CN1634970A - 一种三七总皂苷的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种三七总皂苷的制备方法，它是三七茎基或主根或支根或叶经过超声振荡提取、过大孔吸附树脂或水饱和正丁醇萃取富集、反相制备型高效液相色谱系统纯化的方法获得，其中的主要活性部位三七总皂苷的纯度达98％以上。本发明制备的三七总皂苷具有很好的预防和治疗心脑血管疾病的作用。

Description

一种三七总皂苷的制备方法

技术领域

本发明属中药制药技术领域，具体涉及一种三七总皂苷的制备方法。

背景技术

三七是我国的常用中药，其中所含的三七总皂苷是其主要有效部位，三七总皂苷均具有扩张血管、抑制血小板聚集的作用，同时还具有抗炎、镇痛、抗衰老、增强免疫功能的作用。三七的药用部位有茎基(芦头、剪口)、主根、支根(筋条)，三七叶中也含有大量的三七皂苷，各药用部位所含的三七总皂苷含量有差异。为了获得高纯度的三七总皂苷，研究人员付出了不懈的努力。申请号02158727.2的专利文献公开了一种三七叶皂苷的提取方法，采用水提液过强极性ADS-3型吸附树脂柱得到，其中三七叶总皂苷含量大于或等于90％；申请号为02144840.X的专利文献公开了三七叶中总皂苷提取物的制备方法，采用水提后的碱液过大孔吸附树脂柱和ZTC型大孔脱色树脂，得到的三七叶总皂苷含量达85％以上；申请号01108591.6的专利文献公开了三七总苷的制备方法，三七采用70％乙醇提取，浓缩液过大孔吸附树脂柱，70％-90％乙醇洗脱液过离子交换树脂脱色柱，得到三七总苷的纯度达到95％以上；申请号93105774.4的专利文献公开了三七总苷药物及其制备方法，三七采用50％以上乙醇浸提，回收乙醇后的水液过大孔吸附树脂柱，70％-95％乙醇洗脱液用氧化铝吸附脱色，再用3％-5％活性炭脱色，正丁醇萃取，丙酮干燥和真空干燥，得到的皂苷纯度可达88％以上。以上的制备方法有以下的不足：对于纯度和产率这一对矛盾解决的不好，纯度提高的同时产率下降，产率提高的同时纯度又下降，两者不能很好的兼顾；大孔吸附树脂或聚酰胺或正丁醇萃取作为纯化的关键步骤，由于受到方法本身的限制，提取物要达到高纯度很困难；所以以大孔吸附树脂或聚酰胺或正丁醇萃取为关键步骤的工艺来对三七提取物进行纯化是不可取的；三七药材各部位含有类似的皂苷，只是含量和单体皂苷的比例不同而已。在已有的制备方法中，没有一种方法可以用来提取三七药材不同部位中的总皂苷使其达到很高的相近的纯度，必须采用不同的制备工艺。不同的制备方法在工业生产中对于设备的要求就不同，因而会增加生产的成本；温度对三七中的有效成分有影响[刘环香，等。温度对三七有效成分的影响。中国医院药学杂志，1995，15(11)：513]，以上方法在提取中没有考虑到皂苷类成分在长时间受热过程中，容易分解而含量降低。

发明内容

本发明的研究人员经过多次试验，在已有的制备方法的基础上，利用现在的先进的科学技术方法探索出一条从三七药材中制备三七总皂苷的方法。本方法对于原料中三七总皂苷含量的要求非常小，无论是三七的茎基、主根、支根或叶，药材中总皂苷含量高低，经过本发明的制备方法后，得到的三七总皂苷的纯度都可以达到98％以上。且本发明完全可以实现自动化、工业化，为三七总皂苷的产业化发展提供基础。

本发明的目的是公开一种三七总皂苷的提取方法。

本发明通过以下技术方案实现。

一、制备方法

(1)原料。药材为：三七茎基或主根或支根或叶；

(2)提取。将上述药材粉碎，过20-60目筛，加6-10倍量的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为20-50分钟，振荡频率为20-80kHz，提取2-4次，合并提取液，以12000-20000转/分的速度离心，离心液收集备用；

(3)富集。将离心液采用下述a)或b)方法之一对有效部位进行富集；

a)将上述离心液过已处理好的非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，先用5-10倍柱体积的水洗脱，再换用4-8倍柱体积的75％-95％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到粉末；

b)将上述离心液浓缩为溶液∶药材为1∶1，用0.5-3倍的用水饱和正丁醇萃取3-8次，合并正丁醇液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到粉末；

(4)纯化。将上述粉末用20-40倍量的50％乙醇溶解，用色谱柱微粒直径为5-15μm的八烷基硅烷键合硅胶或十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的制备型高效液相色谱系统进行分离，用20％-60％乙醇溶液洗脱，收集富含三七皂苷成分的洗脱液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到三七总皂苷有效部位。

超声振荡仪产生的超声波能产生强烈振动，高速度，强烈的空化效应，搅拌作用，加速药材中的有效成分溶解，可以提高有效成分的提出率。超声振荡所需设备简单、操作方便、提取时间短、提取率高、节能、节约药材、无需加热，使三七药材中的皂苷类成分在提取完全的同时保持稳定。

旋转刮膜浓缩可以在低温下快速、高效率的对提取液进行浓缩，使得其中的三七皂苷类有效成分免受长时间的加热而破坏。

利用大孔吸附树脂或正丁醇萃取的方法对三七皂苷类有效部位进行富集，去除提取物中的鞣质、蛋白质、淀粉和糖等杂质。这些方法运用已很成熟，对于皂苷类成分的除杂效果很好。

用制备型反相高效液相色谱系统对富集后的三七总皂苷进行纯化，利用色谱柱高效的分离能力，使得皂苷类有效成分与其它成分达到彻底的分离，收集只含皂苷类成分的部分，处理后即可得到纯度很高的三七总皂苷有效部位。制备型高效液相色谱系统已实现了工业化和自动化，而且在产品纯度高的同时也具有很高的产率，对于有效成分的损失很小。

二、三七药材不同部位提取的三七总皂苷纯度比较

总皂苷含量测定方法依照申请号01108591.6的专利文献中总皂苷含量测定方法测定。三七药材不同部位提取样品均由广东天之娇药物开发有限公司提供。结果见表1。

表1  三七药材不同部位提取的三七总皂苷纯度比较(N＝3)

    原料(三七部位)              纯度(％)

        茎基                      99.2

        主根                      99.0

        支根                      98.5

        叶                        98.7

以上含量测定结果可以看出，三七药材中三七总皂苷含量不同的药用部位为原料按本发明的制备方法得到的三七总皂苷，其纯度均达到了98.5％以上。说明本发明的三七总皂苷的制备方法对于原料药材的选择性很低，而且最终得到的产品纯度很高。

三、不同制备方法提取的三七总皂苷的比较

为了阐明本发明的制备方法和其它方法比较所具有的优势，对本发明和其它发明得到的三七总皂苷进行了比较。下述编号为A的产品用申请号为02158727.2的专利文献中的方法制备；编号为B的产品用申请号为02158727.2的专利文献中的方法制备；编号C的产品用本发明的制备方法制成。原料为市售的同一批三七主根药材。三批样品均由广东天之娇药物开发有限公司提供。结果见表2。

表2  不同制备方法提取的三七总皂苷的比较(N＝3)

产品         产率(％)        纯度(％)      色泽

A        8.37         91.2        白色

B        9.14         95.3        白色

C        11.32        99.2        白色

由以上数据可以看出，本发明的制备方法无论是三七总皂苷的产率，还是其纯度均明显高于对比专利文献中的方法；本发明的制备方法得到的三七总皂苷的绝对量和相对量均较高，说明本发明的制备方法更加科学、更加合理、更具有实用性。

四、制备实施例

以下实施例旨在进一步举例说明，而不是限制本发明。在不违背本发明的精神和原则的前提下，对发明个别技术步骤进行的任何改动或改变将落入本发明权利要求范围内。

实施例1

将三七茎基(芦头、剪口)10kg，粉碎，过60目筛，加10倍量的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为50分钟，振荡频率为20kHz，提取4次，合并提取液，以20000转/分的速度离心，离心液过已处理好的D101型大孔吸附树脂柱，先用5倍柱体积的水洗脱，再换用8倍柱体积的75％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到粉末；将粉末用40倍量的50％乙醇溶解，用色谱柱微粒直径为5μm的八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的制备型高效液相色谱系统进行分离，用60％乙醇溶液洗脱，收集富含三七皂苷成分的洗脱液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到三七总皂苷有效部位1.43kg，得率14.3％。

实施例2

将三七主根10kg，粉碎，过20目筛，加6倍量的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为20分钟，振荡频率为80kHz，提取2次，合并提取液，以12000转/分的速度离心，离心液过已处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱，先用10倍柱体积的水洗脱，再换用4倍柱体积的95％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到粉末；将粉末用20倍量的50％乙醇溶解，用色谱柱微粒直径为15μm的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的制备型高效液相色谱系统进行分离，用20％乙醇溶液洗脱，收集富含三七皂苷成分的洗脱液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到三七总皂苷有效部位1.15kg，得率11.5％。

实施例3

将三七支根10kg，粉碎，过40目筛，加8倍量的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为40分钟，振荡频率为50kHz，提取3次，合并提取液，以16000转/分的速度离心，离心液过已处理好的D101型大孔吸附树脂柱，先用8倍柱体积的水洗脱，再换用6倍柱体积的85％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到粉末；将粉末用30倍量的50％乙醇溶解，用色谱柱微粒直径为10μm的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的制备型高效液相色谱系统进行分离，用40％乙醇溶液洗脱，收集富含三七皂苷成分的洗脱液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到三七总皂苷有效部位1.12kg，得率11.2％。

实施例4

将三七叶10kg，粉碎，过40目筛，加9倍量的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为30分钟，振荡频率为45kHz，提取4次，合并提取液，以18000转/分的速度离心，离心液过已处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱，先用6倍柱体积的水洗脱，再换用7倍柱体积的80％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到粉末；将粉末用35倍量的50％乙醇溶解，用色谱柱微粒直径为8μm的八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的制备型高效液相色谱系统进行分离，用30％乙醇溶液洗脱，收集富含三七皂苷成分的洗脱液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到三七总皂苷有效部位1.01kg，得率10.1％。

实施例5

将三七茎基(芦头、剪口)10kg，粉碎，过20目筛，加7倍量的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为45分钟，振荡频率为75kHz，提取2次，合并提取液，以15000转/分的速度离心，离心液浓缩为溶液∶药材为1∶1，用3倍的用水饱和正丁醇萃取3次，合并正丁醇液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到粉末；将粉末用25倍量的50％乙醇溶解，用色谱柱微粒直径为12μm的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的制备型高效液相色谱系统进行分离，用50％乙醇溶液洗脱，收集富含三七皂苷成分的洗脱液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到三七总皂苷有效部位1.46kg，得率14.6％。

实施例6

将三七主根10kg，粉碎，过60目筛，加10倍量的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为35分钟，振荡频率为60kHz，提取3次，合并提取液，以17000转/分的速度离心，离心液浓缩为溶液∶药材为1∶1，用0.5倍的用水饱和正丁醇萃取8次，合并正丁醇液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到粉末；将粉末用35倍量的50％乙醇溶解，用色谱柱微粒直径为6μm的八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的制备型高效液相色谱系统进行分离，用35％乙醇溶液洗脱，收集富含三七皂苷成分的洗脱液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到三七总皂苷有效部位1.13kg，得率11.3％。

实施例7

将三七支根10kg，粉碎，过40目筛，加8倍量的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为25分钟，振荡频率为30kHz，提取4次，合并提取液，以14000转/分的速度离心，离心液浓缩为溶液∶药材为1∶1，用2倍的用水饱和正丁醇萃取5次，合并正丁醇液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到粉末；将粉末用30倍量的50％乙醇溶解，用色谱柱微粒直径为9μm的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的制备型高效液相色谱系统进行分离，用55％乙醇溶液洗脱，收集富含三七皂苷成分的洗脱液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到三七总皂苷有效部位1.13kg，得率11.3％。

实施例8

将三七叶10kg，粉碎，过60目筛，加9倍量的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为40分钟，振荡频率为55kHz，提取3次，合并提取液，以19000转/分的速度离心，离心液浓缩为溶液∶药材为1∶1，用1倍的用水饱和正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到粉末；将粉末用25倍量的50％乙醇溶解，用色谱柱微粒直径为10μm的八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的制备型高效液相色谱系统进行分离，用45％乙醇溶液洗脱，收集富含三七皂苷成分的洗脱液，50℃旋转刮膜浓缩，干燥，粉碎，得到三七总皂苷有效部位1.04kg，得率10.4％。

本发明制备的三七总皂苷不仅可以用于预防和治疗心脑血管疾病，尤其对脑血管疾病的治疗效果最佳，而且可以用于其它出血和淤血性疾病的治疗。本发明制备的三七总皂苷可以制成口服制剂和注射制剂。

Claims (9)

1、一种三七总皂苷的制备方法，它是将三七茎基或主根或支根或叶经过提取、富集、纯化的方法得到三七总皂苷有效部位，其特征在于，制备方法包括以下步骤：

(1)将上述药材进行超声振荡提取；

(2)将提取液采用下述a)或b)方法之一对有效部位进行富集；

a)将上述提取液过已处理好的非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，先用5-10倍柱体积的水洗脱，再换用4-8倍柱体积的75％-95％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，粉碎，得到粉末；或

b)将上述提取液浓缩为溶液∶药材为1∶1，用0.5-3倍体积的用水饱和正丁醇萃取3-8次，合并正丁醇液，浓缩，干燥，粉碎，得到粉末；

(3)将上述粉末用制备型高效液相色谱系统进行纯化；

2、根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)为药材粉末过20-60目筛，加6-10倍量的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为20-50分钟，振荡频率为20-100kHz，提取2-4次，合并提取液，以12000-20000转/分的速度离心，离心液收集备用；

3、根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)为粉末用20-40倍量的50％乙醇溶解，用制备型高效液相色谱系统进行分离，用乙醇溶液洗脱，收集富含三七皂苷成分的洗脱液，浓缩，干燥，粉碎，得到三七总皂苷有效部位。

4、根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，三七总皂苷的重量百分含量大于或等于98.5％。

5、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，制备型高效液相色谱系统的色谱柱的填充剂为烷基硅烷键合硅胶。

6、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，制备型高效液相色谱系统的色谱柱的填充剂为八烷基硅烷键合硅胶或十八烷基硅烷键合硅胶。

7、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，制备型高效液相色谱系统的色谱柱的填充剂的微粒直径为5-15μm。

8、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，乙醇溶液的体积百分比浓度为20％-60％。

9、根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于，浓缩采用旋转刮膜浓缩技术，温度控制在50℃。