CN1643143A - 检测、诊断和治疗血液恶性肿瘤的组合物和方法 - Google Patents

检测、诊断和治疗血液恶性肿瘤的组合物和方法 Download PDF

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Abstract

公开了检测、诊断、预后和治疗血液恶性肿瘤疾病，具体是B细胞白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤的方法和组合物。公开了在动物中诱导对特异性血液恶性肿瘤相关抗原性多肽及其抗原性多肽片段的免疫和T细胞应答的组合物、方法和试剂盒。还公开了用于鉴定含一种或多种血液恶性肿瘤相关组合物的细胞和生物样品的组合物和方法，以及检测和诊断这类疾病和病变细胞的方法。还公开了诊断和治疗试剂盒及诊断、治疗和/或预防各种白血病和淋巴瘤的方法。

Description

检测、诊断和治疗血液恶性肿瘤的组合物和方法
相关专利申请的相互参照
本申请是2002年1月22日提交的美国专利申请序列号10/057,475的部分延续，后者是2001年11月6日提交的美国专利申请序列号10/040,862的部分延续，后者是2001年3月1日提交的美国专利申请序列号09/796,692的部分延续，它要求2000年3月1日提交的美国临时专利申请序列号60/186,126；2000年3月17日提交的序列号60/190,479；2000年4月27日提交的序列号60/200,545；2000年4月28日提交的序列号60/200,303；2000年4月28日提交的序列号60/200,779；2000年5月1日提交的序列号60/200,999；2000年5月4日提交的序列号60/202,084；2000年5月22日提交的序列号60/206,201；2000年7月14日提交的序列号60/208,950；2000年8月3日提交的序列号60/222,903；2000年8月4日提交的序列号60/223,406；和2000年8月7日提交的序列号60/223,378的优先权；上述各专利申请的完整说明书、权利要求书、序列和附图都纳入本文作为参考，无需弃权且用于所有目的。
关于在联邦政府资助下进行研究和开发获得的发明权利的声明
不适用
参考以光盘形式提交的“序列表”、表格或计算机程序表附孙
无
1发明背景
1.1发明领域
本发明一般涉及癌症诊断和治疗领域。更具体说，涉及令人惊奇地发现了检测和免疫治疗血液恶性肿瘤，具体是B细胞白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤的组合物和方法。本发明提供了诱导针对分离自人血液恶性肿瘤的抗原性多肽及抗原性肽片段的免疫应答和T细胞应答的新的有效方法、组合物和试剂盒，以及利用这类组合物诊断、检测、治疗、监测和/或预防各种类型人血液恶性肿瘤的方法。具体说，本发明提供的多肽、肽、抗体、抗原结合片段、杂交瘤、宿主细胞、载体和多核苷酸化合物及组合物，可用于鉴定和区分不同类型的血液恶性肿瘤，及检测、诊断、预后、监测和治疗患病动物的这类疾病。
1.2相关领域描述
1. 2.1血液恶性肿瘤
血液恶性肿瘤，如白血病和淋巴瘤是以造血细胞的异常生长和成熟异常为特征的疾病。白血病通常是造血干细胞的恶性疾病，包括成人和儿童的急性骨髓白血病(AML)、慢性骨髓白血病(CML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)和继发性白血病。淋巴瘤有两种不同类型：非霍奇金淋巴瘤(NHL)和霍奇金氏病。NHL是B或T细胞的克隆性扩展，但何杰金氏病的分子病理学，包括谱系衍生和克隆能力仍不清楚。其它血液恶性肿瘤包括骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增生综合症(MPS)和多发性骨髓瘤。血液恶性肿瘤通常是严重疾病，可导致各种症状包括骨髓衰竭和器官衰竭。
NHL是美国癌症死亡的第6位最常见原因。每年发病率中只有前列腺、乳腺、肺、结直肠和膀胱癌通常超过淋巴瘤。1995年新诊断为NHL超过45000人，21000多病人死亡。淋巴瘤病人的平均年龄较年轻(42岁)，因此病而死亡的人数使NHL成为影响美国经济的第四位癌症。过去15年，美国癌症协会报告NHL发病率增加了50％，是任何癌症中增加最大的之一。大量增加主要归因于患AIDS的年轻人淋巴瘤的发生。淋巴瘤也是第三位最常见的童年期恶性肿瘤，占儿童癌症的约10％。成活率(所有年龄)73％(低危)至26％(高危)不等。
1.3现有技术的不足
对许多血液恶性肿瘤包括白血病和淋巴瘤的治疗仍有困难，现有疗法不是普遍有效。虽然包括特异性免疫疗法的治疗似乎有很大潜力，但这些治疗只限于少数已知的恶性肿瘤相关抗原。况且早期检测这类血液恶性肿瘤可能相当困难取决于具体疾病。此病缺乏足够数量的特异性诊断和预后标志和鉴定可能受影响的细胞和组织的方法，极大限制了肿瘤学领域的发展。
因此，该领域仍然需要改进的方法用于检测、筛查、诊断和治疗血液恶性肿瘤疾病，如B细胞白血病、淋巴瘤和多发性骨髓病。本发明满足了该领域中的这些和其它基本需求，在检测一种或多种这类血液恶性肿瘤中已证明为过度表达的一种或多种多肽的细胞和细胞类型上提供了显著的优越性。
2发明概述
本发明通过对一种或多种血液恶性肿瘤，具体是B细胞白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤的鉴定、检测、筛查、诊断、预后、预防治疗和免疫调节，提供了一种新和有效的策略，满足了该领域中上述的长期需求和其它缺陷。
本发明部分根据令人惊奇和出乎意料的发现，即在一种或多种类型的血液恶性肿瘤中已鉴定到过度表达的，某些以前不知道或未鉴定的人类多肽、肽和它们所产生的片段，现已鉴定了编码这些肽的基因，并得到其分离形式，并已用一系列的分子生物学方法，包括扣除文库分析，微阵列筛选、多核苷酸测序、肽和表位的鉴定，以及表达概况分析和体外全基因细胞引发，进行了特征分析。现已鉴定了这些多核苷酸及它们编码的多肽、肽和抗原片段，并与血液恶性肿瘤疾病，具体如白血病和淋巴瘤的开始，进展和/或结果等复杂过程相牵连。
本发明还证明这些多核苷酸和它们编码的多肽，及抗体、抗原呈递细胞、T细胞和衍生自这种抗体的抗原结合片段，可用于开发特别有利的组合物和方法，以检测、诊断、预后、预防和/或治疗一种或多种这些疾病，特别是那些(a)以一种或多种多核苷酸表达的增加、改变、升高或持续表达为特征的疾病，所述多核苷酸包含至少第一序列区，该区含SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一所示的核酸序列，或(b)以一种或多种多肽生物活性的增加、改变、升高或持续为特征的疾病，所述多肽含有至少第一序列区，该区含SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的氨基酸序列。
本发明也提供一种或多种所述肽、多肽、抗体、抗原结合片段和本发明多核苷酸组合物在动物中特别是在哺乳动物如人中产生免疫应答或产生T细胞应答的方法和用途。本发明还提供这些组合物的一种或多种用于鉴定、检测和定量测定临床样品、分离的细胞、整体组织和甚至受影响个体中血液恶性肿瘤组合物的方法和用途。本文所述组合物和方法也可用于制备一种或多种诊断试剂、测定、药物或治疗剂，进行此类疾病的诊断和治疗。
在第一个重要实施例中，提供含有至少第一种分离的肽或多肽的组合物，此分离的肽或多肽所含的氨基酸序列与SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的氨基酸序列至少有约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或约99％相同。示范性优选序列是含有至少第一编码区的那些序列，该第一编码区所含的氨基酸序列与SEQ IDNO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的氨基酸序列至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％或约94％相同；包含与SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％或约99％相同的至少第一编码区的那些序列，是实施本发明特别优选序列的例子。同样，还提供含有基本上由SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的氨基酸序列组成的肽和多肽化合物及组合物。
以类似方式，本文实施例也提供检测、诊断、预后、预防、治疗B细胞白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤的组合物和方法。涉及本发明此方面的示范性优选肽和多肽化合物及组合物，包括但不限于：含有至少第一种分离的肽或多肽的那些肽和多肽化合物或与SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的氨基酸序列至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或约99％相同；和含有至少第一编码区的那些序列，该第一编码区所含的氨基酸序列与SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的氨基酸序列至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％或约94％相同；以及甚至含有至少第一编码区的那些序列，该第一编码区所含的氨基酸序列与SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％或约99％相同。
本发明的示范性肽可以是任何合适的长度，取决于其具体用途；这些肽可长约9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、或约100个左右氨基酸。当然，本发明的肽也可包含上述范围内中等长度或整数长度的氨基酸。
本发明的示范性多肽和蛋白质可以是任何合适的长度，取决于其具体用途；这些多肽和蛋白质可长约100、150、200、250、300、35或约400个左右氨基酸。当然，本发明的多肽和蛋白质也可包含上述范围内中等长度或整数长度的氨基酸。
本发明的肽、多肽、蛋白质、抗体和抗原结合片段优选含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的任一肽的至少约5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或者100个毗连的氨基酸序列。
而且，本发明的多肽、蛋白质、抗体和抗原结合片段可更优选至少含有第一分离的编码区，该编码区含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一所编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的任一肽的至少约100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或者200个毗连的氨基酸序列。
同样，本发明的多肽、蛋白质、抗体和抗原结合片段可含有第一分离的编码区，该编码区包含基本上较长的序列，例如，含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的任一肽的至少约200、220、240、260、280、或者300个毗连的氨基酸序列。
在说明性实施例中，特别在涉及B细胞白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤的方法和组合物的那些实施例中，本发明多肽所含氨基酸序列(a)含有，(b)基本上包括，或(c)包括SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的氨基酸序列。
本发明的多肽和蛋白质优选含有至少第一核酸区段编码的氨基酸序列，该第一核酸区段含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一种的至少21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个毗连核苷酸序列。
本发明的多肽和蛋白质还优选含有至少第一核酸区段编码的氨基酸序列，该第一核酸区段含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一种的至少约31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个毗连核苷酸序列。本发明的多肽和蛋白质还优选含有一个或多个编码区，这些编码区含有第一核酸区段编码的氨基酸序列，该第一核酸区段含有SEQ IDNO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一种的至少约41、42、43、44、45、46、47、48、49、或50个毗连核苷酸序列。本发明的多肽和蛋白质还优选含有一个或多个编码区，这些编码区含有第一核酸区段编码的氨基酸序列，该第一核酸区段含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一种的至少约51、52、53、54、55、56、57、58、59、或60个毗连核苷酸序列。本发明的多肽和蛋白质还优选含有一个或多个编码区，这些编码区含有第一核酸区段编码的氨基酸序列，该第一核酸区段含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一种的至少约70、80、90、100、110、120、130、140或150个毗连核苷酸序列。本发明的多肽和蛋白质还优选含有一个或多个编码区，这些编码区含有第一核酸区段编码的氨基酸序列，该第一核酸区段含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一种的至少约175、200、225、250、275、300、325、350、375、或4000个毗连核苷酸序列。本发明的多肽和蛋白质还优选含有一个或多个编码区，这些编码区含有第一核酸区段编码的氨基酸序列，该第一核酸区段含有SEQ IDNO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一种的至少约500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400或1500个毗连核苷酸序列。
在第二个重要实施例中，提供含有至少第一种分离的多核苷酸的组合物，此第一种分离的多核苷酸所含的核酸序列至少与SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一所示的核酸序列至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或约99％相同。示范性优选序列是含有至少与SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一所示的核酸序列至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％或约94％相同；包含与SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一所示的核酸序列至少约95％、96％、97％、98％或约99％相同的至少一种核酸序列的那些序列，是实施本发明特别优选序列的例子。
在具体涉及检测、诊断、预后、预防、治疗B细胞白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤的组合物和方法的实施例中，示范性优选多核苷酸组合物包括至少含有第一种分离的核酸区段的那些组合物，此第一种分离的核酸区段含有的序列与SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一所示的核酸序列至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或约99％相同。这类多核苷酸优选含有一个或多个分离的编码区，各区可(a)包括，(b)基本上包括，或(c)含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中所示的核酸序列。
本发明的示范性多核苷酸可有任何合适的长度，取决于其具体用途；这些多核苷酸可(a)至少长约，或(b)至少含有第一种分离的核酸区段，该区段至少长约27、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500、520、540、560、580、600、625、650、675、700、750、800、850、900、950或者1000个左右核苷酸；以及较长的多核苷酸，该多核苷酸(a)至少长，或(b)至少含有第一种分离的核酸区段，该区段至少长约1000、1025、1050、1075、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450、1500、1550、1600、1650、1700、1750、1800、1850、1900、1950、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900或3000个左右核苷酸，以及大体上较大的多核苷酸。当然，本发明的多核苷酸和核酸区段也可含有上述范围内的中等长度或整数核苷酸。
本发明的组合物可含有单一多肽或多核苷酸，或者，可含有二种或多种血液恶性肿瘤化合物，例如二种或多种多肽，二种或多种多核苷酸，或甚至一种或多种肽或多肽与一种或多种多核苷酸的组合。当具体应用考虑二种或多种多肽时，第二和/或第三和/或第四等分离的肽或多肽优选含有的氨基酸序列至少与SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一所编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的氨基酸序列至少约91％、93％、95％、97％或99％相同。或者，本发明的多核苷酸可含有一个或多个编码区，其编码第一种融合蛋白或肽，例如在正确读码框中与一种或多种所述血液恶性肿瘤肽或多肽融合的佐剂编码区。或者，此融合蛋白可含有在正确读码框中与一可检测蛋白或肽，或与一免疫剌激蛋白或肽，或其它此类构建物融合的血液恶性肿瘤多肽或肽。融合蛋白如具体用于与本文所述一种或多种血液恶性肿瘤的诊断、检测和治疗有关实施例中的那些融合蛋白。
本发明也提供含有至少第一种杂交瘤细胞系的组合物，该杂交瘤细胞系可产生对本文所述一种或多种肽或多肽有免疫特异性的单克隆抗体，或至少第一种对所述肽或多肽有免疫特异性的单克隆抗体或其抗原结合片段。该抗原结合片段可含一轻链可变区，一重链可变区，Fab片段，F(ab)2片段，Fv片段、scEv片段或此类抗体的抗原结合片段。
本发明也提供含有至少第一种表达本文所述肽或多肽的分离的抗原呈递细胞，或能与所述肽或多肽起特异性反应的许多分离的T细胞的组合物。可通过使T细胞与本文所述一种或多种肽或多肽接触来剌激或扩展大多数分离的T细胞群。扩展前可克隆T细胞且可获得自健康哺乳动物或至少患有第一种血液恶性肿瘤如白血病或淋巴瘤哺乳动物的骨髓、骨髓组分、外周血或外周血组分。
如上所述，本发明的分离的多肽可长约9-1000个氨基酸，或可长约50-900个氨基酸，长约75-800个氨基酸，长约100-700个氨基酸，长约125-600个氨基酸，或任何其它合适长度。
编码此分离多肽的分离的核酸区段可长约27-10000个核苷酸，长约150-800个核苷酸，长约250-6000个核苷酸，长约350-4000个核苷酸，长约450-2000个核苷酸，或任何其它合适长度。
该核酸区段可操作地置于至少一种异源重组启动子，如组织特异性、细胞特异性、可诱导性或调节启动子的控制下。这类启动子也可受到一种或多种附加的增强子或调控区的控制或调节，这取决于所需表达该多核苷酸的具体细胞类型。也可将本发明的多核苷酸和核酸区段包含在一载体内，如质粒或病毒载体。也可将本发明的多核苷酸和核酸区段包含在宿主细胞内，如重组宿主细胞、或人宿主细胞如血细胞或骨髓细胞。
本发明的多核苷酸可含有至少第一种操作性框内连接于至少第二种分离的核酸区段，这样该多核苷酸可编码一种融合蛋白，该融合蛋白中第一肽或多肽与第二肽或多肽连接。
本发明的多肽可含有任何合适长度的毗连氨基酸，例如长约2000、1900、1850、1800、1750、1700、1650、1600、1550、1500、1450、1400、1350、1300、1250、1200、1150、1100或约1000个左右氨基酸。同样，本发明的多肽和肽可含有略短的毗连氨基酸编码区，例如约950、900、850、800、750、700、650、600、550、500、450、400、350、300、250、200、150或甚至约100个左右氨基酸长度。
以同样方式，本发明的多肽和肽可含有甚至更小的毗连氨基酸编码区，例如长约95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15或甚至约9个左右氨基酸。
在所有这类实施例中，那些具有优选范围内中等长度包括所有整数长度的肽和多肽(如含有长度至少约94、93、92、91、90、89、88、87、86、85、84、83、82、81、80、79、78、77、76、75、74、73、72、71、69、68、67、66个左右氨基酸的那些肽和多肽)均认为属于本发明范围内。
具体实施例中，本发明的肽和多肽可含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的一种或多种肽的至少约9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或约50个毗连氨基酸的序列。
其它实施例中，本发明的肽和多肽可含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的一种或多种肽的至少约51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个毗连氨基酸的序列。
还有其它实施例中，本发明的肽和多肽可含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的一种或多种肽的至少约100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375或约400个毗连氨基酸的序列。
本发明的多肽通常含有上述多核苷酸任一编码的或SEQ ID NOs：10，471-10，474；SEQ ID NO：10，481；SEQ ID NOs：10，599-10，819；SEQ ID NOs：10，820-10，842；SEQID NOs：10，849-10，908；和SEQ ID NOs：10，909-10，968任一所示的第一毗连氨基酸序列，但还可任选地含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的至少第二种，至少第三种，或甚至至少第四种或更多种毗连的氨基酸序列。单一肽可只含单一编码区，或单一肽可含有多个相同或明显不同的SEQ IDNO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的肽毗连氨基酸序列。事实上，所述多肽可含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的任一肽的多个相同的毗连氨基酸序列，或它们可含有一个或多个不同的毗连氨基酸序列。例如，单一多肽可含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的一种或多种肽的单一毗连氨基酸序列，或者，可含有SEQ IDNO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的一种或多种肽的两个或多个明显不同的毗连氨基酸序列。事实上，所述多肽可含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的任一肽的2、3、4或甚至5个不同的毗连氨基酸序列。或者，单一多肽可含有2、3、4或甚至5个不同的编码区。例如，多肽至少可含有第一编码区，该第一编码区含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的任一肽的第一种毗连氨基酸序列，和至少一个第二编码区，该第二编码区含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的任一肽的第二种毗连氨基酸序列。相反，多肽至少可含有第一编码区，该第一编码区含有SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的任一肽的第一种毗连氨基酸序列，和至少第二编码区，该第二编码区含有明显不同的第二种肽或多肽，例如佐剂或免疫剌激肽或多肽。
在这种情况下，同一多肽上的两个编码区可以分开，或两个编码区可操作性相连，各处在正确的读框中，这样产生融合蛋白其中第一编码区的第一氨基酸序列连接于第二编码区的第二氨基酸序列。
本文公开内容中，短语“SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：4所述序列”指包括这些序列标志符任一所述的任何和所有毗连序列。”即“SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：4任一所述序列”指“SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4任一所述任何序列。同样，“SEQ ID NO：25-37所述序列”指SEQ ID NO：25，SEQ ID NO：26，SEQ IDNO：27，SEQ ID NO：28，SEQ ID NO：29，SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：31，SEQ ID NO：32，SEQ ID NO：33，SEQ ID NO：34，SEQ ID NO：35，SEQ ID NO：36，或SEQ ID NO：37任一所述任何序列。
同样，短语“至少一种SEQ ID NO：55-SEQ ID NO：62任一的序列”指SEQ ID NO：55，SEQ ID NO：56，SEQ ID NO：57，SEQ ID NO：58，SEQ ID NO：59，SEQ ID NO：60，SEQID NO：61，或SEQ ID NO：62任一所述的第一种序列。
也应理解本发明的试剂盒和组合物从整体和一般意义上说，含有至少一种或多种具体的多核苷酸、多肽和肽，它们含有本文在SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中所示的一种或多种核酸序列的一个或多个毗连序列区，或由SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的一种或多种氨基酸序列的一个或多个毗连序列区，这些肽、多肽和多核苷酸组合物可用于一种或多种具体方法，和用于本文所述一种或多种血癌，具体说是各种特殊类型的淋巴瘤的诊断、检测、预防和治疗。本领域技术人员也可理解，本说明书所述益处是，所述肽和多肽组合物可用于动物中产生T细胞或免疫应答，也可将这类组合物施动物，然后从该动物分离得到免疫特异性抗体和抗原结合片段或鉴定其与这类肽或多肽的特异性结合。本发明所鉴定的多核苷酸可通过重组蛋白产生方法(在本领域技术人员的能力范围内)，用于产生这类肽、多肽、抗体和抗原结合片段，它们具有本文提供的特异性氨基酸和核酸序列。
同样，本领域技术人员了解，一种或多种所述组合物可用于一种或多种诊断或检测方法以鉴定生物样品、宿主细胞、或甚至动物机体或组织内的某些抗体、肽、多核苷酸或多肽。本领域技术人员了解，一种或多种所述核酸或氨基酸组合物可用于制备或制造一种或多种药物，用于诊断、检测、预后、预防或治疗动物的一种或多种血液恶性肿瘤，具体是本文和权利要求所述的恶性疾病。
本领域技术人员不难明白，本发明的方法、试剂盒及其用途优选采用本文所述一种或多种化合物和/或组合物，它们含有本文所附序列表SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124所示的一种或多种毗连核苷酸序列。
同样，本领域技术人员不难明白，本发明的方法、试剂盒及其用途也可采用本文所述一种或多种化合物和/或组合物，它们含有上述多核苷酸之一编码的或本文所附序列表SEQ ID NO：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124中任一编码的或SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121中任一所示的任一肽的一种或多种毗连氨基酸序列。
3.附图和序列的简要说明
可通过参见以下描述并结合附图了解本发明，其中，同样的参考数字鉴别同样的成分，且其中：
图1为用于鉴定本发明cDNA靶标的微阵列芯片技术方法的示意图，见5.1节所述。
图2为用于产生抗原特异性细胞系和鉴定感兴趣克隆的体外全基因CD8+T细胞引发方法的总方案的示意图。
图3为用于产生抗原特异性细胞系和鉴定感兴趣克隆的体外全基因CD4+T细胞引发方法的总方案的示意图。
图4为用于鉴定在淋巴瘤细胞中过度表达的cDNA的一组探针。
图5列出了与已知的治疗剂CD20和CD52有类似组织表达概况的抗原。
图6说明Ly1484长的和Ly1484短的TMpred报告的结果。
图7说明Ly1484长TSITES分析的结果。
图8说明Ly1484短的TSITES分析的结果。
SEQ ID NO：1是Ly1728P的全长cDNA。
SEQ ID NO：2是Ly1728P的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：3是Ly1732P的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：4是Ly1732P的全长蛋白质。
SEQ ID NO：5是Ly1888P的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：6是Ly1888P的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：7是Ly1452_HIS-Tag-融合蛋白的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：8是Ly1452_His-tag-融合蛋白的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：9是Ly1452P，剪接变体1的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：10是Ly1452P，剪接变体1的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：11是Ly1452P，剪接变体2的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：12是Ly1452P，剪接变体2的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：13是Ly1462P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：14是Ly1462P的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：15是Ly1462P的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：16是Ly1484P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：17是Ly1484P的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：18是Ly1484P的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：19是Ly1486P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：20是Ly1486P的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：21是Ly1486P的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：22是Ly1677P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：23是Ly1682P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：24是Ly1693P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：25是Ly1693P的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：26是Ly1693P的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：27是Ly1697P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：28是Ly1715P的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：29是Ly1715P的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：30是Ly1727P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：31是Ly1727P的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：32是Ly1727P的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：33是Ly1885P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：34是Ly1885P的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：35是Ly1885P的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：36是Ly1905P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：37是Ly1905P的部分蛋白质序列。
SEQ ID NO：38是Ly1905P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：39是Ly1905P的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：40是Ly1905P的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：41是Ly663S的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：42是Ly663S的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：43是Ly663S的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：44是Ly664S的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：45是Ly664S的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：46是Ly667S的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：47是Ly667S的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：48是Ly667S的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：49是Ly677S的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：50是Ly677S的部分蛋白质序列。
SEQ ID NO：51是Ly677S的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：52是Ly677S的部分蛋白质序列。
SEQ ID NO：53是Ly677S的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：54是Ly677S的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：55是Ly1891P的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：56是Ly1891P的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：57是CD138的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：58是CD138的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：59是CD22的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：60是CD22的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：61是CD22的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：62是CD79β的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：63是CD79β的部分蛋白质序列。
SEQ ID NO：64是CD79β的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：65是CD79β的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：66是CD79β的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：67是Ly1450P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：68是Ly1450P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：69是Ly1451P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：70是Ly1451P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：71是Ly1451P的部分蛋白质序列。
SEQ ID NO：72 72＞Ly1454P，OLD-SEQ-ID_3577，部分cDNA
SEQ ID NO：73是Ly1454P的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：74是Ly1454P的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：75是Ly1485P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：76是Ly1485P的部分蛋白质序列。
SEQ ID NO：77是Ly1485P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：78是Ly1500P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：79是Ly1500P，剪接变体1的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：80是Ly1500P，剪接变体1的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：81是Ly1500P，剪接变体2的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：82是Ly1500P，剪接变体2的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：83是Ly1500P，剪接变体3的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：84是Ly1500P，剪接变体3的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：85是Ly1516P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：86是Ly1516P，剪接变体1的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：87是Ly1516P，剪接变体1的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：88是Ly1516P，剪接变体2的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：89是Ly1516P，剪接变体3的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：90是Ly1678P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：91是Ly1678P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：92是Ly1678P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：93是Ly1678P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：94是Ly1680P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：95是Ly1686P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：96是Ly1687P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：97是Ly1706P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：98是Ly1712P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：99是Ly1729P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：100是Ly1729P的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：101是Ly1729P的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：102是Ly1848P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：103是Ly1859P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：104是Ly1859P的部分蛋白质序列。
SEQ ID NO：105是Ly1859P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：106是Ly1859P的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：107是Ly1859P的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：108是Ly1866P的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：109是Ly1866P的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：110是Ly1867P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：111是Ly1868P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：112是Ly1886P的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：113是Ly669S的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：114是Ly669S的全长蛋白质序列。
SEQ ID NO：115是Ly672S的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：116是Ly672S的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：117是Ly672S的全长cDNA序列。
SEQ ID NO：118是Ly675S的部分cDNA序列。
SEQ ID NO：119是Ly675S的部分蛋白质序列。
SEQ ID NO：120是Ly1484P的部分蛋白质序列。
SEQ ID NO：121是Ly1484P的部分蛋白质序列。
SEQ ID NO：122是His-Ly1452P的PCR引物序列。
SEQ ID NO：123是His-Ly1452P的PCR引物序列。
SEQ ID NO：124是Ly1451P的开放阅读框序列。
4.说明性实施例的描述
为了更全面了解本文所述的本发明，以下列出各种说明性实施例的描述。
本发明一般涉及免疫治疗和诊断血液恶性肿瘤如B细胞白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤的组合物和方法。
4.1核酸递送和DNA转染的方法
某些实施例中，采用本文所述的一种或多种RNA或DNA和/或替代的多核苷酸组合物来转染合适的宿主细胞。本领域技术人员熟知将RNA和DNA及包含它们的载体导入合适的宿主细胞的技术。具体说，当通过编码一种或多种感兴趣的治疗性化合物的一种或多种多核苷酸构建物的表达而获得治疗性施用一种或多种活性肽、化合物或疫苗时，这种多核苷酸可用于遗传转化一种或多种宿主细胞。
将多核苷酸和/或多肽导入合适的靶细胞的各种方法是本领域技术人员已知的。例如，当要将多核苷酸递送一细胞时，本领域技术人员可采用其使用的几种非病毒方法，将表达构建物转运入培养的哺乳动物细胞。这些方法包括例如磷酸钙沉淀(Graham和Van Der Eb，1973；Chen和Okayama，1987；Rippe等，1990)；DEAE-葡聚糖沉淀(Copal，1985；电泳(Wong和Neumann，1982；Fromm等，1985；Tur-Kaspa等，1966；Potter等，1984；suzuti等1998；Vanbever等，1998)、直接微注射(Capecchi，1980；Harland和Wontraub，1985))；装载DNA的脂质体(Nicolau和Sene，1982；Fraley等，1979；Takakura，1998)和脂质转染胺-DNA复合物；细胞超声处理(Fechherimer等，1987)；采用高速微粒的基因轰击技术(Yang等，1992；Klein等，1992)和受体介导的转染(Curiel等，1991；Wagner等，1992；Wu和Wu，1987；Wu和Wu，1988)。这些技术中的一些可成功采纳用于体内或活体外。
用一种或多种所述表达载体转化细菌、酵母或动物细胞是本发明的重要方面。常需要将这种转化的宿主细胞用于表达本文所述各种DNA基因构建物。本发明某些方面常需要调制调节或控制所述基因节段的表达，这种方法对分子遗传学领域的技术人员是常规技术。通常当需要提高或过度表达一个具体基因时，可采用各种操作提高其信使RNA的表达，具体是采用活性启动子，如本文所述的组织特异性启动子，以及采用能提高该信使RNA在具体转化宿主细胞中的稳定性的序列。
通常起始和翻译终止区含有终止密码子，和任选的一种聚腺苷酸化信号。在转录方向即编码序列或有义序列的5’→3’方向，该构建物将包含转录调控区和启动子，其中的调控区可以是5’或3’启动子，核糖体结合位点，起始密码子，具有开放读框和起始密码子的结构基因，终止密码子，聚腺苷酸化信号序列和终止子区域(如需要)。作为双链，该序列本身可用于转化微生物或真核宿主，但在DNA导入宿主期间将第二DNA序列连接于表达构建物时，通常在DNA序列中包含一标记。
当不存在功能性复制系统时，该构建物还优选包括与宿主中序列同源的至少约30、40或50个碱基对的序列，优选至少约60、70、80或90-100bp，通常不超过约500-1000bp的序列。以这种方式，可能增强合理的重组，从而该基因将整合入宿主内并被宿主稳定地保留。理想的是，该表达构建物的调控区紧靠(也可操作性相对定位于)所选的治疗性基因，以提供互补及竞争优势的基因。因此，当丧失该治疗基因时，所产生的生物也可能丧失提供此竞争优势的基因，从而不能在具有保留完整构建物的基因环境中竞争。
可将所选治疗基因导入转录和翻译起始区和转录和翻译终止区之间，使之处于该起始区的调控下。可将此构建物包含在一质粒中，该质粒包括至少一复制系统，其中一复制系统用于克隆在开发质粒，并且在最终宿主(此例为哺乳动物宿主)中的功能需要第二个复制系统时，也可含一个以上系统。此外，可存在上述一个或多个标记。需要整合时该质粒需包括具有宿主基因组的同源序列。
可采用该领域熟知的各种技术将上述基因或其它核酸区段插入宿主细胞。已描述了以下五种通用方法来传递核酸区段到细胞中：(1)化学方法(Graham和Van Der Eb，1973)；(2)物理方法，如微注射(Capecchi，1980)、电穿孔(美国专利5,472,869；Wong和Neumann，1982；Fromm等，1985)、微粒轰击(美国专利5,874,265，其内容纳入本文作参考)、“基因枪”(Yang等，1990)；(3)病毒载体(Eglitis和Anderson1988)；(4)受体介导的机制(Curiel等，1991；Wagner等，1992)；(5)细菌介导的转化。
4.2血液恶性肿瘤相关的特异性抗体及其抗原结合片段
本发明还提供能特异地结合(或有免疫特异性)上述至少第一种肽或肽变体的抗体及其抗原结合片段。本文中的抗体或其抗原结合片段，指能“特异地结合”肽，并与该肽发生可检测(如ELISA)水平的反应，但与无关的肽或蛋白质在相似条件下不发生可检测反应。“结合”是指形成“复合物”的两种不同分子之间的非共价连接。结合能力可通过例如测定该复合物形成的结合常数来评价。结合常数是复合物浓度除以组分产物的浓度所得值。本发明内容中，当形成复合物的结合常数超过约103L/mol时，一般认为这两种化合物“结合”。可用本领域熟知方法测定结合常数。
能满足上述要求的任何试剂可能是一种结合剂。在说明性实施例中，该结合剂是抗体或其抗原结合片段。可用本领域普通技术人员已知的任何各种技术制备这种抗体(Harlow和Lanl，1988)。通常可用细胞培养技术生产抗体，包括产生上述单克隆抗体，或通过将抗体基因转染入合适的细菌或哺乳动物细胞宿主以产生重组抗体。在一项技术中，将含有肽的免疫原先注射入任何各种哺乳动物(如小鼠、大鼠、家兔、山羊或绵羊)。此步骤中，本发明的肽不经修饰即可作为免疫原。另外，特别对于较短的肽，若将肽连接于一载体蛋白如牛血清白蛋白或匙孔血蓝蛋白可引发强免疫应答。将免疫原注射动物宿主，优选按照预定的时间表进行一次或多次加强免疫接种，并定期采集动物的血。可通过例如亲和层析(采用偶联于合适的固相支持物的肽)从抗血清中纯化对肽特异的多克隆抗体。
“抗体”指由特异性结合或识别抗原的免疫球蛋白基因或其片段编码的多肽。识别的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因，以及无数的免疫球蛋白可变区基因。轻链被分成为κ或λ。重链被分成为γ、μ、α、δ或ε，这依次决定了免疫球蛋白的类型分别为IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。
示范性的免疫球蛋白(抗体)结构单元包括一个四聚体。每个四聚体由相同的两对多肽链构成，每对具有一条“轻”链(约25kD)和一条“重”链(约50-70kD)。每条链的N-末端限定约100-110或更多氨基酸的可变区，它主要负责抗原识别，即抗原识别区域。“抗原识别区域”是指识别靶或其部分的本发明的抗体、重组分子、融合蛋白或免疫结合物的一部分。抗原识别区域通常包括抗体的可变区或其部分，例如一个、两个、三个、四个、五个、六个或多个超变区。术语“VH”或“VH”是指免疫球蛋白重链的可变区，包括Fv、scFv、dsFv或Fab。术语“VL”或“VL”是指免疫球蛋白轻链的可变区，包括Fv、scFv、dsFv或Fab。
例如，作为完整免疫球蛋白或一些良好鉴定的片段存在的抗体通过用各种肽酶消化产生。因此，例如，胃蛋白酶在绞链区的二硫键以下消化抗体产生F(ab)’2，这是Fab的二聚体，它本身是通过二硫键与VH-CH1连接的轻链。F(ab)’2可在温和条件下还原以断裂绞链区中的二硫键，从而将F(ab)’2二聚体转变成Fab’单体。Fab’单体实质上是具有部分绞链区的Fab(参见Fundamental Immunology(Paul编，第三版，1993)。因此，术语抗体在这里还包括通过修饰完整抗体产生的抗体片段。
“片段”在这里指免疫球蛋白分子的至少部分可变区，它结合其靶，即抗原识别区域或抗原结合区。还可包括免疫球蛋白的一些恒定区。抗体功能片段的例子包括但不限于完整的抗体分子、人源化抗体、抗体片段、如Fv、单链Fv(scFv)、超变区或互补决定区(CDR)、VL(轻链可变区)、VH(重链可变区)、Fab、F(ab)2’以及这些成分的任何组合或能够结合靶抗原的免疫球蛋白肽的任何其它部分(参见，例如Fundamental Immunology(Paul编，第四版，1999)。如本领域的技术人员所知，可用多种方法获得各种抗体片段，例如，用酶如胃蛋白酶消化完整抗体；或从头合成。通常用化学方法或采用重组DNA法从头合成抗体片段。因此，术语抗体在这里包括通过修饰完整抗体产生的抗体片段，或用重组DNA法从头合成的抗体片段(如单链Fv)或用噬菌体展示文库鉴定的抗体片段(例如参见McCafferty等，(1990)，Nature348：552)。术语抗体还包括二价或双特异性分子、双抗体、三抗体和四抗体。例如，二价和双特异性分子描述在Kostelny等，J.Immunol.148：1547(1992)，Pack和Pluckthun，Biochemistry 31：1579(1992)，Zhu等，Protein Sci.6：781(1997)，Hu等，Cancer Res.56：3055(1996)，Adams等，Cancer Res.53：4026(1993)和McCartney等，Protein Eng.8：301(1995)。
“人源化抗体”是指其中VH和VL区域所含的抗原结合环，即互补决定区(CDR)，被移植到人构架序列内的抗体。通常，人源化抗体与本文所述的非人源化抗体有着相同的结合特异性。使抗体人源化的技术是此领域熟知的并描述在例如美国专利号4,816,567；5,530,101；5,859,205；5,585,089；5,693,761；5,693,762；5,777,085；6,180,370；6,210,671和6,329,511；WO 87/02671；欧洲专利申请0173494；Jones等，Nature 321：522(1986)和Verhoyen等，Science 239：1534(1988)。人源化抗体还描述在例如Winter和Milstein，Nature 349：293(1991)。
为制备单克隆或多克隆抗体，可采用此领域已知的任何技术(参见例如Kohler和Milstein，Nature 256：495-497(1975)；Kozbor等，Immunology Today 4：72(1983)；Cole等，《单克隆抗体和癌症治疗》(MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY)，77-96页，Alan R.Liss，Inc.(1985))。
生产多克隆抗体的方法是精通此领域的技术人员熟知的。在一个示范性方法中，采用标准佐剂(如弗氏佐剂)和标准免疫方法，用螯合物或封闭结构的类似物免疫近交品系的小鼠(如BALB/C小鼠)或兔。或者，除了使用佐剂外，将螯合物与自身呈免疫原性的载体(如匙孔血蓝蛋白(“KLH”)偶合。通过取试验血并测定其与β亚基的反应性效价来监测动物对免疫原制剂的免疫应答。当得到抗体对免疫原适当的高效价时，从动物采集血液并制备抗血清。如果需要，还可以富集抗血清的其它组分以使抗体与蛋白质反应。
单克隆抗体可用此领域的技术人员熟知的各种技术获得。简言之，来自用所需抗原免疫动物的脾细胞无限增殖，这通常是通过与骨髓瘤细胞融合(例如参见Kohler和Milstein，Eur.J.Immunol.6：511-519(1976))。其它无限增殖化的方法包括用EB病毒、癌基因或逆转录病毒转化，或用此领域熟知的其它方法。筛选产生自单个无限增殖细胞克隆以生产对抗原有所需特异性和亲和性的抗体，且可通过各种技术提高用这种细胞生产单克隆抗体的产率，包括注射到脊椎动物宿主的腹膜腔中。或者，根据Huse等，Science 246：1275-1281(1989)中概述的一般方法，通过筛选人B细胞的DNA文库分离编码单克隆抗体或其结合片段的DNA序列。
收集单克隆抗体和多克隆血清并用免疫测定法确定其对免疫原的效价，例如用固定在固体支持物上的免疫原进行固相免疫测定。通常，选择效价为104或更高的多克隆抗血清，并用竞争性结合免疫测定法测试其对不同螯合物的交叉反应性。特异性多克隆抗血清和单克隆抗体的结合Kd一般至少约为0.1mM、更一般至少约为1μM，优选至少约为0.1μM或更好，最优选为0.01μM或更好。
可采用生产单链抗体的技术(美国专利4,946,778)来生产与螯合物和其它诊断剂、分析剂或治疗剂反应的抗体。同样，转基因小鼠或其它生物如其它哺乳动物可用来表达人源化抗体。或者，可用噬菌体展示技术来生产和鉴别特异性结合所选抗原的抗体和异聚的Fab片段(参见例如McCafferty等，Nature 348：552-554(1990)；Marks等，Biotechnology 10：779-783(1992))。
在一个示范性实施方案中，动物，如兔或小鼠用螯合物或免疫原性构建物免疫。优选用标准方法分离通过免疫方法产生的抗体。
再在一个优选的实施例中，所述抗体是人源化抗体。“人源化”是指已经被修饰以使在人体内的免疫反应性最小化的非人多肽序列，这通常是通过改变氨基酸序列以模拟现在的人序列，而无需改变多肽序列的功能(参见例如Jones等，Nature321：522-525(1986)，和发表的英国专利申请号8707252)。
在另一个优选的实施例中，本发明提供了一种抗体，如上所述，该抗体上还附着选自可检测标记、生物活性剂及其组合的部分。
当抗体与可检测标记结合时，所述标记优选选自放射性同位素、荧光剂、荧光剂前体、生色团、酶或其组合。将各种基团结合到抗体的方法是此领域熟知的。例如，经常结合到抗体的可检测标记是酶，如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和葡萄糖氧化酶。
生产用小分子如荧光剂标记的抗体的方法是此领域熟知的。荧光标记的抗体可用于免疫组织化学染色(Osborn等，Methods Cell Biol.24：97-132(1990)；用于流式细胞术或细胞分选技术(Ormerod，M.G.(编)，《流式细胞术实用方法》(FLOWCYTOMETRY.A PRACTICAL APPROACH)，IRL Press，New York，1990)；用于追踪和定位抗原，以及各种双染色方法(小Kawamura，A.，《荧光抗体技术及其应用》(FLUORESCENT ANTIBODY TECHNIQUES AND THEIR APPLICATION)，Univ.Tokyo Press，Baltimore，1977)。
许多反应性荧光标记可通过商业获得(如Molecular Probes，Eugene，OR)或者可用此领域已知的技术合成。在一个示范性实施例中，本发明的抗体在温和碱性条件下被胺反应性荧光剂，如异硫氰酸荧光素标记。欲了解抗体标记技术的其它例子可参见Goding，J.Immunol.Methods 13：215-226(1976)和《单克隆抗体“原理和实践》(MONOCLONAL ANTIBODIES：PRINCIPLES AND PRACTICE)，6-58页，Academic Press，Orlando(1988)。
可采用例如Kohler和Milstein(1976)的技术及其改进，来制备对感兴趣抗原肽特异的单克隆抗体。简言之，这些方法包括制备能产生具有所需特异性(如与感兴趣肽反应)抗体的无限增殖细胞系。可从获自上述免疫接种动物的脾细胞产生这种细胞系。例如通过与骨髓瘤细胞融合伙伴(优选与该免疫动物同系)融合，使脾细胞无限增殖。可采用各种融合技术。例如，可用非离子洗涤剂使脾细胞和骨髓瘤细胞结合几分钟，然后以低密度铺在能支持杂交细胞生长但不支持骨髓瘤细胞生长的选择培养基上。优选的选择技术采用HAT(次黄嘌呤、氨基喋呤、胸苷)。足够时间后，一般约1-2周，可见杂交体的集落。选出单个克隆，测试其培养物上清液对肽的结合活性。优选具有高反应性和特异性的杂交瘤。
可从生长的杂交瘤集落的上清液中分离单克隆抗体。此外，可采用各种技术来提高产量，例如将杂交瘤细胞系注射到合适的脊椎动物宿主，如小鼠的腹腔内。然后从腹水或血液中收集单克隆抗体。用常规方法如层析、凝胶过滤、沉淀和抽提法去除抗体中的污染物。本发明的肽可用于此纯化过程，例如亲和层析步骤中。
某些实施例中，优选采用抗体的抗原结合片段。这些片段包括用标准技术制备的Fab片段。简言之，可用A蛋白珠柱进行亲和层析(Harlow和Lanl，1988)纯化兔血清中的免疫球蛋白，再用木瓜蛋白酶消化产生Fab和Fc段。用A蛋白珠柱亲和层析分离Fab和Fc片段。
可将单克隆抗体及其片段偶联于一种或多种治疗药物。在这方面，合适的试剂包括放射性追踪剂和化疗剂，它们可用于例如体外净化自身骨髓。代表性的治疗剂包括放射性核素、分化诱导剂、药物、毒素及其衍生物。优选的放射性核素包括：90Y、123I、125I、131I、186Re、188Re、211At和212Bi。优选的药物包括氨甲喋呤和嘧啶及嘌呤类似物。优选的分化诱导剂包括佛波醇酯和丁酸。优选的毒素包括篦麻毒蛋白，想思豆毒蛋白、白喉毒素、霍乱毒素、白树毒蛋白、假单胞菌外毒素、志贺菌毒素和商陆抗病毒蛋白。为诊断目的，与放射活性药物偶联可用于促进转移的追踪或确定血液恶相关阳性肿瘤的位置。
可将治疗剂与合适单克隆抗体直接或间接(通过一接头基因)偶联(如共价健合)。当药剂和抗体各自具有能相互反应的取代基时，二者之间可能直接反应。例如，一个分子上的亲核基团如氨基或巯基，能与另一分子上含羰基的基团如酸酐或酸卤化物反应，或与含有良好离去基团(如卤化物)的烷基反应。
或者，可能需要将治疗剂和抗体通过一接头基团偶联。接头基团的功能是作为间隔使抗体与药剂隔开，以避免干优结合能力。接头基团也可用于增加药剂或抗体上取代基的化学反应性，从而提高偶联效率。化学反应性的增加还促进药剂原本不可能的用途或其上功能基团的用途。
该领域技术人员已证明各种双功能或多功能试剂，同质和异质功能试剂(见Pierci Chemical Co(Rockford IL)的产品目录上所述)，可用作接头基团。例如通过氨基、羧基、巯基或氧化的糖残基可影响偶联。有许多参考文献描述了这种方法，如美国专利4,671,958。
当治疗剂从本发明免疫偶联物的抗体部分游离出来时其作用更强，因此可能需要采用细胞内化期间或内化时能被切割的接头基团。已描述了许多不同的可切割的接头基团。从这些接头基团细胞内释放药剂的机制包括通过还原二硫键切割(美国专利4,489,710)；通过对光不稳定的键(美国专利4,625,014)；通过水解衍生的氨基酸侧链(美国专利4,638,045)；通过血清补体介导的水解(美国专利4,671,958)和酸催化的水解(美国专利4,569,789)来切割。
可能需要将一个以上的药剂偶联于抗体。一实施例中，将药剂的多个分子偶联于一个抗体分子。另一实施例中，可将一种以上的药剂偶联于一种抗体。不论具体的实施例，含一种以上药剂的免疫偶联物可用各种方法制备，例如，可将一种以上的药剂物直接偶联于一抗体分子或可用接头提供多个附着位点。或者可采用载体。载体也可以不同方法携载药剂，包括直接，或通过接头基团共价键合。合适的载体包括蛋白质如白蛋白(美国专利4,507,234)，肽和多糖如氨基葡聚糖(美国专利4,699,784)。载体也可通过非共价键合或包囊化如包裹在脂质体载体内(美国专利4,429,008和4,873,088)而携带药剂。对放射性核素试剂特异的载体包括放射性卤化的小分子和螯合性化合物。例如美国专利4,735,792披露代表性放射性卤化的小分子和它们的合成方法。可从含有氮和硫原子作为结合金属或金属氧化物、放射性核素的供体原子的螯合性化合物中产生放射性核素螯合物。例如美国专利4,673,562披露的代表性螯合化合物及其合成方法。
可采用各种途径施予抗体和免疫偶联物。通常给药途径是静脉内、肌肉内、皮下或肿瘤切除的床中。显然抗体/免疫偶联物的精确剂量随所用抗体，肿瘤上的抗原密度和抗体清除率而不同。
本文还提供模拟血液恶性肿瘤相关免疫原性部分的抗独特性抗体。可用众所周知的技术产生针对能特异地结合血液恶性肿瘤相关免疫原性部分的抗体或其抗原结合片段的这种抗体。抗独特性抗体能模拟血液恶性肿瘤相关免疫原性部分，这类抗体能结合上述能特异地结合血液恶性肿瘤相关免疫原性部分的抗体或其抗原结合片段。
不考虑最初的血液恶性肿瘤相关肽特异性抗体的来源，本发明可采用完整的抗体、抗体多聚体或该抗体的各种功能性、抗原结合区的任一种。示范性的血液恶性肿瘤相关肽特异性抗体的功能区包括seFv、Fv、Fab’和F(ab’)2片段。制备这些构建物的技术是该领域熟知的，本文将进一步举例说明。
各种因素可能影响抗体构建物的选择。例如由于肾脏内完整抗体的主动重吸收、免疫球蛋白Fc段的性能所致的半寿期延长。因此预计基于IgG的抗体表现出较其Fab’对应物具有较慢的血液清除率。然而，基于Fab’片段的组合物通常表现出更好的组织渗透能力。
可用非特异性巯基蛋白酶-木瓜蛋白酶蛋白水解整个免疫球蛋白获得抗体片段。木瓜蛋白酶消化产生两个相同的抗原结合片段称为“Fab片段”，各具有一抗原结合位点和一个残余的“Fc片段”。
木瓜蛋白酶应先用半胱氨酸、2-巯基乙醇或二硫苏糖醇还原活性位点上的巯基而活化。通过用EDTA(2mM)螯合去除酶贮存液中的重金属以确保酶活性最高。通常以1∶100重量比将此酶与底物混合在一起。温育后用碘乙酰胺不可逆地烷化巯基，或简单地透析中止反应。应通过SDS-PAGE监测消化的完全性，且用蛋白A-琼脂糖或离子交换层析分离各组分。
常规制备兔和人IgG的F(ab’)2片段的方法限于用胃蛋白酶水解。提出抗体在重链内二硫键的C端侧要害的条件，是37℃用PH4.5的乙酸缓冲液处理，抗体过量100倍(重量比)。小鼠IgG的消化速度随亚类而不同，可能难以获得高产量的活性F(ab’)2片段没有未消化或完全降解的IgG。具体讲，IgG2a对完全降解高度敏感。而其它亚类要求不同的温育条件才能产生最佳结果，这是该领域已知的。
胃蛋白酶处理完整抗体产生的F(ab’)2片段具有二个抗原结合位点，仍能交联抗原。胃蛋白酶消化大鼠IgG的条件包括用0.1M醋酸缓冲液PH4.5透析，然后与1％(重量比)胃蛋白酶一起温育4小时，若4℃先用PH2.8，0.1M甲酸液透析16小时，再用醋酸缓冲液透析可改进消化。IgG2b与链球菌V8蛋白酶(3％重量比)在PH78，0.1M磷酸钠缓冲液中，37℃温育4小时所得结果更一致。
Fab片段也含有轻链恒定区和重链第一恒定区(CH1)。Fab’片段与Fab片段不同处在于其重链CH1区的羧基端添加了几个残基，包括了抗体绞链区的一个或多个半胱氨酸。F(ab’)2抗体片段原来作为Fab’片段配对产生，二者之间有绞链半胱氨酸。也知道其它化学偶联的抗体片段。
术语“可变区”本文用于指抗体可变区的某些部分在序列中存在广泛差异，可变区用于结合和各特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，变异性不是平均分布在抗体可变区中。而是集中于轻链和重链可变区中的三个区段，称为“超变区”。
可变区中更高度保守部分称为构架区(FR)。天然重链和轻链的可变区各包含4个FR(分别为FR1、FR2、FR3和FR4)，主要采取β-片层构型，通过形成环连接的三个超变区相连接，在某些情况下形成β-片层结构的一部分。
每条链中的超变区通过FR与另一条链超变区紧靠在一起，有助于形成抗体的抗原结合位点(Kabat等，1991，纳入本文作参考)。恒定区不直接参与抗体和抗原的结合，但显示各种效应功能，如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。
术语“超变区”本文用于指抗体中负责抗体结合的氨基酸残基。超变区包括来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基，(即轻链可变区中的残基24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)和重链可变区中的残基31-35(H1)、50-56(H2)和95-102(H3)(Kabat等，1991，纳入本文作参考)，和/或来自来自“超变环”(即轻链可变区中的残基26-32(L1)、50-52(L2)和91-96(L3)和重链可变区中的残基26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3))的那些残基。“构架”或“FR”残基是除上述超变区残基以外的可变区残基。
“FV”片段是含有完整的抗原识别和结合位点的最小抗体片段。此区域由一条重链和一条轻链可变区以紧密、共价连接的二聚体组成。其构型中各可变区的三个超变区相互作用限定了VH-VL二聚体表面上的抗原结合位点。6个超变区共同赋予此抗体的抗原结合特异性。然而，甚至单一可变区(或FV的一半只含有对抗原特异的三个超变区)就能识别和结合抗原，虽然其亲和力较全部结合位点低。
“单链FV”或“sFV”抗体片段含有抗体的VH和VL区，其中这些区存在于单一多肽链。通常，FV多肽在VH和VL区之间还含有一个多肽接头，使sFV能形抗原结合所需的结构。
“双抗体”是具有二个抗原结合位点的小抗体片段，该片段在同一条多肽链(VH-VL)中含有重链可变区(VH)连接于轻链可变区(VL)。所用接头太短不允许在同一链是的二个区之间配对，而迫使二区与另一链的互补区配对并产生两个抗原结合位点。双抗体见欧洲专利申请EP404,097和国际专利申请WO93/11161，各纳入本文作参考。“线性抗体”可以是双特异性或单特异性抗体，含有一对串联的Fd片段(VH-CH1-VH-CH1)，形成一对抗原结合区，如Zapata等(1995)所述，纳入本文作参考。
其它类型的变体是生物学性较之产自其亲代抗体有所改进的抗体。这类变体或第二代化合物通常是置换性变体，包括亲代抗体的一个或多个置换的超变区残基。产生这类置换变体的方便途径是采用噬菌体展示的亲和力成熟。
采用噬菌体展示的亲和力成熟中突变了几个超变区位点(如6-7个位点)，在每个位点产生所有可能的氨基酸取代。由此产生的抗体变体融合于丝状噬菌体每个颗粒内包装的基因III产物M13，以单价形式从噬菌体颗粒表面展示。然后如本文所述筛选噬菌体展示变体的生物学活性(如结合亲和力)。为了鉴定用于修饰的候选超变区位点，可对鉴别为非常有助于抗原结合的超变区域基进行丙氨酸扫描诱变。
另一方面或此外，可描述和分析抗原一抗体复合物的晶体结构，以鉴定抗体与靶之间的接触点。这些接触残基或邻近残基是置换的候选残基。一旦产生了变体，可对一组变体进行筛选，在一种或多种相关测定中选出具有类似但不同或甚至优良特征的抗体作进一步开发。
采用抗体的Fab’或抗原结合片段具有对组织穿透的好处，修饰此片段可产生的另一优点是增加了半衰期。可采用各种技术如操作或修饰抗体分子本身，也可将其结合于隋性载体。任何结合的唯一目的是增加半衰期而不是为了将药剂输送给靶，在所选的Fab’和其它穿透组织的片段中需小心地进行这种结合。然而，可考虑结合于非蛋白性聚合物如PEG等。
因此修饰而非结合的依据是，修饰抗体片段的结构可使其更稳定，和/或降低体内的分解代谢的速度。这类修饰方法的机制是用D-氨基酸取代L-氨基酸。该领域普通技术人员知道，引入这类修饰后需要精确地测试所产生的分子，以确保它仍保留所需的生物学性能。其它稳定化修饰包括在N-末端或C-端或二端加入稳定化组成成分通常用延长生物分子的半衰期。仅作为例子，可考虑通过酰化或氨基化修饰此未端。
本发明所用的中等结合类型修饰包括在抗体片段中掺入一补救受体结合表位。实施的技术包括突变抗体片段的适当区域或掺入的该表位(作为肽标记)使之随着于抗体片段。见国际专利申请WO96/32478，本文纳入其内容的目的是进一步阐明此技术。补救受体结合表位通常是来自Fc结构域的1个或2个环的3个或3个以上的氨基酸区域，将其转移到抗体片段上的类似位置。补救受体结合表位见国际专利申请WO98/45331，纳入本文作为本发明的参考。
4.3地血液恶性肿瘤相关肽特异的T细胞组合物
免疫治疗性组合物也可或另外包含对血液恶性肿瘤相关肽特异的T细胞。这类T细胞一般用标准方法在体外或活体外制备。例如，可分离哺乳动物如病人骨髓，外周血或骨髓组分或外周血中存在的T细胞，采用商品化的细胞分离系统如IsolexTM系统，购自Nexell Therapeutics Inc.(Irvine.CA.见美国专利5,240,856、5,215,926，国际专利申请WO89/06280、WO91/16116和WO92/07243)。或者可从相关或无关的人、非人哺乳动物、细胞系或培养物中产生T细胞。
可用血液恶性肿瘤相关肽、编码该肽的多核苷酸和/或表达该肽的抗原呈递细胞(APC)刺激T细胞。在以充足时间允许产生对血液恶性肿瘤相关肽特异的T细胞条件下，进行这种刺激。优选地血液恶性肿瘤相关肽或多核苷酸存在于输送载体如微球内，以促进抗原特异性T细胞的产生。简言之，用常规技术(如Ficoll/Hypaque密度梯度离心外周血淋巴细胞)从病人、或有关或无关供血者中分离T细胞，与血液恶性肿瘤相关肽一起培育。例如，将T细胞体外37℃与血液恶性肿瘤相关肽(如5-25μg/ml)或合成相当量此肽的细胞一起培养2-9天(一般4天)。可能需要在缺乏血液恶性肿瘤相关肽时培养另一等份的T细胞样品作为对照。
如果T细胞杀伤包被血液恶性肿瘤相关肽或表达编码该肽的基因的靶细胞，就认为T细胞对该肽有特异性。T细胞特异性也可用任何一种标准方法来评价。例如铬释放测定或增殖测定中，与阴性对照相比较，裂解和/或增殖的刺激指数增加二倍以上时，表明T细胞特异性。可按Chen等(1994)所述进行此类测定。另外，可用各种已知技术检测T细胞增殖。例如测定增加的DNA合成的速率(如用氚化胸苷脉冲标记培养T细胞和测定掺入DNA中的氚化胸苷量)可检测T细胞增殖。检测T细胞增殖的其它方法包括测定的介素-2(IL-2)产生、Ca2+流动或染料摄入，如3-(4，5二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑的摄入。另外，可测定淋巴因子(如γ干扰素)或定量测定能对血液恶性肿瘤相关肽起反应的T细胞的相对数量。与血液恶性肿瘤相关肽(200ng/ml-100μg/ml，优选100ng/ml-25μg/ml)接触3-7天应导致T细胞增殖提高至少二倍，和/或如上述接触2-3小时应导致T细胞激活，后者可用标准的细胞因子试验测定，该试验中细胞因子(如TNF或IFN-γ)释放水平增加二倍表明T细胞激活(Coligan等，1998)。可用标准技术扩展血液恶性肿瘤相关特异性T细胞。优选实施例中，刺激和扩增后将来源于病人或有关或无关供血者的T细胞施予病人。
在对血液恶性肿瘤相关肽、其多核苷酸或对表达该肽的APC应答中被激活的T细胞可以是CD4+和/或CD8+。可以各种方法检测特异性激活的CD4+或CD8+T细胞。检测特异性T细胞激活的方法包括检测T细胞增殖、细胞因子(如淋巴因子)的产生或溶细胞活性的产生(即对血液恶性肿瘤相关肽特异的细胞毒T细胞的产生)。对于CD4+T细胞，检测特异性T细胞激活的优选方法是检测T细胞增殖。对于CD8+T细胞，检测特异性T细胞激活的优选方法是检测溶细胞活性的产生。
为治疗目的，可体内或体外扩增对血液恶性肿瘤相关肽、多核苷酸或APC反应而增殖的CD4+和/或CD8+T细胞的数量。体外T细胞的增殖可采用各种方法进行。例如，使该T细胞再接触血液恶性肿瘤相关肽，加或不加T细胞生长因子如IL-2，和/或合成血液恶性肿瘤相关肽的刺激性细胞。当产生CD8+T细胞应答时优选加入刺激性细胞。在对血液恶性肿瘤相关肽间歇性再刺激的应答中，保持特异性的T细胞可在体外大量生长。简言之，对于初次体外刺激(1VS)，可将大量淋巴细胞(如4×107以上)置于含人血清培养基的烧瓶中。可直接加入血液恶性肿瘤相关肽(如10μg/ml肽)与破伤风类毒素(如5μg/ml)。然后培养该烧瓶(如37℃、7天)。对于第二次1VS，收获T细胞，置于具有2-3×107个照射的外周血单核细胞的新烧瓶中。直接加入血液恶性肿瘤相关肽(如10μg/ml)。37℃培养该烧瓶7天，第二次IVS后的第2天和4天，可加入2-5单位的IL-2。对于第三次IVS，可将T细胞置于孔中并用个体自身的EBV转化B细胞(包太的)刺激。每轮的第2和第4天加入IL-2。一旦证明细胞为特异性细胞毒T细胞，就可在第2、4和6天用较高IL-2(20单位)进行10天剌激周期扩增这些T细胞。
或者用克隆方法在数量上扩增存在血液恶性肿瘤相关肽时增殖的一种或多种T细胞。克隆细胞的方法是该领域熟知的，包括有限稀释法。可用密度梯度离心和羊红细胞玫瑰花结法纯化致敏病人外周血中的反应性T细胞，在存在照射过的自身浸润细胞时，采用命名的抗原刺激培养细胞建立细胞克隆。为了产生CD4+T细胞系，可采用血液恶性肿瘤相关肽作为抗原刺激，并用EB病毒感染无限增殖的自身外周血淋巴细胞(PBL)或成淋巴细胞样细胞系(LCL)作为抗原呈递细胞。为了产生CD8+T细胞系，用能产生血液恶性肿瘤相关肽的表达载体转染自身抗原呈递细胞，用作刺激细胞。可在抗原刺激后2-4天克隆建立的T细胞系，方法是在含有1×106个照射过的PBL或LCL细胞和重组IL-2(50U/ml)的96孔平底板中，接种剌激的T细胞，频率为每孔0.5个细胞。在首次平板接种和存在自身抗原呈递细胞时用适当抗体再刺激后约2-3周，可鉴定具有建立的克隆生长的孔。抗原刺激后加入低剂量rIL-2(10U/ml)2-3天扩增克隆细胞。约每隔二周通过定期抗原和IL-2再刺激可在24孔板中维持T细胞克隆。如所述可将克隆的和/或扩增的T细胞输回给病人，见Chang等(1996)。
某些实施例中，可在体内和/或体外致每同种异型T细胞(即对相关血液恶性肿瘤敏感)。用T细胞接触血液恶性肿瘤相关肽、编码该肽的多核苷酸或产生该肽的细胞在足以致敏T细胞的条件和时间下获得这种致敏。总之，例如通过上述标准的增殖、铬释放和/或细胞因子释放试验测定，如果与血液恶性肿瘤相关肽接触导致T细胞增殖和/或活化，则认为该T细胞是致敏的。与阴性对照相比，增殖或裂解的刺激指数增加二倍以上，细胞因子水平增加三倍以上，表明T细胞的特异性。可在骨髓移植中或作为供体淋巴细胞灌注，采用体外致敏的细胞。
血液恶性肿瘤相关特异性T细胞可杀伤表达血液恶性肿瘤相关蛋白的细胞。在T细胞受体(TCR)链中导入编码相关血液恶性肿瘤相关的基因用作一种方法在质和量上改进对携带血液恶性肿瘤相关肽的白血病和癌细胞的免疫应答。接种能增加与血液恶性肿瘤阳性细胞反应的T细胞数量的疫苗，是靶向携带血液恶性肿瘤相关细胞的一种方法。采用血液恶性肿瘤相关特异性T细胞治疗是另一种方法。另一方法是将地相关血液恶性肿瘤特异的TCR链导入T细胞或是有裂解潜力的其它细胞。一合适的实施例中，从相关血液恶性肿瘤特异性T细胞系中克隆获得TCRα和β链，且用于过继性T细胞治疗，如WO96/30516所述，纳入本文作参考。
4.4药物组合物和疫苗制剂
本发明某些方面中，可将所述肽、多核苷酸、抗体和/或T细胞掺入药物组合物或免疫原性组合物(如疫苗)。或者，所述药物组合物可含有转染血液恶性肿瘤相关多核苷酸的抗原呈递细胞(如树突细胞)，这样该抗原呈递细胞表达血液恶性肿瘤相关肽。该药物组合物含有一种或多种这类化合物或细胞和生理上可接受的载体或赋形剂。疫苗可含有一种或多种这类化合物或细胞和免疫刺激剂如佐剂或脂质体(化合物掺入其中)。免疫刺激剂可以是能提高或增强对外原抗原的免疫应答(抗体和/或细胞介导)的物质。免疫刺激剂的例子包括佐剂、生物可降解微球体(如聚乳酸半乳交酯)和脂质体(化合物掺入其中)(美国专利4,235,877)。疫苗制品一般描述于Powell和Newman(1995)。本发明范围内的药物组合物和疫苗也可含有生物活性或无活性的其它化合物。例如可加入其它肿瘤抗原的一种或多种免疫原性部分或掺入融合肽中，或作为组合物或疫苗内单独的化合物。
某些实施例中，设计药物组合物和疫苗在患者如人中诱发对血液恶性肿瘤相关肽特异的T细胞应答。一般通过采用较短的肽(如天然血液恶性肿瘤相关肽的23个以下连续氨基酸残基，优选4-16个连续残基，更优选8-16个连续残基，最优选8-10个连续残基)有利于T细胞应答。另一方面或此外，所述疫苗可含有优先增强T细胞应答的免疫刺激剂。换言之，该免疫刺激剂可提高T细胞对血液恶性肿瘤相关肽的应答水平，按比例数量＞增强抗体应答的数量。例如，当与标准的油性佐剂如CFA相比时，优先增强T细胞应答的免疫刺激剂可提高的增殖性T细胞应答，比相关的血液恶性肿瘤阴性对照细胞系至少高二倍，提高裂解反应至少10％和/或提高T细胞活化至少二倍，虽然没有检测到抗体应答增强。一般可采用该领域已知的任何代表性技术如本文提供的技术，来测定增强的对血液恶性肿瘤相关肽的T细胞的数量或抗体应答。
药物组合物或疫苗可含有编码上述一种或多种肽的DNA，这样就原位产生了肽。如上所述，可将DNA置于该领域普通技术人员已知的任何各种传递系统中，包括核酸表达系统、细菌和病毒表达系统、哺乳动物表达系统。许多基因传递技术是本领域熟知的(Roll and，1998，和本文引用的参考文献)。合适的核酸表达系统含有在病人中表达所需的DNA、cDNA或RNA(如合适的启动子和终止信号)。细菌传递系统包括给予能在其细胞表面表达肽的免疫原性部分或分泌表位的细菌(如BCG)。一优选实施例中，采用病毒表达系统(如牛痘或其它痘病毒、逆转录病毒或腺病毒)导入该DNA，此系统涉及采用非致病性(缺陷性)复制病毒(Fisher-Hoch等，1989；Flexner等，1989，Flexner等，1990；美国专利4,603,112、4,769,330；5,017,487；国际专利申请WO 89/01973；美国专利4,777,127；英国专利GB 2,200,651；欧洲专利EP0,345,242；国际专利申请WO 91/02805；BerKner，1988；Rosenfeld等，1991；Kolls等，1994；Kass-Ersler等，1993；Guzman等，1993a；和Guzman等，1993)。将DNA掺入这类表达系统的技术是该领域普通技术人员熟知的。DNA也可是“裸的”，例如见Ulmer等(1993)所述和Cohen(1993)的综述。可通过将该DNA包被在可生物降解的小珠上有效地转运入细胞，来增加裸DNA的摄入。显然一种疫苗可含有多核苷酸和肽组分。这种疫苗可提供增强的免疫应答。
如上所述，药物组合物或疫苗可含有能表达血液恶性肿瘤相关肽的抗原呈递细胞。为上述治疗目的，该抗原呈递细胞优选是自身树突细胞。可用标准技术(Reeves等，1996；Tuting等，1998；和Nair等，1998)制备和转染此种细胞。可用上述体外刺激和标准的增殖以及铬释放测定验证抗原呈递细胞的表面上血液恶性肿瘤相关肽的表达。
本领域普通技术人员懂得本文所述的好处是，疫苗可含有上述多核苷酸和肽的药学上可接受的盐。可从药学上接受的非毒性碱，包括有机碱(如伯、仲、叔胺和碱性氨基酸的盐)和无机碱(如钠、钾、锂、铵、钙和镁盐)制备此种盐。短语“药学上或药理学上可接受的”指当给予合适的动物或人时，不会产生副作用、过敏或其它明显不良反应的分子实体和组合物。术语“药学上可接受的载体”包括任何或所有的溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂、抗真菌剂、等渗剂和吸收延缓剂等。用于药物活性物质的这类介质和制剂是本领域熟知的。应考虑用于治疗组合物时，除迄今已知的与活性成分不相容的任何常规介质或制剂。对于人给药，制品应符合食品和药物管理局的生物制品标准所要求的无菌、无热源、总体安全和纯度标准。组合物中也可掺入补充的活性成分。
虽然本发明药物组合物中可采用本领域普通技术人员已知的任何合适的载体，但载体的类型根据给药方式而不同。可将本发明组合物配制成任何合适的给药方式例如局部、口服、鼻、静脉内、颅内、腹膜内、皮下或肌肉内给药的剂型，对于胃肠道外给药如皮下注射，载体最好含有水、盐水、酒精、脂肪、蜡或缓冲剂。对于口服给药，可采用任一上述载体，或固体载体如甘露糖醇，乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石粉、纤维素、葡萄糖、蔗糖和碳酸镁。也可采用生物可降解微球体(如聚乳酸聚羟乙酸盐)作为本发明药物组合物的载体。合适的生物可降解微球体见例如美国专利4,897,268；5,075,109；5,928,647；5,811,128；5,820,883；5,853,763；5,814,344和5,942,252中所述。对于某些局部应用，优选用熟知的组分配制成霜剂或洗剂。
这类组合物也可含有缓冲剂(如中性缓冲盐水或磷酸缓冲盐水)、碳水化合物(如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖)，甘露糖醇、蛋白质、肽或氨基酸如甘氨酸、抗氧化剂、抑菌剂，螯合剂如EDTA或谷胱甘肽、佐剂(如氢氧化铝)、能赋予该制剂与受者血液等渗、低渗或微高渗的溶质、悬浮剂、增稠剂和/或防腐剂。或者，可将本发明组合物配制成冻干剂，或用熟知的技术配制成一种或多种脂质体、微球体、纳米颗粒或微粒化传递系统。
在制备本发明疫苗组合物时，可采用任何各种免疫刺激剂如佐剂。大多数佐剂含有保护抗原免被快速分解的物质如氢氧化铝或矿物油、免疫应答刺激剂如脂质A、来源于百日咳鲍特氏菌或结核分枝杆菌的蛋白质。合适的佐剂可从市场上购得，如铝基佐剂(如Alhydrogel、Rehydragel、磷酸铝；Algammulin，氢氧化铝)；油基佐剂(弗氏不完全佐剂和完全佐剂(Difco Laboratories，Detroit，MI)、Specol、RIBI、TiterMax、Montanide ISA 50或Seppic MONTANIDE ISA 720)、基于非离子嵌段共聚物的佐剂、细胞因子(如GM-CSF或Flat3-配体)；Merck佐剂65(Merck and CompanyInc.Rahway，NJ)；AS-2(Smithkline Beecham，Philadelphia.PA)；钙、铁或锌的盐；酰化酪氨酸的不溶性悬浮液；酰化糖；阳离子或阴离子衍生的多糖；聚磷腈；生物可降解微球体；单磷酰脂质A和Quil A。细胞因子如GM-CSF或IL-2、IL-7或IL-12也可用作佐剂。
血蓝蛋白和血红细胞素也可用于本发明。特别优选采用匙孔血蓝蛋白(KLH)，虽然可采用其它软体动物和节肢动物的血蓝蛋白和血红细胞素。也可采用各种多糖佐剂。特别优选多糖的聚胺变体如壳多糖和脱乙酰壳多糖。
另一组优选佐剂是细菌肽聚糖的胞壁酰二肽(MDP，N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺)。也考虑胞壁酰二肽的衍生物，如氨基酸衍生物苏氨酰-MDP和脂肪酸衍生物MTPPE。
美国专利4,950,645描述了胞壁酰二肽的亲脂性二糖-三肽衍生物，提议可用于磷脂酰胆碱和磷脂酰甘油形成的人工脂质体。据说其能有效激活人单核细胞和破坏肿瘤细胞，但通常高剂量时无毒性。也提出美国专利4,950,645和国际专利申请WO91/16347的化合物可用于本发明的具体方面。
也可采用BCG和BCG细胞壁骨架(CWS)作为本发明的佐剂，加或不加海藻糖二霉菌酸。可采用海藻糖二霉菌酸本身。Azuma等(1988)证明海藻糖二霉菌酸给药与小鼠对流感病毒感染的抗性增强相关。可按美国专利4,579,945所述制备海藻糖二霉菌酸。
两亲性和表面活性剂如皂苷及衍生物如QS21(Cambridge Biotech)形成了用于本发明疫苗免疫原的另一类优选佐剂。也可使用非离子嵌段共聚物表面活性剂(Rabinovich等，1994；Hunter等，1991)。如Yamamoto等(1988)描述的寡核苷酸是另一类有用的佐剂。Quil A和香菇多糖也是优选佐剂。
还考虑采用超抗原作为本发明佐剂。“超抗原”一般是细菌产物，能刺激比肽抗原更大比例的T淋巴细胞而无需抗原加工(Mooney等，1994)。超抗原包括葡萄球菌外蛋白如金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的α、β、γ和δ肠毒素和大肠杆菌的α、β、γ和δ外毒素。常见的葡萄球菌肠毒素称为葡萄球菌肠毒素A(SEA)和B(SEB)到肠毒素E(SEE)(Rott等，1992)。酿脓葡萄球菌B(SEB)、产气荚膜梭菌肠毒素(Bowness等，1992)、酿脓葡萄球菌的胞质膜相关蛋白(CAP)(Sato等，1994)和金黄色葡萄球菌的毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)(Schwab等，1993)也是有用的超抗原。
一类特别优选用于本发明的佐剂是精制的去毒内毒素，如美国专利4,866,034中所述。这些精制去毒内毒素能在哺乳动物中有效产生佐剂反应。去毒内毒素可与其它佐剂联用。考虑去毒内毒素与海藻糖二霉菌酸联用，见美国专利4,435,386所述。还参考去毒内毒素与海藻糖二霉菌酸及内毒素糖脂联用(美国专利4,505,899)，去毒内毒素与细胞壁骨架(CWS)联用，或CWS与海藻糖二霉菌酸联用，见美国专利4,436,727；4,436,728和4,505,900。预计只联用CWS和海藻糖二霉菌酸而无去毒内毒素也有用，见美国专利4,520,019。
MPL是目前的一种优选免疫增强剂，可用于本发明。关于MPL用途的参考文献包括Tomai等(1987)，Chen等(1991)和Garg和Subbarao(1992)，各关于MPL在老龄小鼠反应中的某些作用；Ellioff等(1991)报道了D-半乳糖胺负载小鼠及其对脂多糖和MPL敏感性的增强；Chase等(1986)报道了与细菌感染的关系，Masihi等(1988)报道了MPL和内毒素对小鼠的抗鼠弓体的作用。Fitzgerald(1991)也报道用MPL上调梅毒疫苗的免疫原性且赋予家兔明显的抗攻击性感染的保护作用。
如以上模型系统所证明，已知MPL使用安全。I期临床试验也显示MPL使用安全(Vosika等，1984)。的确，已知人用时100μg/m2是安全的，即使门诊使用(Vosika等，1984)。
MPL一般诱导多克隆B细胞活化(Baker等，1994)，已证明能在许多系统如免疫不成熟小鼠(Baker等，1988)；老龄小鼠(Tomai和Johnson，1989)和裸鼠及Xid小鼠(Madonna和Vogel，1986；Myers等，1955)中增强抗体产生。显示能产生针对红细胞(Hraba等，1993)、T细胞依赖和不依赖抗原、Pnu-免疫疫苗(Garg和Subbarao，1992)、分离的肿瘤相关抗原(美国专利4,877,611)、同系肿瘤细胞(Livingston等，1985；Ravindranath等，1994a；b)、肿瘤相关神经节苷脂(Ravindranath等，1994a；b)的抗体。
MPL的另一用途是增强IgM应答，Baker等(1988a)报道MPL能提高幼龄小鼠的抗体应答。本发明某些实施例中显示了此佐剂的特别有用的特点。Myers等(1995)最近报道通过不依赖T细胞抗体产生MPL诱导IgM抗体的能力。Myers等(1995)的研究中，将MPL与半抗原TNP偶联。MPL可用作其它半抗原如肽的载体。MPL也可激活和募集巨噬细胞(Verma等，1992)。Tomai和Johnson(1989)证明MPL-刺激的T细胞增强了巨噬细胞分泌IL-1。还知道MPL能激活超氧化物的产生、溶菌酶活性、吞噬、和杀伤鼠腹腔巨噬细胞中的念珠菌(Chen等，1991)。
MPL对T细胞的作用包括在BCG-致敏小鼠的血清中产生内源性细胞毒因子如TNF(Bennett等，1988)。Kovach等(1990)和Elliot等(1991)也证明MPL诱导TNF活性。已知MPL与TNF-α作用以诱导NK细胞释放IFN-γ。Tomai和Johnson(1989)及Odean等(1990)也证明在T细胞对MPL反应中产生IFN-γ。
也已知MPL是强的T细胞佐剂。例如，MPL刺激黑色素瘤-抗原特异性CTL的增殖(Mitchell等，1988，1993)。另外，Baker等(1988b)证明无毒MPL灭活了抑制型T细胞的活性。当然，已认识到在生理环境中，灭活T抑制型细胞能增加对动物的好处，如提高抗体产量。Jonson和Tomai(1988)报道了MPL的佐剂作用的可能的细胞和分子介体。
也知道MPL能诱导血小板凝聚和磷酸化血小板蛋白，继而诱导5-羟色胺分泌(Grabarek等，1990)。此研究表明MPL参与了蛋白激酶C的活化和信号转导。
许多文章关于MPL的结构和功能。这些文章包括Johnson等(1990)描述获自明尼苏达沙门菌Re595脂多糖的MPL同系物的结构特征。Johnson等(1990)与Grabarek等(1990)共同证明，MPL的脂肪酸部分可不同，即使是商品化种类。用薄层层析可将MPL分成8个组分，Johnson等(1990)用人血小板反应评估，发现三个特别有活性。Johnson等(1990)征了各种MPL的化学组分。
Baker等(1992)还分析了影响脂质A及其类似物消除抑制型T细胞活性表达能力的结构特征。他们报道说，将脂质A的磷酸基因从二个减少到一个(即产生单磷酸脂质A，MPL)以及主要去除3位残基减少脂肪酰基含量，导致毒性逐渐降低，然而这些结构修饰不影响其消除TS功能表达的能力(Baker等，1992)。这些类型的MPL用于本发明是理想的。
Baker等(1992)还证明将脂肪酰基含量从5减至4(脂质A前体IVA或Ia)消除了影响TS功能的能力，但不诱导B细胞的多克隆活化。这些研究表明为了能消除TS功能的表达，脂质A必须是葡糖胺二糖，可具有一或二个磷酸基团，且必须具有至少5个脂肪酰基。另外，非羟基化脂肪酸的链长和酰氧酰基(2’和3’位)的位置可能起重要作用(Baker等，1992)。
研究脂肪酰基的链长和位置间关系对消除脂质a表达抑制型T细胞(Ts)活性的能力后，Baker等(1994)发现，链长C12-C14的脂肪酰基似乎生物活性最佳。因此，虽然它们仍可使用，但本发明不太优选采用脂肪基链长较短(铜绿假单胞菌和紫色色杆菌的C10-C12)；或主要是长链(幽门螺杆菌的C18)的脂质A制品。
Baker等(1994)还证明一些细菌多糖的脂质A近侧内核心区寡糖能提高TS活性的表达，主要由于革兰阴性菌结构中相对保守的这类寡糖能扩大或扩增对无关微生物抗原的正常抗体应答过程中产生的CD8+Ts细胞群。据报道，增加所见免疫抑制表达所需的最小结构是一个六糖，其含有2-酮基-3-脱氧辛酸残基、二个葡萄糖残基和三个庚糖残基(其上附着有二个焦磷酸乙醇胺基团Baker等(1994)。这些信息可考虑在本发明中利用或设计另外的佐剂。
相关研究中，Tanamoto等(1994a；b；1995)描述化学合成的脂质A前体，在乙酰化或琥珀酰化后内毒素活性的解离。因此，本发明也考虑采用“乙酰406”和“琥珀酰516”等化合物(Tanamoto等，1994a；b；1995)。
合成的MPL形成一种特别优选的抗原。例如，Brade等(1993)描述一种含脂质A的双磷酰化葡糖胺二糖骨架的人工糖缀合物能结合抗脂质a单抗。这是用于本发明某些方面的一个候选物。
具体考虑本发明采用美国专利4,987,237所述的MPL衍生物。该专利描述MPL衍生物通过脂基团连接于单磷酰脂质A核的伯羟基的侧链上含有一个或多个游离基团如铵基。衍生物提供了偶联脂质A的方便方法，即通过偶联剂将脂质A与各种生物活性材料偶联，并保持脂质A的免疫刺激剂性能。美国专利4,987,237中的所有MPL衍生物都考虑用作本发明的MPL佐剂掺入的细胞。
各种佐剂，甚至于通常不用于人类的那些，仍可用于动物，例如，人们希望产生抗体或随后获得活化的T细胞。例如当采用未照射的肿瘤细胞时可能发生，从佐剂或细胞中产生的毒性或其它副作用在这种情况下是没关系的。
本文所述疫苗中，佐剂组合物最好设计成能诱导Th1型占优势的免疫应答。高水平的Th1型细胞因子(如IFN-r、TNF-α、IL-2和IL-12)倾向于诱导对给与抗原的细胞介导的免疫应答。相反，高水平的Th2型细胞因子(如IL-4、IL-5、IL-6和IL-10)倾向于诱导体液免疫应答。应用本文所述疫苗后，病人将维持包括Th1和Th2型的免疫应答。优选实施例中，其中免疫应答以Th1型占优势，Th1型细胞因子水平的增加高于Th2型细胞因子的水平。采用标准试验不难评估这些细胞因子的水平。细胞因子家族的综述可参见Mosmann和Coffman(1989)。
用于诱导Th1型占优势应答的优选佐剂包括，例如单磷酰脂质A(优选3-脱氧酰化单磷酰脂质a(3D-MPL)与铝盐合用。MPL佐剂可从Corixa Corporation(Seattle WA；见美国专利4,436,727；4,877,611；4,866,034和4,912,094，其各自纳入本文作参考)购买到。含CpG的寡核苷酸(其中CpG二核苷酸是非甲基化的)也诱导Th1型占优势的应答，这类寡核苷酸是熟知的，例如可参见国际专利申请WO96/02555和WO99/33488中所述。Sato等(1996)也描述了免疫刺激DNA序列。另一种优选的佐剂是皂苷，优选是QS21(Aquila Biopharmaceuticals Inc.，Framingham，MA)，可单独或与其它佐剂联用。例如，一种强化系统包括单磷酰脂质A和皂苷衍生物的组合，如QS21和3D-MPL的组合(见国际专利申请WO94/00153)或一种反应原性较低的组合物，其中QS21用胆固醇猝灭(见国际专利申请WO96/33739)。其它优选制剂包括水包油乳剂和生育酚。特别强的佐剂包括QS21、3D-MPL和上述水包油乳剂中的生育酚(见国际专利申请WO95/17210)。
其它优选佐剂包括Montanide ISA720(Seppic)、SAF(Chiron)、ISCOMS(CSL)、MF-59(Chiron)、SBA系列佐剂(如SBAS-2或SBAS-4、购自SmithKline Beecham，Rixensart，Belgium)、Detox(Corixa公司)、RC-529(Corixa公司)和氨烷基氨基葡糖苷-4-磷酸盐(AGPs)。
本发明的任何疫苗可用熟知的方法制备，即将一种或多种抗原，一种或多种免疫刺激剂或佐剂，以及一种或多种合适的载体，赋形剂或药学上可接受的缓冲剂组合在一起。本文所述组合物可作为缓释剂型给药(即以多糖组成的胶囊、海绵或凝胶剂型、能在给药后缓慢释放其中的化合物)。可采用熟知技术(Coombes等，1996)制备此种制剂，并通过口服、直肠或皮下植入在所需的靶位或植入)给药。缓释制剂可含有分散在载体基质和/或包含在储存器(被速率控制膜包围)中的肽、多核苷酸或抗体。
这类制剂中所用的载体优选生物相容性，也可以是生物可降解的，优选提供较恒定水平的活性成分释放的制剂。这类载体包括聚(丙交酯-共乙交酯)的微颗粒以及聚丙烯酸、乳胶、淀粉、纤维素和葡聚糖。其它缓释载体包括超分子生物载体，其含有非液态亲水核心(如交联的多糖或寡糖)和任选的含两亲性化合物如磷脂的外层(美国专利5,151,254、国际专利申请WO94/20078；WO94/23701和WO96/06638)。缓释制剂中活性化合物的量取决于植入部位、释放的速度和预计持续时间，及待防治疾病的性质。
所述药物组合物和疫苗中可采用任何各种传递载体，以促进产生靶向肿瘤细胞的抗原特异性免疫应答。传递载体包括抗原呈递细胞(APC)，如树突细胞、巨噬细胞、B细胞、单核细胞和可被基因改造成有效的APC的其它细胞。这类细胞可以但不需要基因修饰以提高其提呈抗原的能力，改进T细胞应答的活化和/或维持本身具有的抗肿瘤作用，和/或在免疫学上与接受者相容(即配对的HLA单倍型)。一般可从各种生物液体和器官，包括肿瘤和肿瘤外周组织中分离得到APC，且可以是自体的、同种异体的，同种或异种细胞。
本发明某些优选实施例采用树突细胞或其后代细胞作为抗原呈递细胞。树突细胞是很强的APC(Banchereau和Steinman，1998)，已证明其有效作为诱导预防或治疗抗肿瘤免疫性的生理性辅剂(Timmerman和Levy，1999)。通常可根据其典型形态(原位星状，显著的胞质突(树突)体外可见)，摄取、加工和高效呈递抗原的能力及激活原初T细胞应答的能力，来鉴定树突细胞。当然可基因改造树突细胞以表达通常在体内或活体内树突细胞上没有发现特异性细胞表面受体或配体，这类修饰的树突细胞也是本发明考虑的。另一种树突细胞，分泌性载体、抗原负载的树突细胞(称为外染色体)也可用于疫苗中(Zitvogel等，1998)。
树突细胞可获自外周血、骨髓、肿瘤浸润细胞、肿瘤外周组织浸润细胞、淋巴结、脾脏、皮肤、脐带血或任何其它合适的组织或液体。例如，可通过在获自外周血单核细胞的培养物中加入组合细胞因子如GM-CSF、IL-4、IL-13和/或TNFα活体外分化树突细胞。或者，在培养基中加入能诱导树突细胞分化、成熟和增殖的GM-CSF、IL-3、TNF-α、CD40配体、LPS、fit3配体和/或其它化合物，使获自外周血、脐带血或骨髓的CD34阳性细胞分化为树突细胞。
可方便地将树突细胞分成“不成熟”和“成熟”细胞，这是在两种鉴定良好的表型之间区别的简单方法。然而这种命名法不应认为排除了所有可能的分化中间期。不成熟树突细胞被称为PAC，其抗原摄取和加工能力高，这与FCr受体和甘露糖受体的高表达相关。成熟表型的典型特征是这些标志的表达较低，但负责T细胞活化的细胞表面分子，如I类和II类MHC分子、粘附分子(如CD54和CD11)和共刺激分子(如CD40、CD80、CD86和4-1BB)的高表达。
一般用编码血液恶性肿瘤相关肽的多核苷酸转染APC，在细胞表面上表达肽或其抗原性部分。可活体外进行这种转染，含这种转染细胞的组合物或疫苗可用于上述治疗目的。或者，可将靶向树突细胞或其它抗原呈递细胞的基因传递载体给予病人，使其在体内转染。可用该领域已知的任何方法如国际专利申请WO97/24947中所述的方法或Mahvi等(1997)所述基因枪方法进行树突状细胞的体内或活体内转染。可将树突细胞或祖细胞与血液恶性肿瘤相关肽、DNA(裸或在质粒载体中)或RNA一起培育，或与表达抗原的重组细菌或病毒(如牛痘、禽痘、腺病毒或慢病毒载体)一起培育，获得树突细胞的抗原负载。负载前可将此肽共价偶联于提供T细胞辅助的免疫伙伴(如载体分子)。或者，可单独或存在此肽时用非偶联的免疫伙伴脉冲剌激树突细胞。
也考虑联合治疗，可采用同一类型的所述药物组合物作单一和联合药物。所述疫苗和药物组合物可装在单位剂量或多剂量容器，如安瓿或小瓶中。这些容器最好密封保持制剂的无菌，直到使用。一般将这类制剂作为悬浮液、溶液或乳液贮存在油性和水性载体中。或者，可将所述疫苗或药物组合物冻干贮存，使用前只需加入无菌液态载体即可。
4.5血液恶性肿瘤疾病的诊断和预后方法
本发明还提供检测与上述一种或多种多肽或多核苷酸组合物相关的恶性肿瘤疾病的方法，以及监测免疫接种或治疗此类疾病效果的方法。为了确定是否存在与上述一种或多种多肽或多核苷酸组合物相关的恶性肿瘤疾病，可测试病人的对一种或多种组合物特异的T细胞的水平。某些方法中，从病人中分离含CD4+和/或CD8+T细胞的生物样品，与上述一种或多种多肽或多核苷酸组合物一起培育，和/或检测表达一种或多种所述肽或多肽的APC，以及是否存在T细胞的特异性激活。合适的生物样品包括但不限于分离的T细胞。例如，可用常规方法(如Ficoll/Hypaque密度梯度离心外周血淋巴细胞)从病人中分离T细胞。37℃体外将T细胞与上述一种或多种肽、多肽或多核苷酸组合物(如5-25μg/ml)一起培育2-9天(一般4天)。需要在缺乏所述组合物时培养另一等分的T细胞样品作为对照。对于CD4+T细胞，最好通过评价T细胞增殖来检测活化。对于CD8+T细胞，最好通过评价溶细胞活性来检测活化。增殖水平至少比无病者高两倍或溶细胞活性水平至少比无病者高20％，表明存在与上述一种或多种多肽或多核苷酸组合物的表达相关的恶性肿瘤疾病。再采用该领域熟知的方法，进行增殖水平和/或溶细胞活性与对治疗预计反应之间的相关分析。具体说，可预计显示了较高抗体、增殖和/或裂解反应的病人对治疗显示较大的反应。
其它方法中，测定病人的生物样品中对上述一种或多种血液恶性肿瘤相关肽或多肽特异的抗体水平。将该生物样品与血液恶性肿瘤相关肽或多肽，或编码肽或多肽的多核苷酸，和/或表达肽或多肽的APC在适当条件下一起培育足够时间，以形成免疫复合物。然后，检测所选肽或多肽与生物样品中特异性结合所述肽或多肽的抗体之间形成的免疫复合物。此方法中所用的生物样品可以是获自预计含有抗体的病人的任何样品。合适的生物样品包括血液、腹水、骨髓、胸腔积液和脑脊液。
将反应混合物中的生物样品与所选肽或多肽在适当条件下培育足够时间，以使所选肽或多肽与对肽或多肽有免疫特异性的抗体之间形成免疫复合物。例如，将生物样品与所选肽或多肽于4℃培育24-48小时。
培育后检测反应混合物中存在的免疫复合物。检测所选肽或多肽与生物样品中存在的抗体之间形成的免疫复合物，可采用各种已知技术如放射免疫测定(RIA)和酶联免疫吸附测定(ELISA)进行。合适的测定是本领域熟知的，并可参见科学和专利文献的详述(Harlow和Lane，1988)。可用的测定包括但不限于：双单抗夹心免疫测定技术(美国专利4,376,110)，单克隆-多克隆抗体夹心测定(Wide等，1970)；“Western印迹”法(美国专利4,452,901)；标记配体的免疫沉淀(Brown等，1980)；酶联免疫吸附测定(Raines和Ross，1982)；包括利用荧光色素的免疫细胞化学技术(Brooks等，1980)和活性的中和作用(Bowen Pope等，1984)。其它免疫测定包括但不限于美国专利3,817,827；3,850,752；3,901,654；3,935,074；3,984,533；3,996,345；4,034,074和4,098,876中所述的测定。
为了检测目的，所选肽或多肽可标记或不标记。不标记的多肽和肽可用于凝集测定或与标记的检测试剂联用，该标记的试剂能结合所述免疫复合物(如抗免疫球蛋白、蛋白G、蛋白A或凝集素，和能结合第一抗体(此抗体能特异性结合所选血液恶性肿瘤相关肽或多肽)的第二抗体和/其抗原结合片段。如果标记所选肽或多肽，报道基团可以是本领域已知的任何合适的报道基团，包括放射性同位素、荧光基团、发光基团、酶、生物素和染料颗粒。
某些测定中，将不标记的肽或多肽固定在固相支持物上。固相支持物可以是本领域普通技术人员已知的、可附着肽的任何材料。例如，固相支持物可以是微量滴定板中的测试孔，或硝酸纤维素或其它合适的膜。或者，该支持物可以是小珠或园片，如玻璃、玻璃纤维、胶乳或塑料如聚苯乙烯或聚氯乙烯。该支持物也可以是磁性颗粒或光纤传感器，见美国专利5,359,681所述。可用本领域技术人员已知的，专利和科学文献中详述的各种技术，将所述肽固定在固相支持物上。本文中，“固定”指非共价结合如吸附和共价结合(可以是抗原和支持物上的功能基团之间的直接连接，或可以通过交联剂连接)。优选通过吸附固定于微量滴定板的孔中或膜上。在这种情况下，可使所选肽或多肽在合适的缓冲液中与固支持物接触适当时间来获得吸收。接触时间因温度而不同，但通常在约1小时至约1天之间。一般接触塑料(如聚苯乙烯或聚氯乙烯)微量滴定板的孔所用肽量的范围为约10ng至约10μg，优选约100ng至约1μg，以充分固定足够量的肽。
固定后，通常要封闭支持物上的残留蛋白质结合位点。本领域普通技术人员知道可使用任何合适的封闭剂，如牛血清白蛋白、TweenTM20(Sigma Chemical Co.，St.Louis，Mo)热灭活的正常山羊血清(NGS)或BLOTTO(无脂干奶粉的缓冲液，也含有防腐剂、盐和消泡剂)。然后将此支持物与怀疑含有特异性抗体的生物样品一起培育。样品可不稀释或更常用含少量(0.1-0.5％重量)蛋白如BSA，NGS或BLOTTO的缓冲液稀释后加入。通常适当的接触时间(即培育时间)是足以检测到样品中存在的抗体或其抗原结合片段的时间，所述抗体对所选肽或多肽有免疫特异性。优选接触时间是足以结合和未结合抗体或抗体片段之间达到平衡时的至少约95％的结合水平。本领域普通技术人员知道，达到平衡所需时间不难通过测定该期间段发生的结合水平来确定。室温培育时间约30分钟通常足够。
可用适当的缓冲液如含0.1％TweenTM20的PBS洗涤固相支持物，去除未结合样品。然后加入能结合免疫复合物(其至少含有第一种可检测标记或“报道”分子)的检测试剂。将该检测试剂与免疫复合物一起培育足够时间以检测结合的抗体或其抗原结合片段。一般通过测定该时间段发生的结合水平确定适合的时间量。然后除去未结合标记或检测试剂，用合适的试验或分析仪器检测结合的标记或检测试剂。检测报道基团所用方法取决于报道基团的性质。对于放射性标记物，一般适用闪烁计数或放射自显影方法。分光光度法可用于检测染料、发光或化学发光部分及各种色原、荧光标记物等。偶联于不同报道基团(常为放射性或荧光基团或酶)的生物素可用亲和素检测。酶报道基团(如辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、碱性磷酸酶和葡萄糖氧化酶)一般可通过加入底物(通常一个特定时间段)，然后用分光光度计或其它分析反应产物来检测。不论所用的具体方法，结合的检测试剂水平比本底(即获自无病者的生物样品中所观察到的水平)至少高二倍时，表明存在与表达所选肽或多肽相关的恶性疾病。
通常，监测免疫接种或治疗效果的方法，包括监测样品中或动物如病人中对所选肽或多肽特异的抗体或T细胞水平中的变化。监测抗体水平的方法包括以下步骤：(a)将获自治疗或免疫接种前病人的第一种生物样品与所选肽或多肽一起培育，其中培育的条件和时间足以形成免疫复合物；(b)检测所选肽或多肽与生物样品中能特异性结合所选肽或多肽的抗体或抗原结合片段之间形成的免疫复合物；(c)用以后时间例如治疗或免疫接种后采自该病人的第二种生物样品重复步骤(a)和(b)；和(d)比较第一和第二种生物样品中检测到的免疫复合物的量。或者，可用编码所选肽或多肽的多核苷酸，或表达所选肽或多肽的APC代替所选肽或多肽本身。这些方法是检测多核苷酸编码的或APC所表达的所选肽或多肽和生物样品中的抗体和或抗原结合片段之间的免疫复合物。
监测T细胞活化和/或血液恶性肽特异性前体的方法，可包括以下步骤(a)将获自治疗或免疫接种前病人的含CD4+和/或CD8+T细胞的第一种生物样品(如骨髓、外周血或其组分)与血液恶性肽或多肽一起培育，其中培育的条件和时间足以使T细胞特异性活化、增殖和/或裂解；(b)检测T细胞活化、增殖和/或裂解的量；(c)用治疗或免疫接种后采自同一病人的含有CD4+和/或CD8+T细胞的第二种生物样品重复步骤(a)和(b)；和(d)比较第一和第二种生物样品中的T细胞活化、增殖和/或裂解的量。或者可用编码血液恶性肿瘤相关肽的多核苷酸或表达此肽的APC代替血液恶性肿瘤肽本身。
以上方法中所用生物样品可以是获自病人的、预计含有抗体、CD4+T细胞和/或CD8+T细胞的任何样品。合适的生物样品包括血液、血清、腹水、骨髓、胸腔积液和脑脊液。第一种生物样品可获自治疗或免疫接种开始之前，或部分完成治疗或免疫接种方案时。第二种生物样品应以类似方法获得，但时间在治疗或免疫接种之后。第二种生物样品可获自治疗或免疫接种完成时或部分完成时，只要第一和第二种生物样品分离至少已进行了部分治疗或免疫接种。
二种样品的培育和检测步骤一般按上述进行。第二种样品中的免疫复合物的量比第一种样品有统计学显著增加，反映治疗或免疫接种成功。
4.6药物组合物和制剂的给药
某些实施例中，本发明涉及用药学上可接受的溶液配制上述一种或多种多核苷酸、多肽、肽、抗体或抗原结合片段组合物，单独或与抗癌症治疗的一种或多种其它方式组合，或与一种或多种诊断或治疗剂组合给予细胞或动物。
也可理解，若需要，可将上述核酸片段、RNA或DNA组合物与其它制剂如蛋白质或肽或各种药物活性剂组合给药。只要该组合物至少含有一种上述基因表达构建物，事实上不限制也可包含其它组分，只要加入的制剂与靶细胞或宿主组织接触时不产生显著副作用。如需要时，RNA或DNA衍生物组合物可与其它各种制剂一起传递。这类RNA或DNA组合物可从宿主细胞或其它生物来源纯化得到，或者可如上述化学合成。同样，这类组合物可含有取代或衍生的RNA或DNA组合物。这类组合物可包括一种或多种治疗性基因构建物，单用或与一种或多种修饰的肽或核酸取代衍生物和/或其它抗癌治疗剂组合。
随着合适给药和治疗方案的发展，药学上可接受的赋形剂和载体溶液的配制是精通此领域的技术人员熟知的，以将本文所述的特定组合物用于各种治疗方案，包括例如口服、静脉内、鼻内、经皮、前列腺内、肿瘤内和/或肌肉内施用和制剂。
4.6.1注射输药
本文所述药物组合物例如可通过胃肠道外、静脉内、肌肉内或甚至腹膜内给药，如美国专利5,543,159；5,641,515和5,399,363所述(各自纳入本文作为参考)。可将水与表面活性剂如羟丙基纤维素适当混合，制备活性化合物的游离碱或药学上可接受盐的溶液。也可用甘油、液态聚乙二醇及其混合物和油制备分散剂。在普通的贮藏和使用条件下，这些制品应含有防腐剂以预防微生物生长。
适合于注射的药物形式包括无菌水溶液或分散液，和无菌粉剂临用时配成无菌注射液或分散液(美国专利5,466,468，纳入本文参考)。所有情况下制剂必须无菌，必须是易用针筒装的液体。在生产和贮藏条件下必须稳定，必须防止微生物如细菌和真菌污染。载体可以是溶剂或分散介质，含有例如水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、液态聚乙二醇等)，其合适的混合物和/或植物油。可维持合适的流动性，例如通过采用包衣如卵磷脂，可通过使用表面活性剂保持分散剂中所需的颗粒大小。可加入各种抗细菌和抗真菌剂如对羟基苯甲酸脂、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等产生防止微生物的作用。许多情况下，优选包括等渗剂如糖和氯化钠。可通过在组合物中采用延缓吸收剂，如单硬脂酸铝和明胶延长可注射的组合物的吸收。
若需要，胃肠道外给药的水溶液应适当地缓冲，可用足量的盐和糖使液体稀释液等渗。这些特定的水溶液尤其适合静脉内、肌肉内、皮下和腹膜内给药。为此，本领域技术人员通过本文所述将知道可用的无菌含水介质。例如，可将一个剂量溶于1ml等渗NaCl液中，加入到100ml的皮下输液中或在提出的输注部位注射(见例如Hoover，1970)。一些剂量变化是需要的，取决于待治疗者的状况。在任何情况下，负责给药的人将决定个体对象的适合剂量。此外，对于人施用，制品应符合FDA生物制品标准的无菌、致热原性、总体安全和纯度标准。可将所需量的基因治疗构建物和几种其它上述成分掺入适当的溶剂中，如需要然后过滤除菌制备无菌注射液。通常将多种灭菌活性组分掺入含有基础分散介质和所需的上述其它组分的无菌载体中制成分散液。制备无菌注射液的无菌粉未时，优选的制备方法是真空干燥或冻干技术，从其预先除菌过滤液制备活性组分和其它所需成分的粉末。
上述组合物可配制为中性或盐形式。药学上可接受的盐包括用无机酸如盐酸或磷酸或有机酸如醋酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等形成的酸加成盐。与游离羧基形成的盐可衍生自无机碱如钠、钾、铵、钙、氢氧化铁和有机碱如异丙胺、三甲胺、组胺、普鲁卡因等。配制时将此溶液以与剂型相配方式和治疗有效量给药。该制剂可以各种剂型如注射溶液、药物释放胶囊等易于给药。
本文所用的“载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、载体、包衣、稀释液、抗细菌和抗真菌剂、等渗剂和吸收延缓剂、缓冲剂、载体溶液、悬浮液、胶体等。药物活性物质所用的这类介质和制剂是本领域熟知的。除了迄今已知与活性成分不相容的任何常规介质或制剂外，均可考虑用于本发明的治疗组合物。也可将辅助的活性成分掺入组合物中。
4.6.2鼻内输药
可采用鼻液或喷雾、气雾甚至吸入剂来治疗与上述一种或多种肽和多核苷酸相关的血液恶性肿瘤。鼻液是通常用于滴或喷雾给予鼻通道而设计的水溶液。制备的鼻液应在许多方面类似于鼻分泌液以维持正常的纤毛活动。鼻水溶液一般是等渗和略有缓冲性以维持PH约5.5-6.5。此外，若需要，可在该制剂中加入类似于眼科制剂中所用的抗微生物防腐剂和适当的药物稳定剂。各种商品化鼻制剂是已知的。
吸入剂或吸入物是设计用于传送药物或化合物至病人呼吸树的药物制剂。给予蒸气或湿气且到达患病区域常可缓解支气管和鼻阻塞症状。然而，也可借此途径将药物输送至全身循环。可通过鼻或口呼吸给予吸入剂。如果液滴大小足够细和均匀，这样湿气到达细支气管，施用吸入液才有效。
另一类产品也称为吸入剂，有时称为吹入剂由细粉化的或液态药物组成，可用特殊的给药系统，如将药液或药物悬液保持为液化气体推进剂的药物气雾剂将其带入呼吸道。当通过一合适的阀门和口腔适配器释放时，可将定量的吸入剂推入病人的呼吸道。
此类制剂给药时颗粒大小是重要的。据报道，能透入肺腔的最佳粒子大小为约0.5-7μm。加压气雾剂可产生细小湿气，因此可考虑优先采用。
4.6.3脂质体、纳米胶囊和微粒介导的输药
在某些实施例中，本发明人考虑采用脂质体、纳米胶囊、微球体、微粒、脂质颗粒载体等，将本发明多核苷酸组合物导入适合的宿主细胞。具体说，可将本发明多核苷酸组合物配制包裹在脂性粒子、脂质体、载体、毫微球或纳米颗粒等中来输送。
为加入上述核酸的药学上可接受制剂，这类制剂是优选的。脂质体的形成和用途通常是本领域技术人员已知的(见例如Couyreur等，1997；Couvreur，1988；Lasic，1998；他们报道了脂质体和纳米胶囊在抗生素靶向治疗胞内细菌感染和疾病中的应用)。最近开发的脂质体具有改进的血清稳定性和循环半寿期(Gabizon和Papahadjopoulos，1988；Allen和Choun，1987；美国专利5,741,516，纳入本文作为参考)。另外，已综述了脂质体和脂质体样制剂用作潜在药物载体的各种方法(见Takakura，1998；Chandran等，1997；Margalit，1995；美国专利5,567,434；5,552,157；5,565,213；5,738,868和5,795,587，各自纳入本文作为参考)。
脂质体已成功地用于其它方法通常不能转染的一些细胞类型，包括T细胞悬液、原代肝细胞培养物和PC12细胞(Renneisen等，1990；Muller等，1990)。此外，脂质体对DNA长度没有通常基于病毒输送系统的限制。脂质体已有效用于在各种培养的细胞系和动物中导入基因、药物(Heath和Martin，1986；Heath等，1986；Balazsovits等，1989；Fresta和Puglisi，1996)、放射性治疗剂(Pikul等，1987)、酶(Imaizumi等，1990a；Imaizumi等，1990b)、病毒(Faller和Baltimore，1984)、转录因子和别构剂(Nicolau和Gersonde，1978)。此外，已完成了检测脂质体介导药物输送效果的几项成功临床试验(Lope Berestein等，1985a；1985b；Coune，1988；Sculier等，1988)。此外，几项研究提示，采用脂质体全身给药后不会伴有自身免疫反应、毒性或性腺定位(Mori和Fukatsu，1992)。
将磷脂分散在水介质中形成脂质体且自发形成多层同心双层载体(也称为多层载体MLV)。MLV一般直径25nm-4μm。超声处理MLV导致形成直径200-500的小单层载体(SUV)，核心中含水溶液。
脂质体类似细胞膜，可考虑用于本发明作为所述肽组合物的载体。它们广泛适用于作为水溶性和脂溶性物质分别包载在水空间和双层本身内。载有药物的脂质体通过选择性修饰脂质体制剂可位点专一输送活性药物。
除Couvreur等(1977，1988)所述外，以下信息可用于产生脂质体制剂。当磷脂分散在水中时形成脂质体以外的各种结构，这取决于脂质与水的摩尔比。比例低时，脂质体是优选的结构。脂质体的物理特征性依赖于PH、离子强度和双价阳离子的存在。脂质体可显示对离子和极性物质的低通透性，但温度升高时经历相转变可显著改变其通透性。相转变包括从包装紧密的有序结构(称为凝胶态)改变为包装松散不太有序的结构(称为流动态)。这发生在特征性的相转变温度时，且导致对离子、糖和药物的通透性增加。
或者，本发明提供多核苷酸组合物的药学上可接受的纳米胶囊制剂。纳米胶囊一般可以稳定和可重复方式包载化合物(Henry-Michelland等，1987；Quintanar-Guerrero等，1988；Douglas等，1987)。为了避免因胞内聚合物过载产生的副作用，应采用能在体内降解的聚合物设计这类超细颗粒(大小约0.1μm)。生物可降解的聚烷基氰基丙烯酸纳米颗粒符合这些要求，可考虑用于本发明，这类颗粒不难制备，见(Couvreur等，1980；1988；Zur Muhlen等，1998；Zambaux等，1998；Pinto-Alphandry等，1995和美国专利5,145,684，各自纳入本文参考)所述。具体说，也特别考虑用纳米颗粒和毫微球将多核苷酸输送给靶细胞的方法用于制备所述组合物，给予动物，尤其给与人。
4.7治疗制剂和试剂盒
本发明还提供含有一种或多种药学上可接受的赋形剂、载体、稀释剂、佐剂和/或其它组分配制的一种或多种血液恶性肿瘤相关组合物，用于制备药物或诊断试剂以及各种试剂盒，所述试剂盒含有一种或多种这类组合物、药物或制剂，以及给予需要的动物或用于一种或多种诊断试验来鉴定对上述一种或多种血液恶性肿瘤相关化合物特异的多核苷酸、多肽和/或抗体。除上述表位外，在配制上述具体组合物和制剂时，可采用所述抗体和抗原结合片段、编码抗体或抗原结合片段的多核苷酸或其它抗癌药物、多核苷酸、肽、抗原或其它治疗化合物，特别是在制备抗癌药物或给予患病哺乳动物的抗血液恶性肿瘤治疗。
因此，优选给予上述药物组合物的动物包括哺乳动物，特别是人。其它优选动物包括灵长动物、绵羊、山羊、牛、马、猪、狼、犬和猫以及任何其它通常认为是哺乳动物种类的宠物、家畜或商业化相关动物种类。本发明的组合物和制剂可包括部分或明显纯化的多肽、多核苷酸或抗体或抗原结合片段组合物，单用或与一种或多种其它活性成分、抗癌药物、疫苗、佐剂或其它治疗剂组合使用，这些治疗剂可获自天然或重组来源，或可是天然获得的或化学合成的，或由表达一种或多种核酸区段的重组宿主细胞体外产生的，这些核酸区段编码一种或多种其它活性成分、载体、佐剂、辅因子或其它治疗性化合物。
4.8诊断试剂和试剂盒
本发明还提供诊断试剂和试剂盒，它们包含用于各种诊断试验包括免疫测定如ELISA和“夹心”型免疫测定的一种或多种试剂。此试剂盒优选包括本发明的至少第一种肽或第一种抗体或抗原结合片段、其功能性片段或它们的混合物和产生信号的物质。可将此试剂盒组分预先附着于固相支持物上或在使用时施加在固相支持物表面。信号产生物质可预先与本发明抗体结合或使用前需要与一种或多种组分如缓冲液、抗体-酶偶联物、酶底物等组合。该试剂盒也可包括其它试剂如封闭试剂用以降低与固相表面的非特异性结合、洗涤试剂、酶底物等。该固相表面可以以微量滴定板、微球体形式或其它适合固定蛋白质、肽或多肽的物质。能催化形成化学发光或生色产物或能减少化学发光或生色底物的酶是一种优选的产生信号的组分。这类酶是本领域熟知的。
这类试剂盒用于检测、监测和诊断过度表达或不适当表达血液恶性肿瘤相关肽、多肽、抗体和/或多核苷酸及杂交瘤、宿主细胞和含有上述一种或多种组合物的载体为特征的疾病。
制备的本发明治疗性和诊断性试剂盒也可包含至少一种上述抗体、肽、抗原结合片段，杂交瘤、载体、疫苗、多核苷酸或细胞组合物，及使用该组合物作为诊断试剂或治疗剂的说明书。此试剂盒中的容器通常包括至少一个小瓶、试管、烧瓶、瓶、针筒和其它合适的容器，容器中装有一种或多种所述诊断和/或治疗组合物，最好适当地分成等分。当提供第二种治疗剂时，该试剂盒还包含第二个不同容器，此容器中装有第二种诊断和/或治疗组合物。或者，可以一种药物组合物制备多个化合物，将其包装在一个容器中如小瓶、烧瓶、针筒、瓶或其它合适的单一容器中。本发明的试剂盒通常还包括密封装有小药瓶供商品销售的装置，如注塑或吹塑容器中装有所需的小。该试剂盒内还装有放射标记的生色素、荧光素或其它类型的可检测标记和检测工具，可在同一容器中提供标记剂如同诊断或治疗组合物本身，或者置于装有第二种组合物并适当地分成等分的第二个不同容器中。或者，可将检测试剂和标记装在单一容器中，且在大多数情况下，该试剂盒一般还包括有密封小瓶的装置供商品销售和/或方便包装和运输。
4.9多核苷酸组合物
术语“DNA区段”和“多核苷酸”指特定物种中去除总基因组DNA分离得到的一种DNA分子。因此，编码多肽的DNA区段指含有一个或多个编码序列的DNA区段基本上分离或纯化去除了物种(获得DNA区段的物种)总基因组DNA。术语“DNA区段”和“多核苷酸”包括DNA区段和该区段的较小片段和重组载体如质粒、粘粒、噬粒、噬菌体、病毒等。
本领域技术人员了解本发明的DNA区段可包括基因组序列、额外的基因组和质粒编码的序列和较小的经工程改造的基因区段，它们能表达或适合表达蛋白质、多肽或肽等。这种节段可天然分离或经人工合成修饰。
“分离的”本文用于指基本上没有其它编码序列的多核苷酸和不含有大部分无关编码DNA如染色体大片段或其它功能性基因或多肽编码区的DNA区段。当然，所指的DNA区段是最初分离的且不排除后来在该区段中人为加入的基因或编码区。
本领域技术人员知道多核苷酸可以是单链(编码或反义)或双链，可以是DNA(基因组、cDNA或合成的)或RNA分子。RNA分子包括HnRNA分子(其含有内含子并以一对一方式对应于一个DNA分子)和mRNA分子(其不含内含子)。本发明的多核苷酸中可能有其它编码或非编码序列但不需要，多核苷酸可能(但不需要)连接于其它分子和/或支持物。
所述多核苷酸可含有天然序列(即编码血液恶性相关肿瘤蛋白或其部分的内源性序列)，或可含有该序列的变体或生物学或抗原性功能等同物。多核苷酸变体含有下述一个或多个取代、添加、缺失和/或插入，优选编码的多肽与天然肿瘤蛋白相比不会免疫原性。一般可如本文所述评估对编码多肽的免疫原性的影响。术语“变体”还包含异种来源的同源基因。
当比较多核苷酸或多肽序列时，如果两序列当排列对比其最大一致性时，核苷酸或氨基酸的序列相同则认为两个序列“相同”。两序列之间进行比较通常比较序列窗口上的序列以鉴别和比较局部区域的序列相似性。“比较窗口”本文用于指至少约20个毗连位置，通常约30-75个、40-50个毗连位置的区段，其中在两序列最佳排到后一个序列可与相同序号毗连位置的参比序列相比较。
比较序列的最佳排列可用Lasergen生物信息软件包(DNASTAR Inc.Madison WI)中的Megalign程序进行，采用默认参数。该程序包括几种排列方案，见以下参考文献中所述：Dayhoff MO(1978)一种蛋白质进化改变的模型-检测远亲关系的模型。Dayhoff，MO编《蛋白序列和结构图集》，National Biomedical Research Foundation，Washington DC，第5卷，增刊3，345-358页；Hein J(1990)《排列和种系发生的统一方法》，626-645页，《酶学方法》，第183卷，Academic Press，Inc.，San DiegoCA；Higgings，D.G.和Sharp，P.M.(1989)CABIOS 5：151-153；Myers，E.W.和MullerW.(1988)CABIOS 4：11-17；Robinson，E.D.(1971)Comb.Theor 11：105；Santou，N.Nes，M(1987)Mol.Biol.Evol.4：406-25；Sneath P.H.A和Sokal，R.R.(1973)《数值分类学一数值分类学的原理和实践》，Freeman Press，San Frncisco，CA；Wilbur，W.J.和Lipman，DJ(1983)Proc.Natl.Acad，Sci.USA 80：726-730)。
或者，比较的最佳序列排列可用Smith和Waterman(1981)Add.APL.Math 2：482的局部民一性算法，Needleman和Wunsch(1970)J.Mol.Biol.48：443的同一性排列算法，Pearson和Lipuman(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：2444的类似方法搜索，计算机实施的这些算法(GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA和TFASTA，威斯康新遗传学软件包，遗传学计算机小组(GCG)，575 Science Dr.，Madison，WI)或察看来进行。
适合测定序列同一性或序列相似性的优选算法的例子是BLAST和BLAST2.0算法，分别见Altschul等，(1977)Nucl.Acids Res.25：3389-3402和Altschul等，(1990)J.Mol.Biol.215：403-410。例如，可用BLAST和BLAST2.0与上述参数来测定本发明多核苷酸和多肽的序列同一性百分比。进行BLAST分析的软件可从固定生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information)获得。一个说明性实施例中，可采用参数M(-对匹配残基奖分；总是＞0)和N(不匹配残基的罚分，总是＜0)计算核苷酸序列的累积评分。对氨基酸序列，可用评分矩阵计算累计分。当累计排列评分从其达到的最大值下降数量X时；当累计评分由于累积一个或多个负分残基排列而下降到零或以下时；当达到二序列之一的未端时；停止各方向命中词的延伸。BLAST算法参数W，T和X确定了该算法的灵敏度和速度。BLASTN程序(用于核苷酸序列)用作默认值词长(W)为11，期望值(E)为10，BLOSUM 62评分矩阵(见Henikoff和Henikoff(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10915)排列，B为50，期望值(E)为10，M＝5，N＝-4，并比较两条链。
对于两序列的最佳排列，“序列同一至少20个位置的比较窗口上性百分比”的测定最好通过比较的两个最佳对比序列。其中比较窗口中的多核苷酸或多肽序列部分与参比序列(不含有添加或缺失)相比，可含有20％或不到、通常5-15％或10-12％的添加或缺失(即空隙)。计算此百分比可通过测定两个序列中出现的核酸碱基或氨基酸残基的位置数，产生相匹配的位置数，将该匹配的位置数除以参比序列中的位置总数(即窗口大小)，再乘以100，得出序列同一性的百分比。
因此，本发明包括与本文所述序列基本相同的多核苷酸和多肽序列，例如用本文所述方法(如采用标准参数的BLAST分析，如以下所述)。比较了本发明多核苷酸或多肽序列的同一性，至少有50％序列同一性，优选至少55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％或更高的序列同一性。本领域技术人员知道，可通过考虑密码子简并性、氨基酸相似性、读框定位等，适当调整这些值来确定二个核苷酸序列编码的蛋白质的相应同一性。
其它实施例中，本发明提供分离的多核苷酸和多肽含有与本文所述一种或多种序列相同或互补的不同长度的毗连序列。例如，本发明提供的多核苷酸含有本文所述的一种或多种序列的至少约15、20、30、40、50、75、100、150、200、300、400、500或1000或更多的毗连核苷酸以及所有中间长度的核苷酸。不难理解本文中的“中间长度”指上述数值之间的任何长度，如16、17、18、19等；21、22、23等；30、31、32等；50、51、52、53等；100、101、102、103等；150、151、152、153等，包括200-500、500-1000之间的所有整数等。
本发明的多核苷酸或其片段，不论编码序列本身的长度，均可与其它DNA序列如启动子、聚腺苷酸化信号、附加的限制性酶位点、多克隆位点、其它编码区段等组合，这样其总长度可相当不同。因此考虑可采用几乎任何长度的核酸片段，总长度最好受到制备容易和所用重组DNA方案的限制。例如，考虑在本发明许多实施例中所用的说明性DNA区段具有约10000、5000、3000、2000、1000、500、200、100、50个碱基对的总长度等(包括所有中间长度)。
其它实施例中，本发明涉及能在中等严谨条件下与本文所述多核苷酸序列或其片段或其互补序列杂交的多核苷酸。杂交技术是分子生物学领域熟知的。为了说明起见，测试本发明多核苷酸与其它多核苷酸杂交的合适中等严谨条件包括以5×SSC、0.5％SDS、10mM EDTA(PH8.0)溶液预洗涤，于50-65℃，5×SS中杂交过夜，然后于65℃以含0.1％SDS的2×，0.5×和0.2×SSC洗二次，各20分钟。
然而，本领域普通技术人员懂得，由于遗传密码的简并性，编码上述多肽的核苷酸序列有许多。其中，一些多核苷酸与任何天然基因的核苷酸序列的同源性最小。因而，本发明要具体考虑由于密码子使用的差异造成的多核苷酸不同。此外，含有本文所述多核苷酸序列的等位基因也在本发明范围内。等位基因是由于核苷酸的一个或多个突变如缺失、添加和/或取代而发生改变的内源性基因。产生的mRNA和蛋白质可能(但不需要)有改变的结构或功能。可用标准技术(如杂交扩增和/或数据库序列比较)鉴定等位基因。
4.10探针和引物
本发明其它实施例中，可有利地将本文所述多核苷酸序列用作核酸杂交的探针或引物。为此，考虑到核酸区段含有的序列区域至少长约15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95个毗连核苷酸序列，与其相同或互补的序列至少长约15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95个毗连核苷酸序列，将发现多核苷酸在各种杂交实施例中特别有用。较长的相同或互补的毗连序列如约100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、525、550、575、600、650、700、750、800、850、900、950甚至1000个核苷酸(包括所有中间长度)和所有全长序列如上述多核苷酸也可在某些实施例中用作探针、引物或扩增目标等。
这类核酸探针能与感兴趣的序列特异性杂交，使它们用于检测给定样品中存在的互补序列。然而也考虑其它用途，如利用序列信息制备突变种引物或引物，用于制备其它基因构建物和鉴定及表征全长多核苷酸和全长或基本上全长的cDAN，mRNA等。
特别考虑具有与本文所述一种或多种多核苷酸序列相同或互补的毗连核苷酸序列区的多核苷酸分子，作为杂交探针用于如Southern杂交分析和Nothern印迹因此需要分析各种细胞类型和各种细菌细胞中的基因产物或其片段。片段的总体大小和互补序列的大小最终取决于所用的具体核酸区段。较小片段一般用于杂交实施例，其中毗连互补区的长度可不同，根据杂交分析的所需目的和希望检测的互补序列的具体长度，例如在约15、20、25、30、35、40、45、50、55、60左右之间，包括较大的毗连互补序列，包括长约70、80、90、100、120、140、160、180或200左右的核苷酸序列也可使用。
采用长约20-500个核苷酸的杂交探针能形成稳定和选择性的双链体分子。通常优选具有长20个左右碱基以上的毗连互补序列的分子以提高杂交体的稳定性和选择性，从而改进所得特异性杂交分子的量和程度。一般最好设计核酸分子具有长约25-300左右之间的连续核苷酸的基因互补序列，需要时甚至可更长。
可从本文所述序列之一的任何部分选择杂交探针。为此需要回顾所述序列或其长约15-30个核苷酸序列的毗连部分，包括希望用全长序列作为探针或引物。探针或引物序列的选择受制于多种因素。例如可能希望采用从总序列末端开始的引物。
小的多核苷酸区段或片段与通过化学方法直接合成片段制备，如通常可利用自动化寡核苷酸合成仪进行。也可应用核酸再生技术，如美国专利4,683,262的PCRTM技术(纳入本文作参考)，通过在重组载体中导入所选序列，重组产生这些片段，或采用分子生物学领域技术人员已知的其它重组DNA技术。
可利用本发明的核苷酸序列与感兴趣的全基因或基因片段的互补序列选择性形成双链体分子的能力。取决于所考虑的用途，通常需要采用不同的杂交条件来实现探针对于靶序列的不同程度的选择性。对于需要高选择性的应用，通常需要用较严谨条件以形成杂交变体，可选择相对低的盐和/或高温条件如盐浓度约0.02M-0.15M，温度约50-70℃。这类选择性条件(如果有)宽容性小，探针和模板或靶链之间错配，此种条件特别适合分离相关序列。
当然，对于某些应用，例如需要用突变引物链与其下模板杂交制备突变体时，一般需要严谨性较低的杂交条件以便形成异源双链体。在这些情况下，可能需要采用约0.15M-0.9M的盐，约50-55℃的温度。因而不难鉴定到交叉杂交种作为相对于对照杂交的阳性杂交信号。总之，一般认为增加加入的甲酰胺(其作用是随着温度升高使杂交双链体不稳定)量可赋予更严谨的条件。因此，不难操纵杂交条件，且选择方法一般取决于需要的结果。
4.11多核苷酸的鉴定和表征
可用各种良好建立的技术鉴定、制备和/或操作多核苷酸。例如，可按以下更详细描述鉴定多核苷酸，即筛选cDNA的微阵列用于肿瘤相关的表达(即用本文提供的代表性测定检测肿瘤中的表达比正常组织至少高2倍)。可用Synteni微阵列(PaloAlto CA)按厂商说明书进行此种筛选(基本上如Schena等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA93：10614-10619，1996和Heller等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94：2150-2155，1997所述)。或者，可从表达本文所述蛋白质的细胞，如血液恶性肿瘤相关肿瘤细胞制备的cDNA中扩增多核苷酸。可通过聚合酶链反应(PCR)扩增此种多核苷酸。可根据本文提供的序列，设计序列特异性引物且可购买或合成来实施此方法。
可用熟知的技术将本发明多核苷酸的扩增部分用于分离合适文库(如血液恶性肿瘤相关肿瘤cDNA文库)中的全长基因。这些技术中，采用适合扩增的一种或多种多核苷酸探针或引物筛选文库(cDNA或基因组)。文库的大小优选包括较大分子。对于鉴定基因的5’端和上游区域也优选随机引导文库。优选获得内含子和延伸5’序列的基因组文库。
对于杂交技术，可用熟知的技术(如缺口翻译或32P末端标记)标记部分序列。然后使含有变性细菌菌落(或含噬菌斑的菌苔)的杂交滤膜与标记探针杂交，筛选细菌或噬菌体文库(见Sambrook等，《分子克隆：实验手册》，Cold Spring HaborLaboratoris，Cold Spring Habor，NY，1989)。选择和扩增杂交的菌落或噬斑并分离DNA作进一步分析。用来自部分序列的引物和载体的引物进行PCR，分析DNA克隆以确定加成序列的量。可产生限制性酶切图谱以鉴定一个或多个重叠克隆。可采用可能会产生一系列缺失克隆的标准技术测定该完整序列。然后将得到的重叠序列装配成单一连续序列。用熟知的技术连接合适的片段来产生全长cDNA分子。
或者，有许多扩增技术可从部分cDNA序列获得全长编码序列。这些技术中，通常用PCR进行扩增。可用各种商品化试剂盒进行扩增步骤。例如，可用本领域熟知的软件或算法或公式来设计引物。
一种扩增技术是反向PCR(见Triglia等，Nucl Acids Res；16：8186，1988)，此法利用限制性酶在基因的已知区域中产生一片段。通过分子内连接环化此片段，且用作PCR的模板，所用趋异引物衍生自已知区域。另一种方法中，用接头序列的引物和对已知区域特异的引物扩增，可挽回邻近部分序列的序列。通常用相同的接头引物和对已知区域特异的第二引物对扩增的序列作第二轮扩增。此法的变动是采用二种引物，以已知序列的相反方向引导延伸，见WO 96/38591所述。另一种技术称为“cDNA未端快速扩增法”或RACE。此技术包括采用内引物和外引物与Poly A区或载体序列杂交，以鉴定已知序列的5’和3’端序列。其它技术包括捕捉PCR(Lagerstrom等，PCR Methods Applic.1：111-19，1991)和步行PCR(Parker等，Nucl.Acids Res.19：3055-60，1991)。也可采用其它扩增方法以获得全长cDNA序列。
某些情况下，可通过分析表达序列标签(EST)数据库如GenBank提供的序列来获得全长cDNA。可用熟知的程序(如NCBIBLAST检索)进行重叠EST的检索，该EST可用于产生一条连续的全长序列。也可通过分析基因组片段获得全长DNA序列。
4.12多核苷酸在宿主细胞中的表达
本发明的其它实施例中，编码本发明多肽或其融合蛋白或其功能等同物的多核苷酸序列或其片段，可用于重组DNA分子以指导多肽在适当宿主细胞中的表达。由于遗传密码子的固有简并性，可产生编码基本上相同或功能上相等的氨基酸序列的其它DNA序列，这些序列可用于克隆和表达某多肽。
本领域技术人员了解，在某些情况下产生拥有非天然产生的密码子的多肽编码核苷酸序列可能有利。例如，可优选选择特定的原核或真核宿主的密码子以提高蛋白质表达率或产生具有所需性能的重组RNA转录物，如半寿期比天然发生序列产生的转录物的半更期更长。
另外，可用本领域已知的方法工程改造本发明的多核苷酸以改变多肽编码序列，有多种理由，包括但不限于修饰该基因产物的克隆、加工和/或表达的改变。例如，通过基因片段的随机片段化和PCR重装配和合成寡核苷酸改组的DNA，可用于工程改造该核苷酸序列。此外，定点诱变可用来插入新的限制性位点、改变糖基化模式、改变密码子偏爱、产生剪接变体或导入突变等。
本发明另一实施例中，可将天然的、修饰的或重组的核酸序列连接于一异源序以而编码融合蛋白。例如，为筛选适合多肽活性抑制剂的肽文库，它可用于编码能为商品化抗体所认别的嵌合蛋白。也可工程改造融合蛋白使其在多肽编码序列和异源蛋白序列之间含有一切割位点，这样就可切下此多肽并从异源部分中纯化出来。可用本领域熟知的化学方法，全部或部分合成编码所需多肽的序列(见CaruthersMH等，(1980)Nucl.Acids Res Symp Ser 215-223；Horn T.等，(1980)Nucl AcidsRes Symp Ser 225-232)。或者，该蛋白本身可用化学方法产生，以合成多肽的氨基酸序列或其部分。例如肽合成可用各种固相技术(Roberge，JY等，(1995)Science269：202-204)和自动化合成进行，例如采用ABI431A肽合成仪(Perkin Elmer，PaloAlto CA)。
可用制备型高效液相层析或本领域其它类似技术基本纯化新合成的肽(如Creighton T.(1983)，《蛋白质、结构和分子原理》，WH Freaman and Co.，New York，NY)。合成肽的组成可通过氨基酸分析或测序(如Edman降解法)证实。另外，多肽或其任何部分的氨基酸序列在直接合成时可改变，和/或用化学方法与其它蛋白质或其任何部分组合，产生变体多肽。
为了表达所需的多肽，可将编码该多肽或功能等同物的核苷酸序列插入适合的表达载体，即含有转录和翻译该插入编码序列所必需元件的载体中。可用本领域技术人员熟知的方法构建含有编码感兴趣多肽的序列和适当转录翻译控制元件的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、合成技术和体内基因重组。这些技术见Sambrook，J等，(1989)，《分子克隆实验手册》，Cold Spring Harbor Press，Plainview N.Y.，和Ausubel，F.M等，(1989)，《最新分子生物学实验指南》，JohnWiley & Sons New York N.Y.
可利用各种表达载体/宿主系统来包含和表达多核苷酸序列。这些包括但不限于微生物，如用重组噬菌体、质粒或粘粒DNA表达载体转化的细菌、用酵母表达载体转化的酵母、用病毒表达载体(如杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用病毒表达载体(如花椰菜花叶病毒CaMV，烟草花叶病毒TMV)或用细菌表达载体(如Ti或pBR322质粒)转化的植物细胞系统；或动物细胞系统。
表达载体中存在的“控制元件”或“调节序列”是载体的非翻译区-增强子、启动子、与宿主细胞蛋白相互作用进行转录和翻译的5’和3’非翻译区。这些元件在强度和特异性上可以不同。取决于所用的载体系统和宿主，可采用任何数量的合适的转录和翻译元件，包括组成型和诱导型启动子。例如当在细胞系统中克隆时，可采用可诱导型启动子，如PBLUESCRIPT噬菌粒(Stratagen La Jolla，Calif.)或PSPORTI质粒(Gibco BRL Gaithersburg，MD)等的杂交lacZ启动子。哺乳动物系统中，一般优选来自哺乳动物基因或哺乳动物病毒的启动子。如需要产生含多拷贝编码多肽序列的细胞系，采用具有适当可选择标记的SV40或EBV载体是有利的。
细菌系统中，可根据表达的多肽选择一些表达载体。例如需要大量诱导抗体时，可采用能指导高水平表达易于纯化的融合蛋白的载体。这类载体包括但不限于多功能大肠杆菌克隆和表达载体，如BLUESCRIPT(Stratagene)，其中编码感兴趣多肽的序列框内连接入氨基末端Met的序列和β-半乳糖苷酶的7位残基，从而产生一杂交蛋白；以及PIN载体(Van Heeke G.和SM.Schuster(1989)，J.Biol Chem 264：5503-5509)等。也可用pGEX载体(Promega，Madison，Wis)来表达外源多肽如与谷胱苷肽S-转移酶(GST)的融合蛋白。通常这类融合蛋白可溶解，通过吸附于谷胱苷肽琼脂糖珠，然后在游离谷胱苷肽存在时洗脱容易从裂解细胞中纯化。在此类系统中生产蛋白质可设计包含肝素、凝血酶、因子XA蛋白酶切割位点，使克隆的感兴趣多肽可任意地从GST部分中释放。
可采用酿酒酵母菌中的一些含组成型或诱导型启动子如α因子、醇氧化酶和PGH的载体。综述见Ausabel等(同上)和Grant等，Method Enzymol.153：516-544。
当采用植物表达载体时，可通过一些启动子驱动编码多肽的序列的表达。例如，可单独采用病毒启动子如CaMV的35S和19S启动子或与TMV的奥米伽前导序列组合(Takamatsu N.EMBO J 6：307-311，1987)。或者，可采用植物启动子如RUBISCO的小亚单位或热休克启动子(Coruzzi，G.等，EMBO J.3：1671-1680，1984；Broglie，R等，Science 224：838-843，1984和Winter，J.等，Results Probl Cell Differ17：83-105，1991)。可通过DNA直接转化或病原体介导转染将这些构建物导入植物细胞。有许多可获得的综述描述了这类技术(见Hobbs Sor.或Murry L.E.在《McGrawHill科学技术年鉴》，(1992)中的文章，McGraw Hill，New York，NY，第191-196页)。
也可用昆虫系统表达感兴趣多肽。例如，在一系统中，用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)作为载体，在草地夜蛾细胞或夜蛾幼虫中表达外源基因。可将编码所述多肽的序列克隆入病毒的非必需区域中如多角体蛋白基因中，且置于多角体蛋白启动子的控制下。成功插入的多肽编码序列将灭活多角体蛋白基因，产生缺少外被蛋白的重组病毒。然后用此重组病毒感染草地夜蛾细胞或幼虫，可在其中表达感兴趣多肽(Engellard，E.K等，Proc.Natl.Acad.Sci 91：3224-3227，1994)。
一般可得到哺乳动物宿主细胞中的一些基于病毒的表达系统。例如，利用腺病毒作为表达载体，将编码感兴趣多肽的序列连接入由晚期启动子和三联前导序列组成的腺病毒转录/翻译复合体中。可利用在病毒基因组的非必需区域E1或E3区域中插入，获得能在感染宿主细胞中表达多肽的活病毒(Logan，J.和Shenk，Proc.Natl.Acad.Sci.81 3655-3659，1984)。此外，可利用转录增强子，如罗斯肉瘤病毒(RSV)增强子来提高哺乳动物宿主细胞中的表达。
也可利用特异性起始信号来有更效翻译编码感兴趣多肽的序列。这类信号包括ATG起始密码子和毗邻序列。当将编码多肽的序列其起始密码子和上游序列插入适当表达载体时，不需要其它转录或翻译控制信号。然而，当只插入编码序列或其一部分时，应提供含有ATG起始密码子的外源翻译控制信号。因此，起始密码子应处于正确的读以确保整个插入物的翻译。外源性翻译元件和起始密码子可以是各种来源天然或合成的。包含适合于具体细胞体系的增强子可提高表达效率，见文献描述(Scharf，D.等，Results Probl.Cell.Differ.20：125-162，1994)。
此外，可选用能调节插入序列的表达或能以所需方式加工表达的蛋白的宿主细胞株。所述多肽的修饰包括但不限于乙酰化、羧化、糖基化、磷酸化、脂质化和酰化。可利用切割“前原”形式蛋白的翻译后加工来促进正确插入、折叠和/或功能。可利用具有特异性细胞机制和翻译后活动特征性机制的不同宿主细胞，如CHO、Hela、MDCK、HEK293和WI38来保证外源蛋白的正确修饰和加工。
为了长期高产量生产重组蛋白质，一般优选稳定的表达，例如能稳定表达感兴趣多核苷酸的细胞系，可用在相同或不同载体上含有病毒复制起点和/或内源性表达元件和选择性标记基因的表达载体来转化细胞系。导入载体后，在富集培养基中培养细胞1-2天，然后转移到选择培养基中。可选择标记的目的是赋予对选择的抗性，此抗性的存在使成功表达导入序列的细胞得以生长和回收。采用适合于细胞类型的组织培养技术增殖稳定转化的细胞的抗性克隆。
一些选择系统可用于回收转化的细胞系，包括但不限于单纯疱疹病毒胸苷激酶(Wigler，M.等，Cell 11：223-32，1977)和嘌呤磷酸核糖转移酶(Lowy，I.等，Cell22：817-23，1990)基因，它们可分别用于tk.Sup.-或aprt.sup.-细胞。另外，也可利用抗代谢物、抗生素和除草剂抗性作为选择的基础；例如，dhfr赋予对氨甲喋呤的抗性(Wigler，M.等，Proc.Natl.Acad.Sci.77：3567-70，1980)；npt赋予对氨基葡糖苷、新霉素和G-418的抗性(Colbere-Garapin，F.等，J.Mol.Biol.150：1-14，1981)；als或pat分别赋予对氯磺隆和草丁膦乙酰转移酶的抗性(Murry，同上)。其它已描述的可选择基因如trpB使细胞利用吲哚代替色氨酸；或hisD使细胞利用组氨醇代替组氨酸(Hartman，SC和R.C.Mulligan，Proc.Natl.Acad.Sci85：5247-5251，1988)。最近，采用花色素苷、β-葡糖醛酸酶及其底物GUS和荧光素酶及其底物荧光素等可见标记已获得普及，不仅广泛用于鉴定转化体，还用于基于特定载体系统的瞬时或稳定蛋白质表达的定量(Rhodes，CA.等，Methods Mol.Biol.55：121-131，1995)。
虽然存在/缺乏标记基因表达提示了感兴趣基因也存在，但仍需要证实感兴趣基因的存在与表达。例如，如果将编码多肽的序列插入标记基因序列内，通过缺乏标记基因功能可鉴定重组细胞含有这些序列。或者，可将标记基因与多肽编码基因串联置于一个启动子的控制下。随诱导或选择而表达的标记基因，通常表明串联基因也表达。
或者，可用本领域技术人员已知的多种方法鉴定含有并表达所需多核苷酸序列的宿主细胞，这些方法包括但不限于DNA-DNA或DNA-RNA杂交和蛋白质生物测定或免疫测定，包括检测和/或定量核酸或蛋白质的膜、溶液或基于芯片的技术。
用对产物特异的多克隆或单克隆抗体测试和测定多核苷酸编码产物的表达的各种方法是本领域已知的。例子包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)和荧光激活细胞分选(FACS)。一些应用优选采用对某给定多肽上两个非干扰表位反应的单抗作双位点单抗免疫测定，但也可采用竞争结合测定。这些和其它测定已有描述(见Hampton，R.等(1990)《血清学方法-实验手册》，APS Press，St Paul.Minn.)和Maddox，DE.等，J.Exp.Med.158：1211-1216，1983)。
本领域技术人员知道各种各样标记和偶联技术，且可用于各种核酸和氨基酸测定。产生检测与多核苷酸相关序列的标记杂交或PCR探针的方法，包括寡聚体标记、缺口翻译、末端标记或采用标记核苷酸的PCR扩增。或者，可将序列或其任何部分克隆到载体中产生mRNA探针。这些载体是本领域已知的，可商品购买到并可用于体外合成RNA探针，方法是加入合适的RNA聚合酶如T7、T3或SP6和标记核苷酸。可采用各种商品化试剂盒进行这些程序。可采用的合适报道分子或标记物包括：放射性核素、酶、荧光剂、化学发光剂或生色剂及其底物、辅因子、抑制剂，磁粒等。
用感兴趣多核苷酸序列转化的宿主细胞可在适合从细胞培养中表达和回收蛋白质的条件下培养。重组细胞产生的蛋白质可分泌或包含在细胞内，取决于所用的序列和/或载体。本领域技术人员知道，可设计含有本发明多核苷酸的表达载体含有信号序列，该信号序列可指导编码的多肽穿过原核或真核细胞膜分泌出来。可采用其它重组构建将编码感兴趣多肽的序列与编码促进可溶性蛋白纯化的多肽结构域的核苷酸序列连接起来。这种纯化促进结构域包括但不限于金属螯合肽，如允许在固定的金属上纯化的组氨酸-色氨酸组件，允许在固定的免疫球蛋白上纯化的蛋白A结构域，和用于FLAGS延伸段/亲和纯化系统中的结构域(Immunex Corp.，Seattle，Wash.)。在纯化结构域和编码肽之间包含可切割接头序列，如对因子XA或肠激酶特异的切割接头序列(Invitrogen San Diego Calif)可有利于纯化。一种这样的表达载体提供了一种融合蛋白的表达，该融合蛋白含有感兴趣的肽和编码6个组氨酸残基的核酸，前面的硫氧还蛋白或肠激酶切割位点。组氨酸残基有利于在IMIAC(固定的金属离子亲和层析)上纯化。见Porath，J.等(Prot.Exp.Purif.3：263-81，1992)所述，而肠激酶切割位点提供了从融合蛋白纯化所需肽的工具。含融合蛋白的载体的讨论见Kroll，D.J.等(DNA Cell Biol.12：441-453，1993)。
除了重组生产方法外，可用固相法直接合成肽生产本发明的多肽和其片段(Merrifild J.，J.Am.Chem.Soc.85：2149-2154，1963)。可用手工方法或自动化进行蛋白质合成。自动化合成例如可采用Applied Biosystems 431A肽合成仪(PerkinElmer)进行。或者可分别化学合成各种片段，再用化学方法组合产生全长分子。
4.13定点诱变
定点诱变是一种通过特异性诱变编码肽的多核苷酸制备各种肽或生物功能等价多肽的有用技术。该技术是本领域技术人员熟知的，还能用于制备和测定序列变体，如结合一个或多个上述条件，在DNA中导入一个或多个核苷酸序列变化。定点诱变可通过利用特定寡核苷酸序列产生突变体，该突变体编码具有所需突变的DNA序列，以及足够数目的邻近核苷酸可提供足够大小和序列复杂性的引物序列，形成横跨缺失连接的两侧的稳定双链体。突变可用于选择的多核苷酸序列以改进、改变、降低、修饰或改变该多核苷酸本身的性能，和/或改变编码肽的性能、活性、组成、稳定性或一级序列。
本发明某些实施例中，考虑对上述多核苷酸序列进行诱变以改变编码多肽的一种或多种性能，如多肽疫苗的抗原性。定点诱变技术是本领域熟知的，并广泛用于产生多肽和多核苷酸的变体。例如通常用定点诱变来改变DNA分子的特定部分。这类实施例中，通常采用长约14-25个核苷酸的引物，序列连接的两侧约5-10个残基被改变。
本领域技术人员懂得，定点诱变技术常采用单链和双链形式的噬菌体载体。用于定点诱变的典型载体包括例如M13噬菌体。这些噬菌体不难从市场上购买到，其用途一般为本领域技术人员熟知。定点诱变也常规采用双链质粒来取消将感兴趣基因从质粒转移到噬菌体的步骤。
通常，进行上述定点诱变的第一步是获得单链载体或使双链载体的两条链解离分开(在载体的序列内含有编码所需肽的DNA序列)。通常用合成法制备携带有所需突变复序列的寡核苷酸引物。然后使该引物与单链载体退火，经DNA聚合酶如大肠杆菌聚合酶I Klenow片段处理，以便完成带突变链的合成。形成的异源双链体中一条链编码原来的非突变序列，第二条链带有所需的突变。然后用此异源双链体载体转化适合的细胞如大肠杆菌细胞，并选择含有携带突变序列排列的重组载体的克隆。
用定点诱变法制备所选肽编码DNA区段的序列变体，提供了一种可能产生有用物种的方法，且不意味着限于用其它方法来获得肽的序列变体及其编码DNA序列。例如可用诱变剂如羟胺处理编码所需肽序列的重组载体以获得序列变体。关于这些方法和方案的具体细节见Maloy等，1994；Segal，1976；Prokop和Bajpai，1994；Kuby，1994；和Maniatis等，1982，各自纳入本文作为参考。
术语“寡核苷酸指导的诱变方法”本文指模板依赖方法和载体介导的增殖，导致特异性核酸分子的浓度比其初始浓度升高，或可检测信号如扩增的浓度升高。术语“寡核苷酸指导的诱变方法”本文指模板依赖的引物分子的延伸。术语“模板依赖方法”指RNA或DNA分子的核酸合成，其中新合成的核酸链的序列由熟知的互补性碱基配对规律所决定(见例如Watson，1987)。通常，载体介导的方法涉及将核酸片段导入DNA或RNA载体中，载体的克隆扩增，回收扩增的核酸片段。这些方法的例子见美国专利4,237,224，纳入本文作为参考。
4.14多核苷酸扩增技术
可利用一些模板依赖方法扩增样品中的感兴趣靶序列。一种最著名的扩增方法是聚合酶链反应(PCRTM)，其详细描述见美国专利4,683,195；4,683,202和4,800,159，各自纳入本文作为参考。简言之，在PCRTM中制备与靶序列的相反互补链区域互补的两条引物序列。在反应混合物中加入过量的脱氧核苷三磷酸和DNA聚合酶(如Taq聚合酶)。如果样品中存在靶序列，引物将结合该靶，聚合酶将使引物通过加入的核苷酸沿着靶序列延伸。提高和降低反应混合物温度，延伸的引物将从靶上解离形成反应产物，剩余引物将结合靶和反应产物，且重复此过程。优选进行逆转录和PCRTM扩增程序以定量扩增的mRNA量。聚合酶链反应是本领域熟知的。
另一扩增方法是连接酶链反应(称为LCR)，见欧洲专利申请320、308(特别纳入本文参考)。在LCR中制备两对互补探针，存在靶序列时，每对探针将结合靶的互相毗邻的相反互补链。存在连接酶时，两对探针将连接形成一个单元。经过温度循环(如PCRTM中的循环)，结合的连接单元从靶上解离，然后作为过量探针对连接的“靶序列”。其内容纳入本文作参考的美国专利4,883,750描述了另一扩增方法，类似于探针结合靶序列的LCR。
PCT国际专利申请PCT/US87/00880(纳入本文参考)中所述的Qbeta复制酶也可用于本发明另一扩增方法中。在此方法中，将具有与靶互补区域的RNA的复制性序列加入存在RNA聚合酶的样品中。聚合酶将拷贝复制性序列，然后可被检测到。
一种等温性扩增方法中，用限制性内切酶和连接酶扩增靶分子，该靶分子的限制性位点的一条链中含有核苷酸5’-[α-硫代]三磷酸(Walker等，1992，纳入本文参考)]，也可在本发明中用于扩增核酸。
链置换扩增(SDA)是实施核酸等温扩增的另一方法，此法包括多轮链置换和合成，即缺口翻译。一种类似方法称为修复链反应(PCR)是另一种可用于本发明的扩增方法，所述方法包括退火整个扩增靶区域的几个探针，然后进行四种碱基只存在2种的修复反应。可将其它两种碱基作为生物素化衍生物加入而易于检测。SDA中采用了类似的方法。
也可用循环探针反应(CPR)检测序列。在CPR中，使具有非靶DNA的3’和5’序列和靶蛋白特异性RNA的内部或“中间”序列的探针与样品中存在的DNA杂交。杂交时用RNA酶H处理反应物，通过消化后释放产生的信号可将该探针产物鉴定为特殊产物。最初的模板与另一循环探针退火并重复此反应。因此，CPR包括扩增探针与靶基因特异性表达的核酸杂交产生的信号。
可用于本发明的其它扩增方法，见英国专利申请2,202,328和PCT国际专利申请PCT/US89/01025，各自纳入本文作参考。前一申请中，PCR采用“修饰的”引物进行模板和酶依赖的合成。可用捕捉成分(如生物素)和/或检测成分(如酶)标记来修饰引物。后一申请中，样品中加入过量的标记探针。存在靶序列时，该探针结合并被催化切割。切割后，靶序列被完整释放，并被过量探针结合切割的标记探针表明存在靶序列。
包括基于转录的扩增系统(TAS)(Kwoh等，1989；PTC国际专利申请WO88/10315，纳入本文作参考)的其它核酸扩增方法，包括基于核酸序列的扩增(NASBA)和3SR。NASBA中，可制备用于扩增的核酸，采用标准的苯酚/氯仿抽提法，热变性样品，用裂解液处理，微旋转柱分离DNA和RNA或氯化胍提取RNA。这些扩增技术涉及退火具有对靶序的特性序列的的引物。聚合后，用RNA酶H消化DNA/RNA杂交体，同时再热变性双链DNA分子。两种情况下，通过加入第二种靶特异性引物，然后聚合，将单链DNA制备成全双链。然后用聚合酶如T7或SP6多重转录该双链DNA分子。在等温循环反应中，RNA被逆转录为DNA，并用聚合酶如T7或SP6再转录一次。所得产物不论是截短的或完全的均显示了靶特异性序列。
纳入本文作参考的欧洲专利申请329,822描述了一种核酸扩增方法，包括可用于本发明的循环合成单链RNA(“ssRNA”)，ssDNA和双链DNA(dsDNA)。ssRNA是用逆转录酶(RNA依赖的DNA聚合酶)延伸的第一引物瓜豁寡核苷酸的第一模板。然后经核糖核酸酶H(RNA酶H，一种具有DNA或RNA的双链体中对RNA特异的RNA酶)作用从产生的DNA:RNA双链体中去除RNA。产生的ssDNA是第二引物的第二模板，该第二引物中还包含RNA聚合酶启动子(由T7RNA聚合酶)为例5’至与其模板同源的序列。然后用DNA聚合酶(由大肠杆菌DNA聚合酶1的大“Klenow”片段为例)延伸该引物得到双链DNA(“dsDNA”)分子，该分子的序列与引物之间的最初RNA相同，并在另一端有一启动子序列。此启动子序列可经适当的RNA聚合酶作用产生DNA的许多RNA拷贝。然后这些拷贝可再进入循环导致非常快的扩增。选用合适的酶，可在等温下进行此扩增而不需每轮都加酶。由于该过程的循环性质，所选的起始序列可以是DNA或RNA形式。
纳入本文参考的国际专利申请WO89/06700描述了一种核酸序列扩增流程，根据启动子/引物序列与靶单链DNA(“ssDNA”)的杂交，接着转录许多RNA拷贝的序列。此流程不是循环性，即从产生的RNA转录物中不产生新的模板。其它扩增方法包括“RACE”(Frohman，1990)和“单面PCR”(Ohara，1989)这是该领域技术人员熟知的。在扩增本发明DNA序列时，也可采用以下方法，即在具有所产生的“双-寡核苷酸”的序列的核酸存在时，连接二个(或多个)寡核苷酸，从而扩增该双-寡核苷酸的方法(Wu和Dean，1996，纳入本文作参考)。
4.15体内多核苷酸送递技术
其它实施例中，将含有本发明一种或多种多核苷酸的基因构建物体内导入细胞。这可用多种熟知的方法进行，这些方法中的几种将在下文中阐述。
4.15.1腺病毒
体内送递一种或多种核酸序列的优选方法之一是采用腺病毒表达载体。“腺病毒表达载体”包括能充分：(a)支持构建物包装和(b)以有义或反义取向表达其中已克隆的多核苷酸的腺病毒序列的那些构建物。当然，反义构建物的表达不需要合成基因产物。
表达载体含有基因工程改造的腺病毒形式。已知腺病毒的基因结构是36kb、线性、双链DNA病毒，使腺病毒DNA的大部分可用多达7kb的外源序列取代(Grunhaus和Horwitz，1992)。与逆转录病毒相反，腺病毒感染宿主细胞不导致染色体整合，因为腺病毒DNA可以附加型方式复制而没有潜在的基因毒性。还有，腺病毒结构稳定经大量扩增后未检测到基因组重排。事实上腺病毒可感染所有的上皮细胞而不论其细胞周期。迄今，腺病毒感染似乎只与轻微疾病如人急性呼吸道疾病有关。
腺病毒特别适合用作基因转移载体，因其基因组大小适中、易操作、高滴度、靶细胞范围广和高感染性。病毒基因组两端含100-200个碱基对反向重复序列(ITR)。它是病毒DNA复制和包装必需的顺式元件。基因组的早期(E)和晚期(L)区域含有不同的转录单元，其通过病毒DNA复制的开始而分裂。E1区(E1A和E1B)编码负责调节病毒基因组和少许细胞基因转录的蛋白质。E2区(E2A和E2B)的表达引起病毒DNA复制的蛋白质的合成。这些蛋白质参与DNA复制、后期基因表达和宿主细胞关闭(Renan，1990)。后期基因的产物包括大部分的病毒衣壳蛋白，只在主要晚期启动子(MLP)产生的一种原代转录物的加工后才表达。MLP(位于16.8m.u.)在感染晚期特别有效，此启动子产生的所有mRNA拥有5’-三联前导(TPL)序列，使它们成为翻译的优选mRNA。
一最新系统中，用穿梭载体和原病毒载体之间的同源重组产生的重组腺病毒由于两种原病毒载体之间可能重组，此过程可产生野生型腺病毒。因此，关键是从单个噬斑中分离病毒的单一克隆并检验其基因组结构。
复制缺陷性的最新腺病毒载体的产生和增殖依赖于一种独特的辅助细胞系，命名为293，是用Ad5DNA片段转化人胚肾细胞而得，组成性地表达E1蛋白(Graham等，1977)。因为E3区与腺病毒基因组分开(Jones和Shenk，1978)，最新的腺病毒载体在293细胞辅助下，可在E1、D3或两个区域中携带外源DNA(Graham和Prevec，1991)。实质上，腺病毒可包装约105％的野生型基因组(Ghosh-Choudhury等，1987)，提供了约2个额外KBDNA的容量。与约5.5kbDNA组合，可在E1和E3区中更换，此最新腺病毒载体的最大容量低于7.5kb，或占约载体总长的15％。留在载体骨架中80％以上的腺病毒基因组是载体携带的细胞毒性的来源。还有，E1缺失病毒的复制缺损是不完全的。例如，在高感染复数(MOI)时，用最新获得的载体观察到病毒基因表达的渗漏(Mulligan，1993)。
辅助细胞系可衍生自人细胞，如人胚肾细胞、肌肉细胞、造血细胞或其它人胚胎间充质细胞或上皮细胞。另外，辅助细胞可衍生自人腺病毒允许的其它哺乳动物的细胞。这些细胞包括如Vero细胞或其它猴胚胎间充质细胞或上皮细胞。如上所述，目前优选的辅助细胞系是293。
目前，Racher等(1995)披露了培养293细胞和增殖腺病毒的改良方法。一种方式中，通过接种细胞到1升硅烷化旋转瓶(Techne，Cambridge，UK)内含100-200ml培养液，以培养天然的细胞聚集物。以40rpm搅拌后，用台盼兰估计细胞活力。另一方式中，如下采用Fibra-Cel微载体(Bibby Sterlin Stone UK)5克/升。将重悬于5ml培养液中的细胞接种物加入含50ml载体的250ml锥形瓶中，静置(偶尔摇动)1-4小时。培养基用50ml新鲜培养基更换并摇动。为了产生病毒，使细胞生长到约80％汇合，此时更换培养基(至最终体积的25％)，以0.05约MOI的腺病毒。培养物静置过夜，增加然后容量到100％，并开始振摇72小时。
除了要求腺病毒载体是复制缺损型或至少是条件缺损型外，据信对于成功实施本发明腺病毒的性质不是关键。该腺病毒可以是已知的42种不同血清型或亚组A-F中的任何一种。为获得用于本发明的条件性复制缺损型腺病毒载体，起始材料优选腺病毒5型C亚组，因为腺病毒5型是人腺病毒，其大量的生化和遗传学信息已知道，且历史上大多数构建采用腺病毒作为载体。
如上所述，本发明的典型载体是复制缺损型，不具有腺病毒E1区。因此，最方便的是将编码感兴趣基因的多核苷酸导入去除了E1编码序列的位置上。然而，构建物插入腺病毒序列内的位置对本发明不是关键性的。也可将编码感兴趣基因的多核苷酸插入E3取代载体中，以代替缺失的E3区，见Karlsson等，(1986)所述；或插入E4区在那里辅助细胞系或辅助病毒补充E4缺陷。
腺病毒容易生长和增殖，体内和体外宿主范围宽。此组病毒可获得高滴度，如每毫升109-1011噬斑形成单位，它们有高度感染性。腺病毒的生命周期不需要整合入宿主细胞基因组。由腺病毒载体输送的外源基因是附加型，因而对宿主细胞的基因毒性低。用野生型腺病毒接种疫苗的研究中已报道无副作用(Couch等，1963，Top等，1971)，证明其作为体内基因转移载体的安全性和治疗潜力。
腺病毒已用于真核基因表达(Levrero等，1991，Gomez-Foix等，1992)和疫苗开发(Grunhaus和Horwitz，1992，Graham和Prevec，1992)。最近，动物研究提示，重组腺病毒可用于基因治疗(Stratford Perricaudet和Perricaudet，1991；Stratford Perric andet等，1990；Rich等，1993)。不同组织给予重组腺病毒的研究包括气管滴注法(Rosenfeld等，1991；Rosenfeld等，1992)，肌肉注射(Ragot等，1993)，外周静脉注射(Herz和Gerard，1993)和脑内立体定向接种(Le Gal Salle等，1993)
4.15.2逆转录病毒
逆转录病毒是一组单链RNA病毒，特征为能在感染细胞中通过逆转录过程将其RNA转变成双链DNA(Coffin，1990)。产生的DNA然后稳定整合入细胞染色体内作为原病毒并指导病毒蛋白的合成。整合导致病毒基因序列保留在受体细胞及其子代中。逆转录病毒基因组分别含有编码衣壳蛋白的三种基因：gag、pol和env，聚合酶和包膜组分。gag基因上游的序列含有将基因组包装入病毒粒子的信号。病毒基因组的5’和3’端有二条长末端重复(LTR)序列。这些含强启动子和增强子序列也是在宿主细胞基因组中融合所需的(Coffin，1990)。
为了构建逆转录病毒载体，可将编码一种或多种感兴趣的寡核苷酸或多核苷酸的核酸插入病毒基因组中替代某些病毒序列，以产生复制缺损型病毒。为了产生病毒粒子，构建含gag、pol和env基因但无LTR的包装细胞系和包装组分(Mann等，1983)。当重组质粒含cDNA时，将其与逆转录病毒LTR和包装序列一起导入该细胞系(例如用磷酸钙沉淀)，此包装序列能使重组质粒的RNA转录物被包装入病毒粒子中，然后分泌到培养基中(Nicolas和Rubenstein，1988，Temin，1986；Mann等，1983)。然后收集含重组逆转录病毒的培养基，任选地浓缩，用于基因转移。逆转录病毒载体能感染各种各样类型的细胞。然而，整合和稳定表达要求宿主细胞的分裂(Paskind等，1975)。
最近，开发了一种使逆转录病毒载体特异性靶向的新方法，所述方法通过在病毒包膜中用化学方法加入乳糖残基而化学修饰逆转录病毒。这种修饰通过唾液糖蛋白受体允许特异性感染肝细胞。
设计了重组逆转录病毒靶向的不同方法，其中采用抗逆转录病毒包膜蛋白和抗特异性细胞受体的生物素化抗体。采用链霉亲和素这些抗体通过生物素偶联(Rous等，1989)。采用抗主要组织相容性复合物I类和II类抗原的抗体，他们证明体外用亲嗜性病毒可感染载有这些表面抗原的各种人细胞(Roux等，1989)。
4.15.3腺相关病毒
AVV(Ridgeway，1988；Hermonat和Muzycska，1984)是作为一种污染腺病毒贮液而发现的细小病毒(parovirus)。它是一种遍在性病毒(85％美国人群中存在抗体)，与任何疾病无关。也分类为依赖病毒，因为其复制依赖于辅助病毒如腺病毒的存在。已分离到5种血清型，其中AAV-2是最了解的。AAV有一单链线性DNA包裹在衣壳蛋白VP1、VP2和VP3中，形成直径20-24nm的二十面体病毒粒子(Muzyczka和Mclaughlin，1988)。
AAV DNA约长4.7kb，它含两个开放读框，侧面接二个ITR。AAV基因组中有两个主要基因：rep和cap。rep基因编码的蛋白负责病毒复制，而cap编码衣壳蛋白VP1-3。各ITR形成T形发夹环结构。这些末端重复序列是AAV染色体整合唯一必需的顺式组分。因此AAV可用作一种载体，此载体中所有的病毒编码序列被去除并用输送基因盒代替。已鉴定到三个病毒启动子按它们的图谱位置命名为p5、p19和p40。P5和p19的转录导致产生rep蛋白，p40的转录产生衣壳蛋白(Hermonat和Muzyczka，1984)。
有几种因素促进了研究人员研究利用rAAV作为表达载体的可能性。一种是很少需要将基因输送整合到宿主染色体中。这需要有145-bpITR，仅为AAV基因组的6％。这在载体中留下了可装配4.5kbDNA插入物的空间。虽然此携带容量可不使AAV输送大基因，但十分适合输送本发明的反义构建物。
AAV由于其安全性也是输送载体的一个良好选择。需要相对复杂的拯救机制，不仅是野生型腺病毒，而且需要AAV基因来调动rAAV。同样；AAV无致病性且与任何疾病无关。去除病毒的编码序列可最大程度减少对病毒基因表达的免疫反应，因此，rAAV不会激发炎症反应。
4.15.4其它病毒载体作为表达构建物
可采用其它病毒载体作为本发明的表达构建物，将寡核苷酸或多核苷酸序列输运给宿主细胞。可采用病毒如牛痘病毒(Ridgeway，1988；Coupar等，1988)、慢病毒、脊灰病毒和疱疹病毒衍生的载体。它们对各种哺乳动物细胞有几种吸引力的特征(Friedmann，1989；Ridgeway，1988；Coupar等，1988；Horwich等，1990)。由于最近识别的缺损性乙肝病毒，获得了对不同病毒序列的结构功能关系的新了解。体外研究表明，病毒尽管缺失了其多达80％的基因组，仍能保持辅助依赖性包装能力和逆转录能力(Horwich等，1990)。这提示大部分基因组可用外源基因物质替代。嗜肝性和持久性(整合)是肝定向基因转运特别吸引的性能。Chang等(1991)将氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因导入鸭乙肝病毒基因组中，取代聚合酶、表面和前表面编码序列。与野生型病毒共转染入禽肝癌细胞系。培养基中含高滴度重组病毒，用于感染原代鸭肝细胞。转染后检测到稳定的CAT基因表达至少24天(Chang等，1991)。
4.15.5非病毒载体
为了有效表达本发明寡核苷酸或多核苷酸序列，必须将表达构建物输送到细胞内。体外进行此输送可用于实验室方法中转化细胞系，或体内或活体内输送用于治疗某些疾病。如上所述，一种优选的输送机制是通过病毒感染，将表面构建物包裹在感染性病毒颗粒中。一旦表达构建物被输送入细胞内，编码所需寡核苷酸或多核苷酸序列的核酸可定位于不同部位并表达。某些实施例中，编码该构建物的核酸可稳定整合入细胞的基因组中。此整合可通过同源重组(基因取代)，以特异性定位和取向整合或可以是随机、非特异性定位整合(基因增大)。其它实施例中，该核酸可稳定保持在细胞中作为DNA的分离的附加型节段。这类核酸节段或“附加体”编码序列，能充分不受宿主细胞周期的制约，或与其同步维持和复制。该表达构建物如何输送入细胞，及该核酸保持在细胞中何处，取决于所用表达构建物的类型。
本发明某些实施例中，含有一种或多种寡核苷酸或多核苷酸序列的表达构建物可仅由裸重组DNA或裸质粒组成。可用上述物理或化学通透细胞膜的方法之一转移该构建物。这具体可用于体外转移，但也可应用于体内转移。Dubensky等(1984)成功地将磷酸钙沉淀形式的多瘤病毒DNA注射入成年鼠和新生小鼠的肝和脾中，证明了活性病毒复制和急性感染。Benvenisty和Reshef(1986)也证明直接腹膜内注射磷酸钙沉淀质粒结果表达了转染的基因。考虑编码感兴趣基因的DNA也可以用类似方式体内转移并表达基因产物。
转移裸DNA表达构建物到细胞中的本发明另一实施例涉及颗粒轰击技术。此方法根据加速DNA包被的微粒至高速的能力，使它们穿破细胞膜且进入细胞而不杀死细胞(Klein等，1987)。已开发了加速小粒子的几种装置。一种装置依靠施加高压产生电流，进而提供动力(Yang等，1990)。所用微粒由生物惰性物质如钨或金珠组成。
所选器官包括大鼠和小鼠的肝、皮肤及肌肉组织，已作过体内轰击(Yang等，1990；Zelenin等，1991)。这可能需要手术暴露组织或细胞以消除枪和靶器官之间的任何干扰组织，即活体内治疗。另外，可通过此法输送编码特定基因的DNA，仍纳入本发明中。
4.16反义寡核苷酸
基因信息流动的最后结果是合成蛋白质。DNA被聚合酶转录为信使RNA并在核糖体上翻译产生折叠的功能性蛋白质。沿着蛋白质合成途径的几个步骤可受到抑制。象所有哺乳动物DNA链那样，编码本文所述多肽的天然DNA区段也有两条链，一条有义链和一条反义链，由氢键连在一起。编码多肽的信使RNA具有与有义DNA链相同的核苷酸序列，除了DNA胸腺嘧啶由尿嘧啶代替外。因此，合成的反义核苷酸序列将结合mRNA，并抑制该mRNA编码的蛋白质表达。
因此，反义寡核苷酸靶向mRNA是关闭蛋白质合成的一种机制，故代表了一种有效和靶向治疗方法。例如，多聚半乳糖醛酸酶和毒蕈碱2型乙酰胆碱受体的合成可受到针对它们各自mRNA序列的反义寡核苷酸的抑制(美国专利5,739,119和5,759,829，各自纳入本文参考)。另外，反义抑制的例子已用核蛋白细胞周期蛋白、多重抗药性基因(MDGI)、ICAM-1、E-选择素、STK-1、横纹肌GABAA受体和人EGF得到证明(Jaskulski等，1988；Vasanthaku mar和Ahmed，1989；Peris等，1998；美国专利5,801,154；5,789,573；5,718,709；5,610,288，各自纳入本文参考)。也已描述反义构建物抑制并可用于治疗各种异常细胞增殖如癌症(美国专利5,474,470；5,591,317和5,783,683，各自纳入本文参考)。
因此，示范性实施例中，本发明提供的寡核苷酸序列含有能特异性结合本文所述寡核苷酸序列或其互补序列的所有任何序列或一部分序列。一实施例中，反义寡核苷酸含DNA或其衍生物.。另一实施例中，寡核苷酸含RNA或其衍生物.。第三个实施例中，寡核苷酸是修饰的DNA，含硫代磷酸酯修饰的骨架。第四个实施例中，寡核苷酸序列含肽核酸或其衍生物.。各自情况下，优选的组合物含有与本文所述多核苷酸的一部分或多个部分互补，更优选基本互补，甚至更优选完全互补的序列区域。
对某给定基因序列特异的反义组合物的选择，根据对所选靶序列(即这些说明性例子中的大鼠和人的序列)的分析和二级结构、Tm、结合能、相对稳定性的测定；反义组合物的选择根据其相对不能形成二聚体、发夹环或其它二级结构，从而可减少或抑制与宿主细胞中靶mRNA的特异性结合。
最优选的MRNA的靶区域是AUG翻译起始密码子处或附近的那些区域，和与mRNA的5’区基本互补的那些序列。这些二级结构的分析和靶位点选择可用OLIGO引物分析软件第4版(Rychlik，1997)和BLASTN 2.0.5算法软件(Altschul，等，1997)进行。
也考虑采用称为MPG(27个残基)的短肽载体的反义输送方法。MPG肽含有衍生自HIV gp41的融合序列的疏水性结构域和SV40 T-抗原的核定位序列的亲水性结构域(Morris，等，1997)。已证明几个MPG肽的分子包被反义寡核苷酸，可在不到1小时内被输送入培养的哺乳动物细胞中，效率相对高(90％)。另外，与MPG相互作用大大提高了寡核苷酸对核酸酶的稳定性和穿过质膜的能力(Morris等，1997)。
4.17核酶
虽然传统上蛋白质用来催化分解核酸，但已出现的另一类大分子可用于此目的。核酶是能以定点方式切割核酸的RNA-蛋白质复合物。核酶且有特异性催化结构域，该结构域具有内切核酸酶活性(Kim和Cech，1987；Gerlach等，1987；Forster和Symons，1987)。例如，大量核酶能以高度特异性加速磷脂转移反应，常只切割寡核苷酸底物中几个磷酸脂之一(Cech等，1981；Michel和Westhof，1990；Reinhold-Hurek和Shub，1992)。此特异性归因于化学反应前底物结合于核酶的内部指导序列(“IGS”)需要通过特异性的碱基配对相互作用。
最初观察一核酶催化是核酸序列特异性切割/连接反应的一部分(Joyce，1989；Cech等，1981)。例如，美国专利5,354,855(纳入本文作参考)报道某些核酶可起内切核酸酶作用，其序列特异性比已知的核糖核酸酶还高，接近DNA限制性酶的特异性。因此，序列特异性核酶介导的抑制基因表达可能特别适合治疗应用(Scanlon等，1991；Sarver等，1990)。最近报道核酶引起了它们所应用的一些细胞系中的遗传变化；改变的基因包括癌基因H-ras、c-fos和HIV基因。此研究的大部分涉及基于特异性核酶切割的特定突变密码子的修饰靶mRNA。
目前知道有天然产生的酶RNA的六种基本变体。在生理条件下各自能反式催化RNA磷酸二酯键的水解(因此能切割其它RNA分子)。总之，酶核酸通过先与靶RNA结合起作用。发生这种结合是通过酶核酸的靶结合部分，其保持非常接近于该分子的酶部分而发挥切割靶RNA的作用。因此酶核酸通过互补碱基配对，先识别酶核酸然后结合靶RNA，一但结合于正确部位就酶促切割该靶RNA。这种靶RNA的关键性切割将破坏其指导编码蛋白合成的能力。酶核酸结合和切割其RNA靶后，从RNA释放以搜寻另一个靶并可重复地结合和切割新的靶。
核酶的酶特性优于许多技术如反义技术(核酸分子只结合核酸靶以阻止其翻译)，因为发挥治疗作用所需的核酶浓度比反义寡核苷酸浓度低。此优点反映了核酶发挥酶促的能力。因此，一个核酶分子能切割许多靶RNA分子。此外，核酶是一种高度特异性抑制剂，此抑制特异性不仅依赖于与靶RNA结合的碱基配对机制，而且依赖于靶RNA切割的机制。靠近切割位点的单个错配或碱基置换可完全去除核酶的催化活性。而反义分子中的类似错配不阻止其作用(Woolf等，1992)。因此，核酶作用的特异性大于反义寡核苷酸结合相同RNA位点的特异性。
可在锤头、发夹、δ肝炎病毒、I组内含子或RNaseP RNA(与RNA指导序列相连)或链孢霉VS RNA基序中形成酶核酸分子。锤头基序的例子见Rossi等(1992)所述。发夹基序的例子见Hample等，(欧洲专利申请专利EP0360257)、Hample和Tritz(1989)、Hample等，(1990)和美国专利5631359(纳入本文作参考)中所述。δ肝炎病毒基序的例子见Perrotta和Been(1992)所述；RNaseP基序的例子见Guerrier-Takada等(1983)所述；链孢霉VS RNA核酶基序见Collins(Saville和Collins，1990；Saville和Collins，1991；Collins和Olive，1993)所述；I组内含子的例子见美国专利4987071(纳入本文作参考)中所述。本发明酶核酸分子中重要的是其与一种或多种靶基因RNA区互补的特异性底物结合位点，和此底物结合位点内或周围赋予该分子的RNA切割活性的核苷酸序列。因此核酶构建物不需要限于上述特异性基序。
某些实施例中，重要的是产生对所需靶RNA(如上述序列之一)有高度特异性的酶促切割剂。优选酶核酸分子靶向靶RNA的高度保守序列区。若需要，这类酶核酸分子可外源输送给特定细胞。或者，可从输送给特定细胞中的DNA或RNA表达此核酶。
小的酶核酸基序(如锤头或发夹结构的基序)也可用于外源输送。这些分子的简单结构提高了酶核酸侵入mRNA结构的靶区域的能力。或者，催化性RNA分子可在含真核启动子的细胞中表达(如Scanlon等，1991；Kashani-Sabet等，1992；Dropulic等，1992；Weerasinghe等，1991；Ojwang等，1992；Chen等，1992；Sarver等，1990)。本领域技术人员知道，任何核酶都可在真核细胞中由合适的DNA载体表达。这类核酶的活性可通过第二核酶释放其初级转录物而增强(国际专利申请WO93/23569和WO 94/02595，二者纳入作参考；Ohkawa等，1992；Taira等，1991；和Ventura等，1993)。
可直接加入核酶，或将核酶与阳离子脂质、脂质复合物络合，包装在脂质体内或另外输送给靶细胞。可将RNA或RNA复合物局部给予活体内的有关组织，或通过注射、气雾剂吸入、灌注泵或支撑管(它们掺入或不掺入在生物聚合物中)体内给予。
可按国际专利申请WO 93/23569和WO 94/02595(各自纳入本文作参考)所述设计核酶并合成，如上所述在体内或体外进行测试。也可优选输送这类核酶。当提供具体例子时，本领域人员知道需要时可采用其它形式的等价RNA靶。
可通过计算机折叠(Jaeger等，1989)个别分析锤头或发夹核酶，以评估此核酶序列是否折叠成适当的二级结构。不考虑结合臂与催化核心之间具有不利的分子间相互作用的那些核酶。可选择不同的结合臂长度以优化活性。通常每个臂至少5个以上碱基才能结合或与靶RNA反应。可设计能与mRNA信使中各种位点退火的锤头或发夹基序的核酶，并化学合成。所用合成方法按照正常RNA合成程序，见Usman等(1987)和Scaringe等，(1990)所述，并采用共同的核酸保护和偶联基团，如5’端的二甲氧三苯甲基和3’端的亚磷酰胺。分步偶联平均得率通常＞98％。发夹核酶可二部分合成，并退火重建活性核酶(Chowrira和Burke，1992)。可广泛修饰核核酶提高其稳定性，修饰用的基团为核酸酶抗性基团，例如2’-氨基、2’-C-烯丙基、2’-氟基、2 ’-O-甲基、2’-H(综述见Usman和Cedergren，1992)。可用一般方法凝胶电泳或高效液相层析纯化核酶并重悬于水。
可改变核酶结合臂的长度或化学合成具有防止其被血清核糖酶降解的修饰的核酶，来优化核酶的活性(见国际专利申请WO 92/07065；Perrault等，1990；Pieken等，1991；国际专利申请WO 91/03162；欧洲专利申请92110298.4；美国专利5,334,711；和国际专利申请WO 94/13688，它们描述了对酶RNA分子的糖部分可进行的各种化学修饰)，这些修饰能增强核酶在细胞中的效果，和除去主干II碱基以缩短RNA合成时间及减少化学需求。
Sullivan等(国际专利申请WO 94/02595)描述了输送酶RNA分子的通用方法。可用本领域熟练技术人员已知的各种方法将核酶给予细胞，包括但不限于脂质体包裹、离子电渗、掺入其它载体如水凝胶、环糊精、生物可降解纳米胶囊和生物粘附性微球体中。对一些应用，可活体内将核酶物直接输送给细胞或组织，用或不用上述载体。或者，可通过直接吸入、直接注射或导管、灌注泵或支撑管局部输送RNA/载体组合。其它输送途径包括但不限于：血管内、肌肉内、皮下或关节注射、气雾剂吸入、口服(片剂或药丸)、局部、全身、眼、腹膜内和/或鞘内输送。核酶输送和给药的更详细说明见国际专利申请WO 94/02592和WO 93/23569中所述，各自纳入本文作参考。
细胞内积累高浓度核酶的另一种方法是将编码核酶的序列掺入DNA表达载体中。核酶序列的转录受真核RNA聚合酶(pol I)、RNA聚合酶II(pol II)或RNA聚合酶III(pol III)启动子的驱动。Pol II或pol III启动子的转录物将在所有细胞中高水平表达；pol II启动子在给定细胞类型中的水平将取决于附近存在的基因调节序列(增强子、沉默子等)的性质。也可采用原核RNA聚合酶启动子，只要该原核RNA聚合酶能在适当细胞中表达(Elroy-Stein和Moss，1990；Gao和Huang，1993；Lieber等，1993；Zhou等，1990)。这些启动子表达的核酶可在哺乳动物中起作用(Kashani-Saber等，1992；Ojwang等，1992；Chen等，1992；Ye等，1993；L’Huillier等，1992；Lisziewicz等，1993)。为导入哺乳动物细胞，可将这类转录单位掺入各种载体中，包括但不限于质粒DNA载体、病毒DNA载体(如腺病毒、腺相关病毒载体)或病毒RNA载体(如逆转录病毒、生里基森林病毒、新培斯病毒载体)。
核酶可用作诊断工具以检测患病细胞内的基因漂变和突变。它们也可用来评估靶RNA分子的水平。核酶活性与靶RNA结构之间的密切关系得以检测分子的任何区域中改变靶RNA的碱基配对和三维结构的突变。利用多种核酶可绘制对RNA结构和体外及细胞和组织中发挥功能十分重要的核苷酸变化图谱。可用核酶切割靶RNA来抑制基因表达和明确特定基因产物在疾病进程中的作用。以此方式可明确作为疾病重要介体的其它基因靶标。这些研究将通过可能的组合性治疗(如多种核酶靶向不同基因，核酶与已知小分子抑制剂偶联，或用核酶和/或其它化学或生物分子组合间歇性治疗)导致更好治疗疾病进展。核酶的其它体外用途是本领域熟知的，包括检测与IL-5相关疾病有关的mRNA的存在。用核酶处理后，通过用标准方法测定切割产物的存在，可检测这类RNA。
4.18肽核酸
某些实施例中，本发明人考虑利用肽核酸(PNA)来实施本发明的方法。PNA是一种DNA模拟物，其中的核碱基附着于假肽骨架(Good和Nielsen，1997)。许多传统上采用RNA或DNA的方法可采用PNA。这些技术中，PNA序列常常比相应的RNA或DNA序列做得更佳，其用途不是RNA或DNA所固有的。PNA的综述包括制备方法、特征和和使用方法见Corey(1997)，本文纳入作参考。因此在某些实施例中，可制备与ACEmRNA序列的一部分或多部分互补的PNA序列，这类PNA组合物可用于调节、改变、减少或降低ACE-特异性mRNA的翻译，从而改变已给予PNA组合物的宿主细胞中的ACE活性水平。
PNA具有2-氨基乙基-甘氨酸键替代DNA的正常磷酸二酯主链(Nielsen等，1991；Hanvey等，1992；Hyrup和Nielsen，1996；Neilsen，1996)。这种化学性质具有三个重要的结果：第一，与DNA或硫代磷酸寡核苷酸相反，PNA是中性分子；第二，PNA无手性，不需要开发立体选择性合成；第三，PNA合成可用固相肽合成的标准的Boc(Dueholm等，1994)或Fmoc(Thomson等，1995)方案，虽然其它方法包括改进的Merrified方法也可使用(Christensen等，1995)。
PNA单体或易制备的寡聚物可从PerSeptive Biosystems(Framinghan，MA)商业购得。Boc或Fmoc方案合成PNA可直接用手工或自动化方案进行(Norton等，1995)。手工方案本身提供产生化学修饰的PNA或同时合成密切相关的PNA家族。
关于肽合成，具体PNA合成的成功取决于所选序列的性质。例如，虽然理论上PNA可掺入任何核苷酸碱基的组合，但相邻嘌呤的存在可能导致产物中缺失一个或多个残基。预计到这种困难，建议在生产具有相邻嘌呤的PNA时。应反复偶联可能无效加入的残基。然后通过反相高压液相层析纯化PNA(Norton等，1995)，产物的得率和纯度与肽合成时所见相似。
为某种应用而修饰PNA可通过在固相合成中偶联氨基酸，或结合含有羧酸基团的化合物而暴露N端胺基来完成。或者，可在合成后通过偶联导入的赖氨酸或半胱氨酸来修饰PNA。PNA容易被修饰有利于优化更佳的溶解性或特殊功能要求。一旦合成，可用质谱验证PNA及其衍生物的同一性。进行的几项研究采用了PNA的修饰(Norton等，1995；Haaima等，1996；Stetsenko等，1996；Petersen等，1995；Ulmann等，1996；Koch等，1995；Orum等，1995；Footer等，1996；Griffith等，1995；Kremsky等，1996；Pardridge等，1995；Boffa等，1995；L and sdorp等，1996；Gambacorti-Passerini等，1996；Armitage等，1997；Seeger等，1997；Ruskowski等，1997)。美国专利5,700,922讨论了PNA-DNA-PNA嵌合分子和它们在诊断学、调生物体中的蛋白质和对治疗剂敏感的疾病中的用途。
与含有负电荷键的DNA或RNA相反，PNA主链是中性的。尽管这种显著改变，PNA能通过Watson-Crick配对识别互补性DNA和RNA(Egholm等，1993)，证实了Nielsen等(1991)提出的最初模型。PNA缺乏3’-5’极性，且能以平行或反平行方式与优选的反平行模式结合(Egholm等，1993)。
DNA寡核苷酸与DNA和RNA的杂交因互补链的带负电的磷酸骨架之间的静电排斥而失去稳定性。相反，PNA-DNA或PNA-RNA双链体中没有电荷排斥，提高了融化温度(Tm)并降低了Tm对单价或二价阳离子浓度的依赖性(Nielsen等，1991)。杂交的速率和亲和力明显提高因为它们使PNA能在松开的双链DNA内进行互补序列的链入侵。此外，反向重复的有效杂交提示PNA能有效识别双链DNA内的二级结构。识别增强也随PNA固定在表面上而出现，Wang等证明载体连接的PNA可用于检测杂交事件(Wang等，1996)。
人们可能希望PNA与互补序列的紧密结合也会增加与类似(但不相同)序列的结合，因而降低了PNA识别的序列特异性。然而，如同DNA杂交一样，可通过平衡寡聚物长度与培育时间实现选择性识别。而且通过PNA-DNA杂交增强的PNA选择性杂交比DNA-DNA杂交更不耐受碱基错配。例如，16bp PNA-DNA双链体内的一个错配可降低Tm多达15℃(Egholm等，1993)。这种高水平的辨别力得以开发几种以PNA为基础的策略来分析点突变(Wang等，1996；Carlsson等，1996；Thiede等，1996；Webb和Hurskainen，1996；Perry-O’Keefe等，1996)。
高亲和力结合为分子识别和开发PNA的新用途提供了明显的优点。例如，11-13个核苷酸PNA能抑制端粒酶(一种利用基本的RNA模板延伸端粒端酶末端的核糖核蛋白)的活性，而类似的DNA寡聚物则不能(Norton等，1996)。
中性PNA比类似的DNA寡聚物更疏水，这可能导致它们难于在中性pH时溶解，特别是如果PNA有高的嘌呤含量或如果它们可能形成二级结构。可通过一个或多个在电荷连接于PNA末端提高其溶解性(Nielsen等，1991)。
Allfrey及其同事的发现提示，链入侵会自发地逐一发生于染色体DNA内(Boffa等，1995；Boffa等，1996)。这些研究将PNA靶向的核苷酸CAG的三联体序列，并利用此识别来纯化转录与活性DNA(Boffa等，1995)并抑制转录(Boffa等，1996)。此结果提示如果PNA能在细胞内输送，它们可能是通用的基因表达的序列特异性调节剂。关于PNA用作反义和反基因制剂的研究和综述可参见Nielsen等(1993b)，Hanvey等(1992)，Good和Nielsen(1997)。Koppelhus等(1997)利用PNA来抑制HIV-1的逆转录，表明PNA可用于抗病毒治疗。
表征PNA的反义结合性能的方法见Rose(1993)和Jensen等(1997)所述。Rose用毛细管凝胶电泳测定PNA与其互补寡核苷酸的结合，测定相对结合动力学和化学计量。Jensen等用BIAcoreTM技术进行了相似类型的测定。
PNA的其它用途包括用于DNA链入侵(Nielsen等，1991)，反义抑制(Hanvey等，1992)，突变性分析(Orum等，1993)，转录增强子(Mollegaard等，1995)，核酸纯化(Orum等，1995)，转录活性基因的分离(Boffa等，1995)，阻断转录因子结合(Vickers等，1995)，基因组切割(Veselkov等，1996)，生物传感器(Wang等，1996)，原位杂交(Thisted等，1996)，和替代Sounthern印迹(Perry-O’Keefe，1996)。
4.19多肽、肽和肽变体
在其它方面本发明提供了多肽组合物。一般说，本发明的多肽是衍生自哺乳动物的分离的多肽(或其表位、变体或活性片段)。优选该多肽由本文所述多核苷酸序列编码，或由在中等严谨条件下与本文所述多核苷酸序列杂交的序列编码。或者，该多肽可定义为含有本文所述氨基酸序列的毗连氨基酸序列的多肽，或该多肽含有本文所述的全部氨基酸序列。
本发明中，多肽组合物还含有与本发明多肽产生的抗体起免疫反应的一种或多种多肽，具体是具有所述多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽，或其活性片段、变体或生物功能等价物。
同样，应理解本发明的多肽组合物含有能诱导抗体的一种或多种多肽(所述抗体能与本申请书中所述一种或多种毗连核酸序列编码的一种或多种多肽起免疫反应)，或其活性片段，或其变体，或能在中等到高度严谨性条件下与这些序列的一种或多种杂交的一种或多种核酸序列。
如本文所用，多肽的活性片段包括用常规技术如诱变、或添加、缺失或置换修饰的多肽的全部或一部分，但活性片段显示与本文所述多肽基本相同的结构功能、抗原性等。
某些说明性实施例中，本发明的多肽至少含有上述血液恶性相关肿瘤蛋白或其变体的免疫原性部分。如上所述，“血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白”是由血液恶性疾病相关肿瘤细胞表达的蛋白质。在采用血液恶性肿瘤患者的抗血清作免疫测定(如ELISA)时也可检测到与血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白反应的蛋白质。上述多肽可以是任何长度。可能存在衍生白天然蛋白的其它序列和/或异源序列，这些序列也可(但不需要)具有免疫原性和抗原性。
“免疫原性部分”本文指某蛋白质中被B细胞和/或T细胞表面抗原受体识别(即特异性结合)的部分。这些免疫原性部分通常含有血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白或其变体的至少5个氨基酸残基，更优选至少10个，最优选至少20个氨基酸残基。某些优选的免疫原性部分包括缺失了N-末端前导序列和/或跨膜结构域的肽。其它优选免疫原性部分与成熟蛋白质相比较，可含有小的N-末端和/或C-端缺失(如1-30个氨基酸，优选5-15个氨基酸)。
免疫原性部分通常可用熟知的技术鉴定，如Paul，《基础免疫学》(FundamentalImmunology)，第三版，243-247(Raven Press，1993)中总结和本文参考文献引用的那些技术。这些技术包括筛选能与抗原特异性抗体、抗血清和/或T细胞系或克隆反应的多肽。如本文所用，抗血清和抗体是“抗原特异性的”，如果它们能与抗原特异性结合(即在ELISA或其它免疫测定中，它们能与蛋白反应，但与无关蛋白不发生可检测反应)。可如上所述用熟知的技术制备这些抗血清和抗体。天然血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白的免疫原性部分是与上述抗血清和/或T细胞反应的部分，其反应水平基本上不低于全长多肽的反应性(如在ELISA和/或T细胞反应性测定中)。这些免疫原性部分能在这类测定中反应，反应水平类似于或高于全长多肽的反应性。可用本领域普通技术人员熟知的方法进行这种筛选，见Harlow和Lane，《抗体：实验室手册》，Cold Spring Harbor Laboratory，1988。例如，可将此多肽固定在固相载体上，并与病人血清接触，使血清中的抗体与固定的多肽结合。然后洗去未结合的血清，用例如125I-标记蛋白A检测结合的抗体。
如上所述，组合物可含有天然血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白的变体。多肽“变体”本文指与天然血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白不同，有一个或多个取代、缺失、添加和/或插入的多肽，这样该多肽的免疫原性基本上没有减弱。换句话说，变体与抗原特异性抗血清的反应能力与天然蛋白相比可能增强或无变化，或与天然蛋白相比减少不到50％，优选不到20％。这类变体可通过修饰上述多肽序列之一和评价修饰的演多肽与上述抗原特异性抗体或抗血清的反应性来鉴定。优选的变体包括一部分或多部分，如N未端前导序列或跨膜结构域已去除的那些变体。其它优选项变体包括从成熟蛋白的N未端和/或c未端中去除的一小部分(如1-30个氨基酸，优选5-15个氨基酸)已变体。
本发明的多肽变体包括显示与本文所述多肽至少约70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性的那些多肽变体。
优选变体含有保守性取代。“保守性取代”是其中一个氨基酸被另一个具有类似性能的氨基酸所取代，这样肽化学领域的技术人员预计多肽的二级结构和亲水性基本上不改变。通常可要据极性、电荷、溶解性、疏水性、亲水性的相似性和/或残基的两亲性进行氨基酸取代。例如，负电荷氨基酸包括门冬氨酸和谷氨酸；正电荷氨基酸包括赖氨酸和精氨酸；具有无电荷极性头部基、相似疏水性值的氨基酸包括亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸；甘氨酸和丙氨酸；天冬酰胺和谷氨酰胺；和丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。可代表保守性改变的其它氨基酸组包括：(1)ala，pro，gly，glu，asp，gln，asn，ser，thr；(2)cys，ser，tyr，thr；(3)val，ile，leu，mel，ala，phe；(4)lys，arg，his；和(5)phe，tyr，trp，his。变体也可含有非保守性改变。一优选项实施例中，变体多肽有5个氨基酸或更少个取代、缺失或添加而与不同于天然序列。也可例如通过缺失或添加对多肽的免疫原性、二级结构和亲水性影响最小的氨基酸来修饰(或改变)变体。
如上所述多肽可在蛋白质的N末端含有一信号(或前导)序列，该序列共翻译或翻译后指导蛋白质的转移。可将多肽偶联于一接头或其它序列，而易于多肽(如聚组氨酸)的合成、纯化和鉴定，或增强多肽与固相载体的结合。例如，可将多肽偶联于免疫球蛋白Fc区。
可用各种熟知的技术制备多肽。利用本领域技术人员知道的各种表达载体，不难从DNA序列制备上述DNA序列编码的重组多肽。可在用含有编码重组多肽的DNA分子的表达载体转化或转染的合适宿主细胞中实现表达。合适的宿主细胞包括原核生物、酵母和高等真核细胞如哺乳动物细胞和植物细胞。优选采用的宿主细胞是大肠杆菌、酵母或哺乳动物系如COS或CHO。可用商业购得的滤器先浓缩合适宿主/载体系统的培养基上清液(其中有分泌的重组蛋白或多肽)。浓缩后，将浓缩液加到合适的纯化基质如亲和基质或离子交换树脂上。最后，可用一种可多种反相HPLC进一步纯化重组多肽。
也可用本领域普通技术人员熟知的技术，以合成方法产生不到约100个氨基酸，通常不到约50个氨基酸的部分和其它变体。例如，可用市场上购得的固相技术，如Merrifield固相合成方法合成多肽，合成中氨基酸被依次加到正在生长的氨基酸链中。见Merrifield，J.Am.Chem.Soc.85：2146-2149，1963。自动化合成多肽的仪器可从供货商如Perkin Elmer/Applied BioSystems Division(Foster City，CA)购得，并可按厂商说明书进行操作。
某些具体实施例中，所述多肽可以是含有上述多个多肽，或含有上述至少一个多肽和一无关序列如已知的肿瘤蛋白质的一种融合蛋白。此融合伙伴可以，例如帮助提供T辅助表位(一种免疫融合伙伴)，优选人可识别的T辅助表位，或帮助表达该蛋白(表达增强子)，产量比天然重组蛋白高。某些优选的融合伙伴是免疫和表达增强融合伙伴。可选择其它融合伙伴来提高蛋白的溶解性或使该蛋白靶向所需的胞内区室。其它融合伙伴包括有利于蛋白纯化的亲和标记物。
通常可用标准技术，包括化学偶联制备融合蛋白。优选融合蛋在表达系统中作为重组蛋白表达，与非重组蛋白相比产量水平提高了。简言之，可分别装配编码多肽组分的DNA序列，并连接入适当的表达载体中。将编码一多肽组分的DNA序列的3’末端用或不用肽接头，与编码第二个多肽组分的DNA序列的5’末端连接，使该序列的读框处于相中。这允许翻译成保留二组分多肽的生物活性的一个融合蛋白。
用一肽接头序列分开第一和第二多肽组分，分开的距离足以保证各多肽折叠成其二级和三级结构。可用本领域熟知的标准方法将这种肽接头序列掺入融合蛋白中。合适的肽接头序列可根据以下因素选择：(1)其采取可屈曲延伸构型的能力，(2)其不能采取能与第一和第二多肽上的功能性表位相互作用的二级结构，(3)缺少能与多肽功能性表位反应的疏水性或带电残基。优选的肽接头序列含有Gly，Asn和Ser残基。其它接近中性的氨基酸如Thr和Ala也可用于接头序列。可用作接头的氨基酸序列包括Maratea等，Gene 40：39-46，1985；Murphy等，Proc.Natl.Acad.Sci83：8258-62，1986；美国专利4,935,233和4,751,180中所述。接头序列一般长1-约50个氨基酸。当第一和第二多肽含有可用于分开功能性结构域和防止空间干扰的非必需N-末端氨基酸区域时，不需要接头序列。
将该连接的DNA序列操作性连接于合适的转录和翻译调控元件。负责表达DNA的调控元件只能位于编码第一个多肽的DNA序列的5’端。类似地，终止翻译和转录终止信号所需的终止密码子只能位于编码第二多肽的DNA序列的3’端。
也提供融合蛋白。此种蛋白含上述多肽与无关的免疫原性蛋白。优选免疫原性蛋白能诱导回忆应答。此种蛋白的例子包括破伤风、结核和肝炎蛋白(见例如Stoute等，New Engl.J.Med.，336：86-91，1997)。
优选实施例中，一种免疫融合伴侣衍生自蛋白质D，一种革兰阴性菌流感嗜血杆菌B(WO 91/18926)的表面蛋白。蛋白D衍生物优选含蛋白质的约1/3(如前N-末端100-110个氨基酸)，并可脂化的蛋白D衍生物。某些优选实施例中，将脂蛋白D融合伴侣的前109个残基包含在N-末端上以提供具有附加外源性T-细胞表位的多肽及提高在大肠杆菌中的表达水平(因此起表达增强子的作用)。脂尾可确保将抗原最适呈递给抗原呈递细胞。其它融合伴侣包括流感病毒的非结构性蛋白、NS1(凝血素)。通常利用N-末端81个氨基酸，虽然可采用包括T-辅助表位的不同的片段。
另一实施例中，免疫合伴侣是称为LYTA的蛋白质，或其一部分(优选C-末端部分)。LYTA衍生自肺炎链球菌，该细菌合成一种称为酰胺酶LYTA的N-乙酰-L-丙氨酸酰胺酶(由LytA基因编码；Gene 43：265-292，1986)。LYTA是一种能特异性降解肽聚糖骨架中某些键的自溶素。LYTA的C-末端结构域负责对胆碱或对某些胆碱类似物(如DEAE)的亲和力。已利用这种性能开发用于表达融合蛋白的大肠杆菌C-LYTA表达质粒。已描述氨基末端含C-LYTA片段的杂交蛋白的纯化(见Biotechnology10：795-798，1992)。一优选实施例中，可将LYTA的重复部分掺入一融合蛋白中。在开始于残基178的C-末端区中找到重复部分。特别优选的重复部分掺入了残基188-305。
通常，需分离本文所述多肽(包括融合蛋白)和多核苷酸。“分离的”多肽或多核苷酸指从其原来环境中除去的。例如，分离天然产生的蛋白质，如果它与天然系统中共存的一些或全部物质分开的话。优选这些多肽至少约90％纯，更优选至少约95％纯，最优选至少约99％纯。如果将一多核苷酸克隆到不是天然环境一部分的载体中，就认为该多核苷酸是分离的。
4.20结合剂
本发明还采用能特异性结合血液恶性相关抗原的制剂如抗体及其抗原结合片段。如果抗体及其抗原结合片段以可检测水平(如在ELISA中)与血液恶性相关抗原反应，但在类似条件下与无关蛋白检测不到反应，就认为其与血液恶性相关抗原“特异性结合”。“结合”本文指两个不同分子间的非共价结合，从而形成一种复合物。结合能力可通过测定形成复合物的结合常数来评价。复合物浓度除以组分的浓度可获得结合常数。通常本文中形成复合物的结合常数超过约103L/mol时，就认为两化合物“结合”了。结合常数可用本领域熟知方法测定。
结合剂能区分患或不患血液恶性肿瘤的病人。这类结合剂产生的信号表明此病患者至少约20％存在血液恶性肿瘤；且产生阴性信号表明在至少约90％的无此病个体中不存在此病。为确定结合剂是否能满足此要求，可测试患或不患有血液恶性肿瘤(用标准临床试验测定)病人的生物样品(如血、血清、尿、和/肿瘤活检)是否存在与结合剂结合的多肽。显然应测试有统计学意义数量的患或不患有疾病的样品。各结合剂应满足上述标准，然而，该领域普通技术人员懂得可联合应用结合剂以提高灵敏度。
能满足上述要求的任何制剂可以是一种结合剂。例如，结合剂可以是有或没有肽组分、RNA分子或多肽的核糖体。一优选实施例中，结合剂是抗体或其抗原结合片段。可用本领域普通技术人员所知的各种技术制备抗体。见例如，Harlow和Lane《抗体：实验室手册》，Cold Spring Harbor Laboratory，1988。通常，可通过细胞培养技术产生抗体，包括产生上述单克隆抗体，或通过将抗体基因转染入合适的细菌或哺乳动物细胞以产生重组抗体。一种技术是将含多肽的免疫原先注射入各种各样的动物(如小鼠、大鼠、家兔、绵羊或山羊)中。在步骤中，本发明的多肽可作为免疫原而无需修饰。或者，特别对于较短的肽，如果将多肽连接于一载体蛋白如牛血清白蛋白或匙孔血蓝蛋白，可诱导高免疫应答。优选按预定的时间表给动物宿主注射免疫原，加一次或多次加强免疫，动物定期采血。可将多肽偶联于合适的固相载体，如采用亲和层从血清中纯化对多肽特异的多克隆抗体。
可用Kohler和Milstein，Eur J Immunol.6：511-19，1976的技术及其改进制备感兴趣抗原肽特异的单克隆抗体。简言之，这些方法包括制备能产生具有所需特异性(如与感兴趣多肽反应)的无限增殖的细胞系。例如，可从上述免疫动物获得的脾细胞产生这种细胞系。然后将脾细胞与骨髓瘤细胞融合伴侣(优选与免疫动物同系)融合而无限增值。可采用各种融合技术。例如，将脾细胞和骨髓瘤细胞与非离子去污剂混合几分钟，然后以低密度接种在支持杂交细胞生长而不支持骨髓瘤细胞生长的选择性培养基上中。优选的选择技术采用HAT(次黄嘌呤、氨基喋呤、胸苷)选择。充分时间后，通常约1-2周可见杂交的克隆。选择单个克隆并检测其培养上清液对多肽的结合能力。优选具有高反应性和特异性的杂交瘤。
可从生长的杂交瘤克隆的上清液中分离得到单克隆抗体。此外，可用各种技术来提高产量，如将杂交瘤细胞系注射入合适脊椎动物宿主如小鼠的腹膜腔。然后从腹水或血液中收获单抗。可用常规技术如层析、凝胶过滤、沉淀和抽提去除抗体中的污染物。本发明的多肽可用于此纯化工艺如亲和层析步骤。
某些实施例中，优选采用抗体的抗原结合片段。这种片段包括Fab片段可用标准方法制备。简言之，可用蛋白A珠柱亲和层析(Harlow和Lane，《抗体：实验室手册》，Cold Spring Harbor Laboratory，1988)从兔血清中纯化免疫球蛋白，并用木瓜蛋白酶消化产生Fab和Fc片段。用蛋白A珠层析柱亲和层析分离Fab和Fc片段。
可将本发明的单抗及其片段偶联于一种或多种治疗剂，如放射性核素、分化诱导剂、药物、毒素和它们的衍生物。优选的放射性核素包括：90Y、123I、125I、131I、186Re、188Re、211At和212Bi。优选的药物包括氨甲喋呤、嘧啶和嘌呤类似物。优选的分化诱导剂包括佛波醇酯和丁酸。优选的毒素包括篦麻毒蛋白，想思豆毒蛋白、白喉毒素、霍乱毒素、白树毒蛋白、假单胞菌外毒素、志贺菌毒素和商陆抗病毒蛋白。对于某些体内或活体内治疗，优选将抗体或其片段偶联于细胞毒剂如放射性或化疗组成成分。
可将治疗剂与合适的单克隆抗体直接或间接(通过一接头基团)偶联(如共价连接)。当药剂和抗体各自具有能相互反应的取代基时，二者之间可能发生直接反应。例如，一个分子上的亲核基团如氨基或巯基，能与另一分子上含羰基的基团如酸酐或卤酸反应，或与含有良好离去基团(如卤化物)的烷基反应。
或者，可能需要将治疗剂和抗体通过一接头基团偶联。接头基团的功能是作为分隔抗体与药剂的间隔臂，以避免干扰结合能力。接头基团也可增加药剂或抗体上取代基的化学反应性，从而提高偶联效果。化学反应性的增加还便于使用药剂或其它药剂上的功能基团，否则中不可能的。
本领域技术人员已证明各种双功能或多功能试剂，同功能和异功能试剂(见Pierce Chemical Co，Rockford，IL的产品目录上所述)，可用作接头基团。可通过氨基、羧基、巯基或氧化的糖残基进行偶联。有许多参考文献描述了这类方法，如美国专利4,671,958。
当治疗剂从本发明免疫偶联物的抗体部分游离出来时其作用更强，因此可能需要采用细胞内化期间能切割的接头基团。已描述了许多不同的可切割的接头基团。从这些接头基团细胞内释放药剂的机制包括通过还原二硫键(美国专利4,489,710)；照射对光不稳定键(美国专利4,625,014)；水解衍生的氨基酸侧链(美国专利4,638,045)；血清补体介导的水解(美国专利4,671,958)和酸催化水解(美国专利4,569,789)来切割。
可能需要将一个以上的药剂偶联于抗体。一实施例中，将多个药剂的分子偶联于一个抗体分子。另一实施例中，可将一种以上的药剂偶联于一个抗体。不论具体的实施例，含一种以上药剂的免疫偶联物可用各种方法制备。例如，可将一种以上的药剂直接偶联于一抗体分子，或可用接头提供多个结合位点。或者，可采用载体。
载体也可以不同方法携带药剂，包括直接，或通过接头基团共价接合。合适的载体包括蛋白质如白蛋白(美国专利4,507,234)、肽和多糖如氨基葡聚糖(美国专利4,699,784)。载体也可通过非共价结合或包囊化如包裹在脂质体载体中(美国专利4,429,008和4,873,088)而携带药物。对放射性核素剂特异的载体包括放射性卤化的小分子和螯合性化合物。例如，美国专利4,735,792披露的代表性放射性卤化的小分子及其的合成方法。可从含有氮和硫原子作为结合金属或金属氧化物、放射性核素的供体原子的螯合性化合物中产生放射性核素螯合物。例如，见美国专利4,673,562披露的代表性螯合化合物及其合成方法。
可采用各种途径给予抗体和免疫偶联物。给药途径通常是静脉内、肌肉内、皮下或肿瘤切除床部位。显然抗体/免疫偶联物的精确剂量视所用抗体、肿瘤上的抗原密度和抗体清除率而不同。
4.21疫苗
本发明的某些优选实施例中提供了疫苗。这些疫苗通常含有上述一种或多种药物组合物与免疫剌激剂组合。免疫剌激剂是任何能提高或增强对异源抗原的免疫应答(抗体和/或细胞介导应答)的物质。免疫剌激剂的例子包括佐剂、生物可降解微球体(如聚乳酸聚半乳交酯)和脂质体(将化合物掺入其中，见Fullerton，美国专利4,235,877)。疫苗制品的一般描述见M.F.Powell和M.J.Newman编，《疫苗设计(亚基和佐剂方法)》(“Vaccine Design(the subunit and adjuvant approach))，”PlenumPress(NY，1995)。本发明范围中的药物组合物和疫苗也可含有其它可能有或没有生物活性的化合物。例如，组合物或疫苗中，存在其它肿瘤抗原的一种或多种免疫原性部分，或掺入融合多肽中，或作为分开的化合物。
说明性疫苗可含有编码上述一种或多种多肽的DNA，从而可在原位产生该多肽。如上所述，DNA可在本领域普通技术人员所知的各种输送系统内存在，包括核酸表达系统、细菌和病毒表达系统。许多基因输送技术是本领域熟知的，如见RollandCrit.Rev.Therap.Drug Carrier Systems.15：143-198，1998，及其引用的参考文献。适当的核酸表达系统含有在患者中表达所需的DNA序列(如合适的启动子和终止信号)。细菌输送系统包括给予能在其细胞表面表达多肽的免疫原性部分，或分泌此种表位的细菌(如卡介苗)。一优选实施例中，可用病毒表达系统(如牛痘苗或其它痘病毒、逆转录病毒或腺病毒)。合适系统的描述见：Fisher-Hoch等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：317-321，1989；Flexner等，Ann.N.Y.Acad.Sci.569：86-103，1989；Flexner等，Vaccine 8：17-21，1990；美国专利4,603,112；4,769,3305,017,487；WO 89/01973；美国专利4,777,127；GB 2,200,651；EP 0,345,242；WO91/02805；Berkner，Biotechniques 6：616-27，1988；Rosenfeld等，Science252：431-4，1991；Kolls等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：215-19，1994；Kass-Eisler等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：11498-502，1993；Guzman等，Circulation88：2838-48，1993；和Guzman等，Cir.Res.73：1202-07，1993。将DNA掺入这类表达系统的技术是本领域普通技术人员熟知的。DNA也可是“裸的”，例如见Ulmer等，Science 259：1745-1749(1993)所述和Cohen(1993)的综述。可通过将DNA包被在可生物降解的小珠上而有效地转运入细胞中，来提高裸DNA的摄入。显然所述疫苗可含有多核苷酸和多肽组分。提供这种疫苗用于增强免疫应答。
显然所述疫苗可含有上述多核苷酸和多肽的药学上可接受的盐。可从药学上接受的非毒性碱，包括有机碱(如伯、仲、叔胺和碱性氨基酸的盐)和无机碱(如钠、钾、锂、钙和镁盐)制备此种盐。
虽然本发明疫苗组合物中可采用本领域普通技术人员已知的任何合适载体，但载体的类型将根据给药方式而不同。可配制本发明组合物用于任何合适的给药方式，包括例如局部、口、鼻、静脉内、颅内、腹膜内、皮下或肌肉内给药。对于胃肠道外给药如皮下注射，载体最好含有水、盐水、酒精、脂肪、蜡或缓冲剂。对于口服给药，可采用上述任一载体，或固体载体如甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石粉、纤维素、葡萄糖、蔗糖和碳酸镁。也可采用生物可降解微球体(如聚乳酸聚甘醇酸酯)作为本发明药物组合物的载体。合适的生物可降解微球体见例如美国专利4,897,268；5,075,109；5,928,647；5,811,128；5,820,883；5,853,763；5,814,344和5,942,252中所述。也可采用美国专利5,928,647中所述包含宿主中能诱导I类限制性细胞毒T淋巴细胞应答的颗粒一蛋白复合物的载体。
这类组合物可也含有缓冲剂(如中性缓冲盐水或磷酸缓冲盐水)、碳水化合物(如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖)，甘露糖醇、蛋白质、肽或氨基酸如甘氨酸、抗氧化剂、抑菌剂，螯合剂如EDTA或谷胱甘肽、佐剂(如氢氧化铝)、能赋予制剂与受者血液等渗、低渗或弱高渗的溶质、悬浮剂、增稠剂和/或防腐剂。或者，可将本发明组合物配制成冻干剂，。也可用熟知的将化合物包囊在脂质体内。
在制备本发明疫苗时可采用各种免疫刺激剂如佐剂。大多数佐剂含有保护抗原免被快速分解的物质如氢氧化铝或矿物油、免疫应答刺激剂如脂质A、百日咳鲍特氏菌或结核分枝杆菌衍生的蛋白。合适的佐剂可从市场上购得，如弗氏不完全佐剂和完全佐剂(Difco Laboratories，Detroit，MI)；Merck佐剂65(Merck and Company Inc.，Rahway，NJ)；AS-2(Smithkline Beecham，Philadelphia，PA)；铝盐如氢氧化铝凝胶(明矾)或磷酸铝、钙、铁或锌的盐；酰化酪氨酸的不溶性悬浮液；酰化糖；阳离子或阴离子衍生多糖；聚磷腈；生物可降解微球体；单磷酰脂质A和Quil A。细胞因子如GM-CSF或IL-2、IL-7或IL-12也可用作佐剂。
本文所述疫苗中，佐剂组合物优选设计成能诱导Th1型占优势的免疫应答。高水平的Th1型细胞因子(如IFN-r、TNF-α、IL-2和IL-12)有利于诱导对施用抗原的细胞介导免疫应答。相反，高水平的Th2型细胞因子(如IL-4、IL-5、IL-6和IL-10)有利于诱导体液免疫应答。应用本文所述疫苗后，病人将产生包括Th1和Th2型的免疫应答。优选实施例中，免疫应答是占优势的Th1型，Th1型细胞因子水平的增加大于Th2型细胞因子的水平。采用标准测定不难评估这些细胞因子的水平。细胞因子家族的综述可参见Mosmann和Coffman，Ann.Rev.Immunol.7：145-173，1989。
用于诱导占优势的Th1型应答的优选佐剂包括，例如单磷酰脂质A(优选3-脱氧酰化单磷酰脂质a(3D-MPL)与铝盐合用。MPL佐剂可从Corixa Corporation(SeattleWA；见美国专利4,436,727；4,877,611；4,866,034和4,912,094)购买。含CpG的寡核苷酸(其中CpG二核苷酸是非甲基化的)也诱导占优势的Th1型应答。这类寡核苷酸是熟知的，例如可参见国际专利申请WO96/02555和WO99/33488及美国专利6,008,200；5,856,462中所述。Sato等，Science 273：352，1996也描述了免疫刺激DNA序列。另一种优选的佐剂是皂苷，优选QS21(Aquila Biophamaceuticals Inc.，Framingham，MA)，可单独或与其它佐剂联用。例如，一种增强系统包括单磷酰脂质A和皂苷衍生物的组合，如QS21和3D-MPL的组合(见国际专利申请WO94/00153)，或一种反应原性较低的组合物(其中采用胆固醇猝灭QS21，见WO96/33739所述)。其它优选制剂包括水包油乳剂和生育酚。特别强的佐剂包括QS21、3D-MPL和上述水包油乳剂中的生育酚，见国际专利申请WO95/17210。
其它优选佐剂包括Montanide ISA 720(Seppic)、SAF(Chiron)、ISCOMS(CSL)、MF-59(Chiron)、SBAS系列佐剂(如SBAS-2或SBAS-4，获得自SmithKline Beecham，Rixensart，Belgium)、Detox(Corixa公司)、RC-529(Corixa公司)和氨烷基氨基葡糖苷-4-磷酸盐(AGPs)，这些可见待批美国专利申请08/853,826和09/074,720，其内容纳入本文作参考。
本文所述任何疫苗可用熟知的方法制备而得到抗原、免疫应答增强剂和合适的载体或赋形剂的组合。本文所述组合物可作为缓释剂型的一部分给药(即以多糖组成的胶囊、海绵或明胶剂型、能在给药后缓慢释放起作用的化合物)。可采用熟知技术(Coombes等，Vaccine 14：1429-38，1996)制备此种制剂，并通过口、直肠或皮下植入(植入在所需的靶位置)给药。缓释制剂可含有分散在载体基质，和/或包含在贮器(被一控速膜包围)中的肽、多核苷酸或抗体。
这类制剂中所用的载体优选生物相容的，也可以是生物可降解的，该制剂优选提供较恒定水平的活性成分释放。这类载体包括聚(丙交酯-共乙交酯)的微球体聚丙烯酸、乳胶、淀粉、纤维素和葡聚糖等。其它缓释载体包括超分子生物载体，其含有非液态亲水核心(如交联的多糖或寡糖)和任选地含两亲性化合物如磷脂的外层(美国专利5,151,254、国际专利申请WO94/20078；WO94/23701和WO96/06638)。缓释制剂内活性化合物含量取决于植入的部位、释放的速度和持续时间，及待防治疾病的性质。
所述药物组合物和疫苗中可采用各种输送载体，以促进靶向肿瘤细胞的抗原特异性免疫应答的产生。输送载体包括抗原呈递细胞(APC)，如树突细胞、巨噬细胞、B细胞、单核细胞和可被基因改造成有效的APC的其它细胞。这类细胞可以但不需要基因修饰以提高其呈递抗原的能力，促进T细胞应答的活化和/或维持本身具有的抗肿瘤作用，和/或在免疫学上与接受者相容(即HLA单倍体型相配)。一般可从各种生理性液体和器官，包括肿瘤和肿瘤外周组织中分离得到APC，可以是自身的、同种异体的，同系或异种细胞。
本发明某些优选实施例采用树突细胞或其祖细胞作为抗原呈递细胞。树突细胞是很强的APC(Banchereau和Steinman，Nature 392：245-251，1998)，已证明其有效作为诱导预防或治疗性抗肿瘤免疫的生理性佐剂(Timmerman和Levy，Ann Rev Med50：507-529，1999)。通常可根据其典型形状(原位放射状，显著的胞质突起(树突)体外可见)，摄取、加工和高效呈递抗原的能力及激活原初T细胞应答的能力，来鉴定树突细胞。当然，可基因改造树突细胞使其表达通常在体内或活体内树突细胞上没有的特异性细胞表面受体或配体，这类修饰的树突细胞也是本发明考虑的。另一种树突细胞，分泌的载体、载有抗原的树突细胞(称为外体)也可用于疫苗中(Zitvogel等，Nature Med 4：594-600，1998)。
树突细胞可获得自外周血、骨髓、肿瘤浸润细胞、肿瘤外周组织浸润细胞、淋巴结、脾脏、皮肤、脐带血或任何其它合适的组织或液体。例如，可通过在获自外周血的单核细胞培养物中加入细胞因子的组合物如GM-CSF、IL-4、IL-13和/或TNFα来话体外分化树突细胞。或者，在培养基中加入能诱导树突细胞分化、成熟和增殖的GM-CSF、IL-3、TNF-α、CD40配体、LPS、fit3配体和/或其它化合物的组合物，使获自外周血、脐带血或骨髓的CD34阳性细胞分化为树突细胞。
可方便地将树突细胞分成“不成熟”和“成熟”细胞，这是在两种鉴定良好的表型之间的简单方法。然而，这种命名法不应认为排除了所有可能的分化中间期细胞。作为APC，不成熟树突状细胞特征是抗原摄取和加工能力高，这与其FCr受体和甘露糖受体的高表达相关。成熟表型的典型特征是这些标记的表达较低，但负责T细胞活化的细胞表面分子，如I类和II类MHC分子、粘附分子(如CD54和CD11)和共刺激分子(如CD40、CD80、CD86和4-IBB)高表达。
一般用编码血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白(其部分或其它变体)的多核苷酸转染APC，在细胞表面表达该血液恶性疾病相关肿瘤多肽或其免疫原性部分。可活体外进行这种转染，包含这种转染细胞的组合物或疫苗可用于上述治疗目的。或者，可将靶向树突细胞或其它抗原呈递细胞的基因输送载体给予病人，使其在体内转染。可用本领域已知的任何方法如WO97/24947中所述的方法或Mahvi等，Immunology andCell Biology 75：456-460，1997所述基因枪方法进行树突细胞的体内或活体内转染。可将树突细胞或祖细胞与血液恶性肿瘤相关肿瘤多肽、DNA(裸的或在质粒载体内)或RNA一起培育，或与表达抗原的重组细菌或病毒(如牛痘、禽痘、腺病毒或慢病毒载体)一起培育，实现树突细胞的抗原负载。负载前，可将此多肽共价偶联于提供T细胞辅助的免疫伙伴(如载体分子)。或者，可分别或存在此多肽时用非偶联的免疫伙伴脉冲剌激树突细胞。
所述疫苗和药物组合物可装在单位剂量或多剂量容器中，如密封的安瓿或小瓶。这些容器最好密封以保持制剂的无菌，直到使用。一般将制剂作为悬浮液、溶液或乳液贮存在油性和水性载体中。或者，可将所述疫苗或药物组合物冻干贮存，使用前只需加入无菌液体载体即可。
4.22癌症治疗
本发明的其它方面，可用本文所述组合物免疫治疗癌症如血液恶性肿瘤，这类方法中，通常给予患者药物组合物和疫苗。“患者”本文指温血动物，优选人。患者可以患有或没患有癌症。因此可用上述药物组合物和疫苗来预防癌症的发展或治疗患有癌症的患者。癌症可用该领域一般所接受的标准进行诊断，包括恶性肿瘤的存在。可在手术切除原发肿瘤和/或给予放疗或常规化疗药物等治疗之前或之后，给予药物组合物和疫苗。可用任何合适的方法，包括静脉内、腹腔内、肌肉内、皮下、鼻内、皮内、肛门、阴道、局部和口服途径给药。
某些实施例中，免疫治疗可以是主动性免疫治疗，这种治疗依靠给予免疫应答修饰剂(如本文所述多肽和多核苷酸)体内刺激内源性宿主免疫系统产生抗肿瘤反应。
其它实施例中，免疫治疗可以是被动性免疫治疗，这种治疗包括给予已建立的抗肿瘤免疫反应性制剂(如效应细胞或抗体)的输送直接或间接介导抗肿瘤作用，而不需要依赖宿主的完整免疫系统。效应细胞的例子包括上述表达本文所述多肽的T细胞、T淋巴细胞(如CD8+细胞毒T淋巴细胞和CD4+T辅助肿瘤浸润淋巴细胞)、杀伤细胞(如自然杀伤淋巴和因子激活的杀伤细胞)、B细胞和抗原呈递细胞(如树突细胞和巨噬细胞)。
可将对上述多肽特异的T细胞受体和抗体受体克隆、表达和转移到用于过继免疫治疗的其它载体或效应细胞中。也可用上述多肽产生用于被动性免疫治疗的抗体或抗独特型抗体(见上述和美国专利4,918,164)。
用于过继免疫治疗的效应细胞一般可如上所述通过体外生长而充分获得。本领域熟知将一个抗原特异性效应细胞体内扩增至数十亿数量并保留抗原识别能力的培养条件。体外培养条件通常在存在细胞因子(如IL-2)和非分裂饲养细胞的条件下采用抗原间歇刺激。如上所述，本文所述免疫反应性多肽可用于快速扩增抗原特异性T细胞培养物，以产生充分数量的细胞用于免疫治疗。特别是，可用本领域熟知的标准技术，以免疫反应性多肽脉冲刺激或用一种或多种多核苷酸转染抗原呈递细胞如树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、成纤维细胞和/或B细胞。例如，可用具有适合于提高重组病毒或其它表达系统中表达的启动子的多核苷酸转染抗原呈递细胞。培养的治疗用效应细胞必须能在体内生长并广泛分布和长期存活。研究显示，用补充了IL-2的抗原反复制刺激可诱导培养的效应细胞在体内大量生长和长期存活(见例如Cheever等，Immnnol Rev 157：177，1997)。
或者，可将表达上述多肽的载体导入病人的抗原呈递细胞且在活体外克隆增殖供移植回同一病人中。可采用该领域已知的方法将转染的细胞再导入病人体内，优选以无菌形式通过静脉内，腔内，腹膜内或肿瘤内给药。
给予本文所述治疗组合物的途径和次数以及剂量，个体之间不同，易用标准技术确定。一般可通过注射(如皮内、肌肉内、静脉内或皮下)，鼻内(如吸入)或口服给予药物组合物和疫苗。最好在52周期间给药1-10个剂量。优选间隔1个月一次给予6个剂量，然后可定期给予加强免疫接种。其它方案也适合各个病人。合适的剂量是如上给予时能促进抗肿瘤免疫应答并超过基础水平(即未治疗)至少10-50％的量。免疫应答可通过测定病人的抗肿瘤抗体，或依赖疫苗产生的能体外杀伤病人肿瘤细胞的细胞毒效应细胞来监测。此种疫苗也应能引起免疫应答导致接种疫苗病人比未接种疫苗病人的临床结果改善(如更常见缓解、完全或部分缓解或较长时间的无病存活)。总之，药物组合物和疫苗含有一种或多种多肽，一个剂量中各多肽的量为每公斤宿主约25μg-5mg范围。合适的剂量范围因病人的体重而不同，但通常为约0.1mL-5mL范围。
一般适合的剂量和治疗方案可提供充足量的活性化合物以获得治疗和/或预防效果。治疗病人与未治疗病人相比，可通过确定改善的临床结果(如更常见缓解、完全或部分缓解或较长时间的无病存活)来监测免疫应答。先前存在的对血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白的免疫应答得到提高，通常与改善的临床结果相关联。一般可用获自治疗前后病人的样品，以标准增殖、细胞毒性或细胞因子测定，来评价此种免疫应答。
4.23癌症的检测和诊断
通常病人的癌症检测可根据获自该病人的生物样品(如血、血清、痰、尿和/或肿瘤活检)中存在的一种或多种血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白和/或编码此类蛋白的多核苷酸而定。换句话说，这类蛋白可用作表明是否存在血液恶性肿瘤的标志。此外，这类蛋白可用于检测其它癌症。本发明提供的结合剂通常能检测生物样品中结合药剂的抗原水平。可利用多核苷酸引物和探针来检测编码肿瘤蛋白的mRNA水平。通常肿瘤组织中存在的血液恶性肿瘤相关肿瘤的序列水平应比正常组织中至少高3倍。
本领域普通技术人员已知有多种测定采用结合剂来检测样品中的多肽标记。见例如Harlow和Lane《抗体：实验室手册》，Cold Spring Harbor Laboratory，1988。通常病人中是否存在癌症可通过(a)使病人的生物样品与结合剂接触；(b)检测样品中结合该结合剂的多肽水平；和(c)将多肽水平与预定的截断值比较来测定。
一优选实施例中，测定涉及利用固定在固相载体上的结合剂来结合样品中的多肽和去除其余成分。然后用含有报导基团能特异性结合该结合剂/多肽复合物的检测试剂检测结合的多肽。这类检测试剂可包括能特异性结合该多肽或抗体的结合剂，或能特异性结合该结合剂的其它试剂，如抗免疫球蛋白、蛋白G、蛋白A或凝集素。或者，可用竞争性测定，此测定中用一报导基团标记多肽，培育结合剂和样品后，使标记的多肽与固定的结合剂结合。样品中的成分抑制该标记多肽与结合剂结合的程度，反映了样品与固定的结合剂的反应性，适合这类测定用的多肽包括上述能与结合剂结合的全长血液恶性肿瘤相关蛋白及其部分。
肿瘤蛋白可附着的固相支持体是本领域普通技术已知的任何材料。例如，固相支持体可以是微量滴定板中的测试孔、或硝酸纤维素或其它合适的膜。或者，支持体可以是珠或圆片，如玻璃、玻璃纤维、乳胶或塑料如聚丙乙烯或聚氯乙烯。支持体也可以是上述磁性颗粒或光纤传感器，例如见美国专利5,359,681。结合剂可用本领域技术人员已知专利和科学文献上所详细描述的各种技术固定在固相支持体上。本发明内容中，术语“固定”指非共价缔合(如吸附)和共价结合(可以是试剂和支持体上的功能基团之间直接连接或借助交联剂连接)。优选通过吸附于微量滴定板中的孔或膜上的固定。此类情况下，可使用合适缓冲液配的结合剂与固相支持接触适当时间而获得吸附。接触时间随温度而异，但通常约1小时和约1天。一般与塑料微量滴定板的孔接触的结合剂量约10ng-10μg，优选100ng-1μg，能充分固定足够量的结合剂。
结合剂与固相支持体共价结合的实现，一般可先使该支持体与双功能试剂反应，该双功能试剂可与支持体和结合剂上的功能基因如羟基或氨基反应。例如，所述结合剂可共价结合于具有用苯醌包被的适当聚合物的支持体上，或通过支持体上的醛基与结合伙伴上的胺基和活化氢缩合(见Pierce《免疫技术样本和手册》，1991，A12-13)。
某些实施例中，测定是双抗体夹心测定。进行该测定可先使固定在固相支持体(通常是微量滴定板的孔)上的抗体与样品接触，使样品中的多肽结合于固定的抗体。然后从固定的多肽-抗体复合物中洗去未结合样品，加入含报导基团的检测试剂(优选能结合多肽上不同位点的第二抗体)。然后用适合于特异性报导基团的方法，测定仍结合于固相支持体的检测试剂的量。
更具体地说，一理抗体被固定于上述支持体上，通过封闭该支持体上的其余蛋白结合位点。合适的封闭剂是本领域普通技术人员已知的，如牛血清白蛋白或Tween20TM(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)。然后，一起培育固定化抗体和样品，使多肽结合于该抗体。培育前可用合适的稀释液如磷酸缓冲液(PBS)稀释样品。一般，适当的接触时间(即培育时间)是足以检测到获自血液恶性肿瘤患者样品中多肽存在的时间。优选的接触时间是获得的结合水平足以达到结合和非结合多肽之间平衡时至少约95％。本领域普通技术人员知道，不难通过测定该时间段出现的结合水平来确定实现平衡所需的时间。通常室温下培育时间约30分钟是足够的。
可用适当的缓冲液如含0.1％Tween20TM的PBS洗去固相支持体上未结合的样品。然后将含报导基团的第二抗体加到固相支持体上。优选的报导基团包括上述基团。
然后，将检测试剂与固定的抗体-多肽复合物培育足够时间以检测结合的多肽。适当的时间通常可通过测定该时间段出现的结合水平来确定。然后洗去未结合的检测试，并用报导基团检测结合的检测试剂。用于检测报导基团的方法取决于该报导基团的性质。对于放射性基团，通常适合用闪烁计数或放射自显影方法。可用分光光度法检测染料、发光基团和荧光基团。偶联于不同报导基团(通常为放射性或荧光基团或酶)的生物素可用亲和素检测。一般可加入底物(通常用于特定时间段)然后用分光度或反应产物的其它分析，来检测酶报导基团。
为确定是否存在癌症如血液恶性肿瘤，通常将检测到的仍结合于固相支持体的报导基团的信号，与相应于预定的截断值信号作比较。一优选实施例中，测定癌症的截断值是固定化抗体与非癌症患者样品培育时获得的信号平均值。一般，样品产生的信号高于预定截断值三个标准偏差即认为癌症阳性。另一优选实施例中，按Sackett等，《临床流行病学：临床医学的基础科学》，Little Brow and Co.，1985，106-7页的方法，用接受手术者曲线(Receiver Operator Curve)测定此截断值。简言之，此实施例中，可从真阳性率(即灵敏度)和假阳性率(100％特异性)配对的曲线来确定此截留值，其对应于诊断试验结果的每种可能截断值。该曲线上最靠近左手上角处的截断值(即围住最大区域的值)是最精确的截断值，能产生高于此法所测定的截断值的信号的样品被认为是阳性。或者，可将截断值沿曲线向左移动以最低程度地减少假阳性率，或向右移动以最低程度地减少假阴性率。通常，能产生高于此法所测定的截断值的信号的样品被认为是癌症阳性。
一相关实施例中，以流通或测试条方式进行测定，其中结合剂被固定在一种膜如硝酸纤维素。流通试验中，样品中的多肽随样品流过膜时结合于已固定的结合剂。然后标记的第二结合剂在含第二结合剂的溶液流过该膜时，结合于结合剂-多肽复合物。然后如上所述检测结合的第二结合剂。测试条方式中，将结合剂所结合的膜的一端浸在含样品的溶液中。样品沿着膜移动，通过含第二结合剂的区域，进入固定结合剂的区域。固定抗体区域中聚集的第二结合剂表明有癌症存在。通常该部位聚集的第二结合剂产生一种模式，如可用肉眼看的线条。缺乏此模式表示阴性结果。一般在上述形式的双抗体夹心测定中，当生物样品含有的多肽水平足以产生阳生信号时，选择固定于膜上的结合剂的量以产生肉眼可辨别的模式。这类测定中所用的结合剂优选抗体和其抗原结合片段。固定在膜上的抗体量优选约25ng-1μg，更优选约50ng-500ng。这类试验一般用很少量的生物样品进行。
当然，现有的许多其它测定方案也适合采用本发明的肿瘤蛋白或结合剂。以上所述仅是示范性的。例如本领域普通技术人员懂得，易对上述方案进行改进而采用血液恶性肿瘤相关多肽来检测与生物样品中此类多肽结合的抗体。检测这类血液恶性疾病相关肿瘤蛋白特异性抗体可能与癌症的存在相关。
或者，也可根据存在能与生物样品中血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白特异性反应的T细胞测定癌症。某些方法中，将分离自病人的含CD4+T或/或CD8+T细胞的生物样品与血液恶性肿瘤相关肿瘤多肽一起培育，检测编码多肽的多核苷酸、和/或表达至少一种多肽的免疫原性部分的APC，及特异性激活的T细胞存在与否。合适的生物样品包括但不限于分离的T细胞。例如可用常规技术(如Ficoll-Hypaque密度梯度离心外周血淋巴细胞)分离病人的T细胞。可体外37℃培养T细胞与多肽(如5-25μg/ml)2-9天(一般4天)。可能需要在缺少血液恶性肿瘤相关肿瘤多肽时培养另一等分T细胞样品作为对照。对于CD4+T细胞，优选通过评价T细胞的增殖来测定其激活。对于CD8+T细胞，优选通过评价细胞毒活性来测定其激活。与无此病患者相比，增殖水平至少高两倍，和/或细胞毒活性至少高20％表明该病人患有癌症。
如上所述也可根据生物样品中编码血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白的mRNA水平来检测癌症。例如可在聚合酶链反应(PCR)测定中采用至少二种寡核苷酸引物来扩增衍生自生物样品的血液恶性肿瘤相关肿瘤cDNA的一部分，其中至少一种寡核苷酸引物对编码血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白的多核苷酸有特异性(即与之杂交)。然后用本领域熟知的技术(如凝胶电泳)分离和检测扩增的cDNA。类似地，可在杂交测定中采用能特异性杂交编码血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白的多核苷酸的寡核苷酸探针，检测生物样品中存在的编码肿瘤蛋白的多核苷酸。
为了能在测定条件下杂交，寡核苷酸引物和探针应含有的寡核苷酸序列应与至少长10个核苷酸，优选至少长20个核苷酸的编码血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白的多核苷酸一部分的同一性至少的60％，优选至少约75％，更优选至少约90％。优选在上述中等严谨条件下，寡核苷酸引物和/或探针与编码所述多肽的多核苷酸杂交。可用于所述诊断方法的寡核苷酸引物和/或探针长度最好至少10-40个核苷酸。一优选实施例中，寡核苷酸引物含本申请书所述序列的DNA分子的至少10个毗连核苷酸，更优选至少15个毗连核苷酸。PCR测定和杂交测定技术是本领域熟知的(见例如Mullis等，Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.51；263，1987；Erlich编《PCR技术》Stockton Press，NY，1989)。一优选测定采用RT-PCR，其中PCR与逆转录相结合。RNA一般提取自生物样品如活检组织并逆转录产生cDNA分子。用至少一个特异性引物作PCR扩增，产生的cDNA分子可分离并用凝胶电泳观察。对取自待测病人和取自非患癌症的个体的生物样品进行扩增。扩增反应可在横跨二个数量级的几种cDNA稀释液中进行。待测病人样品几种稀释液中的表达比非癌性样品的相同稀释度大2倍或以上通常视为阳性。
另一实施例中，上述组合物可用作癌症进展的标志。此实施例中，可随时进行癌症诊断的上述测定，且评价反应性多肽或多核苷酸水平的变化。例如，可在6个月至1年中每隔24-72小时进行一次测定。然后按需要进行。通常这些病人中癌症发展时，检测到的多肽或多核苷酸水平随时间而增加。相反，当反应性多肽或多核苷酸水平保持恒定或随时间而降低时，则癌症没有进展。
某些体内诊断测定可直接在肿瘤上进行。这类试验包括使肿瘤细胞与结合剂接触。然后结合的结合剂可直接检测或通过报道基因间接检测。这类结合剂也可用于组织学。或者，这类应用中可采用多核苷酸探针。
如上所述，为了提高灵敏度，可测定给定样品中的多种血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白标记。显然在一个试验中可联用本文提供的对不同蛋白质特异的结合剂。另外，可同时采用多个引物和探针。可根据常规试验选择肿瘤蛋白标记来确定能导致最佳灵敏度的组合。此外，或者本文提供的肿瘤蛋白的测定可与其它已知肿瘤抗原的测定联合应用。
4.24制备DNA序列
通过基于PCRTM的扣除分离了编码血液恶性肿瘤相关抗原部分的cDNA分子的某些核酸序列。此技术用来规范差异性表达的cDNA，有利于回收罕见的转录物，还具有用小量Poly A RNA材料富集的cDNA和没有多轮杂交的优点。为获得在非霍奇金淋巴瘤中抗原的过度表达，用三个T细胞非霍奇金淋巴瘤mRNA的集合体制备的实验对象文库进行了两次扣除。此两个独自扣除的文库具有驱动cDNA的不同集合体。驱动#1含有从特定的正常组织(淋巴结、骨髓、T细胞、心脏和脑)制备的cDNA，此扣除产生文库TCS-D1(T细胞非霍奇金淋巴瘤扣除文库具有驱动#1)。驱动#2含非特定的正常组织(结肠、大肠、肺、胰、脊髓、骨骼肌、肝、肾、皮肤和脑)，此扣除产生文库TCS-D2(T细胞非霍奇金淋巴瘤扣除文库具有驱动#2)。用三个B细胞非霍奇金淋巴瘤mRNA的集合体制备的实验对象文库进行另二次扣除。此两个独自扣除的文库具有驱动cDNA的不同集合体。驱动#1含有从特定的正常组织(淋巴结、骨髓、B细胞、心脏和脑)，此扣除产生文库BCNHL/D1(B细胞非霍奇金淋巴瘤扣除文库具有驱动#1)。驱动#2含非特定的正常组织(脑，肺，胰，脊髓，骨骼肌，结肠，脾，大肠和PBMC)，此扣除产生文库BCNHL/D2(B细胞非霍奇金淋巴瘤扣除文库具有驱动#2)。从扣除文库产生PCRTM扩增的库，并测序克隆。用各种熟知技术之进一步表征了血液恶性肿瘤相关抗原序列。例如，可将PCRTM扩增的克隆在玻璃载玻片上排成阵列作微阵列分析。为确定组织分布，阵列的克隆可用作靶，与不同的第一链cDNA探针包括淋巴瘤探针、白血病探针和不同正常组织的探针杂交。可从结果差的(常规化疗后不能完全缓解或复发的病人)或结果良好(获得长期缓解的病人)的NHL、何杰金氏病、AML、CML、CLL、ALL、MDS和骨髓瘤病人诊断时获得的冻存样品产生白血病和淋巴瘤探针。为了分析造血细胞分化期间的基因表达，可从衍生自健康个体的CD34+、CD2+、CD14+、CD15+和CD19+的95％以上纯化组分中产生探针。
多核苷酸变体一般可用该领域已知的任何方法制备，包括化学合成如：固相亚磷酰胺化学合成。也可用标准诱变技术如多核苷酸指导的定点诱变，在多核苷酸序列中导入修饰(见Adelman等，DNA 2：183，1983)。或者，可通过DNA序列的体外或体内转录产生RNA分子，只要将DNA掺入具有合适的RNA聚合酶启动子(如T7或SP6)的载体中。某些部分可用于制备上述的编码多肽。此外，或者可将一部分给予病人，这样在体内产生编码多肽(如通过用编码血液恶性肿瘤相关抗原的cDNA构建物转染抗原呈递细胞如树突细胞，并给予该病人此转染细胞)。
与编码序列互补的序列的一部分(即反义多核苷酸)可用作探针，或调节血液恶性肿瘤相关抗原的表达。也可将转录入反义RNA中的cDNA构建物导入细胞或组织中，以促进反义RNA的产生。可用上述反义多核苷酸来抑制血液恶性肿瘤相关抗原的表达。反义技术可通过三股螺旋形成以折衷双螺旋充分打开的能力，用于聚合酶、转录因子或调节分子的结合，从而调控基因表达(见Gee等，Huber and Carr，《分子和免疫方法》，Futura Pulishing Co.(Mt.Kisco，NY；1994)。或者可设计能与基因的控制区(如启动子、增强子、转录起始位点)杂交的反义分子，并阻断基因的转录，或通过抑制转录物与核糖体的结合来阻断翻译。也可设计编码序列的一部分或互补序列的一部分作为探针或引物来检测基因表达。可用各种报导基团如放射性核素和酶来标记探针，探针优选至少长10个核苷酸，更优选至少长20个核苷酸，最优选至少长30个核苷酸。如上所述引物优选长22-30个核苷酸。还可修饰任何多核苷酸提高其体内稳定性。可能的修饰包括但不限于在5’和/或3’末端加入侧翼序列；主链中采用硫代磷酸或2’-O-甲基而不是磷酸二酯酶键；和/或加入非传统碱基如肌苷，queosine和Wybutosine以及腺嘌呤、胞苷、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和尿苷的乙酰基、甲基、硫代和其他修饰形式。
可用已建立的重组DNA技术将血液恶性肿瘤相关抗原的多核苷酸连接于各种其他核苷酸序列。例如，可将多核苷酸克隆入各种克隆载体中，包括质粒、噬菌粒，λ噬菌体衍生物和粘粒。特别感兴趣的载体包括表达载体、复制载体、探针产生载体和测序载体。一般说，载体含有能在至少一种生物中有功能的复制起点、方便的限制性内切核酸酶位点和一个或多个可选择标记。其它元件取决于所需用途，这是该领域普遍技术人员显而易见的。
某些实施例中，可制备多核苷酸使其能进入哺乳动物细胞中并在其中表达。如下所述，这类制剂对于治疗特别有用。本领域普通技术人员知道有许多方法可实现多核苷酸在靶细胞中的表达，并可采用任何合适的方法。例如，可将多核苷酸掺入病毒载体(但不限于腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、痘苗病毒或其他痘病毒如禽痘病毒)。将DNA掺入这类载体的技术是本领域普通技术人员熟知的。逆转录病毒还可转移或掺入可选择标记的基因(有助于鉴定或选择转导细胞)，和/或靶向组成成分，如编码特异性靶细胞上受体的配体的基因赋予该载体靶向特异性。也可用该领域普通技术人员已知方法利用抗体来实现靶向。
其它治疗制剂包括胶体分散系统如大分子复合物、纳米胶囊、微球体、珠和基于脂质的系统包括水包油乳液、胶团、混合胶团和脂质体。用于体内和体外输送载体的优选胶体系统是脂质体(即人工膜载体)。这些系统的制备和使用是本领域熟知的。
4.25治疗方法
本发明其他方面，上述组合物可用于免疫治疗血液恶性肿瘤，包括成人和儿童AML、CML、ALL、CLL、骨髓增生异常综合症(MDS)、骨髓增生综合征(MPS)、继发性白血病、多发性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。此外，所述组合物可用于治疗与对造血前体细胞自身免疫应答相关的疾病如严重再生障碍性贫血。
免疫治疗可采各种技术进行，其中提供的化合物或细胞可发挥功能去除病人中的血液恶性肿瘤相关抗原表达细胞。发生这种去除的结果是增强或诱导了对血液恶性肿瘤相关抗原特异的病人中的免疫应答，或表达血液恶性肿瘤相关抗原的细胞。或可在活体内去除血液恶性肿瘤相关抗原表达细胞(如通过对自身骨髓、外周血、或骨髓或外周血组分的处理)。可用本领域的标准技术获得骨髓或外周血组分。
这些方法中，通常可给予患者药物组合物和疫苗。“患者”本文用于指任何温血动物，优选人。患者可以患有或不患有血液恶性肿瘤。因此，上述药物组合物和疫苗可用于预防恶性肿瘤的发生或治疗恶性肿瘤患者。可用本领域普遍接受的标准诊断血液恶性肿瘤。可在手术切除原发性肿瘤和/或给予放疗或常规化疗药物或骨髓移植(自身、同种异体或同系)之前或之后给予药物组合物和疫苗。
某些实施例中，免疫治疗可以是主动免疫治疗，这种治疗依赖给予免疫应答修饰剂(如本文所述多肽或多核苷酸)体内刺激宿主内源性免疫系统产生抗肿瘤反应。
其它实施例中，免疫治疗可以是被动免疫治疗，这种治疗包括输送已建立抗肿瘤免疫反应性的制剂(如效应细胞或抗体)可直接或间接介导抗肿瘤作用，而不需要依赖完整的宿主免疫系统。效应细胞的例子包括上述表达本文所述多肽的T细胞、T淋巴细胞(如CD8+T细胞毒T淋巴细胞和CD4+T辅助肿瘤浸润淋巴细胞)、杀伤细胞(如天然杀伤细胞和淋巴因子激活的杀伤细胞)、B细胞和抗原呈递细胞(如树突细胞和巨噬细胞)。可将地上述多肽特异的T细胞受体和抗体受体克隆表达，转移入用于过继免疫治疗的其它载体或效应细胞中。也可用上述多肽来产生用于被动免疫治疗的抗体或抗独特型抗体(见上述和美国专利4,918,164)。
用于过继免疫治疗的效应细胞可如上所述通过体外生长以足够数量获得。本领域熟知将一个抗原特异性效应细胞体内扩增至几十亿数量并保留抗原识别的培养条件。体外培养条件通常在细胞因子(如IL-2)和非分裂饲养细胞存在的条件下采用抗原间歇刺激。如上所述，本文所述免疫反应性多肽可用于快速扩增抗原特异性T细胞培养物，以产生充分数量的细胞用于免疫治疗。特别是，可用本领域熟知的标准技术，以免疫反应性多肽脉冲刺激或用一种或多种多核苷酸转染抗原呈递细胞如树突细胞、巨噬细胞或B细胞。例如，可用具有适合于提高重组病毒或其它表达系统中表达的启动子的多核苷酸转染抗原呈递细胞。培养的治疗用效应细胞必须能在体内生长并广泛分布和长期存活。研究表明，用补充了IL-2的抗原反复制刺激可诱导培养的效应细胞在体内大量生长和长期存活(见例如Cheever等，Immnnol.Rev.157：177，1997)。
或者，可将表达上述多肽的载体导入病人的抗原呈递细胞在活体外克隆增殖后用于移植回同一病人。可采用本领域已知的方法将转染的细胞再导入病人中，优选以无菌形式通过静脉内，腔内，腹膜内或肿瘤内给药。
本文提供的组合物可单独使用或与常规治疗方案如手术、照射、化疗或骨髓移植(自身、同系、同种异体或无关的)联合。如以下更详细说明，本文提供的结合剂和T细胞可用于净化自身干细胞。这种净化(purging)在骨髓移植、输血或血液组分前可能有益处。本文所述的结合制剂-T细胞、抗原递呈细胞(APC)和组合物还可用于体外和/或体内扩增和刺激(或致敏)自身、同种异体、同系或无关的血液恶性肿瘤相关抗原特异性T细胞。这些血液恶性肿瘤相关抗原特异性T细胞可用于供者淋巴细胞输注。
给予本文所述治疗组合物的途径和次数以及剂量随个体之间而异，易于用标准技术确定。一般可通过注射(如皮内、肌肉内、静脉内或皮下)，鼻内(如吸入)或口服给予。优选药物组合物和疫苗在52周期间给药1-10个剂量。优选间隔1个月给予6个剂量，然后可定期给予加强免疫接种。其它方案也适合各个病人。合适的剂量是如上给予后能促进抗肿瘤免疫应答并超过基础水平(即未治疗)至少10-50％的量。免疫应答可通过测定病人中的抗肿瘤抗体，或依赖疫苗产生的能体外杀伤病人肿瘤细胞的细胞毒效应细胞来监测。此种疫苗也应能引起免疫应答导致接种疫苗病人比未接种疫苗病人的临床结果改善(如更常见缓解、完全或部分缓解或较长时间的无病存活)。总之，药物组合物和疫苗含有一种或多种多肽，一个剂量中各多肽的量为每公斤宿主约100μg-5mg范围。合适的剂量范围因病人的体重而不同，但通常为约0.1ml-5ml范围。
一般适合的剂量和治疗方案可提供充足量的活性化合物以获得治疗和/或预防效果。治疗病人与未治疗病人相比，可通过确定改善临床结果(如更常见缓解、完全或部分缓解或较长时间的无病存活)来监测免疫应答。先前存在的对血液恶性肿瘤相关肿瘤抗原的免疫应答得到提高，通常与改善的临床结果相关联。一般可用获自治疗前后病人的样品，以标准增殖、细胞毒性或细胞因子测定，来评价此种免疫应答。其它方面，抑制与血液恶性肿瘤相关抗原表达有关的恶性疾病发生的方法，包括给予自身T细胞，此种T细胞在对上述血液恶性肿瘤相关抗原多肽或血液恶性肿瘤相关抗原表达的APC的反应中已被激活。这种T细胞可以是CD4+和/或CD8+，可如上所述增殖。将这种T细胞给予患者的量应能有效抑制恶性疾病的发生。通常为约1×109-1×1011个T细胞/平方米，静脉内、腔内或肿瘤切除床内给药。该领域技术人员懂得给予的细胞数和次数取决于病人的反应。
某些实施例中，可在自身骨髓移植前刺激T细胞。可在体内或体外进行此种刺激。对于体外刺激，可在足以剌激T细胞的上述条件和时间下使病人的骨髓和/或外周血(或骨髓或外周血组分)与血液恶性肿瘤相关抗原多肽、编码该抗原多肽的多核苷酸和/或表达该抗原多肽的APC接触。然后可用标准技术给予病人骨髓、外周血干细胞和/或血液恶性肿瘤相关抗原特异性T细胞。
在有关实施例中，可在同系或同种异体(相关或无关)骨髓移植前刺激相关或无关供者的T细胞。可在体内或体外进行这种刺激。对于体外剌激，可在足以剌激上述T细胞的条件和时间下，使获自相关或无关供者的骨髓和/或外周血(或骨髓或外周血的组分)与血液恶性肿瘤相关抗原多肽、血液恶性肿瘤相关抗原多核苷酸和/或表达该抗原多肽的APC接触。然后可用标准技术给予病人骨髓、外周血干细胞和/或血液恶性肿瘤相关抗原特异性T细胞。
在其它实施例中，上述血液恶性肿瘤相关抗原特异性T细胞、抗体或及抗原结合片段可用于从生物样品中去除表达血液恶性肿瘤相关抗原的细胞，如自身骨髓外周血(PB)，或骨髓或外周血的组分(如在给予病人前富集CD34+细胞的外周血)。可在足以降低血液恶性肿瘤相关抗原表达细胞至骨髓或外周中骨髓或淋巴细胞总数10％以下，优选5％以下，更优选1％以下的条件和时间下，使生物样品与这类T细胞、抗体或抗体片段接触。可采用标准技术使抗体结合于层析柱来实现这种接触。抗原表达细胞保留在柱上。除去这类细胞的程度易用标准方法，如定性和定量PCR分析、形态学、免疫组化和FACS分析进行测定。然后可用标准技术给予病人骨髓或PB(或其组分)。
4.26诊断方法
通常可根据获自病人的生物样品(如血、血清、痰、尿和/或肿瘤活检)中存在的血液恶性肿瘤相关抗原和/或多核苷酸检测病人中的血液恶性肿瘤。换句话说，血液恶性肿瘤相关抗原可用作表明是否存在此恶性肿瘤的标志。本发明提供的结合剂通常能检测生物样品中结合该试剂的抗原水平。可利用多核苷酸引物和探针来检测编码血液恶性肿瘤相关抗原的mRNA水平，这也是血液恶性肿瘤存在与否的标志。通常获自患血液恶性肿瘤病人的样品中血液恶性肿瘤相关抗原的水平，应比获自未患此病个体样品中水平至少高3倍。
本该领域普通技术人员已知有多种测定采用结合剂来检测样品中的多肽标记。见例如Harlow和Lane《抗体：实验室手册》，Cold Spring Harbor Laboratory，1988。通常病人中是否存在血液恶性肿瘤可通过(a)使病人的生物样品与结合剂接触；(b)检测样品中结合该结合剂的多肽水平；和(c)将多肽水平与预定的截取值比较来测定。
一优选实施例中，测定涉及利用固定在一固相支持体上的结合剂来结合样品中的多肽和去除其余成分。然后用含有报导基团和特异性结合该结合剂/多肽复合物的检测试剂检测结合的多肽。这类检测试剂可包括特异性结合多肽或抗体的结合剂，或其它特异性结合该结合剂的试剂，如抗免疫球蛋白、蛋白G、蛋白A或凝集素。或者可用竞争测定，此测定中用一报导基团标记多肽，培育结合剂和样品后，使标记报导基团的多肽与固定的结合剂结合。样品中的成分抑制该标记多肽与结合剂的结合程度，反映了样品与固定的结合剂的反应性。在这类测定中使用的合适的多肽包括上述与结合剂结合的全长血液恶性肿瘤相关肽抗原及其部分。
血液恶性相关抗原多肽可附着的固相支持体是本领域普通技术已知的任何材料。例如，固相支持体可以是微量滴定板中的测试孔、或硝酸纤维素或其它合适的膜。或者，支持体可以是珠或圆片，如玻璃、玻璃纤维、乳胶或塑料如聚丙乙烯或聚氯乙烯。支持体也可以是上述磁性颗粒或光纤传感器，例如见美国专利5,359,681。结合剂可用该领域技术人员已知专利和科学文献上详细描述的各种技术固定在固相支持体上。本发明内容中，术语“固定”指非共价缔合(如吸附)和共价结合(可以是试剂和支持体上的功能基团之间直接连接或借助交联剂连接)。优选通过吸附于微量滴定板的孔或膜上的固定。此类情况下，可使用合适缓冲液配的结合剂与固相支持体接触适当时间获得吸附。接触时间随温度而异，但通常约1小时和约1天。一般与塑料微量滴定板的孔接触的结合剂量约10ng-10μg，优选100ng-1μg，能充分固定足够量的结合剂。
结合剂与固相支持体共价结合的实现，一般可先使该支持体与双功能试剂反应，该双功能试剂可与支持体和结合剂上的功能基因如羟基或氨基反应。例如，所述结合剂可共价结合于具有用苯醌包被的适当聚合物的支持体上，或通过支持体上的醛基与结合伙伴上的胺基和活化氢缩合(见Pierce《免疫技术样本和手册》，1991，A12-13)。
某些实施例中，测定是双抗体夹心测定。进行该测定可先使固定在固相支持体(通常是微量滴定板的孔)上的抗体与样品接触，使样品中的多肽结合于固定的抗体。然后从固定的多肽-抗体复合物中洗去未结合样品，加入含报导基团的检测试剂(优选能结合多肽上不同位点的第二抗体)。然后用适合于特异性报导基团的方法，测定仍结合于固相支持体的检测试剂的量。
更具体地说，一旦抗体被固定于上述支持体上，通常封闭该支持体上的剩余蛋白结合位点。合适的封闭剂是本领域普通技术人员已知的，如牛血清白蛋白或Tween20TM(Sigma Chemical Co.St.Louis，MO)。然后，一起培育固定化抗体和样品，使多肽结合于该抗体。培育前可用合适的稀释液如磷酸缓冲液(PBS)稀释样品。一般，适当的接触时间(即培育时间)是足以检测到获自血液恶性肿瘤患者样品中多肽存在的时间。优选的接触时间是获得的结合水平足以达到结合和非结合多肽之间平衡时至少约95％。本领域普通技术人员知道，不难通过测定该时间段出现的结合水平来确定实现平衡所需的时间。通常室温下培育时间约30分钟是足够的。
可用适当的缓冲液如含0.1％Tween20TM的PBS洗去固相支持体上未结合的样品。然后将含报导基团的第二抗体加到固相支持体上。优选的报导基团包括上述基团。
然后，将检测试剂与固定的抗体-多肽复合物培育足够时间以检测结合的多肽。适当的时间通常可通过测定该时间段出现的结合水平来确定。然后洗去未结合的检测试剂，并利用报导基团检测结合的检测试剂。用于检测报导基团的方法取决于该报导基团的性质对于放射性基团，通常适合用闪烁计数或放射自显影方法。可用分光光度法检测染料、发光基团和荧光基团。偶联于不同报导基团(通常为放射性或荧光基团或酶)的生物素可用亲和素检测。一般可加入底物(通常用于特定时间段)然后用分光光度或反应产物的其它分析，来检测酶报导基团。
为确定是否存在血液恶性肿瘤，通常将检测到的仍结合于固相支持体的报导基团的信号，与相应于预定的截断值信号作比较。一优选实施例中，测定血液恶性肿瘤的截断值是固定化抗体与非恶性肿瘤患者样品培育时获得的信号平均值。一般，样品产生的信号高于预定截断值三个标准偏差即认为恶性肿瘤阳性。另一优选实施例中，按Sackett等，《临床流行病学：临床医学的基础科学》，Little Brow and Co.，1985，106-7页的方法，用接受手术者曲线测定此截断值。简言之，此实施例中，可从真阳性率(即灵敏度)和假阳性率(100％特异性)配对的曲线来确定此截留值，其对应于诊断试验结果的每种可能截断值。该曲线上最靠近左手上角处的截断值(即围住最大区域的值)是最精确的截断值，能产生高于此法所测定的截断值的信号的样品被认为是阳性。或者，可将截断值沿曲线向左移动以最低程度地减少假阳性率，或向右移动以最低限度地减少假阴性率。通常，能产生高于此法所测定的截断值的信号的样品被认为是恶性肿瘤阳性。
一相关实施例中，以流通或测试条方式进行测定，其中结合剂被固定在一种膜如硝酸纤维素。流通方式试验中，样品中的多肽随样品流过膜时结合于已固定的结合剂。然后标记的第二结合剂在含第二结合剂的溶液流过该膜时，结合于结合剂-多肽复合物。然后如上所述检测结合的第二结合剂。测试条方式中，将结合剂所结合的膜的一端浸在含样品的溶液中。样品沿着膜移动，通过含第二结合剂的区域，进入固定结合剂的区域，固定抗体区域中聚集的第二结合剂表明有癌症存在。通常，该部位聚集的第二结合剂产生一种模式，如可用肉眼观察看的线条。缺乏此模式表示阴性结果。一般在上述形式的双抗体夹心测定中，当生物样品含有的多肽水平足以产生阳性信号时，选择固定于膜上的结合剂的量以产生肉眼可辨别的模式。这类测定所用的结合剂优选抗体和其抗原结合片段。固定在膜上的抗体量优选约25ng-1μg，更优选约50ng-500ng。这类试验一般用很少量的生物样品进行。
当然，现有的许多其它测定方案也适合采用本发明的血液恶性肿瘤相关抗原序列或结合剂。以上所述仅是示范性的。例如本领域普通技术人员懂得，易对上述方案进行改进而采用血液恶性肿瘤相关抗原多肽来检测与生物样品中此类多肽结合的抗体。血液恶性肿瘤相关抗原的特异性抗体的检测可能存在癌症相关。
或者，恶性肿瘤也可根据存在与生物样品中血液恶性肿瘤相关抗原特异性反应的T细胞来测定。某些方法中，将分离自病人的含CD4+T或/或CD8+T细胞的生物样品与血液恶性肿瘤相关抗原多肽一起培育，检测编码这类多肽的多核苷酸、和/或表达这类多肽的APC，及特异性激活的T细胞的存在与否。合适的生物样品包括但不限于分离的T细胞。例如，可用常规技术(如Ficoll-Hypaque密度梯度离心外周血淋巴细胞)从病人中分离T细胞。可体外37℃培养T细胞与Mtb-81或Mtb-67.2多肽(如5-25μg/ml)2-9天(一般4天)。可能需要在缺少血液恶性肿瘤相关抗原多肽时培养另一等分的T细胞样品作为对照。对于CD4+T细胞，优选通过评价T细胞的增殖来测定其激活。对于CD8+T细胞，优选通过评价细胞毒活性来测定其激活。与无此病患者相比，增殖水平至少高两倍，和/或细胞毒活性至少高20％，表明该病人患血液恶性肿瘤。
如上所述，血液恶性肿瘤也可根据生物样品中编码血液恶性肿瘤相关抗原的mRNA水平来检测。例如，可在聚合酶链反应(PCR)测定中采用至少二种寡核苷酸引物来扩增生物样品中血液恶性疾病相关抗原cDNA的一部分，其中至少一种寡核苷酸引物对编码血液恶性肿瘤相关抗原蛋白的多核苷酸有特异性(即与之杂交)。然后用本领域熟知的技术(如凝胶电泳)分离和检测扩增的cDNA。相似地，可在杂交测定中采用特异性杂交编码血液恶性肿瘤相关抗原的多核苷酸的寡核苷酸探针，检测生物样品中存在的编码血液恶性肿瘤相关抗原的多核苷酸。
为了能在测定条件下杂交，寡核苷酸引物和探针应包含的寡核苷酸序列与至少长10个核苷酸，优选至少长20个核苷酸的编码血液恶性肿瘤相关抗原的多核苷酸一部分有至少60％，优选至少约75％，更优选至少约90％同一性。优选在上述中等严谨条件下，寡核苷酸引物和/或探针与编码所述多肽的多核苷酸杂交。可用于上述诊断方法的寡核苷酸引物和/或探针优选至少10-40个核苷酸。PCR测定和杂交测定技术是本领域熟知的(见例如Mullis等，Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.51：263，1987；Erlich编，《PCR技术》，Stockton Press，NY.1989)。
一优选测定采用RT-PCR，其中PCR应用与逆转录相结合。一般从生物样品如活检中提取RNA并逆转录产生cDNA分子。用至少一个特异性引物作PCR扩增，产生的cDNA分子可分离并用凝胶电泳观察。对取自待测病人和取自未患血液恶性肿瘤个体的生物样品进行扩增。扩增反应可在横跨二个数量级的几种cDNA稀释液中进行。待检病人样品的几种稀释液中的表达比正常个体样品的相同稀释度大2倍或以上通常视为阳性。
优选实施例中，采用富含能表达感兴趣血液恶性肿瘤相关抗原的细胞的样品进行此类测定。这种富集可用例如本文提供的结合剂从生物样品的剩余部分去除细胞。然后测定去除的细胞。
其它实施例中，血液恶性肿瘤相关抗原可用作监测疾病进展或对血液恶性肿瘤治疗反应的标志。此实施例中，可随时进行上述测定来诊断血液恶性肿瘤，评价反应性多肽水平的变化。例如，可每隔24-72小时进行一次测定，持续6个月至1年，然后按需要进行。通常此种病人中恶性肿瘤发展时，结合剂检测到的多肽水平随时间而增加。相反，当反应性多肽水平保持恒定或随时间而降低时，恶性肿瘤没有进展。
某些体内诊断测定可直接在肿瘤上进行。一种此类试验涉及使肿瘤细胞与结合剂接触。然后可直接或通过报告基团间接测定结合的结合剂。此类结合剂也可用于组织学。另外，此类应用中可采用多核苷酸探针。
如上所述，为了提高灵敏度，可测定给定样品中的多种标志。显然在一试验中可联用对本文提供的对不同蛋白质特异的结合剂。此外，可同时采用多个引物或探针。标志物的选择可根据常规实验确定能导致最佳灵敏度的组合。
其它诊断应用包括检测髓外疾病(如白血病中胚细胞的脑内浸润)。此类方法中，可将结合剂与一示踪物质偶联，并用熟知的技术在体内进行诊断。可如上所述给予偶联的结合剂，并根据测定示踪物质的存在检测髓外疾病。或者，示踪物质可与对血液恶性肿瘤相关抗原特异的T细胞结合，根据测定该示踪物质的定位检测髓外疾病。
4.27示范性定义
本发明中，核酸序列包括但不限于DNA(包括但不限于基因组或基因组外DNA)、基因、肽核酸(PNA)、RNA(包括但不限于rRNA，mRNA和tRNA)、核苷和合适的核酸片断不论获自天然来源、化学合成、修饰的还是全部或部分用人工制备的。
除非另有定义，本文所用的所有技术和科学术语具有的含义与本发明所属领域普通技术人员共同理解的相同。虽然也可采用与上述相似或相等的方法和组合物来实施或检验本发明。但本文所述的是优选的方法和组合物。为说明本发明以下术语定义如下：
一个、一种：按照长期存在的专利法惯例，单词“一个”和“一种”本申请书和权利要求书中用于指“一个或多个”、“一种或多种”。
表达：多核苷酸如结构基因经历胞内加工过程的组合，包括转录和翻译以合成编码的肽或多肽。
启动子：一般用于描述调节转录的核酸区域或序列的术语。
调控元件：一般用于描述调节转录的核酸区域或序列的术语。
结构基因：一种表达以产生编码的肽或多肽的基因或序列区域。
转化：将外源多核苷酸序列(如载体、重组DNA或RNA分子)导入宿主细胞或原生质中，其中外源核酸片断掺入至少一个第一染色体中，或在转化的宿主细胞内能自身复制。转染、电穿孔和裸核酸摄取都是用一种或多种多核苷酸转化宿主细胞的技术的代表性例子。
转化细胞：由于细胞中导入了一种或多种外源性多核苷酸因而其核酸补体，已改变的宿主细胞。
转基因细胞：任何细胞衍生或再生自转化细胞，或衍生自转基因细胞或来自转化宿主细胞产生的子代或后代。
转基因动物：衍生自转化动物细胞的动物或其产生的子代或后代，其中动物的DNA含有同种的天然、野生型、非转基因动物中原先不存在的导入的外源核酸分子。术语“转基因动物”和“转化动物”本领域有时作为同义词使用，指其基因组成经修饰而含有一种或多种外源性核酸片段的动物。
载体：一种核酸分子。通常含有能在宿主细胞中复制的和/或与另一核酸区段操作性连接以致附着区段引起复制的DNA。质粒、粘粒或病毒是示范性的载体。
本文所用术语“基本上相应于”、“基本上同源”或“基本上同一”指核酸或氨基酸序列的特征，其中所选核酸或氨基酸序列与所选参比核酸或氨基酸序列相比，至少有约70％或约75％序列同一性。更具体说，所选序列和参比序列至少有约76，77，78，79，80，81，82，83，84或甚至85％的序列同一性，和更优选至少有约86，87，88，89，90，91，92，93，94或95％的序列同一性。更优选高度同源序列在所选序列和参比序列之间的序列同一性大于至少约96，97，98或99％。序列同一性百分比可根据比较序列的全长计算，或可排除总数不到所选参比序列的约25％的小量缺失或添加。参比序列可以是一亚组较大的序列，如基因的一部分或侧翼序列或染色体的重复部分。然而，就两种或多种多核苷酸序列的序列同源性而言，参比序列通常含有至少约18-25个核苷酸，更通常含约26-35个核苷酸，甚至更通常含至少约40、50、60、70、80、90或甚至100个以上核苷酸。理想地需要高度同源片断，二序列之间同一性百分率应至少约80％，优选至少约85％，更优选至少约90％或95％或更高。这不难用本领域技术人员熟知的一种或多种序列比较算法测定，如Pearson和Lipman(1988)所述的FASTA程序分析。
术语“天然产生的”本文用于指某物质可在自然中找到。例如，生物体(包括病毒)中存在的多肽或多核苷酸序列可从天然来源中分离得到而不是在实验室中经人工有意修饰产生的，这就是天然产生的。如本文所用的实验啮齿类动物品系是按经典遗传学选择性饲养的，可认为是天然产生的动物。
本文所用的“异源性”是与预定的参比基因序列有关而定义的。例如就结构基因序列而言，异源性启动子定义为，靠近参比的结构基因不天然产生但经实验实操作而定位的启动子。同样，异源性基因或核酸区段定义为，靠近参比的启动子和/或增强子元件不天然产生的基因或区段。
“转录调控元件”指单独或与一个或多个其他核酸序列联合能激活转录的多核苷酸序列。转录调控元件例如可包括一个或多个启动子、一个或多个反应元件、一个或多个负调控元件和/或一个或多个增强子。
“转录因子识别位点”和“转录因子结合位点”本文用于指一种多核苷酸序列或序列基序，其鉴定为一种或多种转录因子的序列特异性相互作用的位点，通常采取直接的蛋白质-DNA结合形式。通常可通过DNA足迹法、凝胶迁移率变动分析等鉴定转录因子结合位点，或可根据已知的共有序列基序或本领域技术人员已知的其它方法预测。
术语“操作性连接”本文用于指两个或多个多核苷酸或两个或多个核酸序列以功能关系连接。当将核酸置于与另一核酸序列功能相关的位置上时，即为该核酸“操作性连接”。例如启动子或增强子操作性连接于编码序列，它就影响编码序列的转录。操作性连接意味着DNA序列通常是毗连连接的，需要将两种蛋白编码区毗连连接和在读框内连接。然而，因为与启动子分隔数千个碱基时增强子也能发挥功能，所以内含子序列可有不同长度，一些多核苷酸元件可操作性连接而非毗连。
“转录单元”指一种多核苷酸序列，其含有至少第一个结构基因(该结构基因操作性连接于至少第一个顺式作用启动子序列，并任选地操作性连接于该结构基因序列的有效转录所必需的一个或多个其它顺式作用核酸序列)，和至少一个该结构基因序列的适当的组织特异性和发育性转录所需的第一个远端调控元件，此结构基因序列操作性位于该启动子和/或增强子元件以及有效转录和翻译所需的其它顺式序列(如聚腺苷酸化位点，mRNA稳定性控制序列等)的控制下。
如上所述，本发明一般涉及治疗和诊断癌症如血液恶性肿瘤的组合物和使用该组合物的方法。本文所述的某些说明性组合物包括血液恶性肿瘤相关肿瘤多肽、编码这类多肽的多核苷酸、结合剂如抗体、抗原呈递细胞(APC)和/或免疫系统细胞(如T细胞)。“血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白”本文用于指在血液恶性肿瘤相关肿瘤细胞中表达的蛋白质，其表达水平用本文提供的代表性试验测定，比正常组织中的表达水平至少高2倍，优选至少高5倍。某些血液恶性肿瘤相关肿瘤蛋白是能与血液恶性肿瘤患者的抗血清起可检测反应(如ELISA或Western印迹等免疫测定)的肿瘤蛋白。
4.28生物功能等价物
可在本发明的多核苷酸和肽的结构中进行修饰和改变，仍可获得编码具有所需特征的功能性分子，或仍能获得具有所需表达特异性和/或性能的遗传构建物。因为通常需要在特定多核苷酸序列中导入一个或多个突变。在多核苷酸或肽序列中导入突变的各种方法是本领域技术人员已知的，可用于制备异源性序列并将该异源性序列导入所选的细胞或动物中。某些情况下，此种突变改变了所得的编码的肽序列，或其它情况下，编码的多核苷酸中一个或多个突变不会改变肽的序列。其它情况下，在多核苷酸构建物的启动子区和/或增强子区中导入一个或多个变化，以改变表达元件的活性或特异性，从而改变操作性位于元件控制下的异源性治疗核酸区段的表达。
当需要改变由表达构建物编码的一个或多个异源性肽的氨基酸序列以产生等价物，或甚至产生改进的第二代分子时，可按表1所列，通过改变该编码DNA序列的一个或多个密码子实现氨基酸改变。
例如，蛋白质结构中某些氨基酸可被其它氨基酸取代而不会明显失去与抗体的抗原结合区，或底物分子上的结合位点等结构相互结合的能力。因为正是蛋白质的这种相互作用能力和性质确定了该蛋白质的生物功能活性。可在蛋白质序列中进行某些氨基酸序列的替代，当然其基础是DNA编码序列，从而获得性能相似的蛋白质。本发明人设想可在上述组合物的肽序列中或编码所述肽的相应DNA序列中，进行各种改变而不会明显失去其生物学用途或活性。
                         表1
         氨基酸              密码子
丙氨酸    Ala    A      GCA GCC GCG GCU
半胱氨酸  Cys    C      UGC UGU
天冬氨酸  Asp    D      GAC GAU
谷氨酸    Glu    E      GAA GAG
苯丙氨酸  Phe    F      UUC UUU
甘氨酸    Gly    G      GGA GGC GGG GGU
组氨酸    His    H      CAC CAU
异亮氨酸  Ile    I      AUA AUC AUU
赖氨酸    Lys    K      AAA AAG
亮氨酸    Leu    L      UUA UUG CUA CUC CUG CUU
甲硫氨酸  Met    M      AUG
天冬酰胺  Asn    N      AAC AAU
脯氨酸    Pro    P      CCA CCC CCG CCU
谷氨酰胺  Gln    Q      CAA CAG
精氨酸    Arg    R      AGA AGG CGA CGC CGG CGU
丝氨酸    Ser    S      AGC AGU UCA UCC UCG UCU
苏氨酸    Thr    T      ACA ACC ACG ACU
缬氨酸    Val    V      GUA GUC GUG GUU
色氨酸    Trp    W      UGG
酪氨酸    Tyr    Y      UAC UAU
进行这些改变可考虑氨基酸的亲水性指数。氨基酸亲水性指数在赋予蛋白质相互作用的生物功能中的重要性是本领域通常了解的(Kyte和Doolitte，1982，纳入本文作参考献)。众所接受的是氨基酸的相对亲水性有助于所得蛋白质的二级结构，进而确定了蛋白质与其它分子如酶、底物、受体、DNA、抗体、抗原等的相互作用。根据氨基酸的疏水性和电荷特征排定各氨基酸的亲水性指数是：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)和精氨酸(-4.5)。
本领域知道某些氨基酸可被具有类似亲水性指数或评分的其它氨基酸替代，仍导致蛋白质具有相似的生物活性，即仍获得生物功能相等的蛋白质。进行这种变化中，替代的氨基酸的亲水性指数优选在±2内，特别优选在±1内，更加特别优选在±0.5内。本领域还知道可根据亲水性进行同类氨基酸的替代。美国专利4,554,101(纳入本文作参考)阐述了蛋白质的最大局部平均亲水性受其毗连氨基酸的亲水性的控制，与该蛋白质的生物性能相关。
如美国专利4,554,101所详述，氨基酸的亲水性值排列如下：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5±1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。已知道氨基酸可被具有相似亲水性值的另一氨基酸替代且仍可获得生物等价物，具体是免疫等价蛋白质。这些变化中，替代的氨基酸的亲水性值优选在±2内，特别优选在±1，更加特别优选在±0.5内。
如上所述，氨基酸取替通常是根据氨基酸侧链取代基的相对相似性例如其疏水性、亲水性、电荷、大小等。考虑到上述几种特征的示范性取替是本领域技术人员熟知的，包括精氨酸和赖氨酸；天冬氨酸和谷氨酸；丝氨酸和苏氨酸；天冬酰胺和谷氨酰胺；缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。
5.实施例
以下实施例显示了本发明的优选实施例。然而本领域技术人员应知道，根据本文公开内容，可对这些公开的具体实施例进行许多改变仍可获得相似和类似结果而不背离附加权利要求书中所述的本发明的精神和范围。
5.1实施例1—血液恶性肿瘤相关抗原多核苷酸的鉴定
此实施例说明非霍奇金淋巴瘤的血液恶性肿瘤相关抗原多核苷酸的鉴定。
通过PCR扣除法分离得到血液恶性肿瘤相关抗原多核苷酸。从T细胞非霍奇金淋巴瘤、B细胞非霍奇金淋巴瘤和和正常组织制备多聚A mRNA。构建了6个cDNA文库，进行PCR扣除和分析。用3个T细胞非霍奇金淋巴瘤mRNA的集合体构建了二个文(本文称为TCS文库)。用3个B细胞非霍奇金淋巴瘤mRNA的集合体构建了其它二个文库(本文称为BCNHL文库)。用2个T细胞霍奇金淋巴瘤mRNA的集合体构建了其它二个文库(本文称为HLS文库)。按Clontech的用户手册(PCR-Select cDNA扣除)进行了cDNA合成、杂交和PCR扩增，改变如下：1)用包括Mscl，Pvull，Stul，和Dral的酶混合物代替单一酶RsaI限制性消化cDNA；2)杂交步骤中提高驱动和测试cDNA的比率(至76∶1)以产生更严谨的扣除。
用驱动cDNA的不同集合体单独扣除二个TCS文库。驱动#1含从特定正常组织(淋巴节、骨髓、T细胞、心脏和脑)制备的cDNA，此扣除产生文库TCS-D1(T细胞非霍奇金淋巴瘤扣除文库具有驱动#1)。驱动#2含非特定的正常组织(结肠、大肠、肺、胰、脊髓、骨骼肌、肝、肾、皮肤和脑)，此扣除产生文库TCS-D2(T细胞非霍奇金淋巴瘤扣除文库具有驱动#2)。
类似地，用驱动cDNA的不同集合体单独扣除二个BCNHL文库。驱动#1含从特定的正常组织(淋巴节、骨髓、T细胞、心脏和脑)制备的cDNA，此扣除产生文库BCNHL/D1(B细胞非霍奇金淋巴瘤扣除文库具有驱动#1)。驱动#2含非特定的正常组织(脑、肺、胰、脊髓、骨骼肌、结肠、脾、大肠和PBMC)，此扣除产生文库BCNHL/D2(B细胞非霍奇金淋巴瘤扣除文库具有驱动#2)。
用驱动cDNA的不同集合体单独扣除二个HLS文库。驱动#1含从特定的正常组织(淋巴节、骨髓、B细胞和肺)制备的cDNA，此扣除产生文库HLS-D1(霍奇金淋巴瘤扣除文库具有驱动#1)。驱动#2含非特定的正常组织(结肠、大肠、肺、胰、脊髓、骨骼肌、肝、肾、皮肤和脑)，此扣除产生文库HLS-D2(霍奇金淋巴瘤扣除文库具有驱动#2)。
为了分析此扣除的效果，PCR扩增扣除及不扣除PCR样品稀释液中的肌动蛋白(管家基因)。此外，通过测定各PCR扣除文库(TCS-D1、TCS-D2、BCNHL/D1、BCNHL/D2、HLS-D1、HLS-D2)的96个克隆的序列，表征了各文库的复杂性和丰余性。这些分析表明文库富含白血病组织中，特别是T细胞和B细胞非霍奇金淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤样品中过度表达的基因。
PCR扩增后，将cDNA克隆入pCR2.1-TOPO质粒载体(Invitrogen)中。
从这些分析中获得的序列用BLAST2.0释放法检索公共可利用的数据库中的已知序列。BLAST默认参数如下：间隙参数：开放间隙＝0，延伸间隙＝0；输出参数：期望值＝10.0，阈值＝0，排列数＝250。BLASTN的检索参数如下：错配＝-3，正向＝1，词大小＝0。配对排列窗口同一性百分率＝22。检索了所有可得到的蛋白质和核酸数据库，包括PIR，SwissPROT，GenBank，小鼠EST，人EST，其它EST，人重复和高通量序列，及公开的专利和专利申请数据库。
从这些检索中鉴定到许多独特序列，它们代表GenBank和其它数据库中以前未描述的新的多核苷酸序列。鉴定到许多其它序列似乎含有与数据库中以前鉴定的一个或多个序列有显著同源性，虽然只描述它们为基因组或cDNA克隆但不知其功能。其余序列与已知基因相对应。从此分析获得的克隆概述于待批专利申请USSN09/796,692的表2-6中。
5.2实施例2—用微阵列分析扣除的cDNA序列
用微阵列分析扣除的cDNA序列以评价它们在血液恶性肿瘤和正常组织中的表达。用此方法PCR扩增了cDNA序列，并用基本上如上述(Shena等，1995)cDNA微阵列技术检验了血液恶性肿瘤和和正常组织中的mRNA表达模式。
简言之，将扣除cDNA文库分析鉴定的克隆固定并在载玻片上列阵成为微阵列载玻片上的多个复制物，使载玻片与二组不同的探针杂交，各组探针分别位于微阵列载玻片上相应于一独特cDNA克隆的位置(一张载玻片或芯片上可排列多达5500个克隆)。每张芯片与分别荧光标记了Cy3和Cy5的一对cDNA探针杂交。衍生自血液恶性肿瘤的一组探针用Cy3标记，而另一组衍生自正常组织集合体的探针用Cy5标记。通常用1微克poly A+RNA来产生各cDNA探针。杂交后，扫描芯片并记录Cy3和Cy5通路的荧光强度。与二组探针杂交后的强度差异(即Cy3/Cy5比率)提供了固定在肿瘤和正常组织载玻片上各cDNA序列的相对表达水平的信息。这是多重内部质量控制步骤。首先用一组遍在表达基因监测探针质量。其次对照板也可包括酵母DNA片段，其互补RNA可掺入探针合成中以测定探针的质量和分析的灵敏度。此方法提供的灵敏度为100000拷贝的mRNA中可测出1个，通过在不同位置包含重复的对照cDNA元件可确保此技术的重现性。
通过在各种微阵列芯片上的微阵列分析血液恶性肿瘤扣除克隆，鉴定到待批专利申请USSN 09/796,692的所有SEQ ID NO：668中的SEQ ID NO：1所述序列，在血液恶性肿瘤中过度表达至少是正常组织中的二倍。
5.3实施例3—多核苷酸和多肽组合物：简要描述通过扣除杂交和微阵列分析鉴定cDNA克隆和开放读框
待批专利申请USSN 09/796,692的表7列出了本发明分析中获得的多核苷酸序列。显示了668个多核苷酸序列和它们的克隆名字标志以及在先临时专利申请中第一次鉴定克隆的序列号和申请日期。
待批专利申请USSN 09/796,692的表8鉴定了该待批专利申请中SEQ ID NO：1-SEQID NO：668的cDNA序列分析获得的推测开放读框。显示了用于产生该开放读框的多核苷酸序列相应DNA序列中的序列标志、克隆名称、翻译框、起始和终止核苷酸。
待批专利申请USSN 09/796,692的表9鉴定了用上述扣除文库和微阵列方法获得的其它具体血液恶性肿瘤相关的cDNA序列组。这些序列在该待批专利申请中命名为SEQ ID NO：2533-SEQ ID NO：9597，表中还显示了最初的克隆名称，和在先临时专利申请中第一次描述克隆的序列号和申请日期。
5.4实施例4-通过扣除杂交和微阵列分析鉴定cDNA克隆和Orf的其它分析
此实施例描述了白血病肿瘤特异cDNA和组织特异cDNA的微阵列分析。
微阵列分析识别很多在特异组织/肿瘤中过度表达的潜在基因。然而，这些基因通常是已知基因或随后用实时PCR分析发现具有较宽表达模式(expression profile)的基因。本公开描述了将微阵列分析(CorixArray)和比较公共数据库相结合以确定和按重点排列实时分析的候选序列，从而可以更加有效的方式鉴定具有较好表达模式的序列。
用Corixa白血病/淋巴瘤芯片#3(Lyc3)测得与正常组织相比，克隆在淋巴瘤样品中过度表达。被分析的克隆最初随机挑取自淋巴瘤PCR扣除文库：B-细胞非非霍奇金淋巴瘤文库(BCNHL/D1和BCNHL/D2；CID000153)；T-细胞非霍奇金淋巴瘤文库(TCS-D1和TCS-D2；CID000166)；霍奇金淋巴瘤文库(HLS-D1和HLS-D2；CID000204和CID000275)和Clontech产生的T8白血病PCR扣除文库。排列了总共5184个克隆：2304个来自BCNHL文库，288个来自TCS文库，1344个来自HLS文库，960个来自Clontech-T8文库。此外，从上述文库中选择已经用白血病/淋巴瘤芯片鉴定的288个克隆在LyC3上再分析。
用载体特异性引物通过PCR扩增排列用的cDNA插入物。用43个探针对探测这些阵列。用CorixArray计算分析进行分析。该分析包括用两组探针确定特定元件(cDNA)平均或中位值杂交信号的比例。该比例反应了元件(cDNA)在探针群体内过度表达或表达不足。建立探针组以鉴定在探针组#1中高度差异表达的元件(cDNA)。探针组#1通常包括20个肿瘤RNAs，每个探针代表一个淋巴瘤亚组(如B-细胞非霍奇金淋巴瘤、T-细胞非霍奇金淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤)。组#2中的探针包括16T必需和非必需的正常组织(参见图4)。阈值(在探针组#1中的过表达倍数)设在3.0。设定这一阈值是为了鉴别基于芯片质量可能被重复检测的过度表达的元件。序列最初根据其CorixArray分析分选，尤其是基于它们的平均信号2值。
平均信号2＜0.1的序列可被认为是在正常组织中低表达/不表达的序列。平均信号2在0.1和0.2之间的序列可被认为是在正常组织中可能有一些表达的克隆。平均信号2＞0.2的序列可被认为是在一些正常组织中可能表达的克隆。
5.5实施例5-鉴定具有与CD20和CD52有相同组织表达模式的候选基因
此实施例鉴定了与CD20和CD52有类似组织表达模式的白血病肿瘤和组织特异性基因(图3)。抗这两种标记的抗体被用来治疗血液恶性疾病和其它与这些标记的表达有关的疾病，即FDA批准的Rituximab(抗CD20 Ab)和Campath(抗-CD52 Ab)。我们的候选基因和CD20和CD52之间基因表达的类似性提示，所述基因作为诊断和治疗血液恶性疾病和其它与所述一种或多种抗原的表达有关的癌性和非癌性疾病的化合物也是有用的。
实时PCR被用来比较候选基因的表达模式和CD20和CD52的表达模式。图8说明了候选基因在造血亚组和血液恶性肿瘤中的表达。这张图中总结的数据显示，联合使用PCR扣除的cDNA文库、微阵列分析和实时PCR可以鉴定在正常B-细胞、淋巴瘤、骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病和急性髓性白血病中差异表达的基因。
5.6实施例6-一种与CD20和CD52有类似表达模式的基因Ly1484(SEQ IDNOS：16-18和120-121)的分析
此实施例说明了用来鉴定用作治疗剂、诊断剂等的抗原的典型程序，以及用于开发白血病/淋巴瘤疾病的治疗剂和诊断剂的优选方法。首先，用PCR扣除文库克隆鉴定白血病/淋巴瘤细胞中高度富集的候选基因。然后，通过微阵列分析法分析扣除的cDNA序列以评估它们在血液恶性肿瘤和正常组织中的表达。由于微阵列分析通常识别的基因是已知基因或随后用实时PCR分析发现具有较宽表达模式的基因，微阵列分析和比较公共数据库相结合以确定用按重点排列用于分析的候选序列。然后，用实时PCR来分析各种血液亚组中的表达模式。一些情况下，进一步的分析集中在与已知治疗剂有类似表达模式的抗原上。对于这些基因，结构预测程序被用来鉴定跨膜结构域，用人体外致敏产生了抗原特异性CTL，并产生了人源化的单克隆和多克隆抗体，这些抗体作为试剂被用于诊断和治疗恶性疾病和与抗原表达有关的自身免疫疾病。
Ly1484P PCR扣除文库克隆序列与Genbank克隆KIAA1607(登录号XM033378、XM033379和AB046827)和FJL00111(登录号AK024502)相匹配。用微阵列分析和实时PCR证实了Ly1484的过表达。Ly1484P在B细胞瘤中过度表达，而在正常组织中的表达限于正常B-细胞。
用Genbank数据库获得了候选Ly1484P的全长序列。Ly1484P被绘制在人染色体10上。Ly1484P具有长型和短型(长型-SEQ ID NO：120；短型-SEQ ID NO：121)。Ly1484P的TMpred分析表明此蛋白质含有一个跨膜结构域。采用TSITES程序还鉴定了T-辅助细胞表位(图7和8)。产生了多肽，这些多肽被用来产生对Ly1484P特异的抗体。这些人源化的单克隆抗体可用来(共轭或非共轭的)诊断和治疗恶性疾病和与Ly1484的表达有关的自身免疫疾病。
5.7实施例7-跨膜结构域的鉴定
用精通本领域的技术人员熟知的结构预测程序来鉴定本文所述候选抗原中的跨膜结构域。
对于Ly1728P，SEQ ID NO：2的氨基酸残基6-22、47-65、227-243和228-245被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1732P，SEQ ID NO：4的氨基酸残基60-76和55-76被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1888P，SEQ ID NO：6的氨基酸1-22、3-21、52-68、254-273、252-273和256-272被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1452P，SEQ ID NO：10(剪接变体1)的氨基酸354-375、355-377和425-441被鉴定为假定的跨膜结构域，SEQ ID NO：12(剪接变体2)的氨基酸354-375、355-377和425-441被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1462P，SEQ ID NO：15的氨基酸2-23、3-21、369-385、976-999、977-993和979-1000被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1484P，SEQ ID NO：18的氨基酸51-67、322-338、666-682、736-752、1078-1094、24-43、53-69、118-136、319-335、730-752、1586-1602、48-69、88-109、114-135、196-217、300-321、323-344、389-410、502-523、659-680、714-735、1076-1097、1158-1179和1321-1342被鉴定为假定的跨膜结构域，SEQ ID NO：120的氨基酸10-86、63-84、118-139、480-501、562-583、725-746、70-86、113-129、134-156、280-296、481-497、560-577、653-674、721-738、734-752、833-869、879-895、990-1006、1023-1048、1070-1087、1112-1138、1135-1170和1146-1170被鉴定为假定的跨膜结构域，SEQ ID NO：121的氨基酸94-129、102-123、367-383、394-423、447-464和493-513被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1486P，SEQ ID NO：21的氨基酸24-40和24-45被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1693P，SEQ ID NO：26的氨基酸47-63、80-96、114-130、158-174、207-223、237-253、289-305、117-134、144-160、167-184、516-535、44-65、85-106、111-132、150-171、204-225、242-263和290-311被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1715P，SEQ ID NO：29的氨基酸38-54、38-56和34-55被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1727P，SEQ ID NO：32的氨基酸68-100、214-234、304-320、84-105、217-238和302-323被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1905P，SEQ ID NO：40的氨基酸68-100、214-234、84-105和217-238被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1885P，SEQ ID NO：35的氨基酸218-234、219-235、626-654和219-240被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly663S，SEQ ID NO：43的氨基酸22-38、41-57、60-76、92-108、242-258、20-38、23-57、60-77、86-102、241-257、14-35、89-110和248-269被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly664S，SEQ ID NO：45的氨基酸11-27、15-31、74-93、209-227、8-29和67-88被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly667S，SEQ ID NO：48的氨基酸13-31、139-157、184-202、231-247、329-351、435-451、473-490、609-626、685-705、688-704、7-28、233-254和685-706被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly677S，SEQ ID NO：54的氨基酸149-165、10-30、144-165、7-28和144-165被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1891P，SEQ ID NO：56的氨基酸31-47、66-82、93-109、128-144、171-187、205-221、242-258、31-48、64-82、94-111、120-145、170-187、205-221、244-266和29-50、63-84、93-114、124-145、168-189、206-227和241-262被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于CD138，SEQ ID NO：58的氨基酸255-271、4-21、258-276、6-27和256-277被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于CD22，SEQ ID NO：61的氨基酸688-704、3-19、29-46、157-174、185-201、349-366、386-406、479-505、688-709、1-22、159-180和689-710被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于CD79β，SEQ ID NO：66的氨基酸161-177、4-29、59-78、160-181、4-25和161-180被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1454P，SEQ ID NO：74的氨基酸5-22、231-249、7-28和425-446被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1485P，SEQ ID NO：76的氨基酸残基2-19被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1500P，SEQ ID NO：80(剪接变体1)的氨基酸残基10-31和327-344被鉴定为假定的跨膜结构域，SEQ ID NO：82(剪接变体2)的氨基酸残基13-38、71-92和388-405被鉴定为假定的跨膜结构域，SEQ ID NO：84(剪接变体3)的氨基酸25-46和341-359被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1516P，SEQ ID NO：87的氨基酸142-158、177-193、207-223、238-254、271-287、142-158、177-193、207-223、238-254和271-287被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1729P，SEQ ID NO：101的氨基酸420-436 431-437和412-433被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1859P，SEQ ID NO：107d氨基酸残基128-144、293-311、408-425、435-454、465-483、516-533、290-311；435-456和507-528被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly1866P，SEQ ID NO：109的氨基酸47-65和50-71被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly669S，SEQ ID NO：114的氨基酸489-505、13-29、38-57、73-89、94-114、252-268、307-324、329-346、489-509、4-25和486-507被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly672S，SEQ ID NO：117的氨基酸11-27、284-300、325-341、345-361、407-423、7-28、102-118、174-198、283-299、325-341、347-383、403-423、431-454、473-492、11-32、286-307、322-343、345-366、404-425、430-451和469-490被鉴定为假定的跨膜结构域。
对于Ly675S，SEQ ID NO：119的氨基酸154-170、187-203、428-444、518-534、846-862、81-97、155-172、235-251、374-391、428-444、477-195、520-542、539-573、694-714、807-823、843-862、50-71、77-98、145-166、518-539、802-823和845-866被鉴定为假定的跨膜结构域。
5.8实施例8-实时PCR分析以鉴定在慢性淋巴细胞白血病和多发性骨髓瘤中过长表达的抗原
用实时PCR证实候选抗原在慢性淋巴细胞白血病(CLL)和多发性骨髓瘤(MM)中的过度表达。
实时PCR评价了扩增期间PCR产物积累的水平(参见例如Gibson等，GenomeResearch 6：995-1001(1996)；Heid等，Genome Research 6：986-994(1996))。实时PCR可以定量许估多个样品中的mRNA水平。简言之，mRNA提取自肿瘤和正常组织并用标准技术制备cDNA。例如，可用Perkin Elmer/Applied Biosystems(Foster City，CA)9700棱镜仪进行实时PCR。可用例如Perkin Elmer/Applied Biosystems(FosterCity，CA)提供的引物表达程序为感兴趣的基因设计匹配的引物。引物和探针的最佳浓度最初由本领域的一般技术人员确定，并通过商业如Perkin Elmer/AppliedBiosystems(Foster City，CA)获得对照(如β-肌动蛋白)引物和探针。为测定样品中特定RNA的量，用含有感兴趣基因的质粒产生了标准曲线。用实时PCR中确定的Ct值产生标准曲线，该值与测定中所用的最初cDNA浓度有关。感兴趣基因的10-106拷贝的标准稀释通常是足够的。此外，产生了对照序列的标准曲线。出于比较的目的，可将组织样品的最初RNA含量标准化为对照的量。
结果概略
    抗原     CLL     MM
    Ly1728P     否     是
    Ly1732P     是     是
    Ly1888P     是     否
    Ly1452P     是     否
    Ly1462P     是     否
    Ly1484P     未测定     未测定
    Ly1486P     是     否
    Ly1677P     是     否
    Ly1682P     是     否
    Ly1693P     是     是
    Ly1697P     是     否
    Ly1715P     是     是
    Ly1727P     是     是
    Ly1905P     是     是
    Ly1885P     是     是
    Ly663S     是     是
    Ly664S     是     是
    Ly667S     是     是
    Ly677S     是     是
    Ly1891P     未测定     未测定
    CD138     否     是
    CD22     是     否
    CD79β     是     是
    Ly1450P     未测定     未测定
    Ly1451P     是     是
    Ly1454P     是     未测定
    Ly1485P     未测定     未测定
    Ly1500P     是     否
    Ly1516P     未测定     未测定
    Ly1678P     是     是
    Ly1680P     是     否
    Ly1686P     是     否
    Ly1687P     是     否
    Ly1706P     是     是
    Ly1712P     是     是
    Ly1729P     是     是
    Ly1848P     是     是
    Ly1859P     是     否
    Ly1866P     是     是
    Ly1867P     是     否
    Ly1868P     是     否
    Ly1886P     是     否
    Ly669S     是     是
    Ly672S     是     是
    Ly675S     是     是
这些序列方便地用于诊断、治疗和预防这些基因过度表达的恶性疾病，包括多发性骨髓瘤、B-细胞淋巴瘤和B-CLL。例如，单克隆抗体，包括人源化的单克隆抗体可用于诊断和治疗与抗原表达有关的疾病，所述抗原在血液恶性肿瘤中过度表达。
5.9实施例9-与CD20和CD52有类似表达模式的其它抗原的序列分析、表达分析和结构分析
结果概略
抗原 序列分析
Ly1728P FOAP-2(“在巨噬细胞中过度表达的新基因”)
Ly1732P B-细胞成熟因子(BCM)，肿瘤坏死因子受体超家族，成员17。BCM结合TALL-1、TNF家族的成员
Ly1888P 抗-Fas-诱导的凋亡蛋白(TOSO)；实验显示在细胞表面上表达
Ly1452P 抗-Fas-诱导的凋亡蛋白(TOSO)；实验显示在细胞表面上表达
Ly1462P II型人EB病毒补体受体
Ly1484P KIAA1607(GenBank中存在的cDNA序列)
Ly1486P IgE的Fc片段，低亲和力II受体
Ly1677P 新
Ly1682P 新
Ly1693P 趋化因子受体CXCR4
Ly1697P 新
Ly1715P 凝集素样NK细胞受体
Ly1727P hpim-2基因(小鼠pim-2癌基因的同系物)的剪接变体。预计是在细胞增殖中有作用的丝氨酸苏氨酸激酶
Ly1905P hpim-2基因(小鼠pim-2癌基因的同系物)的剪接变体。预计是在细胞增殖中有作用的丝氨酸苏氨酸激酶
Ly1885P 细胞周期进程8蛋白的明显剪接形式，细胞周期进程8蛋白是参与细胞周期进程恢复的一个蛋白质家族(通过在G1期中阻断抑制)
Ly663S 白细胞表面抗原CD37
Ly664S 与各种硫氧还蛋白有30-40％同一性的具有未知功能的蛋白
Ly667S 脑信号蛋白B(脑信号蛋白是一大类分泌并跨膜的蛋白质家族；脑信号蛋白域出现在肝细胞生长因子受体中)
Ly677S 白细胞表面受体CD79a
Ly1891P 孤独G-蛋白偶联受体(GPRC5D)
CD138 CD138
CD22 CD22
CD79β CD79β
Ly1450P 新(匹配GenBank序列FLJ23202；无ORF)
Ly1451P 新(匹配GenBank序列FLJ39358；无ORF)
Ly1454P 新(匹配GenBank序列FLJ40597；ORF)
Ly1485P 新(仅匹配基因组DNA)
Ly1500P BANK蛋白：具有锚蛋白重复的B-细胞支架蛋白；B-细胞抗原受体刺激时酪氨酸磷酸化的底物
Ly1516P Rh-相关抗原CD47，信号转导蛋白整联蛋白相关蛋白
Ly1678P 新(仅匹配基因组DNA)
Ly1680P 新(仅匹配基因组DNA)
Ly1686P 新(仅匹配基因组DNA)
Ly1687P 新(仅匹配基因组DNA)
Ly1706P 新(仅匹配基因组DNA)
Ly1712P 新
Ly1729P 造血细胞特异的Lyn底物1(HCLS1)蛋白；具有与螺旋-转角-螺旋显著同一性的N-末端半心重复序列；C-末端一半与作为蛋白质酪氨酸激酶底物的结构域类似，提示这种蛋白质可能参与信号转导和基因表达的调节
Ly1848P 新(仅匹配基因组DNA)
Ly1859P 新(匹配GenBank序列FLJ00140；ORF)
Ly1866P 与GenBank中的一种基因匹配是指“与假定的蛋白质PRO1722类似”
Ly1867P 新(仅匹配基因组DNA)
Ly1868P 新(仅匹配基因组DNA)
Ly1886P 新(仅匹配基因组DNA)
Ly669S 胞内粘附分子3(ICAM3)
Ly672S 顺氯氨铂抗性相关蛋白CRR9p
Ly675S KIAA0906(GenBank中存在的部分cDNA/蛋白质序列)
5.10实施例10-Ly1451的序列分析
衍生自淋巴瘤PCR扣除文库克隆的Ly1451(SEQ ID NOS：69-71和124)序列被用来查询一些公共数据库，包括GenBank和GenSeq。未检测到5’-近端51bp的匹配(＞90同一性)提示该序列可能含有重复元件。对LifeSeq数据库(Incyte)进行BLASTN检索鉴定出一个980bp模板(模板#1076101.8；SEQ ID NO：124，它含有Ly1451的所有240bp。该模板由6个克隆的序列构成，其中2个(33％)来自血液/免疫组织文库。模板#1076101.8是bin的一部分，含有11个来自总共104个克隆的模板，其中12个(9％)来自血液/免疫组织文库。
该序列(SEQ ID NO：124)被用来进一步检索公共数据库，但未得到其它序列。然而，这些检索表明该序列是一种人内源性反转录病毒序列(HERV)，它编码与部分整合酶和包膜基因相应的多肽。具有ATG转录起始位点的单个ORF包含在LS1076101.8的正向阅读中。
预计此ORF(SEQ ID NO：124)编码的多肽不具有跨膜结构域。
5.11实施例11-由与B细胞白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤有关的特异性基因LY1452编码的Ly1452淋巴瘤抗原编码的
构建了重组表达的Ly1452抗原以便迅速且简便地纯化蛋白质。
Ly1452的开放读框被PCR扩增，并亚克隆入框内用His标记修饰的pET28载体中，并在大肠杆菌中重组表达(His-Ly1452：SEQ ID NO：10，482(nt)，SEQ ID NO：10，483(蛋白质)。
Ly1452P在大肠杆菌中的表达
用以下引物PCR扩增LS编码区域的开放读框：
PDM-797 5’gtgtcacaatctacagtcaggcaggattctcc 3’Tm 64℃
               (SEQ ID NO：10，975)
PDM-799 5’gttatgtagcggccgcttatcatgttgctgcagag 3’Tm 67℃
               (SEQ ID NO：10，976)
采用以下条件：
10μl 10X Herculase缓冲液
1μl 10MM dNTPs
2μl 10μM各种寡核苷酸
83μl无菌水
1.0μl Herculase DNA聚合酶(Stratagene，La Jolla，CA)
50ng DNA
98℃ 3分钟
98℃ 40秒        60℃ 30秒        72℃ 2分钟×10循环
98℃ 40秒        60℃ 30秒        72℃ 2分钟30秒×10循环
98℃ 40秒        60℃ 30秒        72℃ 3分钟×10循环
98℃ 40秒        60℃ 30秒        72℃ 3分钟30秒×10循环
72℃ 4分钟
PCR产物用Xho I消化并克隆入已经用Eco72I和XhoI消化的pPDM His(一种在5’末端的框中用His标记修饰的pET28载体)。构建物通过序列分析证实并转化入BLR(DE3)pLysS和HMS 174 pLys S细胞。
还表达了重组蛋白，无组氨酸标记或有其它淋巴瘤抗原。它们也在其它载体中表达，包括其它大肠杆菌构建物、杆状病毒、酵母和哺乳动物表达载体。此重组抗原可用来产生多克隆和单克隆抗体，或用于免疫测定。
6.参考文献
以下参考文献提供了对于本文所述的示范性的程序或其它细节的补充，故具体纳入本文作参考。
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本文和权利要求书披露的所有组合物和方法通过阅读本文无需过多实验即可制备和实施。虽然已通过优选实施例描述了本发明的组合物和方法，本领域技术人员应明白可在不脱离本发明的概念、精神和范围对本文所述组合物和方法及方法的步骤和步骤的顺序进行改进。更具体说，显然可用化学或物理上相关的某些试剂来代替本文所述的试剂，而仍能获得相同或相似结果。本领域技术人员明白，所有这些相似的替代和改变都属于本发明附如权利要求的精神、范围和概念之内。本文引用的所有出版物、专利、专利申请都纳入本文作为参考。因此，本发明申请的独占专利权如以下权利要求书所述。
                          序列表
<210>1
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>1
1>Ly1728P，膜蛋白FOAP-12，全长cDNA
cttccagagagcaatatggctggttccccaacatgcctcaccctcatctatatcctttggcagctcacag
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tgcaaaaccctattgtagtaaaaaagtcttctttactatcttaataaaacagatattgtgagattcaaaa
aaaaaaaaaaaa
<210>2
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>2
2>Ly1728P，FOAP-12，全长蛋白质
MAGSPTCLTLIYILWQLTGSAASGPVKELVGSVGGAVTFPLKSKVKQVDSIVWTFNTTPLVTIQPEGGTI
IVTQNRNRERVDFPDGGYSLKLSKLKKNDSGIYYVGIYSSSLQQPSTQEYVLHVYEHLSKPKVTMGLQSN
KNGTCVTNLTCCMEHGEEDVIYTWKALGQAANESHNGSILPISWRWGESDMTFICVARNPVSRNFSSPIL
ARKLCEGAADDPDSSMVLLCLLLVPLLLSLFVLGLFLWFLKRERQEEYIEEKKRVDICRETPNICPHSGE
NTEYDTIPHTNRTILKEDPANTVYSTVEIPKKMENPHSLLTMPDTPRLFAYENVI
<210>3
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>3
3>Ly1732P，BCM，全长cDNA
ttgtaagatattacttgtccttccaggctgttctttctgtagctcccttgttttcttttt
gtgatcatgttgcagatggctgggcagtgctcccaaaatgaatattttgacagtttgttg
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ctgttgggagcttaatggtagaaacttccttggtttctatgattaaagtctttt
<210>4
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>4
4>Ly1732P，BCM，全长蛋白质
MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNAILWTCLGLSLIISLAV
FVLMFLLRKISSEPLKDEFKNTGSGLLGMANIDLEKSRTGDEIILPRGLEYTVEECTCEDCIKSKPKVDS
DHCFPLPAMEEGATILVTTKTNDYCKSLPAALSATEIEKSISAR
<210>5
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>5
5>Ly1888P，抗-Fas-诱导的表位(TOSO)，全长cDNA
ttgcactctagaagggacaatggacttctggctttggccactttacttcctgccagtatcgggggccctg
aggatcctcccagaagtaaaggtagagggggagctgggcggatcagttaccatcaagtgcccacttcctg
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<210>6
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>6
6>Ly1888P，抗-Fas-诱导的表位(TOSO)，全长蛋白质
MDFWLWPLYFLPVSGALRILPEVKVEGELGGSVTIKCPLPEMHVRIYLCREMAGSGTCGTVVSTTNFIKA
EYKGRVTLKQYPRKNLFLVEVTQLTESDSGVYACGAGMNTDRGKTQKVTLNVHSEYEPSWEEQPMPETPK
WFHLPYLFQMPAYASSSKFVTRVTTPAQRGKVPPVHHSSPTTQITHRPRVSRASSVAGDKPRTFLPSTTA
SKISALEGLLKPQTPSYNHHTRLHRQRALDYGSQSGREGQGFHILIPTILGLFLLALLGLVVKRAVERRK
ALSRRARRLAVRMRALESSQRPRGSPRPRSQNNIYSACPRRARGADAAGTGEAPVPGPGAPLPPAPLQVS
ESPWLHAPSLKTSCEYVSLYHQPAAMMEDSDSDDYINVPA
<210>7
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>7
7>Ly1452_His-tag-融合蛋白，Old-SEO-ID_10482，全长cDNA
atgcagcatcaccaccatcaccacgtgtcacaatctacagtcaggcaggattctcctgtg
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<210>8
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>8
8>Ly1452_His-tag-融合蛋白，Old-SEQ-ID_10483，全长蛋白质
MQHHHHHHVSQSTVRQDSPVEPWEGISDHSGIIDGSPRLLNTDHPPCQLDIRLMRHKAVW
INPQDVQQQPQDLQSQVPAAGNSGTHFVTDAASPSGPSPSCLGDSLAETTLSEDTTDSVG
SASPHGSSEKSSSFSLSSTEVHMVRPGYSHRVSLPTSPGILATSPYPETDSAFFEPSHLT
SAADEGAVQVSRRTISSNSFSPEVFVLPVDVEKENAHFYVADMIISAMEKMKCNILSQQQ
TESWSKEVSGLLGSDQPDSEMTFDTNIKQESGSSTSSYSGYEGCAVLQVSPVTETRTYHD
VKEICKCDVDEFVILELGDFNDITETCSCSCSSSKSVTYEPDFNSAELLAKELYRVFQKC
WILSVVNSQLAGSLSAAGSIVVNEECVRKDFESSMNVVQEIKFKSRIRGTEDWAPPRFQI
IFNIHPPLKRDLVVAAQNFFCAGCGTPVEPKFVKRLRYCEYLGKYFCKCCHSYAESCIPA
RILMMWDFKKYYVSNFSKQLLDSIWHQPIFNLSSIGQSLYAKAKELDRVKEIQEQLFHIK
KLLKTCRFANSALKEFEQVPGHLTDELHLFSLEDLVRIKKGLLAPLLKDILKASLAHVAG
CELCQGKGFICEFCQNTTVIFPFQTATCRRCSACRACFHKQCFQSSECPRCARITARRKL
LESVASAAT
<210>9
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>9
9>Ly1452P_LS_400351.4_编辑的，剪接体-1，全长cDNA
gggagcctatagggttcaataacttgcagtgtggttggggcttatggatgctggatgaagataagtgagggaggtttaca
gggacagcatcatgtcaggccttgagggcaagaatagctctccagacccccagctggccatgtggtgagttcagggccca
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tcacaatctacagtcaggcaggattctcctgtggagccctgggaagggatcagcgatcactctggcattattgatggttc
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gatgaattactcagtttctctttctctaaagcttgtttgatgaaactggttggtcctttcagtgaacaaaaatatgaccc
caaatctgtttgctctggcttttatttcttcaggaagcagacttccacttaaatgccattttgtgattgtgtcaatcata
cacattttatttacttcagagtttgaatagagagtacacatttcttctgcagatttatttcatgatgagtttgagttgct
tagcagggcgtgtgggtcccgttgaagtgcagtttgaagcaactgcttctagatggcactctttcaggtggcacaaattg
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aggatcttgctttaacagatgtaaaactgaacataaggtatttgcagatttaaacgaactgggggaaataatgaacagtg
tgattctagtaataacattaaaatcatagacattgactaataaggttaaatgaatcacaaaacctttatgaatttctttt
ttctaatagttcttatatgttttcctgaaacatgtgagcctattcttttttcttctactttctatatactttctcccact
tgagaaaggggccttgaggctgggtcccttcatggtatacctttagactgaacggtttgcaacctagggcttgggcatta
cattccctgggattcacatgccctaactaaacctaccttgattttctcagacagcacaggcaggcaataaagcgtcacag
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<210>10
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>10
10>Ly1452P_LS_400351.4_编辑的，剪接体-1，全长蛋白质
MVSQSTVRQDSPVEPWEGISDHSGIIDGSPRLLNTDHPPCQLDIRLMRHKAVWINPQDVQQQPQDLQSQVPAAGNSGTHF
VTDAASPSGPSPSCLGDSLAETTLSEDTTDSVGSASPHGSSEKSSSFSLSSTEVHMVRPGYSHRVSLPTSPGILATSPYP
ETDSAFFEPSHLTSAADEGAVQVSRRTISSNSFSPEVFVLPVDVEKENAHFYVADMIISAMEKMKCNILSQQQTESWSKE
VSGLLGSDQPDSEMTFDTNIKQESGSSTSSYSGYEGCAVLQVSPVTETRTYHDVKEICKCDVDEFVILELGDFNDITETC
SCSCSSSKSVTYEPDFNSAELLAKELYRVFQKCWILSVVNSQLAGSLSAAGSIVVNEECVRKDFESSMNVVQEIKFKSRI
RGTEDWAQPRFQIIFNIHPPLKRDLVVAAQNFFCAGCGTPVEPKFVKRLRYCEYLGKYFCDCCHSYAESCIPARILMMWD
FKKYYVSNFSKQLLDSIWHQPIFNLLSIGQSLYAKAKELDRVKEIQEQLFHIKKLLKTCRFANSALKEFEQVPGHLTDEL
HLFSLEDLVRIKKGLLAPLLKDILKASLAHVAGCELCQGKGFICEFCQNTTVIFPFQTATCRRCSACRACFHKQCFQSSE
CPRCARITARRKLLESVASAAT
<210>11
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>11
11>Ly1452P，剪接体-2，FLJ21562，全长蛋白质
ctttctgctgttaccgggagcgcggtggccacggaacgctgcccggagccgcgcgagggaggacccgacg
cgcggcgtttacccagcgcagcgttccaccgctcgggtttggctggaatagctctccagacccccagctg
gccatgtggtgagttcagggcccaaatcaagtagtaccagcaatcagggaactcctatctgttttgaatg
gattcacaccagccacaagcctggaaagatggtgtcacaatctacagtcaggcaggattctcctgtggag
ccctgggaagggatcagcgatcactctggcattattgatggttcgcccagactcctgaacactgaccatc
ctccttgccaattagacatcaggctcatgaggcacaaagctgtctggattaacccccaggatgtgcagca
acagccgcaggacttgcaatctcaggtgccagcagcagggaacagtgggacccattttgtgacagatgct
gcctctccctcaggcccttcaccttcgtgcctcggggactccctggcagagacaacgttgtctgaggata
ccacagactccgttggcagcgcttctccccatggctcgagtgaaaagagtagcagcttctctctgtcctc
aacagaggtacacatggtccgcccaggatactctcatcgggtgtctctgcccacaagccctgggattttg
gccacctccccatatcctgagactgacagtgctttttttgagccttcccatctgacatctgctgctgatg
aaggtgctgttcaagtcagtagaagaaccatttcttcgaattccttctcaccagaggtatttgtgctgcc
tgttgatgtagaaaaggaaaatgcccacttttatgttgcagatatgattatatcagcaatggagaaaatg
aagtgtaacattctgagtcaacagcagacagagagctggagtaaagaagtcagtgggttacttgggagtg
atcagcctgactctgaaatgacttttgataccaacataaagcaagagtctgggtcttctacttcttcata
cagtggctatgaaggttgtgctgtgttacaggtcagcccagtgactgaaacacgtacttaccatgatgtg
aaagagatttgcaaatgcgatgttgatgaatttgttattttagagcttggagattttaatgatatcacag
aaacctgtagctgttcctgcagctcctctaagagtgtcacttatgagccagacttcaattctgcagaact
attagccaaagagctgtaccgcgtgttccagaagtgctggatactgtcagtagttaattctcagctggca
ggttccctgagtgcagctggctcgatagtcgtaaatgaagagtgtgtccgaaaagactttgaatccagta
tgaatgtagtacaggaaattaaatttaagtctaggatcagagggactgaagactgggctcctcctagatt
tcaaatcatatttaatattcatccaccactcaagagggaccttgtggtggcagcccagaattttttctgt
gccggctgtggaactccagtagagcctaagtttgtgaagcggctccggtactgcgaatacctagggaagt
atttctgtgactgctgccactcatatgcagagtcgtgcatccctgcccgaatcctgatgatgtgggactt
caagaagtactacgtcagcaatttctccaaacagctgctcgacagcatatggcaccagcccattttcaat
ttgctgagcatcggccaaagcctgtatgcgaaagccaaggagctggacagagtgaaggaaattcaggagc
agctcttccatatcaagaagctgttgaagacctgtaggtttgctaacagctgtgtcaaggaaagggcttt
atttgtgaattttgccagaatacgactgtcatcttcccatttcagacagcaacatgtagaagatgttcag
cgtgcagggcttgctttcacaaacagtgcttccagtcctccgagtgcccccggtgtgcgaggatcacagc
gaggagaaaacttctggaaagtgtggcctctgcagcaacatgatgcccctgagtactgtgaaaaagactg
ttcaacatgccttatgataacaccgatttgtgtctattattggtgacattgttttagatattgggtattg
tatattaaggaaaaagatggtctatattctctttattgcatatacttaatgtttcaaaagaatgcagatt
ctgtgtttaagcacagggctgatagttgtggttttgtttacaaatgttctgttttggctgctattggttt
tttaaagaggttttttatacttttgtatttgaatagttatgtttcactgatgctgagccagtttgtatgt
gtgtgcatatatgtgaactgtaactgacaagatgaattactcagtttctctttctctaaagcttgtttga
tgaaactggttggtcctttcagtgaacaaaaatatgaccccaaa
<210>12
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>12
12>Ly1452P，剪接-形式-2，FLJ21562，全长蛋白质
MVSQSTVRQDSPVEPWEGISDHSGIIDGSPRLLNTDHPPCQLDIRLMRHKAVWINPQDVQQQPQDLQSQV
PAAGNSGTHFVTDAASPSGPSPSCLGDSLAETTLSEDTTDSVGSASPHGSSEKSSSFSLSSTEVHMVRPG
YSHRVSLPTSPGILATSPYPETDSAFFEPSHLTSAADEGAVQVSRRTISSNSFSPEVFVLPVDVEKENAH
FYVADMIISAMEKMKCNILSQQQTESWSKEVSGLLGSDQPDSEMTFDTNIKQESGSSTSSYSGYEGCAVL
QVSPVTETRTYHDVKEICKCDVDEFVILELGDFNDITETCSCSCSSSKSVTYEPDFNSAELLAKELYRVF
QKCWILSVVNSQLAGSLSAAGSIVVNEECVRKEFESSMNVVQEIKFDSRIRGTEDWAPPRFQIIFNIHPP
LKRDLVVAAQNFFCAGCGTPVEPKFVKRLRYCEYLGDYFCDCCHSYAESCIPARILMMWDFKKYYVSNFS
KQLLDSIWHQPIFNLLSIGQSLYAKAKELDRVKEIQEQLFHIKKLLKTCRFANSCVKERALFVNFARIRL
SSSHFRQQHVEDVQRAGLAFTNSASSPPSAPGVRGSQRGENFWKVWPLQQHDAPEYCEKDCSTCLMITPI
CVYYW
<210>13
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>13
13>LY1462P，Old-SEQ-ID_6411，部分cDNA
ctggttcacgtgtggagctagttaatacgtcctgccaagatgggtaccagttgactggac
atgcttatcagatgtgtcaagatgctgaaaatggaatttggttcaaaaagattccacttt
gtaaagttatccactgcaccctccacca
<210>14
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>14
14>Ly1462P，人EB病毒互补受体类型II(cr2)全长
ccagagctgccggacgctcgcgggtctcggaacgcatcccgccgcgggggcttcggccgtggcatgggcg
ccgcgggcctgctcggggttttcttggctctcgtcgcaccgggggtcctcgggatttcttgtggctctcc
tccgcctatcctaaatggccggattagttattattctacccccattgctgttggtaccgtgataaggtac
agttgttcaggtaccttccgcctcattggagaaaaaagtctattatgcataactaaagacaaagtggatg
gaacctgggataaacctgctcctaaatgtgaatatttcaataaatattcttcttgccctgagcccatagt
accaggaggatacaaaattagaggctctacaccctacagacatggtgattctgtgacatttgcctgtaaa
accaacttctccatgaacggaaacaagtctgtttggtgtcaagcaaataatatgtgggggccgacacgac
taccaacctgtgtaagtgttttccctctcgagtgtccagcacttcctatgatccacaatggacatcacac
aagtgagaatgttggctccattgctccaggattgtctgtgacttacagctgtgaatctggttacttgctt
gttggagaaaagatcattaactgtttgtcttcgggaaaatggagtgctgtcccccccacatgtgaagagg
cacgctgtaaatctctaggacgatttcccaatgggaaggtaaaggagcctccaattctccgggttggtgt
aactgcaaactttttctgtgatgaagggtatcgactgcaaggcccaccttctagtcggtgtgtaattgct
ggacagggagttgcttggaccaaaatgccagtatgtgaagaaattttttgcccatcacctccccctattc
tcaatggaagacatataggcaactcactagcaaatgtctcatatggaagcatagtcacttacacttgtga
cccggacccagaggaaggagtgaacttcatccttattggagagagcactctccgttgtacagttgatagt
cagaagactgggacctggagtggccctgccccacgctgtgaactttctacttctgcggttcagtgtccac
atccccagatcctaagaggccgaatggtatctgggcagaaagatcgatatacctataacgacactgtgat
atttgcttgcatgtttggcttcaccttgaagggcagcaagcaaatccgatgcaatgcccaaggcacatgg
gagccatctgcaccagtctgtgaaaaggaatgccaggcccctcctaacatcctcaatgggcaaaaggaag
atagacacatggtccgctttgaccctggaacatctataaaatatagctgtaaccctggctatgtgctggt
gggagaagaatccatacagtgtacctctgagggggtgtggacaccccctgtaccccaatgcaaagtggca
gcgtgtgaagctacaggaaggcaactcttgacaaaaccccagcaccaatttgttagaccagatgtcaact
cttcttgtggtgaagggtacaagttaagtgggagtgtttatcaggagtgtcaaggcacaattccttggtt
tatggagattcgtctttgtaaagaaatcacctgcccaccaccccctgttatctacaatggggcacacacc
gggagttccttagaagattttccatatggaaccacggtcacttacacatgtaaccctgggccagaaagag
gagtggaattcagcctcattggagagagcaccatccgttgtacaagcaatgatcaagaaagaggcacctg
gagtggccctgctcccctatgtaaactttccctccttgctgtccagtgctcacatgtccatattgcaaat
ggatacaagatatctggcaaggaagccccatatttctacaatgacactgtgacattcaagtgttatagtg
gatttactttgaagggcagtagtcagattcgttgcaaacgtgataacacctgggatcctgaaataccagt
ttgtgaaaaaggctgccagccacctcctgggctccaccatggtcgtcatacaggtggaaatacggtcttc
tttgtctctgggatgactgtagactacacttgtgaccctggctatttgcttgtgggaaacaaatccattc
actgtatgccttcaggaaattggagtccttctgccccacggtgtgaagaaacatgccagcatgtgagaca
gagtcttcaagaacttccagctggttcacgtgtggagctagttaatacgtcctgccaagatgggtaccag
ttgactggacatgcttatcagatgtgtcaagatgctgaaaatggaatttggttcaaaaagattccacttt
gtaaagttattcactgtcaccctccaccagtgattgtcaatgggaagcacacaggcatgatggcagaaaa
ctttctatatggaaatgaagtctcttatgaatgtgaccaaggattctatctcctgggagagaaaaattgc
agtgcagaagtgattctaaaggcatggatcttggagcgagccttcccacagtgcttacgatctctgtgcc
ctaatccagaagtcaaacatgggtacaagctcaataaaacacattctgcatattcccacaatgacatagt
gtatgttgactgcaatcctggcttcatcatgaatggtagtcgcgtgattaggtgtcatactgataacaca
tgggtgccaggtgtgccaacttgtatcaaaaaagccttcatagggtgtccacctccgcctaagaccccta
acgggaaccatactggtggaaacatagctcgattttctcctggaatgtcaatcctgtacagctgtgacca
aggctacctggtggtgggagagccactccttctttgcacacatgagggaacctggagccaacctgcccct
cattgtaaagaggtaaactgtagctcaccagcagatatggatggaatccagaaagggctggaaccaagga
aaatgtatcagtatggagctgttgtaactctggagtgtgaagatgggtatatgctggaaggcagtcccca
gagccagtgccaatcggatcaccaatggaaccctcccctggcggtttgcagatcccgttcacttgctcct
gtcctttgtggtattgctgcaggtttgatacttcttaccttcttgattgtcattaccttatacgtgatat
caaaacacagagaacgcaattattatacagatacaagccagaaagaagcttttcatttagaagcacgaga
agtatattctgttgatccatacaacccagccagctgatcagaagacaaaactggtgtgtgcctcattgct
tggaattcagcggaatattgattagaaagaaactgctctaatatcagcaagtctctttatatggcctcaa
gatcaatgaaatgatgtcataagcgatcacttcctatatgcacttattctcaagaagaacatctttatgg
taaagatgggagcccagtttcactgccatatactcttcaaggactttctgaagcctcacttatgagatgc
ctgaagccaggccatggctataaacattacatggctctaaaagttttgccctttttaaggaggcactaaa
aagagctgtcctggtatctagacccatcttctttttgaaatcacatactcatgttactatctgcttttgg
ttataatgtgtttttaattatctaaagtatgaagcattttctggggttatgatggccttacttttattag
gaagtatggttttattttgatagtagcttccttcctcggtggtgttaatcatttcgtttttaccctttac
cttcggatttgagtttctctcacattactgtatatactttgccttccataatcactcagtgattgcaatt
tgcacaagtttttttaaattatgggaatcaagatttaatcctagagatttggtgtacaattcaggctttg
gatgtttctttagcagttttgtgataagttctagttgcttgtaaaatttcacttaataatgtgtacatta
gtcattcaataaattgtaattgtaaagaaaacat
<210>15
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>15
15>Ly1462P，CR2/CD21/C3d/病毒受体，全长
MGAAGLLGVFLALVAPGVLGISCGSPPPILNGRISYYSTPIAVGTVIRYSCSGTFRLIGEKSLLCITKDK
VDGTWDKPAPKCEYFNKYSSCPEPIVPGGYKIRGSTPYRHGDSVTFACKTNFSMNGNKSVWCQANNMWGP
TRLPTCVSVFPLECPALPMIHNGHHTSENVGSIAPGLSVTYSCESGYLLVGEKIINCLSSGKWSAVPPTC
ERARCKSLGRFPNGKVKEPPILRVGVTANFFCDEGYRLQGPPSSRCVIAGQGVAWTKMPVCEEIFCPSPP
PILNGRHIGNSLANVSYGSIVTYTCDPDPEEGVNFILIGESTLRCTVDSQKTGTWSGPAPRCELSTSAVQ
CPHPQILRGRMVSGQKDRYTYNDTVIPACMFGFTLKGSKQIRCNAQGTWEPSAQVCEKECQAQPNILNGQ
KEDRHMVRFDPGTSIKYSCNPGYVLVGEESIQCTSEGVWTPPVPQCKVAACEATGRQLLTKPQHQFVRPD
VNSSCGEGYKLSGSVYQECQGTIPWFMEIRLCKEITCPPPPVIYNGAHTGSSLEDFPYGTTVTYTCNPGP
ERGVEFSLIGESTIRCTSNDQERGTWSGPAPLCKLSLLAVQCSHVHIANGYKISGKEAPYFYNDTVTFKC
YSGFTLKGSSQIRCKADNTWDPEIPVCEKETCQHVRQSLQELPAGSRVELVNTSCQDGYQLTGHAYQMCQ
DAENGIWFKKIPLCKVIHCHPPPVIVNGKHTGMMAENFLYGNEVSYECDQGFYLLGKKKLQCRSDSKGHG
SWSGPSPQCLRSPPVTRCPNPEVKHGYKLNKTHSAYSHNDIVYVDCNPGFIMNGSRVIRCHTDNTWVPGV
PTCMKKAFIGCPPPPKTPNGNHTGGNIARFSPGMSILYSCDQGYLLVGEALLLCTHEGTWSQPAPHCKEV
NCSSPADMDGIQKGLEPRKMYQYGAVVTLECEDGYMLEGSPQSQCQSDHQWNPPLAVCRSRSLAQVLCGI
AAGLILLTFLIVITLYVISKHRERNYYTDTSQKEAFHLEAREVYSVDPYNPAS
<210>16
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>16
16>Ly1484P，Old-SEQ-ID_10493，部分cDNA
ctgggcaanaccaagtcacagtttccagcgtgctgctcagccctccgagtgtgtgtgctc
atccttttcatagaagtcccatmkgacatggagagggttgggctgcaragctgwgattgc
cagaggcccttccttgagaactgtggggaaggaggccctgggggtttcttctgtaggcag
agctcaggccccagtcacctctgccaccctcagcctggcactgttgtgccagagcctctg
ctgcctctctcttcctacccatctgcagaccagcagaatattctccccctctcatcacca
accaggagtttggtgtggtttctggacacggccagagcagtcactgcggggctggttttg
ctgggcttccctgtcaaagcaatgctaacgtccagctctcgactcaaggccaggttcttc
tcccacttgtggcctcttgggcttggaggctgagccaggggctcctctcctgctggccgt
ccaggaacagacatcttcacatcctcagtcttccaaacccggaccatgccgtcttgactc
ccggtgatgatgatctggcttgtgtcccatgctgggccctccatcaggcagcaacaggtt
atggctccttctgggccccaggctgtggtgatgctgg
<210>17
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>17
17>Ly1484P，KIAA1607，全长cDNA
agcgagacttccagtccgaggtcctgctttctgctatggaactattccacatgacaagtg
gaggtgatgcagcgatgttcagagacggcaaagagcctcagccaagtgcagaagctgctg
ctgccccttctcttgccaacatctcctgcttcacccagaagctggtggagaagctgtaca
gtgggatgttctcggcagaccccaggcatatcctcctcttcatcctggagcacatcatgg
tggtcattgagactgcctcttctcaaagggacactgtcctcagcactttatacagcagtt
taaataaagtcattctttattgcctatccaagccccagcagtccctctccgaatgcctcg
gccttctcagcatcctgggctttctgcaggagcactgggatgttgtctttgccacctaca
attccaacatcagcttcctcctgtgtctcatgcattgccttttgctactcaatgagagaa
gttacccagaaggatttggattggagcccaagcctagaatgtctacttatcatcaagtct
tcctttccccaaatgaagacgtgaaagaaaaaagagaagacttaccaagtttgagtgatg
tccaacacaacatccagaagacagtgcagactctctggcagcagctggtggcacaaaggc
agcagaccctggaggatgccttcaagatcgatctctctgtgaaacctggagagagggaag
tgaagattgaagaggtcacaccgctctgggaggagacgatgctcaaggcctggcagcatt
acttagcatctgagaagaagtcactggcaagtcgttcaaatgttgcacaccacagcaaag
tcactttgtggagtggaagcctgtcctcagccatgaagctgatgcccgggcggcaggcca
aggaccctgagtgcaagacagaggattttgtgtcatgtatagagaactacagaagaagag
gacaagagctatatgcatctttatacaaagaccatgtgcaaaggcgaaaatgtggcaaca
tcaaggcagccaacgcctgggccaggatccaggagcagctttttggggagctgggcttgt
ggagccagggggaagaaaccaagccctgttccccatgggaactcgactggagagaaggac
cagctcgaatgaggaaacgcatcaaacgcttgtctcctttggaggccctgagctcaggaa
ggcacaaggaaagccaagacaaaaatgatcatatttctcaaacaaatgctgaaaaccaag
atgaactgacactgagggaggctgagggcgagccggacgaggtgggggtggactgcaccc
agctgaccttcttcccagccttacacgaaagtctgcactcagaagacttcttggaactgt
gtcgggaaagacaagttattttacaagagcttcttgataaagaaaaggtgacgcagaagt
tctccctggtgattgtgcagggccacctggtgtcagaaggggtcctgctttttggccacc
aacacttctacatctgcgagaacttcacactgtctcccacgggtgatgtctactgtaccc
gtcactgcttatccaacatcagcgatccgttcattttcaacctgtgcagcaaagacaggt
ccactgaccattactcgtgccagtgccacagctacgctgacatgcgggagctacggcagg
ctcgcttcctcctgcaggacatcgccctggagatcttcttccacaatggatattccaagt
ttcttgtcttctacaacaatgatcggagtaaggcctttaaaagcttctgctctttccaac
ccagcctgaaggggaaagccacctcggaggacaccctcaatctaaggagataccccctct
ctgacaggatcatgctgcagaagtggcagaaaagggacatcagcaattttgagtatctca
tgtacctcaacaccgcggctgggagaacctgcaatgactacatgcagtacccagtgttcc
cctgggtcctcgcagactacacctcagagacattgaacttggcaaatccgaagattttcc
gggatctttcaaagcccatgggggctcagaccaaggaaaggaagctgaaatttatccaga
ggtttaaagaagttgagaaaactgaaggagacatgactgtccagtgccactactacaccc
actactcctcggccatcatcgtggcctcctacctggtccggatgccacccttcacccagg
ccttctgcgctctgcagggcggaagcttcgacgtggcagacagaatgttccacagtgtga
agagcacgtgggagtcggcctccagagagaacatgagtgacgtcagggagctgaccccag
agttcttctacctgcctgagttcttaaccaactgcaacggggtagagttcggctgcatgc
aggacgggactgtgctaggagacgtgcagctccctccctgggctgatggggaccctcgga
aattcatcagcctgcacagaaaggccctggaaagtgactttgtcagtgccaacctccacc
attggatagaccttatttttgggtacaagcagcaggggccagccgcagtggatgctgtta
atatcttccacccccacttctacggtgacagaatggacctcagcagcatcactgaccccc
tcatcaaaagcaccatcctggggtttgtcagcaactttggacaggtgcccaaacagctct
ttaccaaacctcacccagccaggactgcagcagggaagcctctgcctggaaaggatgtct
ccacccccgtgagcctgcctggccacccacagccctttttctacagcctgcagtcgctga
ggccctcccaggtcacggtcaaagatatgtacctcttttctctaggctcagagtccccca
aaggggccattggccacattgtctctactgagaagaccattctggctgtagagaggaaca
aagtgctgctgcctcctctctggaacaggaccttcagctggggctttgatgacttcagct
gctgcttggggagctacggctccgacaaggtcctgatgacattcgagaacctggctgcct
ggggccgctgtctgtgcgccgtgtgcccatccccaacaacgattgtcacctctgggacca
gcactgtggtgtgtgtgtgggagctcagcatgaccaaaggccgcccgaggggcttgcgcc
tccggcaggccttgtatggacacacacaggctgtcacgtgcctggcagcgtcagtcacct
tcagcctcctggtgagcggctcccaggactgcacctgtatcctgtgggatctggaccacc
tcacccacgtgacccgcctgcccgcccatcgggaaggcatctcagccatcaccatcagtg
acgtctcaggcaccattgtctcctgtgcgggagcacacttgtccctgtggaatgtcaatg
gacagcccctggccagcatcaccacagcctggggcccagaaggagccataacctgttgct
gcctgatggagggcccagcatgggacacaagccagatcatcatcaccgggagtcaagacg
gcatggtccgggtttggaagactgaggatgtgaagatgtctgttcctggacggccagcag
gagaggagcccctggctcagcctccaagcccaagaggccacaagtgggagaagaacctgg
ccttgagtcgagagctggacgttagcattgctttgacagggaagcccagcaaaaccagcc
ccgcagtgactgctctggccgtgtccagaaaccacaccaaactcctggttggtgatgaga
gggggagaatattctgctggtctgcagatgggtaggaagagagaggcagcagaggctctg
gcacaacagtgccaggctgagggtggcagaggtgactggggcctgagctctgcctacaga
agaaacccccagggcctccttccccacagttctcaaggaagggcctctggcaatcacagc
tctgcagcccaaccctctccatggccgatgggacttctatgaaaaggatgagcacacaca
ctcggagggctgagcagcacgctggaaactgtgacttggtgatgcccagctgcacacgaa
attacacatgactcaccttattaagggctattgcactgaaaaaaaaaaaaagatgggtcg
cttactggaaattattgtattgtctttattttattaaagcaactatgtttt
<210>18
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>18
18>Ly1484P，KIAA1607，全长蛋白质
MNISSRDNAMPVFLLRNCAGHLSGSLRTIGAVAVGQLGVRVFHSSPAASSLDFIGGPAILLGLISLATDD
HTMYAAVKVLHSVLTSNAMCDFLMQHICGYQIMAFLLRKKASLLNHRIFQLILSVAGTVELGFRSSAITN
TGVFQHILCNFELWMNTADNLELSLFSHLLEILQSPREGPRNAEAAHQAQLIPKLIFLFNEPSLIPSKIP
TIIGILACQLRGHFSTQDLLRIGLFVVYTLKPSSVNERQICMDGALDPSLPAGSQTSGKTIWLRMQLLEM
LLSVISSPQLHLSSESKEEMFLDLGPDWFLLLLQGHLHASTTVLALKLLLYFLASPSLRTRFRDGLCAGS
WVERSTEGVDIVMDNLKSQSPLPEQSPCLLPGFRVLNDFLAHHVHIPEVYLIVSTFFLQTPLTELMDGPK
DSLDAMLQWLLQRHHQEEVLQAGLCTEGALLLLEMLKATMSQPLAGSEDGAWAQTFPASVLQFLSLVHRT
YPQDPAWRAPEFLQTLAIAAFPLGAQKGVGAESTRNTSSPEAAAEGDSTVEGLQAPTKAHPARRKLREFT
QLLLRELLLGASSPKQWLPLEVLLEASPDHATSQQKRDFQSEVLLSAMELFHMTSGGDAAMFRDGKEPQP
SAEAAAAPSLANISCFTQKLVEKLYSGMFSADPRHILLFILEHIMVVIETASSQRDTVLSTLYSSLNKVI
LYCLSKPQQSLSECLGLLSILGFLQEHWDVVFATYNSNISFLLCLMHCLLLLNERSYPEGFGLEPKPRMS
TYHQVFLSPNEDVKEKREDLPSLSDVQHNIQKTVQTLWQQLVAQRQQTLEDAFKIDLSVKPGEREVKIEE
VTPLWEETMLKAWQHYLASEKKSLASRSNVAHHSKVTLWSGSLSSAMKLMPGRQAKDPECKTEDFVSCIE
NYRRRGQELYASLYKDHVQRRKCGNIKAANAWARIQEQLFGELGLWSQGEETKPCSPWELDWREGPARMR
KRIKRLSPLEALSSGRHKESQDKNDHISQTNAENQDELTLREAEGEPDEVGVDCTQLTFFPALHESLHSE
DFLELCRERQVILQELLDKEKVTQKFSLVIVQGHLVSEGVLLFGHQHFYICENFTLSPTGDVYCTRHCLS
NISDPFIFNLCSKDRSTDHYSCQCHSYADMRELRQARFLLQDIALEIFFHNGYSKFLVFYNNDRSKAFKS
FCSFQPSLKGKATSEDTLNLRRYPGSDRIMLQKWQKRDISNFEYLMYLNTAAGRTCNDYMQYPVFPWVLA
DYTSETLNLANPKIFRDLSKPMGAQTKERKLKFIQRFKEVEKTEGDMTVQCHYYTHYSSAIIVASYLVRM
PPFTQAFCALQGGSFDVADRMFHSVKSTWESASRENMSDVRELTPEFFYLPEFLTNCNGVEFGCMQDGTV
LGDVQLPPWADGDPRKFISLHRKALESDFVSANLHHWIDLIFGYKQQGPAAVDAVNIFHPYFYGDRMDLS
SITDPLIKSTILGFVSNFGQVPKQLFTKPHPARTAAGKPLPGKDVSTPVSLPGHPQPFFYSLQSLRPSQV
TVKDMYLFSLGSESPKGAIGHIVSTEKTILAVERNKVLLPPLWNRTFSWGFDDFSCCLGSYGSDKS
<210>19
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>19
19>Ly1486P，Old-SEQ-ID_5058，部分cDNA
ctgcccttccatgtcgtcacaggcataccgggcgtggacccactgcttggtgcccttgcc
gaagtagtagcacttccgttggaaattgatccacttttcagggcacgtgttgcacacaaa
gccgctggacacctgcaactccatccttagctttgtcacctcctcccggagtctttccag
caaatctgaagcttcgttcctctcgttcaattcctgggacttgaagctgctcagatctgc
ttgaagcccgttcaggttccaggacagctccaagtcctgagatttcaatctctgctgttc
agctcgaagttcctccagttcctgtgaaatctgcgtggactgggatttctgcgccatctg
gtcaccgtggtggctttccaagttcttggaaacttgagagacgttccgggcagccctctc
ttccag
<210>20
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>20
20>Ly1486P，IgE的Fc片段，低亲和力II，(CD23A)的受体，全长
ggcacgaggctgcttaaacctctgtctctgacggtccctgccaatcgctctggtcgaccccaacacacta
ggaggacagacacaggctccaaactccactaaccagagctgtgattgtgcccgctgagtggactgcgttg
tcagggagtgagtgctccatcatcgggagaatccaagcaggaccgccatggaggaaggtcaatattcaga
gatcgaggagcttcccaggaggcggtgttgcaggcgtgggactcagatcgtgctgctggggctggtgacc
gccgctctgtgggctgggctgctgactctgcttctcctgtggcactgggacaccacacagagtctaaaac
agctggaagagagggctgcccggaacgtctctcaagtttccaagaacttggaaagccaccacggtgacca
gatggcgcagaaatcccagtccacgcagatttcacaggaactggaggaacttcgagctgaacagcagaga
ttgaaatctcaggacttggagctgtcctggaacctgaacgggcttcaagcagatctgagcagcttcaagt
cccaggaattgaacgagaggaacgaagcttcagatttgctggaaagactccgggaggaggtgacaaagct
aaggatggagttgcaggtgtccagcggctttgtgtgcaacacgtgccctgaaaagtggatcaatttccaa
cggaagtgctactacttcggcaagggcaccaagcagtgggtccacgcccggtatgcctgtgacgacatgg
aagggcagctggtcagcatccacagcccggaggagcaggacttcctgaccaagcatgccagccacaccgg
ctcctggattggccttcggaacttggacctgaagggggagtttatctgggtggatgggagccacgtggac
tacagcaactgggctccaggggagcccaccagccggagccagggcgaggactgcgtgatgatgcggggct
ccggtcgctggaacgacgccttctgcgaccgtaagctgggcgcctgggtgtgcgaccggctggccacatg
cacgccgccagccagcgaaggttccgcggagtccatgggacctgattcaagaccagaccctgacggccgc
ctgcccaccccctctgcccctctccactcttgagcatggatacagccaggcccagagcaagaccctgaag
acccccaaccacggcctaaaagcctctttgtggctgaaaggtccctgtgacattttctgccacccaaacg
gaggcagctgacacatctcccgctcctctatggcccctgccttcccaggagtacaccccaacagcaccct
ctccagatgggagtgcccccaacagcaccctctccagatgagagtacaccccaacagcaccctctccaga
tgagagtacaccccaacagcaccctctccagatgagagtacaccccaacagcaccctctccagatgcagc
cccatctcctcagcaccccaggacctgagtatccccagctcaggtggtgagtcctcctgtccagcctgca
tcaataaaatggggcagtgatggcctccc
<210>21
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>21
21>Ly1486P，IgE的Fc片段，低亲和力II，(CD23A)的受体，全长
MEEGQYSEIEELPRRRCCRRGTQIVLLGLVTAALWAGLLTLLLLWHWDTTQSLKQLEERAARNVSQVSKN
LESHHGDQMAQKSQSTQISQELEELRAEQQRLXSQDLELSWNLNGLQADLSSFKSQELNERNEASDLLER
LREEVTKLRMELQVSSGFVCNTCPEKWINFQRKCYYFGKGTKQWVHARYACDDMEGQLVSIHSPEEQDFL
TKHASHTGSWIGLRNLDLKGEFIWVDGSHVDYSNWAPGEPTSRSQGEDCVMMRGSGRWNDAFCDRKLGAW
VCDRLATCTPPASEGSAESMGPDSRPDPDGRLPTPSAPLHS
<210>22
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>22
22>Ly1677P，新的，部分，cDNA
atcagcacgaatacattcacgtccaacaacacatcaactaccaacaccatcaccacgagcacattcatgcccaacaacac
atcaaccaccaacacctttgccacaaacacattcatgtctaacaacacatcaattaccaacaccagcgccacgaacacct
tcacgtccatcaacacatcaaccaccaacaccatcagcacgagcacattcacatccaataacacatcaactaccaacacc
agcaccatgaacacattcatgcccaacaacacgtaaacccctaacactgtcaccacaaacaccttacagccagcagaacg
ccagtcactaacaccatcgccatcagcacttcgtggttagcaacacctcagctgacgccaatgtcaccacaaacacctca
tggccagaagcagctcaaccaccaacaccgttattataaatacattcttgaccatcaatgcttcaactgctgacaccatt
accataaatacatccatggccagcaatacttcaatcaccaacaccatgaccagcagcacgtcagcggccatcactgtcac
cacaaacaccttcatatccaataacacttcaaccaccatcatcaccacaaacacctcatagccaacagtgcctcagccac
caaccccatcatgacaaacacctcatggccagcagcacttcaaccaccaacaaacccctccaaggtcagcaacaccttca
tcaccgacatcattaacagaggtacccaccaccagcagcagcttatctccaccacccacaccacagccaacaccatcttt
accaaccacaccagccgtgtcttcatcactggcaccgacagcaaaaccagtgctgtggccaggtccaccagcgattactt
tccccaagcaccatccctaccaacagccctggtcatcatcactggcagaacccgccaaaccagcactcctagccaatgtc
tgggaaattgngatnattttcttccagtgggaggctntggtcaggagagccaatgggattgcaagactaggtcccacaat
ccctcaatatggtctctttntccccttccccccacc
<210>23
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>23
23>Ly1682P，新的，部分cDNA
aggtacgcggggacgttcaacgacttactggggagagaaagaaaaggaacgggagctgag
agctgggagtggagtatgaagaccaaggaattctcttaaagacctgagcagttatctgga
actcctcacaaaatcacagtaatggatattatttcccagttcctactctacactgggcat
agatgttatggacatcttctgagtcccacaacacccctgcaaggcagatatgatacactc
ctttcacctatggagaacggaggctcaaagaggctaggtgaccctcaggaaacacagatg
agaggtccccgcccagtctgcccagctctgaaatcttccatgccaactcccttagggcga
tcctgagtctagcctgtacaggcagttcatgtggttgtatttgaataaaatccctttcct
ccagaataaaaaaaaaaaaataaaaaaaaaaatgaaaaattgaaagggaaaaaaaa
<210>24
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>24
24>Ly1693P，Old-SEQ-ID_2611，部分cDNA
ccaccaacagtcagaggccaaggaagctgttggctgaaaaggtggtctatgttggcgtct
ggatccctgccctcctgctgactattcccgacttcatctttgccaacgtcagtgaggcag
atgacagatatatctgtgaccgcttctaccccaatgacttgtgggtggttgtgttccagt
ttcagcacatcatggttggccttatcctgcctggtattgtcatcctgtcctgctattgca
ttatcatctccaagctgtcacactccaagggccaccagaagcgcaaggccctcaagacca
cagtcatcctcatcctggctttcttcgcctgttggctgccttactacattgggatcagca
tcgactccttcatcctcctggaaatcatcaagcaagggtgtgagtttgagaacactgtgc
a
<210>25
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>25
25>Ly1693P，CXCR，全长cDNA
caattctgaatcctgccttttgcacttaatgtttcataagtatttccccatgtcactaaa
aattcttccaaataacattcacgatgtccatatggaatttcagatgtggatgaaccaaaa
tcttgtcaactattccactaacagtggttatttagggatgttcagacatttcactattta
aaaaaaaatgtttccacaaatacctttgtggcataagtttttatgagtggagttactgtt
ctgaagttcctgctgaatagaaaatgctttccagtgaggctgtcccaagccacattccca
tcagtgacaagcgagagacagctggtcttttcaaatccggagaccaaatattatctttga
aaaaaaatggatttttgcctaatttggtagtcaccaaatagcatctcattgttcttttaa
ttatctgcttccttttagtagagatccctaaaaagatctgaaaggagtcttcagataaag
gaaggagctttcttttgtctgtctacaatcaacaaatatttattatgcaaaccattttgc
tccgagttttctcctctttccctttttggacagatttgggagatctcacctttcaggttt
tagacatcgtgcagggaggagttttgaggtagggtgcagcttacggtccaggataaaaca
tactgattctgccactaccaggctttgtgaaaagcaagtcatgaaaacgctctgaaattc
tagaccttcagtagataggatctaccgtgtctataaaaatatgaagatccttaagtttta
ttaaagattcgaaaaaagtaaaagtgtttttacggttttattttcatttttatttcttac
cgttatcgtttattataaaggatattataaaggatacagatgaagagatacgtaatgcaa
ggcctgtgagaaggggcgtggagcttccgaaacctcttccagccaccaccctccaagaac
ctggagtttctttttttttttttaattctacaaatgtaatattagaattgattttatctg
gccattagtgtgtgtcctaactcgttcgtttctgagagtcccatctcccggcccgggata
tcatctttcctgtgtcagtgaaagtgcagagtagatgagaacctttaaccaccaacatta
gggaggggtcccagacaaagggggtaagtcatgctctgtagagaaaaggttccctgcctc
cgaactacctctggaacactccagtaaatgtttcctcttttgatatagaaaagagggatc
gtgtgtagagtgcagtctgggcaatccctctcctcgggaccatttcggggtaggggcctc
tggggtccgtgtcgcgacgcacgcgcctcggtcccagctatctccgcagcgggccacccc
gcctgcggacgcagtttctcggccccgccccacactcgctcccccgccccacccagtctc
cgcgccggagggaagtggcgcgagggggaaagcactgtctgcgcgcccactgcaaacctc
agccagtctgagatcgctttaaacgtctgacccccacccccactccgccccgcccagttc
ttcaacctaatttctgattcgtgccaaagcttgtcctctgctcaaaatcgtggaagacgc
cgagtatggggaccgaagacctgggttcaagcccggcttggaatccctgcccatccctgg
catttcatctctccgggcttatttgctggtttctccgaatgcgggccttgtctggttcac
gctggatccccaacgcctagaacagtgcgtggcacgcagttcgtccttctataaatatcg
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tctgtgcaagttcctagtgatctgttacaaaaagtactggtcgctaaattactcttataa
taaagcatacttttaggataataaagcactattcgcgaattggttaccgctattatgaaa
ttactgagcaatacatatctacatctgatcagtctccagaattatgccaaatcctacctt
cttctgaaagtatctcctaattatctgcacctgaccctagtgatgctgtgaatgtgcaag
tatagctacatcctccgaaggaaaggatctttactccttttacctcctgaatgggctgcg
tctgctgaaagcgcgggggaatgggcggttggaagcttggccctacttccagcattgccg
cctactggttgggttactccagcaagtcactccccttccctgggcctcagtgtctctact
gtagcattcccaggtctggaattccatccactttagcaaggatggacgcgccacagagag
acgcgttcctagcccgcgcttcccacctgtcttcaggcgcatcccgcttccctcaaactt
aggaaatgcctctgggaggtcctgtccggctccggactcactaccgaccacccgcaaaca
gcagggtcccctgggcttcccaagccgcgcacctctccgccccgcccctgcgccctcctt
cctcgcgtctgcccctctcccccaccccgccttctccctccccgccccagcggcgcatgc
gccgcgctcggagcgtgtttttataaaagtccggccgcggccagaaacttcagtttgttg
gctgcggcagcaggtagcaaagtgacgccgagggcctgagtgctccagtagccaccgcat
ctggagaaccagcggttaccatggaggggatcagtgtaagtccagtttcaacctgctttg
tcataaatgtacaaacgtttgaacttagagcgcagcccctctccgagcgggcagaagcgg
ccaggacattggaggtacccgtactccaaaaaagggtcaccgaaaggagttttcttgacc
atgcctatatagtgcgggtgggtggggggggagcaggattggaatctttttctctgtgag
tcgaggagaaacgactggaaagagcgttccagtggctgcatgtgtctcccccttgagtcc
cgccgcgcgcggcggcttgcacgctgtttgcaaacgtaagaacattctgtgcacaagtgc
agagaaggcgtgcgcgctgcctcgggactcagaccaccggtctcttccttggggaagcgg
ggatgtcttggagcgagttacattgtctgaatttagaggcggagggcggcgtgcctgggc
tgagttcccaggaggagattgcgcccgctttaacttcggggttaagcgcctggtgactgt
tcttgacactgggtgcgtgtttgttaaactctgtgcggccgacggagctgtgccagtctc
ccagcacagtaggcagagggcgggagaggcgggtggacccaccgcgccgatcctctgagg
ggatcgagtggtggcagcagctaggagttgatccgcccgcgcgctttgggtttgaggggg
aaaccttcccgccgtccgaagcgcgcctcttccccacggccgcgagtgggtcctgcagtt
cgagagtttggggtcgtgcagaggtcagcggagtggtttgacctcccctttgacaccgcg
cagctgccagccctgagatttgcgctccggggataggagcgggtacggggtgaggggcgg
gggcggttaagaccgcacctgggctgccaggtcgccgccgcgaagactggcaggtgcaag
tggggaaaccgtttggctctctccgagtccagttgtgatgtttaaccgtcggtggtttcc
agaaaccttttgaaaccctcttgctagggagtttttggtttcctgcagcggcgcgcaatt
caaagacgctcgcggcggagccgcccagtcgctccccagcaccctgtgggacagagcctg
gcgtgtcgcccagcggagcccctgcagcgctgcttgcgggcggttggcgtgggtgtagtg
ggcagccgcggcggcccggggctggacgacccggccccccgcgtgcccaccgcctggagg
cttccagctgcccacctccggccgggttaactggatcagtggcggggtaatgggaaacca
cccgggagagtgaggaaatgaaacttggggcgaggaccacgggtgcagaccccgttacct
tctccacccaggaaaatgccccgctccctaacgtcccaaacgcgccaagtgataaacacg
aggatggcaagagacccacacaccggaggagcgcccgcttgggggaggaggtgccgtttg
ttcattttctgacactcccgcccaatataccccaagcaccgaagggccttcgttttaaga
ccgcattctctttacccactacaagttgcttgaagcccagaatggtttgtatttaggcag
gcgtgggaaaattaagtttttgcgccttaggagaatgagtctttgcaacgcccccgccct
ccccccgtgatcctcccttctcccctcttccctccctgggcgaaaaacttcttacaaaaa
gttaatcactgcccctcctagcagcacccaccccaccccccacgccgcctgggagtggcc
tctttgtgtgtattttttttttcctcctaaggaaggttttttttcttccctctagtgggc
ggggcagaggagttagccaagatgtgactttgaaaccctcagcgtctcagtgcccttttg
ttctaaacaaagaattttgtaattggttctaccaaagaaggatataatgaagtcactatg
ggaaaagatggggaggagagttgtaggattctacattaattctcttgtgcccttagccca
ctacttcagaatttcctgaagaaagcaagcctgaattggttttttaaattgctttaaaaa
atttttttaactgggttaatgcttgctgaattggaagtgaatgtccattcctttgcctct
tttgcagatatacacttcagataactacaccgaggaaatgggctcaggggactatgactc
catgaaggaaccctgtttccgtgaagaaaatgctaatttcaataaaatcttcctgcccac
catctactccatcatcttcttaactggcattgtgggcaatggattggtcatcctggtcat
gggttaccagaagaaactgagaagcatgacggacaagtacaggctgcacctgtcagtggc
cgacctcctctttgtcatcacgcttcccttctgggcagttgatgccgtggcaaactggta
ctttgggaacttcctatgcaaggcagtccatgtcatttacacagtcaacctctacagcag
tgtcctcatcctggccttcatcagtctggaccgctacctggccatcgtccacgccaccaa
cagtcagaggccaaggaagctgttggctgaaaaggtggtctatgttggcgtctggatccc
tgccctcctgctgactattcccgacttcatctttgccaacgtcagtgaggcagatgacag
atatatctgtgaccgcttctaccccaatgacttgtgggtggttgtgttccagtttcagca
catcatggttggccttatcctgcctggtattgtcatcctgtcctgctattgcattatcat
ctccaagctgtcacactccaagggccaccagaagcgcaaggccctcaagaccacagtcat
cctcatcctggctttcttcgcctgttggctgccttactacattgggatcagcatcgactc
cttcatcctcctggaaatcatcaagcaagggtgtgagtttgagaacactgtgcacaagtg
gatttccatcaccgaggccctagctttcttccactgttgtctgaaccccatcctctatgc
tttccttggagccaaatttaaaacctctgcccagcacgcactcacctctgtgagcagagg
gtccagcctcaagatcctctccaaaggaaagcgaggtggacattcatctgtttccactga
gtctgagtcttcaagttttcactccagctaacacagatgtaaaagacttttttttatacg
ataaataacttttttttaagttacacatttttcagatataaaagactgaccaatattgta
cagtttttattgcttgttggatttttgtcttgtgtttctttagtttttgtgaagtttaat
tgacttatttatataaattttttttgtttcatattgatgtgtgtctaggcaggacctgtg
gccaagttcttagttgctgtatgtctcgtggtaggactgtagaaaagggaactgaacatt
ccagagcgtgtagtgaatcacgtaaagctagaaatgatccccagctgtttatgcatagat
aatctctccattcccgtggaacgtttttcctgttcttaagacgtgattttgctgtagaag
atggcacttataaccaaagcccaaagtggtatagaaatgctggtttttcagttttcagga
gtgggttgatttcagcacctacagtgtacagtcttgtattaagttgttaataaaagtaca
tgttaaacttacttagtgttatgttctgatttctgttgacattcttttggctagtagaag
acaaaagtaatacatttatggtatgcaaagcactatcctaggtatttcattgtaatattt
tacttaccccttatcacaactctgatagattctgcttctgttactaattacattttatag
aagaggaaacggaggcacagaaagcctaagtaacttggttaaaggcatgtagtaagtatc
aaatcctgtattttaaaccaggtaacatgacttaacgaatctgaagccttcaccacttta
aattcaaatggaagtttagaaatggccagccagcacctatttgtatgaaaggtcatcttt
cagaggataagcatgtataaagaagaaaaggtatgcagtcgtgtttggattttactccac
catccacttgtgaaacccaggtctgtgcaatgccagacggtgtgtgctttcctcatccag
tatcctcagtgtagataaccatcactcccttttcacagacaagagaactgagattcagag
actttccatacattgcactttcaagggggcaaagccaagaactaattctgtttattgttc
cagctcttgctcttaactcttacctactattgcccttcagaacacctgggcataagtcaa
ctgaactgctaataaagaaagccaaaagtgaatgttttcttcataaaattaaccatgacc
aaaatactcctcttgtaatatcttctatgcaaatctcaacacttttattcttaaactatc
gcaacacctagcacctcctcaaggactcagccaagcagctacaagttaatactgatattt
gttagagtcagaaggaaggtccactgaagcaagctccctgttgctcacattttgcacaag
attttggagacttatgtaaccacccgttgctattaacacgaccattgtgcaagccccagg
ctcttgagtaaatttcagctttggtttctatttaaagataatttctaaactctagccata
cctacctcacattggaacacaaacagggtacactccaggcatgcactcagataataagta
ggatataattacgacaatatttggtctacttttagtaattgtttctggcacagaaaatcc
attttggaggaaaaattgcaatgccttatctttctgaggcaaatcacatttgttcaaggc
aaattatagatcctgtgaagggaaataacttaattacttaaaatagaatccaatttggct
gtacatttttgctgccgtctatggatctggggtaattcaaagtggtattcatattctact
tgaggacacaattagatttcagataggaaattatcttgaggtttcttggttttccctgag
aagcctaattggatcacccttcatttaagcatagttttacatgcactctctcaaaggctt
agtcttaaagccacaaccattgagacagacttcacttgaaccctctctataaatatttat
tctccgggagacaatagaagaaatccttggaaggcatgctttttctttctcatcttggct
tgaaacctccttaccccagattcctctcctttaccgtggagtcacaacaaaaggaactga
gccaaaacaaaattcccagtgtcaccagtcttaatggatatttcattctcccttggaaca
aagatggaatagctttttttccaaaagaaaaacaagccttggctctctccctgccccaaa
agggtgccccccacccccatcattctctgtcccaaccctgccatgttagagcgtctccaa
agccttccctgtgtcgtggtttgtctgacaatgtggggaaacccagtctgctggccagcc
cttgcatgaagtagctgattgttccctctcctcatcccttatgaatggggcccttgaagt
tcagtcatgtagattcagttgtataatgaaagctaaaatatttaaattgtatgcatgctg
ccaataacagcatacatctgacatctaacttattaataacattaagcctgcaactagggg
ggaaagtggatgttttttcttgcaaagcctttgttttcctaaaatgacacttgaaaattt
atctccccctactgcaggcttcccagcccccttttataattatgcttaaattaaaataat
gattctgggatactcttttggggagataccctacaggctttattttaataattgaactaa
gtgtttgtgactttctcctagatattgtcaaatattaaataaaggctccataaacaattg
agctgtcttattcccagataatacccatttaggaggggcaaggatcc
<210>26
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>26
26>Ly1693P，CXCR4，全长蛋白质
MDVDEGQDMSQVSGKESPPVSDTPDEGDEPMPVPEDLSTTSGAQQNSKSDRGMASNVKVE
TQSDEENGRACEMNGEECAEDLRMLDASGEKMNGSGRDQGSSALSGVGGIRLPNGKLKCD
ICGIVCIGPNVLMVHKRSHTGERPFQCNQCSSALSGVGGIRLPNGKLKCDICGIVCIGPN
VLMVHKRSHTGERPFQCNQCGASFTQKGNLLRHIKLHSGEKPFKCHLCNYACRRRDALTG
HLRTHSVGKPHKCGYCGRSYKQRSSLEEHKERCHNYLESMGLPGMYPVIKEETNHNEMAE
DLCKIGAERSLVLDRLASNVAKRKSSMPQKFLGDKCLSDMPYDSANYEKEDMMTSHVMDQ
AINNAINYLGAESLRPLVQTPPGSSEVVPVISSMYQLHKPPSDGPPRSNHSAQDAVDNLL
LLSKAKSVSSEREASPSNSCQDSTDTESNAEEQRSGLIYLTNHINPHARNGLALKEEQRA
YEVLRAASENSQDAFRVVSTSGEQLKVYKCEHCRVLFLDHVMYTIHMGCHGCHGFRDPFE
CNMCGYHSQDRYEFSSHITRGEHRYHLS
<210>27
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>27
27>Ly1697P，新的，部分cDNA
ccagagagtaagaataggaggagaaaacatgctgcagatgtaggcggggcccagattgta
gacagcatagaaataattttgggcttttcctgttaaattcctctagcttctaggatacat
tttttttaacttttgtctttgagataattttagatttacagaagagttgcaaaaagagta
gagagagttcctgtacacccttcacccagcttcctctactgctaacatcttacataatca
tagtttcaacctgagaaattagcatggggtacagtcctattaatgaaaccccaggcttta
ttcagatttcaccaggttttcagtaacatcctttatctgtttcagaattt
<210>28
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>28
28>Ly1715P，凝集素样NK细胞受体(LLT1)，全长cDNA
gaattccggcaaaatgcatgacagtaacaatgtggagaaagacattacaccatctgaattgcctgcaaac
ccaggttgtctgcattcaaaagagcattctattaaagctaccttaatttggcgcttatttttcttaatca
tgtttctgacaatcatagtgtgtggaatggttgctgctttaagcgcaataagagctaactgccatcaaga
gccatcagtatgtcttcaagctgcatgcccagaaagctggattggttttcaaagaaagtgtttctatttt
tctgatgacaccaagaactggacatcaagtcagaggttttgtgactcacaagatgctgatcttgctcagg
ttgaaagcttccaggaactgaatttcctgttgagatataaaggcccatctgatcactggattgggctgag
cagagaacaaggccaaccatggaaatggataaatggtactgaatggacaagacagtttcctatcctggga
gcaggagagtgtgcctatttgaatgacaaaggtgccagtagtgccaggcactacacagagaggaagtgga
tttgttccaaatcagatatacatgtctagatgttacagcaaagccccaactaatctttagaagcatattg
gaactgataactccattttaaaatgagcaaagaatttatttcttataccaacaggtatatgaaaatatgc
tcaatatcactaataactgggaaaatacaaatcaaaatcatagtaaaatattacctgttttcatggtgct
aatattacctgttctcccactgctaatgacatacccgagaatgagtaatttataaataaaagagatttaa
ttgaaaaaaa
<210>29
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>29
29>Ly1715P，凝集素样NK细胞受体(LLT1)，全长蛋白质
MHDSNNVEKDITPSELPANPGCLHSKEHSIKATLIWRLFFLIMFLTIIVCGMVAALSAIRANCHQEPSVC
LQAACPESWIGFQRKCFYFSDDTKNWTSSQRFCDSQDADLAQVESFQELNFLLRYKGPSDHWIGLSREQG
QPWKWINGTEWTRQFPILGAGECAYLNDKGASSARHYTERKWICSKSDIHV
<210>30
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>30
30>Ly1727P，Old-SEQ-ID_6042，部分cDNA
ccatgggatggctcttctgaccattgggggccaggccaggccaggccaggcttagggcag
caaggaccaggccaaaggggcagggcctcctttggaggggttgaggggtacatcctcggc
tggtgtttgcatccaggggtccagcaggatctcttccagtgagggtcgggaagaaggttt
gggggccaggcaccggcggattagggcacagcaatcttggggaaaacatgggcttgggaa
gtggagctcagcttccagaatctcctggtccctctcaaagggaatgtccccacacaccat
gtcatagaggaggatgcccagtgaccagacagtggccgggagtgcatggtactggtgtcg
agagatccactctggggggctgtacacccttgtcccatcaaagtcagtgtagggttcatc
atgaagcagggcaccagaaccaaaatcaatgagtttggcacagccacggcgtaggtctat
caggatgntctcatccttgatgtcacgatggacaactncacgggaaatggcagtgctgga
tggctgccactactttgg
<210>31
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>31
31>Ly1727P，pim-2原癌基因类似物pim-2h，全长cDNA
gaattcggcacgagcgcgcggcgaatctcaacgctgcgccgtctgcgggcgcttccgggccaccagtttc
tctgctttccaccctggcgccccccagccctggctccccagctgcgctgccccgggcgtccacgccctgc
gggcttagcgggttcagtgggctcaatctgcgcagcgccacctccatgttgaccaagcctctacaggggc
ctcccgcgccccccgggacccccacgccgccgccaggaggcaaggatcgggaagcgttcgaggccgagta
tcgactcggccccctcctgggtaaggggggctttggcaccgtcttcgcaggacaccgcctcacagatcga
ctccaggtggccatcaaagtgattccccggaatcgtgtgctgggctggtcccccttgtcagactcagtca
catgcccactcgaagtcgcactgctatggaaagtgggtgcaggtggtgggcaccctggcgtgatccgcct
gcttgactggtttgagacacaggaaggcttcatgctggtcctcgagcggcctttgcccgcccaggatctc
tttgactatatcacagagaagggcccactgggtgaaggcccaagccgctgcttctttggccaagtagtgg
cagccatccagcactgccattcccgtggagttgtccatcgtgacatcaaggatgagaacatcctgataga
cctacgccgtggctgtgccaaactcattgattttggttctggtgccctgcttcatgatgaaccctacact
gactttgatgggacaagggtgtacagccccccagagtggatctctcgacaccagtaccatgcactcccgg
ccactgtctggtcactgggcatcctcctctatgacatggtgtgtggggacattccctttgagagggacca
ggagattctggaagctgagctccacttcccagcccatgtctccccagactgctgtgccctaatccgccgg
tgcctggcccccaaaccttcttcccgaccctcactggaagagatcctgctggacccctggatgcaaacac
cagccgaggatgttacccctcaacccctccaaaggaggccctgcccctttggcctggtccttgctaccct
aagcctggcctggcctggcctggcccccaatggtcagaagagccatcccatggccatgtcacagggatag
atggacatttgttgacttggttttacaggtcattaccagtcattaaagtccagtattactaaggtaaggg
attgaggatcaggggttagaagacataaaccaagtttgcccagttcccttcccaatcctacaaaggagcc
ttcctcccagaacctgtggtccctgattttggagggggaacttcttgcttctcattttgctaaggaagtt
tattttggtgaagttgttcccattttgagccccgggactcttattttgatgatgtgtcaccccacattgg
cacctcctactaccaccacacaaacttagttcatatgcttttacttgggcaagggtgctttccttccaat
accccagtagcttttattttagtaaagggaccctttcccctagcctagggtcccatattgggtcaagctg
cttacctgcctcagcccaggattttttattttgggggaggtaatgccctgttgttaccccaaggcttctt
tttttttttttttttttttgggtgaggggaccctactttgttatcccaagtgctcttattctggtgagaa
gaaccttaattccataatttgggaaggaatggaagatggacaccaccggacaccaccagacaataggatg
ggatggatggttttttgggggatgggctaggggaaataaggcttgctgtttgttttcctggggcgctccc
tccaattttgcagatttttgcaacctcctcctgagccgggattgtccaattactaaaatgtaaataatca
cgtattgtggggaggggagttccaagtgtgccctccttttttttcctgcctggattatttaaaaagccat
gtgtggaaacccactatttaataaaagtaatagaatcagaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
<210>32
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>32
32>Ly1727P，pim-2原癌基因类似物pim-2h，全长蛋白质
MLTKPLQGPPAPPGTPTPPPGGKDREAFEAEYRLGPLLGKGGFGTVFAGHRLTDRLQVAIKVIPRNRVLG
WSPLSDSVTCPLEVALLWKVGAGGGHPGVIRLLDWFETQEGFMLVLERPLPAQDLFDYITEKGPLGEGPS
RCFFGQVVAAIQHCHSRGVVHRDIKDENILIDLRRGCAKLIDFGSGALLHDEPYTDFDGTRVYSPPEWIS
RHQYHALPATVWSLGILLYDMVCGDIPFERDQEILEAELHFPAHVSPDCCALIRRCLAPKPSSRPSLEEI
LLDPWMQTPAEDVTPQPLQRRPCPFGLVLATLSLAWPGLAPNGQKSHPMAMSQG
<210>33
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>33
33>Ly1885P_DKFZp564F112(来自克隆DKFZp564F112)_部分cDNA
ggggggacttgagtatcctttgttaccctcaggagatcctgaaaccagtcccccatggatactgagggct
gactgtatagtcctatcctcacggaactttcattctaatgggggaagactgactataaacaaaatatatg
taataggtggtggtaagtaccgtggagaagtaacaaatggggcaaagtgagttatacagctccattctta
gaaaccttggagtacttttcttagtttatactcgtggtggtttccttttgtctcctttattacatgggac
tctgacatgtgcccatagctagggtgacagtaggatctacccgatagtagggtggcagtaggatctaccc
aaaaagcgtcctgctgatacaggaccaaagcatcctgttgttctcgagcctataaaaagagctaatggtg
ttgcttctcttaactgtggcctcctacactgtgttttggatgattggtgatgtcttggatattctgtttc
tttggaactttgaatatacaacactttactagggaattagcaatggaagcagagcaaagatgtacagagg
aaacaatgcgtaactctgatggaattgaagtcatgaggcagcagagagcttaaattacagctttaaaaat
ttttattttttagagggaatttacttgggagtaacagcagtaatagttaacggagccagaatgcttgagt
catataattgcaaagcagagttgggagcaacagatgctaaagagtagttgctgtagttcctctttgggtc
gtaggagcagttgtcatattactatatagctactgcatgaagaagagttcttagtgaggcctgggtgatc
agctcttcttagtattctgtgtgaccccatttgaccttttaacaaatccctaagtaaataaatagcccct
caggaaaactaagtttttctctgctgtttttttgcttgagagagctataactgtaatagacttatatttc
tgaacattttagtgcttgccaatatttggtaatatttatgtttcctatatttgtaatgaacattcttctt
ccggtacattttttgttaaattattgtttgatggataaaagttcaccttttattgtataaaattgactga
gattaatttatacacattgacaatgggtaaatagaatttttcagattattaaaagctgaaggatgcccac
gtaagcaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
<210>34
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>34
34>LY1885P，CCP8 mRNA，全长cDNA
tcctctttccgtgcgcgagtgcacagctccggaggcccgagccgaccctggggcgtccggtccggtggtc
ttgcagcctccaaaccccgagtgctataccgaactgcgcgccaagggtgggagagctgacggcctgggcc
acccttcttccttcactgggcaggctttgaggtgcttgtcggtctggactgatgaaaatccatatgacct
gaaagatgtctgaaaattccagtgacagtgattcatcttgtggttggactgtcatcagtcatgaggggtc
agatatagaaatgttgaattctgtgacccccactgacagctgtgagcccgccccagaatgttcatcttta
gagcaagaggagcttcaagcattgcagatagagcaaggagaaagcagccaaaatggcacagtgcttatgg
aagaaactgcttatccagctttggaggaaaccagctcaacaattgaggcagaggaacaaaagatacccga
agacagtatctatattggaactgccagtgatgattctgatattgttacccttgagccacctaagttagaa
gaaattggaaatcaagaagttgtcattgttgaagaagcacagagttcagaagactttaacatgggctctt
cctctagcagccagtatactttctgtcagccagaaactgtattttcatctcagcctagtgacgatgaatc
aagtagtgatgaaaccagtaatcagcccagtcctgcctttagacgacgccgtgctaggaagaagaccgtt
tctgcttcagaatctgaagaccggctagttgctgaacaagaaactgaaccttctaaggagttgagtaaac
gtcagttcagtagtggtctcaataagtgtgttatacttgctttggtgattgcaatcagcatgggatttgg
ccatttctatggcacaattcagattcagaagcgtcaacagttagtcagaaagatacatgaagatgaattg
aatgatatgaaggattatctttcccagtgtcaacaggaacaagaatcttttatagattataagtcattga
aagaaaatcttgcaaggtgttggacacttactgaagcagagaagatgtcctttgaaactcagaaaacgaa
ccttgctacagaaaatcagtatttaagagtatccctggagaaggaagaaaaagccttatcctcattacag
gaagagttaaacaaactaagagaacagattagaatattggaagataaagggacaagtactgaattagtta
aagaaaatcagaaacttaagcagcatttggaagaggaaaagcagaaaaaacacagctttcttagtcaaag
ggagactctgttgacagaagcaaagatgctaaagagagaactggagagagaacgactagtaactacggct
ttaaggggggaactccagcagttaagtggtagtcagttacatggcaagtcagattctcccaatgtatata
ctgaaaaaaaggaaatagcaatcttacgggaaagactcactgagctggaacggaagctaaccttcgaaca
gcagcgttctgatttgtgggaaagattgtatgttgaggcaaaagatcaaaatggaaaacaaggaacagat
ggaaaaaagaaagggggcagaggaagccacagggctaaaaataagtcaaaggaaacatttttgggttcag
ttaaggaaacatttgatgccatgaagaattctaccaaggagtttgtaaggcatcataaagagaaaattaa
gcaggctaaagaagctgtgaaggaaaatctgaaaaaattctcagattcagttaaatccactttcagacac
tttaaagataccaccaagaatatctttgatgaaaagggtaataaaagatttggtgctacaaaagaagcag
ctgaaaaaccaagaacagtttttagtgactatttacatccacagtataaggcacctacagaaaaccattc
aaggccctactatgcaaaaagatggaaggaagaaaagccagttcactttaaagaattcagaaaaaataca
aattcaaagaaatgcagtcctgggcatgattgtagagaaaattctcattctttcagaaaggcttgttctg
gtgtatttgattgtgctcaacaagagtccatgagcctttttaacacagtggtgatccctataaggatgga
tgaatttagacagataattcaaaggtacatgttaaaagaactggatactttttgtcgctggaacgaactt
gatcagttcatcaataagtttttcctaaacggtgtctttatacatgatcagaagctcttcactgactttg
ttaatgatgttaagattatcttaggaaacatgaaggaatatgaagtagataatgatggagtatttgagaa
gttggatgaatatatatatagacacttctttggtcacactttttcccctccatatggacccaggtcggtt
tacataaaaccgtgtcattacagtagtttgtaacatttgtagattggatacgatttttatgatttgatga
gtttcttgtaaggttaccgtttctaagagttgtgctttatggccactgagagaattcagaataaattgaa
agatggagtctaaaaattattagctgttacaaatggaacaatttcattataacgtgatcactttgacttg
agcaaatggtttaatttttatcttaaaatcagttaagaatatataaaatcctacctttggccaagtttgt
ttcttttcattatagtttatatgaaaagatcaccttaagtgaaattattttccttattttcctttaatct
tttatgtatttattcacttctggaagctaggaatgagcaacacaaattttactctgaagtcagaagagct
catatatataattctaatgtcccacctatgtccattccatgtaccagcttagttatatactagtcacata
attatctttgataaaggtagaggcacaaagaggcaaactaacaagtcaaattctaatgtgtgtacttcat
aataattttttatccattttcatcttctttatctttatattctgtaacatgaaacttacctaatcttcaa
atgttagcttcattttttacctttgaaatacttaatctttctgaataaatataatggtctataa
<210>35
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>35
35>Ly1885P，CCP8，全长蛋白质
MSENSSDSDSSCGWTVISHEGSDIEMLNSVTPTDSCEPAQECSSLEQEELQALQIEQGESSQNGTVLMEE
TAYPALEETSSTIEAEEQKIPEDSIYIGTASDDSDIVTLEPPKLEEIGNQEVVIVEEAQSSEDFNMGSSS
SSQYTFCQPETVFSSQPSDDESSSDETSNQPSPAFRRRRARKKTVSASESEDRLVAEQETEPSKELSKRQ
FSSGLNKCVILALVIAISMGFGHFYGTIQIQKRQQLVRKIHEDELNDMKDYLSQCQQEQESFIDYKSLKE
NLARCWTLTEAEKMSFETQKTNLATENQYLRVSLEKEEKALSSLQEELNKLREQIRILEDKGTSTELVKE
NQKLKQHLEEEKQKKHSFLSQRETLLTEAKMLKRELERERLVTTALRGELQQLSGSQLHGKSDSPNVYTE
KKEIAILRERLTELERKLTFEQQRSDLWERLYVEAKDQNGKQGTDGKKKGGRGSHRAKNKSKETFLGSVK
ETFDAMKNSTKEFVRHHKEKEKQADEAVKENLKKFSDSVKSTFRHFKDTTKNIFDEKGNKRFGATKEAAE
KPRTVFSDYLHPQYKAPTENHSRPYYAKRWKEEKPVHFKEFRKNTNSKKCSPGHDCRENSHSFRKACSGV
FDCAQQESMSLFNTVVIPIRMDEFRQIIQRYMLKELDTFCRWNELDQFINKFFLNGVFIHDQKLFTDFVN
DVKIILGNMKEYEVDNDGVFEKLDEYIYRHFFGHTFSPPYGPRSVYIKPCHYSSL
<210>36
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>36
36>Ly1905P_Old-SEQ-ID_546，部分cDNA
ccatgggatggctcttctgaccattgggggccaggccaggccaggccaggcttagggcag
caaggaccaggccaaaggggcagggcctcctttggaggggttgaggggtacatcctcggc
tggtgtttgcatccaggggtccagcaggatctcttccagtgagggtcgggaagaaggttt
gggggccaggcaccggcggattagggcacagcaatcttggggaaaacatgggcttgggaa
gtggagctcagcttccagaatctcctggtccctctcaaagggaatgtccccacacaccat
gtcatagaggaggatgcccagtgaccagacagtggccgggagtgcatggtactggtgtcg
agagatccactctggggggctgtacacccttgtcccatcaaagtcagtgtagggttcatc
atgaagcagggcaccagaaccaaaatcaatgagtttggcacagccacggcgtaggtctat
caggatgntctcatccttgatgtcacgatggacaactncacgggaaatggcagtgctgga
tggctgccactactttgg
<210>37
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>37
37>Ly1905P，Old-SEQ-ID_2169，部分蛋白质
QVVAXIQHCHSRGVVHRDIKDENILIDLRRGCAKLIDFGSGALLHDEPYTDFDGTRVYSP
PEWISRHQYHALPATVWSLGIXLYDM
<210>38
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>38
38>Ly1905P_Old_SEQ-ID_52277部分cDNA
aaataatccaggcaggagaagagaggagggcacacttggaactcccctccccacaatacg
tgattatttacattttagtaattggacaatcccggctcaggaggaggttgcaagaatctg
caaaagttggagggagcgccccaggagaacaaacagcaagccttatttcccctagcccat
cccccaaaaaaccatccatcccatcctagtgtctggtggtgtccggtggtgtccatcttc
cattccttcccaaattatggaagtaaggttcttctcaccagaataagagcacttgggata
acagagtagggtcccctcacccaaaaaaaaaaaaaaaaangaagccttggggtaacaaca
gggcattacctcccccagaataaagaatcctgggctgaggcaggtaagcagcttgaccca
atatgggaccctaggctaggggaaagggtccctttactaaaataaaagctactggggtat
tggaaggaaagcacccttgcccaagtaagagcatatgaactaagtttgngtggnggtagt
aggaggngccaatgtggggtgacacatcatcagaataagagtcc
<210>39
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>39
39>Ly1905P pim-2原癌基因全长cDNA
cgcgcgcggcgaatctcaacgctgcgccgtctgcgggcgcttccgggccaccagtttctctgctttccac
cctggcgccccccggccctggctccccagctgcgctgccccgggcgtccacgccctgcgggcttagcggg
ttcagtgggctcaatctgcgcagcgccacctccatgttgaccaagcctctacaggggcctcccgcgcccc
ccgggacccccacgccgccgccaggaggcaaggatcgggaagcgttcgaggccgagtatcgactcggccc
cctcctgggtaaggggggctttggcaccgtcttcgcaggacaccgcctcacagatcgactccaggtggcc
atcaaagtgattccccggaatcgtgtgctgggctggtcccccttgtcagactcagtcacatgcccactcg
aagtcgcactgctatggaaagtgggtgcaggtggtgggcaccctggcgtgatccgcctgcttgactggtt
tgagacacaggagggcttcatgctggtcctcgagcggcctttgcccgcccaggatctctttgactatatc
acagagaagggcccactgggtgaaggcccaagccgctgcttctttggccaagtagtggcagccatccagc
actgccattcccgtggagttgtccatcgtgacatcaaggatgagaacatcctgatagacctacgccgtgg
ctgtgccaaactcattgattttggttctggtgccctgcttcatgatgaaccctacactgactttgatggg
acaagggtgtacagccccccagagtggatctctcgacaccagtaccatgcactcccggccactgtctggt
cactgggcatcctcctctatgacatggtgtgtggggacattccctttgagagggaccaggagattctgga
agctgagctccacttcccagcccatgtctccccagactgctgtgccctaatccgccggtgcctggccccc
aaaccttcttcccgaccctcactggaagagatcctgctggacccctggatgcaaacaccagccgaggatg
tacccctcaacccctccaaaggaggccctgcccctttggcctggtccttgctaccctaagcctggcctgg
cctggcctggcccccaatggtcagaagagccatcccatggccatgtcacagggatagatggacatttgtt
gacttggttttacaggtcattaccagtcattaaagtccagtattactaaggtaagggattgaggatcagg
ggttagaagacataaaccaagtctgcccagttcccttcccaatcctacaaaggagccttcctcccagaac
ctgtggtccctgattctggagggggaacttcttgcttctcattttgctaaggaagtttattttggtgaag
ttgttcccattctgagccccgggactcttattctgatgatgtgtcaccccacattggcacctcctactac
caccacacaaacttagttcatatgctcttacttgggcaagggtgctttccttccaataccccagtagctt
ttattttagtaaagggaccctttcccctagcctagggtcccatattgggtcaagctgcttacctgcctca
gcccaggattctttattctgggggaggtaatgccctgttgttaccccaaggcttcttttttttttttttt
tgggtgaggggaccctactctgttatcccaagtgctcttattctggtgagaagaaccttacttccataat
ttgggaaggaatggaagatggacaccaccggacaccaccagacactaggatgggatggatggttttttgg
gggatgggctaggggaaataaggcttgctgtttgttctcctggggcgctccctccaacttttgcagattc
ttgcaacctcctcctgagccgggattgtccaattactaaaatgtaaataatcacgtattgtggggagggg
agttccaagtgtgccctcctctcttctcctgcctggattatttaaaaagccatgtgtggaaacccactat
ttaataaaagtaatagaatcag
<210>40
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>40
40>Ly1905P pim-2原癌基因全长
MLTKPLQGPPAPPGTPTPPPGGKDREAFEAEYRLGPLLGKGGFGTVFAGHRLTDRLQVAIKVIPRNRVLG
WSPLSDSVTCPLEVALLWKVGAGGGHPGVIRLLDWFETQEGFMLVLERPLPAQDLFDYITEKGPLGEGPS
RCFFGQVVAAIQHCHSRGVVHRDIKDENILIDLRRGCAKLIDFGSGALLHDEPYTDFDGTRVYSPPEWIS
RHQYHALPATVWSLGILLYDMVCGDIPFERDQEILEAELHFPAHVSPDCCALIRRCLAPKPSSRPSLEEI
LLDPWMQTPAEDVPLNPSKGGPAPLAWSLLP
<210>41
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>41
41>Ly663S_Old_SEQ-ID_2757部分cDNA
ctggaactgcacntagtcccagctctcctcggccgcggtctcctcggggntggtgccgta
cttttggatggttttctctacnacntcccgcaagcttccntccag
<210>42
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>42
42>Ly663S CD37抗原(CD37)全长cDNA
gtctcccccactgtcagcacctcttctgtgtggtgagtggaccgcttaccccactaggtgaagatgtcag
cccaggagagctgcctcagcctcatcaagtacttcctcttcgttttcaacctcttcttcttcgtcctcgg
cagcctgatcttctgcttcggcatctggatcctcatcgacaagaccagcttcgtgtcctttgtgggcttg
gccttcgtgcctctgcagatctggtccaaagtcctggccatctcaggaatcttcaccatgggcatcgccc
tcctgggttgtgtgggggccctcaaggagctccgctgcctcctgggcctgtattttgggatgctgctgct
cctgtttgccacacagatcaccctgggaatcctcatctccactcagcgggcccagctggagcgaagcttg
cgggacgtcgtagagaaaaccatccaaaagtacggcaccaaccccgaggagaccgcggccgaggagagct
gggactatgtgcagttccagctgcgctgctgcggctggcactacccgcaggactggttccaagtcctcat
cctgagaggtaacgggtcggaggcgcaccgcgtgccctgctcctgctacaacttgtcggcgaccaacgac
tccacaatcctagataaggtgatcttgccccagctcagcaggcttggacacctggcgcggtccagacaca
gtgcagacatctgcgctgtccctgcagagagccacatctaccgcgagggctgcgcgcagggcctccagaa
gtggctgcacaacaaccttatttccatagtgggcatttgcctgggcgtcggcctactcgagctcgggttc
atgacgctctcgatattcctgtgcagaaacctggaccacgtctacaaccggctcgctcgataccgttagg
ccccgccctccccaaagtcccgccccgcccccgtcacgtgcgctgggcacttccctgctgcctgtaaata
tttgtttaatccccagttcgcctggagccctccgccttcacattcccctggggacccacgtggctgcgtg
cccctgctgctgtcacctctcccacgggacctggggctttcgtccacagcttcctgtccccatctgtcgg
cctac
<210>43
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>43
43>Ly663S，CD37抗原，全长
MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMG
IALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRAQLERSLRDVVEKTIQKYGTNPEETAAE
ESWDYVQFQLRCCGWHYPQDWFQVLILRGNGSEAHRVPCSCYNLSATNDSTILDKVILPQLSRLGHLARS
RHSADICAVPAESHIYREGCAQGLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARY
R
<210>44
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>44
44>Ly664S，FLJ90810 fis，类似于蛋白质二氯化物异构酶相关蛋白前体的每周克隆，全长
agccccgccgcgatgcccgcgcgcccaggacgcctcctcccgctgctggcccggccggcggccctgactg
cgctgctgctgctgctgctgggccatggcggcggcgggcgctggggcgcccgggcccaggaggcggcggc
ggcggcggcggacgggccccccgcggcagacggcgaggacggacaggacccgcacagcaagcacctgtac
acggccgacatgttcacgcacgggatccagagcgccgcgcacttcgtcatgttcttcgcgccctggtgtg
gacactgccagcggctgcagccgacttggaatgacctgggagacaaatacaacagcatggaagatgccaa
agtctatgtggctaaagtggactgcacggcccactccgacgtgtgctccgcccagggggtgcgaggatac
cccaccttaaagcttttcaagccaggccaagaagctgtgaagtaccagggtcctcgggacttccagacac
tggaaaactggatgctgcagacactgaacgaggagccagtgacaccagagccggaagtggaaccgcccag
tgcccccgagctcaagcaagggctgtatgagctctcagcaagcaactttgagctgcacgttgcacaaggc
gaccactttatcaagttcttcgctccgtggtgtggtcactgcaaagccctggctccaacctgggagcagc
tggctctgggccttgaacattccgaaactgtcaagattggcaaggttgattgtacacagcactatgaact
ctgctccggaaaccaggttcgtggctatcccactcttctctggttccgagatgggaaaaaggtggatcag
tacaagggaaagcgggatttggagtcactgagggagtacgtggagtcgcagctgcagcgcacagagactg
gagcgacggagaccgtcacgccctcagaggccccggtgctggcagctgagcccgaggctgacaagggcac
tgtgttggcactcactgaaaataacttcgatgacaccattgcagaaggaataaccttcatcaagttttat
gctccatggtgtggtcattgtaggactctggctcctacttgggaggaactctctaaaaaggaattccctg
gtctggcgggggtcaagatcgccgaagtagactgcactgctgaacggaatatctgcagcaagtattcggt
acgaggctaccccacgttattgcttttccgaggagggaagaaagtcagtgagcacagtggaggcagagac
cttgactcgttacaccgctttgtcctgagccaagcgaaagacgaactttaggaacacagttggaggtcac
ctctcctgcccagctcccgcaccctgcgtttaggagttcagtcccacagaggccactgggttcccagtgg
tggctgttcagaaagcagaacatactaagcgtgaggtatcttctttgtgtgtgtgttttccaagccaaca
cactctacagattctttattaaatgtgtaactcatggtcactgtgtaaacattttcagtggcgatatatc
ccctttgaccttctcttgatgaaatttacatggtttcctttgagactaaaatagcgttgagggaaatgaa
attgctggactatttgtggctcctgagttgagtgattttggtgaaagaaagcacatccaaagcatagttt
acctgcccacgagttctggaaaggttgccttgtggcagtattgacgttcctctgatcttaaggtcacagt
tgactcaatactgtgttggtccgtagcatggagcagattgaaatgcaaaaacccacacctctggaggata
ccttcacggccgctgctggagcttctgttgctgtgaatacttctctcagtgtgagaggttagccgtgatg
aaagcagcgttacttctgaccgtgcctgagtaagagaatgctgatgccataactttatgtgtcgatactt
gtcaaatcagttactgttcaggggatccttctgtttctcacggggtgaaacatgtctttagttcctcatg
ttaacacgaagccagagcccacatgaactgttggatgtcttccttagaaagggtaggcatggaaaattcc
acgaggctcattctcagtatctcattaactcattgaaagattccagttgtatttgtcacctggggtgaca
agaccagacaggctttcccaggcctgggtatccagggaggctctgcagccctgctgaagggccctaacta
gagttctagagtttctgattctgtttctcagtagtccttttagaggcttgctatacttggtctgcttcaa
ggaggtcgaccttctaatgtatgaagaatgggatgcatttgatctcaagaccaaagacagatgtcagtgg
gctgctctggccctggtgtgcacggctgtggcagctgttgatgccagtgtcctctaactcatgctgtcct
tgtgattaaacacctctatctcccttgggaataagcacatacaggcttaagctctaagatagataggtgt
ttgtccttttaccatcgagctacttcccataataaccactttgcatccaacactcttcacccacctccca
tacgcaaggggatgtggatacttggcccaaagtaactggtggtaggaatcttagaaacaagaccacttat
actgtctgtctgaggcagaagataacagcagcatctcgaccagcctctgccttaaaggaaatctttatta
atcacgtatggttcacagataattctttttttaaaaaaacccaacctcctagagaagcacaactgtcaag
agtcttgtacacacaacttcagctttgcatcacgagtcttgtattccaagaaaatcaaagtggtacaatt
tgtttgtttacactatgatactttctaaataaactcctttttttt
<210>45
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>45
45>Ly664S，全长
MPARPGRLLPLLARPAALTALLLLLLGHGGGGRWGARAQEAAAAAADGPPAADGEDGQDPHSKHLYTADM
FTHGIQSAAHFVMFFAPWCGHCQRCQPTWNDLGDKYNSMEDAKVYVAKVDCTAHSDVCSAQGVRGYPTLK
LFKPGQEAVKYQGPRDFQTLENWMLQTLNEEPVTPEPEVEPPSAPELKQGLYELSASNFELHVAQGDHFI
KFFAPWCGHCKALSPTWEQLALGLEHSETVKIGKVDCTQHYELCSGNQVRGYPTLLWFRDGKKVDQYKGK
RDLESLREYVESQLQRTETGATETVTPSEAPVLAAEPEADKGTVLALTENNFDDTIAEGITFIKFYAPWC
GHCRTLAPTWEELSKKEFPGLAGVKIAEVDCTAERNICSKYSVRGYPTLLLFRGGKKVSEHSGGRDLDSL
HRFVLSQAKDEL
<210>46
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>46
46>Ly667S，Old-SEQ-ID_9413，部分cDNA
ccagccagtgacagaaaaaagagtgaatgtgcctttaagaagaagagcaatgagacacag
tgtttcaacttcatccgtgtcctggtttcttacaatgtcacccatctctacacctgcggc
accttcgccttcagccctgcttgtaccttcattgaacttcaagattcctacctgttgccc
atctcggaggacaaggtcatggagggaaaaggccaaagcccctttgaccccgctcacaag
catacggctgtcttggtggatgggatgctctattctggtactatgaacaacttcctgggc
agtgagcccatcctgatgcgcacactgggatcccagcctgtcctcaagaccgacaacttc
ctccgctggctgcatcatgacgcctcctttgtggcagccatcccttcgacccaggtcgtc
tacttcttcttcgaggagacagccagcgagtttgacttctttgagaggctccacacatcg
cgggtggctagagtctgcaagaatgacgtgggcggcgaaaagctgctgcagaagaagtgg
accaccttcct
<210>47
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>47
47>Ly667S，脑信号蛋白B，全长
aggatgatgaaagtgagaccgtcttagggcccttccagatagtgaaccttctctgccccaatgccccacc
cctgccaccaatacacacgcttctgctgcctggggctctcctattggtcctcggggggatgtggtaagaa
ctgctcacccagaaagtgcccgggtgcctgtttccccagacctccctggtgacagtctgtggctgagcat
ggccctcccagccctgggcctggacccctggagcctcctgggccttttcctcttccaactgcttcagctg
ctgctgccgacgacgaccgcggggggaggcgggcaggggcccatgcccagggtcagatactatgcagggg
atgaacgtagggcacttagcttcttccaccagaagggcctccaggattttgacactctgctcctgagtgg
tgatggaaatactctctacgtgggggctcgagaagccattctggccttggatatccaggatccaggggtc
cccaggctaaagaacatgataccgtggccagccagtgacagaaaaaagagtgaatgtgcctttaagaaga
agagcaatgagacacagtgtttcaacttcatccgtgtcctggtttcttacaatgtcacccatctctacac
ctgcggcaccttcgccttcagccctgcttgtaccttcattgaacttcaagattcctacctgttgcccatc
tcggaggacaaggtcatggagggaaaaggccaaagcccctttgaccccgctcacaagcatacggctgtct
tggtggatgggatgctctattctggtactatgaacaacttcctgggcagtgagcccatcctgatgcgcac
actgggatcccagcctgtcctcaagaccgacaacttcctccgctggctgcatcatgacgcctcctttgtg
gcagccatcccttcgacccaggtcgtctacttcttcttcgaggagacagccagcgagtttgacttctttg
agaggctccacacatcgcgggtggctagagtctgcaagaatgacgtgggcggcgaaaagctgctgcagaa
gaagtggaccaccttcctgaaggcccagctgctctctgcacccagccggggcagctgcccttcaacgtca
tccgccacgcggtcctgctccccgccgattctcccacagctccccacatctacgcagtcttcacctccca
gtgggcaggttggcgggaccaggagctctgcggtttgtgccttctctctcttggacattgaacgtgtctt
taaggggaaattcaaagagttgaacaaagaaacttcacgctggactacttataggggccctgagaccaac
ccccggccaggcagttgctcagtgggcccctcctctgataaggccctgaccttcatgaaggaccatttcc
tgatggatgagcaagtggtggggacgcccctgctggtgaaatctggcgtggagtatacacggcttgcagt
ggagacagcccagggccttgatgggcacagccatcttgtcatgtacctgggaaccaccacagggtcgctc
cacaaggctgtggtaagtggggacagcagtgctcatctggtggaagagattcagctgttccctgaccctg
aacctgttcgcaacctgcagctggcccccacccagggtgcagtgtttgtaggcttctcaggaggtgtctg
gagggtgccccgagccaactgtagtgtctatgagagctgtgtggactgtgtccttgcccgggacccccac
tgtgcctgggaccctgagtcccgaacctgttgcctcctgtctgcccccaacctgaactcctggaagcagg
acatggagcgggggaacccagagtgggcatgtgccagtggccccatgagcaggagccttcggcctcagag
ccgcccgcaaatcattaaagaagtcctggctgtccccaactccatcctggagctcccctgcccccacctg
tcagccttggcctcttattattggagtcatggcccagcagcagtcccagaagcctcttccactgtctaca
atggctccctcttgctgatagtgcaggatggagttgggggtctctaccagtgctgggcaactgagaatgg
cttttcataccctgtgatctcctactgggtggacagccaggaccagaccctggccctggatcctgaactg
gcaggcatcccccgggagcatgtgaaggtcccgttgaccagggtcagtggtggggccgccctggctgccc
agcagtcctactggccccactttgtcactgtcactgtcctctttgccttagtgctttcaggagccctcat
catcctcgtggcctccccattgagagcactccgggctcggggcaaggttcagggctgtgagaccctgcgc
cctggggagaaggccccgttaagcagagagcaacacctccagtctcccaaggaatgcaggacctctgcca
gtgatgtggacgctgacaacaactgcctaggcactgaggtagcttaaactctaggcacaggccggggctg
cggtgcaggcacctggccatgctggctgggcggcccaagcacagccctgactaggatgacagcagcacaa
aagaccacctttctcccctgagaggagcttctgctactctgcatcactgatgacactcagcagggtgatg
cacagcagtctgcctcccctatgggactcccttctaccaagcacatgagctctctaacagggtgggggct
acccccagacctgctcctacactgatattgaagaacctggagaggatccttcagttctggccattccagg
gaccctccagaaacacagtgtttcaagagaccctaaaaaacctgcctgtcccaggaccctatggtaatga
acaccaaacatctaaacaatcatatgctaacatgccactcctggaaactccactctgaagctgccgcttt
ggacaccaacactcccttctcccagggtcatgcagggatctgctccctcctgcttcccttaccagtcgtg
caccgctgactcccaggaagtctttcctgaagtctgaccacctttcttcttgcttcagttggggcagact
ctgatcccttctgccctggcagaatggcaggggtaatctgagccttcttcactcctttaccctagctgac
cccttcacctctccccctccctcttcctttgttttgggattcagaaaactgcttgtcagagactgtttat
tttttattaaaaatataaggcttatgtatgat
<210>48
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>48
48>Ly667S，脑信号蛋白B，全长
MALPALGLDPWSLLGLFLFQLLQLLLPTTTAGGGGQGPMPRVRYYAGDERRALSFFHQKGLQDFDTLLLS
GDGNTLYVGAREAILALDIQDPGVPRLKNMIPWPASDRKKSECAFKKKSNETQCFNFIRVLVSYNVTHLY
TCGTFAPSPACTFIELQDSYLLPISEDKVMEGKGQSPFDPAHKHTAVLVDGMLYSGTMNNFLGSEPILMR
TLGSQPVLKTDNFLRWLHHDASFVAAIPSTQVVYFFFEETASEFDFFERLHTSRVARVCKNDVGGEKLLQ
KKWTTFLKAQLLSAPSRGSCPSTSSATRSCSPPILPQLPTSTQSSPPSGQVGGTRSSAVCAFSLLDIERV
FKGKFKELNKETSRWTTYRGPETNPRPGSCSVGPSSDKALTFMKDHFLMDEQVVGTPLLVKSGVEYTRLA
VETAQGLDGHSHLVMYLGTTTGSLHKAVVSGDSSAHLVEEIQLFPDPEPVRNLQLAPTQGAVFVGFSGGV
WRVPRANCSVYESCVDCVLARDPHCAWDPESRTCCLLSAPNLNSWKQDMERGNPEWACASGPMSRSLRPQ
SRPQIIKEVLAVPNSILELPCPHLSALASYYWSHGPAAVPEASSTVYNGSLLLIVQDGVGGLYQCWATEN
GFSYPVISYWVDSQDQTLALDPELAGIPREHVKVPLTRVSGGAALAAQQSYWPHFVTVTVLFALVLSGAL
IILVASPLRALRARGKVQGCETLRPGEKAPLSREQHLQSPKECRTSASDVDADNNCLGTEVA
<210>49
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>49
49>Ly677S，Old-SEQ-ID_465，部分cDNA
accagcagtcctgcggcacctacctccgcgtgcgccagccgccccccaggcccttcctgg
acatgggggagggcaccaagaaccgaatcatcacagccgaggggatcatcctcctgttct
gcgcggtggtgcctgggacgctgctgctgttnaggaaacgatggcaagaacganaactcn
gg
<210>50
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>50
50>Ly677S，Old-SEQ-ID_1923，全长蛋白质
QQSCGTYLRVRQPPPRPFLDMGEGTKNRIITAEGIILLFCAVVPGTLLLXRKRWQERXLX
<210>51
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>51
51>Ly677S，Old-SEQ-ID_5989，部分cDNA
accagcagtcctgcggcacctacctccgcgtgcgccagccgccccccaggcccttcctgg
acatgggggagggcaccaagaaccgaatcatcacagccgaggggatcatcctcctgttct
gcgcggtggtgcctgggacgctgctgctgttnaggaaacgatggcaagaacganaactcn
gg
<210>52
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>52
52>Ly677S，Old-SEQ-ID_1496，部分蛋白质
QQSCGTYLRVRQPPPRPFLDMGEGTKNRIITAEGIILLFCAVVPGTLLLXRKRWQERXLX
<210>53
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>53
53>Ly677S，CD79A抗原(免疫球蛋白相关的α)，全长
tgctgcaactcaaactaaccaacccactgggagaagatgcctgggggtccaggagtcctccaagctctgc
ctgccaccatcttcctcctcttcctgctgtctgctgtctacctgggccctgggtgccaggccctgtggat
gcacaaggtcccagcatcattgatggtgagcctgggggaagacgcccacttccaatgcccgcacaatagc
agcaacaacgccaacgtcacctggtggcgcgtcctccatggcaactacacgtggccccctgagttcttgg
gcccgggcgaggaccccaatggtacgctgatcatccagaatgtgaacaagagccatgggggcatatacgt
gtgccgggtccaggagggcaacgagtcataccagcagtcctgcggcacctacctccgcgtgcgccagccg
ccccccaggcccttcctggacatgggggagggcaccaagaaccgaatcatcacagccgaggggatcatcc
tcctgttctgcgcggtggtgcctgggacgctgctgctgttcaggaaacgatggcagaacgagaagctcgg
gttggatgccggggatgaatatgaagatgaaaacctttatgaaggcctgaacctggacgactgctccatg
tatgaggacatctcccggggcctccagggcacctaccaggatgtgggcagcctcaacataggagatgtcc
agctggagaagccgtgacacccctactcctgccaggctgcccccgcctgctgtgcacccagctccagtgt
ctcagctcacttccctgggacattctcctttcagcccttctgggggcttccttagtcatattcccccagt
ggggggtgggagggtaacctcactcttctccaggccaggcctccttggactcccctgggggtgtcccact
cttcttccctctaaactgccccacctcctaacctaatccccacgccccgctgcctttcccaggctcccct
cacccagcgggtaatgagcccttaatcgctgcctctaggggagctgattgtagcagcctcgttagtgtca
ccccctcctccctgatctgtcagggccacttagtgataataaattcttcccaactgc
<210>54
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>54
54>Ly677S，CD9A抗原，完全蛋白质
MPGGPGVLQALPATIFLLFLLSAVYLGPGCQALWMHKVPASLMVSLGEDAHFQCPHNSSNNANVTWWRVL
HGNYTWPPEFLGPGEDPNGTLIIQNVNKSHGGIYVCRVQEGNESYQQSCGTYLRVRQPPPRPFLDMGEGT
KNRIITAEGIILLFCAVVPGTLLLFRKRWQNEKLGLDAGDEYEDENLYEGLNLDDCSMYEDISRGLQGTY
QDVGSLNIGDVQLEKP
<210>55
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>55
55>Ly1891P，孤独G-蛋白偶联的受体(GPRC5D)，全长
atgtacaaggactgcatcgagtccactggagactattttcttctctgtgacgccgaggggccatggggca
tcattctggagtccctggccatacttggcatcgtggtcacaattctgctactcttagcatttctcttcct
catgcgaaagatccaagactgcagccagtggaatgtcctccccacccagctcctcttcctcctgagtgtc
ctggggctcttcggactcgcttttgccttcatcatcgagctcaatcaacaaactgcccccgtacgctact
ttctctttggggttctctttgctctctgtttctcatgcctcttagctcatgcctccaatctagtgaagct
ggttcggggttgtgtctccttctcctggacgacaattctgtgcattgctattggttgcagtctgttgcaa
atcattattgccactgagtatgtgactctcatcatgaccagaggtatgatgtttgtgaatatgacaccct
gccagctcaatgtggactttgttgtactcctggtctatgtcctcttcctgatggccctcacattcttcgt
ctccaaagccaccttctgtggcccgtgtgagaactggaagcagcatggaaggctcatctttatcactgtg
ctcttctccatcatcatctgggtggtgtggatctccatgctcctgagaggcaacccgcagttccagcgac
agccccagtgggacgacccggtcgtctgcattgctctggtcaccaacgcatgggttttcctgctgctgta
catcgtccctgagctctgcattctctacagatcgtgtagacaggagtgccctttacaaggcaatgcctgc
cccgtcacagcctaccaacacagcttccaagtggagaaccaggagctctccagagcccgagacagtgatg
gagctgaggaggatgtagcattaacttcatatggtactcccattcagccgcagactgttgatcccacaca
agagtgtttcatcccacaggctaaactaagcccccagcaagatgcaggaggagtataa
<210>56
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>56
56>Ly1891P，孤独G-蛋白偶联的受体(GPRC5D)，全长
MYKDCIESTGDYFLLCDAEGPWGIILESLAILGIVVTILLLLAFLFLMRKIQDCSQWNVLPTQLLFLLSV
LGLFGLAFAFIIELNQQTAPVRYFLFGVLFALCFSCLLAHASNLVKLVRGCVSFSWTTILCIAIGCSLLQ
IIIATEYVTLIMTRGMMFVNMTPCQLNVDFVVLLVYVLFLMALTFFVSKATFCGPCENWKQHGRLIFITV
LFSIIIWVVWISMLLRGNPQFQRQPQWDDPVVCIALVTNAWVFLLLYIVPELCILYRSCRQECPLQGNAC
PVTAYQHSFQVENQELSRARDSDGAEEDVALTSYGTPIQPQTVDPTQECFIPQAKLSQQQDAGGV
<210>57
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>57
57>CD138，多配聚糖1(SDC1)，全长cDNA
ggcacgaggaagggcctgtgggtttattataaggcggagctcggcgggagaggtgcgggccgaatccgag
ccgagcggagaggaatccggcagtagagagcggactccagccggcggaccctgcagccctcgcctgggac
agcggcgcgctgggcaggcgcccaagagagcatcgagcagcggaacccgcgaagccggcccgcagccgcg
acccgcgcagcctgccgctctcccgccgccggtccgggcagcatgaggcgcgcggcgctctggctctggc
tgtgcgcgctggcgctgagcctgcagccggccctgccgcaaattgtggctactaatttgccccctgaaga
tcaagatggctctggggatgactctgacaacttctccggctcaggtgcaggtgctttgcaagatatcacc
ttgtcacagcagaccccctccacttggaaggacacgcagctcctgacggctattcccacgtctccagaac
ccaccggcctggaggctacagctgcctccacctccaccctgccggctggagaggggcccaaggagggaga
ggctgtagtcctgccagaagtggagcctggcctcaccgcccgggagcaggaggccaccccccgacccagg
gagaccacacagctcccgaccactcatcaggcctcaacgaccacagccaccacggcccaggagcccgcca
cctcccacccccacagggacatgcagcctggccaccatgagacctcaacccctgcaggacccagccaagc
tgaccttcacactccccacacagaggatggaggtccttctgccaccgagagggctgctgaggatggagcc
tccagtcagctcccagcagcagagggctctggggagcaggacttcacctttgaaacctcgggggagaata
cggctgtagtggccgtggagcctgaccgccggaaccagtccccagtggatcagggggccacgggggcctc
acagggcctcctggacaggaaagaggtgctgggaggggtcattgccgtaggcctcgtggggctcatcttt
gctgtgtgcctggtgggtttcatgctgtaccgcatgaagaagaaggacgaaggcagctactccttggagg
agccgaaacaagccaacggcggggcctaccagaagcccaccaaacaggaggaattctatgcctgacgcgg
gagccatgcgccccctccgccctgccactcactaggcccccacttgcctcttccttgaagaactgcaggc
cctggcctcccctgccaccaggccacctccccagcattccagcccctctggtcgctcctgcccacggagt
cgtggggtgtgctgggagctccactctgcttctctgacttctgcctggagacttagggcaccaggggttt
ctcgcataggacctttccaccacagccagcacctggcatcgcaccattctgactcggtttctccaaactg
aagcagcctctccccaggtccagctctggaggggagggggatccgactgctttggacctaaatggcctca
tgtggctggaagatcctgcgggtggggcttggggctcacacacctgtagcacttactggtaggaccaagc
atcttgggggggtggccgctgagtggcaggggacaggagtccactttgtttcgtggggaggtctaatcta
gatatcgacttgtttttgcacatgtttcctctagttctttgttcatagcccagtagaccttgttacttct
gaggtaagttaagtaagttgattcggtatccccccatcttgcttccctaatctatggtcgggagacagca
tcagggttaagaagactttttttttttttttttttaaactaggagaaccaaatctggaagccaaaatgta
ggcttagtttgtgtgttgtctcttgagtttgtcgctcatgtgtgcaacagggtatggactatctgtctgg
tggccccgtttctggtggtctgttggcaggctggccagtccaggctgccgtggggccgccgcctctttca
agcagtcgtgcctgtgtccatgcgctcagggccatgctgaggcctgggccgctgccacgttggagaagcc
cgtgtgagaagtgaatgctgggactcagccttcagacagagaggactgtagggagggcggcaggggcctg
gagatcctcctgcagaccacgcccgtcctgcctgtggcgccgtctccaggggctgcttcctcctggaaat
tgacgaggggtgtcttgggcagagctggctctgagcgcctccatccaaggccaggttctccgttagctcc
tgtggccccaccctgggccctgggctggaatcaggaatattttccaaagagtgatagtcttttgcttttg
gcaaaactctacttaatccaatgggtttttccctgtacagtagattttccaaatgtaataaactttaata
taaagta
<210>58
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>58
58>CD138，多配聚糖1(SDC1)，全长蛋白质
MRRAALWLWLCALALSLQPALPQIVATNLPPEDQDGSGDDSDNFSGSGAGALQDITLSQQTPSTWKDTQL
LTAIPTSPEPTGLEATAASTSTLPAGEGPKEGEAVVLPEVEPGLTAREQEATPRPRETTQLPTTHQASTT
TATTAQEPATSHPHRDMQPGHHETSTPAGPSQADLHTPHTEDGGPSATERAAEDGASSQLPAAEGSGEQD
FTFETSGENTAVVAVEPDRRNQSPVDQGATGASQGLLDRKEVLGGVIAVGLVGLIFAVCLVGFMLYRMKK
KDEGSYSLEEPKQANGGAYQKPTKQEEFYA
<210>59
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>59
59>CD22，Old-SEQ-ID_4021，部分cDNA
ctggggctgaggatggagtccaagactgagaaatggatggaacgaatacacctcaatgtc
tctgaagggccttttccacctcatatccagctccctccagaaattcaagagtcccaggaa
gtcactctgacctgcttgctgaatttctcctgctatgggtatccgatccaattgcagtgg
ctcctagagggggttccaatgaggcaggctgctgtcacctcgacctccttgaccatcaag
tctgtcttcacccggagcgagctcaagttctccccacagtggagtcaccatgggaagatt
gtgacctgccagcttcaggatgcagatgggaagttcctctccaatgacacggtgcag
<210>60
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>60
60>CD22，全长cDNA
ccatcccatagtgagggaagacacgcggaaacaggcttgcacccagacacgacaccatgcatctcctcgg
cccctggctcctgctcctggttctagaatacttggctttctctgactcaagtaaatgggtttttgagcac
cctgaaaccctctacgcctgggagggggcctgcgtctggatcccctgcacctacagagccctagatggtg
acctggaaagcttcatcctgttccacaatcctgagtataacaagaacacctcgaagtttgatgggacaag
actctatgaaagcacaaaggatgggaaggttccttctgagcagaaaagggtgcaattcctgggagacaag
aataagaactgcacactgagtatccacccggtgcacctcaatgacagtggtcagctggggctgaggatgg
agtccaagactgagaaatggatggaacgaatacacctcaatgtctctgaaaggccttttccacctcatat
ccagctccctccagaaattcaagagtcccaggaagtcactctgacctgcttgctgaatttctcctgctat
gggtatccgatccaattgcagtggctcctagagggggttccaatgaggcaggctgctgtcacctcgacct
ccttgaccatcaagtctgtcttcacccggagcgagctcaagttctccccacagtggagtcaccatgggaa
gattgtgacctgccagcttcaggatgcagatgggaagttcctctccaatgacacggtgcagctgaacgtg
aagcacaccccgaagttggagatcaaggtcactcccagtgatgccatagtgagggagggggactctgtga
ccatgacctgcgaggtcagcagcagcaacccggagtacacgacggtatcctggctcaaggatgggacctc
gctgaagaagcagaatacattcacgctaaacctgcgcgaagtgaccaaggaccagagtgggaagtactgc
tgtcaggtctccaatgacgtgggcccgggaaggtcggaagaagtgttcctgcaagtgcagtatgccccgg
aaccttccacggttcagatcctccactcaccggctgtggagggaagtcaagtcgagtttctttgcatgtc
actggccaatcctcttccaacaaattacacgtggtaccacaatgggaaagaaatgcagggaaggacagag
gagaaagtccacatcccaaagatcctcccctggcacgctgggacttattcctgtgtggcagaaaacattc
ttggtactggacagaggggcccgggagctgagctggatgtccagtatcctcccaagaaggtgaccacagt
gattcaaaaccccatgccgattcgagaaggagacacagtgaccctttcctgtaactacaattccagtaac
cccagtgttacccggtatgaatggaaaccccatggcgcctgggaggagccatcgcttggggtgctgaaga
tccaaaacgttggctgggacaacacaaccatcgcctgcgcacgttgtaatagttggtgctcgtgggcctc
ccctgtcgccctgaatgtccagtatgccccccgagacgtgagggtccggaaaatcaagcccctttccgag
attcactctggaaactcggtcagcctccaatgtgacttctcaagcagccaccccaaagaagtccagttct
tctgggagaaaaatggcaggcttctggggaaagaaagccagctgaattttgactccatctccccagaaga
tgctgggagttacagctgctgggtgaacaactccataggacagacagcgtccaaggcctggacacttgaa
gtgctgtatgcacccaggaggctgcgtgtgtccatgagcccgggggaccaagtgatggaggggaagagtg
caaccctgacctgtgagagtgacgccaaccctcccgtctcccactacacctggtttgactggaataacca
aagcctcccccaccacagccagaagctgagattggagccggtgaaggtccagcactcgggtgcctactgg
tgccaggggaccaacagtgtgggcaagggccgttcgcctctcagcacccttactgtctactatagcccgg
agaccatcggcaggcgagtggctgtgggactcgggtcctgcctcgccatcctcatcctggcaatctgtgg
gctcaagctccagcgacgttggaagaggacacagagccagcaggggcttcaggagaattccagcggccag
agcttctttgtgaggaataaaaaggttagaagggcccccctctctgaaggcccccactccctgggatgct
acaatccaatgatggaagatggcattagctacaccaccctgcgctttcccgagatgaacataccacgaac
tggagatgcagagtcctcagagatgcagagacctccccggacctgcgatgacacggtcacttattcagca
ttgcacaagcgccaagtgggcgactatgagaacgtcattccagattttccagaagatgaggggattcatt
actcagagctgatccagtttggggtcggggagcggcctcaggcacaagaaaatgtggactatgtgatcct
caaacattgacactggatgggctgcagcagaggcactgggggcagcgggggccagggaagtccccgagtt
tccccagacaccgccacatggcttcctcctgcgtgcatgtgcgcacacacacacacacacgcacacacac
acacacacactcactgcggagaaccttgtgcctggctcagagccagtctttttggtgagggtaaccccaa
acctccaaaactcctgcccctgttctcttccactctccttgctacccagaaatcatctaaatacctgccc
tgacatgcacacctcccctgccccaccagcccactggccatctccacccggagctgctgtgtcctctgga
tctgctcgtcattttccttcccttctccatctctctggccctctacccctgatctgacatccccactcac
gaatattatgcccagtttctgcctctgagggaaagcccagaaaaggacagaaacgaagtagaaaggggcc
cagtcctggcctggcttctcctttggaagtgaggcattgcacggggagacgtacgtatcagcggcccctt
gactctggggactccgggtttgagatggacacactggtgtggattaacctgccagggagacagagctcac
aataaaaatggctcagatgccacttcaaagaaaaaaaaaa
<210>61
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>61
61>CD22，全长蛋白质.
MHLLGPWLLLLVLEYLAFSDSSKWVFEHPETLYAWEGACVWIPCTYRALDGDLESFILFHNPEYNKNTSK
FDGTRLYESTKDGKVPSEQKRVQFLGDKNKNCTLSIHPVHLNDSGQLGLRMESKTEKWMERIHLNVSERP
FPPHIQLPPEIQESQEVTLTCLLNFSCYGYPIQLQWLLEGVPMRQAAVTSTSLTIKSVFTRSELKFSPQW
SHHGKIVTCQLQDADGKFLSNDTVQLNVKHTPKLEIKVTPSDAIVREGDSVTMTCEVSSSNPEYTTVSWL
KDGTSLKKQNTFTLNLREVTKDQSGKYCCQVSNDVGPGRSEEVFLQVQYAPEPSTVQILHSPAVEGSQVE
FLCMSLANPLPTNYTWYHNGKEMQGRTEEKVHIPKILPWHAGTYSCVAENILGTGQRGPGAELDVQYPPK
KVTTVIQNPMPIREGDTVTLSCNYNSSNPSVTRYEWKPHGAWEEPSLGVLKIQNVGWDNTTIACARCNSW
CSWASPVALNVQYAPRDVRVRKIKPLSEIHSGNSVSLQCDFSSSHPKEVQFFWEKNGRLLGKESQLNFDS
ISPEDAGSYSCWVNNSIGQTASKAWTLEVLYAPRRLRVSMSPGDQVMEGKSATLTCESDANPPVSHYTWF
DWNNQSLPHHSQKLRLEPVKVQHSGAYWCQGTNSVGKGRSPLSTLTVYYSPETIGRRVAVGLGSCLAILI
LAICGLKLQRRWKRTQSQQGLQENSSGQSFFVRNKKVRRAPLSEGPHSLGCYNPMMEDGISYTTLRFPEM
NIPRTGDAESSEMQRPPRTCDDTVTYSALHKRQVGDYENVIPDFPEDEGIHYSELIQFGVGERPQAQENV
DYVILKH
<210>62
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>62
62>CD79β，Old-SEQ-ID_504，部分cDNA
ctggggggtccgggaaaggggttgggccatgagccaggcagctccgaagcagtcactgag
gccagggagcctgcacccaggtcatggggcgacctggctctcactcctggcctgggtgct
cacctacagaccacttcacttcccctgtccgcagcgtcactatgtcctcataggtggctg
tctggtcaatgtccaggccctcgtaggtgtgatcttcctccatgccagccttgctgtcat
ccttgtccagcagcaggaagataggcacgatgatgaagaggatgatcagcagcgtctgga
tcatgatgataccatccttcagcgtgttcctctgcttcag
<210>63
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>63
63>CD79β，Old-SEQ-ID_1747，部分蛋白质
LKQRNTLKDGIIMIQTLLIILFIIVPIFLLLDKDDSKAGMEEDHTYEGLDIDQTATYEDI
VTLRTGEVKWSVGEHPGQE
<210>64
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>64
64>CD79β，Old-SEQ-ID_5238，部分cDNA
ctggggggtccgggaaaggggttgggccatgagccaggcagctccgaagcagtcactgag
gccagggagcctgcacccaggtcatggggcgacctggctctcactcctggcctgggtgct
cacctacagaccacttcacttcccctgtccgcagcgtcactatgtcctcataggtggctg
tctggtcaatgtccaggccctcgtaggtgtgatcttcctccatgccagccttgctgtcat
ccttgtccagcagcaggaagataggcacgatgatgaagaggatgatcagcagcgtctgga
tcatgatgataccatccttcagcgtgttcctctgcttcag
<210>65
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>65
65>CD79β，全长cDNA
ccacgcgtccgcctacgcgtccgcagagcggtgaccatggccaggctggcgttgtctcctgtgcccagcc
actggatggtggcgttgctgctgctgctctcagctgagccagtaccagcagccagatcggaggaccggta
ccggaatcccaaaggtagtgcttgttcgcggatctggcagagcccacgtttcatagccaggaaacggggc
ttcacggtgaaaatgcactgctacatgaacagcgcctccggcaatgtgagctggctctggaagcaggaga
tggacgagaatccccagcagctgaagctggaaaagggccgcatggaagagtcccagaacgaatctctcgc
caccctcaccatccaaggcatccggtttgaggacaatggcatctacttctgccagcagaagtgcaacaac
acctcggaggtctaccagggctgcggcacagagctgcgagtcatgggattcagcaccttggcacagctga
agcagaggaacacgctgaaggatggtatcatcatgatccagacgctgctgatcatcctcttcatcatcgt
gcctatcttcctgctgctggacaaggatgacagcaaggctggcatggaggaagatcacacctacgagggc
ctggacattgaccagacagccacctatgaggacatagtgacgctgcggacaggggaagtgaagtggtctg
taggtgagcacccaggccaggagtgagagccaggtcgccccatgacctgggtgcaggctccctggcctca
gtgactgcttcggagctgcctggctcatggcccaacccctttcccggaccccccagctggcctctgaagc
tggcccaccagagctgccatttgtctccagcccctggtccccagctcttgccaaagggcctggagtagaa
ggacaacagggcagcaacttggagggagttctctggggatggacgggacccagccttctgggggtgctat
gaggtgatccgtccccacacatgggatgggggaggcagagactggtccagagcccgcaaatggactcgga
gccgagggcctcccagcagagcttgggaagggccatggacccaactgggccccagaagagccacaggaac
atcattcctctcccgcaaccactcccaccccagggaggccctggcctccagtgccttcccccgtggaata
aacggtgtgtcctgagaaaccaaaaaaaaaaaaaaa
<210>66
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>66
66>CD79β，全长蛋白质
MARLALSPVPSHWMVALLLLLSAEPVPAARSEDRYRNPKGSACSRIWQSPRFIARKRGFTVKMHCYMNSA
SGNVSWLWKQEMDENPQQLKLEKGRMEESQNESLATLTIQGIRFEDNGIYFCQQKCNNTSEVYQGCGTEL
RVMGFSTLAQLKQRNTLKDGIIMIQTLLIILFIIVPIFLLLDKDDSKAGMEEDHTYEGLDIDQTATYEDI
VTLRTGEVKWSVGEHPGQE
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<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>67
67>Ly1450P，Old-SEQ-ID_6695，部分cDNA
aaaattgatcacaacnagggaaaacaaaataaaattagggggcaaagggtaggagtatgg
ggggaggggagagcaaacctatcgaatatatcttagaattttgctcagaaatcactgctg
cctctcaagtgttgcattgtccctgcctaaaccaagaaggctaaacaaagcccctcctgt
ttgaattcttaaggtaagaaatttctaagctaagaaaacactattgcctaaaaccaatga
tagtggagctcatttacaaataggcatgcctcacacacacagtccaaaggcaagacactg
gctttgaaattaggctcatgatgtgattcctattatatgtacctgatttttttaggcccc
aggtatgtggaccagagttaatgtcatgactcttcaaagatatgatgaaaagttgcccta
gaaatctagagatgcatgtttatttaatt
<210>68
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>68
68>Ly1450P，部分cDNA
ctttcaagaaaatacatctgtgctgtattttccccttccctcaggccatgatctctgctgttttccttactaactggcat
gtcagtacaagagtgattgtgaagctgctccggaagggctttatgctaacctctgttgcttgatgacatgtcctcaggac
tctgatattaaaactcaatccttagataacaggtagctttatcatggaagtaggtagcaatttggaattagaccattctt
agttatttttttcttaatgaattgatacatgcactttaaaaaatatttttgttattttgggaagaaaaactcagactttt
aaaaaagtgtatattgtcccattataatatgtatatggaagagtgaaatctgaacgctgtcttatattaagcagtagaat
taggtattatcataaaaagtcttaatctgtagggaatatgagtttatgtttatgagtcctgctcagtccctctttgagag
aattagttgaaacccagactctaaagtctgcttttatatttgtttgttaagaccacttatctgcagaaggttgcctttta
accccagtggttctaaggtgtggaattgagtgaccctaatatttacataagagacttgttttagtggagcataagggagg
ggcataagttacaccgttttgtgctgcttgagaactgtcttttaaaattgatcacaacgagggaaaacaaaataatatta
gggggcaaagggtaggagtatggggggaggggagagcaaacctatcgaatatatcttagaattttgctcagaaatcactg
ctgcctctcaagtgttgcattgtccctgcctaaaccaagaaggctaaacaaagcccctcctgtttgaattcttaaggtaa
gaaatttctaagctaagaaaacactattgcctaaaaccaatgatagtggagctcatttacaaataggcatgcctcacaca
cacagtccaaaggcaagacactggctttgaaattaggctcatgatgtgattcctattatatgtacctgatttttttaggc
cccaggtatgtggaccagagttaatgtcatgactcttcaaagatatgatgaaaagttgccctagaaatctagagatgcat
gtttatttaattccatagtttaaaaaaaaatttaagcaggtagttgtggcttatctgggggcaaaataatatatgtgaaa
ttgcttccagaggacaaagtatattttctaaagtcctgaaataggatcatgaacccttctgaagttttggtttgaaatat
tatagtatatgatattaccaaagagcccttaattcagagtttaaggggctctcttcctgaactctcttcatcactcaggg
ttgaatgtgtaatgttccttgctattgattgttattgttgattcttaggatcaggccaagaatcatctggaaaacattat
cttaattccgtctctcatatcctaaacagtacattttactaagaaattccatatgaaaaactccactcatgtctcctgag
attatcctgtaagtgaagtagctttcatttaaccaagctaaattatttccatttagccatgttaaagagaagccaagtct
agagaaagcaatcctgtaacccatgaatctggtgtacccattttcccttaacgtaacgggaagtgttttgaaattcccag
aagagagctgttttgtaatcaaagtgatggattataagaaagccagactttggaaaaggataattggaataaagggaggt
gcttgaagattttccaaactactttatgtcatttagcttctattttctgaagggctttctttggtgccatgtactcagat
cagtcagttgactgaaagatgatcatgttttcttcgtaaagatttaagcaattggcaactacaaagacattattttctta
ctgttctatatcatgtactgttgctgacattacaaaaagggtctggaagggaaaccgtgtcactgttttatcttttttct
ttaaaatacaaaagtatcccaactaatcatttattatggtcagcttgttttacatgtcccctatgatgagaaatgctatc
aacatctgtgatttctaagagtcttaccaaattgttactttaattcttgtgtcctgctgagtggtttttcttttaaaata
ccatttttatcaccctgtggcactgggtgtgttactgcgattacactgatgattctgagctgtgcttcttcaagtagctc
agttcttgcgttttatattaggtaacagttttgtgatgcttttgtgcattctttgtcatctcttctgagttttcgaatct
gtcataaataaactttttcactatgcacctggtaaaaaa
<210>69
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>69
69>Ly1451P，Old-SEQ-ID_3507，部分cDNA
cctaagccgcctaaggggctgcctcggctgtccatcagttacctcgtttcctgagcagag
taattgggtgagattgttcatggaggcattgctggctctctagtcctggaacctacagtt
ggtccaattcattatgccaaagggtccgtctaggaggttcttgttccaagtattgagatt
cccgagagaagtaggtccccttagatagaagcagagtttctcagaggtatttagcagcag
<210>70
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>70
70>Ly1451P，部分cDNA
gccgctgccgctccaggagacaggttcccatgcaggaatgaaagacatggaagggaagag
gggggccagctccctgagtcctgtgtccaccagctgctgctaaatacctctgagaaactc
tgcttctatctaaggggacctacttctctcgggaatctcaatacttggaacaagaacctc
ctagacggaccctttggcataatgaattggaccaactgtaggttccaggactagagagcc
agcaatgcctccatgaacaatctcacccaattactctgctcaggaaacgaggtaactgat
ggacagccgaggcagccccttaggcggcttaggcctcccctgtggagcatccctgaggcg
gactccggccagcccgagtgatgcgatccaaagagcactcccgggtaggaaattgccccg
gtggaatgcctcaccagagcagcgtgtagcagttccctgtggaggattaacacagtggct
gaacaccgggaaggaactggcacttggagtccggacatctgaaacttgtagactgggagc
tgtacatggatgggagcagcttcaccaacccctgcaaagtgactctgaagaagacgacaa
gccctgctccagtcacacccggaagctgactggtccacgcacagctgaagcatgaggaaa
ctcatcgcgggactaattttccttaaaatttagacttgcacagtaaggacttcaactgac
cttcctcagactgagaactgtttccagtatatacatcaagtcactgaggtaggacaaaag
attgctacattcctattattttaaggttacatttttggggacccctctttcttctgttct
agctattacctttcttgtgtcacctagaaaaggaccagtccttaattgtattttaaaaac
tgtgatcatgggaagctttaaattggttcaataacacgcatcaagttggttatttcctgg
gctacataccttggatagat
71>Ly1451P，部分蛋白质
MDSRGSPLGGLGLPCGASLRRTPASPSDAIQRALPGRKLPRWNASPEQRVAVPCGGLTQWLNTGKELALGVRTSETCRLG
AVHGWEQLHQPLQSDSEEDDKPCSSHTRKLTGPRTAEA
72>Ly1454P，Old-SEQ-ID_3577，部分cDNA
aaaaaggtaattttcagcattttggcacctaaaagggaaactttcatctgcttacacagg
ccagaagcaaagacaaagattgcatgttgttcttacagatgacttaaatcatctctttga
tgataaaaatatttttaagccgtgaaagttatgagatattctgggtaagcctgattatca
aagaataccacaaatagctttggagatcgtgtattgtttgtcactgagtcaaagagatct
gtgggattgtgaggattcttgggtggaggggtgactaatcctgcacgtccctttgtgaag
actccagtaagtactcgcacaacgtacatgtgctttctcccattgctgtctggcttggag
taggtgtccttggcagaataactggcatccacagcaaaataggttccttttccataggat
acagcatttttcccacacaacttctattaaagccgtgctgattgacatatggcactgagt
ctgcatctgtcccatggaagaggagtctctcattattcntatggtcattct
73>Ly1454P，FLJ40597，全长cDNA
attgttatcaactctttgatatctgatgatcaatgctccaaagaattggattaatatttttacacaatat
tgttgtagtcagtaactgtttctatttccaggcatttttagatgaattcactaactggtcaagaataaat
cccaacaaggccaggattcccatggcaggagatacccaaggtgtggtcgggactgtctctaagccttgtt
tcacagcatatgaaatgaaaatcggtgcaattacttttcaggttgctactggagatatagccactgaaca
ggtagatgttattgtaaactcaacagcaaggacatttaatcggaaatcaggtgtgtcaagagctatttta
gaaggtgctggacaagctgtggaaagtgaatgtgctgtactagctgcacagcctcacagagattttataa
ttacaccaggtggatgcttaaagtgcaaaataataattcatgttcctgggggaaaagatgtcaggaaaac
ggtcaccagtgttctagaagagtgtgaacagaggaagtacacatcggtttcccttccagccattggaaca
ggaaatgccggaaaaaaccctatcacagttgctgataacataatcgatgctattgtagacttctcatcac
aacattccaccccatcattaaaaacagttaaagttgtcatttttcaacctgagctgctaaatatattcta
cgacagcatgaaaaaaagagacctctctgcatcactgaactttcagtccacattctccatgactacatgt
aatcttcctgaacactggactgacatgaatcatcagctgttttgcatggtccagctagagccaggacaat
cagaatataataccataaaggacaagttcacccgaacttgttcttcctacgcaatagagaagattgagag
gatacagaatgcatttctctggcagagctaccaggtaaagaaaaggcaaatggatatcaagaatgaccat
aagaataatgagagactcctcttccatgggacagatgcagactcagtgccatatgtcaatcagcacggct
ttaatagaagttgtgctgggaaaaatgctgtatcctatggaaaaggaacctattttgctgtggatgccag
ttattctgccaaggacacctactccaagccagacagcaatgggagaaagcacatgtacgttgtgcgagta
cttactggagtcttcacaaagggacgtgcaggattagtcacccctccacccaagaatcctcacaatccca
cagatctctttgactcagtgacaaacaatacacgatctccaaagctatttgtggtattctttgataatca
ggcttacccagaatatctcataactttcacggcttaaaaatatttttatcatcaaagagatgatttaagt
catctgtaagaacaacatgcaatctttgtctttgcttctggcctgtgtaagcagatgaaagtttcccttt
taggtgccaaaatgctgaaaattacctttttaaagtgctctattgctgcgatttgtagcatacctttttt
tctcagcaaattgatgggtggaagctgagaaatgtatggtaaatgtcacagagctacaaccattcacaga
caccaaatctctaggagaataaaaagcacattattctttttctatcagaaaaaaacaagatgcatcacct
taaaaccaagatgacattgttcttcttggaacatgttaagacatcgaatggtggcgggttaaactgtact
gcttaagtggagcggctaccgttatgcatctatcacagttggggattttgccttattaaggaaaacttgt
caatagttcagctgaaatgactgaatcacagaatattaactctgttatggaacaaatcataacagatttt
acctgtttacatttcaggtaaaaatgtatcgcattgttatctaatattaaaaaattacccccaatt
74>Ly1454P，FLJ40597，全长蛋白质
MLQRIGLIFLHNIVVVSNCFYFQAFLDEFTNWSRINPNKARIPMAGDTQGVVGTVSKPCFTAYEMKIGAI
TFQVATGDIATEQVDVIVNSTARTFNRKSGVSRAILEGAGQAVESECAVLAAQPHRDFIITPGGCLKCKI
IIHVPGGKDVRKTVTSVLEECEQRKYTSVSLPAIGTGNAGKNPITVADNIIDAIVDFSSQHSTPSLKTVK
VVIFQPELLNIFYDSMKKRDLSASLNFQSTFSMTTCNLPEHWTDMNHQLFCMVQLEPGQSEYNTIKDKFT
RTCSSYAIEKIERIQNAFLWQSYQVKKRQMDIKNDHKNNERLLFHGTDADSVPYVNQHGFNRSCAGKNAV
SYGKGTYFAVDASYSAKDTYSKPDSNGRKHMYVVRVLTGVFTKGRAGLVTPPPKNPHNPTDLFDSVTNNT
RSPKLFVVFFDNQAYPEYLITFTA
75>Ly1485P，Old-SEQ-ID 2789，部分cDNA
cgaggtctgagctcctctggttcttctctagacctgctccctctctgaaatgcaaggccg
tgcctttaatgggcttttggcattctgtctccagacctcccttctcatctgaagggctct
caggagaacagagaaaaaaccagcctgtctccaaactggcccgtctcagggactgggggc
ctttacccccagtgaaagatgcagactttacagcgctgcagtacagtagagtcaagtgac
tccttcagatagttggatgggtctctcgatcattcctgataataacattttgcctatgtt
aagtgctttccacctatcatgttaccttctaactactcccttggttggatacaggtatta
gccccatttcacaattaagaaattgaggcttaaaaggattaaagagttttttagaggaga
aacagctcttccttacagaaggatcccaa
76>Ly1485P，Old-SEQ-ID_2417，部分蛋白质
RSHLTLLYCSAVKSASFTGGKGPQSLRRASLETGWFFLCSPESPSDEKGGLETECQKPIK
GTALHFREGAGLEKNQRSS
77>Ly1485P，Old-SEQ-ID_10476，部分cDNA
ggcacgagcaatgggacttatcgctgctgatgttaaccttgatctcttggttcaggtggt
gcctgccagctgtctccactgtggagttactatttttccttttccccattttattcatca
gaagccagtcactaagcgaggtcaaactccaggacaggggaattaagtgccaccttctgg
agagggagcattcacatttattacttgggatccttctgtaaggaagagctgtttctcctc
taaaaaactctttaatccttttaagcctcaatttcttaattgtgaaatggggctaatacc
tgtatccaaccaagggagtagttagaaggtaacatgataggtggaaagcacttaacatag
gcaaaatgttattatcaggaatgatcgagagacccatccaactatctgaaggagtcactt
aactctactgtactgcagcgctgtaaagtctgcatctttcactgggggtaaaggccccca
gtccctgagacgggccagtttggagacaggctggttttttctctgttctcctgagagccc
ttcagatgagaagggaggtctggagacagaatgccaaaagcccattaaaggcacggcctt
gcatttcagagagggagcaggtctagagaagaaccagaggagctcagctgagatatggtg
tatggattggattttggtagaagatgggaagaaccaaacacctgagaaaccactttgaag
atcggggtcagagtaaggcctaacacatagttggctcccagtaattattggttgattgaa
cagctcaaagagcaactcgaccaagaacactggactgggagtccagttacttggatcttg
cattcctgatttatttttattttatatgtattttttctatttttttgagacgaagtctca
ctcactctgtcgcccaggctggactacaatggcacgatctcggctcactgcaaactctgc
ctcccaggttcaagcgattctcctgcctcagcctctcgagtagctaggattacaggcatg
caccaccacgctggctaatttttgtatttttagtagagacggggttttgccatgttggcc
atgctggtgtccacctcctgacctcagttgatcttcctgcctcagccttccaaaatgttg
ggattacaggcgtgagccaccgtgcctggccgtgatttattttttttgtgtatgtttgtt
tttgtcaacttgctgtgtgaccttaagcaagttacttaacttctctgggcttcactttcc
atggatgaacattgtaaagaggctggagagagatgaggactaggtacaggctttagagga
gagccaccgccccggacttctccctctgtcaccccgctttccatgaccctccttgcctga
ctttgtgactccttgcctcgctatcaaaacaagtgctgcaatctcagtgctttccaagag
ccctgcattgttagaaacttcccagcacgcagcaaaggctgctgcaatactcgctctgcc
tgcctttgccctgcgcttcctacttaccctccttttgtttctcccaaacatctgtccctg
actatgctcatctcatgtttgtcctcagctgctgaaagggccacgtttgttttcattaca
aataagaccaccgagtgggctcctggcgtgggggcgggagcagccgcgcgcagtcttcag
aggcagccccccaggctgtctctggagggtgtgtctctgcttccctttccccgtgtttat
tttcagacgaagccaagtggcccggggggaccctccggactcccagccttcagagaggag
ggcagctcgggctttcgccgcagtgcttcctgcccgtcacgtgtgtgctcctagccgggg
tcgggggagctggtatcttggcccttctgggaggacgcgcacagcccgaggaggcagagc
cccagacgggaatgggcttttcagaggtggggtgcgggcgaggggacgatgcattatttt
taatatttgatttatttttccaactggacttcttcccggggctctttctgggcccagctg
cctttgtgatcccgcgccccggtcctcggcctctcacctccagcgccggggcgccccctg
ctgtcggaagcggctgtgaccgggcagaggtgctatctgggactctgggttctcagcccg
gggacagcgaaccgaggggcagatgatccatcagaaaagagccggcactgcccagccccg
cgcccctgcccctgcctttttccgggagcgcgccgcgccgcacccgctacggccgcttga
ccccatctttgagcccggccccaagctctgggaccgtcgtgcccctcatcaaggaagagc
caaggaccccaaggagaaggtcaggagcggcggtgtggatgtcccttggctgcaggcccc
gccgcgcactcccttcagtccttcccttctctagggaccaggtagcatcagtgcctggat
ctcggccttgtgtgccctgctccctgccccacctactaagaaccaagtctggttcaccgg
ctcccaagagctggaacccattctcagctagctgggggcccaggccaccccttccctcca
gacctgtgtgccttctgccctggctccagggccccccacaccgtgaccagggcgggatcc
ctatggggctggccagtcggcaccgtgccaggcccacagtgccctgggcgtccatggaag
tcgttctgtgtctttaaaatcagaaggaagacattaacctttaggctgaagaaaatgttt
tagtacacagcaataacttatttgtctttatccaacagccataaaatataactttaaata
ttctattgatagagaaaggagttcatgaaggcagaaatgcctggggcccacgaacatccc
agtgtggccctggacgggacatcatgctgggcaacacagctaaaatgcgggtgaagacca
gatttcttgcacatggcggtgacgggatgctccctagagagcttcaagtggattctttgc
tttttattttctctcttaataaaaatgtatgatgtttacattgtcagagaaaaaaaaaaa
aaaaaaa
78>Ly1500P，Old-SEQ-ID_5226，部分cDNA
aaagcgaattcatactataacagcagaaacaaaacttcagatttcagaatttgttattgg
caaaatttattctcattatacctgcttcatatgggtatattactattaaaacagaatacc
atagagtaattgcattatttgaaaattctntcattttacaatgcacttcaccaatgaaac
agntaatttccattttgaaaattaaaagaaaacagcacagagaagttaaatgcggtgtag
caaagttatggggtctgcttgagggcactaacctcaacagattattcctcctctccttag
aataaccatgaaaatacaaatttacttagcacatttttgctttttaagtagctggttcat
tttctgaatttcccacattcagagttccagtcattattgttacatcatgtttgcagaaac
cttgtcttatttagtgtctatttgcatataaccctgaaaacattattatttgaaaacttt
tctatatctcaaattaatatacattttcataacctacctttgnattaagacttgcaattt
tatcaatctattat
79>Ly1500P，剪接体-1，FLJ20706，完全cDNA
ccgcagcctccgcgggtggcaagcgggctggggagagccgagggccaaaggaagagaaaatcgcggggag
tctctggccgggagagtccaggtagcgctcggcgggcagcagtgcgcaggcccctcggcttcaaccgcca
caatgctgccagcagcgccaggcaaggggcttgggagcccggaccccgccccctgcggcccagcgccccc
aggaaatacaaaagatataataatgatatatgaagaagatgctgaggaatgggctctgtacttgacagaa
gtatttttacatgttgtgaaaagggaagccatcctgttatatcgcttggagaatttctcttttcggcatt
tggagttgctgaacttaacgtcttacaaatgtaaacttttgatattatcaaatagcctgcttagagacct
aactccaaagaaatgtcagtttctggaaaagatacttcattcaccaaaaagtgtagttactttgctttgt
ggagtgaagagttcagatcagctctatgaattactaaatatctctcaaagcagatgggagatctcaactg
aacaggaacctgaagactacatctctgtaatccagagtatcatattcaaagattctgaagactactttga
ggtcaacattccaacagacctacgagcaaaacattctggggaaataagtgagagaaaggaaattgaagaa
ctatcagaagcttcaagaaacaccataccactagcagtggtgcttcccactgaaattccatgtgagaatc
ctggtgaaatattcataattttgagagatgaagtaattggtgatactgtagaggttgaatttacatcaag
taataagcgcattagaacacggccagccctttggaataagaaagtctggtgcatgaaagctttagagttt
cctgctggttcagtccatgtcaatgtctactgtgatggaatcgttaaagctacaaccaaaattaagtact
acccaacagcaaaggcaaaggaatgcctattcagaatggcagattcaggagagagtttgtgccagaatag
cattgaagaacttgatggtgtccttacatccatattcaaacatgagataccatattatgagttccagtct
cttcaaactgaaatttgttctcaaaacaaatatactcatttcaaagaacttccaactcttctccactgtg
cagcaaaatttggcttaaagaacctggctattcatttgcttcaatgttcaggagcaacctgggcatctaa
gatgaaaaatatggagggttcagaccccgcacatattgctgaaaggcatggtcacaaagaactcaagaaa
atcttcgaagacttttcaatccaagaaattgacataaataatgagcaagaaaatgattatgaagaggata
ttgcctcattttccacatatattccttccacacagaacccagcatttcatcatgaaagcagaaagacata
cgggcagagtgcagatggagctgaggcaaatgaaatggaaggggaaggaaaacagaatggatcaggcatg
gagaccaaacacagcccactagaggttggcagtgagagttctgaagaccagtatgatgacttgtatgtgt
tcattcctggtgctgatccagaaaataattcacaagagccactcatgagcagcagacctcctctcccccc
gccgcgacctgtagctaatgccttccaactggaaagacctcacttcaccttaccagggacaatggtggaa
ggccaaatggaaagaagtcaaaactggggtcatcctggtgttagacaagaaacaggagatgaacccaaag
gagaaaaagagaagaaagaagaggaaaaagagcaggaggaggaagaagacccatatacttttgctgagat
tgatgacagtgaatatgacatgatattggccaatctgagtataaagaaaaaaactgggagtcggtctttc
attataaatagacctcctgcccccacaccccgacccacaagtatacctccaaaagaggaaactacacctt
acatagctcaagtgtttcaacaaaagacagccagaagacaatctgatgatgacaagttccgtggtcttcc
taagaaacaagacagagctcggatagagagtccagccttttctactctcaggggctgtctaactgatggt
caggaagaactcatcctcctgcaggagaaagtaaagaatgggaaaatgtctatggatgaagctctggaga
aatttaaacactggcagatgggaaaaagtggcctggaaatgattcagcaggagaaattacgacaactacg
agactgcattattgggaaaaggccagaagaagaaaatgtctataataaactcaccattgtgcaccatcca
ggtggtaaggaaactgcccacaatgaaaataagttttataatgtacacttcagcaataagcttcctgctc
gaccccaagttgaaaaggaatttggtttctgttgcaagaaagatcattaaagaaggttattataatgaaa
ctcacgaatctacggacattttgctttcagggtgaagcaagcttgaatttggattgcctgctttctttaa
agcgaattcatactataacagcagaaacaaaacttcagatttcagaatttgttattggcaaaatttattc
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80>Ly1500P，剪接体-1 FLJ20706，全长蛋白质
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83>Ly1500P，剪接体-3，FLJ34204 fis，全长cDNA
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84>Ly1500P，剪接体-3，FLJ34204 fis，全长蛋白质
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QEKLRQLRDCIIGKRPEEENVYNKLTIVHHPGGKETAHNENKFYNVHFSNKLPARPQVEKEFGFCCKKDH
85>Ly1516P，Old-SEQ-ID_8949，部分cDNA
cctctcagaaaactgagcatactagcaagacagctcttcttgaaaaaaaaaatatgtata
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86>Ly1516P，类似于CD47抗原，剪接形式-1，全长cDNA
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87>Ly1516P，类似于CD47抗原，剪接形式-1，全长蛋白质
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GLIVTSTGILILLHYYVFSTAIGLTSFVIAILVIQVIAYILAVVGLSLCIAACIPMHGPLLISGLSILAL
AQLLGLVYMKFVASNQKTIQPPRNN
88>Ly1516P，cDNA DKFZp313F0317，剪接形式，部分cDNA
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ctgaacttccatattaccatcagaaatttagatagttgtttagttctctttttctttgtagaacatagat
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ctttagrcagtcacaataaagatctgggaagttaggttttagttctcagtgatgccaaatcaggacagtgggagaaaaat
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tgtgcatgatgacaggatcccgttcaatttacaagtagataacaaaacctgaaagacaagtacaggaccagaataataac
ccataagaaggtgctatagtttttataaaatatctttctacagtcatcccccttttttgatccaaattaaccaaagtaag
attattcttgtttacaaaataagtcttgtctcattatatttgacttacttatttgcataattgcagcaagaatggcaact
gaccaggtaggcttatttaagtttgcattgctggaactttttacaagtaatctcagattatgctttcaagagttcttgaa
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caggtaccaggcagactttccgggagggcttcatatgcattggctccataaagttaaccttagttcctcaaaactgtctg
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cagaccggagctgttcctattcggccatcttggaatggacccccatgtcttattctcaaataaaacattttggtcaaaaa
aaaa
95>Ly1686P，部分cDNA
cctaatatgacattatttcaaagcttattataaaggaacagtaatcaaactagtgcaattttggcataaagttagaaaaa
cagatcaatgaagcagaagagagagtccagaaacagaactgcacatttatgtgttggtgaatgccagggattcagcttag
gtctgattgctcaccacacagaaagccaatcactgagacaacaagtactgccaggaagaaaggctttattgctggtgatg
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aggcagtaggtagttgaatcagggttctggcaccttgctgttaggatgcagcgatctggaaatcttcagctttctgatac
tatctgggagg
96>Ly1687P，部分cDNA
gtgccagttataaaatatcttatattttcttataatgcctccatagttttattatatattcactcaatacatcatttttc
tatgtggtatgaggtaagaatctaacttttactgattttatctttatgcattttttttaatttaaaatgtggggtaggga
tctaacttttttcaaacacatataaatgtgcactactatttatttaaatagtctgttcttttcccttttattattatgct
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gcataattaacttcaagcacattagcctccgggttcctcaagcacaccaaatttagtcccagctcaggaactctgtactt
tctatttccatgctttaatgttctttctcttgatatccttgttttcttatttccttcatttgcatttctgctttgatttt
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ttgctatgtgcttggagctcagggagggcctcaaaggatgaaattggagtatggtgtgatcagaagtttgaacttctttg
tattgtatgatcatccctttaccttaatactcacatgaaatgctatctatggcttcttacattccacttcttcttaatca
atttctttcttcatgaacttaaacgttcccatcatttttgatagggtctgtgagtttatttgtccaaaaagcccaaaagc
agaatttaagattgatagcatagctttgtgctcaacagttgtaatatttttttccatggtcgtctagcttcttctgtttt
ctttgagaaatctatgtaattgttgtttctttataattaatctatcttttctctccagttgcctttaagactttttatat
ttgatattatgcaatttcactatgatttgtctaaatgtgcatttattttgctagagattaataactcaagtctaaggtat
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ccctcagaaatttatattagaagtttgctagacttcattctagtctcatgactcttaattagtcttgcaaaattttcatt
tcattatcacttattgcattttaggtaatttcttaatctctgtcttccagtttactggttctttcttcagctgtatctat
tttattgtttaacctatttattttctatttcaatgattacattttttgagattttattagcaaaatggttaaaagcatgg
tttcagaggattgtctggatttacattttgcctccattatttactagctctccagttttggttaaattaattaacctttt
gtgcttcttggtgtgtaaaattgaagtaacaattgtatataaatatagtgttttttggtaattaattaaaattatttgca
taaaatgcttaagacagggcctgaaatgacattgagtcctcaaaaaataaattattattatcattccttcaaaaaaaaaa
aaaaaaaaaaaaaaaaaanaaaaaaaanacca
97>Ly1706P，FLJ21578，部分cDNA
tctaaaagctgcggaattcctcgagcactgttggcctttggtagatgcccctctgggagagatccccagg
ggtgacagccatgggccctggaagggcctgggctagggacagggaccagagccagtccagggagaggaca
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gggttgtgagacccctgaggagctgggccctggtcccaggcagcgctggcccctgctgctgctgggtctg
gccatggtcgcccatggcctgctgcgcccaatggttgcaccgcaaagcggggacccagaccctggagcct
cagttggaagcagccgatccagcctgcggagcctgtggggcaggtaaggggcaagagatatgtgggggtc
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tcaccagggtcagtgcctcaatcacctagtcctagtcctctgggtagggaaggaacagaggcagggacag
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tgcccatgtgcctcctgcccagtgagggcaggggccactccctggagaaggcagcaagggcttggtttgg
tctcccccaaggctgtctgttcaccaacttgcacataaatacttactggggccaggctcaaggacacagg
gagggtgggatgaaccgaggggagctgtccagtcattggaacaggcccacggcccatgtttgcagcaatg
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tgatgcgacgcccaattagaggagggaggagagggggtgatggccaagtccagggtaggtggggatcctg
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aatgggagcatgaggttgaagtgagggctgagcagaggggagcagacacgctcggggactgtctatgggc
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ttgctcaggctggagtacagtggcgtggccacagctcactgcagcctcaacctccagggctcaaaagatc
ctccagcctcagcctcctgagtagttaggactacagatgcaggccactacacctggctaattttgattag
gattatcattagtttagagacagagcctcgctatattgctcaggcctgtctcaaattcctaagctcaagc
aatctttctgcctcagtttcccacgtgctggaattacaggcgtgagccactgcacctgacccaactgtgt
ttttaaagtatatatgcattttcaaaaacctgtcagaaaatatagaaaaatgtcaatggtgtgtctggct
ggctgatgggatttcacctaattttaatgtggctttataattttctggttttgtgaagttgttcacaaaa
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gagtatattacaaaatgtaatgacttttgtacattactcttttttcttgccaaaaaaaaaaaaaaaaa
98>Ly1712P，部分cDNA
ccacaaaataaggtctaattcaataaattatagtaaattaatgtaatataatattacatgccactaaaaagaataaggta
gctgtatatttcctggtatggaaaaaacatattaatatgttataaactattaggttggtgcaaaactaattgtggttttt
gccattgaaatggcattgaaataaaagtgtaaagaaatctataccagatgtagtaacagtggtttggttctgggaggttg
gattacagggagcatttgatttctatgttgngtatttctatantgtttgaattgtttagaatgaatctgtntt
99>Ly1729P，Old-SEQ-ID_6586，部分cDNA
ccagtatggaatccagaaggaccgagtggataagagcgctgtcggcttcaatgaaatgga
ggccccgaccacagcttataagaagacgacgcccatagaagccgcttctagtggtgcccg
tgggctgaaggcgaaatttgagtccatggctgaggagaagaggaagcgagaggaagagga
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tgaggctccacagccagtgatagctatggaagagccagcagtaccggccccactgcccaa
gaaaatctcctcagagg
100>Ly1729P，造血细胞特异性Lyn底物(HCLS1)，全长cDNA
aattccgccgggcgcttagaacagaggcttgcacaggtggagatgtggaagtctgtagtgggccatgatg
tgtctgtttccgtggagacccagggtgatgattgggacacagatcctgactttgtgaatgacatctctga
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cagtatggaatccagaaggaccgagtggataagagcgctgtcggcttcaatgaaatggaggccccgacca
cagcttataagaagacgacgcccatagaagccgcttctagtggtgcccgtgggctgaaggcgaaatttga
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tgaaccttctttctgttcagtcctaaaattcgaaataaagtgagactatggttcacctgtaaaaaaaaaa
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101>Ly1729P，造血细胞特异性Lyn底物(HCLS1)，全长蛋白质
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KEMESGPKASHGYGGRFGVERDRMDKSAVGHEYVAEVEKHSSQTDAAKGFGGKYGVERDRADKSAVGFDY
KGEVEKHTSQKDYSRGFGGRYGVEKDKWDKAALGYDYKGETEKHESQRDYAKGFGGQYGIQKDRVDKSAV
GFNEMEAPTTAYKKTTPIEAASSGARGLKAKFESMAEEKRKREEEEKAQQVARRQQERKAVTKRSPEAPQ
PVIAMEEPAVPAPLPKKISSEAWPPVGTPPSSESEPVRTSREHPVPLLPIRQTLPEDNEEPPALPPRTLE
GLQVEEEPVYEAEPEPEPEPEPEPENDYEDVEEMDRHEQEDEPEGDYEEVLEPEDSSFSSALAGSSGCPA
GAGAGAVALGISAVALYDYQGEGSDELSFDPDDVITDIEMVIGWWRGRCHGHFGLFPANYVKLLE
102>Ly1848P，部分cDNA
ctgacagcatctggctttcagttcctcagtcaccactactttgtaccaaattcactgttttggctctgaaatctaatttt
gagtttagcaaggatg
103>Ly1859P，Old-SEQ-ID_640，部分cDNA
ccagagtgcaggatacatcattggcaccaagggtctttttcaattcttggtcaatcctct
gcagcaagcacccccggatgacgtcctcatagatgccctcagtggtcagagcctggctgc
ccacggcaaggacatccccctcgaactcaggcagctcctttttgcagcctggctcgagtt
ggctcagcacaaaaggtaaaaagatgcagagaccccagcctcggatgaacctcctctgcg
ccaacccgctgtccgatttgaatttcttcagcacgcgccccctgactctctccagcctct
gggcagcctggtcacagttgagggccgtcgtcagacactggtcagccag
104>Ly1859P，old-SEQ-ID_2452，部分蛋白质
LADQCLTTALNCDQAAQRLERVRGRVLKKFKSDSGLAQRRFIRGWGLCIFLPFVLSQLEP
GCKKELPEFEGDVLAVGSQALTTEGIYEDVIRGCLLQRIDQELKKTLGANDVSCTL
105>Ly1859P，Old-SEQ-ID_3313，部分cDNA
ctgcaagacagcagagaanctgccaatatccagttagcagatgactttgctggcaagcag
aggaagncggtaaaagcttgtctcccagccaggaaacttgacaccaagntaagatttgga
gctaggaaacaaacccaaaaggctcacagcaagcggagaaaaaaaccccaaaatctgtaa
cctgtatcacaaagcgttcatatccttcagatataaagagttattagatatcaataagaa
aaatgcaaacactcctgaaaagtagaaaaaagctatgaacaggcaattcactgaaattaa
aaaaaaaaaaa
106>Ly1859P，FLJ00140，全长cDNA
cgcaggcggtggtcgtggggaagggaagaggagccccgggagacgacagcagcatgggtgggcggccttc
gagccctctggacaagcagcagcggcagcacctaaggggtcaggtggacaccctgctgaggaacttcctg
ccttgctaccgtgggcagctggcagcgtctgtcctgcggcagatctctcgagagctgggccctcaggagc
cgaccggaagccagttgctacgcagcaaaaagctgccccgagtccgtgagcaccgaggacccctgaccca
gcttcggggccacccaccccggtggcagccgatcttctgtgttctgcgtggggacggccgcctagagtgg
ttcagccacaaggaggaatatgaaaacgggggccactgccttggctcaacagccctgacaggatacacgc
tcctgacttcccagcgagaatatctccgccttttggatgctctctgccctgaatccttgggagaccatac
tcaggaagagcctgactccctcttggaagtgcctgtgagcttcccgctgttcctgcagcaccccttccgc
cggcacctctgcttctctgcagccaccagggaggcacagcatgcctggaggctggccctgcagggtggca
tccggcttcagggcacagtcctgcagcgaagccaggcccctgctgcccgggccttcctggacgccgtccg
actctaccggcagcaccaaggccactttggcgacgacgacgtgaccctaggctcagacgccgaggtgctg
accgcggtgctgatgcgggagcaacttcccgcgctgqagcccagacccttcctggcctgcgggggggcag
gccgcgcccgcgcctgggcctggaccgagcttctagacgccgttcacgcagctgtcctggccggggcctc
cgccgggctctgcgccttccagcccgaaaaggacgagctgcttgcgtcgctggagaagacgatccgcccg
gacgtggaccagctgctgcggcagcgggcgcgtgtggcggggcggctgaggacggatatcaggggaccgc
tcgagtcgtgcctgcgccgggaggtggacccgcagctgccccgggtcgtgcagaccctgctgcgcaccgt
ggaagcctcgctcgaggcggtgcggaccctcctggctcaaggcatggaccgactgtcccaccgcctgcgc
cagagcccctcgggcacgcggctgcgcagggaggtttactcatttggggagatgccgtgggacttggcgc
tgatgcagacatgctaccgtgaggccgagcggagccgggggcgcttggggcagctggcagcaccgtttgg
ctttctggggatgcagagcctcgtgtttggggcccaagatcttgcacagcagctcatggctgacgccgtg
gccaccttcctgcagctggctgaccagtgtctgacgacggccctcaactgtgaccaggctgcccagaggc
tggagagagtcagggggcgcgtgctgaagaaattcaaatcggacagcgggttggcgcagaggaggttcat
ccgaggctggggtctctgcatctttttaccttttgtgctgagccaactcgagccaggctgcaaaaagacg
gagtctcgctctgtcgcccaggctgtagtgcagtggtgtgatcttggctcgctgcggcctccacctccta
ggttcaagcgatcctcccatctcggcctcccaagtagctgggattacaggcacccgctatagggaccagc
cccacagggtcggtgggtctctccctgtgtgcagagacaagagagtgtagaaataaagacacaagacaaa
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gaatgtctggctgcgctgttatttattggatacaaagcaaaaggggcagggtaaagagtgtgagtcatct
ccaatgataggtaaggtcacgtgggtcatgtgtccactggacagggggcccctccctgcctggcagctga
ggcagagagagagaggagacaaagagaaagacagcttaagccattatttctgcatatcagagacttttag
tactttcactaactgactactgctatctagaaggcagagccaggtgtacaggatggaacacgaaggcgga
ctaggagcgagaccactgaagcacagcatcacagggagacggttaggtctctggataactgtgggcaagc
ctgactgatatcaggccctccacaagaggtggaggagcagagtcttctctaaactcccccggagaaaagg
agactccctttcccggtctgctaagtagccggtgtttttccttgacacttttcgctaccgctagaccacg
gtctgcctggcaacaggcatcttcccagacgctggcgtcaccgctagaccaaggagcccttctgctggcc
ctgtccgggcataacagaaggctcgcactcttgtcttctggtcatacctcactatgccccctcagctcct
atctctgtatggcctggtttttcctaggttatgattgtagagtgaggattattataatattggaataaag
agtaactgctaccaactaatcattaatgatattcatatataatcatatctaatatctatatctggtataa
ctattcttgttttatattttgttatactggaacagctcatgtcctcggtctcttgcctcagcacctgggt
ggcttgccgcccacaacccgccaccacgcccagctaatttttgtacttttggtagagacggtggtttcac
catgttggtcaggctggtcttgaactcctgacctcatgatccgcccacctcagccaaccaaagtgctggg
attacaggcatgagccaccgcacccggcctgtttattttaaaataaaaatatttaaaaataaagataagg
aaactaaggcccaagccccgccccccaaccccacagctaatcaggcccagggctagggcagaagcctgtg
ttgtaggcctctagaggggccctcctctccatccgagcccctaacccgccatggttccaggagctgcctg
agttcgagggggatgtccttgccgtgggcagccaggctctgaccactgagggcatctatgaggacgtcat
ccgggggtgcttgctgcagaggattgaccaagacccttggtgccaatgatgtatcctgcactctggacgg
ctgcttggaggtcccatgggaacaggagggagcagatgaggaaactgaggctgagcgggaaggaggggct
tgtcccaggcagccagactctggtgcccagatccagccactctgcccaccgccttctccaggaacattcc
ggagctgaatcttcacccacatctatcttgtttctattggataaatgtctacaagtggaatttctgggcc
aaaacggatgtgccatctttaggcttttgtaacccctgcaacttcagaaaactgtaccattttatactcc
aagcagcagcatttatttgtgtattttccccaaggctttctttattttaatttttttttttttttttgag
actgggtcttgctctgtcacccgggctggggtgcagtggcaggatctcggctcactgcgacctccgcctc
ccgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagtagctgggatttcaggcacccgccaccatgcct
ggttaattgtgtttttggtagagatggggtttcgccgtgttggccaggctggtctcgaactcctgtcctt
aggtggtctgcccgcctcagcctcccggagtgctgggattgcaggtgtgagccaccacacgtggcctaat
tttttttttttaaataatagagacaaggtctcgctatgctgcccaggctgatctcaaactcctggactca
agcaatcctcctgccttggcctcccaaagtgctaggattataggagtgatccactatgtccagcctccaa
atcctttctaaacactaggacttttcatgaaaagaaaaaagctatgccagttagacacacacagaaatcc
catgattttattttgaacttctttgactaaattgaacttacaaataagtttattatggccgggcgtggcg
gtgcacacctgtggtcccggcactttgggaggctgaggcgggcagatcacttgagctcaggagttcggga
ccagcctggcggacgtggtgggacctcatctctacaaaaaatacaaaattagcggccgggagtggtggct
cacgcctgtcatcccagcactttgggaggctgagacaggtggattgcttgagccaaggagttttgaggcc
agcttgggcaatgtggtgaaacctgtctctactaaaaaataaaataaataaataaataaataaataaaca
aataaataaataaaatttaaaagaagctgggctgagatgggagatttgcctgagcctgggaactcaaggc
tgcagtgagtggtgattgcaccactgcactccagcctgggtgatgggagtgagaccctgtctcaaaaaac
aaaatccaaatatgttgattagccatttacatgtttgtagtttttttttttttaatttcagtgaattgcc
tgttcatagcttttttctacttttcaggagtgtttgcatttttcttattgatatctaataactctttata
tctgaaggatatgaacgctttgtgatacaggttacagattttggggtttttttctccgcttgctgtgagc
cttttgggtttgtttcctagctccaaatcttaacttggtgtcaagtttcctggctgggagacaagctttt
accgacttcctctgcttgccagcaaagtcatctgctaactggatattggcagcttctctgctgtcttgca
gctgcttccggagtgggttccacagggattcccgtgtgttcttggttcagcttgcagagggactttcaca
ctccctggagaccgtttcctcccattctgtctggagttttcggcctaccccaagacaatgagatattcct
gacctttccacctatttccctccaaccccaccttccaaaatacatttgctcaatacatttgcacttc
107>Ly1859P，FLJ00140，全长蛋白质
QAVVVGKGRGAPGDDSSMGGRPSSPLDKQQRQHLRGQVDTLLRNFLPCYRGQLAASVLRQISRELGPQEP
TGSQLLRSKKLPRVREHRGPLTQLRGHPPRWQPIFCVLRGDGRLEWFSHKEEYENGGHCLGSTALTGYTL
LTSQREYLRLLDALCPESLGDHTQEEPDSLLEVPVSFPLFLQHPFRRHLCFSAATREAQHAWRLALQGGI
RLQGTVLQRSQAPAARAFLDAVRLYRQHQGHFGDDDVTLGSDAEVLTAVLMREQLPALRAQTLPGLRGAG
RARAWAWTELLDAVHAAVLAGASAGLCAFQPEKDELLASLEKTIRPDVDQLLRQRARVAGRLRTDIRGPL
ESCLRREVDPQLPRVVQTLLRTVEASLEAVRTLLAQGMDRLSHRLRQSPSGTRLRREVYSFGEMPWDLAL
MQTCYREAERSRGRLGQLAAQFGFLGMQSLVFGAQDLAQQLMADAVATFLQLADQCLTTALNCDQAAQRL
ERVRGRVLKKFKSDSGLAQRRFIRGWGLCIFLPFVLSQLEPGCKKTESRSVAQAVVQWCDLGSLRPPPPR
FKRSSHLGLPSSWDYRHPL
108>Ly1866P，类似于假想蛋白质PRO1722，全长cDNA
ctagaatgctaattgcacttaggcctcatggttctagtaaacggcagctgtgggcccttttgcctcttcc
cctgttcttggcctcacatctccagctgagctgccggtcttggcttcctggtcgcctctgtcccagagat
ggtcccagggagccatcctagggcaggtagcactgaggctcctgtggaaacaggagccacctgctcagga
gacccctttcctgaggaagtccttacctctccccttgagatgtaaaaatggtccagcagagacaagctcc
cgtggaaaacagacaggagcatgggggcagctgtcatggctgtggcgggcacttttcctcagagtttctg
ccttgcgctggtccaggagccattttgcaccaaggacttggtaggcagaggcagccccactgtaaagaag
ggtcagattaaaacaaaaaactgccaaaagcatcccctctgccccccatgtggcactggcatcattctct
gcttccctgggaggaattttttcaccatgttattgaaggggatggttcattaaggactccacccctcaga
gctcactcagaccccaaggacagaggtgactggggcttggtgacttgttcactccttttttcccaggtat
actgaaggggtgacagagagaggtcttcatggcagaccaggccttcacagctaatggggagaggaactca
tgttacctctgcaggcctggggtcctgagggggtcttttggcttcagcctgttcccccagaggcttgatc
atcccacattgtcccttcagctcagctgctcttctcccccacccaccctgggatgtgggtgctctgggct
gaaccaaggctatgacttctggagagaggctcaggggttggtctgagaggcctgccatccacccctcagg
gagctaggttttctcagaggctcagctggacagcactttttagaaaagtttgtagcattaagctggttta
aaatatgaagttggttttgttggatggctcctgagctgactgactgatgtctgaagtttgagacgaggga
ttatttcagggtggggcccaatgtgatctaatgcccagctggggacaattgtgcctcatcatttgctcaa
attcctgggcccccaagttagccccctcccaggagtggtcagcgggtcacagctgcccccactctataag
cagggctaattgtgtaccctttgcagaaatgcttttggtctcctacccaaatactcacaagggtcttatc
agacgcccgtcttaaagtccagcatgctcagggaccctgtgtaggatctcgtttgtggtgagtgggctgc
tctgaggtctccactgggctgccatttagccatgtgccatctctgaagtcagaggtgtttgactcccatt
ccttgggctctggagctttccccaagaattacatcagagaaaaggaagaaggggcctgcaggacccattg
ggaatgagtttaatactgaagtctggaatgtaagctcatgccctagaggcctctccatatggctggtcag
gggagctgccttcaggcttgtgccccgtgtgctcagcagctgcctctgtccccctctactgtccctttca
caccttgcctggccaaggggctagacctcccaggctaagcctcagattcagtgcaggacacaagctcatg
cccccgtcttgccagtgacacttgaagcctcccgacttccacagagtgcttcaggacacattttgagtgg
tattttcttttctttttttcttcttttttttttttttgagatggagtctcgctctgttgcccaggctgga
gtgcagtggcctgatctcggctcactgcaacctctgcctcccaggttcaagcgattcttctgcctcagcc
tccagagtagctgggactatagacatgcaccaccacgcccggctaattttgtatttttggtcgagacggg
gttttgccatgttagtcaggctggtcttgaactcctgacctcaagtgatccaccacctcggcctcccaaa
gtgttgagatgacaggcacgagccaccaggcccagcctgagtggtattttctttagggaccaggtagact
ttaaaacgagggtaagagaaaagccagtgtctttctgaggtaaataatttctgccaggaaacttcccagc
cccaccagcagcccccctaaaaaaatcactcgtgtccccagggacttctaaagcttggggctccaggaaa
tcatccagtagagttggagattcagagatttcttgaagccagggacatgctcctaactcctttcccatta
aaggtgttagaatagaccagagggtgtcccttttccacagtaatgggatcggctggtgtgccttcaggga
ggaagagggaggtggtcaagcttgaaaaactggctttaggatggttctgactttgttctccctccccaag
tgttctcaacctccattctgcagtgttcagagttttagggaaagggtttgggtgccccagcatccaggtg
ttgtgtggcttagcgcatgtgaagtgaaaaccttctggggttgtttggaagcagctttctggttcttgtg
attgtatcctgaggtcccagaaccctattctcccacgaggatcctcagtgaccatggtggccacacgcct
ggccagcctgctggctcctgggtgagctgaagaaccttgcctgtggcacttttcgagggtgagctggaac
cgagagaacatggtccccgtgctgggactcatgcgggtcatttcctgccggcctggtttcgcctggtcgt
gtctttatgagcaccatgtaagcctccttgtattgagataattgggcattaaacattaaactgcagctct
gggaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaac
109>Ly1866P，类似于假想蛋白质PRO1722，全长蛋白质
MESRSVAQAGVQWPDLGSLQPLPPRFKRFFCLSLQSSWDYRHAPPRPANFVFLVETGFCHVSQAGLELLT
SSDPPPRPPKVLR
110>Ly1867P，Old-SEQ-ID_3570，部分cDNA
aaaccttaagaaccacataatactatataatgcttttctgtacaaatctcaagaaacact
ttcattcattaaaacatcatgaaaatccttaaatgtgttaaatggaaaaaaatgaaacca
tgaacaaaaaagctatacatgtaggtgcatatttatctcctcctgagttgggagaaatct
ttctaagcatagaaacaatggtagcaaaagagaagaatagatttggctggattaacaata
aaaaatttctgccagaaatatgaaaattcaatttagacaaaattcaatataaacaaaatt
aatatagacaaaggtggtaaacaggtggttctcagagaagataaatacatgattatttaa
cataaaaagaaatgttcaatgtttctagaagacaaataattacaaacctaaacaaattgt
atatttgttagattggcataaattataataatccaacattgagttangtggaatataaat
tggtaaaatatttctggaagacaatttgg
111>Ly1868P，部分cDNA
agaagtgattatgggattaaaagaatacataattacagtgttttgggattgggctcttttttttcttaatagaaaagcag
aaacttcataaataatagctgtgctttagataccagataacaaatattgtttcccctgaagatatgacctactagaacta
ctcacatatatagtccaataattgctgacttaataggtatggtaaaatagctgataataagtcagactctcaagagtttc
tgtaccttgattattgacaaattcattgttttacatcctactaaagaacatgtgtgtggggagggggtggggaactggtt
cacaacataatctgaaggagatcaaacatctgtaaggacaggtacccagtgatgataatatatctgaaaacacaagccat
ttttattctttatcccaattaacttgaggtactctaatgatgaagcactcgattgcactatgacctccttgagtgatggg
cagcttggttcctctctcactttttgtttctttttaatatgcaaa
112>Ly1886P，O1d-SEQ-ID_6454
aaaaaaagacaatttgagcaggacgaccctctccaatctgggtagcatggttagcctgtg
cagtaacaacgtaggcttggaggatgggtncaatgaaaatgattctgattcggaaacgtt
ttgactttggactgtanaagcttttctttgatcacctgtgntggaggaaaggaaagaagc
ctt
113>Ly669S，胞间粘附分子3(ICM3)，完全cDNA
cagctctctgtcagaatggccaccatggtaccatccgtgttgtggcccagggcctgctggactctgctgg
tctgctgtctgctgaccccaggtgtccaggggcaggagttccttttgcgggtggagccccagaaccctgt
gctctctgctggagggtccctgtttgtgaactgcagtactgattgtcccagctctgagaaaatcgccttg
gagacgtccctatcaaaggagctggtggccagtggcatgggctgggcagccttcaatctcagcaacgtga
ctggcaacagtcggatcctctgctcagtgtactgcaatggctcccagataacaggctcctctaacatcac
cgtgtacgggctcccggagcgtgtggagctggcacccctgcctccttggcagccggtgggccagaacttc
accctgcgctgccaagtggagggtgggtcgccccggaccagcctcacggtggtgctgcttcgctgggagg
aggagctgagccggcagcccgcagtggaggagccagcggaggtcactgccactgtgctggccagcagaga
cgaccacggagcccctttctcatgccgcacagaactggacatgcagccccaggggctgggactgttcgtg
aacacctcagccccccgccagctccgaacctttgtcctgcccgtgacccccccgcgcctcgtggcccccc
ggttcttggaggtggaaacgtcgtggccggtggactgcaccctagacgggctttttccagcctcagaggc
ccaggtctacctggcgctgggggaccagatgctgaatgcgacagtcatgaaccacggggacacgctaacg
gccacagccacagccacggcgcgcgcggatcaggagggtgcccgggagatcgtctgcaacgtgaccctag
ggggcgagagacgggaggcccgggagaacttgacggtctttagcttcctaggacccattgtgaacctcag
cgagcccaccgcccatgaggggtccacagtgaccgtgagttgcatggctggggctcgagtccaggtcacg
ctggacggagttccggccgcggccccggggcagccagctcaacttcagctaaatgctaccgagagtgacg
acggacgcagcttcttctgcagtgccactctcgaggtggacggcgagttcttgcacaggaacagtagcgt
ccagctgcgagtcctgtatggtcccaaaattgaccgagccacatgcccccagcacttgaaatggaaagat
aaaacgagacacgtcctgcagtgccaagccaggggcaacccgtaccccgagctgcggtgtttgaaggaag
gctccagccgggaggtgccggtggggatcccgttcttcgtcaacgtaacacataatggtacttatcagtg
ccaagcgtccagctcacgaggcaaatacaccctggtcgtggtgatggacattgaggctgggagctcccac
tttgtccccgtcttcgtggcggtgttactgaccctgggcgtggtgactatcgtactggccttaatgtacg
tcttcagggagcaccaacggagcggcagttaccatgttagggaggagagcacctatctgcccctcacgtc
tatgcagccgacagaagcaatgggggaagaaccgtccagagctgagtgacgctgggatccgggatcaaag
ttggcgggggcttggctgtgccctcagattccgcaccaataaagccttcaaactccctaaaaaaaaaaaa
114>Ly669S，胞间粘附分子3(ICM3)，完全蛋白质
MATMVPSVLWPRACWTLLVCCLLTPGVQGQEFLLRVEPQNPVLSAGGSLFVNCSTDCPSSEKIALETSLS
KELVASGMGWAAFNLSNVTGNSRILCSVYCNGSQITGSSNITVYGLPERVELAPLPPWQPVGQNFTLRCQ
VEGGSPRTSLTVVLLRWEEELSRQPAVEEPAEVTATVLASRDDHGAPFSCRTELDMQPQGLGLFVNTSAP
RQLRTFVLPVTPPRLVAPRFLEVETSWPVDCTLDGLFPASEAQVYLALGDQMLNATVMNHGDTLTATATA
TARADQEGAREIVCNVTLGGERREARENLTVFSFLGPIVNLSEPTAHEGSTVTVSCMAGARVQVTLDGVP
AAAPGQPAQLQLNATESDDGRSFFCSATLEVDGEFLHRNSSVQLRVLYGPKIDRATCPQHLKWKDKTRHV
LQCQARGNPYPELRCLKEGSSREVPVGIPFFVNVTHNGTYQCQASSSRGKYTLVVVMDIEAGSSHFVPVF
VAVLLTLGVVTIVLALMYVFREHQRSGSYHVREESTYLPLTSMQPTEAMGEEPSRAE
115>Ly672S，Old-SEQ-ID_3042，部分cDNA
cctgatgcccgaatttcagtttggcacttacagcgaatctgagaggaaaaccgaggagta
cgatactcaggccatgaagtacttgtcatacctgctgtaccctctctgtgtcgggggtgc
tgtctattcactcctgaatatcaaatataagagctggtactcctggttaatcaacagctt
cgtcaacggggtctatgcctttggtttcctcttcatgctgccccagctctttgtgaacta
caagttgaagtcagtggcacatctgccctggaagg
116>Ly672S，顺铂抗性相关蛋白质CRR9p，全长cDNA
cagctccttcaccagcttggtggtgggcgtgttcgtggtctacgtggtgcacacctgctgggtcatgtac
ggcatcgtctacacccgcccgtgctccggcgacgccaactgcatccagccctacctggcgcggcggccca
agctgcagctgagcgtgtacaccacgacgaggtcccacctgggtgctgagaacaacatcgacctggtctt
gaatgtggaagactttgatgtggagtccaaatttgaaaggacagttaatgtttctgtaccaaagaaaacg
agaaacaatgggacgctgtatgcctacatcttcctccatcacgctggggtcctgccgtggcacgacggga
agcaggtgcacctggtcagtcctctgaccacctacatggtccccaagccagaagaaatcaacctgctcac
cggggagtctgatacacagcagatcgaggcggagaagaagccgacgagtgccctggatgagccagtgtcc
cactggcgaccgcggctggcgctgaacgtgatggcggacaactttgtctttgacgggtcctccctgcctg
ccgatgtgcatcggtacatgaagatgatccagctggggaaaaccgtgcattacctgcccatcctgttcat
cgaccagctcagcaaccgcgtgaaggacctgatggtcataaaccgctccaccaccgagctgcccctcacc
gtgtcctacgacaaggtctcactggggcggctgcgcttctggatccacatgcaggacgccgtgtactccc
tgcagcagttcgggttttcagagaaagatgctgatgaggtgaaaggaatttttgtagataccaacttata
cttcctggcgctgaccttctttgtcgcagcgttccatcttctctttgatttcctggcctttaaaaatgac
atcagtttctggaagaagaagaagagcatgatcggcatgtccaccaaggcagtgctctggcgctgcttca
gcaccgtggtcatctttctgttcctgctggacgagcagacgagcctgctggtgctggtcccggcgggtgt
tggagccgccattgagctgtggaaagtgaagaaggcattgaagatgactattttttggagaggcctgatg
cccgaatttcagtttggcacttacagcgaatctgagaggaaaaccgaggagtacgatactcaggccatga
agtacttgtcatacctgctgtaccctctctgtgtcgggggtgctgtctattcactcctgaatatcaaata
taagagctggtactcctggttaatcaacagcttcgtcaacggggtctatgcctttggtttcctcttcatg
ctgccccagctctttgtgaactacaagttgaagtcagtggcacatctgccctggaaggccttcacctaca
aggctttcaacaccttcattgatgacgtctttgccttcatcatcaccatgcccacgtctcaccggctggc
ctgcttccgggacgacgtggtgtttctggtctacctgtaccagcggtggctttatcctgtggataaacgc
agagtgaacgagtttggggagtcctacgaggagaaggccacgcgggcgccccacacggactgaaggccgc
ccgggctgccgccagccaagtgcaacttgaattgtcaatgagtatttttggaagcatttggaggaattcc
tagacattgcgttttctgtgttgccaaaatcccttcggacatttctcagacatctcccaagttcccatca
cgtcagatttggagctggtagcgcttacgatgcccccacgtgtgaacatctgtcttggtcacagagctgg
gtgctgccggtcaccttgagctgtggtggctcccggcacacgagtgtccggggttcggccatgtcctcac
gcgggcaggggtgggagccctcacaggcaagggggctgttggatttccatttcaggtggttttctaagtg
ctccttatgtgaatttcaaacacgtatggaattcattccgcatggactctgggatcaaaggctctttcct
cttttgtttg
117>Ly672S，顺铂抗性相关蛋白质CRR9p，全长蛋白质
MWSGRSSFTSLVVGVFVVYVVHTCWVMYGIVYTRPCSGDANCIQPYLARRPKLQLSVYTTTRSHLGAENN
IDLVLNVEDFDVESKFERTVNVSVPKKTRNNGTLYAYIFLHHAGVLPWHDGKQVHLVSPLTTYMVPKPEE
INLLTGESDTQQIEAEKKPTSALDEPVSHWRPRLALNVMADNFVFDGSSLPADVHRYMKMIQLGKTVHYL
PILFIDQLSNRVKDLMVINRSTTELPLTVSYDKVSLGRLRFWIHMQDAVYSLQQFGFSEKDADEVKGIFV
DTNLYFLALTFFVAAFHLLFDFLAFKNDISFWKKKKSMIGMSTKAVLWRCFSTVVIFLFLLDEQTSLLVL
VPAGVGAAIELWKVKKALKMTIFWRGLMPEFQFGTYSESERKTEEYDTQAMKYLSYLLYPLCVGGAVYSL
LNIKYKSWYSWLINSFVNGVYAFGFLFMLPQLFVNYKLKSVAHLPWKAFTYKAFNTFIDDVFAFIITMPT
SHRLACFRDDVVFLVYLYQRWLYPVDKRRVNEFGESYEEKATRAPHTD
118>Ly675S，KIAA0906基因，部分cDNA
cttcccggccccagccaaggctgtcgtttacgtgtcggacattcaggagctgtacatccgtgtggttgac
aaggtggagattgggaagacagtgaaggcatacgtccgcgtgctggacttgcacaagaagcccttccttg
ccaaatacttcccctttatggacctgaagctccgagcagcctccccgatcattacattggtggcccttga
tgaagcccttgacaactacaccatcacattcctcatccgcggtgtggccatcggccagaccagtctaact
gcaagtgtgaccaataaagctggacagagaatcaactcagccccacaacagattgaagtctttcccccgt
tcaggctgatgcccaggaaggtgacactgcttatcggggccacgatgcaggtcacctccgagggcggccc
ccagcctcagtccaacatccttttctccatcagcaatgagagcgttgcgctggtgagcgctgctgggctg
gtacagggcctcgccatcgggaacggcactgtgtctgggctcgtgcaggcagtggatgcagagaccggca
aggtggtcatcatctctcaggacctcgtgcaggtggaggtgctgctgctaagggccgtgaggatccgcgc
ccccatcatgcggatgaggacgggcacccagatgcccatctatgtcaccggcatcaccaaccaccagaac
cctttctcctttggcaatgccgtgccaggcctgaccttccactggtctgtcaccaagcgggacgtcctgg
acctccgagggcggcaccacgaggcgtcgatccgactcccgtcacagtacaactttgccatgaacgtgct
cggccgggtaaaaggccggaccgggctgagggtggtggtcaaggctgtggaccccacatcggggcagctg
tatggcctggccagagaactctcggatgagatccaagtccaggtgtttgagaagctgcagctgttcaacc
ctgaaatagaagcagaacaaatattaatgtcgcccaactcatatataaagctgcagacaaacagggatgg
tgcagcctctctgagctaccgcgtcctggatggacccgaaaaggttccagttgtgcatgttgatgagaaa
ggctttctagcatcagggtctatgatcgggacatccaccatcgaagtgattgcacaagagccctttgggg
ccaaccaaaccatcattgttgctgtaaaggtatcccctgtttcctacctgagggtttccatgagccctgt
cctgcacacccagaacaaggaggccctggtggccgtgcctttgggaatgaccgtgaccttcactgtccac
ttccacgacaactctggagatgtcttccatgctcacagttcggtcctcaactttgccactaacagagacg
actttgtgcagatcgggaagggccccaccaacaacacctgcgttgtccgcacagtcagcgtgggcctgac
actgctccgtgtgtgggacgcagagcacccgggcctctcggacttcatgcccctgcctgtcctacaggcc
atctccccagagctgtctggggccatggtggtgggggacgtgctctgtctggccactgttctgaccagcc
tggaaggcctctcaggaacctggagctcctcagccaacagcatcctccacatcgaccccaagacgggtgt
ggctgtggcccgggccgtgggatccgtgacggtttactatgaggtcgctgggcacctgaggacctacaag
gaggtggtggtcagcgtccctcagaggatcatggcccgtcacctccaccccatccagacaagcttccagg
aggctacagcctccaaagtgattgttgccgtgggagacagaagctctaacctgagaggcgagtgcacccc
cacccagagggaagtcatccaggccttgcacccagagaccctcatcagctgccagtcccagttcaagccg
gccgtctttgatttcccatctcaagatgtgttcaccgtggagccacagtttgacactgctctcggccagt
acttctgctcaatcacaatgcacaggctgacggacaagcagcggaagcacctgagcatgaagaagacagc
tctggtggtcagtgcctccctctccagcagccacttctccacagagcaggtgggggccgaggtgcccttc
agcccaggtctcttcgccgaccaggctgaaatccttttgagcaaccactacaccagttccgagatcaggg
tctttggtgccccggaggttctggagaacttggaggtgaaatccgggtccccggccgtgctggcattcgc
aaaggagaagtcttttgggtggcccagcttcatcacatacacggtcggcgtctcggaccccgcggctggc
agccaagggcctctgtccactaccctgaccttctccagccccgtgaccaaccaagccattgccatcccag
tgacagtggcttttgtgatggatcgccgtgggcccggtccttatggagccagcctcttccagcacttcct
ggattcctaccaggtcatgttcttcacgctcttcgccctgttggctgggacagcggtcatgatcatagcc
taccacactgtctgcacgccccgggatcttgctgtgcctgcagccctcacgcctcgagccagccctggac
acagcccccactatttcgctgcctcatcacccacatctcccaatgcattgcctcctgctcgcaaagccag
ccctccctcagggctgtggagcccagcctatgcctcccactaggccgcgtgaaggttcccggaggatggg
tctcagccgagcctcgtgcacccccaagatggaacatccctgctgcattcacactggaacaagcccctcc
agatgagtgccccggccccaggccagcttcactgccgtctcttcacacagagctgtagtttcggctctgc
ccattagctcattttatgtaggagttttaaatgtgtgtttttttcctttcaagtcttacaaagctaagac
tttttggctcattcctttttgcatggttgtctagggtttctggacaatgtgctgttgcatttttattttc
ctagccttgctaaaatctttcccttctcaagactttgagcagttagaagtgctctttagaagttgtctgt
gggtgatgttactgtagtggtctcagggaaaggattgtccagttactttagggggtttttggtggggttt
ttccccctgtgaaaacttactttgcccctagtctggctgctgctaggacttctgaggagcaatgggacat
gagtgtccctgtatctgcgccactgccgcaagggaagcctcaggaaccagcacctggaggccaggatagc
caagccctgggtgagcgagaggctggagaacacaggagctcacccagggctgctgcccaaccatgggcca
ctgtgaacagacttcagtcctctgtttttgtttcataagccgttgagacatctgatggacttggcttagg
ccctgctgggacatcccacgtgtgatccctttcactccatcaggacaccaggactgtccttaggaaaatg
tccttgagatggcagcaggagtcatattttctgtgtgtgtgtttcggaaagccgctgtgtcctgcctcag
cacaaagacccagtgtcatttgctcctcctgttcctgtgccactccagaacctcagcagatctgagccac
cgcctgccagtgtgagaggcggccactttcatggcagcttatcaggcgcagggccccagacagcttccca
gccggccctagagcccggcctgggccaatgatggagggcggccaccagcccagggcctgcccatccagaa
gggactccccagggcctgggggaggagacccttggaaaagtcctctcttcccagctcctgattctggatc
tgagattctcagatcacaggcccctgtgctccaggccgaggctgggccaccctcagggagatccagagac
tcatgcccatggccatccatgcgtggacgctgtgtggagagtccaggatgacgggatcccgcacaagctc
ccttcagtccttcagggctgggccatgtggttgatttttctaaagctggagaaaggaagaattgtgcctt
gcatattacttgagcttaaactgacaacctggatgtaaataggagcctttctactggtttatttaataaa
gttctatgtgatttttt
119>Ly675S，KIAA0g06蛋白质，部分蛋白质
FPAPAKAVVYVSDIQELYIRVVDKVEIGKTVKAYVRVLDLHKKPFLAKYFPFMDLKLRAASPIITLVALD
EALDNYTITFLIRGVAIGQTSLTASVTNKAGQRINSAPQQIEVFPPFRLMPRKVTLLIGATMQVTSEGGP
QPQSNILFSISNESVALVSAAGLVQGLAIGNGTVSGLVQAVDAETGKVVIISQDLVQVEVLLLRAVRIRA
PIMRMRTGTQMPIYVTGITNHQNPFSFGNAVPGLTFHWSVTKRDVLDLRGRHHEASIRLPSQYNFAMNVL
GRVKGRTGLRVVVKAVDPTSGDLYGLARELSDEIQVQVFEKLQLLNPEIEAEQILMSPNSYIKLQTNRDG
AASLSYRVLDGPEKVPVVHVDEKGFLASGSMIGTSTIEVIAQEPFGANQTIIVAVKVSPVSYLRVSMSPV
LHTQNKEALVAVPLGMTVTFTVHFHDNSGDVFHAHSSVLNFATNRDDFVQIGKGPTNNTCVVRTVSVGLT
LLRVWDAEHPGLSDFMPLPVLQAISPELSGAMVVGDVLCLATVLTSLEGLSGTWSSSANSILHIDPKTGV
AVARAVGSVTVYYEVAGHLRTYKEVVVSVPQRIMARHLHPIQTSFQEATASKVIVAVGDRSSNLRGECTP
TQREVIQALHPETLISCQSQFKPAVFDFPSQDVFTVEPQFDTALGQYFCSITMHRLTDKQRKHLSMKKTA
LVVSASLSSSHFSTEQVGAEVPFSPGLFADQAEILLSNHYTSSEIRVFGAPEVLENLEVKSGSPAVLAFA
KEKSFGWPSFITYTVGVSDPAAGSQGPLSTTLTFSSPVTNQAIAIPVTVAFVMDRRGPGPYGASLFQHFL
DSYQVMFFTLFALLAGTAVMIIAYHTVCTPRDLAVPAALTPRASPGHSPHYFAASSPTSPNALPPARKAS
PPSGLWSPAYASH
<210>121
<211>1270
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>121
Arg Asp Phe Gln Ser Glu Val Leu Leu Ser Ala Met Glu Leu Phe His
 1               5                  10                  15
Met Thr Ser Gly Gly Asp Ala Ala Met Phe Arg Asp Gly Lys Glu Pro
            20                  25                  30
Gln Pro Ser Ala Glu Ala Ala Ala Ala Pro Ser Leu Ala Asn Ile Ser
        35                  40                  45
Cys Phe Thr Gln Lys Leu Val Glu Lys Leu Tyr Ser Gly Met Phe Ser
    50                  55                  60
Ala Asp Pro Arg His Ile Leu Leu Phe Ile Leu Glu His Ile Met Val
65                  70                  75                  80
Val Ile Glu Thr Ala Ser Ser Gln Arg Asp Thr Val Leu Ser Thr Leu
                85                  90                  95
Tyr Ser Ser Leu Asn Lys Val Ile Leu Tyr Cys Leu Ser Lys Pro Gln
            100                 105                 110
Gln Ser Leu Ser Glu Cys Leu Gly Leu Leu Ser Ile Leu Gly Phe Leu
        115                 120                 125
Gln Glu His Trp Asp Val Val Phe Ala Thr Tyr Asn Ser Asn Ile Ser
    130                 135                 140
Phe Leu Leu Cys Leu Met His Cys Leu Leu Leu Leu Asn Glu Arg Ser
145                 150                 155                 160
Tyr Pro Glu Gly Phe Gly Leu Glu Pro Lys Pro Arg Met Ser Thr Tyr
                165                 170                 175
His Gln Val Phe Leu Ser Pro Asn Glu Asp Val Lys Glu Lys Arg Glu
            180                 185                 190
Asp Leu Pro Ser Leu Ser Asp Val Gln His Asn Ile Gln Lys Thr Val
        195                 200                 205
Gln Thr Leu Trp Gln Gln Leu Val Ala Gln Arg Gln Gln Thr Leu Glu
    210                 215                 220
Asp Ala Phe Lys Ile Asp Leu Ser Val Lys Pro Gly Glu Arg Glu Val
225                 230                 235                 240
Lys Ile Glu Glu Val Thr Pro Leu Trp Glu Glu Thr Met Leu Lys Ala
                245                 250                 255
Trp Gln His Tyr Leu Ala Ser Glu Lys Lys Ser Leu Ala Ser Arg Ser
            260                 265                 270
Asn Val Ala His His Ser Lys Val Thr Leu Trp Ser Gly Ser Leu Ser
        275                 280                 285
Ser Ala Met Lys Leu Met Pro Gly Arg Gln Ala Lys Asp Pro Glu Cys
    290                 295                 300
Lys Thr Glu Asp Phe Val Ser Cys Ile Glu Asn Tyr Arg Arg Arg Gly
305                 310                 315                 320
Gln Glu Leu Tyr Ala Ser Leu Tyr Lys Asp His Val Gln Arg Arg Lys
                325                 330                 335
Cys Gly Asn Ile Lys Ala Ala Asn Ala Trp Ala Arg Ile Gln Glu Gln
            340                 345                 350
Leu Phe Gly Glu Leu Gly Leu Trp Ser Gln Gly Glu Glu Thr Lys Pro
        355                 360                 365
Cys Ser Pro Trp Glu Leu Asp Trp Arg Glu Gly Pro Ala Arg Met Arg
    370                 375                 380
Lys Arg Ile Lys Arg Leu Ser Pro Leu Glu Ala Leu Ser Ser Gly Arg
385                 390                 395                 400
His Lys Glu Ser Gln Asp Lys Asn Asp His Ile Ser Gln Thr Asn Ala
                405                 410                 415
Glu Asn Gln Asp Glu Leu Thr Leu Arg Glu Ala Glu Gly Glu Pro Asp
            420                 425                 430
Glu Val Gly Val Asp Cys Thr Gln Leu Thr Phe Phe Pro Ala Leu His
        435                 440                 445
Glu Ser Leu His Ser Glu Asp Phe Leu Glu Leu Cys Arg Glu Arg Gln
    450                 455                 460
Val Ile Leu Gln Glu Leu Leu Asp Lys Glu Lys Val Thr Gln Lys Phe
465                 470                 475                 480
Ser Leu Val Ile Val Gln Gly His Leu Val Ser Glu Gly Val Leu Leu
                485                 490                 495
Phe Gly His Gln His Phe Tyr Ile Cys Glu Asn Phe Thr Leu Ser Pro
            500                 505                 510
Thr Gly Asp Val Tyr Cys Thr Arg His Cys Leu Ser Asn Ile Ser Asp
        515                 520                 525
Pro Phe Ile Phe Asn Leu Cys Ser Lys Asp Arg Ser Thr Asp His Tyr
    530                 535                 540
Ser Cys Gln Cys His Ser Tyr Ala Asp Met Arg Glu Leu Arg Gln Ala
545                 550                 555                 560
Arg Phe Leu Leu Gln Asp Ile Ala Leu Glu Ile Phe Phe His Asn Gly
                565                 570                 575
Tyr Ser Lys Phe Leu Val Phe Tyr Asn Asn Asp Arg Ser Lys Ala Phe
            580                 585                 590
Lys Ser Phe Cys Ser Phe Gln Pro Ser Leu Lys Gly Lys Ala Thr Ser
        595                 600                 605
Glu Asp Thr Leu Asn Leu Arg Arg Tyr pro Gly Ser Asp Arg Ile Met
    610                 615                 620
Leu Gln Lys Trp Gln Lys Arg Asp Ile Ser Asn Phe Glu Tyr Leu Met
625                 630                 635                 640
Tyr Leu Asn Thr Ala Ala Gly Arg Thr Cys Asn Asp Tyr Met Gln Tyr
                645                 650                 655
Pro Val Phe Pro Trp Val Leu Ala Asp Tyr Thr Ser Glu Thr Leu Asn
            660                 665                 670
Leu Ala Asn Pro Lys Ile Phe Arg Asp Leu Ser Lys Pro Met Gly Ala
        675                 680                 685
Gln Thr Lys Glu Arg Lys Leu Lys Phe Lle Gln Arg Phe Lys Glu Val
    690                 695                 700
Glu Lys Thr Glu Gly Asp Met Thr yal Gln Cys His Tyr Tyr Thr His
705                 710                 715                 720
Tyr Ser Ser Ala Ile Ile Val Ala Ser Tyr Leu Val Arg Met Pro Pro
                725                 730                 735
Phe Thr Gln Ala Phe Cys Ala Leu Gln Gly Gly Ser Phe Asp Val Ala
            740                 745                 750
Asp Arg Met Phe His Ser Val Lys Ser Thr Trp Glu Ser Ala Ser Arg
        755                 760                 765
Glu Asn Met Ser Asp Val Arg Glu Leu Thr Pro Glu Phe Phe Tyr Leu
    770                 775                 780
Pro Glu Phe Leu Thr Asn Cys Asn Gly Val Glu Phe Gly Cys Met Gln
785                 790                 795                 800
Asp Gly Thr Val Leu Gly Asp Val Gln Leu Pro Pro Trp Ala Asp Gly
                805                 810                 815
Asp Pro Arg Lys Phe Ile Ser Leu His Arg Lys Ala Leu Glu Ser Asp
            820                 825                 830
Phe Val Ser Ala Asn Leu His His Trp Ile Asp Leu Ile Phe Gly Tyr
        835                 840                 845
Lys Gln Gln Gly Pro Ala Ala Val Asp Ala Val Asn Ile Phe His Pro
    850                 855                 860
Tyr Phe Tyr Gly Asp Arg Met Asp Leu Ser Ser Ile Thr Asp Pro Leu
865                 870                 875                 880
Ile Lys Ser Thr Ile Leu Gly Phe Val Ser Asn Phe Gly Gln Val Pro
                885                 890                 895
Lys Gln Leu Phe Thr Lys Pro His Pro Ala Arg Thr Ala Ala Gly Lys
            900                 905                 910
Pro Leu Pro Gly Lys Asp Val Ser Thr Pro Val Ser Leu Pro Gly His
        915                 920                 925
Pro Gln Pro Phe Phe Tyr Ser Leu Gln Ser Leu Arg Pro Ser Gln Val
    930                 935                 940
Thr Val Lys Asp Met Tyr Leu Phe Ser Leu Gly Ser Glu Ser Pro Lys
945                 950                 955                 960
Gly Ala Ile Gly His Ile Val Ser Thr Glu Lys Thr Ile Leu Ala Val
                965                 970                 975
Glu Arg Asn Lys Val Leu Leu Pro Pro Leu Trp Asn Arg Thr Phe Ser
            960                 985                 990
Trp Gly Phe Asp Asp Phe Ser Cys Cys Leu Gly Ser Tyr Gly Ser Asp
        995                 1000                1005
Lys Val Leu Met Thr Phe Glu Asn Leu Ala Ala Trp Gly Arg Cys Leu
    1010                1015                1020
Cys Ala Val Cys Pro Ser Pro Thr Thr Ile Val Thr Ser Gly Thr Ser
1025                1030                1035                1040
Thr Val Val Cys Val Trp Glu Leu Ser Met Thr Lys Gly Arg Pro Arg
                1045                1050                1055
Gly Leu Arg Leu Arg Gln Ala Leu Tyr Gly His Thr Gln Ala Val Thr
            1060                1065                1070
Cys Leu Ala Ala Ser Val Thr Phe Ser Leu Leu Val Ser Gly Ser Gln
        1075                1080                1085
Asp Cys Thr Cys Ile Leu Trp Asp Leu Asp His Leu Thr his Val Thr
    1090                1095                1100
Arg Leu Pro Ala His Arg Glu Gly Ile Ser Ala Ile Thr Ile Ser Asp
1105                1110                1115                1120
Val Ser Gly Thr Ile Val Ser Cys Ala Gly Ala His Leu Ser Leu Trp
                1125                1130                1135
Asn Val Asn Gly Gln Pro Leu Ala Ser Ile Thr Thr Ala Trp Gly Pro
            1140                1145                1150
Glu Gly Ala Ile Thr Cys Cys Cys Leu Met Glu Gly Pro Ala Trp Asp
        1155                1160                1165
Thr Ser Gln Ile Ile Ile Thr Gly Ser Gln Asp Gly Met Val Arg Val
    1170                1175                1180
Trp Lys Thr Glu Asp Val Lys Met Ser Val Pro Gly Arg Pro Ala Gly
1185                1190                1195                1200
Glu Glu Pro Leu Ala Gln Pro Pro Ser Pro Arg Gly His Lys Trp Glu
                1205                1210                1215
Lys Asn Leu Ala Leu Ser Arg Glu Leu Asp Val Ser Ile Ala Leu Thr
            1220                1225                1230
Gly Lys Pro Ser Lys Thr Ser Pro Ala Val Thr Ala Leu Ala Val Ser
        1235                1240                1245
Arg Asn His Thr Lys Leu Leu Val Gly Asp Glu Arg Gly Arg Ile Phe
    1250                1255                1260
Cys Trp Ser Ala Asp Gly
1265                1270
<210>121
<211>647
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>121
Met Leu Gln Lys Trp Gln Lys Arg Asp Ile Ser Asn Phe Glu Tyr Leu
 1               5                  10                  15
Met Tyr Leu Asn Thr Ala Ala Gly Arg Thr Cys Asn Asp Tyr Met Gln
            20                  25                  30
Tyr Pro Val Phe Pro Trp Val Leu Ala Asp Tyr Thr Ser Glu Thr Leu
        35                  40                  45
Asn Leu Ala Asn Pro Lys Ile Phe Arg Asp Leu Ser Lys Pro Met Gly
    50                  55                  60
Ala Gln Thr Lys Glu Arg Lys Leu Lys Phe Ile Gln Arg Phe Lys Glu
65                  70                  75                  80
Val Glu Lys Thr Glu Gly Asp Met Thr Val Gln Cys His Tyr Tyr Thr
                85                  90                  95
His Tyr Ser Ser Ala Ile Ile Val Ala Ser Tyr Leu Val Arg Met Pro
            100                 105                 110
Pro Phe Thr Gln Ala Phe Cys Ala Leu Gln Gly Gly Ser Phe Asp Val
        115                 120                 125
Ala Asp Arg Met Phe His Ser Val Lys Ser Thr Trp Glu Ser Ala Ser
    130                 135                 140
Arg Glu Asn Met Ser Asp Val Arg Glu Leu Thr Pro Glu Phe Phe Tyr
145                 150                 155                 160
Leu Pro Glu Phe Leu Thr Asn Cys Asn Gly Val Glu Phe Gly Cys Met
                165                 170                 175
Gln Asp Gly Thr Val Leu Gly Asp Val Gln Leu Pro Pro Trp Ala Asp
            180                 185                 190
Gly Asp Pro Arg Lys Phe Ile Ser Leu His Arg Lys Ala Leu Glu Ser
        195                 200                 205
Asp Phe Val Ser Ala Asn Leu His His Trp Ile Asp Leu Ile Phe Gly
    210                 215                 220
Tyr Lys Gln Gln Gly Pro Ala Ala Val Asp Ala Val Asn Ile Phe His
225                 230                 235                 240
Pro Tyr Phe Tyr Gly Asp Arg Met Asp Leu Ser Ser Ile Thr Asp Pro
                245                 250                 255
Leu Ile Lys Ser Thr Ile Leu Gly Phe Val Ser Aan Phe Gly Gln Val
            260                 265                 270
Pro Lys Gln Leu Phe Thr Lys Pro His Pro Ala Arg Thr Ala Ala Gly
        275                 280                 285
Lys Pro Leu Pro Gly Lys Asp Val Ser Thr Pro Val Ser Leu Pro Gly
    290                 295                 300
His Pro Gln Pro Phe Phe Tyr Ser Leu Gln Ser Leu Arg Pro Ser Gln
305                 310                 315                 320
Val Thr Val Lys Aap Met Tyr Leu Phe Ser Leu Gly Ser Glu Ser Pro
                325                 330                 335
Lys Gly Ala Ile Gly His Ile Val Ser Thr Glu Lys Thr Ile Leu Ala
            340                 345                 350
Val Glu Arg Asn Lys Val Leu Leu Pro Pro Leu Trp Asn Arg Thr Phe
        355                 360                 365
Ser Trp Gly Phe Asp Asp Phe Ser Cys Cys Leu Gly Ser Tyr Gly Ser
    370                 375                 380
Asp Lys Val Leu Met Thr Phe Glu Asn Leu Ala Ala Trp Gly Arg Cys
385                 390                 395                 400
Leu Cys Ala Val Cys Pro Ser Pro Thr Thr Ile Val Thr Ser Gly Thr
                405                 410                 415
Ser Thr Val Val Cys Val Trp Glu Leu Ser Met Thr Lys Gly Arg Pro
            420                 425                 430
Arg Gly Leu Arg Leu Arg Gln Ala Leu Tyr Gly His Thr Gln Ala Val
        435                 440                 445
Thr Cys Leu Ala Ala Ser Val Thr Phe Ser Leu Leu Val Ser Gly Ser
    450                 455                 460
Gln Asp Cys Thr Cys Ile Leu Trp Asp Leu Asp His Leu Thr His Val
465                 470                 475                 480
Thr Arg Leu Pro Ala His Arg Glu Gly Ile Ser Ala Ile Thr Ile Ser
                485                 490                 495
Asp Val Ser Gly Thr Ile Val Ser Cys Ala Gly Ala His Leu Ser Leu
            500                 505                 510
Trp Asn Val Asn Gly Gln Pro Leu Ala Ser Ile Thr Thr Ala Trp Gly
        515                 520                 525
Pro Glu Gly Ala Ile Thr Cys Cys Cys Leu Met Glu Gly Pro Ala Trp
    530                 535                 540
Asp Thr Ser Gln Ile Ile Ile Thr Gly Ser Gln Asp Gly Met Val Arg
545                 550                 555                 560
Val Trp Lys Thr Glu Asp Val Lys Met Ser Val Pro Gly Arg Pro Ala
                565                 570                 575
Gly Glu Glu Pro Leu Ala Gln Pro Pro Ser Pro Arg Gly His Lys Trp
            580                 585                 590
Glu Lys Asn Leu Ala Leu Ser Arg Glu Leu Asp Val Ser Ile Ala Leu
        595                 600                 605
Thr Gly Lys Pro Ser Lys Thr Ser Pro Ala Val Thr Ala Leu Ala Val
    610                 615                 620
Ser Arg Asn His Thr Lys Leu Leu Val Gly Asp Glu Arg Gly Arg Ile
625                 630                 635                 640
Phe Cys Trp Ser Ala Asp Gly
                645
<210>122
<211>32
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>His-Ly1452P的PDM-797 PCR引物
<400>122
gtgtcacaat ctacagtcag gcaggattct cc                    32
<210>123
<211>35
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>His-Ly1452P的PDM-799 PCR引物
<400>123
gttatgtagc ggccgcttat catgttgctg cagag                 35
<210>124
<211>980
<212>DNA
<223>Incyte Lifeseq数据库模板#LS_1076101.8
人内源逆转录病毒序列(HERV)
<400>124
gccgctgccg ctccaggaga caggttccca tgcaggaatg aaagacatgg aagggaagag     60
gggggccagc tccctgagtc ctgtgtccac cagctgctgc taaatacctc tgagaaactc    120
tgcttctatc taaggggacc tacttctctc gggaatctca atacttggaa caagaacctc    180
ctagacggac cctttggcat aatgaattgg accaactgta ggttccagga ctagagagcc    240
agcaatgcct ccatgaacaa tctcacccaa ttactctgct caggaaacga ggtaactgat    300
ggacagccga ggcagcccct taggcggctt aggcctcccc tgtggagcat ccctgaggcg    360
gactccggcc agcccgagtg atgcgatcca aagagcactc ccgggtagga aattgccccg    420
gtggaatgcc tcaccagagc agcgtgtagc agttccctgt ggaggattaa cacagtggct    480
gaacaccggg aaggaactgg cacttggagt ccggacatct gaaacttgta gactgggagc    540
tgtacatgga tgggagcagc ttcaccaacc cctgcaaagt gactctgaag aagacgacaa    600
gccctgctcc agtcacaccc ggaagctgac tggtccacgc acagctgaag catgaggaaa    660
ctcatcgcgg gactaatttt ccttaaaatt tagacttgca cagtaaggac ttcaactgac    720
cttcctcaga ctgagaactg tttccagtat atacatcaag tcactgaggt aggacaaaag    780
attgctacat tcctattatt ttaaggttac atttttgggg acccctcttt cttctgttct    840
agctattacc tttcttgtgt cacctagaaa aggaccagtc cttaattgta ttttaaaaac    900
tgtgatcatg ggaagcttta aattggttca ataacacgca tcaagttggt tatttcctgg    960
gctacatacc ttggatagat                                                980

Claims (16)

1.一种如SEQ ID N0：1-3、5、7、9、11、13-14、16-17、19-20、22-25、27-28、30-31、33-34、36、38-39、41-42、44、46-47、49、51、53、55、57、59-60、62、64-65、67-70、72-73、75、77-81、83、85-86、88-100、102-103、105-106、108、110-113、115-116、118或124所示的分离的多核苷酸，其中，所述多核苷酸编码一种多肽或其免疫原性片段。
2.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有可操作连接于表达控制序列的如权利要求1所述的多核苷酸。
3.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求2所述的表达载体。
4.一种免疫结合物，其特征在于，所述免疫结合物含有特异性结合由权利要求1所述的多核苷酸编码的多肽或其免疫原性片段的抗体。
5.如权利要求4所述的免疫结合物，其特征在于，所述抗体连接于效应分子。
6.如权利要求4所述的免疫结合物在药物制造中的应用，所述药物在治疗癌症的组合物中作为活性成分。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述癌症是多发性骨髓瘤细胞。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述癌症是慢性淋巴细胞白血病。
9.一种含有如SEQ ID NOS：4、6、8、10、12、15、18、21、26、29、32、35、37、40、43、45、48、50、52、54、56、58、61、63、66、71、74、76、82、84、87、101、104、107、109、114、117或119-121所示氨基酸序列的分离的多肽。
10.一种分离的抗体，其特征在于，所述抗体特异性结合权利要求9所述的多肽或其免疫原性片段。
11.一种免疫结合物，其特征在于，所述免疫结合物含有权利要求10所述的抗体。
12.如权利要求11所述的免疫结合物，其特征在于，所述抗体连接于效应分子。
13.如权利要求12所述的免疫结合物，其特征在于，所述效应分子是治疗性部分。
14.如权利要求11所述的免疫结合物在药物制造中的应用，所述药物在治疗癌症的组合物中作为活性成分。
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述癌症是多发性骨髓瘤。
16.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述癌症是慢性淋巴细胞白血病。
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