CN1839863A - 一种治疗糖尿病的药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents
一种治疗糖尿病的药物组合物及其制备方法和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1839863A CN1839863A CN 200510020636 CN200510020636A CN1839863A CN 1839863 A CN1839863 A CN 1839863A CN 200510020636 CN200510020636 CN 200510020636 CN 200510020636 A CN200510020636 A CN 200510020636A CN 1839863 A CN1839863 A CN 1839863A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- semen trigonellae
- saponin
- medicine
- group
- present
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供了一种治疗糖尿病的药物组合物，它是以胡芦巴总皂苷为活性部分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂，其中，所述的胡芦巴总皂苷为胡芦巴Trigonella foenum－graecum L.提取物，胡芦巴总皂苷的重量百分含量按胡芦巴皂苷B计算大于65％。本发明药物以胡芦巴皂苷B为对照品进行质量控制，质量稳定、可控，采用本发明提取方法，所用有机溶剂为乙醇，成本低、收率高，适于工业化大生产。且本发明药物中确定了药效成分胡芦巴皂苷A、B、C、D，通过该四个成分的配比发挥了协同增效的作用，药效明显，为临床治疗糖尿病提供了一种新的选择。
Description
技术领域
本发明涉及一种治疗糖尿病的药物组合物，具体地，是涉及以胡芦巴为原料制备而成的组合物及其制备方法，属药物领域。
背景技术
糖尿病(diabetes mellitus.)是一组由遗传和环境因素相互作用而引起的临床综合症。因胰岛素分泌绝对或相对不足以及靶组织细胞对胰岛敏感性降低，引起糖、蛋白、脂肪、水和电解质等一系列紊乱。临床以高血糖为主要标志，久病可引起多个系统损害。病情严重或应激时可发生急性代谢紊乱如酮症酸中毒等。在糖尿病人群中发生冠心病、缺血性或出血性脑血管病、失明、肢端坏疽等严重并发症均明显高于非糖尿病人群。因此，糖尿病及其并发症已成为严重威胁人民健康的世界性公共卫生问题。
糖尿病分为胰岛素依赖型(IDDM，I型)和非胰岛素依赖型(NIDDM，II型)，前者多发生于青幼年。起病急，多食、多尿、多饮、体重减轻症状较明显，有发生酮症酸中毒倾向，必须依赖胰岛素治疗维持生命。后者多见于40岁以后的中老年人，起病缓，临床症状相对较轻或不明显，无酮症酸中毒倾向，不依赖胰岛素，但此类病人大都因出现并发症(动脉粥样硬化性心脑疾患、糖尿病性肾病变、眼部病变、神经病变等)而发现糖尿病。
目前，治疗II型糖尿病的口服降糖西药主要有磺脲类和双胍类。如目前最新的第二代的磺脲类降糖药有格列本脲、格列吡嗪、格列齐特、格列波脲、格列喹酮等。这些药物确能降低血糖，对II型糖尿病人具有治疗作用，但副作用是非常突出的：1、低血糖反应严重，尤其对肝肾功能不全和老年病人停药后低血糖仍反复发作，甚至引起中枢神经系统不可逆损害或致死；2、其他副作用有恶心、呕吐、消化不良、胆汁淤滞性黄疸、肝功能损害、白细胞减少、粒细胞缺乏、再生障碍性贫血、溶血性贫血、血小板减少、皮肤瘙痒、皮疹和光敏皮疹等。常用的双胍类降糖药有甲福明(metformin)，苯乙福明和丁福明，该类药物对正常人并无降血糖作用，与磺脲类联合使用可增强降血糖作用。主要副作用是严重的胃肠道反应，表现为口干苦、金属味、厌食、恶心、呕吐、腹泻等。西药降糖剂除具降糖作用外，尚有明显的毒副作用，且对血中甘油三脂，胆固醇及低密度脂蛋白尚未发现有降低作用，也就是说，它们对糖尿病普遍存在的并发症无突出的治疗作用。因此，从中药中寻找一种低毒副作用、且对并发症又具治疗作用的适用于II型糖尿病患者的药物显得尤为必要。
胡芦巴为豆科植物胡芦巴Trigonella foenum-graecum L.的种子，为中国药典2000年版收载品种[3]。中医主要用于治疗肾虚腰酸、阳痿、寒疝偏坠、胃寒痛以及寒湿脚气肿痛乏力等。近年来国内外均有报道用原生药粉治疗糖尿病收到较好疗效。如中国医学论坛报道：每日服25g胡芦巴，共服21天，可明显降低病人的尿糖及血糖含量。且正常人服100g葡萄糖后，再服100g胡芦巴，可有效地防止血糖升高。国外文献报道：将10例非胰岛素依赖型糖尿病患者随机分为两组，治疗组每天在食物中混入25克胡芦巴粉。15天后两组进行交叉互换。在每次研究过程结束时(即第十五天)，进行静脉葡萄糖耐量试验。结果表明：食物中有胡芦巴粉者能提高代谢清除率，从而显著降低血糖水平，并缩短其半衰期，提高红细胞胰岛素受体数。由此可见，胡芦巴在临床上的疗效是肯定的。
专利申请号：专利申请号为03144071.1的“胡芦巴总皂苷提取物生产工艺”，该专利申请公开了“一种从植物胡芦巴中提取的胡芦巴提取物及其生产方法和在制备治疗糖尿病中对血糖和血脂有调节作用药品中的应用”，该胡芦巴提取物按重量百分比含有20％至70％的胡芦巴总皂苷；其生产方法按以下步骤进行；第一步醇提取；第二步大孔树脂吸附；第三步、洗涤杂质：第四步、用能解析吸附在大孔树脂上的胡芦巴总皂苷的洗脱液解析水洗后的大孔树脂；第五步、解析了胡芦巴总皂苷后的洗脱液经浓缩、干燥后既得胡芦巴提取物；该胡芦巴提取物能提高胰岛素敏感性，降低血糖和改善血脂紊乱，减轻了高血糖、高血脂对胰岛B细胞的毒性作用，由此进一步增强糖尿病大鼠和高脂大鼠的胰岛素敏感性，形成良性循环，使机体代谢恢复正常，因此，具有在防治糖尿病和糖尿病慢性并发症的作用。该提取方法为静态提取法，即将原生药的乙醇提取物溶于3～5倍的水中形成混悬液，将此混悬液置于一容器中加入树脂，使树脂与混悬液接触，从而使混悬液中的皂苷成分被树脂吸附，过滤分离出树脂，再置于另一容器内用碱水洗涤树脂，再以清水洗涤后用洗脱剂洗脱树脂上吸附的皂苷，回收洗脱液中的溶剂，浸膏真空干燥后得提取物的固形物。此法存在的最大缺点是：由于混悬液很浓稠，树脂吸附其中的皂苷成分不会完全，此会造成收率很低，且工艺相当繁琐，不适合工业化大生产(仅实验室可行)，该法未报导收率为多少。另外，用碱水洗涤树脂会造成解吸附或对皂苷成分产生破坏作用，使提取物品质受到影响。在树脂吸附后采用碱水(pH8～14)洗涤树脂，此步骤会破坏某些皂苷或致使其产生异构化，还易造成已吸附到树脂上去的皂苷解吸附，故此工艺条件会影响最终产物质量，大大降低收率。由于药物提取方法不同，产物也不相同。所获的总皂苷提取物皂苷部份为已知的甲基原薯蓣皂苷、甲基原翠雀皂苷、胡芦巴皂苷I、II、III共五个皂苷的混合物，且提取物的总皂苷的重量百分比是如何定义的，未作说明。如果没有用对照品，此重量百分比是没有任何意义。如果用了上述皂苷部份5个皂苷的某个作对照品，其含量测定结果完全不同，因为用二糖苷、五糖苷、三糖苷作对照品与四糖苷作对照品所测定的含量结果是完全不同的。也就是说，对照品不同，所测出的含量结果不同，如果未使用对照品，不能有效地达到质量控制的目的。
发明内容
本发明的技术方案是提供了一种治疗糖尿病的药物组合物，本发明的另一技术方案是提供了该药物组合物的制备方法和用途。
本发明提供了一种治疗糖尿病的药物组合物，它是以胡芦巴总皂苷为活性部分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
所述的胡芦巴总皂苷为胡芦巴Trigonella foenum-graecum L.提取物，其中胡芦巴总皂苷的重量百分含量按胡芦巴皂苷B计算大于65％。
所述的胡芦巴提取物中含有胡芦巴皂苷A、B、C、D，其结构式为：
皂苷C
皂苷D
其中，所述的胡芦巴皂苷A、B、C、D的重量配比为：
胡芦巴皂苷A 0.5～3份、胡芦巴皂苷B 1～5份、胡芦巴皂苷C 1～4份、胡芦巴皂苷D 1～5份。
进一步地，所述的胡芦巴皂苷A、B、C、D的重量配比为：
胡芦巴皂苷A 1份、胡芦巴皂苷B 2份、胡芦巴皂苷C 1.5份、胡芦巴皂苷D 2份。
所述的胡芦巴总皂苷是由下述方法提取制备：
a、取胡芦巴原生药材，粉碎，加入60％～90％乙醇回流提取，浓缩，得浸膏；
b、将a步骤的浸膏溶解入水中，过滤，滤液通过大孔吸附树脂柱：
c、用常水洗涤脂柱，流出液弃去，至流出液呈近无色澄明溶液时，放干常水，用90％～95％乙醇洗脱，洗脱液过滤，浓缩即得本发明胡芦巴皂苷。
其中，b步骤所述的大孔吸附树脂柱的树脂量与原生药材的重量配比为：1∶1。步骤a所述方法为80％乙醇回流提取；c步骤为95％乙醇洗脱。
所述的制剂是：胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、口服液。
本发明还提供了该药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
称取胡芦巴总皂苷，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。
本发明还提供了该药物组合在制备治疗II型糖尿病的药物中的用途。
本发明药物以胡芦巴皂苷B为对照品进行质量控制，质量稳定、可控，采用本发明提取方法，所用有机溶剂为乙醇，成本低、收率高，适于工业化大生产。且本发明药物中确定了药效成分胡芦巴皂苷A、B、C、D，通过该四个成分的配比发挥了协同增效的作用，药效明显，为临床治疗糖尿病提供了一种新的选择。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
实施例1 本发明原料的制备
(1)原生药粉碎成粗粉过20目筛，置于提取罐内，加入2.5倍量80％乙醇(W/W)加热回流提取2小时。收集提取液。药渣再加入乙醇加热回流提取二次，每次加入投料量1.5倍量(W/W)的80％乙醇，提取1.5小时，合并三次提取液，过滤，60℃减压回收乙醇至无醇味，得比重为1.2g/ml(热测)的糖浆状物质(棕黄色浸膏)，其得率为投料量20～24％(W/W)。将上述浸膏溶解于30倍量(W/W)的常水中，充分搅拌，使其溶解完全。纱布过滤，将滤液通过已经处理的WLD型大孔吸附树脂罐(树脂量：原生药量1∶1，W/W)，流速控制在每100kg树脂每分钟4～6立升，流出液弃去。待流出液对高氯酸反应显红色时(取流出液1ml置5ml试管内，加入2ml 70～72％高氯酸，若流出液有微量皂苷，反应液即呈红色)，即刻用常水洗涤树脂柱床，直至流出液呈无色橙明溶液，放干树脂柱内的常水，用树脂量2倍量(W/W)的药用乙醇洗脱，收集洗脱乙醇液，过滤，60℃减压回收溶剂，得棕黄色浸膏。将其在60℃减压真空干燥，碾细，得棕黄色疏松粉末胡芦巴总皂苷(以胡芦巴皂苷B计含量＞65％，含水量＜4％)，收率为原生药的5.5～7％(按干燥品计算)，以胡芦巴总皂苷经加工制成的硬胶囊剂，含胡芦巴总皂苷以胡芦巴皂苷B(C51H82O21·3H2O)计，应为标示量的90.0～110.0％(本发明药物胶囊每粒内容物平均重量约为0.35g)，其标示量为0.25g。
(2)原生药粉碎成粗粉过20目筛，置于不锈钢提取罐内加入3倍量60％乙醇回流提取2小时，收集提取液。药渣再加热回流提取二次，每次加入投料量2倍量(W/W)的60％乙醇，提取1.5小时。合并三次提取液，过滤，60℃减压回收乙醇至无醇味，提取物呈糖浆状，将此浸膏趁热溶于30倍量(W/W)的常水中，充分搅拌，使其溶解完全。静置4小时后过滤，将滤液通过已经处理的WLD型大孔吸附树脂柱(树脂量：原生药量1∶1，W/W)，弃去流出液，至流出液无色澄清时，放干柱内常水，用树脂量2倍量90％药用乙醇洗脱，收集洗脱乙醇液，过滤，60℃减压回收乙醇，得棕黄色浸膏。将其进行喷雾干燥，得棕黄色疏松粉末胡芦巴总皂苷(以胡芦巴皂苷B计含量＞65％，含水量＜4％)，收率为原生药的6～7％。
(3)原生药粉碎后过20目筛得粗粉，将此粗粉置于不锈钢多能提取罐内，加入2.5倍量90％乙醇加热回流提取3小时，收集乙醇提取液。药渣再加热回流提取三次，每次加入投料量2倍量(W/W)的90％乙醇，提取2小时。合并四次提取液，过滤后减压回收乙醇至残留物无醇味，将此残留物趁热溶解于25倍量(W/W)的常水中，冷却后放置6小时，除去水溶液表面的棕褐色油状物，过滤。滤液通过已经处理的WLD型大孔吸附树脂柱(树脂量：原生药量1∶1，W/W)，弃去流出液，至流出液无色澄明、对高氯酸显负反应时，放干柱内常水，用树脂量2.5倍量90％药用乙醇洗脱，收集洗脱乙醇液，过滤后减压回收乙醇至无醇味，所得膏状物进行喷雾干燥，得黄棕色疏松粉末(絮状)胡芦巴总皂苷(以胡芦巴皂苷B计含量＞65％，含水量＜4％)，收率为原生药5.5～7.5％。
实施例2 本发明药物胶囊剂
1、原料：胡芦巴总皂苷(实施例1制备) 约350g，制成1000粒本发明药物胶囊；
2、制备：将胡芦巴总皂苷粉碎过60目筛，在相对湿度68％以下的条件下，用手工或胶囊机装填1号囊壳，控制内容物每粒约0.35g，制备1000粒。
胶囊剂可掩盖胡芦巴总皂苷的苦味；药物利用度高，在胃肠道内分散快、吸收好；提高药物的稳定性。
3、本发明药物胶囊剂的制备
胡芦巴总皂苷35kg，粉碎后过60目筛，混匀。取细粉适量测定总皂苷含量和胡芦巴皂苷B含量及含水量，根据所测结果决定每粒胶囊的内容物装填量(一般情况下每粒胶囊装填量不得少于0.35g，若总皂苷含量＞75％，可加入适量药用淀粉进行稀释，使其总皂苷含量为65～75％之间，皂苷B含量不小于12％)。将胶囊剂填装车间相对湿度控制在60％，用胶囊填装机填装此药粉于1号囊壳内，每粒装填量约为0.35g，制备10万粒。按100粒/瓶，装瓶密封，贴笺，送检，包装(6瓶/小盒、3小盒/中盒、20中盒/箱)，入库。
实施例3 本发明药物胶囊剂中胡芦巴总皂苷的鉴别
(1)取实施例1制备的提取物约1mg，置10ml容量瓶中，加高氯酸适量，使溶解并稀释至刻度，摇匀，在30分钟内照分光光度法(中华人民共和国药典2000版一部附录VB)测定，在405±2nm波长处有最大吸收。
(2)取实施例1制备的提取物10mg，加甲醇2ml使溶解，照薄层色谱法(中华人民共和国药典2000版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液10μl，点于羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以氯仿—甲醇—醋酸—水(体积比25∶12∶2∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，应显出4个红色主斑点。
(3)本发明胶囊原料药胡芦巴总皂苷的检查
还原糖：取本发明药物胶囊剂10mg，置10ml试管中，加2ml水溶液，加入碱性酒石酸铜试液3ml，在沸水浴中加热3分钟，应无红色沉淀产生。
干燥失重：取本发明药物胶囊剂100℃干燥至恒重，减少重量不得过6.0％(中华人民共和国药典2000版一部附录IXG)。三批胡芦巴总皂苷中试产品干燥失重测定结果见表1。
表1 三批胡芦巴总皂苷中试产品干燥失重测定结果
| 胡芦巴总皂苷中试产品批号 | 干燥失重(％) |
| 981202981203981201 | 3.84.14.2 |
炽灼残渣：取本品1.0g，依法检查(中华人民共和国药典2000版一部附录IXJ)遗留残渣不得过3％。
重金属：取炽灼残渣项下遗留的残渣适量，依法检查(中华人民共和国药典2000版一部附录IXE第一法)，含重金属不得过百万分之二十。
砷盐：取本品1g，依法检查(中国药典2000版附录IXF第二法)，不得过百万分之二。
树脂残留物或降解产物：详见原料药质量标准草案。
胡芦巴总皂苷含量测定
对照品的制备：精密称取经80℃减压干燥至恒重的胡芦巴皂苷B对照品14mg，置25ml量瓶中，加80％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ul含胡芦巴皂苷B约0.5ug)。
供试品溶液的制备：精密称取本品约20mg，置25ml量瓶中，加80％乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：精密量取对照品溶液与供试品溶液各200ul，分别置于10ml容量瓶中，加高氯酸至刻度，密塞，摇匀，置60℃恒温水浴中加热70分钟，取出，浸入常水中冷却至刻度。以相应的试剂为空白，在1小时内，照分光光度法(中华人民共和国药典2000版一部附录VB)，在325nm波长处分别测定吸收度，计算，即得。见表2。
表2 三批胡芦巴总皂苷中试产品含量测定结果
| 胡芦巴总皂苷批号 | 胡芦巴总皂苷含量(％) | 平均含量(％) |
| 981202981203980101 | 69.8570.2569.96 | 70.02 |
本品按干燥品计算含总皂苷以胡芦巴皂苷B(C51H82O21·3H2O)计算，不得少于65％。
胡芦巴皂苷B
对照品溶液制备 精密称取经80℃干燥至恒重的胡芦巴皂苷B对照品7mg于1ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度即得(每1μl含胡芦巴皂苷B 7μg)。
供试品溶液的制备
精密称取100℃干燥至恒重的胡芦巴总皂苷120mg，于10ml容量瓶中，用80％乙醇溶解，并定容，即成供试品溶液。
测定法：精密吸取对照品溶液20μl，供试品溶液60μl各三份，分别点于硅胶H薄层板上(20×20×0.05cm)，每份点成1cm长的条状，同时点上甲醇60μl作空白。冷风吹干，在层析缸中用展开剂氯仿—甲醇—正丁醇—醋酸—水(体积比25∶12∶5∶4∶4)预饱和半小时后，展开，同时层析缸壁置一张17×15cm大小的浸有展开剂的滤纸，展完后继续展开1.5小时。取出晾干，挥尽溶剂，于碘蒸气缸中显色约10分钟，取出，划出供试品中相应的胡芦巴皂苷B色带，等褪色后，刮下对照品和供试品中皂苷B的色带硅胶H及一份面积大小相似的空白硅胶H，分别置于5ml带塞离心试管中，精密加入甲醇5ml，超声波振荡洗脱20分钟后离心处理15分钟(转速2500转/分)，倾出离心液于另一带塞试管中，分别精密吸取4ml溶液于10ml容量瓶中，水浴上挥干溶剂。加入70～72％高氯酸至刻度，摇匀，置60℃恒温水浴中加热70分钟，取出，浸入常水中冷却至瓶内溶液面降回刻度。以空白色带溶液为空白，在1小时内，照分光光度法(中国药典2000版一部附录VB)，在325nm波长处分别测定吸收度，计算，即得。
本品按干燥品计算含胡芦巴皂苷B(C51H82O21·3H2O)，不得少于12％。
选择皂苷B定量控制的依据是：(1)、该化合物是含量测定用的对照品，且在有效部份总皂苷中含量最多，为有效部份中的一个主成分，对于以单味药有效部份作为药用的，不但测定有效部位的总含量，而且必须测定其中主成分的含量；(2)、皂苷A、B、C、D组成有效部份，皂苷B是其中有效成分之一，因为此四个皂苷的苷元均为薯蓣皂苷元，A为三糖苷(两分子葡萄糖与一分子鼠李糖)；皂苷B为四糖苷(两分子葡萄糖与两分子鼠李糖)；皂苷C为四糖苷(三分子葡萄糖与一分子鼠李糖)；皂苷D为六糖苷(三分子葡萄糖与三分子鼠李糖)。选择四糖皂苷B作为对照品控制含量(总皂苷)较为准确。
实施例4 胡芦巴总皂苷中单体甙A、B、C、D的含量测定研究
采用皂苷B含量测定方法，以皂苷B对照品对总皂苷所含的四个主要皂苷成分进行定量测定。总皂苷用硅胶H薄层板分离[1]，碘蒸气显色后确定各主要成分的色带，挖取各色带吸附剂[2]，用甲醇洗脱，洗脱物与高氯酸反应后，反应液经比色测定而获得各成分含量。其测定过程如下：
精密称取胡芦皂苷B对照品14.2mg，置于2ml量瓶中，加甲醇至刻度，每ml对照品溶液含皂苷B7.1mg。精密称取100℃干燥至恒重的胡芦巴总皂苷(批号981203)约108mg，置于10ml量瓶中，用80％乙醇定容，此作为供试品溶液。准确吸取对照品溶液15μl，供试品溶液90μl，点于硅胶H薄层板(200×20×0.5mm)上，点样点成条状(约1cm)，间距1.5cm，对照品及样品各点三个，用吹风将所点样品的溶剂吹干，将板置于层析缸(25×30×10cm)中预饱和20分钟后展开，层析缸壁贴一张15×17cm大小的展开剂浸湿的滤纸以防止边缘效应。展开完毕后继续展开1.5～2小时，取出，挥尽溶剂，在碘缸中显色后取出，用铅笔描出各色带位置，在室温挥尽碘后，分别刮下皂苷A、B、C、D及对照品的色带硅胶H，分别置于5ml带塞离心试管内，精密加入甲醇5ml。用超声波振荡洗脱20分钟后，离心处理15分钟(2500转/分)，小心倾出离心液于另一5ml带塞试管中，精密吸取溶液4ml于10ml容量瓶内，置水浴上挥尽甲醇(同时从板上刮下相同面积的硅胶H平行操作做空白)，加入70～72％高氯酸至刻度，摇匀。于60℃恒温水浴中加热70分钟，取出在常水中冷却至液面降回刻度，以空白色带平行处理的高氯酸溶液作空白，于波长325nm处分别测定吸收度，用以下公式计算各皂苷成分含量：
W对＝15μl点样对照品溶液所含对照品μg数；
A样＝供试品溶液的吸收度值；
A对＝对照品溶液的吸收度值；
W样＝90μl点样供试品溶液所含总皂苷的μg数；
*A样为皂苷A、B、C、D分别的吸收度值。
表3 四个主要皂苷成分在总皂苷的含量测定结果
| 样品 | 点样量(μg) | 吸收度A | 含量(％) | 总含量(％) | |
| 测得值 | 平均值 | ||||
| 对照品(皂苷B) | 106.5106.5106.5 | 0.30670.29270.3066 | 0.3066 | 54.56 | |
| 皂甘A | 864864864 | 0.19210.20510.2061 | 0.2056 | 8.26 | |
| 皂苷B | 864864864 | 0.44180.45080.4454 | 0.4438 | 17.83 | |
| 皂苷C | 864864864 | 0.30350.30010.3134 | 0.3118 | 12.54 | |
| 皂苷D | 864864864 | 0.40380.39630.3981 | 0.3972 | 15.97 | |
以上测定结果证明：总皂苷中四个主要皂苷成分的总含量为54.56％，它们分别的含量为皂苷A 8.26％、皂苷B 17.83％、皂苷C 12.54％、皂苷D为15.97％。它们之间的含量比为皂苷A∶皂苷B∶皂苷C∶皂苷D(1∶2∶1.5∶2)。
胡芦巴总皂苷是胡芦巴乙醇提取物，通过大孔吸附树脂处理得到的干燥、疏松粉末，工艺很好地解决了其吸湿性和流动性问题，通常可制成片剂，颗粒剂和胶囊剂。
以下通过药效学试验证明本发明药物。
以下是本发明药物药效试验的受试药物及工具药、阳性对照药：
1、受试药物：本发明药物胶囊剂，由实施例2制备；本发明药物胶囊质量标准有效部分含量定为不少于65％，有效部分胡芦巴总皂苷含量为67.21％，其中，皂苷A∶皂苷B∶皂苷C∶皂苷D的重量配比为：1∶2∶1.5∶2。
2、工具药、阳性对照药
链脲霉素STREPTOZOTOCIN，N-(Methyinitrososocarbamoyl)-D-glucosamine)(STZ)，纯度(purity)：Minimum 98％，规格：1g：1瓶，批号(Lot)：82k0827，由SIGMA提供。依据：STZ通过自由基(如-CH3)损伤β细胞，使细胞内胰岛素缺乏，使血糖升高。
四氧嘧啶(ALLOXAN，5，6-Dioxyuracil)，规格：25g：1瓶，Lot：12k1460，由SIGMA提供。依据：四氧嘧啶是β细胞毒剂，通过产生超氧自由基破坏β细胞，使细胞内DNA损伤，辅酶I含量下降，mRNA功能受损，β细胞合成前胰岛素受损，导致胰岛素缺乏，使血糖升高。
降糖灵片(盐酸苯乙双胍片)：规格：25mg×100片，批号：020703，由江苏林海药业有限公司生产。依据：本品为双胍类口服降血糖药，可促进脂肪组织摄取葡萄糖，使肌肉组织无氧酵解增加，增加葡萄糖的利用；拮抗抗胰岛素因子：减少葡萄糖经消化道吸收；还可抑制胰高血糖素的释放。本项研究用于治疗化学试剂诱发高血糖动物高血糖的西药对照药。
糖脉康颗粒，规格：5g×10袋，批号：021211，由中国中医研究院中汇制药有限公司出品。依据：主治糖尿病气阴两虚，血瘀，糖尿病II型及并发症。本项研究用于治疗II型糖尿病高血糖动物高血糖症的中药对照药。
葡萄糖试剂盒：批准文号：(93)卫药准字D-20-6，编号：001017，北京北化康泰临床试剂有限公司出品。采用葡萄糖氧化酶法按程序测定血糖含量。补充资料试验用葡萄糖试剂盒，批号：021227，由四川省迈克科技有限责任公司提供。
0.9％氯化钠注射液，规格：500ml：4.5g，临用前新购置，四川科伦大药厂生产。
胆固醇：Cholesterin gepulvert Art3672 Cod Franc 1965，JP USP。造成高脂模型用药。
丙基硫氧嘧啶：批准号，沪卫药准字(1995)第045007号，批号：971103，第二军医大学朝晖制药厂出品。造成高脂模型用药。
5号胆盐(生化试剂)：批号：98012，湖南省益阳生化试剂厂出品。造成高脂模型用药。
总胆固醇测定试剂盒：批准号：(96)卫药准字D-01-2号，产品号：00011，温州东瓯生物工程有限公司出品。
甘油三酯测定试剂盒：批准号：(96)卫药准字D-03-4(1)号，产品号：00031，温州东瓯生物工程有限公司出品。
低密度脂蛋白测定试剂盒：批准号：(浙)卫药生证字第06-B-14号，温州东瓯生物工程有限公司出品。
高密度脂蛋白测定试剂盒：批准号：(96)卫药准字D-05-2号，温州东瓯生物工程有限公司出品。
脂必清：(96)卫药证进字第027号，联邦制药厂有限公司出品，批号：010796。本品是新一代苯氧酸衍生物，具优良的降低甘油三酯和总胆固醇作用。1990年美国药典USPXXII版正式收载该药，核定为美国国家基础药物。本项研究用作降脂试验的西药对照药。
优降糖(格列本脲片)：规格：2.5mg×100片，批号：980406，北京双桥制药公司出品。依据：为口服降血糖药磺酰脲类第二代产品。用作治疗正常动物或外源性高血糖动物降低血糖的西药对照药。
3、试验动物
小鼠：昆明种远交系(封闭群30代以上)1级合格动物，合格证号：川实动管质(95)第85号，体重为18g～22g之间，♂♀各半，动物数依试验内容而定，由四川省抗菌素工业研究所动物中心提供。另有来源，合格证号：川实动管字第2002-33号，体重在30～35g之间，♀♂各半，由四川省中药研究所动物研究室动物生产中心提供。
大鼠：SD种远交系(封闭群30代以上)1级合格动物，合格证号：川实动管质(95)第92号，体重为180g～220g之间，♂♀各半，动物数依试验内容而定(参阅试验方法部分)，由四川省抗菌素工业研究所动物中心提供。另有来源，合格证号：川实动管字第2002-32号，体重在250～300g之间，♀♂各半，由四川省中药研究所动物研究室动物生产中心提供。
大鼠Wistar种系，1级合格动物，合格证号：川实动管质第8号。体重为180～220g之间，♀♂各半，动物数依实验内容而定，由成都中医药大学动物中心提供。
家兔：新西兰1级合格动物，合格证号：医动字第24101114号，川实动管质第98-3号，体重2～3kg之间，动物数由实验内容定，♂♀各半，由卫生部成都生物制品研究所提供。
新西兰兔，1级合格动物，合格证号：川实动管质第99-11号，体重2～3kg之间，动物数由实验内容定，由医学科学院四川分院血液输血研究所动物中心提供。
试验例1 胡芦巴总皂苷降血糖活性确证的实验
从本发明药物中分离纯化出纯总皂苷(含量大于95％)和非皂苷部份。一级标准SD大鼠51只，在本所一级标准动物房适应24小时后随机分组。第一组为对照组，给蒸馏水；第二组，第三组为本发明药物(胡芦巴总皂苷)不同剂量组，分别为0.2、0.4g/kg：第四组为纯总皂苷，第五组为非皂苷部份，剂量均为0.2g/kg。以上各组均为ig给药，对照组ig等体积蒸馏水，连续给药6天，第6天给药后iv四氧嘧啶并继续每天给药一次，于3天(72小时)后，分别取尾血测定血糖值，并进行统计学处理，结果如表4：
| 组别 | 动物数(N) | 剂量(g/kg) | 血糖值(mg/dl) | t | p |
| 模型组模型+本发明药物模型+本发明药物模型+纯总皂苷模型+非皂苷部份 | 111011910 | /0.20.40.20.2 | 593.52±76.72507.78±86.96503.14±82.70509.64±59.85595.58±109.12 | 2.402.602.602.50 | ＜0.05＜0.05＜0.05＞0.05 |
以上实验结果表明，本发明药物(胡芦巴总皂苷)0.2、0.4g/kg，纯总皂苷0.2g/kg对四氧嘧啶致大鼠高血糖有明显的降低血糖作用，而从本发明药物中分离出的非皂苷部份对此无活性，结果证明，胡芦巴中所含总皂苷为本发明药物的有效部位。
试验例2 本发明药物对链脲霉素致大鼠高血糖的影响试验
一级健康SD大白鼠90只，体重在250～300g范围内，全♂。随机取10只作为正常对照组，其余80只用链脲霉素造成高血糖模型大鼠。造型前先禁食(自由饮水)15小时，用PH值调至4的生理盐水新鲜配制1.31％链脲霉素的生理盐水溶液，冰浴低温保存，用40mg/kg尾静脉注射大鼠，造成高血糖模型，iv后2h各鼠ig 20％ glu液2g/kg，以防低血糖期休克死亡。在iv STZ72小时后从大鼠眼眶静脉丛用毛细管取血，用葡萄糖氧化酶法测定血糖值(取血前禁食(自由饮水)5h)，选择血糖值在180mg/dl以上的动物随机分成6组，本发明药物给药组分为3个剂量组，分别为0.5，0.25，0.125g/kg组，中药糖脉康对照1个组1.8g/kg，西药降糖灵对照1个组，0.075g/kg，模型组不给药ig给药组相同体积的蒸馏水，以上各组均按剂量灌胃(ig)给药，正常对照组先测定正常血糖值后，ig给药组相同体积的蒸馏水，以上7个组均按其剂量、体积，每日1次，连续用药，分别于给药第7天、第14天测定血糖。当日给药安排在取血前1小时，类似前述方法，取血前禁食(自由饮水)5小时，用葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖值。结果如表5。
表5 本发明药物对链脲酶素致高血糖大鼠血糖的影响
| 组别 | 剂量g/kg | (造型后)血糖值(mg/dl) | |||||
| 给药前 | n | 药后7天 | n | 药后14天 | n | ||
| 正常组模型组本发明药物本发明药物本发明药物糖脉康降糖灵 | --0.50.250.1251.80.075 | 141.2±16.9580.9±90.0ΔΔ580.7±73.8ΔΔ579.5±77.3ΔΔ578.3±80.6ΔΔ579.4±72.9ΔΔ578.5±70.3ΔΔ | (10)(10)(10)(10)(10)(10)(10) | 123.7±14.2548.0±54.7ΔΔ312.6±86.3**355.5±109.9**481.1±98.5513.2±73.6151.8±29.0** | (10)(10)(10)(10)(10)(10)(10) | 126.9±17.5509.0±80.1ΔΔ238.9±63.1**355.1±78.9**308.4±81.6**499.7±89.6157.4±26.4** | (10)(10)(10)(10)(10)(10)(10) |
ΔΔ：P＜0.01 模型组VS正常对照组；**：P＜0.01 给药组VS模型组
结果表明：链脲霉素造型后的大鼠平均血糖值较正常大鼠血糖平均值有非常显著的升高(P＜0.01)，表明注射链脲霉素已造成大鼠高血糖模型。造型后每天灌胃(ig)不同剂量的本发明药物和中、西对照药，给药第7天测量，本发明药物大剂量组、中剂量组和西药对照降糖灵组大鼠平均血糖值较模型组平均血糖值已有非常显著的降低(P＜0.01)；在给药第14天测定，本发明药物大、中、小剂量组以及西药对照降糖灵组的大鼠平均血糖值均较模型组平均血糖值有非常显著的降低(P＜0.01)，证明本发明药物对链脲霉素致高血糖大鼠有显著的降低高血糖的作用。
试验例3 本发明药物对链脲霉素致高血糖小鼠的影响试验
一级昆明种远交系健康小鼠115只，体重在30～35g范围内，全♂。随机取10只作为正常对照组，其余105只用链脲霉素造成高血糖模型小鼠。造模前先禁食(自由饮水)15小时，用PH值调至4的生理盐水新鲜配制1.32％链脲霉素溶液，冰浴低温保存，用100mg/kg尾静脉注射(iv)小鼠，造成高血糖模型，iv后2h各鼠ig 20％glu液2g/kg，以防低血糖期休克死亡。在iv STZ 7天后从小鼠眼眶静脉丛用毛细管取血，用葡萄糖氧化酶法测定血糖值(取血前先禁食(自由饮水)2h)。选择血糖值在180mg/dl以上动物随机分成6组，本发明药物给药组分3个剂量组，分别为1.0，0.5，0.25g/kg组，中药对照1个组为糖脉康3.6g/kg组，西药对照1个组为降糖灵0.15g/kg组，模型组不给药，ig与给药组同体积的蒸馏水。正常对照1个组，先测定正常血糖值后，也ig与给药组相同体积的蒸馏水，以上7个组均按各组给药剂量、体积，每日1次，连续投与，且分别于给药第7天、第14天测定血糖，类似前述方法，取血前禁食(自由饮水)2h，当日药后1h从小鼠眼眶静脉丛取血，用葡萄糖氧化酶法测定血糖值。结果见表6。
表6 本发明药物对链脲霉素致高血糖小鼠的影响
| 组别 | 剂量g/kg | (造型后)血糖值(mg/dl) | |||||
| 给药前 | n | 给药7天 | n | 给药14天 | n | ||
| 正常组模型组本发明药物本发明药物本发明药物糖脉康降糖灵 | --1.00.50.253.60.15 | 101.7±21.2410.8±226.1ΔΔ407.4±211.8ΔΔ412.9±219.0ΔΔ410.9±219.9ΔΔ410.3±215.1ΔΔ413.0±215.3ΔΔ | (0)(12)(12)(12)(12)(12)(12) | 109.2±29.7571.2±71.0ΔΔ288.6±75.0**303.6±98.1**370.2±44.1**368.0±102.8**246.2±79.6** | (10)(12)(12)(12)(12)(12)(12) | 111.3±26.4445.2±59.7ΔΔ252.3±62.9**233.1±30.8**373.0±47.8**255.5±47.2**135.4±30.8** | (10)(12)(12)(12)(10)(11)(12) |
ΔΔ：P＜0.01 模型组VS正常对照组； **：P＜0.01 给药组VS模型组
结果表明：链脲霉素造型后的小鼠平均血糖值较正常小鼠的平均血糖值非常显著的升高(P＜0.01)，表明链脲霉素已造成高血糖小鼠模型。造模后每天分别灌胃(ig)不同剂量的本发明药物和中、西对照药，给药第7天测量，本发明药物大、中、小3个剂量及中药对照糖脉康组、西药对照降糖灵组的小鼠平均血糖值均较模型组平均血糖值有非常显著的降低(P＜0.01)，给药14天测定，本发明药物大、中、小剂量组以及中药对照药糖脉康组、西药对照降糖灵组的平均血糖值仍较模型组平均血糖值有非常显著的降低(P＜0.01)，证明本发明药物对链脲霉素致高血糖小鼠有显著的降低高血糖的作用。
试验例4 本发明药物对四氧嘧啶致高血糖大鼠的影响试验
在本所动物研究室动物生产中心领取标准一级SD健康大白鼠90只，体重在250～300g范围内，雌雄各半。在本所药理研究室动物实验室适应环境3天。随机取10只作为正常对照组，其余80只用四氧嘧啶造成高血糖模型大鼠。造模前先禁食(不禁水)15小时，用PH值调至4的生理盐水新鲜配制1.12％四氧嘧啶的生理盐水溶液，冰浴低温保存，用40mg/kg尾静脉注射大鼠，造成高血糖模型。iv后2h各鼠ig20％ glu液2g/kg，以防低血糖期休克死亡。造型后72小时从大鼠眼眶静脉丛取血，用葡萄糖氧化酶法测定血糖值(取血前禁食不禁水5h)，选择血糖值在180mg/dl以上动物随机分成6组，本发明药物给药组分为3个剂量组，分别为0.5，0.25，0.125g/kg组，中药对照1个组，为糖脉康1.8g/kg组，西药对照1个组，为降糖灵0.075g/kg组，模型对照组不给药ig同体积的蒸馏水，以上各组均按剂量灌胃(ig)给药。正常对照1个组，先测定正常血糖值后，ig给与给药组相同体积的蒸馏水，以上7个组均按各自的给药剂量、体积，每日1次，连续投与，分别于给药第7天、第14天测定血糖。类似前述方法，取血前禁食(不禁水)5小时，从大鼠眼眶静脉丛取血，用葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖值。结果见表7、8。
表7 本发明药物对四氧嘧啶致高血糖大鼠血糖的治疗作用
| 组别 | 剂量g/kg | 造型后血糖值(mg/dl) | |||||
| 给药前 | n | 药后7天 | n | 药后14天 | n | ||
| 正常组模型组本发明药物本发明药物本发明药物糖脉康降糖灵 | --0.50.250.1251.80.075 | 132.6±9.5502.1±270.1ΔΔ497.7±226.8ΔΔ493.3±231.1ΔΔ491.6±238.1ΔΔ499.7±226.3ΔΔ503.2±223.7ΔΔ | (10)(12)(12)(12)(12)(12)(12) | 124.5±7.31463.6±107.6ΔΔ187.0±123.2**312.4±169.4*160.3±54.7**181.8±111.5**99.4±18.5** | (10)(10)(11)(10)(10)(11)(10) | 118.6±12.0329.0±37.2ΔΔ169.9±18.5**205.9±40.0**200.6±49.0**195.5±45.0**153.7±48.7** | (10)(10)(11)(10)(10)(11)(10) |
ΔΔ：P＜0.01 模型组VS正常对照组；**：P＜0.01，*：P＜0.05 给药组VS模型组
表8 本发明药物对四氧嘧啶致高血糖大鼠血糖的治疗作用
| 组别 | 剂量g/kg | 造型后血糖值(mg/dl) | |||||
| 给药前 | n | 药后21天 | n | 药后28天 | n | ||
| 正常组模型组本发明药物本发明药物本发明药物糖脉康降糖灵 | --0.50.250.1251.80.075 | 132.6±9.5502.1±270.1ΔΔ497.7±226.8ΔΔ493.3±231.1ΔΔ491.6±238.1ΔΔ499.7±226.3ΔΔ503.2±223.7ΔΔ | (10)(12)(12)(12)(12)(12)(12) | 128.1±13.1417.2±65.5ΔΔ168.0±43.3**219.2±80.1**220.3±55.3**216.8±124.4**191.5±81.8** | (10)(10)(11)(10)(10)(10)(10) | 114.6±8.5367.6±64.4ΔΔ213.9±73.5**254.6±101.4**274.2±37.6**354.1±34.8**135.3±40.6** | (10)(10)(11)(10)(9)(10)(10) |
ΔΔ：P＜0.01 模型组VS正常对照组
**：P＜0.01 给药组VS模型组
结果表明：四氧嘧啶造型后的大鼠平均血糖值较正常大鼠平均血糖值非常显著的升高(P＜0.01)，表明注射四氧嘧啶已造成大鼠高血糖模型。造型后每天灌胃(ig)不同剂量的本发明药物和中、西对照药，给药第7天测量，本发明药物大、中、小3个剂量组和中、西药对照药糖脉康给药组、降糖灵给药组的大鼠平均血糖值较模型组平均血糖值已有显著降低(P＜0.01，或P＜0.05)；在给药14天测定，本发明药物大、中、小剂量组和中、西药对照药组(糖脉康给药组和降糖灵给药组)的大鼠平均血糖值均较模型组平均血糖值有非常显著的降低(P＜0.01)，给药21天、28天测定，本发明药物大、中、小3个剂量组及中药对照糖脉康组、西药对照降糖灵组大鼠平均血糖值较模型组平均血糖值有非常显著的降低(P＜0.01)，试验结果证明本发明药物对四氧嘧啶致高血糖大鼠有显著的降低高血糖的作用。
试验例5 本发明药物对四氧嘧啶致高血糖小鼠的影响试验
在本所动物研究室动物生产中心领取标准一级昆明种远交系健康小鼠100只，体重在30～35g范围内，全♂，在本所药理研究室动物室适应环境3天。随机取10只作为E常对照组，其余90只用四氧嘧啶造成高血糖模型小鼠。造模前先禁食(自由饮水)15小时，用PH值调至4的生理盐水新鲜配制1.14％四氧嘧啶的生理盐水溶液，冰浴低温保存，用70mg/kg尾静脉注射小鼠，造成高血糖模型，iv后2h各鼠ig20％glu液2g/kg，以防低血糖期休克死亡。造型后72小时从眼眶静脉取血(取血前先禁食(自由饮水)2h)，用葡萄糖氧化酶法测定血糖值，选择血糖值在180mg/dl以上动物随机分成6组，本发明药物给药组分3个剂量组，分别为1.0，0.5，0.25g/kg组，中药对照1个组为糖脉康3.6g/kg组，西药对照1个组为降糖灵0.15g/kg组，将饲养笼中的小鼠调整到与电脑中的分组相一致。以上各组均按剂量灌胃(ig)给药，模型对照1个组不给药，ig给药组同体积的蒸馏水。正常对照先测定正常血糖值后，ig给药组同体积的蒸馏水，按以上7个组的给与方式，每日1次，连续投与。分别于给与第7天、第14天眼眶取血，同法测定血糖值。结果见表9。
表9 本发明药物对四氧嘧啶致高血糖小鼠的治疗作用
| 组别 | 剂量(g/kg) | (造型后)血糖值(mg/dl) | |||||
| 给药前 | n | 给药7天 | n | 给药14天 | n | ||
| 正常组模型组本发明药物本发明药物本发明药物糖脉康降糖灵 | --1.00.50.253.60.15 | 111.7±22.8433.3±179.2ΔΔ429.6±168.0ΔΔ424.7±166.7ΔΔ424.1±167.3ΔΔ430.9±169.3ΔΔ435.2±180.0ΔΔ | (10)(10)(10)(10)(10)(10)(10) | 108.8±18.7493.7±56.1ΔΔ274.8±93.7**300.2±56.8**359.4±103.5**460.1±126.4329.9±93.0** | (10)(10)(10)(10)(9)(10)(10) | 94.9±18.3561.1±88.5ΔΔ245.6±55.3**317.6±96.3**356.2±104.4**366.4±90.4**154.2±53.4** | (10)(10)(10)(10)(9)(10)(10) |
ΔΔ：P＜0.01 模型组VS正常对照组
**：P＜0.01 给药组VS模型组
结果表明：四氧嘧啶造型后的小鼠平均血糖值较正常小鼠的平均血糖值非常显著的升高(P＜0.01)，表明注射四氧嘧啶已造成高血糖小鼠模型。造模后每天分别灌胃(ig)不同剂量的本发明药物和中、西对照药，给药第7天测量，本发明药物大、中、小3个剂量组和西药对照药降糖灵组的小鼠平均血糖值已有非常显著的降低(P＜0.01)；给药14天测定，本发明药物大、中、小3个剂量组以及中药对照糖脉康组、西药对照降糖灵组的小鼠平均血糖值均较模型组平均血糖值有非常显著的降低(P＜0.01)，证明本发明药物对四氧嘧啶致高血糖小鼠有显著的降低高血糖的作用。
试验例6 本发明药物对实验性高血糖家兔高血糖的影响试验
购入体重为2～3kg新西兰种家兔45只，雌雄兼用，造型前禁食15小时，用新配制四氧嘧啶80mg/kg耳静脉注射，造成高血糖动物模型，于48小时后，取饥饿4小时造型家兔耳静脉血，用葡萄糖氧化酶法测定血糖，选取血糖值在180mg/dl以上的动物42只进行试验。动物共分为6组，每组7只，一组不给药，作为四氧嘧啶模型对照组，另设受试药本发明药物0.1、0.2、0.4g/kg 3个组和中药对照药糖脉康0.66g/kg、西药对照药降糖灵0.028g/kg，给药组每天上午灌胃给药一次，四氧嘧啶模型组灌胃等体积蒸馏水。各组分别于灌胃给药的第5天、第14天从耳静脉取血，用葡萄糖氧化酶法测定血糖。将结果进行统计学处理，用T检验法进行组间比较，如表10。(动物只数为测定时存活动物只数)
表10 本发明药物对实验性高血糖家兔高血糖的影响
| 组别 | 动物数(N) | 剂量(g/kg) | 血糖值(mg/dl) | |
| 5d | 14d | |||
| 正常组模型组本发明药物本发明药物本发明药物糖脉康降糖灵 | 6766667 | --0.10.20.40.660.028 | 120.41±21.65277.92±204.98252.93±150.76137.93±12.12153.88±26.93298.73±141.68162.98±63.37 | 133.08±10.51350.54±203.61278.73±172.05155.46±22.49*154.21±14.75*224.60±57.93187.35±48.90* |
*：P＜0.05
结果表明：本发明药物对四氧嘧啶致实验性高血糖家兔有降低高血糖作用，给药5天已见明显下降趋势。大、中剂量约下降100mg/dl以上，给药14天约下降200mg/dl，有统计学显著差异(P＜0.05)，表明本发明药物有降低家兔高血糖的作用。
试验例7 本发明药物对实验性高血脂大鼠血脂等指标的影响实验
购一级标准SD大鼠一批82只，♀♂各半，在本所一级标准动物实验室适应环境3天，单笼饲养、定量喂食、自由饮水，第四天开始给高脂配方饲料。
高脂配方饲料：1％胆固醇、0.5％胆盐、0.2％甲基硫氧嘧啶、5％猪油、5％黄豆粉、88.3％基础饲料。高脂饲料喂15天后，将大鼠随机分为高脂模型对照组，从第16天ig蒸馏水1ml/100g，给药组有本发明药物0.125、0.25、0.5g/kg和中药对照药糖脉康1.8g/kg，西药对照药脂必清0.18g/kg组，每组12只.分别在造型第16天ig给药，每日一次。同时每天继续喂给高脂饲料。另设一组正常对照组10只大鼠，给普通饲料，第16天开始每天ig蒸馏水1ml/100g。以上各组分别于给药后10天、25天取眼眶静脉血，分离血清，测定甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白，(注：在实验过程中，大鼠有死亡减少，括弧内数字是实测只数，正常对照组在第25天测定时只取6只测定。)并进行统计学处理。结果如表11、12、13。
表11 本发明药物对高脂大鼠甘油三酯的影响
| 组别 | 剂量(g/kg) | 给药后不同时间甘油三酯含量(mmol/L) | |||
| 10d | (n) | 25d | (n) | ||
| 正常对照模型组本发明药物组本发明药物组本发明药物组糖脉康组脂必清组 | --0.1250.250.501.800.18 | 0.40±0.070.78±0.32Δ0.69±0.310.58±0.230.49±0.14*0.57±0.290.42±0.15* | (10)(12)(12)(12)(11)(12)(12) | 0.48±0.110.87±0.870.49±0.340.31±0.310.24±0.27*0.20±0.24*0.24±0.23* | (6)(11)(10)(10)(10)(11)(12) |
ΔP＜0.05 模型组与正常对照组比较；*P＜0.05 给药组与模型组比较
结果表明：用高脂饲料喂养大鼠，药后10天测定可见血清甘油三酯升高，较正常组差异显著(P＜0.05)，高脂动物各给药治疗组可见血清甘油三酯均有降低。本发明药物小、中、大剂量组胆固醇降低有量效关系趋势，大剂量组降低显著(P＜0.05)，给药25天测定甘油三酯降低更显著，三个剂量组较模型组降低近一半或一半以上，仍呈明显量效关系。大剂量组差异显著(P＜0.05)，可见本发明药物有降低甘油三酯的作用。
表12 本发明药物对高脂大鼠胆固醇含量的影响
| 组别 | 剂量(g/kg) | 给药后不同时间胆固醇含量(mmol/L) | |||
| 10d | (n) | 25d | (n) | ||
| 正常对照模型对照本发明药物本发明药物本发明药物糖脉康组脂必清组 | --0.1250.250.501.800.18 | 1.73±0.3414.48±4.46ΔΔ14.20±5.1511.10±5.299.21±3.16*10.63±4.1213.25±4.01 | (10)(12)(12)(12)(11)(12)(12) | 2.85±3.5710.98±2.79ΔΔ12.63±6.3010.11±5.127.39±2.95**8.68±3.588.67±3.57 | (6)(11)(10)(10)(10)(11)(12) |
ΔΔP＜0.01 模型组与正常对照组比较；*P＜0.05 **P＜0.01 给药组与模型组比较
结果表明：用高脂饲料喂养大鼠，药后10天测定可见血清总胆固醇较正常对照组非常显著地升高(P＜0.01)。伴随给药10天的各组动物血清总胆固醇有降低作用，小、中、大剂量组总胆固醇降低有量效关系趋势，大剂量组降低显著(P＜0.05)，伴随给药25天测定，本发明药物中、大剂量组总胆固醇有仍降低作用，大剂量组较模型组降低非常显著(P＜0.01)，综合两次测量结果，可以认为本发明药物大剂量组是有显著降低血清总胆固醇作用的，作用强度与脂必清相近。
表13 本发明药物对高脂大鼠低密度脂蛋白的影响
| 组别 | 剂量(g/kg) | 给药后不同时间低密度脂蛋白含量(mmol/L) | |||
| 10d | n | 25d | n | ||
| 正常对照模型对照本发明药物本发明药物本发明药物糖脉康组脂必清组 | --0.1250.250.501.800.18 | 0.17±0.2712.16±4.01ΔΔ11.49±5.857.20±5.41*6.40±3.61**6.10±5.26**8.50±6.25 | (10)(12)(12)(12)(11)(12)(12) | 05.89±4.14ΔΔ5.93±6.725.56±3.783.55±2.963.79±4.024.47±3.19 | (6)(11)(10)(10)(10)(11)(12) |
ΔΔP＜0.01 模型组与正常对照组比较
*P＜0.05 **P＜0.01 给药组与模型组比较
结果表明：用高脂饲料喂养大鼠，药后10天测定已见血清低密度脂蛋白较正常饲料喂养的动物有非常显著地升高(P＜0.01)。高脂动物各给药组可见血清低密度脂蛋白明显降低。三个剂量组降低呈一定量效关系，中、大剂量组降低显著(P＜0.05)或非常显著(P＜0.01)；药后25天测定，模型组仍非常显著高于对照组(P＜0.01)，各给药组血清低密度脂蛋白仍较模型组有一定降低，大剂量组降低较明显，但未见统计学显著差异。综合两次测定结果，表明本发明药物有降低高脂血症低密度脂蛋白的作用。
试验例8 本发明药物对大鼠正常血糖的影响试验
购回一级标准SD大鼠66只，雌雄兼用.体重180～220g.随机分为6组，每组11只，正常对照组和本发明药物3个剂量组及西药对照药优降糖及中药对照药糖脉康，本发明药物大、中、小剂量分别为0.5、0.25、0.125g/kg，糖脉康为1.8g/kg，优降糖为0.025g/kg，以上药物均采用ig给药。对照组ig同体积蒸馏水，连续给药7天，第7天在给药后1.5小时，剪尾尖取禁食血，用葡萄糖氧化酶法测定大鼠血糖，并进行统计学处理和组间差异显著性测定，结果如表14。
表14 本发明药物对大鼠正常血糖含量的影响
| 组别 | 动物数(N) | 剂量(g/kg) | 给药后7天血糖值(mg/dl) | P值 |
| 对照组本发明药物本发明药物本发明药物糖脉康优降糖 | 111111111111 | -0.50.250.1251.80.025 | 87.58±16.1964.84±20.5268.60±7.4781.05±19.95116.96±14.8979.00±10.90 | ＜0.05＜0.05＞0.05＞0.05＞0.05 |
结果表明：本发明药物连续7天给药对正常大鼠血糖有一定影响，大、中剂量组血糖值降低明显，有统计学显著差异(P＜0.05)，表明本发明药物对大鼠正常血糖也有降低作用。
试验例9 本发明药物对正常家兔血糖的影响试验
购买家兔40只，雌雄各半，为新西兰兔，一级标准动物。合格证书：医动字第24101114号，由卫生部成都生物制品所提供。购回后，随即注射兔瘟巴氏杆菌二联疫苗(成都药械厂出品，批号：9812)。在本所药理研究室动物实验室适应环境一周，随机分为6组，各组动物只数见表15，分别为对照组，本发明药物0.4、0.2、0.1g/kg，糖脉康1.33g/kg和优降糖0.018g/kg，分别给兔灌服，对照组灌服等体积蒸馏水，连续给药，分别于第4天、8天、12天从兔耳静脉取血0.6～0.8ml，静置离心(3000r/min)取兔血清用葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖含量。将结果进行统计学处理，如表15。
表15 本发明药物对正常家兔血糖值的影响
| 组别 | 动物数(N) | 剂量(g/kg) | 给药前血糖值(mg/dl) | 给药后不同时间血糖值(ng/dl) | ||
| 4d | 8d | 12d | ||||
| 对照组本发明药物本发明药物本发明药物糖脉康优降糖 | 777766 | /0.40.20.11.330.018 | 134.31±8.37132.28±7.06128.21±11.16131.55±9.55122.26±15.31133.65±11.11 | 120.41±21.65125.78±10.13126.94±4.07124.01±8.38119.13±6.1550.16±7.32* | 116.81±12.91111.72±8.82110.08±4.88110.11±10.70103.95±12.0054.72±5.14* | 133.08±10.51128.21±14.40126.84±11.69128.25±11.31120.06±6.0381.56±12.28* |
*：P＜0.05
结果表明：西药对照药优降糖有显著降低家兔正常血糖的作用(P＜0.05)，而本发明药物大、中、小剂量及中药对照药糖脉康对家兔正常血糖无显著影响。
试验例10 本发明药物对正常小鼠葡萄糖耐量的影响试验
购回标准小鼠50只，雌雄各半，在实验室环境下饲养一天，适应环境，第二天随机分为4组，每组10只，第1组为对照组，第2、3、4组分别ig本发明药物0.25、0.5、1.0g/kg，第5组ig优降糖0.05g/kg，给药组每天给药一次，对照组每天一次等量蒸馏水。于第三天每组每只鼠均ig葡萄糖2.5g/kg，5分钟后再给药1次，给药后分别在40分钟、90分钟取眼眶血，测定血糖含量，进行组间比较，作统计学处理，结果如表16。
表16 本发明药物对正常小鼠葡萄糖耐量的影响
| 组别 | 动物数(N) | 剂量(g/kg) | 血糖值(mg/dl) | |
| 40min | 90min | |||
| 蒸馏水+葡萄糖本发明药物+葡萄糖本发明药物+葡萄糖本发明药物+葡萄糖优降糖+葡萄糖 | 1010101010 | 0.2ml+2.50.25+2.50.5+2.51.0+2.50.05+2.5 | 350.21±134.11247.57±84.82222.51±60.64206.59±57.80*69.03±19.35** | 213.63±92.28123.03±23.09*188.62±71.15188.76±72.1749.73±15.58** |
*：P＜0.05 **：P＜0.01(给药组与对照组比较)
结果表明：本发明药物大、中、小剂量组对小鼠外源性高血糖有一定降低作用，在药后40分钟测定血糖值较对照组有明显降低，大剂量降低显著(P＜0.05)：药后90分钟测定本发明药物各剂量组血糖值仍低于对照组，且小剂量组降低显著(P＜0.05)。所以本发明药物能增强小鼠糖耐量，加速降解高血糖。
试验例11 本发明药物对正常大鼠葡萄糖耐量的影响试验
购回SD大鼠72只，体重180～220g，雌雄各半，按体重随机分为6组，1组不给药作对照，2、3、4组作受试药本发明药物3个剂量组，分别剂量是0.5，0.25，0.125g/kg，5组为中药对照药组，取糖脉康1.8g/kg，6组西药对照药组，取优降糖50mg/kg，给药前先普遍测定正常血糖1次，并作适当调整，使各组血糖平均值比较接近。然后按上述给药剂量分别给药，对照组喂给等量蒸馏水，每天1次，连续给药7天。第7天给药前禁食5小时，给药后40分钟，各组均ig葡萄糖2.5g/kg。并于给葡萄糖前及给葡萄糖后60、120、180分钟取尾血，测定血糖含量，观察本发明药物对大鼠耐受血中高浓度葡萄糖含量的作用，测定数据用统计学处理，用T检验比较组间差异，结果如表17。
表17 本发明药物对正常大鼠葡萄糖耐量的影响
| 组别 | N | 剂量(g/kg) | 给药前血糖值(mg/dl) | 给葡萄糖前血糖值(mg/dl) | 给葡萄糖后血糖值(mg/dl) | ||
| 60min | 120min | 180min | |||||
| 对照组本发明药物本发明药物本发明药物糖脉康优降糖 | 101010101010 | 0.500.250.1251.80.05 | 77.41±9.8778.23±9.5878.20±14.8678.16±13.1977.62±11.5378.52±15.70 | 108.87±15.8671.98±14.59**101.17±17.2283.70±14.73**116.05±10.6759.24±11.88** | 121.62±20.50131.72±21.33114.79±18.62126.93±19.21118.99±23.95175.75±36.61 | 119.87±22.5698.88±9.25*99.64±14.20*103.98±9.42114.94±21.2851.25±12.17** | 114.50±23.21100.48±13.9593.96±12.39*99.44±11.05109.20±25.2543.79±15.11** |
*：P＜0.05，**：P＜0.01
结果表明：引入外源性葡萄糖后1小时测定血糖升高，优降糖组升高明显，其余各组增高相近，无显著差异，在ig外源性葡萄糖后2，3小时测定，优降糖和本发明药物组血糖值降低显著(P＜0.05或P＜0.01)，表明本发明药物与优降糖均有降低外源血糖，增加葡萄糖耐量作用。
通过上述药效学试验，本发明药物0.5，0.25，0.125g/kg ig给药，对链脲霉素致大鼠高血糖有显著的降低高血糖的作用(P＜0.01)；本发明药物1.0，0.5，0.25g/kg ig给药，对链脲霉素致小鼠高血糖有显著的降低高血糖的作用(P＜0.01)；本发明药物0.5，0.25，0.125g/kg ig给药，对四氧嘧啶致大鼠高血糖有显著的降低高血糖的作用(P＜0.01或P＜0.05)；本发明药物1.0，0.5，0.25g/kg ig给药，对四氧嘧啶致高血糖小鼠有显著降低高血糖的作用(p＜0.01)；本发明药物0.4，0.2，0.1g/kg ig给药，对四氧嘧啶致高血糖家兔有明显降低高血糖作用，大、中剂量组降低显著(P＜0.05)；本发明药物0.5，0.25，0.125g/kg ig给药，对高血脂大鼠有明显降低甘油三酯的作用，大剂量组降低显著(P＜0.05)；有明显降低胆固醇作用，大剂量组降低显著或者非常显著(P＜0.05或P＜0.01)；有明显降低低密度脂蛋白的作用，大、中剂量组降低显著或非常显著(P＜0.05或P＜0.01)；本发明药物大、中剂量显著降低正常大鼠血糖(P＜0.05)，对家兔正常血糖无显著影响；显著增强正常小鼠葡萄糖耐量(P＜0.05)，显著地增强大鼠的葡萄糖耐量(P＜0.05或P＜0.01)，表明本发明药物能增强大、小鼠对外源性高血糖的降解。
药物对生物的活性试验的影响因素是非常复杂的，药物的剂量与药效之间的关系只能是随着剂量的增加或减少所呈现出活性的增强或减弱，它只能是一种趋势，而不能如在分析化学中，药物的剂量与吸收度或峰面积呈现出非常准确的线性关系。所以，药理学家称药物量与活性的关系称为量效关系(即随药物量增或减，活性也随之增或减的一种趋向)。而且量效关系仅存在于一定的剂量范围内。以上的资料均足以证明由提取物中以皂苷A、B、C、D组成的皂苷部份是本发明总皂苷提取物的有效部份。
Claims (12)
1、一种治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于：它是以胡芦巴总皂苷为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂，其中，所述的胡芦巴总皂苷为胡芦巴Trigonella foenum-graecum L.提取物，胡芦巴总皂苷的重量百分含量按胡芦巴皂苷B计算大于65％。
2、根据权利要求1所述的治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于：所述的胡芦巴提取物中含有胡芦巴皂苷A、B、C、D，其结构式为：
皂苷C
3、根据权利要求2所述的治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于：所述的胡芦巴皂苷A、B、C、D的重量配比为：
胡芦巴皂苷A 0.5～3份、胡芦巴皂苷B 1～5份、胡芦巴皂苷C 1～4份、胡芦巴皂苷D 1～5份。
4、根据权利要求3所述的治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于：所述的胡芦巴皂苷A、B、C、D的重量配比为：
胡芦巴皂苷A 1份、胡芦巴皂苷B 2份、胡芦巴皂苷C 1.5份、胡芦巴皂苷D 2份。
5、根据权利要求1～4任一项所述的治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于：所述的胡芦巴总皂苷是由下述方法提取制备：
a、取胡芦巴原生药材，粉碎，加入60％～90％乙醇回流提取，浓缩，得浸膏；
b、将a步骤的浸膏溶解入水中，过滤，滤液通过大孔吸附树脂柱；
c、用水洗涤脂柱，流出液弃去，至流出液呈近无色澄明溶液时，放干水，用90％～95％乙醇洗脱，洗脱液过滤，浓缩即得本发明胡芦巴总皂苷。
6、根据权利要求5所述的治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于：所述的胡芦巴总皂苷的提取方法中b步骤所述的大孔吸附树脂柱的树脂量与原生药材的重量配比为：1∶1。
7、根据权利要求5所述的治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于：步骤a所述乙醇为80％乙醇；c步骤所述乙醇为95％乙醇。
8、根据权利要求1所述的治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于：所述的制剂是：胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、口服液。
9、一种制备权利要求1所述的治疗糖尿病的药物组合物的方法，包括如下步骤：
a、取胡芦巴原生药材，粉碎，加入60％～90％乙醇回流提取，浓缩，得浸膏；
b、将a步骤的浸膏溶解入水中，过滤，滤液通过大孔吸附树脂柱；
c、用水洗涤脂柱，流出液弃去，至流出液呈近无色澄明溶液时，放干水，用90％～95％乙醇洗脱，洗脱液过滤，浓缩即得本发明胡芦巴总皂苷。
10、根据权利要求9所述的治疗糖尿病的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述的胡芦巴总皂苷的提取方法中b步骤所述的大孔吸附树脂柱的树脂量与原生药材的重量配比为：1∶1。
11、根据权利要求9所述的治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于：步骤a所述乙醇为80％乙醇；c步骤所述乙醇为95％乙醇。
12、权利要求1所述的药物组合物在制备治疗II型糖尿病的药物中的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200510020636 CN1839863A (zh) | 2005-04-01 | 2005-04-01 | 一种治疗糖尿病的药物组合物及其制备方法和用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200510020636 CN1839863A (zh) | 2005-04-01 | 2005-04-01 | 一种治疗糖尿病的药物组合物及其制备方法和用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1839863A true CN1839863A (zh) | 2006-10-04 |
Family
ID=37029167
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200510020636 Pending CN1839863A (zh) | 2005-04-01 | 2005-04-01 | 一种治疗糖尿病的药物组合物及其制备方法和用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1839863A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101953878A (zh) * | 2010-09-17 | 2011-01-26 | 四川逢春制药有限公司 | 泰福乐胶囊的检测方法 |
| CN101496828B (zh) * | 2009-02-27 | 2011-07-27 | 湖南今汉生物医药技术有限公司 | 葫芦巴总皂苷提取物的用途 |
| CN102532248A (zh) * | 2011-12-19 | 2012-07-04 | 四川省中医药科学院 | 制备胡芦巴皂苷b的方法 |
-
2005
- 2005-04-01 CN CN 200510020636 patent/CN1839863A/zh active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101496828B (zh) * | 2009-02-27 | 2011-07-27 | 湖南今汉生物医药技术有限公司 | 葫芦巴总皂苷提取物的用途 |
| CN101953878A (zh) * | 2010-09-17 | 2011-01-26 | 四川逢春制药有限公司 | 泰福乐胶囊的检测方法 |
| CN102532248A (zh) * | 2011-12-19 | 2012-07-04 | 四川省中医药科学院 | 制备胡芦巴皂苷b的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1228344C (zh) | 薯蓣皂苷的制备方法、药物制剂及其医药新用途 | |
| WO2006098604A1 (en) | Pharmaceutical composition for preventing and treating diabetes or glucose control abnormality comprising ginsenosides | |
| CN1723955A (zh) | 射干提取物及其制备方法和用途 | |
| CN1144803C (zh) | 板栗花黄酮化合物及其提取方法 | |
| CN1839863A (zh) | 一种治疗糖尿病的药物组合物及其制备方法和用途 | |
| CN1803787A (zh) | 贯叶金丝桃总黄酮提取物、其制备及应用 | |
| CN1262273C (zh) | 月季花提取物及其制备方法和用途 | |
| CN1313109C (zh) | 三子汤新制剂及其制备 | |
| CN1186051C (zh) | 一种化痰止咳的药物及其生产方法 | |
| CN100346820C (zh) | 金地蓝解毒药物组合物、制剂及制备方法 | |
| CN1857385A (zh) | 一种治疗颈椎病的药物组合物及其制备方法 | |
| CN1274309C (zh) | 甘草酸及其盐的肠溶制剂和制备方法 | |
| CN101045077A (zh) | 一种胡芦巴口服固体制剂的制备方法及其应用 | |
| CN1582952A (zh) | 积雪草总苷在制备防治心、脑血管疾病药物中的用途 | |
| CN1258372C (zh) | 治疗肠易激综合症的中药组合物及其制备方法 | |
| CN1605357A (zh) | 胡芦巴提取物及其制备方法和应用 | |
| CN1301108C (zh) | 美他多辛分散片及其制备方法 | |
| CN100337623C (zh) | 月季花总黄酮及其制备方法和用途 | |
| CN100339090C (zh) | 新的石榴叶提取物及其医药用途 | |
| CN1511553A (zh) | 一种小儿退热药物 | |
| CN1634463A (zh) | 治疗糖尿病的药物及生产方法 | |
| CN1775277A (zh) | 一种防治代谢综合症的天然药物组合 | |
| CN101036647A (zh) | 具有抗炎和抗感染作用的药物组合物 | |
| CN1490045A (zh) | 剑麻提取物及其制备方法和用途 | |
| CN1548142A (zh) | 一种改善糖耐量和治疗糖尿病及肥胖症的药物及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20061004 |