatccaatt ctttcacgca    480

tcatagatgg gacactgagt tatgatagtc atggttcccc attcaattcc ttcatctctt    540

tatttaccca aagttctgag aaagagtact cagagcagtg ggccttggcc tgtggagaaa    600

ttcttagagt tctaactcac tacaacaggc caatctttaa agttgcagac tgtaaccacc    660

agatcagacc aggccacagc aagttgtttt gcacagagaa agcaattact cttccaggaa    720

atgaacccga agggaagcca ttgaggccat tatctccttg gatcacagat attgtgctaa    780

ctgcaccttt gggcattaga agcgactatt ttagatggtg tggtggagtt atgggaaaat    840

acgcagctgg tggagaattg aagcctccaa caactgctta cagccgagga gctggcaagc    900

acccacaact catgccatcc accccaagat gggctgttgc caatggagct ggagttattt    960

taagtgtctg tgatgaggaa gtagctcgtt atgagacagc aaacttaacc gcggcagctg   1020

ttcccgccct tctgctacct ccaccgacaa cacccttgga tgagcatttg gtggcagggc   1080

taccccctct cgaaccatac gctcgcttgt ttcatagata ctacgcaatt gccacaccaa   1140

gtgctacgca aagattgctt tttggtcttc ttgaagcacc accgtcatgg gctccagatg   1200

cacttgatgc agcagttcag cttgttgaac tccttcgggc agctgaagat tatgctactg   1260

gcatgcggct tccaaaaaat tggttgcatc ttcatttctt gcgtgcgatt ggaactgcaa   1320

tgtctatgag ggctggtatt gctgctgata cagctgctgc gttgcttttt cgcatactat   1380

cccaaccaat gttgcttttt cctccactaa ggcatgctga aggagttgaa gtgcaacatg   1440

aaccactggg tggctatgta tcatcataca aaagacagct ggaagttcct gcatctgaaa   1500

ccacaattga tgccactgca caaggcattg cttccttgct gtgtgctcat ggtcctgatg   1560

ttgagtggag aatatgtacc atctgggaag ctgcctatgg tttgttacct ctgaattcat   1620

cagcagttga tttacccgaa atcgttgtag ctgctccgct tcagccacct actttgtcat   1680

ggagcctata cttgccactg ttgaaagtat ttgagtatct acctcgtgga agtccatctg   1740

aagcatgcct tatgagaata tttgtggcaa cagttgaagc tatactcaga agaactttcc   1800

cttcggaaac ctctgaatca tctaaaagac caagaagtca atccaagaac cttgctgttg   1860

ctgaactccg tacgatgata cattcactct ttgttgaatc atgtgcttca atgaaccttg   1920

cttcccggtt gttgtttgta gtattaactg tttgcgtcag tcatcaagct ttgccagggg   1980

gcagcaaaag accaactggt agtgaaaacc attcttctga ggaggccact gaggacccaa   2040

gattaaccaa tggaagaaat agggtcaaga agaaacaagg gcctgttggt acatttgact   2100

cgtatgtgct ggccgctgtt tgtgccttat cttgcgagct tcagctgttc cctatccttt   2160

gcaagagcgc aacaaactca aatgtaaaag actctataaa gatcctgaag cctggaaaaa   2220

acaatgggat cagtaatgag ctacagaaca gcattagctc agcaattctc catactcgta   2280

gaattcttgg catcctggaa gctcttttct ccttgaagcc atcatcagtt ggtacctcct   2340

ggaactatag ttcaaatgag atagttgcag cggctatggt tgccgctcat gcttctgagt   2400

tatttcgccg gtcgaaggca tgcctaaatg cactatcttc cctgaagcga tgtaagtggg   2460

atgctgagat ttctaccagg gcatcatccc tctaccattt gatcgacttg catggtaaaa   2520

ctgtgtcctc catcgtgaac aaagctgagc ctctagaagc tcacctgact tttacatcag   2580

taaagagaga tgatgaacaa cacattgagg aaaatggcac cagctcatcg ggtagtggca   2640

acttggaaaa gaagaatggt tcagcctcac acatgaaaaa tggtttgtca agaccactct   2700

tgaaatgctc agaagaggct aggcgaaatg gtaatgttgc aagtacatcc gggaaagttc   2760

ctgcaacttt acaggctgaa gcttctgatt tggcgaactt ccttaccatg gataggaatg   2820

gcggttatcg aggctctcag actctcctaa gatctgttat ctcagaaaaa caggaactaa   2880

gcttctctgt tgtctcattg ctctggcata agcttattgc atctcctgaa acgcagatgt   2940

ctgcagaaag tacatcagct catcaaggtt ggagaaaggt tgtagatgct ctttgtgatg   3000

ttgtttcagc ctcaccagcc aaggcttcaa ctgctattgt tctgcaggct gagaaggacc   3060

tacagccctg gattgctcga gatgatgagg aaggtcagaa gatgtggaga gtcaaccagc   3120

gaatagttaa actgatagct gagcttatga ggaaccatga tagcccagaa gcattgataa   3180

ttcttgctag tgcttcagac cttctgcttc gtgctacaga tgggatgctt gttgatggtg   3240

aagcttgtac cttgcctcag ttagagctcc tggaagtaac tgctagagct attcatctca   3300

tcgttgaatg gggagaccca ggtgtagcag ttgctgatgg cctctcaaat ctgttaaagt   3360

gccgtctatc gcctaccatc cgctgcctct cccacgctag cgcacacgta cgtgcgctca   3420

gcatgtccgt cctccgtgac atcttgaaca gtggaccact aggttccact aagatcattc   3480

aaggcgagca acggaatggc atccaaagcc cgacctacca atgcgcggca gcaaacacgg   3540

tgaactggca agcggatgtc gagagatgta tagactggga agcccgcagc cgccgcgcca   3600

ccgggatgac cctcgccttc ctcaccgctg cggctaacga gctcggctgc ccccttcctt   3660

gctgacaagg ccatatttgg agctgacaat cagcgacact tgacagttgg cgcgagcagt   3720

tgctgcatgg tcagcgagca ggatggctaa ttaatccctt gctcaaggat ggcttcccag   3780

tctgccctgc ccccatgatg tgattcaaaa ctgatgtata ttagctgatg ttcccaatca   3840

tacggagctt tgctcccccg gtgtgatttt aacttgcaat ctgacgttag atgttcaagc   3900

atattgaaac tgcttgtgct gtaacttgta ttcatgatgt aaccgaaaga tgtccgctat   3960

ggtaaatgaa gacatgtcat ttttcgttct ccaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa           4012

Claims (2)

1.一种克隆的控制小麦花发育的基因TaGI1，其特征在于它具有下述所示的序列：

  01 CTCCGTATTG GAGCGCTCCT GACCGAGAGA CGTTAAGCGC CTATGGTTGG AACTGGTTGA   60

  61 TATGATATCT GGTCACATTG TGGGATGCAA TCCCCCCTTA GTGGGGGGTG ATTGAAGAAG  120

 121 TCAACAATAG GAGGACTTGC ATCTTGCTGA AGTTTTCTGC TTCTGAGTTT CTTGAGCAGG  180

 181 CTCTTAAACT ACCAAGTATG TCAGTGTCAA ATGGGAAGTG GATTGATGGG CTCCAGTTCT  240

 241 CATCACTGTT CTGGCCCCCG CCACACGATG TGCAGCAGAA ACAGGCACAA ATTTTAGCCT  300

 301 ATGTCGAGTA CTTTGGGCAG TTCACATCTG ACAGCGAGCA ATTCCCGGAG GATGTAGCTC  360

 361 AGCTAATTCA AAGTTGCTAT CCATCAAAAG AAAAGCGGTT GGTAGATGAA GTATTAGCAA  420

 421 CTTTTGTTCT CCATCACCCT GAACATGGTC ATGCAGTTGT ACATCCAATT CTTTCACGCA  480

 481 TCATAGATGG GACACTGAGT TATGATAGTC ATGGTTCCCC ATTCAATTCC TTCATCTCTT  540

 541 TATTTACCCA AAGTTCTGAG AAAGAGTACT CAGAGCAGTG GGCCTTGGCC TGTGGAGAAA  600

 601 TTCTTAGAGT TCTAACTCAC TACAACAGGC CAATCTTTAA AGTTGCAGAC TGTAACCACC  660

 661 AGATCAGACC AGGCCACAGC AAGTTGTTTT GCACAGAGAA AGCAATTACT CTTCCAGGAA  720

 721 ATGAACCCGA AGGGAAGCCA TTGAGGCCAT TATCTCCTTG GATCACAGAT ATTGTGCTAA  780

 781 CTGCACCTTT GGGCATTAGA AGCGACTATT TTAGATGGTG TGGTGGAGTT ATGGGAAAAT  840

 841 ACGCAGCTGG TGGAGAATTG AAGCCTCCAA CAACTGCTTA CAGCCGAGGA GCTGGCAAGC  900

 901 ACCCACAACT CATGCCATCC ACCCCAAGAT GGGCTGTTGC CAATGGAGCT GGAGTTATTT  960

 961 TAAGTGTCTG TGATGAGGAA GTAGCTCGTT ATGAGACAGC AAACTTAACC GCGGCAGCTG 1020

1021 TTCCCGCCCT TCTGCTACCT CCACCGACAA CACCCTTGGA TGAGCATTTG GTGGCAGGGC 1080

1081 TACCCCCTCT CGAACCATAC GCTCGCTTGT TTCATAGATA CTACGCAATT GCCACACCAA 1140

1141 GTGCTACGCA AAGATTGCTT TTTGGTCTTC TTGAAGCACC ACCGTCATGG GCTCCAGATG 1200

1201 CACTTGATGC AGCAGTTCAG CTTGTTGAAC TCCTTCGGGC AGCTGAAGAT TATGCTACTG 1260

1261 GCATGCGGCT TCCAAAAAAT TGGTTGCATC TTCATTTCTT GCGTGCGATT GGAACTGCAA 1320

1321 TGTCTATGAG GGCTGGTATT GCTGCTGATA CAGCTGCTGC GTTGCTTTTT CGCATACTAT 1380

1381 CCCAACCAAT GTTGCTTTTT CCTCCACTAA GGCATGCTGA AGGAGTTGAA GTGCAACATG 1440

1441 AACCACTGGG TGGCTATGTA TCATCATACA AAAGACAGCT GGAAGTTCCT GCATCTGAAA 1500

1501 CCACAATTGA TGCCACTGCA CAAGGCATTG CTTCCTTGCT GTGTGCTCAT GGTCCTGATG 1560

1561 TTGAGTGGAG AATATGTACC ATCTGGGAAG CTGCCTATGG TTTGTTACCT CTGAATTCAT 1620

1621 CAGCAGTTGA TTTACCCGAA ATCGTTGTAG CTGCTCCGCT TCAGCCACCT ACTTTGTCAT 1680

1681 GGAGCCTATA CTTGCCACTG TTGAAAGTAT TTGAGTATCT ACCTCGTGGA AGTCCATCTG 1740

1741 AAGCATGCCT TATGAGAATA TTTGTGGCAA CAGTTGAAGC TATACTCAGA AGAACTTTCC 1800

1801 CTTCGGAAAC CTCTGAATCA TCTAAAAGAC CAAGAAGTCA ATCCAAGAAC CTTGCTGTTG 1860

1861 CTGAACTCCG TACGATGATA CATTCACTCT TTGTTGAATC ATGTGCTTCA ATGAACCTTG 1920

1921 CTTCCCGGTT GTTGTTTGTA GTATTAACTG TTTGCGTCAG TCATCAAGCT TTGCCAGGGG 1980

1981 GCAGCAAAAG ACCAACTGGT AGTGAAAACC ATTCTTCTGA GGAGGCCACT GAGGACCCAA 2040

2041 GATTAACCAA TGGAAGAAAT AGGGTCAAGA AGAAACAAGG GCCTGTTGGT ACATTTGACT 2100

2101 CGTATGTGCT GGCCGCTGTT TGTGCCTTAT CTTGCGAGCT TCAGCTGTTC CCTATCCTTT 2160

2161 GCAAGAGCGC AACAAACTCA AATGTAAAAG ACTCTATAAA GATCCTGAAG CCTGGAAAAA 2220

2221 ACAATGGGAT CAGTAATGAG CTACAGAACA GCATTAGCTC AGCAATTCTC CATACTCGTA 2280

2281 GAATTCTTGG CATCCTGGAA GCTCTTTTCT CCTTGAAGCC ATCATCAGTT GGTACCTCCT 2340

2341 GGAACTATAG TTCAAATGAG ATAGTTGCAG CGGCTATGGT TGCCGCTCAT GCTTCTGAGT 2400

2401 TATTTCGCCG GTCGAAGGCA TGCCTAAATG CACTATCTTC CCTGAAGCGA TGTAAGTGGG 2460

2461 ATGCTGAGAT TTCTACCAGG GCATCATCCC TCTACCATTT GATCGACTTG CATGGTAAAA 2520

2521 CTGTGTCCTC CATCGTGAAC AAAGCTGAGC CTCTAGAAGC TCACCTGACT TTTACATCAG 2580

2581 TAAAGAGAGA TGATGAACAA CACATTGAGG AAAATGGCAC CAGCTCATCG GGTAGTGGCA 2640

2641 ACTTGGAAAA GAAGAATGGT TCAGCCTCAC ACATGAAAAA TGGTTTGTCA AGACCACTCT 2700

2701 TGAAATGCTC AGAAGAGGCT AGGCGAAATG GTAATGTTGC AAGTACATCC GGGAAAGTTC 2760

2761 CTGCAACTTT ACAGGCTGAA GCTTCTGATT TGGCGAACTT CCTTACCATG GATAGGAATG 2820

2821 GCGGTTATCG AGGCTCTCAG ACTCTCCTAA GATCTGTTAT CTCAGAAAAA CAGGAACTAA 2880

2881 GCTTCTCTGT TGTCTCATTG CTCTGGCATA AGCTTATTGC ATCTCCTGAA ACGCAGATGT 2940

2941 CTGCAGAAAG TACATCAGCT CATCAAGGTT GGAGAAAGGT TGTAGATGCT CTTTGTGATG 3000

3001 TTGTTTCAGC CTCACCAGCC AAGGCTTCAA CTGCTATTGT TCTGCAGGCT GAGAAGGACC 3060

3061 TACAGCCCTG GATTGCTCGA GATGATGAGG AAGGTCAGAA GATGTGGAGA GTCAACCAGC 3120

3121 GAATAGTTAA ACTGATAGCT GAGCTTATGA GGAACCATGA TAGCCCAGAA GCATTGATAA 3180

3181 TTCTTGCTAG TGCTTCAGAC CTTCTGCTTC GTGCTACAGA TGGGATGCTT GTTGATGGTG 3240

3241 AAGCTTGTAC CTTGCCTCAG TTAGAGCTCC TGGAAGTAAC TGCTAGAGCT ATTCATCTCA 3300

3301 TCGTTGAATG GGGAGACCCA GGTGTAGCAG TTGCTGATGG CCTCTCAAAT CTGTTAAAGT 3360

3361 GCCGTCTATC GCCTACCATC CGCTGCCTCT CCCACGCTAG CGCACACGTA CGTGCGCTCA 3420

3421 GCATGTCCGT CCTCCGTGAC ATCTTGAACA GTGGACCACT AGGTTCCACT AAGATCATTC 3480

3481 AAGGCGAGCA ACGGAATGGC ATCCAAAGCC CGACCTACCA ATGCGCGGCA GCAAACACGG 3540

3541 TGAACTGGCA AGCGGATGTC GAGAGATGTA TAGACTGGGA AGCCCGCAGC CGCCGCGCCA 3600

3601 CCGGGATGAC CCTCGCCTTC CTCACCGCTG CGGCTAACGA GCTCGGCTGC CCCCTTCCTT 3660

3661 GCTGACAAGG CCATATTTGG AGCTGACAAT CAGCGACACT TGACAGTTGG CGCGAGCAGT 3720

3721 TGCTGCATGG TCAGCGAGCA GGATGGCTAA TTAATCCCTT GCTCAAGGAT GGCTTCCCAG 3780

3781 TCTGCCCTGC CCCCATGATG TGATTCAAAA CTGATGTATA TTAGCTGATG TTCCCAATCA 3840

3841 TACGGAGCTT TGCTCCCCCG GTGTGATTTT AACTTGCAAT CTGACGTTAG ATGTTCAAGC 3900

3901 ATATTGAAAC TGCTTGTGCT GTAACTTGTA TTCATGATGT AACCGAAAGA TGTCCGCTAT 3960

3961 GGTAAATGAA GACATGTCAT TTTTCGTTCT CCAAAAAAAA AAAAAAAAAA AA         4012

2.根据权利要求1所述的一种小麦TaGI1基因的用途，其特征在于该基因在转基因拟南芥中过量表达，能促进转基因拟南芥提早开花。

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