CN100446780C - 一种注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法，其采用乙醇回流提取，大孔吸附树脂柱吸附，过滤，得三七提取液，将其添加赋形剂后再冷冻干燥而成。本发明无需加专用溶剂，直接用氯化钠或葡萄糖注射液就可使其完全溶解，适用于对乙醇过敏的患者，使用方便安全，减少了污染几率。

Description

一种注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法

技术领域

本发明涉及一种注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法，属于中药制剂领域。

背景技术

三七又称田七、人参三七、金不换、山漆，为五加科人参属植物Panax notoginseng(Burk)F.H.Chen.；是我国特有的药材品种，《本草纲目》收录以来，已有500年的历史，李时珍日：“生广西南丹诸州番峒深山中，采根暴干，黄黑色。团结物，状略似白及；长者如老干地黄，有节。味微甘而苦，颇似人参之味”。《本草纲目拾遗》说：“人参补气第一，三七补血第一，为中药之最珍贵者”。

三七具有活血、止痛、止血、祛瘀、消肿等功效。常用于治疗跌打损伤、产后瘀阻、崩漏、经闭及各种出血症。

三七被人们誉为“人参之王”，其总皂苷含量约为12％，是三七主要药理活性成分；现从三七中分离得到20种达玛烷(Dammarane)型皂苷，根据水解后次皂苷元结构的不同，分为人参皂苷(Ginsenoside)Rg、Rb、Ro、三种类型，包括：人参皂苷Rg1、Rg2、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rh、F2、三七皂苷R1、R2、R3、R6、Fa、Fc、Fe、R4等；并含有三七黄酮A、三七黄酮B、挥发油、生物碱、多糖、氨基酸-β-草酰基-L-a、β-二氨基丙酸(deneichine)等有效成分。

因此，对于三七有效成分的提取方法有很多研究和报道。比如，专利文献200310104043.6，发明名称为一种三七总皂苷注射液的制备方法，该方法的过滤步骤均采用膜分离方法或者微滤方法。其可根据药液的有效成分、微生物、微粒的不同大小，选用截留分子量范围为1500至10,0000的膜材对注射液中的杂质、微生物(无效成分及热原物质)按其分子量大小进行一次或分次截留，实现去除杂质和微生物。

专利文献02131193.5，发明名称三七皂苷的提取方法，利用强极性大孔吸附树脂对三七的有效成分进行分离纯化，产品中三七皂苷中各单体皂苷的含量为人参皂苷Rg1≥30％、Re≥5.0％、Rb1≥5.0％和三七皂苷R1≥20.0％。

专利文献200510049903.X，发明名称为从三七中提取皂苷类有效成分的方法，是将三七药材粉碎粒度为20～80目，各称取10g放入A、B、C、D个提取罐中，向D罐中加入5～10倍体积，35～90％的乙醇溶液，温度升至35～80℃，阶段提取20～60min。依次进行D、C、B、A罐的提取，使A、B、C、D四个罐中提取液的有效成分含量依次递减。随后，当某一阶段提取时间结束时，已经提取四次的药材所在的罐进行排渣与加药，提取液有效成分最高的进行排液，其它提取液按照反向隔一个单元进行迁移。进行四次循环后，合并提取液。

专利文献99106223.X，发明名称精制血塞通注射液的生产工艺，包括1、将三七生药煎煮2次；2.将滤液合并，浓缩，并加入乙醇；3.将溶液过树脂柱后冷藏放置；4.回收乙醇；5.微孔滤膜过滤，调节pH；6.浓缩、干燥得到三七总皂甙粉；7.三七总皂甙粉与注射用水混合，调pH；8.溶液煮沸，加活性炭；9.过滤及精滤。

专利文献200510090732.5，发明名称为一种注射用血塞通冻干粉针制剂(包括专用溶剂)及其工艺和适应症，由该文献获得的制剂在使用前需要加专用溶剂溶解，使用不方便，易造成污染且专用溶剂为含35％-45％乙醇的注射用溶液，不适用于对乙醇过敏的人群。

因此，研究人员在此基础上进行注射用血塞通冻干粉针制剂工艺改进，以适用于乙醇过敏者使用。

发明内容

本发明的目的是提供一种注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法，解决了已有注射用血塞通应用前需加专用溶剂溶解，使用不便，易污染等问题，并且适用于对乙醇过敏者。

为了实现本发明目的，本发明的一种注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法，包括如下步骤：

1)将三七粉碎，加1～4倍量70～95％乙醇浸泡12～48小时，加热回流提取至少2次，每次1～3小时，过滤；合并滤液回收乙醇，加纯化水稀释至0.20～0.40g(生药)/ml，静置12～48小时后过滤，得滤液；

2)然后滤液以1.2～1.4BV/h(BV为树脂装填体积)的流速过大孔吸附树脂柱吸附，用树脂1～3倍量的纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂1～3倍量的60～80％乙醇浸泡树脂30～60分钟后，用树脂4～6倍量的60～80％的乙醇以1.0～1.2BV/h的流速洗脱，再用树脂1～3倍量的纯化水冲洗树脂柱；收集洗脱液与冲洗液，以6.0～6.5BV/h的流速过脱色树脂，再加入树脂1～3倍量的85～95％的乙醇以相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，加入生药重量1～3％的活性炭于30～50℃保温脱色40～60分钟，过滤，回收乙醇至无醇味；再加入注射用水稀释至1～2g(生药)/ml的溶液，灌装，灭菌，冷藏3～9天，室温放置30～60天；

3)再将药液经0.45～0.65μm滤膜过滤，于50℃以下调pH值至5.5～6.5，搅拌均匀后加热至75～85℃，加入0.1～0.3％活性炭，煮沸10～25分钟，冷却至室温，调pH值至5.5～6.5，经0.2μm滤膜过滤后灌装，充氮气压盖，灭菌，冷冻至结冰，化冰后于避光阴凉处或室温放置3～5个月；

4)将缓化后的药液用注射用水稀释至浓度按三七总皂苷计0.15～0.25g/ml，加热煮沸，过滤，冷冻干燥，或冷冻干燥后粉碎成细粉即得。

其中，步骤4)缓化后的药液中加入赋形剂，先加注射用水使赋形剂溶解后，再加入活性炭脱色，过滤得水溶液；将水溶液加入到缓化后的药液中，用注射用水稀释至每1ml含三七总皂苷0.15～0.25g，赋形剂1.5～12.5mg，加热煮沸，过滤，冷冻干燥，或冷冻干燥后粉碎成细粉即得。

所述的赋形剂为甘露醇、乳糖或葡聚糖等。

步骤1)中回流次数为三次，优选的为，加2倍量90％乙醇浸泡三七12小时，加热回流提取2小时，过滤；再加1.5倍量90％乙醇回流提取1.5小时，过滤；同法再提取1次。

步骤2)中所述的吸附柱为D-101大孔吸附树脂柱，所述的脱色树脂柱为D900脱色树脂柱。

由本发明的方法获得的注射用血塞通冻干粉针制剂，中间过程无需减压干燥成粉，可由提取液直接经冷冻干燥而得，不仅简化了工艺过程，节约了成本，而且可避免带入杂质，提高其溶解性。赋形剂的添加不仅利于冻干成型，也可改善制剂的溶解性，因而无需加专用溶剂，直接用氯化钠或葡萄糖注射液就可使其完全溶解，适用于对乙醇过敏的患者，使用方便安全，减少了污染几率。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

1.三七提取工艺

取三七剪口，粉碎，加2倍量90％乙醇浸泡12小时，加热回流提取2小时，过滤；再加1.5倍量90％乙醇回流提取1.5小时，过滤，同法再提取一次，合并三次滤液回收乙醇，加纯化水稀释至0.25g(生药)/ml，静置12小时后过滤，滤液以1.3±0.1BV/h的流速过D-101大孔吸附树脂柱吸附，用树脂1倍量的纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂1倍量的70％乙醇浸泡树脂30分钟后，用树脂4倍量的70％的乙醇以1.0BV/h的流速洗脱，再用树脂1倍量的纯化水冲洗树脂柱。收集洗脱液与冲洗液，以6.0BV/h的流速过D900脱色树脂，再加入树脂1倍量的85％的乙醇以相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，加入生药重量2％的活性炭于40℃保温脱色40分钟，过滤，回收乙醇至无醇味。再加入注射用水稀释至1g(生药)/ml的溶液，灌装，110℃灭菌30分钟。冷藏7天，室温放置30天。

将药液经0.45μm滤膜过滤，于50℃以下用20％NaOH溶液调pH值至5.7，搅拌均匀后加热至80℃，加入0.15％活性炭，煮沸15分钟，冷却至室温，用20％NaOH调pH值至5.7，经0.2μm滤膜精滤后灌装，充氮气压盖，115℃灭菌30分钟，冷冻至结冰，化冰后静止放置于避光阴凉处三个月。

2.制剂的制备工艺

缓化后的药液用注射用水稀释至浓度以三七总皂苷计0.20±0.2g/ml，加热煮沸，0.2μm滤膜过滤，分装，冷冻干燥而成。

实施例2

1.三七提取工艺

取三七剪口，粉碎，加1倍量95％乙醇浸泡36小时，加热回流提取3小时，过滤；再加3倍量80％乙醇回流提取1小时，过滤，合并两次滤液回收乙醇，加纯化水稀释至0.20g(生药)/ml，静置48小时后过滤，滤液以1.2BV/h的流速过D-101大孔吸附树脂柱吸附，用树脂3倍量的纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的80％乙醇浸泡树脂40分钟后，用树脂6倍量的60％的乙醇以1.2BV/h的流速洗脱，再用树脂2倍量的纯化水冲洗树脂柱。收集洗脱液与冲洗液，以6.2BV/h的流速过D900脱色树脂，再加入树脂3倍量的90％的乙醇以相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，加入生药重量1％的活性炭于50℃保温脱色50分钟，过滤，回收乙醇至无醇味。再加入注射用水稀释至1g(生药)/ml的溶液，灌装，110℃灭菌30分钟。冷藏3天，室温放置45天。

将药液经0.65μm滤膜过滤，于50℃以下用20％NaOH溶液调pH值至6.5，搅拌均匀后加热至85℃，加入0.3％活性炭，煮沸25分钟，冷却至室温，用20％NaOH调pH值至6.5，经0.2μm滤膜精滤后灌装，充氮气压盖，115℃灭菌30分钟，冷冻至结冰，化冰后室温放置4个月。

2.制剂的制备工艺

取适量甘露醇，加注射用水使其溶解后，再加入活性炭搅拌15分钟脱色，过滤得甘露醇水溶液；将其加入到缓化后的药液中，用注射用水稀释至每1ml含三七总皂苷0.18±0.02g，甘露醇6.5mg，加热煮沸，0.2μm滤膜过滤，分装，冷冻干燥而成。

实施例3

1.三七提取工艺

取三七剪口，粉碎，加4倍量70％乙醇浸泡48小时，加热回流提取2.5小时，过滤；再加3倍量85％乙醇回流提取2小时，过滤，同法再提取一次，合并三次滤液回收乙醇，加纯化水稀释至0.40g(生药)/ml，静置24小时后过滤，滤液以1.4BV/h的流速过D-101大孔吸附树脂柱吸附，用树脂2倍量的纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂3倍量的60％乙醇浸泡树脂60分钟后，用树脂5倍量的80％的乙醇以1.0BV/h的流速洗脱，再用树脂3倍量的纯化水冲洗树脂柱。收集洗脱液与冲洗液，以6.5BV/h的流速过D900脱色树脂，再加入树脂2倍量的95％的乙醇以相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，加入生药重量3％的活性炭于30℃保温脱色60分钟，过滤，回收乙醇至无醇味。再加入注射用水稀释至2g(生药)/ml的溶液，灌装，110℃灭菌30分钟。冷藏9天，室温放置60天。

将药液经0.45μm滤膜过滤，于50℃以下用20％NaOH溶液调pH值至5.5，搅拌均匀后加热至75℃，加入0.1％活性炭，煮沸10分钟，冷却至室温，用20％NaOH调pH值至5.5，经0.2μm滤膜精滤后灌装，充氮气压盖，115℃灭菌30分钟，冷冻至结冰，化冰后静止放置于避光阴凉处5个月。

2.制剂的制备工艺

取适量乳糖，加注射用水使其溶解后，再加入活性炭搅拌15分钟脱色，过滤得乳糖水溶液；将其加入到缓化后的药液中，用注射用水稀释至每1ml含三七总皂苷0.18±0.02g，乳糖1.5mg，加热煮沸，0.2μm滤膜过滤，分装，冷冻干燥而成。

实施例4

基本过程同实施例1，不同的是，制备制剂的过程中，每1ml溶液中添加葡聚糖12.5mg。

实验例

本实验例在于研究注射用血塞通冻干粉针制剂的溶解性和稳定性。

1.不溶性微粒检查：取采用实施例1-3方法获得的注射用血塞通冻干粉针制剂各1支(200mg)，加微粒检查用净化水制成每1ml中含三七总皂苷为0.8mg的溶液，用相应溶剂作空白，依法检查(中国药典2005年版一部附录IX R)，含10μm以上的微粒不得过6000粒，含25μm以上的微粒不得过600粒。实际结果为见表1：

表1

样品	10μm以上的微粒(个/支)	25μm以上的微粒(个/支)
			1	682	56
2	703	67
			3	655	63

2.稳定性考察：将三个样品放置30个月，各取1支加入6ml氯化钠或葡萄糖注射液后，样品能完全溶解，放置一段时间(18小时)未见析出，各项检查均符合规定。

结论：本发明的注射用血塞通冻干粉针制剂无需专用溶剂溶解，其易于溶解，且稳定性好。

Claims (2)

1.一种注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将三七粉碎，加1～4倍量70～95％乙醇浸泡12～48小时，加热回流提取2～3次，每次1～3小时，过滤；合并滤液回收乙醇，加纯化水稀释至0.20～0.40g生药/ml，静置12～48小时后过滤，得滤液；

2)然后滤液以1.2～1.4BV/h的流速过D-101大孔吸附树脂柱吸附，用树脂1～3倍量的纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂1～3倍量的60～80％乙醇浸泡树脂30～60分钟后，用树脂4～6倍量的60～80％的乙醇以1.0～1.2BV/h的流速洗脱，再用树脂1～3倍量的纯化水冲洗树脂柱；收集洗脱液与冲洗液，以6.0～6.5BV/h的流速过D900脱色树脂柱，再加入树脂1～3倍量的85～95％的乙醇以相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，加入生药重量1～3％的活性炭于30～50℃保温脱色40～60分钟，过滤，回收乙醇至无醇味；再加入注射用水稀释至1～2g生药/ml的溶液，灌装，灭菌，冷藏3～9天，室温放置30～60天；

3)再将药液经0.45～0.65μm滤膜过滤，于50℃以下调pH值至5.5～6.5，搅拌均匀后加热至75～85℃，加入0.1～0.3％活性炭，煮沸10～25分钟，冷却至室温，调pH值至5.5～6.5，经0.2μm滤膜过滤后灌装，充氮气压盖，灭菌，冷冻至结冰，化冰后于避光阴凉处或室温放置3～5个月；

4)缓化后的药液中加入赋形剂，所述的赋形剂为甘露醇、乳糖或葡聚糖中的任意一种；先加注射用水使赋形剂溶解后，再加入活性炭脱色，过滤得水溶液；将水溶液加入到缓化后的药液中，用注射用水稀释至每1ml含三七总皂苷0.15～0.25g，赋形剂1.5～12.5mg，加热煮沸，过滤，冷冻干燥，或冷冻干燥后粉碎成细粉即得。

2.根据权利要求1所述的注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法，其特征在于，

步骤1)中回流次数为三次，加2倍量90％乙醇浸泡三七12小时，加热回流提取2小时，过滤；再加1.5倍量90％乙醇回流提取1.5小时，过滤；同法再提取1次。