CN1887906A - 来自蚕的降糖多肽及其制法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种来自蚕的具有降血糖作用的多肽(简称为“蚕降糖多肽”)，及其制法和用途，还涉及含有该蚕降糖多肽的组合物，药物、食品、饮食补充剂和保健品。本发明的蚕降糖多肽可在肠道内与糖苷酶抑制剂竞争性地结合从而部分抑制糖苷酶活性，降低糖苷酶对多糖的分解速度，从而使单位时间中产生的葡萄糖量下降，导致血液中单位时间吸收糖的量下降，起到降血糖的作用。

Description

来自蚕的降糖多肽及其制法和用途

技术领域

本发明属于化学和生物领域。更具体地，本发明涉及一种来自蚕的具有降血糖作用的多肽(简称为“蚕降糖多肽”)，及其制法和用途，还涉及含有该蚕降糖多肽的组合物，药物、食品、饮食补充剂和保健品。

背景技术

蚕，例如桑蚕(Bombyx mori)，是重要的经济昆虫，主要用于提取其丝茧，在纺织工业中为主要丝绸原料。同时，桑蚕也是一种药用经济昆虫、僵蚕、蚕砂、蚕蜕、蚕蛹均能入药，治疗免疫力低下等症。

韩国科学家利用冻干桑蚕粉进行试验证明其降低血糖的功效。中国学者庄大恒等也利用全蚕粉(天然桑蚕的冻干粉)进行动物试验，证明其具有一定的降血糖的作用。然而，直接服用蚕粉较不卫生，不利于产品标准化，也不利于产品进入国际市场。此外，直接服用蚕粉对于某些个体而言会因气味等因素而难以接受，因此适用面受到了限制。

因此，寻找蚕粉中具有降血糖功能的有用物质成为焦点。蚕粉中有多种物质，如脂肪、糖、蛋白质、无机盐、维生素、激素、多肽、色素，等等多种成份，然而，对于蚕粉中是何种物质主要发挥着降血糖作用以及其作用机理等均未详细阐述。曾有学者从蚕粉中提取到一些小分子肽，然而，将这些小分子肽经注射给药后，并未发现如胰岛素那样的降血糖作用。

综上所述，本领域对于蚕或蚕粉中具有降血糖功能的物质知之甚少。因此本领域迫切需要开发蚕粉中具有降血糖功能的有用物质。

发明内容

本发明的目的就是提供一种来自蚕(或蚕粉)的具有降血糖功能的物质。

本发明的另一目的是提供该降血糖物质的制法和用途。

在本发明的第一方面，提供了一种分离的多肽，所述的多肽是从蚕中提取的，并且具有糖苷酶抑制活性，分子量为1000-15000道尔顿(更佳地3000-10000道尔顿)。在下文中，该多肽简称为“蚕降糖多肽”。

在另一优选例中，所述的多肽经口服后，可抑制哺乳动物餐后对葡萄糖的吸收。

在另一优选例中，所述的多肽是从桑蚕(如家蚕、柞蚕等)的4-5龄幼虫或蛹中提取的。

在另一优选例中，所述的多肽还具有以下特性：

采用HPLC分析，HPLC设备为Waters公司，分析柱为Protein Pak 125，Waters公司，流动相为pH6.8磷酸缓冲液，流速1ml/min情况下，特征出峰时间为11±0.5分钟。

在本发明的第二方面，提供了一种组合物，其特征在于，它含有(a)权利要求1所述的分离的多肽和(b)药学上或食品上可接受的载体。

在另一优选例中，它含有20-2000毫克/剂的所述的多肽。较佳地，所述的多肽含量为50-500毫克/剂。

在另一优选例中，所述的组合物为药物组合物食品组合物、饮食补充剂、或保健品组合物。

在另一优选例中，所述的组合物为口服剂型。

在另一优选例中，所述组合物还含有选自下组的辅助降血糖成分：苦瓜子、南瓜、桑叶、蜂胶、或其组合。

在本发明的第三方面，提供了一种本发明蚕降糖多肽的用途，包括用于：(a)作为糖苷酶抑制剂；(b)制备抑制糖苷酶的组合物；(c)制备抑制葡萄糖吸收的组合物；(d)制备降血糖的组合物(如治疗或预防糖尿病的药品、食品、饮食补充剂和保健品)。

在本发明的第四方面，提供了一种制备本发明蚕降糖多肽的方法，它包括步骤：

(a)将4-5龄蚕幼虫和/或蚕蛹的匀浆，与1-10倍体积的水或水性溶剂混合；或者将4-5龄蚕幼虫或蚕蛹的冻干粉末与1-10倍体积的水或水性溶剂混合，从而获得混合液；

(b)对步骤(a)的混合液进行离心，去除沉淀，得到上清液；

(c)对步骤(b)的上清液进行离子交换树脂和/或凝胶过滤分离，收集分子量为1000-15000道尔顿的多肽。

在另一优选例中，步骤(c)中的条件是用SepharoseFF树脂，在pH5.8±0.2，乙酸-乙酸钠体系，0-1M NaCl梯度下进行洗脱，收集0.230～0.255M之间的洗脱峰。

在本发明的第五方面，提供了一种治疗或预防糖尿病的方法以及抑制糖苷酶的方法，它包括给予有关对象施用安全有效量的蚕降糖多肽。

附图说明

图1显示了本发明一个实例中蚕降糖多肽分离纯化图谱。

图2显示了本发明一个实例中蚕降糖多肽标准品的HPLC分析结果。

图3显示了本发明一个实例中蚕粉中多肽含量的测定结果。

具体实施方式

本发明人经过长期广泛而深入的研究，对蚕(或蚕粉)的提取物进行了筛选和研究，发现蚕粉中的某些多肽成份是起降血糖功能的主要成份(简称为“蚕降糖多肽”)，这些蚕降糖多肽在肠道内通过作为抑制糖苷酶抑制剂而抑制葡萄糖的吸收，从而降低了哺乳动物餐后血糖的水平。在此基础上完成了本发明。

术语

本文中，术语“含有”表示各种成分可一起应用于本发明的药物组合物。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。

本文中，“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的物质。

本文中，“食品上可接受的”成分是适用于人和/或动物食用，而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的物质。

本文中，术语“安全有效量”指按本发明的方式使用时足以获得需要的治疗反应而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的成分的量。显然，具体的“安全有效量”因各种因素而异，如受治疗的特殊病情、患者的身体条件、受治疗的哺乳动物的种类、疗程、同时进行的治疗的种类(如果有的话)、所应用的具体制剂和化合物或其衍生物的结构。

本文中，“载体”是用于将蚕降糖多肽传送给动物或人的溶剂、悬浮剂或赋形剂。载体可以是液体或固体。

本文中，“药物载体”是用于将蚕降糖多肽传送给动物或人的药学上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂。载体可以是液体或固体。

蚕降糖多肽

如本文所用，术语“蚕降糖多肽”或“蚕的抑制糖苷酶的多肽”可互换使用，都指从蚕(如桑蚕)或蚕粉中提取并纯化到的一类能够具有糖苷酶抑制活性的、分子量在1000～15000道尔顿(更佳地3000-10000道尔顿)的多肽。应理解，蚕降糖多肽可指单一种类的多肽，也包括多种多肽构成的混合物。通常是指具有相同的抑制糖苷酶功能的多种多肽的混合物。

应理解，“蚕降糖多肽”既包括从蚕粉中提取的具有糖苷酶抑制活性的多肽形式，也包括其活性衍生物以及盐或酯等形式。

此外，“蚕降糖多肽”既包括天然蚕粉中提取的多肽，也包括利用重组技术或人工合成的蚕降糖多肽。

本发明的实验证明，蚕降糖多肽就是蚕粉中起降血糖作用的主要功能成份；该多肽成份在肠道内与糖苷酶抑制剂竞争性地结合从而部分抑制糖苷酶活性，降低糖苷酶对多糖的分解速度，从而使单位时间中产生的葡萄糖量下降，导致血液中单位时间吸收糖的量下降，起到降血糖的作用。

本发明的蚕降糖多肽的具有化学稳定性以及施用的安全性，因此适合作为添加剂用于药品、食品、保健品或饮食补充剂。

应理解，蚕降糖多肽通常指多肽含量为90wt％，更佳地95wt％，最佳地98wt％或以上的提取物。当然，蚕降糖多肽可以含有少量杂质，例如含量小于5wt％，更佳地小于3wt％d脂肪、糖、蛋白质、无机盐、维生素、激素、色素或其他没有糖苷酶抑制活性的多肽，只要这些杂质对蚕降糖多肽的活性不造成实质性的损害。

制法

可用于制备本发明蚕降糖多肽的桑蚕的种类没有特别限制，代表性的例子包括(但并不限于)：柞蚕、家蚕。从这些蚕类中均可提取和纯化到具有糖苷酶抑制活性或降血糖功能的多肽物质。在本发明中，优选的蚕是家蚕(bombyxmori)。

在本发明中，优选的蚕(或蚕粉)原料包括桑蚕的四龄或五龄幼虫以及桑蚕蛹。

通常，本发明蚕降糖多肽的制法包括以下步骤：

(a)将4-5龄蚕幼虫和/或蚕蛹的匀浆，与1-10倍体积(较佳地2-5倍体积)的水或水性溶剂混合；或者将4-5龄蚕幼虫或蚕蛹的冻干粉末与1-10倍体积(较佳地2-5倍体积)的水或水性溶剂混合，从而获得混合液；

(b)对步骤(a)的混合液进行离心，去除沉淀，得到上清液；

(c)对步骤(b)的上清液进行离子交换树脂和/或凝胶过滤分离，收集分子量为1000-15000的多肽。

在另一优选例中，步骤(c)中的条件是用SepharoseFF树脂，在pH5.8±0.2，乙酸-乙酸钠体系，0-1M NaCl梯度下进行洗脱，收集0.230～0.255M之间的洗脱峰。

如本文所用，术语“水性溶剂”指50-99重量份水与0.01-50重量份其他溶剂(如乙醇等)所形成的混合溶剂。

组合物

本发明还提供了蚕降糖多肽用途，尤其是在以下方面的用途：

(a)作为糖苷酶抑制剂；

(b)制备抑制糖苷酶的组合物；

(c)制备抑制葡萄糖吸收的组合物；

(d)制备降血糖的组合物。

在本发明中，所述的组合物包括药物组合物、食品组合物、饮食补充剂组合物和保健品组合物。例如，用于治疗(或辅助治疗)或预防糖尿病的药品、食品、饮食补充剂和保健品。

在本发明的组合物中，通常含有(a)0.1-99.9％本发明的蚕降糖多肽以及(b)余量的药学上或食品上可接受的载体。

以药物组合物为例，蚕降糖多肽可与药学上可接受的载体混合。载体可以是固态的或液态的，一般根据所用的给药方式而选择类型。可用脂质体来释放该蚕降糖多肽。活性药物可以以片剂或胶囊形式(作为附聚的粉末)，或者以液体形式一起给药。固态载体的例子包括(但并不限于)：乳糖、蔗糖、明胶和琼脂。胶囊或片剂可以容易地制备，并且便于吞咽或咀嚼；其他的固体形式包括颗粒。片剂可含有适当的粘合剂、润滑剂、稀释剂、崩解剂、着色剂、调味剂等。液体剂型的例子包括：在水、药学上可接受的脂肪或油、醇或其他有机溶剂(包括酯)中的溶液或悬浮液、乳剂、糖浆、酏剂、用非泡腾颗粒再生的溶液和/或悬浮液、以及用泡腾颗粒再生的泡腾制剂。这样的液体剂型可含有，例如，适当的溶剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、稀释剂、甜味剂、增稠剂和助溶剂。口服剂型可含调味剂和着色剂。

可用于配制本发明口服剂型的、具体的药学上可接受的载体和赋形剂例子，在美国专利No.3,903,297(1975年9月2日授予Robert)中有描述。用于制造本发明的有用剂型的技术和组合物，在下列文献中有描述：《7种现代制剂》(7Modern Pharmaceutics).第9和10章(Banker&Rhodes编辑，1979)；Lieberman等人，《药物剂型：片剂》(Pharmaceutical Dosage Forms：Tablets)(1981)；和Ansel，《药物剂型导论》(Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms)2版(1976)。

通常，本发明的组合物可制成单剂形式。每剂一般含有20-2000毫克蚕降糖多肽，较佳地含50-500毫克蚕降糖多肽。本发明人的研究表明，当蚕降糖多肽以大于20毫克/剂，较佳地，20-2000毫克/剂，更佳地，50-500毫克/剂施用时，表现出显著的对高血糖的抑制作用，

剂量单元包括蚕降糖多肽，或者蚕降糖多肽与其他抑制高血糖症的物质(包括某些天然物质或提取物，如苦瓜子、南瓜、桑叶、蜂胶、或其组合，也包括人工合成的化合物，如他汀类药物)所形成的混合物。此外，剂量单元还可含有稀释剂、填充剂(extender)、载体等。剂量单位是固体、或凝胶形式，如丸剂、片剂、胶囊等，或者是液体形式。它们适合口服给药、直肠给药、局部给药。

施用方式

在本发明中，作为活性成分的蚕降糖多肽可用任何合适的剂量。通常，疾病类型(如I型、II型糖尿病)、化合物类型、载体类型以及数量可以很不相同，因此施用的具体剂量取决于温血动物或人的种类、体重、和待治疗的糖尿病病情程度等。一般，蚕降糖多肽合适的剂量是约0.01-100毫克(mg)/千克(kg)体重，较佳地，约0.2-50毫克/千克体重，更佳地约1-10毫克/千克体重。按50kg体重的对象计算，通常每天可以施用约20-2000毫克(mg)，较佳地约50-500毫克/剂。当口服给药时，蚕降糖多肽的剂量可高达2克/剂或更高。

当蚕降糖多肽被作为活性成分用于保健品、食品或饮食补充剂时，其含量通常为相应药物中蚕降糖多肽含量1/3--1/5，例如每剂20-200毫克。

当施用本发明的含蚕降糖多肽的组合物(如药物组合物)时，施用方法可以是能够糖苷酶抑制活性或降血糖的的任何合适的有效方法。代表性的施用途径包括口服给药、直肠给药、局部给药、肠胃外给药等等。

施用有效量药物的方法还取决于待治疗的糖尿病严重程度。在本发明中，通过与合适的载体、其他抑制糖尿病的化合物或方便给药的稀释剂一起配制，并通过口服施用蚕降糖多肽的肠胃外治疗方法，是将化合物施用于温血动物的优选方法。

本发明的试验结果已经意外地证实，静脉注射施用是本发明的蚕降糖多肽没有降血糖功能，而口服却具有显著的降血糖功效。

应理解，本发明并不受到任何机理的限制。提供以下推定的机理只是为了使公众便于理解本发明。据本发明人研究，本发明蚕降糖多肽的降血糖机理如下：

本发明的蚕降糖多肽就是蚕粉中起降血糖作用的主要物质。该多肽能够降血糖是通过消化道，在肠道内与糖苷酶结合，从而成为一种糖苷酶抑制剂以降低糖苷酶对糖的消解作用，使单糖(葡萄糖)产生的速率放缓，降低餐后人体对糖的急剧吸收，使血糖浓度峰值降低，达到避免糖尿病病人餐后血糖偏高的目的。而直接静脉注射时，因为无法抑制糖苷酶活性，故无降血糖功能。

本发明的蚕降糖多肽的主要优点在于：

(1)本身无毒性，经分解后成为氨基酸，是人体的营养素；

(2)对空腹血糖无影响，因此不会产生如胰岛素等药物引起的低血糖反应；

(3)无需注射给药，方便糖尿病患者使用；

(4)与糖苷酶的结合为不完全竞争性结合抑制，不会对人体机能产生不良影响。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1A

蚕降糖多肽的制备

取鲜活的桑蚕蛹5克于4℃粉碎至匀浆，加入3倍体积的无菌蒸馏水，4℃搅拌，2小时。充分混匀后，10000×g离心，15分钟，去除沉淀，取上清液待分离纯化。

取适量上清液，上柱分离。采用Pharmacia公司生产的CM Sepharose FF填料，缓冲液为pH5.8 HAc-NaAc体系，直线梯度洗脱至缓冲液中含1M NaCl。具体的分离纯化条件如下：

1、柱型：内经1.6cm，柱高20cm，柱床体积为30毫升。

2、填料：CM Sepharose FF，Pharmacia公司生产。

3、上样样品：经离心后的上清液。

4、柱平衡条件：20mM Tris缓冲液，pH7.1，平衡3个柱体积。

5、流速：2ml/min

6、洗脱条件：

A溶液：20mM HAc-NaAc缓冲液，pH5.8

B溶液：20mM HAc-NaAc，1M NaCl，pH5.8

从100％A，0％B至60％A，40％B，直线梯度洗脱，约5个柱床体积。

7、柱再生条件：100％B，2个柱体积

8、检测波长：280nm

9、工作温度：25℃

10、洗脱收集：收集洗脱主峰，其范围在NaCl浓度为0.230～0.255M之间。

分离纯化图谱见附图1。在0.230-0.255M NaCl浓度下有一洗脱主峰。同时可见有部分未吸附的杂蛋白和色素未被吸附而直接穿过柱子，在用NaCl洗脱过程中收集主峰，完毕后用高盐再生柱子，去除其他杂蛋白。

收集后的蚕降糖多肽溶液中加入3倍体积的无水丙酮，4℃过夜，次日过滤去除上清，沉淀再用70％丙酮洗涤两次，真空抽干去除丙酮，沉淀物加入适量的无菌蒸馏水溶解后，冷冻干燥，得白色的多肽粉末(约0.351克)，即为蚕降糖多肽纯品，样品置4℃冰箱保存。

实施例1B

蚕降糖多肽的制备

重复实施例1A，不同点在于用取鲜活的桑蚕五龄幼虫5克替换实施例1A中的桑蚕蛹。

结果与实施例1A基本相同，在0.230-0.255M NaCl浓度下有一蚕降糖多肽的洗脱主峰。制得的蚕降糖多肽数量为0.298克，约为实施例1A的80-90％。

实施例1C

蚕降糖多肽的制备

重复实施例1A，不同点在于用取桑蚕五龄幼虫的冻干蚕粉1克替换实施例1A中的桑蚕蛹，其中先将冻干蚕粉溶于3kg的无菌蒸馏水，4℃搅拌，2小时。充分混匀后，10000×g离心，15分钟，去除沉淀，取上清液待分离纯化。

结果与实施例1A基本相同，在0.230-0.255M NaCl浓度下有一蚕降糖多肽的洗脱主峰。制得的蚕降糖多肽数量为0.375克。

实施例2

蚕降糖多肽的鉴定及纯度分析

在本实施例中，对实施例1A、1B和1C制备的蚕降糖多肽进行鉴定及纯度分析。

采用HPLC分析，HPLC设备为Waters公司，分析柱为Protein Pak 125，Waters公司，流动相为pH6.8磷酸缓冲液，流速1ml/min。

蚕降糖多肽的特征出峰时间为11±0.5分钟。

HPLC图谱见附图2。如实施例1A中纯化的蚕降糖多肽，纯度达99％以上。样品达到药品标准所要求的纯度指标。

实施例1B和1C的纯化的蚕降糖多肽，纯度同样在99％以上。

实施例3

蚕粉粗制品原料中多肽含量的测定

取鲜活桑蚕匀浆后，加3倍体积pH6.8磷酸缓冲液，震荡混匀，12000×g离心10分钟，取上清液。按照实施例2中描述的方法进行HPLC分析。

HPLC图谱见附图3，可见在11-12分钟的出峰时间出现特定的对应于蚕降糖多肽的峰。

实施例4

蚕降糖多肽对α-麦芽糖苷酶活性的抑制

根据汪谦主编的“现代医学实验方法”(人民卫生出版社出版社，1996年)中所述的检测方法进行测试。方法如下：以麦芽糖为底物，加入不同数量实施例1A中制备的蚕降糖多肽，用葡萄糖试剂盒(购自上海荣盛生物技术有限公司)测定体系中葡萄糖生成量，计算出抑制率。以每毫克麦芽糖苷酶60秒钟分解麦芽糖所产生的葡萄糖的微摩尔数作为活性单位。

结果如下表1所示：

                            表1

麦芽糖苷酶	2ug	2ug	2ug	2ug	2ug
						蚕降糖多肽	0ug	1ug	2ug	5ug	10ug
麦芽糖苷酶活性	1.15u	0.97u	0.65u	0.53u	0.48u

上述结果表明，蚕降糖多肽对麦芽糖苷酶有明显的活性抑制作用，且该作用呈量效关系。在等量2ug酶反应体系中，分别加入不同量的蚕降糖多肽时，对酶活性有不同的抑制作用，而且该抑制作用与加入的蚕降糖多肽的量呈正相关。

实施例5

蚕降糖多肽的抑制葡萄糖吸收作用和降血糖作用

在本实施例中，以小鼠(6周龄，体重约22克)作为实验动物，以蚕降糖多肽口服饲喂及试验注射给药，剂量为0.5g/kg体重。

观察小鼠餐后的血糖升降度，结果如下表2所示：

                                    表2

时间	0小时	0.5小时	1小时	1.5小时	2小时	3小时
							空白组	0	+18.8％	+16.5％	+27.7％	+15.3％
注射组	0	+45.5％	+48.9％	+45.6％	+46.8％
							口服组	0	-16.4％	-9.6％		-17.6％	-14.3％

注：空白组的数据是与空白组0小时的血糖相比的血糖升降百分比；注射组的数据是与同一时间点与空白组的血糖相比的血糖升降百分比；口服组的数据是与同一时间点与空白组的血糖相比的血糖升降百分比(3小时的数据除外)。

上述结果显示，蚕降糖多肽注射给药无降糖作用，提示该多肽在血相中无功效作用机制。而口服组出现显著的降血糖作用。这表明，蚕降糖多肽主要在肠道中起到糖苷酶抑制作用，减缓糖苷酶对糖的分解速率，降低餐后葡萄糖的吸收速率，从而达到避免餐后血糖出现高峰的高血糖症。

实施例6

蚕降糖多肽口服药物配方及人体试食结果

采用3号胶囊装填，蚕降糖多肽含量为50毫克/粒，可溶性淀粉50毫克/粒，总计每粒100毫克内容物，其中含蚕降糖多肽50毫克。

在北京市疾病预防控制中心指导下，由北京西苑中医医院，经50对糖尿病病人口服对照试食。结果表明，每天三次，每次服用两粒，持续一个月。

试验结果表明，蚕降糖多肽有降低血糖的功效，空腹血糖下降0.92±1.04mmol/L，餐后血糖下降1.54±1.41mmol/L。总有效率为62％，试食前后病人血液生化学各项指标无显著变化，尿常规，便常规各项指标均为正常范围，对试食者身体健康无明显的不良作用。

实施例7

蚕降糖多肽安全性试验

委托上海复旦大学食品毒理检测中心进行安全性试验，在给予10g/kg体重的口服剂量后，小鼠大鼠均无急性毒性反应。

Ames试验未发现蚕降糖多肽有致突变作用。

小鼠骨髓细胞微核试验，未发现蚕降糖多肽有致染色体断裂效应。小鼠精子畸型试验，未发现蚕降糖多肽对精子有致突变作用。

大鼠30天喂养试验，蚕降糖多肽对大鼠生长发育，食物利用率无明显影响，血液学及血液生化各项指标均未见异常。病理组织学检查也未发现损伤性病理改变。

结论：未见有毒性作用。

实施例8蚕降糖多肽功效物质的确定

采用实施例1C中制备的蚕降糖多肽0.1克剂量加入1毫升蒸馏水，充分溶解，作为阳性对照组，同样剂量蚕降糖多肽溶于1毫升蒸馏水，另加入蛋白水解酶50毫克(用于降解多肽物质)。两份样品均置于37℃，保温1小时后，再分别给予小鼠口服，观察小鼠餐后血糖值的变化。

结果如下表3所示：

                          表3

	蚕降糖多肽对照组	蚕降糖多肽+酶试验组
			0.5小时	-19.7％	+25.6％
1小时	-16.4％	+11.2％
			2小时	-15.9％	+17.8％
3小时	-14.7％	+12.5％

结果表明，使用蛋白酶对多肽进行消解破坏后，引起蚕降糖多肽失活，丧失了降血糖功能。同时也证明了天然蚕粉中起降血糖功效作用的物质为多肽成份，而非其他组份。

实施例9-12

降血糖复方组合物

在实施例6的降血糖组合物的基础上，再添加一些天然动植物来源的有一定降血糖作用的成分，配制成降血糖的复方制剂。

表4：复方制剂配方(采用3号胶囊，每粒胶囊含100毫克内容物)

	实施例9	实施例10	实施例11	实施例12
					蚕降糖多肽(实施例1B制备)	50mg	50mg	25mg	25mg
南瓜粉末	25mg
					桑叶提取物		25mg
蜂胶			25mg
					苦瓜子干粉				25mg
载体(可溶性淀粉)	25mg	25mg	50mg	50mg

将实施例9-12制备的每种胶囊分别给5位糖尿病病人口服，每天三次，每次服用两粒，持续一个月。

试验结果表明，与未服用之前相比，实施例9-12制备的每种胶囊均有降低血糖的功效，有效率为65-70％。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种分离的多肽，所述的多肽是从蚕中提取的，其特征在于，所述的多肽具有糖苷酶抑制活性，分子量为1000-15000道尔顿。

2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的多肽经口服后，可抑制哺乳动物餐后对葡萄糖的吸收。

3.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的多肽是从桑蚕的4-5龄幼虫或蛹中提取的。

4.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的多肽还具有以下特性：

采用HPLC分析，HPLC设备为Waters公司，分析柱为Protein Pak 125，Waters公司，流动相为pH6.8磷酸缓冲液，流速1ml/min情况下，特征出峰时间为11±0.5分钟。

5.一种组合物，其特征在于，它含有(a)权利要求1所述的分离的多肽和(b)药学上或食品上可接受的载体。

6.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，它含有20-2000毫克/剂的所述的多肽。

7.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述的组合物为药物组合物食品组合物、饮食补充剂、或保健品组合物；或者，所述的组合物为口服剂型。

8.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，它还含有选自下组的辅助降血糖成分：苦瓜子、南瓜、桑叶、蜂胶、或其组合。

9.一种权利要求1所述的分离的多肽的用途，其特征在于，它被用于：(a)作为糖苷酶抑制剂；(b)制备抑制糖苷酶的组合物；(c)制备抑制葡萄糖吸收的组合物；或(d)制备降血糖的组合物。

10.一种制备权利要求1所述多肽的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)将4-5龄蚕幼虫和/或蚕蛹的匀浆，与1-10倍体积的水或水性溶剂混合；或者将4-5龄蚕幼虫或蚕蛹的冻干粉末与1-10倍体积的水或水性溶剂混合，从而获得混合液；

(b)对步骤(a)的混合液进行离心，去除沉淀，得到上清液；

(c)对步骤(b)的上清液进行离子交换树脂和/或凝胶过滤分离，收集分子量为1000-15000道尔顿的多肽。

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