CN1922327A - 气孔保卫细胞特异性启动子 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了包含用于核酸序列在植物气孔保卫细胞中选择性表达的AtMYB60基因启动子的基因构件、包含它们的载体和宿主植物。

Description

气孔保卫细胞特异性启动子
本发明涉及重组核酸在植物中的表达。更具体而言，本发明提供了用于在气孔保卫细胞中选择性表达核酸的启动子、含有该启动子的基因构件、带有它们的表达载体和与用其转染的植物。核酸在植物保卫细胞中的选择性表达使得可以调节气孔的打开/关闭状态，由此调节例如增加植物对不利环境条件或气候条件的抵抗力。
发明背景
用于产生转基因植物的组织特异性启动子
植物转化技术的最新进展为提高产量提供了新的机会。按照转基因方法，可以在植物中引入有利于增加植物产量、产品质量和提高植物对不利气候条件和病原体抵抗力的新性状。此外，转基因植物可用于生产重组蛋白、生物聚合物、药物、疫苗或抗体(L.Lanfranco，Riv Biol.，2003，96：31-54；Dunwell JM，J.Exp.Bot.，2000，51：487-496)。
在植物中生产重组蛋白需要使用能够指导转基因在植物组织中正确表达的启动子。迄今为止，建议用于产生转基因植物的启动子数量有限。它们中的大部分是组成型启动子，例如来自花椰菜花叶病毒(CaMV35S)的35S启动子(Odell等人，Nature，1985，313：810-812)或泛素启动子(Holtorf等人，Plant Mol.Biol.，1995，29：637-646)。
与指导重组蛋白在所选择组织或器官中产生的组织特异性启动子不同，这类启动子的缺点在于它们在几乎所有植物组织中有活性，因而妨碍了在转基因株系的特殊器官或特定生长阶段进行转基因的选择性表达。例如，涉及多余物质在种子中积累的启动子，如菜豆碱(Bustos等人，PlantCell，1989，1：839-853)或2S清蛋白(Joseffson等人，J.Biol.Chem.，1987，262：12196-12201)，指导转基因进行种子特异性表达。核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶小亚基的启动子或马铃薯ST-LSI启动子指导转基因进行叶特异性表达(Stockhouse等人，EMBO J.，1989，8：2445)。尽管在文献中已经报道了许多其它的组织特异性启动子或器官特异性启动子，但仅少数对所确定植物细胞类型表现出选择性。这些启动子应当指导转基因表达局限于植物器官的特殊细胞中。
气孔：解剖学和功能
气孔是陆生植物气生器官表面存在的小孔。这些结构在调节植物器官和大气之间的气体流动中起着重要的作用，其允许光合作用所需的CO2流入或者通过蒸腾作用丢失水分。气孔由两个被称为保卫细胞的高度特化的表皮细胞组成，其运动决定了气孔缝裂的打开/关闭(图1)。
气孔的打开程度反映了对用于光合作用的CO2的需要与可提供水分之间的平衡。因此，并不奇怪，陆生植物发展出了复杂的调节机制，作为对环境刺激或内源信号的响应来调节气孔打开/关闭过程(Wilmer和Fricker，1996，Stomata，Ed Chapman和Hall，London，1-375)。
保卫细胞的形状是由膨压改变诱发的体积变化决定的。反过来，膨压是由细胞腔中诸如K+和Cl-的无机溶质或者诸如蔗糖或苹果酸盐的有机溶质的交换而诱导的(Schroeder等人，Ann.Rev.Plant Physiol.Plant Mol.Biol.，2001，52：627-6658)。有利于光合活性的条件，例如存在光和升高的CO2浓度，会促进保卫细胞中溶质的积累，由此增加的膨压诱导气孔打开(图1A)。
相反，在缺水条件下，植物激素脱落酸(ABA)诱导保卫细胞的膨压迅速下降，该过程源自K+、Cl-和蔗糖的流失以及由苹果酸向无渗透压作用的淀粉的转化，由此导致气孔关闭(图1B)。
由ABA积累介导的气孔缝隙减小代表着植物对抗干旱的主要适应性反应，其能够使因蒸腾作用引起的水份流失降到最低(Wilkinson和Davies，Plant Cell Env.，2002，25：195-210)。近来，随着药理学和遗传学方法的发展，已在保卫细胞中鉴定出许多ABA信号传导级联反应中的成分。
ABA诱导的气孔关闭涉及胞质Ca++浓度增加、阴离子通道激活、胞质pH值和钾通道活性改变、氧活性分子的产生、磷酸酶和激酶以及诸如异源三聚体G蛋白、法尼基转移酶和mRNA帽子结合蛋白的其它蛋白质的调节(Schroeder等人，Ann.Rev.Plant Physiol.Plant Mol.Biol.，2001，52：627-6658)。
对激素信号传导机制的调节对气孔的打开/关闭具有直接影响，这为产生抗不利环境或气候条件、尤其是干旱的、且CO2交换得到优化(并且因此光合作用过程得到优化)的作物提供了的有价值的手段。
技术背景
由ABA诱导的气孔内信号传导的调节使保卫细胞能够针对环境刺激改变生理响应。涉及气孔闭合机制的许多成分是已知的。然而，对气孔活性的调节受限于保卫细胞特异性的启动子的低可用性。
尽管在文献中已经描述了在保卫细胞中具有功能的大量的启动子序列，其中没有一个具有充分的选择性。涉及对气孔缝隙调节的拟南芥属(Arabidopsis)基因启动子，例如Osm1(Zhu等人，Plant Cell，2002，14：3009-3028)、Abh1(Hugouvieux等人，Cell，2001，106：477-487)、Rac1(Lemichez等人，Genes Dev.，2001，15：1808-1816)、Kat1(Anderson等人，Proc.Natl.Acd Sci.U.S.A.，1992，89：3736-3740)、Ost1(Mustilli等人，Plant Cell，2002，14：3089-3099)、Chl1(Guo等人，Plant Cell，2001，13：1761-1777)，不仅在保卫细胞具有活性而且在不同的细胞类型和植物器官中也具有活性。缺乏选择性妨碍了这类启动子在产生具有改变的气孔活性的转基因植物中的应用。
除了调节气孔关闭，ABA还调节植物生理和生长的许多方面，包括种子潜伏期、贮藏蛋白和脂质的合成、相变和对创伤或病原体的反应(Finkelstein等人，Plant Cell，2002，S15-S45)。
使用非特异性的启动子使激素信号传导调节因子异位表达时可以在包括气孔保卫细胞在内的不同植物组织和器官中引起改变的反应。结果产生缺损和异常，从而负面影响植物的生理机能、生长和生产力。
发明简述
本发明提供了一种通过使用AtMYB60基因启动子序列(Atlg08810；cDNA序列置于GenBank登录号AF062895中)使核酸在植物气孔保卫细胞中选择性表达的方法。具体而言，本发明基于以下发现，即AtMYB60启动子的不同区域能够使核酸在气孔保卫细胞进行ABA响应性或ABA非依赖性的选择表达。
根据第一个实施方案，本发明提供了用于在植物气孔保卫细胞中选择性表达核酸序列的基因构件或表达盒，所述构件或表达盒含有与AtMYB60基因的启动子序列(SEQ ID No.1)或其片段或变异体功能性连接的核酸序列，所述变异体与SEQ ID No.1具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％的序列同一性，其前提条件是所述片段或变异体保留了对核酸转录的启动子活性。
根据优选的实施方案，本发明的构件或表达盒包含全长AtMYB60启动子序列(SEQ ID No.1)的片段，该片段选自SEQ ID No.2(从SEQ ID No.1的核苷酸(nt)1045到1291)、SEQ ID No.3(从SEQ ID No.1的核苷酸(nt)689到1291)和SEQ ID No.4(从SEQ ID No.1的核苷酸(nt)293到1292)。
尽管从SEQ ID No.1的nt 1045延伸到1291的片段呈现出ABA非依赖的启动子活性，更大片段、特别是包含了SEQ ID No.3和4的片段以及全长启动子(SEQ ID No.1)的活性可被脱落酸下调。因此，根据本发明，可应用不同的基因构件或表达盒以ABA依赖或ABA非依赖方式调节核酸的气孔特异性表达。
本发明的表达盒或构件除了包含具有转录启动子活性的AtMYB60基因区以外，还可包含涉及转录调节的基因元件，例如内含子、基因3’末端的多聚腺苷酸化位点、转录激活因子或增强子、终止序列、选择标记和前导序列。
任何核酸可以与AtMYB60启动子有效连接并插入本发明的表达盒或构件中。具体而言，在表达盒构建中可使用编码序列和非编码序列。所编码的产物，无论是肽、蛋白质还是RNA转录物，优选涉及由脱落酸(ABA)调节的细胞内信号传导途径以及调节气孔打开/关闭状态的细胞机制。
根据本发明的优选实施例，AtMYB60启动子、其片段或变异体功能性连接于i)涉及控制气孔缝隙的基因，具体是Osm1、Rac1、Kat1、Ost1和Chl1基因(见上面的各自参考文献)，ii)涉及控制光诱导气孔打开的基因，具体是保卫细胞的蓝光受体PHOT1和PHOT2基因(Kinoshita T等人，Nature.2001，414：656-60)、编码14-3-3蛋白的基因(BaunsgaardL等人，Plant J.1998，13：661-71)、和双亲和性硝酸盐转运蛋白的基因AtNRT1.1(CHL1)(Guo FQ等人，Plant Cell.2003，15：107-17)，iii)涉及控制ABA诱导的气孔关闭的基因，具体是编码下列蛋白的基因：2C型蛋白磷酸酶ABI、ABI2和AtP2C-HA(Leung J等人，Plant Cell.1997，9：759-71；Leonhardt N等人，Plant Cell.2004，16：596-615)、PP2A蛋白磷酸酶RCN1(Kwak JM等人，Plant Cell.2002，14：2849-61)、AAPKCa++非依赖的蛋白激酶OST1(Mustilli AC等人，J.Plant Cell.2002，14：3089-99)、类SOS3钙结合蛋白SCaBP5和它的相互作用蛋白激酶PKS3(Guo Y等人，Dev Cell.2002，3：233-44)、AtrbohD和AtrbohF NADPH氧化酶(Kwak，J.M.等人，EMBO J.，2003，22：2623-33)、GTP酶AtRac1(Lemichez E等人，Genes Dev.2001，15：1808-16)、GTP结合蛋白α亚基GPA1(Wang XQ等人，Science.2001，29：292：2070-2)、突触融合蛋白OSM1/SYP61(Zhu，J.等人，Plant Cell，2002，14：3009-28)、法尼基转移酶β亚基ERA1(Pei ZM等人，Science.1998，282：287-90)、硝酸盐还原酶NIA1和NIA2(Desikan R等人，Proc Natl Acad Sci USA.2002，99：16314-8)、K+ in通道KAT1、KAT2、AKT2(Kwak JM等人，Plant Physiol.2001，127：473-85)、K+ out通道GORK(Hosy E等人，ProcNatl Acad Sci USA.2003，100：5549-54)、核RNA帽子结合复合体ABH1亚基(Hugouvieux V等人，Cell.2001，106：477-87)、类Sm的snRNP蛋白质SAD1(Xiong L等人，Dev Cell.2001，1：771-81)和同源异型框亮氨酸拉链转录因子ATHB6(Himmelbach A等人，Grill E.，EMBO J.2002，21：3029-38)。
备选地，控制在宿主细胞中行使特殊功能的RNA转录物产生的核酸序列、尤其是反义RNA和siRNA可以插入到本发明的表达盒或构件中。
如本文所使用，“功能性连接的”和“有效连接的”指构成本发明表达盒或构件的启动子和核酸是以使得启动子能够指导核酸表达的方式相互定位，通常是5’-3’方向。
在另一方面，本发明还涉及带有本文提供的基因构件或表达盒的表达载体。该载体可以是细菌质粒、细菌人工染色体(BAC)、酵母人工染色体(YAC)、病毒载体、用于DNA直接转移的载体、或优选的用于农杆菌(Agrobacterium)介导的DNA转移的载体。后者可以是整合载体或双元载体，并且可包含选择标记例如抗生素抗性基因或除草剂抗性基因、有利于鉴定和筛选转化细胞的报告基因或者调节植物中基因表达的序列。
DNA直接转移可包括原生质体显微注射、电穿孔和基于用DNA包被的微粒轰击植物的生物射弹技术。
在另一方面，本发明还提供了含有本发明基因构件的转基因植物(单子叶植物或双子叶植物)及其营养部分或繁殖部分或者种子。在优选的实施方案中，本发明的构件或表达盒用于在密切相关的作物物种，例如油菜及包括大豆、番茄、烟草、马铃薯、棉花的其它双子叶植物或者诸如玉米、小麦、大麦、水稻的单子叶植物种的保卫细胞中表达蛋白质。
用转基因载体或裸DNA转化植物的方法是本领域技术人员所熟悉的。例如，处于萌芽期的种子、幼苗或成体植物可用带有异源基因构件的农杆菌感染并在适宜条件下生长。
精细调节气孔功能的可能性为产生能够有效响应气候改变的植物提供了重要手段。具体而言，该可能性，即抑制ABA刺激的反应由此增加气孔打开程度和因此导致的光合作用过程所需CO2的流入，对于在水源并非环境限制因素地区种植的植物而言尤其重要。相反，减少气孔缝隙以避免蒸腾作用引起的水分丢失对于在干旱地区种植的植物尤其有益。
发明详述
AtMYB60启动子序列的特征
AtMYB60是拟南芥R2-R3MYB转录因子大家族的成员。为了检测生长于标准条件下的野生型拟南芥植物中的表达情况，将位于转录起始密码子上游或终止密码子下游的基因间区域的不同部分分别克隆到GFP(绿色荧光蛋白)和GUS(β-葡糖醛酸糖苷酶)报告基因的上游和下游(图2B)。
将如此获得的构件导入拟南芥，所产生的转基因株系用于组织学分析以检测报告基因的表达范围。在所有经过检测的样品中，仅在具有气孔的全部植物气生器官的保卫细胞中发现报告基因的表达(图3-6)。
经p1.3-2.2:GUS构件转化的株系
将对应于1号染色体的nt 2821639(Atlg08820基因的3’UTR序列)和nt 2820349(AtMYB60基因-Atlg08810的3’UTR序列)之间基因组区域的互补和倒转序列克隆入GUS报告基因的上游(图2A、B和图7)，这里所提到的名称是依照http：//www.arabidopsis.org上的“拟南芥信息资源”所用的命名法。
AtMYB60下游的且由终止密码子与Atlg08800的5’UTR之间区域组成的基因间区域被插入同一GUS报告基因的下游(图2A、B)。在该构件中所用的基因组区域包含完整的AtMYB60启动子和位于3’区的假定调节元件。
随后，通过用p1.3-2.2:GUS构件转化得到T2植物，分析T2植物以确定报告基因的表达情况。仅在提供该解剖结构和任何生长阶段的所有植物器官的气孔保卫细胞中发现GUS染色(图3)。下文将详细描述与植物不同部分和不同生长阶段相关的结果。
幼苗
在4天和7天时，即分别在子叶伸展阶段和在叶出现时期分析幼苗。在子叶、初生叶和下胚轴的气孔保卫细胞中观察到强的GUS染色(图3)。在初生根和它的侧枝上没有发现染色。
成体植物
分析7周龄植物的营养器官和生殖器官。GUS染色存在于来自基生莲座叶、茎生叶和茎的气孔保卫细胞中(图4A、B、C)。
对于花器官，发现在萼片、雌蕊、花药的气孔保卫细胞和在未成熟的长角果中检测到GUS染色(图4D、E、F、G)。在缺乏气孔的花瓣上未发现任何染色。
经p1.3:GUS、p0.9:GFP、p0.6:GUS、p0.2:GUS和p189:GUS构件转化的株系
为了证实从p1.3-2.2:GUS构件转化的植物所获得的结果并且为了确定对于指导报告基因进行气孔特异性表达必需且足够的基因组区域，制备如下构件(图2B)。
-p1.3:GUS，含有与在p1.3-2.2GUS中使用相同的AtMYB60上游基因间区域，该区域被克隆在GUS报告基因前面。
-p0.9:GFP，含有AtMYB60上游999bp的基因组片段，该片段被克隆在GFP报告基因前面(GFP活性可通过共聚焦显微镜方法检测)。
-p0.6:GUS，含有AtMYB60上游603bp的基因组片段，该片段被克隆在GUS报告基因前面。
-p0.2:GUS，含有AtMYB60上游246bp的基因组片段，该片段被克隆在GUS报告基因前面。
-p189:GUS，含有AtMYB60上游189bp的基因组片段，该片段被克隆在GUS报告基因前面。
如图5所示，除了p189:GUS之外，所有被分析的构件表现出的表达情况与用p1.3-2.2:GUS构件转化的植物中的表达情况相同。仅在来自全部幼苗或具有气孔缝隙的植物结构的气孔保卫细胞中存在两种报告基因活性。
具体而言，用共聚焦显微镜分析来自p0.9:GFP转化株系，明确显示出报告基因的表达局限于气孔保卫细胞，在任何其它细胞类型中没有信号(图6)。
ABA诱导的对报告基因表达的调节
近来研究表明，由脱落酸(ABA)介导的转录调节代表对气孔生理反应的重要控制。因此，在上述转基因株系中检测施用外源ABA对GUS和GFP报告基因表达的影响。用半定量RT-PCR开展表达分析，结果表明，施用ABA可显著降低p1.3-2.2:GUS、p1.3:GUS和p0.6:GUS株系中GUS报告基因转录物的水平(图7)。使用p0.9:GFP株系的GFP报告基因得到了同样的结果。相反，用ABA处理的p0.2:GUS株系中GUS表达未见改变(图7)。这些结果表明，与AtMYB60启动子(SEQ ID No.1)融合的基因的表达被ABA下调。此外，这些结果还表明，负责负向转录调节的顺式元件位于AtMYB60翻译起始密码子上游核苷酸-603到-246之间。
因此，完整的启动子序列SEQ ID No.1或包含ATG密码子上游246bp部分的片段能够使转基因在气孔保卫细胞中以ABA非依赖方式表达。
附图简述
图1-气孔解剖学及功能
存在于拟南芥植物叶表面的气孔的光学显微镜照片(标尺＝5μm)。存在于土壤植物大多数气生器官表皮上的气孔由两个高度特化的保卫细胞(g)形成。保卫细胞中的膨压改变引起气孔缝裂打开(A栏)或关闭(B栏)。
图2
(A)含有AtMYB60基因的基因组区域示意图。显示了Atlg08820基因最后一个外显子的末端部分、AtMYB60(Atlg08810)编码区的三个外显子和Atlg08800基因第一个外显子的起始部分。
(B)含有GUS和GFP报告基因的构件示意图，报告基因受从Atlg08820到AtMYB60之间不同部分的基因间区域的控制。p1.3-2.2:GUS构件还包含从AtMYB60和Atlg08800之间的全部基因间区域，此段序列被插入到GUS报告基因下游。每一基因组区域的长度用bp数值表示。
图3-在来自用p1.3-2.2:GUS构件转化株系的幼苗中，GUS报告基因的气孔特异性表达
A)报告基因GUS在第4天幼苗中的表达。仅在子叶(c)和下胚轴(i)的气孔保卫细胞中存在染色。在根(r)中没有染色信号。
B)子叶(细节)。
C)7天幼苗的叶表皮(细节)。
图4-在来自用p1.3-2.2:GUS构件转化株系的成体植物中GUS报告基因的气孔特异性表达
A)报告基因GUS在7周成体植物叶中的表达
B)叶(细节)
C)茎(细节)
D)成熟花序：GUS染色仅存在于萼片的气孔
E)成熟花：GUS染色仅存在于萼片、花药和雌蕊的气孔
F)雌蕊(细节)
G)花药(细节)。
图5-在来自用p1.3:GUS、p0.6:GUS、p0.2:GUS和p189:GUS构件转化株系的成体植物中GUS报告基因的表达
不同构件转化株系的染色实例：
A)和B)4天幼苗
C)莲座叶
D)茎
F)成熟花
G)和H)经p189:GUS构件转化植物的莲座叶气孔。
图6-在来自用p0.9:GFP构件转化株系的成体植物中GUS报告基因的气孔特异性表达
A)GFP报告基因在7周成体植物叶中的表达(标尺＝1μm)
B)用共聚焦显微镜检测的GFP报告基因在茎中的表达(标尺＝20μm)
C)用共聚焦显微镜检测的叶气孔的细节(标尺＝2μm)
图7-用ABA处理的植物中GUS和GFP报告基因的表达
转基因株系用100μM ABA处理6小时，RT-PCR分析GFP和GUS报告基因的表达。TSB1基因用作对照。
材料和方法
植物生长
用于盘内生长的种子灭菌步骤如下：无水乙醇5分钟，含0.6％(v/v)次氯酸钠、0.05％吐温20的溶液5分钟，无菌水冲洗两次。将种子重悬于0.1％的琼脂糖无菌溶液，置于陪替氏培养皿中萌发，培养皿内含有0.7％琼脂化的MS培养基(Sigma M-5519)并添加了1％的蔗糖，pH 5.7。培养皿于4℃黑暗中放置4天使其统一萌发，而后放置于22℃、16小时光照(48μE/m2)和8小时黑暗周期中培养。
用于土培生长，将种子在4℃黑暗中放置4天，而后在置于Araflat盘(Arasystem，Betatech，Belgium)或培养瓶的Einheitserde土壤(VM-型，Manna-意大利)中萌发，以16小时光照(48μE/m2)-8小时黑暗周期培养。
基因组DNA提取
生长于培养盘中的幼苗以及取自土培植物的花或叶放入Eppendorf管并在液氮中冷冻。组织在500μl提取缓冲液(7M尿素、350mM Na2SO4、50mM Tris pH 8.0、8mM EDTA、34mM的N-十二烷基肌氨酸钠)用固定在台钻上的塑胶头切碎。然后加入等体积的苯酚和氯仿(1∶1v∶v)，经涡旋混合后以13000转/分离心样品5分钟。将上清液置于干净的管中，加入400μl蒸馏水和0.7倍体积的异丙醇。在13000转/分离心样品10分钟沉淀DNA。吸去异丙醇，用300μl的80％乙醇洗涤沉淀。移去乙醇，将DNA重悬于40μl的50mM Tris-HCl pH 8.0，20μg/ml的5mM EDTA中。加入2μl的20mg/ml的Rnase A(Boehringer)，并将样品于37℃孵育30分钟。将提取的DNA保存于-20℃。
AtMYB605’和3’基因组区域的扩增
P60R5NEW引物(5’TCGGATCCTCTAGATCTCTCTG 3’)与下表所报道的引物组合用于扩增AtMYB60基因上游的不同部分区域。在P60R5NEW引物中引入了一个BamHI限制性酶切位点(GGATCC)。
引物 序列5’-3’  与P60F1引物扩增的区域 构件
P60F1 AAGCTTCACAAGGACACAAGGACA 1291bp   p1.3:GUSp1.3-2.2:GUS
  P60F8   ATAGAATCTAACACTACTAATTGTTAT   999bp   p0.9:GFP
  P60F2bis   AAGCTTCAAGTTGCAGTGAATGA   603bp   p0.6:GUS
  P60F3   AAGCTTCGTGTGGAGATCAACAT   246bp   p0.2:GUS
  P60F5   AAGCTTGCAGAGTGACTCGTGA   189bp   P189:GUS
序列 AAGCTT对应着HindIII限制性酶切位点，引入该位点以利于基因组片段的克隆。
使用引物60-3’UTRF2(5’CACTTGATGGAGCTCTCTAATATG 3’)和60-3’UTRR1(5’CTGCAGACGTTTGTCTAGTAG 3’)扩增了长度为2219bp的3’基因组区域。
使用0.5μg基因组DNA开展PCR反应，反应混合物含有Red TaqPCR反应缓冲液1×(Sigma)，dATP、dCTP、dGTP和dTTP(每种5mM)，引物(每种25μM)，1单位Red TaqTM聚合酶(Sigma)，并用无菌蒸馏水补足终体积为25μl。扩增反应进行如下：94℃下1分钟；94℃下15秒，在对所用引物对特异性的退火温度下15秒，72℃下1分钟，共40个循环；72℃下10分钟。反应产物用缓冲液为TBE 1×(89mM Tris-碱、89mM H2BO3、2mM EDTA pH 8)的1％(w/v)琼脂糖凝胶电泳分离，UV透射仪分析。将获得的条带从琼脂糖凝胶上切下，用Qiaquick凝胶提取试剂盒(Quiagen)并按照产品说明书纯化。
含有与报告基因融合的不同基因组区域的构件的制备
-p0.9:GFP构件
按照产品说明书，将999bp的基因组片段克隆入pCRII-TOPO载体(Invitrogen)。随后，用EcoRI将片段切割下来，使用Klenow(Roche)并按照产品说明书将片段末端平端化。将如此获得的片段插入到事先用HindIII消化并用Klenow处理的含GFP报告基因的双元载体pBINmGFP-ER中。
-p1.3-2.2:GUS构件
按照产品说明书，将1291bp的基因组片段克隆入pCR4-TOPO载体(Invitrogen)。随后用HindIII、BamHI切割下该片段，并将其克隆入含GUS报告基因的双元载体pBI101.3(Stratagene)的HindIII、BamHI位点，产生p1.3:GUS载体。将对应于AtMYB60的3’区域的2219bp的基因组片段插入pCRII-TOPO载体，随后用EcoRI酶切。将由此产生的EcoRI片段插入p1.3:GUS载体的转录终点下游的EcoRI位点，以产生p1.3-2.2:GUS载体。
-p0.6:GUS构件
按照产品说明书，将603bp的基因组片段克隆入pCR4-TOPO载体(Invitrogen)。随后用HindIII、BamHI切割下该片段，并将其克隆入载体pBI101.3(Stratagene)的HindIII、BamHI位点。
-p0.2:GUS构件
按照产品说明书，将246bp的基因组片段克隆入pCR4-TOPO载体(Invitrogen)。随后用HindIII、BamHI切割下该片段，并将其克隆入双元载体pBI101.3(Stratagene)的HindIII、BamHI位点。
-p189:GUS构件
按照产品说明书，将189bp的基因组片段克隆入pCR4-TOPO载体(Invitrogen)。随后用HindIII、BamHI切割下该片段，并将其克隆入双元载体pBI101.3(Stratagene)的HindIII、BamHI位点。
植物转化
属于哥伦比亚生态型的野生型拟南芥(Arabidopsis thaliana)生长于22℃、光周期为16小时光照/8小时黑暗的条件下。为了增加种子产量，将植物的一级花序去除，植物继续生长5-6天直到长出二级花序。在转化前，将所有的长角果除去。按照Clough-Bent的方法(Clough和Bent，Plant J.，1998，16：735-743)，通过“浸花法”用农杆菌属GV3101株转化植物。
来自转基因植物的无菌的T1种子于4℃黑暗放置4天，随后在已添加0.8％细菌培养用琼脂(Difco 0141-01)pH 5.7和100μg/ml卡那霉素的MS土壤(Sigma M-5519)中萌发。植物在22℃、光周期为16小时光照/8小时黑暗的条件下生长。
GUS分析
将幼苗、莲座叶和茎生叶、茎、花序和长角果放于含有2.0ml GUS-染色溶液(100mM磷酸钠pH 7.0、0.1％Triton X-100、1mg/ml X-gluc、0.5mM亚铁氰化物)的微量滴定板孔内。微量滴定板真空干燥10分钟，于37℃黑暗孵育过夜。去除GUS染色溶液，用无水乙醇洗涤组织数次，时间达1小时，直到染色被完全除去。将组织保存于-20℃的70％乙醇中。
用OLYMPUS SZX12体视镜(7×-90×放大倍数)检测报告基因表达情况。
共聚焦显微镜分析
将用于共聚焦显微镜分析的样品置于带有盖玻片的载玻片上(COVERWELL PERFUSION CHAMBER OBLONG-Sigma)，样品浸于含有0.3％脱乙酰吉兰糖胶、1％蔗糖和1/2MS pH 5.8(GELRITEGELLANGUM Sigma)的溶液中。然后，将组织玻片倒置。
用TCS NT共聚焦显微镜(LEICA)进行分析，该显微镜配备有一个带有用于GFP(激发光为488nm，发射光为519nm)的滤光片的氩氪激光器。在不同放大倍数下的重复扫描数次。
ABA处理和RT-PCR分析
用上述方法将来自不同转基因植物株系的种子灭菌，并置于含有1％蔗糖和0.5g/L MES的液体MS土壤中萌发。在连续振荡(120转/分)条件下生长三周后，加入终浓度为100μM的ABA。用于mRNA提取的组织在0时间和处理后6小时取出。通过在500μl提取缓冲液(1M Tris HClpH 9、20％十二烷基硫酸钠、4M LiCl和10mM EDTA)中将冷冻组织切碎来提取总RNA。
经过苯酚、氯仿抽提后，在4M LiCl中于4℃沉淀RNA，用70％乙醇洗涤RNA并重溶于焦磷酸二乙酯(1‰DEPC)处理水中。用Dnase I(15单位-Boheringer Mannheim)并按照制造商的方法将5μg总RNA处理30分钟。使用反转录酶SuperscriptTM II(Life Technologies)并按照产品说明书开展反转录反应，反转录所用引物为由17个dT残基和接头5’-GGGAATTCGTCGACAAGC-3’形成的Oligo(dT)引物。将cDNA样品进行扩增，PCR反应混合物包含Red Taq PCR反应缓冲液1×(Sigma)和5mM dATP、dCTP、dGTP及dTTP、25μM特异性引物(见下表)、1单位RED TaqTM聚合酶(Sigma)，并用无菌蒸馏水补足终体积为25μl。扩增反应条件如下：94℃下1分钟；94℃下15秒，60℃下15秒，72℃下1分钟，20个循环；72℃下10分钟。PCR产物用1％琼脂糖凝胶分离，在0.4N NaOH条件下转移至Hybond N+滤膜(Amersham)。滤膜用TSB1特异性探针、GUS特异性探针或GFP特异性探针杂交，探针由下表列出的引物扩增获得，并使用DIG-High Prime试剂盒(Roche)并按照产品说明书进行地高辛标记。
 引物   基因   序列5’-3’
 TSFB1   TSB1   5’-CTCATGGCCGCCGGATCTTGA-3’
 TSBR1   TSB1   5’-CTTGTCTCTCCATATCTTGAGCA-3’
 GFPF1   GFP   5’-GGAGAAGAACTTTTCACTGGAGTTGTCCC-3’
 GFPR1   GFP   5’-TAGTTCATCCATGCCATGTGTAATCCCAGC-3’
 GUSF1   GUS   5’-AATAACGGTTCAGGCACAGC-3’
 GUSR1   GUS   5’-CTGTGGAATTGATCAGCGTTG-3’
                              序列表
<110>米兰大学(UNIVERSITA’DEGLI STUDI DI MILANO)
<120>气孔保卫细胞特异性启动子
<130>7170meur
<160>18
<170>PatentIn版本3.1
<210>1
<211>1291
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>1
cacaaggaca caaggacata tggtatgatg atatgctttg tttctctgct tctcttacta     60
atttgaagct gttggattga tttgtctctt cttacgttcc cttctttttt ttttcgtttt    120
cttttgtcgt atagaccagg caggggctag ggcctagtga tgggtattgg cccaatacta    180
ttgggttatt tgcctggttt attatttcga ttttaggtta attcaatttt aagaatacgt    240
agatttgttt ggtttagttt ggtttggttg cactaagttc ggttttacat aaatagaatc    300
taacactact aattgttata cgtaaaatac aacaacaata acagattttt cgtttcaatt    360
ttcgtttaag agggtagaca ttttggtttg gtttggttca tttttttttt ccctttcaaa    420
ttcacatcct tcacgtagat gacaaaataa agaaaaacat gaatgaaagt tgtaacttgt    480
aagcatcaac atggaaatca tatcacaaag aacacaaatc taactaatgg gtcttttcac    540
atattggtat aattataagt tgtaagaata ttagttaaac agaggcaacg agagatgcgt    600
gatatatgaa aagttgaaaa caaaagacat ggatctaaag agtcaagcaa aatgtaatat    660
ctttttttct tctaaacttg aggatgtcca agttgcagtg aatgattccc tttaatcatg    720
gagaaattca atgaaataat tgtgtttctt cccacacttt atctttattt attttcttac    780
cacaattaca actattatca caaaaatgta agtaacatag cttgtgactc ttcttccatt    840
tatgagttga ttatcactat atttataagt aattaccaac gaatgttcca aattaagcaa    900
aatattgtaa tcgatacact atgtattcat ctacaatatg ttaacgagct ccttttatgg    960
aaatatttcg attgaaaaaa catttgatgg atcgttcact aaataaataa tccagtaacg   1020
ttttcttaag ggagatatac atattcgtgt ggagatcaac atatcttcgt taattgacta   1080
cgcaaaatag ttaatggaaa aggcagagtg actcgtgagc ttggcagatc caaaagaggt   1140
tgtcaagaaa aagcagattt aaaagttctt ccctcttctt taagtcaccc attaatttca   1200
catatatgta catacatgtt gcatttaact catatacata catattctca catctataaa   1260
gagagcataa gactcagaga gatctagagg a                                  1291
<210>2
<211>246
<212>DNA
<213>拟南芥
<400>2
cgtgtggaga tcaacatatc ttcgttaatt gactacgcaa aatagttaat ggaaaaggca     60
gagtgactcg tgagcttggc agatccaaaa gaggttgtca agaaaaagca gatttaaaag    120
ttcttccctc ttctttaagt cacccattaa tttcacatat atgtacatac atgttgcatt    180
taactcatat acatacatat tctcacatct ataaagagag cataagactc agagagatct    240
agagga                                                               246
<210>3
<211>603
<212>DNA
<213>拟南芥
<400>3
caagttgcag tgaatgattc cctttaatca tggagaaatt caatgaaata attgtgtttc     60
ttcccacact ttatctttat ttattttctt accacaatta caactattat cacaaaaatg    120
taagtaacat agcttgtgac tcttcttcca tttatgagtt gattatcact atatttataa    180
gtaattacca acgaatgttc caaattaagc aaaatattgt aatcgataca ctatgtattc    240
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ggatcgttca ctaaataaat aatccagtaa cgttttctta agggagatat acatattcgt    360
gtggagatca acatatcttc gttaattgac tacgcaaaat agttaatgga aaaggcagag    420
tgactcgtga gcttggcaga tccaaaagag gttgtcaaga aaaagcagat ttaaaagttc    480
ttccctcttc tttaagtcac ccattaattt cacatatatg tacatacatg ttgcatttaa    540
ctcatataca tacatattct cacatctata aagagagcat aagactcaga gagatctaga    600
gga                                                                  603
<210>4
<211>999
<212>DNA
<213>拟南芥
<400>4
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tttcaatttt cgtttaagag ggtagacatt ttggtttggt ttggttcatt ttttttttcc    120
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tctataaaga gagcataaga ctcagagaga tctagagga                           999
<210>5
<211>22
<212>DNA
<213>未知
<220>
<223>人工合成的引物
<400>5
tcggatcctc tagatctctc tg                                              22
<210>6
<211>24
<212>DNA
<213>未知
<220>
<223>人工合成的引物
<400>6
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<210>7
<211>27
<212>DNA
<213>未知
<220>
<223>人工合成的引物
<400>7
atagaatcta acactactaa ttgttat                                         27
<210>8
<211>23
<212>DNA
<213>未知
<220>
<223>人工合成的引物
<400>8
aagcttcaag ttgcagtgaa tga                                             23
<210>9
<211>23
<212>DNA
<213>未知
<220>
<223>人工合成的引物
<400>9
aagcttcgtg tggagatcaa cat                                             23
<210>10
<211>22
<212>DNA
<213>未知
<220>
<223>人工合成的引物
<400>10
aagcttgcag agtgactcgt ga                                              22
<210>11
<211>24
<212>DNA
<213>未知
<220>
<223>人工合成的引物
<400>11
cacttgatgg agctctctaa tatg                                            24
<210>12
<211>21
<212>DNA
<213>未知
<220>
<223>人工合成的引物
<400>12
ctgcagacgt ttgtctagta g                                               21
<210>13
<211>21
<212>DNA
<213>未知
<220>
<223>人工合成的引物
<400>13
ctcatggccg ccggatcttg a                                               21
<210>14
<211>23
<212>DNA
<213>未知
<220>
<223>人工合成的引物
<400>14
cttgtctctc catatcttga gca                                             23
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<211>29
<212>DNA
<213>未知
<220>
<223>人工合成的引物
<400>15
ggagaagaac ttttcactgg agttgtccc                                       29
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<212>DNA
<213>未知
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<223>人工合成的引物
<400>16
tagttcatcc atgccatgtg taatcccagc                                      30
<210>17
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<212>DNA
<213>未知
<220>
<223>人工合成的引物
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<210>18
<211>21
<212>DNA
<213>未知
<220>
<223>人工合成的引物
<400>18
ctgtggaatt gatcagcgtt g                                               21

Claims (14)

1.用于核酸序列在植物气孔保卫细胞中选择性表达的基因构件，所述构件包含与启动子SEQ ID No.1或具有启动子活性的其片段或变异体功能性连接的核酸序列。
2.根据权利要求1所述的构件，其中所述启动子片段包含SEQ ID No.2。
3.根据权利要求1所述的构件，其中所述启动子片段包含SEQ ID No.3。
4.根据权利要求1所述的构件，其中所述启动子片段包含SEQ ID No.4。
5.根据权利要求1所述的构件，其中核酸序列或所编码产物涉及受脱落酸(ABA)调节的细胞内信号传导途径。
6.根据权利要求5所述的构件，其中所述核酸序列包含Osm1、Rac1、Kat1、Ost1或Chl1基因的编码序列。
7.根据权利要求5所述的构件，其中所述核酸序列编码反义RNA。
8.包含根据权利要求1-7的基因构件的植物表达载体。
9.根据权利要求8所述的载体，该载体是细菌质粒、细菌人工染色体(BAC)、酵母人工染色体(YAC)、病毒载体或用于农杆菌(Agrobacterium)介导DNA转移的载体。
10.根据权利要求9所述的载体，该载体是用于农杆菌介导DNA转移的双元载体。
11.包含根据权利要求8-10的载体或根据权利要求1-7的基因构件的单子叶植物或双子叶植物。
12.根据权利要求1-7的基因构件或者根据权利要求8-10的载体的用途，其用于核酸序列在气孔保卫细胞中选择性表达。
13.根据权利要求12所述的用途，其中所述异源序列涉及对气孔打开/关闭的调节。
14.调节核酸序列在植物中表达的方法，其包括向所述植物、其营养部分或繁殖部分导入根据权利要求1-7的基因构件或根据权利要求8-10的载体。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103555735A (zh) * 2007-04-27 2014-02-05 加利福尼亚大学董事会 植物co2传感器、编码它们的核酸以及制造和使用它们的方法
CN105051197A (zh) * 2013-03-15 2015-11-11 先正达参股股份有限公司 保卫细胞表达盒组成及其使用方法
CN107287195A (zh) * 2017-05-18 2017-10-24 青岛农业大学 一种在保卫细胞专一表达启动子及其创建方法
CN111197045A (zh) * 2020-01-10 2020-05-26 蒙树生态建设集团有限公司 一种保卫细胞特异性启动子及用途
CN112795693A (zh) * 2021-03-24 2021-05-14 湖南农业大学 与玉米叶片叶绿素含量相关的分子标记及其应用

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2069507B1 (en) 2007-01-31 2014-06-04 BASF Plant Science GmbH Plants having enhanced yield-related traits and/or increased abiotic stress resistance, and a method for making the same
WO2010093954A2 (en) 2009-02-13 2010-08-19 The Regents Of The University Of California Control of plant stress tolerance, water use efficiency and gene expression using novel aba receptor proteins and synthetic agonists
US9145562B2 (en) 2009-11-20 2015-09-29 Alberta Innovates—Technology Futures Variegation in plants
US20130055471A1 (en) 2009-12-15 2013-02-28 Edwin Henricus Antonius HOLMAN Transgenic Ozone-Resistant Plants
AR081242A1 (es) 2010-04-28 2012-07-18 Univ California Receptores pyr/pyl modificados activados por ligandos ortogonales
EP2670232A4 (en) * 2011-02-01 2014-12-03 Univ California COMPOSITIONS AND METHODS FOR CONTROLLING CARBON DIOXIDE (CO2) -REGULATED SPINDING OPTIONS AND WATER TRANSPIRATION AND WATER UTILIZATION EFFICIENCY IN PLANTS
AP2014007355A0 (en) 2011-07-01 2014-01-31 Univ California Constitutively active ABA receptor mutants
WO2013012889A2 (en) * 2011-07-19 2013-01-24 Grassroots Biotechnology, Inc. Regulatory polynucleotides and uses thereof
MX2014001689A (es) * 2011-08-12 2014-05-27 Bayer Cropscience Nv Expresion especifica de celula guardiana de transgenes en algodon.
WO2013057507A2 (en) 2011-10-21 2013-04-25 The University Of Nottingham Methods for improving abiotic stress response
WO2014159394A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 The Regents Of The University Of California Modified pyr/pyl receptors activated by orthogonal ligands
EP3289089B1 (en) 2015-04-27 2023-03-01 The Regents of The University of California CONTROLLING FUNGAL PATHOGENS BY DISABLING THEIR SMALL RNA PATHWAYS USING RNAi-BASED STRATEGY
IT202200010913A1 (it) 2022-05-25 2023-11-25 Sipcam Oxon S P A Pianta di soia caratterizzata da elevata resistenza alla siccità

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19904754A1 (de) * 1999-02-05 2000-08-10 Max Planck Gesellschaft Verwendung regulatorischer cis-aktiver Elemente zur Herstellung von Promotorkonstrukten für eine schließzellspezifische Genexpression
US6653535B1 (en) * 1999-05-28 2003-11-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for modulating water-use efficiency or productivity in a plant by transforming with a DNA encoding a NAPD-malic enzyme operably linked to a guard cell or an epidermal cell promoter
US20020199219A1 (en) * 2000-06-14 2002-12-26 The Regents Of The University Of California Modulation of abscisic acid signal transduction in plants

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103555735A (zh) * 2007-04-27 2014-02-05 加利福尼亚大学董事会 植物co2传感器、编码它们的核酸以及制造和使用它们的方法
CN103555735B (zh) * 2007-04-27 2016-03-09 加利福尼亚大学董事会 植物co2传感器、编码它们的核酸以及制造和使用它们的方法
CN105051197A (zh) * 2013-03-15 2015-11-11 先正达参股股份有限公司 保卫细胞表达盒组成及其使用方法
CN107287195A (zh) * 2017-05-18 2017-10-24 青岛农业大学 一种在保卫细胞专一表达启动子及其创建方法
CN111197045A (zh) * 2020-01-10 2020-05-26 蒙树生态建设集团有限公司 一种保卫细胞特异性启动子及用途
CN112795693A (zh) * 2021-03-24 2021-05-14 湖南农业大学 与玉米叶片叶绿素含量相关的分子标记及其应用
CN112795693B (zh) * 2021-03-24 2022-02-18 湖南农业大学 与玉米叶片叶绿素含量相关的分子标记及其应用

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