CN101078015A - 一种柠条转录因子CkAREB及其在抗逆植物培育中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种新的CkAREB基因。该基因来源于沙漠灌木植物柠条(Caragana korshinskii Kom)。该基因编码含bZIP/AREB结构域的AREB转录因子。利用其所克隆得到的cDNA，构建了植物表达载体，获得了转基因植物。针对其抗旱性能的测试表明，该基因的转入可以提高木本植物的抗旱性。

Description

一种柠条转录因子CkAREB及其在抗逆植物培育中的应用

技术领域

本发明涉及一种bZIP/AREBP类转录因子。具体地说明，本发明涉及一种来源于沙漠灌木植物柠条(Caragana korshinskii Kom)的编码bZIP/AREBP类转录因子的基因，命名为CkAREB。本发明还涉及编码这类转录因子的蛋白，以及含有这类基因的载体，以及利用这类基因培育耐逆植物的应用。

技术背景

在我国西部地区，缺水是一个严重的环境胁迫因子，是阻碍农、林业进一步发展的瓶颈因素。从遗传上提高植物的抗逆性，是未来农、林业的迫切需要。近年来运用分子生物学研究植物复杂的生理调控已获得长足的发展，随植物生理特性及相关抗旱分子机制的研究发展，以及多个与抗旱胁迫相关的基因已克隆、定位，已逐步揭示了控制植物耐旱效应的分子作用机制(调控机制)，为利用基因工程提高农、林物种的抗逆性能提供了理论的指导作用。在我国西部地区，土地的沙漠化和植被生态退化十分严重，主要原因是干旱缺水，许多引种到西部的树种由于干旱生长缓慢或者死亡，如何恢复干旱沙漠地区的植被，防风固沙，维护生态环境，是当前我国国民经济所面临的一个重要的问题。我国相继制订为维护我国西部持续发展，治理干旱地区的总体方针，其中在西部干旱地区大力提倡退耕还林亦是重要措施之一。针对我国西部地区对高抗、优质林木新品种的需求，可将基因工程技术与常规育种方法相结合，可望在培育出适合西部地区地转基因的抗逆新树种，为我国西部长远、高效和持续育种提供保障。

在植物受到盐胁迫时，植物细胞受到伤害，产生一系列包括渗透胁迫和离子胁迫在内的胁迫信号，而这些初级的胁迫信号又进一步开启了下游的胁迫信号受体，激活各种逆境激酶和转录因子，导致各种耐盐、耐旱基因的增强表达。bZIP是植物在受到逆境胁迫情况下，所产生的ABA诱导的一类转录因子，可以启动包含ARE等顺式作用元件的抗逆基因的表达(如Lea)，而提高植物的抗逆性。

本发明人已从沙漠灌木植物柠条(Caragana korshinskii Kom)中克隆到bZIP/AREBP类转录因子，命名为CkAREB。该基因的表达受干旱、盐诱导。构建了用于单、双子叶植物的表达载体，转化双子叶模式植物烟草和木本模式植物毛白杨。转基因植株显现明显的抗逆性。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种具有较强耐旱性的CkAREB，该基因来源于柠条(Caragana korshinskii Kom)，其核苷酸序列与氨基酸序列示于SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。图1中所示的序列代表了柠条中bZIP/AREBP类转录因子。

应当指出的是，对本发明的bZIP/AREBP类转录因子进行一个或多个(优选10个)氨基酸的替换、插入或缺失所得到的具有相同功能的类似物也能达到本发明的目的。因而，本发明也包括与SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列具有至少90％同源性，尤其具有至少95％的同源性，但同时具有柠条中CkAREB基因活性的功能类似物。

本发明的另一个目的所提供一种编码来自柠条的bZIP/AREBP类转录因子的基因CkAREB，在图1SEQ ID NO：1中所示的基因代表了柠条CkAREB的基因家族，它们都含有保守的bZIP结构域序列，但不限于所列的序列。本领域的普通技术人员可以了解，在SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的基础上进行一个或多个(优选10个)核苷酸的保守性替换、缺失、添加或修饰所得到的核苷酸序列同样能够实现本发明的目的。本领域的普通技术人员同样能够了解，在严紧杂交条件下与SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列进行杂交的核苷酸序列同样能够实现本发明的目的。

本发明的再一个目的是提供一种培育耐盐植株的方法，该方法包括用本发明的CkAREB基因构建植物表达载体；用构建的表达载体转化植物组织；将转化的植物组织培育成植株。

本发明的又一个目的是提供一种所提及CkAREB基因的表达载体(图3)。可使用任何一种可以引导外源基因在植物中表达的表达载体。这些植物表达载体包括但不限于，双元农杆菌载体，例如pBIN19，pBI121，pB221，含DRE、ARE元件的启动子以及用于单子叶植物微弹轰击的载体。载体还可包括3’非翻译区域。3’非翻译区域是指一种基因的部分，它含有一种包含聚腺苷酸信号和任何其它的可效应mRNA前体加工或基因表达的DNA片段。本发明的CkAREB基因的3’非翻译区域可被用于在植物中表达。

本发明的载体也可含有适当的启动子。在本发明中可使用任何一种强启动子。这些启动子包括但不限于花椰菜花叶病毒(CaMV 35S)和Ubiqutin启动子。它可单独使用或与其它的植物启动子结合使用。

本发明的表达载体在需要时也可包括增强子，不论是翻译增强子或转录增强子。这些增强子区域包括但不限于ATG起始密码子和邻接区域。起始密码子必需与编码区域的阅读框同向，以保证整个序列的翻译。翻译控制信号和起始密码子可以是多种不同的来源，可以是天然的或合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域，或来自结构基因。

为了便于对转基因植物细胞或植株进行鉴定及筛选，可对所使用的载体进行加工，包括加入植物可选择性标记。可使用的选择性标记包括对抗生素抗性的酶，抗生素包括庆大霉素、潮霉素、卡那霉素等。同样，可使用产生通过颜色变化(例如GUS)或发光(例如荧光酶)来识别的化合物的酶，或抗化学试剂(例如除萎剂)。另外，也可不用任何筛选标记。

本发明的表达载体可通过使用Ti质粒，Ri质粒，植物病毒载体，直接的DNA转化，微注射，电穿孔等导入植物细胞。

可使用本发明的方法转化的植物宿主包括单子叶植物和双子叶植物，例如：杨树、豆科灌木、禾本科牧草和作物(小麦、玉米、水稻)、苜蓿、大豆、油菜、棉花、花生等。

附图说明：

图1.CkAREB基因cDNA核苷酸序列，SEQ ID NO：1。

图2.CkAREB基因所编码的氨基酸序列，SEQ ID NO：2。

图3.CkAREB基因5’UTR核苷酸序列，SEQ ID NO：3。

图4.CkAREB基因3’UTR核苷酸序列，SEQ ID NO：4。

图5.CkAREB植物表达载体pCkAREB构建图。

图6.农杆菌转染CkAREB的烟草分化出的丛生芽。

图7.转入生根培养基的CkAREB转基因烟草植株。

图8.移栽的CkAREB转基因烟草植株。

图9.CkAREB转基因烟草的PCR检测。

图10.CkAREB转基因烟草的PCR-Southrn验证。

图11.CkAREB转基因烟草的基因组点杂交验证。

图12.CkAREB转基因烟草植株的抗旱性实验，图A.温室中(23-26℃)于移栽的转化烟草和对照烟草脱水6天；图B.温室中(23-26℃)于移栽的转化烟草和对照烟草脱水12天。

具体实施方式

下面通过实施例详细描述本发明。本领域的普通技术人员应当理解，下述实施例不是用于限制的目的，本发明的实质性的保护范围由后附的权利要求所限定。

实施例中所用试剂如下：

高保真度Pyrobest Taq、Premix Ex Taq、AMV、RNA酶抑制剂、各种限制性内切酶、One Step RNA PCR试剂盒、pMD18-T Vector购自大连宝生(TaKaRa)公司；DNA纯化回收试剂盒购自鼎国生物技术公司；T4DNA连接酶和RNase A购自MBI公司；ABA、DNase(RNase free)购自Sigmag公司。

实施例1、柠条CkAREB基因的克隆

取生长2-3个月的柠条幼苗(购自中科院新疆吐鲁番沙漠植物园柠条种子萌发而成)为材料，用100uM ABA(Sigma公司)过夜诱导。取叶片，洗净后，放入经DEPC处理、灭菌后的匀浆器中，加入TRIzol(Invitrogen)研磨、匀浆，室温放置5分钟，加入氯仿抽提两次，取上清，用异丙醇沉淀总RNA，空气干燥后，溶于适量DEPC水。以带polyT的引物进行逆转录获得cDNA，(具体操作参见Kit DRR019A，TaKaRa Biotech.(Dalian)Co.Ltd)。

polyT的引物序列如下：

Oligo dT-引物：

5′-CGAGCGGCCGCCCGGGCAGGTTTTTTTTTTTTTTTT-3′(SEQ IDNO：5)

RT反应条件如下

DEPC水                                    85uL

Rnase抑制剂(40U/uL)                       5uL

Oligo dT-引物                             10uL

RNA                                       10uL

总体积                                    110uL

于65℃温浴10分钟，立即于冰上淬冷，然后加入

MgCl₂                            40uL

10XRNA Buffer                     20uL

dNTP混合物                        20uL

AMV                               10uL

总体积                            90uL

整个反应的总体积                  200uL

1. 30℃                           10min

2. 42℃                           1h

3. 99℃                           5min

4. 5℃                            5min

取适量上述逆转录产物以下引物进行PCR扩增。

正向引物：

L1  5′-GGGTCGATGAACATGGACGA-3′(SEQ ID NO：6)反向引物：

R1  5′-TATCATCCTTCTCTGCCTCCTCTC-3′(SEQ ID NO：7)

PCR条件

1. 95℃                             1min

2. 94℃                             30s

3. 60℃                             40s

4. 72℃                             2min  2  29cycles

5. 72℃                             10min

6. 4℃                              pause

PCR产物连接到pMD18-T Vector载体(TaKaRa Biotech.(Dalian)Co.Ltd)上用于测序，采用本领域公知公用的DNAMAN软件进行序列拼接后，在万维网上NCBI数据库中与已知bZIP类基因( AF369792)进行比对分析，确证通过上述PCR反应克隆到的是bZIP类基因片段。

再以这段序列为模板，设计以下引物分别从逆转录反应片段中进行5’、3’-RACE扩增，获得基因5’(SEQ ID NO：3)和3’端序列(SEQ IDNO：4)。具体方法操作参见BD Biosciences Clontech的BD SMART^TMRACE cDNA Amplification Kit(Cat.No.634914)。

5’-RACE引物

5′-TGTCATCTCTCCCAAAGTTGGCTGTCTCT-3′(SEQ ID NO：8)

3’-RACE引物

5′-GGCTTATACCATGGAATTGGAAGCAGAAG-3′(SEQ ID NO：9)

在基因5’和3’序列的基础上，设计以下特异性引物采用高保真Pyrobest Taq PCR扩增获得基因ORF全长，并将其克隆入pMD18-T Vector中。

正向引物(含BamH I位点，其识别序列以下划线表示)

5′-GCC GGATCCATGAACTTCAAGGGCTTCGGG-3′(SEQ ID NO：10)反向引物(含Sac I位点，其识别序列以下划线表示)

5′-CGAG GAGCTCTACCATGGACCAGTTAGTGTACGT-3′(SEQ IDNO：11)

PCR反应条件如下：

上述逆转录cDNA模板质粒             1μL

正反向引物各                       1μL

dNTP                               2μL

ddH₂O                             13.8μL

Pyrobest Taq                       0.2μL

10×buffer                         2μL

Total：                            20μL

PCR程序为：

a)95℃ 2min

b)94℃ 30s

c)55℃ 1min

d)72℃ 3min    2   29cycles

e)72℃ 10min

f)4℃  pause

所获得的CkAREB全长cds为1779bp，见SEQ ID NO：1，含有1273bp开放阅读框架，编码424个氨基酸组成的多肽，见SEQ ID NO：2，其5′端为316bp，3′端为190bp。

实施例2、用于转化的植物表达载体的构建

CkAREB表达载体的构建按常规分子生物学手段进行(参见“精编分子生物学实验指南”2001，科学出版社，颜子颖，王海林译)。将CkAREB采用BamH I和Sac I从pMD18-T Vector上双切下来，回收，将其插入pBI121双元表达载体(Chen PY，Wang CK，Soong SC，To KY(2003)Complete sequence of the binary vector pBI121 and its application in cloningT-DNA insertion from transgenic plants.Molecular Breeding 11：287-293)中CaMV 35S启动子后面，得到一个双元表达载体，其图谱如图5所示，经测序鉴定插入片段无误后，转化农杆菌LBA4404(Hoekema A，Hirsch PR，Hooykaas PJJ，Schilperoort RA(1983)A binary plant vetor strategy based onseparation of vir-and T-region of the Agrobacterium tumefaciens Ti-plasmid.Nature 303：179-180)，再提质粒，经酶切、PCR确认后，证明成功转化入农杆菌中，该表达载体可直接用于植物，如烟草、毛白杨、禾本科牧草等植物的转化。

实施例3、CkAREB基因的烟草转化

1.植物材料的准备

在不含激素的MS培养基上(刘敏著，花卉组织培养与工厂化生产，地质出版社，2006年6月，19-20页)培养烟草(W38)(中科院植物所)的无菌苗，培养温度为25-28℃。

2.农杆菌的培养

将含有目的表达载体的农杆菌接种到20ml(30mg/L Str、50mg/L Kan)YEP液体培养基中，28℃，220rpm摇菌16-18h，使农杆菌培养至对数期OD₆₀₀值0.6-0.8。

取菌液1-2mL转入40mL不含抗生素的YEP中，28℃，220rpm摇菌过夜。

YEP培养基配方：

Yeast Extract 10g/L+Trypton 10g/L+NaCl 5g/L，pH7.0

3.转化

将菌液倒入无菌培养皿中(40mL/per)，把刚划好伤口的叶片，放入菌液中侵染10-20min后，用无菌水漂洗一下，将叶片上的菌液用灭菌滤纸稍吸干，转入不加抗生素的MS培养基上(刘敏著，花卉组织培养与工厂化生产，地质出版社，2006年6月，19-20页)。浸染过的叶片接种在MS培养基上，平放并稍捻入培养基，28℃暗培养条件下共培养2-4天，直至可看见农杆菌菌斑。

4.选择培养：

立即将共培养的、可看见农杆菌菌斑的转化叶片放入含抗生素(Cb500mg/L、Kan 500mg/L)的筛选分化培养基中，筛选培养3-4周。待出芽后，转入含抗生素(Cb 500mg/L、Kan 500mg/L)的生根培养基(见图6)。获得转基因植株(如图7和图8)。

分化培养基组成：

含6-BA 2mg/L，NAA 0.1mg/L，羧苄青霉素500mg/L，卡那霉素500mg/L的MS培养基。

生根培养基组成：

含NAA 0.1mg/L，羧苄青霉素500mg/L，卡那霉素500mg/L的MS培养基。

实施例5、转CkAREB基因的烟草验证

1.PCR验证

采用CTAB法(F.奥斯伯等著，颜子颖、王海林译，精编分子生物学实验指南。科学出版社，2001)提取植物总DNA，采用前面所述引物(SEQID NO：10和SEQ ID NO：11)进行PCR检测。pCkAREB转化的植株进行的PCR检测如图9。可见在DNA Marker约1.3kb处，阳性对照中和转化株A(1，2，3，4)、B(1，2，3)、C(1，2，3)、D(1，2)、E(1，2，)、F(2)中具有明显PCR带，而阴性对照中没有该条带。这表明所获得的烟草转化株中已含有该基因片段。

2.PCR-Southern验证

采用CTAB法(F.奥斯伯等著，颜子颖、王海林译，精编分子生物学实验指南。科学出版社，2001)提取植物总DNA，采用前面所述引物(SEQID NO：10和SEQ ID NO：11)进行PCR扩增，0.8％Agrose电泳，真空吸附转NC膜。采用以下引物进行PCR的DIG标记探针(以SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：11为引物)，参照Roche公司DIG DNA Labeling and DetectionKit(Cat.No.1093657)的操作手册进行标记、杂交和显色。如图10所示，0号泳道为阴性对照；4号泳道为阳性对照；其余1、2、3、5为转基因植株。这表明所获得的转化烟草植株中含有该基因序列。

3.点杂交验证

采用CTAB法提取植物总DNA，进行DOT-blot点膜(参见“精编分子生物学实验指南”2001，科学出版社，颜子颖，王海林译)。采用前面DIG标记探针，参照Roche公司DIG DNA Labeling and Detection Kit(Cat.No.1093657)的操作手册进行标记、杂交和显色(同上)。结果见图11，其中0号为阴性；4号为阳性对照；1、2、3、5号为转基因植株。这表明阳性转化植株基因组中的确含有该基因片段。

实施例6、转CkAREB基因的烟草抗旱性实验

于温室中(23-26℃)将位于同样培养钵中，相同发育时期的转化烟草和野生烟草进行脱水耐旱实验。可见在脱水6天(图12A)和12天后(图12B)(CK，为对照；pCkAREB，为阳性转基因植株)转化株pCkAREB仍然生长正常，而对照株则萎蔫。表明转化有pCkAREB的植株具有一定的抗旱性。

<110>中国科学院遗传与发育生物学研究所

     中国林业科学院林业研究所

<120>一种柠条转录因子CkAREB及其在抗逆植物培育中的应用

<130>IB063047

<160>11

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>1778

<212>DNA

<213>柠条(Caragana korshinskii Kom)

<400>1

ccaatccacc tgtaccacac gcataacata ttgaaccctt ttttttgttt tttaacttga   60

tgatttgttc aaaccccaaa cagcttagct ctgctttttt tttttaaaaa aaaattactt  120

ggatgtaaat cgttactagc acaatcaata atatatccat ttttatgtaa agaattgaaa  180

atcggatttt cgttaaattt tattcctgtg tttgaagttt gagtgtgggg gaatttagat  240

ttgtgatttg gatgaggttg tggttgtgtt ttgcttcaga tttgaggaaa ataggtttgg  300

ttagaactta gaagcatgaa cttcaagggc ttcgggaatg atcaggggat cgccgccggc  360

aacggcgggg ggaggccgcc ggcagcggtg gcggggaact ttcccctgac acggcagtca  420

tcggtgtact cgctgacggt tgacgagttc atgaacagca tgggaggttc agggaaggac  480

tttgggtcga tgaacatgga cgagttgctg aagaacattt ggactgctga agaggttcaa  540

acaatgggtg gtgaagaagc tgtgagccat ttacaaagac aagggtcatt gacgctgcca  600

cgtacgctta gtcaaaagac agtggatcag gtttggaagg atatttccaa ggatcatggt  660

cccaatttgg cggttccgca ggctcagaga cagccaactt tgggagagat gacattggag  720

gagttcttgg tgagagctgg tgttgttaga gaagatgtaa aaccaaacga tggagtcttt  780

gttgatctct ctcgtgtggc gaataacaat ggcttaggat tggggtttca ggctcagcag  840

ttgaataagg tcactggttt gataggtaat aatggtagat tttctcctaa tgatgatcca  900

cttgtgggtt ttcagtctcc ttctaccaat ttgcccttga atgttaatgg ggttcgatca  960

tccaatcagc aacatatgca gagtccacag tctcagcagc agcaacaaca acatcagcat  1020

cagcagcaga tatttccaaa gcaacctgtt ttgaactatg caactcagat gcctctgtct  1080

agtaatcaag gaatgagggg tggaatggtg gggcttgctc ctgatcaggg actgaatgct  1140

aatcttgtgc aaggtggagg gattgggatg gttggtatgc cacctgggac tgttcaactt  1200

gctactgcgt caccagctaa ccagatgtcc agtgataaac ttggaaagag taatggtgac  1260

acttcttctg tgtcaccggt tccttatgtc tttaatggcg gtatgcgagg gaggaagagc  1320

aatggagctg tggagaaggt aattgagagg aggcagagaa ggatgataaa gaatagagag  1380

tcagctgcta ggtcgcgggc tcgcaagcag gcttatacca tggaattgga agcagaagtt  1440

gcaaagttaa aagaagagaa cgaagaactt cagaaaaagc aggaagaaat catggaaatt  1500

cagaaaaatc aagttaagga aatgatgaat ttacagcgcg aagtcaagag aaaatgctta  1560

agacgtacac taactggtcc atggtagatt gaggattgga ttatgattcc gcagttaaga  1620

tatatgtata tgtacataca cttgttttgc tgtagattga ggcttttgta gtttaggtta  1680

gtactttaaa actttaatgt cttaccaaca atttgcttag ttagggaggg tatgccccaa  1740

taccatgaga atgtgtttca gcaaaaaaaa aaaaaaaa                          1778

<210>2

<211>423

<212>PRT

<213>柠条(Caragana korshinskii Kom)

<400>2

Met Asn Phe Lys Gly Phe Gly Asn Asp Gln Gly Ile Ala Ala Gly Asn

1               5                   10                  15

Gly Gly Gly Arg Pro Pro Ala Ala Val Ala Gly Asn Phe Pro Leu Thr

            20                  25                  30

Arg Gln Ser Ser Val Tyr Ser Leu Thr Val Asp Glu Phe Met Asn Ser

        35                  40                  45

Met Gly Gly Ser Gly Lys Asp Phe Gly Ser Met Asn Met Asp Glu Leu

    50                  55                  60

Leu Lys Asn Ile Trp Thr Ala Glu Glu Val Gln Thr Met Gly Gly Glu

65                  70                  75                  80

Glu Ala Val Ser His Leu Gln Arg Gln Gly Ser Leu Thr Leu Pro Arg

                 85                  90                  95

Thr Leu Ser Gln Lys Thr Val Asp Gln Val Trp Lys Asp Ile Ser Lys

            100                 105                 110

Asp His Gly Pro Asn Leu Ala Val Pro Gln Ala Gln Arg Gln Pro Thr

        115                 120                 125

Leu Gly Glu Met Thr Leu Glu Glu Phe Leu Val Arg Ala Gly Val Val

    130                 135                 140

Arg Glu Asp Val Lys Pro Asn Asp Gly Val Phe Val Asp Leu Ser Arg

145                 150                 155                 160

Val Ala Asn Asn Asn Gly Leu Gly Leu Gly Phe Gln Ala Gln Gln Leu

                165                 170                 175

Asn Lys Val Thr Gly Leu Ile Gly Asn Asn Gly Arg Phe Ser Pro Asn

            180                 185                 190

Asp Asp Pro Leu Val Gly Phe Gln Ser Pro Ser Thr Asn Leu Pro Leu

        195                 200                 205

Asn Val Asn Gly Val Arg Ser Ser Asn Gln Gln His Met Gln Ser Pro

    210                 215                 220

Gln Ser Gln Gln Gln Gln Gln Gln His Gln His Gln Gln Gln Ile Phe

225                 230                 235                 240

Pro Lys Gln Pro Val Leu Asn Tyr Ala Thr Gln Met Pro Leu Ser Ser

                245                 250                 255

Asn Gln Gly Met Arg Gly Gly Met Val Gly Leu Ala Pro Asp Gln Gly

            260                 265                 270

Leu Asn Ala Asn Leu Val Gln Gly Gly Gly Ile Gly Met Val Gly Met

        275                 280                 285

Pro Pro Gly Thr Val Gln Leu Ala Thr Ala Ser Pro Ala Asn Gln Met

    290                 295                 300

Ser Ser Asp Lys Leu Gly Lys Ser Asn Gly Asp Thr Ser Ser Val Ser

305                 310                 315                 320

Pro Val Pro Tyr Val Phe Asn Gly Gly Met Arg Gly Arg Lys Ser Asn

                325                 330                 335

Gly Ala Val Glu Lys Val Ile Glu Arg Arg Gln Arg Arg Met Ile Lys

            340                 345                 350

Asn Arg Glu Ser Ala Ala Arg Ser Arg Ala Arg Lys Gln Ala Tyr Thr

        355                 360                 365

Met Glu Leu Glu Ala Glu Val Ala Lys Leu Lys Glu Glu Asn Glu Glu

    370                 375                 380

Leu Gln Lys Lys Gln Glu Glu Ile Met Glu Ile Gln Lys Asn Gln Val

385                 390                 395                 400

Lys Glu Met Met Asn Leu Gln Arg Glu Val Lys Arg Lys Cys Leu Arg

                405                 410                 415

Arg Thr Leu Thr Gly Pro Trp

    420

<210>3

<211>315

<212>DNA

<213>人工序列

<400>3

ccaatccacc tgtaccacac gcataacata ttgaaccctt ttttttgttt tttaacttga     60

tgatttgttc aaaccccaaa cagcttagct ctgctttttt tttttaaaaa aaaattactt    120

ggatgtaaat cgttactagc acaatcaata atatatccat ttttatgtaa agaattgaaa    180

atcggatttt cgttaaattt tattcctgtg tttgaagttt gagtgtgggg gaatttagat    240

ttgtgatttg gatgaggttg tggttgtgtt ttgcttcaga tttgaggaaa ataggtttgg    300

ttagaactta gaagc                                                     315

<210>4

<211>191

<212>DNA

<213>人工序列

<400>4

attgaggatt ggattatgat tccgcagtta agatatatgt atatgtacat acacttgttt     60

tgctgtagat tgaggctttt gtagtttagg ttagtacttt aaaactttaa tgtcttacca    120

acaatttgct tagttaggga gggtatgccc caataccatg agaatgtgtt tcagcaaaaa    180

aaaaaaaaaa a                                                         191

<210>5

<211>36

<212>DNA

<213>人工序列

<400>5

cgagcggccg cccgggcagg tttttttttt tttttt                              36

<210>6

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<400>6

gggtcgatga acatggacga                                                20

<210>7

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<400>7

tatcatcctt ctctgcctcc tctc                                           24

<210>8

<211>29

<212>DNA

<213>人工序列

<400>8

tgtcatctct cccaaagttg gctgtctct                              29

<210>9

<211>29

<212>DNA

<213>人工序列

<400>9

ggcttatacc atggaattgg aagcagaag                              29

<210>10

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<400>10

gccggatcca tgaacttcaa gggcttcggg                             30

<210>11

<211>34

<212>DNA

<213>人工序列

<400>11

cgaggagctc taccatggac cagttagtgt acgt                        34

Claims (13)

1.一种编码bZIP/AREBP类转录因子的基因CkAREB，其核苷酸序列选自SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列或在SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的基础上进行一个或多个核苷酸的保守性替换、缺失、添加或修饰所得到的具有相同功能的核苷酸序列。

2.来源于柠条的bZIP/AREBP类转录因子，其氨基酸序列选自SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列或在SEQ ID No：2所示的氨基酸序列的基础上进行一个或多个氨基酸的保守性替换、缺失、添加或修饰所得到的具有相同功能的氨基酸序列。

3.一种表达载体，包含权利要求1所述的基因。

4.权利要求3所述的表达载体，其为双元农杆菌载体或植物表达载体。

5.权利要求4所述的表达载体，其中所述的植物表达载体含DRE和/或ABRE元件的启动子。

6.一种宿主细胞，包含权利要求3-5任一项所述的表达载体。

7.权利要求6所述的宿主细胞，其为大肠杆菌细胞或农杆菌细胞。

8.权利要求1所述的基因在转化植物获得转基因植物中的应用。

9.权利要求8所述的应用，其中所述植物选自单子叶植物或双子叶植物。

10.权利要求9所述的应用，所述单子叶植物选自由小麦、玉米、水稻、禾本科牧草等组成的组，所述双子叶植物选自由杨树、大豆、棉花、油菜等组成的组。

11.权利要求1所述的基因在提高植物抗逆境胁迫中的应用。

12.权利要求11所述的应用，其中所述逆境胁迫选自由干旱胁迫、盐胁迫等组成的组。

13.一种培育转化权利要求1所述基因的植株的方法，包括构建含权利要求1所述基因的植物表达载体；用所述构建的表达载体转化植物细胞；和将转化的植物细胞培育成转基因植株。

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