CN1589811A - 一种药物组合物、其制备方法及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种药物组合物，含有芦丁经羟乙基化得到的维脑路通(7，3’，4’－三羟乙基芦丁)和从除人以外的哺乳动物脑组织中提取的脑提取液，药物组合物中含有维脑路通1－1000重量份，药物组合物中维脑路通重量为脑提取液中总氮含量的0.1～200倍，还公开了药物组合物的制备方法及其用途，本药物组合物能抑制血小板的聚集，有防止血栓形成的作用，能调整和改善脑代谢，用于治疗急慢性脑血管疾病，以及颅脑外伤及脑血管疾病所引起脑功能障碍等后遗症；用于治疗闭塞综合症、动脉硬化、血栓性静脉炎、毛细血管出血以及血管通透性升高引起的水肿。

Description

一种药物组合物、其制备方法及其用途

技术领域

本发明涉及一种药物组合物、其制备方法及其用途，具体地说，涉及一种由除人以外的哺乳动物脑组织中提取的脑提取液与维脑路通的药物组合物、其制备方法及其在制备治疗急慢性脑血管疾病及其所引起的脑功能障碍等后遗症药物的用途。

背景技术

维脑路通(又名曲克芦丁)是芦丁经羟乙基化半合成而得到的水溶性黄酮类化合物，为以曲克芦丁(7，3’，4’-三羟乙基芦丁)为主的羟乙基芦丁的混合物，一般药用按无水物计算，含曲克芦丁(C₃₃H₄₂O₁₉)不得少于80.0％(供注射用)和60.0％(供口服用)。维脑路通能抑制血小板的聚集，有防止血栓形成的作用。同时能对抗5-羟色胺、缓激肽引起的血管损伤，增加毛细血管的抵抗力，降低毛细血管的通透性，可防止血管通透性升高引起的水肿。

维脑路通的临床药用价值有：适用于闭塞性脑血管病引起的偏瘫、失语、冠心病梗死前综合征、中心视网膜炎、血栓性静脉炎、血管通透性升高引起的水肿、淋巴水肿、烧伤及创伤水肿、动脉硬化等。

以维脑路通作为组分之一，构成复方，相关专利也有公开。比如，申请号93107252.2公开了一种复方天仙子动静脉注射液及其制备方法，每10ml这种注射液含有盐酸山茛菪硷30-80mg，氢溴酸东茛菪硷0.3-1.5mg，维脑路通0.1-0.4g，葡萄糖200-400mg。其制备方法是按维脑路通-盐酸山茛菪硷-氢溴酸东茛菪硷-葡萄糖的顺序依次混合、装瓶、封口、消毒、抽验合格后备用。

申请号95109431.9公开了一种复方混配脑脉通注射液水制剂，其特点是：丹参100-300份、维脑路通5-15份、胞二磷胆碱5-10份、辅酶A1-2份、三磷酸腺甘0.4份、水240-770份，该药有抑制红细胞和血小板凝集的作用，能防治血栓形成，能防治脑水肿，促进新血管生成，能防治老年痴呆，可治疗脑脉血管疾病。

上述专利均未涉及维脑路通与动物脑提取物组配，制备新的药品。

发明内容

本发明的目的在于提供一种药物组合物，该药物组合物由除人以外的哺乳动物脑组织中提取的脑提取液与维脑路通组配而成。

本发明的另一目的在于提供该药物组合物的制备方法。

本发明的再一目的是提供上述组合物在制备治疗急慢性脑血管疾病及由脑血管疾病、脑外伤所引起的脑功能障碍等后遗症药物的用途。

本发明还涉及药物组合物在制备治疗闭塞综合症、动脉硬化、血栓性静脉炎、毛细血管出血以及血管通透性升高引起的水肿等药物中的用途。

本发明所述的一种药物组合物，其中含有动物脑组织提取液，脑组织提取液中含有大量活性多肽、多种氨基酸等，含有的活性多肽、氨基酸由截留分子量5000-10000的超滤膜在超滤时控制。

本发明所述的药物组合物，其特征在于含有芦丁经羟乙基化得到的维脑路通(7，3’，4’-三羟乙基芦丁)和由除人以外的哺乳动物脑组织中提取的脑提取液，药物组合物中含有维脑路通为1-1000重量份，所述的重量份可以是μg、mg、g等医药领域公知的含量，其中维脑路通与脑提取液中总氮含量的重量比为0.1～200。

其中优选药物组合物中维脑路通与脑提取液中总氮含量的重量比为10-100；该重量比更优选为70-90；最优选为80。

本发明所述的除人以外的哺乳动物脑组织优选为猪、狗、牛、羊、鹿、马或兔的脑组织。

从生产成本、生产工艺、产品质量稳定性、临床疗效等因素考虑，上述哺乳动物脑组织优选猪脑组织。

本发明所述药物组合物的制备方法包括脑提取液的制备和脑提取液与维脑路通按比例混配，其中维脑路通与脑提取液中总氮含量的重量比为0.1～200，然后经后处理制得成品制剂。其中脑提取液的制备过程为：取新鲜健康的动物脑组织，加0.5-2.5倍重量注射用水匀浆，加热至80-95℃，保持15-30分钟，冷却至酶解温度，调节至酶解pH值，加入脑重量0.1-1.5％的蛋白水解酶，进行一次酶解或二次酶解，一次酶解液或二次酶解液在4-8℃放置8-24小时后，经离心过滤处理，滤液用截留分子量为5000-10000的超滤膜超滤，超滤液为脑提取液，其总氮含量为0.1～10mg/ml。

所述的一次酶解为在加入脑重量0.1-1.5％的蛋白水解酶后，在该蛋白水解酶酶解温度保持2-20小时，保持酶解pH值，然后加热至80-95℃并保持15-30分钟，得一次酶解液。

所述蛋白水解酶优选使用胰蛋白酶，酶解适合温度为35-50℃，酶解适合pH值为7.5-8.5，酶解pH值优选为7.8～8.2，酶解温度优选为37～42℃；为保持温度稳定，可采取夹层水浴保温的方法。

所述的所述的二次酶解过程为将一次酶解液降温至酶解温度，调节至酶解pH值，加入脑重量0.1-1.5％的蛋白水解酶，酶解2-20小时，保持酶解pH值，然后加热至80-95℃保持15-30分钟，得二次酶解液。

所述蛋白水解酶优选使用胃蛋白酶，酶解温度为35-50℃，酶解温度优选为37～42℃，酶解pH值为2.5-3.5，酶解pH值优选为2.5-3.2。

所述的酶解温度是上述使用的蛋白酶对应的具有生物活性的工作温度，在该温度下，使用的蛋白酶具有正常的生物活性。

所述的酶解pH值是适合所使用的蛋白酶的环境pH值，在该pH值下，使用的蛋白酶具有正常的生物活性。

所述的一次酶解后的离心过滤处理为：离心后分离上清液，将上清液过滤，滤液调pH值为3.5-4.5，加热至80-95℃，保持15-30分钟，在4-8℃放置8-24小时，离心后分离上清液，将上清液过滤，滤液调pH值为6.5-7.5，加热至80-95℃，保持15-30分钟，在4-8℃放置8-24小时，然后离心，上清液经过滤得滤液。

所述的二次酶解后的离心过滤处理为：离心后分离上清液，将上清液过滤，滤液调pH值为8.0-10.0，加热至80-95℃，保持15-30分钟，在4-8℃放置8-24小时，离心后分离上清液，将上清液过滤，滤液调pH值为6.5-7.5，加热至80-95℃，保持15-30分钟，在4-8℃放置8-24小时，然后离心，上清液经过滤得滤液。

所述的离心条件为4000转/分，离心时间为15-30分钟。

所述的过滤为现有技术中通用的纸浆过滤或澄清板过滤。

上述过程调pH值使用盐酸和/或氢氧化钠。

所述的蛋白水解酶为胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶等现有技术中使用的蛋白水解酶，使用方式可以是单一使用，也可以是先后使用不同的酶；优选使用胰蛋白酶或胃蛋白酶。胃蛋白酶常用规格为1∶3000-10000，胰蛋白酶常用规格为1∶250，为使本发明生产工艺、产品质量稳定，使用的酶应尽可能由固定生产商提供。

上述超滤膜优选为截留分子量为6000-10000的超滤膜，更优选截留分子量为8000的超滤膜。使用的超滤膜为市售产品，其生产商应为行业认可的生产单位，使用的滤膜型号与尺寸可根据具体的生产量、选用的超滤器尺寸来确定。

上述成品制剂的剂型为药剂学上可接受的剂型，比如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、小容量注射剂、大容量注射剂或冻干粉针剂等，优选为小容量注射剂、大容量注射剂或冻干粉针剂，最优选为小容量注射剂。因此，所述的后处理可以是按照制备药剂学上可接受的剂型的常规方法进行。

本发明二次酶解后的脑提取液含有多肽和游离氨基酸，符合国家药品标准脑蛋白水解物质量标准。本发明二次酶解后的脑提取液浓缩干燥后脑蛋白水解物(口服用)每克含总氮应为80-100mg，符合脑蛋白水解物(口服用)国家药品标准；本发明二次酶解后的脑提取液(注射用，水溶液)稀释或浓缩后可用于制备脑蛋白水解物注射液，并符合国家药品标准。脑蛋白水解物为一种大脑所特有的肽能神经营养物，能以多种方式作用于中枢神经，调节和改善神经元的代谢，促进突触的形成，诱导神经元的分化，并进一步保护神经细胞免受各种缺血和神经毒素的损害。可通过血脑屏障，促进脑内蛋白质的合成，影响呼吸链，具有抗缺氧的保护能力，改善脑内能量代谢，可激活腺苷酸环化酶和催化其他激素系统，提供神经递质，肽类激素及辅酶前体。可用于颅脑外伤，脑血管病后遗症伴有记忆减退及注意力集中障碍的症状改善。对脑功能不全有辅助改善作用，也用于蛋白质缺乏、神经衰弱病人以及对一般蛋白质消化吸收障碍的病例。

本发明所述药物组合物可应用于制备治疗脑血栓、脑栓塞、脑痉挛等急慢性脑血管疾病药物方面的用途，可用于治疗颅脑外伤及脑血管疾病(脑供血不全、脑梗塞)所引起脑功能障碍等后遗症，以及作为治疗闭塞综合症、动脉硬化、血栓性静脉炎、毛细血管出血以及血管通透性升高引起的水肿等药物中的应用。

本发明研究人员进行大量实验发现，当该药物组合物中维脑路通重量为脑提取液中总氮含量的80倍时，二者的协同作用最好，更利于人体的吸收和利用。

本发明最优选药物组合物注射液的规格为：

2ml：    80mg(维脑路通)：1mg(总氮)；

5ml：    200mg(维脑路通)：2.5mg(总氮)；

10ml：   400mg(维脑路通)：5mg(总氮)；

肌内注射：一次2～4ml，一日2次

静脉滴注：一次10ml，一日一次，用250～500ml生理盐水或5％葡萄糖注射液稀释后使用。20日为一疗程，可用1～3个疗程，每疗程间隔3～7天。

本发明所述的药物组合物含有治疗脑血管疾病及其引起的脑功能障碍后遗症的活性物质，该活性物质能调节和改善脑代谢，采用维脑路通与脑提取液活性物质的协同作用，达到了最佳的临床效果。

本药物组合物通过脑提取液与维脑路通的有机组合，发挥了二者的协同作用，更利于脑血管疾病的有效治疗及其由脑血管疾病引起的后遗症的改善。

本发明所述的药物组合物含有治疗脑血管疾病及其引起的脑功能障碍后遗症的活性物质，包括维脑路通、脑提取液中含有的大量活性多肽和多种氨基酸。维脑路通能抑制血小板的聚集，有防止血栓形成的作用。同时能对抗5-羟色胺、缓激肽引起的血管损伤，增加毛细血管的抵抗力，降低毛细血管的通透性，可防止血管通透性升高引起的水肿。脑提取液所含的大量活性多肽、多种氨基酸等能透过血脑屏障，以多种形式作用于中枢神经，调整和改善神经元代谢，并影响其呼吸链，具有激活、改善脑内神经递质和酶的活性，保护神经细胞免受各种缺血和神经毒素的损害。能增加脑组织对葡萄糖的利用，改善脑细胞缺氧状态，对缺氧的脑组织具保护作用。可应用于制备治疗脑血栓、脑栓塞、脑痉挛等急慢性脑血管疾病药物方面的用途，可用于治疗颅脑外伤及脑血管疾病(脑供血不全、脑梗塞)所引起脑功能障碍等后遗症，以及作为治疗闭塞综合症、动脉硬化、血栓性静脉炎、毛细血管出血以及血管通透性升高引起的水肿等药物中的应用。

附图说明

图1为比较例3中治疗组与对照组临床疗效比较

图2为比较例3中治疗组与对照组神经功能缺损积分比较( X±S)

具体实施方式

                                  实施例1

取新鲜健康猪脑10kg，除去筋膜等杂质，用注射用水洗涤，加10L注射用水，匀浆，加热80℃，保持15分钟，冷却至42℃，调节pH值7.5，加入45g胰蛋白酶(美国DIFCO公司，规格：500g)在42℃酶解3小时，酶解过程中控制pH值8.5，取出，加热至80℃，保持20分钟，得一次酶解液；

4℃放置24小时后离心，离心条件为4000转/分，离心时间为15分钟，纸浆过滤，上清液调pH值3.5，加热95℃，保持20分钟，4℃放置12小时后离心，离心条件为4000转/分，离心时间为20分钟，纸浆过滤，滤液调pH值6.5，加热至90℃，保持15分钟，8℃放置8小时后离心，离心条件为4000转/分，离心时间为20分钟，得滤液；滤液用截留分子量为6000的超滤膜(美国millipore公司，标准超滤系统)超滤，超滤液即为脑提取液，其中总氮含量为4mg/ml。

称取注射用维脑路通纯品80g，与250ml脑提取液可配成2000ml药液，最终制成小溶量注射剂1000支(规格为2ml：80mg维脑路通与1mg总氮)。取配液量约40％的注射用水于浓配罐中，加入维脑路通充分搅拌至完全溶解，加入总配制体积0.05％的活性搅拌煮沸15分钟，将药液温度降至40～50℃，将药液脱炭过滤至稀配罐中，在稀配罐中投入脑提取液，加水至配液量，调节PH值6.8～7.0，药液经过滤系统过滤后灌封于2ml安瓿中，灭菌，即得小容量注射剂。

                                  实施例2

取新鲜健康猪脑10kg，除去筋膜等杂质，用注射用水洗涤，加10L注射用水，匀浆，调节pH值8.2，加热80℃，保持15分钟，冷却至42℃，加入80g胰蛋白酶(美国DIFCO公司，规格：500g)在42℃酶解10小时，酶解过程中控制pH值8.2，取出，加热至80℃，保持20分钟，得一次酶解液；

将一次酶解液降温至44℃，调节pH值为2.5，加入50g胃蛋白酶(厦门星隆达化学试剂有限公司；1∶10000；规格：100g)，酶解10小时，过程pH值控制为2.5，然后加热至90℃保持20分钟，得到二次酶解液；

以4000转/分的速度离心30分钟，将上清液澄清板过滤，滤液调pH值为8.0，加热至95℃，保持15分钟，在6℃放置20小时，相同离心方式分离上清，过滤，滤液调pH值为7.3，加热至85℃，保持25分钟，然后在6℃放置15小时，相同方式离心、过滤得滤液；滤液用截留分子量为10000的超滤膜(美国millipore公司，标准超滤系统)超滤，超滤液即为脑提取液，其中总氮含量为6mg/ml。

称取注射用维脑路通纯品60g，与250ml脑提取液可配成2000ml药液，最终制成小溶量注射剂1000支(规格为2ml：60g维脑路通与1.5mg总氮)。取配液量约40％的注射用水于浓配罐中，加入维脑路通充分搅拌至完全溶解，加入总配制体积0.05％的活性搅拌煮沸15分钟，将药液温度降至40～50℃，将药液脱炭过滤至稀配罐中，在稀配罐中投入脑提取液，加水至配液量，调节PH值7.1～7.3，药液经过滤系统过滤后灌封于2ml安瓿中，灭菌，即得小容量注射剂。

                                  实施例3

取新鲜健康牛脑10kg，除去筋膜等杂质，用注射用水洗涤，加25L注射用水，匀浆，调节pH值9.0，加热95℃，保持30分钟，冷却至38℃，加入150g胰蛋白酶，保温4小时，酶解过程中控制pH值8.0，然后加热至85℃，保持30分钟，得一次酶解液；

8℃放置8小时，离心，离心条件为4000转/分，离心时间为20分钟，上清液纸浆过滤，滤液调pH值4.0，加热80℃，保持30分钟，5℃放置12小时，离心，离心条件为4000转/分，离心时间为30分钟，上清液过滤，滤液调pH值7.0，加热至95℃，保持30分钟，7℃放置18小时后离心，离心条件为4000转/分，离心时间为30分钟，上清液过滤，得滤液；滤液用截留分子量为8000的超滤膜超滤，超滤液即为脑提取液，其总氮含量为1.4mg/mL。

称取注射用维脑路通纯品100g，与500ml脑提取液可配成2000ml药液，最终制成小溶量注射剂1000支(规格为2ml：100mg维脑路通与0.7mg总氮)。取配液量约40％的注射用水于浓配罐中，加入维脑路通充分搅拌至完全溶解，加入总配制体积0.05％的活性搅拌煮沸15分钟，将药液温度降至40～50℃，将药液脱炭过滤至稀配罐中，在稀配罐中投入脑提取液，加水至配液量，调节PH值7.0～7.2，药液经过滤系统过滤后灌封于2ml安瓿中，灭菌，即得小容量注射剂。

                                  实施例4

按照实施例3的操作，得到一次酶解液。

将一次酶解液降温至45℃，调节pH值为3.5，加入100g胃蛋白酶(厦门星隆达化学试剂有限公司；1∶10000；规格：100g)，酶解2小时，过程pH值控制为3.2，然后加热至95℃保持15分钟，得到二次酶解液；

以4000转/分的速度离心30分钟，将上清液澄清板过滤，滤液调pH值为10.0，加热至80℃，保持30分钟，在4℃放置8小时，相同离心方式分离上清，过滤，滤液调pH值为7.0，加热至90℃，保持30分钟，然后在6℃放置15小时，相同方式离心、过滤得滤液；滤液用截留分子量为8000的超滤膜(美国millipore公司，标准超滤系统)超滤，超滤液即为脑提取液，其中总氮含量为2.5mg/ml。

按照实施例3的操作，制得注射液。

                                  实施例5

取新鲜健康鹿脑10kg，除去筋膜等杂质，用注射用水洗涤，加5L注射用水，匀浆，调节pH值至8.5，加热85℃，保持20分钟，冷却至45℃，加入40g胃蛋白酶(厦门星隆达化学试剂有限公司；1∶10000；规格：100g)，在45℃酶解20小时，酶解过程中控制pH值2.5，然后加热至95℃，保持15分钟，得到一次酶解液；

7℃放置10小时后离心，离心条件为4000转/分，离心时间为30分钟，上清液澄清板过滤，滤液调pH值3.5，加热至80℃，保持30分钟，8℃放置8小时后离心，相同方式离心、过滤，滤液调pH值7.3，加热至85℃，保持15分钟，4℃放置24小时后，相同方式离心、过滤，得滤液，滤液用截留分子量为8000的超滤膜(美国millipore公司，标准超滤系统)超滤，超滤液即为脑提取液，其中总氮含量为7mg/ml。

称取注射用维脑路通纯品100g，与500ml脑提取液可配成2000ml药液，最终制成小溶量注射剂1000支(规格为2ml：100mg维脑路通与3.5mg总氮)。取配液量约40％的注射用水于浓配罐中，加入维脑路通充分搅拌至完全溶解，加入总配制体积0.05％的活性搅拌煮沸15分钟，将药液温度降至40～50℃，将药液脱炭过滤至稀配罐中，在稀配罐中投入脑提取液，加水至配液量，调节PH值7.0～7.2，药液经过滤系统过滤后灌封于2ml安瓿中，灭菌，即得小容量注射剂。

                                  实施例6

按照实施例5的操作，得到一次酶解液。

将一次酶解液降温至50℃，调节pH值为7.8，加入80g胰蛋白酶(美国DIFCO公司，规格：500g)，酶解10小时，过程pH值控制为7.8，然后加热至90℃保持20分钟，得到二次酶解液；

以4000转/分的速度离心30分钟，将上清液澄清板过滤，滤液调pH值为9.0，加热至85℃，保持25分钟，在8℃放置10小时，相同离心方式分离上清，过滤，滤液调pH值为7.2，加热至80℃，保持20分钟，然后在6℃放置25小时，相同方式离心、过滤得滤液；滤液用截留分子量为6000的超滤膜(美国millipore公司，标准超滤系统)超滤，超滤液即为脑提取液，其中总氮含量为8.0mg/ml。

按照实施例5的操作，制得注射液。

                                实施例7

取新鲜健康猪脑10kg，加入15L注射用水匀浆，参照实施例1制备脑提取液备用，其中总氮含量为2.4mg/ml。

称取注射用维脑路通纯品80g，与250ml脑提取液可配成2000ml药液，最终制成小溶量注射剂400支(规格为5ml：200mg维脑路通与1.5mg总氮)。取配液量约40％的注射用水于浓配罐中，加入维脑路通充分搅拌至完全溶解，加入总配制体积0.05％的活性搅拌煮沸15分钟，将药液温度降至40～50℃，将药液脱炭过滤至稀配罐中，在稀配罐中投入脑提取液，加水至配液量，调节PH值6.8～7.0，药液经过滤系统过滤后灌封于2ml安瓿中，灭菌，即得小容量注射剂。

                                  实施例8

按照实施例1中的操作，制备脑提取液。

称取注射用维脑路通纯品80g，与1000ml脑提取液可配成2000ml药液，最终制成小溶量注射剂200支(规格为10ml：400mg维脑路通与20mg总氮)。取配液量约30％的注射用水于浓配罐中，加入维脑路通充分搅拌至完全溶解，加入总配制体积0.05％的活性搅拌煮沸15分钟，将药液温度降至40～50℃，将药液脱炭过滤至稀配罐中，在稀配罐中投入脑提取液，加水至配液量，调节PH值6.8～7.0，药液经过滤系统过滤后灌封于2ml安瓿中，灭菌，即得小容量注射剂。

                                实施例9～14

参照实施例1～6，脑提取液和维脑路通进行配比，按公知的方法，制成颗粒，干燥后压片，得片剂。

                                实施例15～20

参照实施例1～5，脑提取液和维脑路通进行配比，加入适宜的赋型剂(如右旋糖酐40、甘露醇等)，进行除菌灌装，按公知的方法，冷冻干燥制成冻干粉针产品。

                                实施例21～26

参照实施例1～5，将脑提取液投入到稀配罐中；在浓配罐中投入维脑路通和0.85％最终配制总体积的氯化钠，加入0.4‰活性炭煮沸脱炭过滤，冷却后，将药液过滤至稀配罐中，在稀配罐中补加注射用水至配液量，调PH为6.8～7.0，过滤。灌封于输液瓶中，100℃流通蒸汽灭菌45分钟，即得输液产品。

                                  实验例1

本实验例为本发明最优选药物组合物小容量注射剂(每ml含40mg维脑路通与0.5mg总氮)外观性状、pH值、蛋白质、热原、异常毒性及其它规定的注射剂检查项目的检测。

√本品为黄色或浅棕黄色澄明液体。

√按照中国药典2000年版二部附录VI H测定，本品pH值应为5.5-7.5。

√取本品2ml，加20％磺基水杨酸溶液2ml，溶液应澄清。

√热原检查：取本品，用氯化钠注射液稀释成每ml中含维脑路通20mg的溶液，依法检查(中国药典2000年版二部附录XI D)。剂量按家兔体重每kg注射本品2ml，应符合规定。

√异常毒性测定：取本品，用氯化钠注射液稀释成每ml中含维脑路通20mg的溶液，依法检查(中国药典2000年版二部附录XI C)。按静脉注射给药，应符合规定。

√其他：应符合注射剂项下有关各项规定(中国药典2000版二部附录I B)。

                                  实验例2

本实验例为本发明最优选药物组合物小容量注射剂(每ml含40mg维脑路通与0.5mg总氮)中主要组分的定性测定。

√取本品0.5ml，加水稀释至20ml，加盐酸1ml和锌粉少量，置水浴上加热，显持续的红色。

√取本品0.5ml，加水稀释至20ml，加三氯化铝少量，溶液显亮黄色。

√取本品2ml，加茚三酮试液数滴，加热，应显蓝紫色。

√在维脑路通含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液的主峰保留时间应与维脑路通对照品峰的保留时间一致。

以上三种实验为本发明药物组合物所含组份的定性反应，说明本发明药物组合中含有确定的组份。

                                  实验例3

本实验例为本发明最优选药物组合物小容量注射剂(每ml含40mg维脑路通与0.5mg总氮)中的维脑路通定量测定。

本实验例按高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录VD)测定。

√色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％枸橼酸溶液-乙睛-四氢呋喃(85∶9∶6)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按维脑路通峰计算应不低于2000。维脑路通峰与其他物质峰之间的分离度应符合要求。

√测定法：取本品适量，用流动相定量稀释成每1ml中含维脑路通0.20mg的溶液，作为供试品溶液，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取维脑路通对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每1ml中含维脑路通0.20mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算。

√维脑路通含量应为标示量的90～110％。

√通过三批测定，结果见下表：

批号	占标示量％
		20020603	103.7
20020604	104.7
		20020605	100.6

                                  实验例4

本实验例为本发明最优选药物组合物小容量注射剂(每ml含40mg维脑路通与0.5mg总氮)中总氮的定量测定。

取本品依法测定(中国药典2000年版二部附录VII D)。

通过三批测定的结果，本品中总氮含量应为标示量的85～115％，参见下表：

批号	占标示量％
		20020603	92.3
20020604	99.6
		20020605	104.6

                                实验例5

本实验例为对实施例2所制备的脑提取液按脑蛋白水解物注射液标准进行的主要项目检测。

√氨基酸含量测定：取本品，用适宜的氨基酸分析仪或高效液相色谱仪进行分离测定；另取相应的氨基酸对照品制成的相应浓度的对照品溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算各氨基酸的含量。

测定结果如下：

每1ml含游离氨基酸为34.70mg/ml，其中：

门冬氨酸  3.05mg/ml    谷氨酸    3.89mg/ml    丝氨酸    0.25mg/ml

组氨酸    1.22mg/ml    甘氨酸    1.49mg/ml    苏氨酸    0.24mg/ml

丙氨酸    2.99mg/ml    精氨酸    0.55mg/ml    缬氨酸    1.94mg/ml

蛋氨酸    0.43mg/ml    异亮氨酸  1.90mg/ml    苯丙氨酸  1.80mg/ml

亮氨酸    6.18mg/ml    赖氨酸    6.55mg/ml    脯氨酸    2.22mg/ml

√总氮含量测定：取本品，依法测定(中国药典2000年版二部附录VII D)，总氮为6.10mg/ml。

√鉴别(1)：取本品2ml，加双缩腺试剂(取硫酸铜0.75g和酒石酸钾钠0.3g，加水250ml使溶解，在搅拌下加入10％氢氧化钠溶液150ml，加水至500ml)4ml，显紫红色，符合规定。

√鉴别(2)：取本品，照高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录V D)试验。

色谱条件：用凝胶色谱柱：以磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钾10.63g与磷酸二氢钾5.31g，加异丙醇50ml，加水至1000ml，用磷酸调节PH值至7.0)为流动相；流速为每分钟1ml。

测定法：取对照溶液及供试品溶液各10υl注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图应与对照溶液的色谱图基本一致，符合规定。

√折光率：本品的折光率(中国药典2000年版二部附录VI H)为1.342，符合规定。

√PH值：PH值为7.2(中国药典2000年版二部附录VI H)，符合规定。

√蛋白质：取本品5ml，加20％磺基水杨酸2ml，溶液应澄清，符合规定。

                                  比较例1

本例为本发明最优选药物组合物小容量注射剂(每ml含40mg维脑路通与0.5mg总氮)与维脑路通注射液在治疗脑血栓的临床对比，说明本发明注射液的良好疗效，即维脑路通与脑提取物的协同疗效优于单独使用维脑路通注射液。

临床背景：

脑血栓患者，随机分为2组。

治疗组58例，其中男性为48例，女性为10例。年龄41-79岁，平均61.3岁。

对照组51例，其中男性为42例，女性为9例。年龄43-82岁，平均60.5岁。所有病例均为脑血栓首发患者，符合脑血管病学术会制订的诊断标准，均经CT扫描未见颅内出血。

治疗方法：

治疗组患者均静脉滴注维脑路通注射液，一次400mg，一日1次；用5～10％葡萄糖注射液或低分子右旋糖酐注射液稀释后滴注，20日为一疗程，治疗3个疗程，作为治疗组。

对照组患者静脉滴注本发明注射液，一次10ml，一日一次，用250～500ml生理盐水或5％葡萄糖注射液稀释后使用。20日为一疗程，治疗3个疗程，作为对照组。

疗效判定：

√治愈：症状消失，语言流利，能独立行走，生活自理，患侧肢体肌力恢复到IV级以上；

√好转；主要体征明显恢复，症状有不同程度的改善，患侧肢体肌力恢复II级以上；

√无效：症状、体征无变化或病情恶化。

治疗结果：

将治疗组与对照组的总有效率和疗效进行比较，均为显著性差异，结果见下表。

                            治疗组与对照组疗效比较

                    对照组(n＝58)           治疗组(n＝58)

                  例数        (％)        例数        (％)

治愈              7           (12.1)      3           (5.9)

好转              49          (84.5)      39          (76.5)

无效              2           (3.4)       9           (17.6)

总有效            56          (96.6)      42          (82.4)

注：两组疗效比较p＜0.01

                              比较例2

本例为本发明最优选药物组合物小容量注射剂(每ml含40mg维脑路通与0.5mg总氮)与维脑路通注射液在治疗脑梗塞的临床对比，说明本发明注射液具有良好疗效，疗效优于脑复素注射液。

临床背景：

33例病例按照用药不同分成2组：

√脑复素注射液组：男性12例，女性5例；

√本发明组：男性11例，女性5例。

治疗方法：

√使用本发明注射液组：静脉滴注，一次10ml，一日一次，用250ml生理盐水或5％葡萄糖注射液稀释后中慢速滴注。治疗2个疗程。

√使用脑复素注射液组：静脉滴注，一次10ml-20ml，一日1次，用250ml生理盐水或5％葡萄糖注射液稀释后中慢速滴注。治疗2个疗程。

疗效判定：

判断疗效以出院为准，住院15天以内者3例；16-30天者30例。

√治愈：症状及体征完全消失，生活自理，照常工作。

√基本治愈：瘫痪肌体，肌力恢复到4-5级，遗留部分病理体征，生活基本自理。

√好转：症状体征改善，肌力提高1-2级，语言功能部分恢复，生活不能完全自理。

√无效或死亡：症状和体征无变化，或加重至死亡。

√见效时间：主要症状开始好转，最短1天，最长28天，一般7-14天。

结果比较：

                                    两组疗效比较(例)

用药组	有效数	治愈	基本治愈	好转	无变化	总数	有效率％
								脑复素组	15	3	4	8	2	17	88.2％
本发明组	16	3	12	1	0	16	100％

                                  比较例3

本例为本发明最优选药物组合物小容量注射剂(每ml含40mg维脑路通与0.5mg总氮)与维脑路通注射液在治疗脑梗死方面的临床对比，说明本发明注射液的良好疗效，即维脑路通与脑提取物的协同疗效优于单独使用维脑路通注射液。

临床背景：

脑梗死患者共120例随机分成两组。120例均为发病72小时以内的颈内动脉系统脑梗死患者，符合全国第四届脑血管病学术会议的诊断标准，并经颅脑CT或MR1检查确诊。120例随机分成两组，本发明注射液治疗组60例，维脑路通注射液对照组60例。两组年龄、性别、病程、发病至给药时间、既往史、并发症无显著性差异，有可比性。

治疗方法：

两组患者均酌情使用脱水剂及其他对症治疗，但均不用其他扩张血管、抗凝等药物。本发明注射液治疗组，一次10ml加入，每日1次，用250ml生理盐水稀释后滴注，14天为一疗程。维脑路通注射液对照组，一次400mg，每日1次，用5％～10％的葡萄糖注射液或低分子右旋糖酐注射液稀释后静滴，14天为一疗程。

疗效判定：

治疗前后观察两组患者神经功能、血流指标的变化。疗效评定标准为基本痊愈显著进步，进步、无变化、恶化5级，结果采用统计学处理，计量资料采用μ检验和X²检验。

治疗结果：

治疗组与对照组之间疗效有显著性差异(P＜0.01)，见图1；治疗前后神经功能缺损积分比较，治疗前后两组间比较无明显差异(P＜0.005)，治疗后治疗组神经功能缺损较对照组明显减轻(P＜0.01)，见图2；两组治疗前后全血粘度及期间未发现明显副作用。

结果分析：

本发明注射液能与血小板膜上的腺苷载体蛋白结合，增加血小板内环磷酸苷(cAMP)的含量，从而抑制红细胞和血小板聚集，防止血栓形成，并对内皮细胞有保护作用，能对抗5-羟色胺、缓激肽、细菌霉素、氧自由基引起的血管损伤，保持毛细血管通透性。可增加血中氧含量和氧饱和度，保护缺氧状态下酶的活性、改善微循环，促进新血管生成以增进侧枝循环，从而增加脑血流量，改善半暗带区域的供血，减轻周边区域的水肿，减小脑梗死面积。

本例中用本发明注射液治疗60例急性脑梗死患者，总有效率为93％，显效率为70％，与对照组比较有显著性差异，且治疗后神经功能缺损积分明显降低，血流变中全血粘度、血浆粘度明显改善，表明本发明注射液能够改善脑血流量和血粘度，明显减轻脑梗死的神经功能损伤，且无明显不良反应，是治疗脑梗死的有效药物。

Claims (10)

1、一种药物组合物，其特征在于所述的药物组合物由除人以外的哺乳动物脑组织中提取的脑提取液与维脑路通组配而成，其中维脑路通与脑提取液中总氮含量的重量比为0.1～200。

2、根据权利要求l所述的组合物，其特征在于所述的药物组合物中维脑路通与脑提取液中总氮含量的重量比为10-100；该重量比更优选为70-90；最优选为80。

3、根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于所述的除人以外的哺乳动物脑组织为猪、狗、牛、羊、鹿、马或兔的脑组织，优选猪脑组织。

4、一种药物组合物的制备方法，其特征在于该制备方法包括脑提取液的制备和脑提取液与维脑路通按比例混配，其中维脑路通与脑提取液中总氮含量的重量比为0.1～200，然后经后处理制得成品制剂。

5、根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的脑提取液的制备过程为：取新鲜健康的动物脑组织，加0.5-2.5倍重量注射用水匀浆，加热至80-95℃，保持15-30分钟，冷却至酶解温度，调节至酶解pH值，加入脑重量0.1-1.5％的蛋白水解酶，进行一次酶解或二次酶解，一次酶解液或二次酶解液在4-8℃放置8-24小时后，经离心过滤处理，滤液用截留分子量为5000-10000的超滤膜超滤，超滤液为脑提取液，其总氮含量为0.1～10mg/ml。

6、根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的一次酶解为在加入脑重量0.1-1.5％的蛋白水解酶后，在该蛋白水解酶酶解温度保持2-20小时，保持酶解pH值，然后加热至80-95℃并保持15-30分钟，得一次酶解液；所述蛋白水解酶优选使用胰蛋白酶，酶解温度为35-50℃，酶解温度优选为37～42℃，酶解pH值为7.5-8.5，酶解pH值优选为7.8～8.2；所述的一次酶解后的离心过滤处理为：离心后分离上清液，将上清液过滤，滤液调pH值为3.5-4.5，加热至80-95℃，保持15-30分钟，在4-8℃放置8-24小时，离心后分离上清液，将上清液过滤，滤液调pH值为6.5-7.5，加热至80-95℃，保持15-30分钟，在4-8℃放置8-24小时，然后离心，上清液经过滤得滤液。

7、根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的二次酶解过程为将一次酶解液降温至酶解温度，调节至酶解pH值，加入脑重量0.1-1.5％的蛋白水解酶，酶解2-20小时，保持酶解pH值，然后加热至80-95℃保持15-30分钟，得二次酶解液；所述蛋白水解酶优选使用胃蛋白酶，酶解适合温度为35-50℃，酶解温度优选为37～42℃，酶解适合pH值为2.5-3.5，酶解pH值优选为2.5-3.2所述的二次酶解后的离心过滤处理为：离心后分离上清液，将上清液过滤，滤液调pH值为8.0-10.0，加热至80-95℃，保持15-30分钟，在4-8℃放置8-24小时，离心后分离上清液，将上清液过滤，滤液调pH值为6.5-7.5，加热至80-95℃，保持15-30分钟，在4-8℃放置8-24小时，然后离心，上清液经过滤得滤液。

8、根据权利要求4、5、6或7所述的制备方法，其特征在于，所述的离心条件为4000转/分，离心时间为15-30分钟；所述的过滤为现有技术中通用的纸浆过滤或澄清板过滤；所述的蛋白水解酶为胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶等现有技术中使用的蛋白水解酶；上述超滤膜优选为截留分子量为6000-10000的超滤膜，更优选截留分子量为8000的超滤膜。

9、根据权利要求4-8所述的制备方法，其特征在于，所述的成品制剂的剂型为药剂学上可接受的剂型，比如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、小容量注射剂、大容量注射剂或冻干粉针剂等，优选为小容量注射剂、大容量注射剂或冻干粉针剂，最优选为小容量注射剂；所述的后处理是按照制备药剂学上可接受的剂型的常规方法进行。

10、根据权利要求1-3所述的药物组合物在制备治疗脑血栓、脑栓塞、脑痉挛等急慢性脑血管疾病，颅脑外伤及脑血管疾病、脑供血不全、脑梗塞所引起的脑功能障碍及后遗症，闭塞综合症、动脉硬化、血栓性静脉炎、毛细血管出血以及血管通透性升高引起的水肿等药物中的应用。

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