CN100337623C - 月季花总黄酮及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及月季花提取物及其提取方法，以及在制备治疗糖尿病药物中的应用。通过用不同的提取方法得到的月季花提取物，进行动物药效实验后，发现具有显著的降糖作用，因此可以应用于制备治疗糖尿病的药物中。

Description

月季花总黄酮及其制备方法和用途

                         技术领域

本发明涉及月季花提取物及其提取方法，以及在制备治疗糖尿病药物中的应用。

                         背景技术

糖尿病是一种常见的代谢性疾病，是由胰岛素绝对或相对分泌不足所造成的糖代谢失调，进而导致脂肪、蛋白质代谢紊乱，因此随着世界人口的老龄化、生活水平提高带来的饮食结构不合理以及遗传基因等因素，糖尿病已经成为一种常见病、多发病，由于它涉及全身系统，以至发生许多致命性的并发症，严重威胁着人类的生命健康。

一般可将糖尿病分为以下几种类型：A、胰岛素依赖型(简称I型糖尿病)；B、非胰岛素依赖型(简称II型糖尿病)；C、营养不良型糖尿病；D、其他类型的糖尿病，其中II型糖尿病占糖尿病患者总人数的85％以上，且发病率急剧增加。

目前，国内外常用的口服降糖药种类繁多，主要是磺酰脲类、双胍类药物、生物制剂α-葡萄糖苷酶抑制剂以及一些中西药复方制剂，尽管上述药物对各类糖尿病有一定的治疗作用，但他们的共同特点是用药周期长，对症状的改善缺乏明显效果，停药后均有不同程度的“反跳”现象。

月季花性味甘、温，具有活血调经、散毒消肿作用，主要用于治疗月经不调等妇科疾病，在中国专利98100371.0和99103552.6中，将月季花与其他药物配伍，用于治疗糖尿病，但遗憾的是这种中药组方复杂，各组分药效不明确，质量不易控制，不利于制备成药物制剂。

在徐文昭发表于南京中医药大学学报(自然科学版)2000年7月第16卷第4期上的“月季花花瓣的黄酮类成分的研究”一文中，作者通过对月季花进行乙醇提取、Sephadex LH20柱层析分离，经波谱解析确定结构并用HPLC测定总黄酮含量，得到四个化合物经过鉴定分别为槲皮甙、山萘素-3-O-鼠李糖甙、槲皮素和山萘黄素，各黄酮成分含量为：73.61％、22.5％、0.45％、1.56％，尽管本文对月季花花瓣的黄酮成分进行了分析，但对其药用价值并未提出任何建议，也未做深入的研究。

本申请人于2002年12月28日申请了“月季花提取物及其制备方法和用途”，明确了月季花提取物的药理作用，但是对其提取物的定性和更深入的药效研究还有待于进行。

                         发明内容

本发明所要解决的问题是通过对月季花提取物的制备，对提取物进行定性研究，在进行大量的药效实验基础上，寻找该提取物的临床用途，并将这种提取物用于药物制剂，得到适合于临床应用的剂型。

本发明通过以下方法得到月季花提取物：

水提法：取月季花药材，稍加捣碎，加水提取，合并提取液，浓缩至每1ml含1g生药的浸膏，即得月季花的水提物，提取温度从0～100℃。

水提过柱法：取上述水提法得到的水提物，过分离柱，用水和醇或水和酸水依次洗脱，得月季花总酚酸。

水提物通过大孔吸附树脂时，使用水、醇依次洗脱，收集乙醇洗脱物；水提物通过离子交换树脂柱时，用水、稀酸依次洗脱，收集稀酸洗脱液；水提物通过聚酰胺柱，用水、甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液。

水提醇沉法：月季花用石油醚脱脂，药渣挥干石油醚，用上述水提法提取，过滤，滤液浓缩成稠膏状，用乙醇进行沉淀，静置过夜，离心过滤，取沉淀，干燥即得月季花的总多糖。

醇提法：取月季花药材，捣碎，用30％～98％的低级醇进行提取，温度从0～90℃，提取液过滤，滤液合并，浓缩至浸膏，即得月季花的醇提物。

所述的低级醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇中的一种，或者两种以上的混合醇。

醇提萃取法：取上述醇提法得到的醇提物，浸膏用水混悬后，用乙酸乙酯萃取，合并萃取液，浓缩至稠膏，即得月季花总黄酮。

月季花提取物可作为活性成分与可接受的药物载体制成口服或注射单方以及复方制剂的应用。

用上述方法得到的月季花提取物分别是月季花水提物、月季花总酚酸、月季花总多糖、月季花醇提物或月季花总黄酮，通过药效实验显示具有显著的降糖作用。

本发明通过对月季花提取物在降糖方面的研究，为临床提供了一种安全有效的降糖药物，本产品来源于天然药物，与现有的合成药相比，具有安全性高的优点，与现有的中成药相比，具有用药量小，降糖作用明确，可制成口服或注射制剂使用等优点。

                       具体实施方式

本发明用上述方法制备月季花提取物的优选方式是：

优选水提法：取月季花药材，稍加捣碎，加水提取，提取温度为10～100℃合并提取液，浓缩至每1ml含1g生药的浸膏，即得月季花的水提物。

优选水提过柱法：取按优选水提法制得的月季花水提物，通过717型强碱型离子交换树脂后，依次用水、稀盐酸洗脱，收集稀酸洗脱液，浓缩成稠膏，干燥即得。取上述干粉少许用水溶解，采用化学试剂显色法进行定性，结果如下：

检验试剂	显色结果
		2％FeCL31％FeCL3/1％K3Fe(CN)60.05％溴酚蓝0.1％溴甲酚绿	蓝紫色深蓝色黄色黄色

因此将此提取物定义为总酚酸。

优选水提醇沉法：月季花用石油醚脱脂，药渣挥干石油醚，加水提取，过滤，滤液浓缩成稠膏状，加95％乙醇使含醇量达80％，静置过夜，收集沉淀，干燥，即得月季花总多糖，取上述干粉少许用水溶解，与下述化学检验试剂有如下反应：

检验试剂	被测物显色结果
		α-萘酚	紫色环
优选醇提法：取月季花药材，稍加捣碎，直接用60～95％浓度的乙醇进行提取，温度控制在10～90℃，提取液过滤，滤液合并，浓缩成1ml含1g生药的浸膏，即得月季花的醇提物。优选醇提萃取法：取月季花95％乙醇醇提物，用水混悬后，用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯萃取液，浓缩至稠膏状，干燥，取干粉少许用甲醇溶解，采用化学试剂显色法进行定性，结果如下：
		检验试剂	显色结果
盐酸—镁粉反应	泡沫红色

1％三氯化铝/日光1％三氯化铝/UVNH3/日光NH3/UV1％Mg(OAC)2/UV

黄色黄绿色深黄色黄绿色黄绿色

因此将此种方法制备的月季花提取物萃取液定义为总黄酮。

为详细说明本发明中月季花提取物的制备及其降糖作用，分别通过以下实施例说明。

实施例一：月季花水提物(I)的制备

取月季花药材1kg，稍加捣碎，加入10倍量水回流提取，共提取3次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液浓缩至每1ml含1g生药的浸膏，共得浸膏约330g。

实施例二：月季花乙醇提取物(II)的制备

取月季花药材1kg，稍加捣碎，加入8倍量45％乙醇进行室温浸提，共浸提3次，每次8小时，合并浸提液，过滤，滤液浓缩至每1ml含1g生药的浸膏，共得浸膏约150g。

实施例三：月季花乙醇提取物(II^*)的制备

取月季花药材1kg，稍加捣碎，加入8倍量60％乙醇进行回流提取，共提取3次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液浓缩至每1ml含1g生药的浸膏，共得浸膏约200g。

实施例四：月季花提取物(I)、(II)、(II^*)对实验性高血糖模型小鼠血糖的影响

1实验目的

观察月季花提取物对实验性高血糖模型小鼠血糖的影响，为筛选有效药物提供依据。

2实验用试剂：

四氧嘧啶(Alloxan)：SIGMA公司，批号：2244-11-3：血糖测定药盒，北京中生生物工程高技术公司，批号：000201

3实验动物：

昆明种小鼠：23-28g，雌雄兼用，河北省实验动物中心提供，合格证号：冀动字04035

4实验方法：

取体重23-28g的昆明种小鼠，雌雄兼用，禁食不禁水24小时后，腹腔注射四氧嘧啶200mg/kg，第二天重复注射一次，造成实验性高血糖模型。末次注射四氧嘧啶72小时后，小鼠眼眶取血测血糖(取血前小鼠禁食不禁水14小时)。选取血糖≥10.0mmol/L的小鼠，分为模型组和月季花提取物(I)、(II)、(II^*)高、低剂量组，每组14-18只，按0.2ml/10g体重灌胃：4g/kg、8g/kg，模型组给等量蒸馏水。每日一次，连续14天。第15天小鼠眼眶取血测血糖(取血前小鼠禁食不禁水14小时)。计算小鼠血糖均值，用t检验进行统计学分析，比较给药前后及组间差异。

5实验结果：

月季花提取物(I)、(II)、(II^*)在4g/kg、8g/kg剂量下，与模型组比较，可明显降低实验性高血糖模型小鼠的血糖值；与给药前比较可明显降低实验性高血糖模型小鼠的血糖值。

表1：月季花提取物(I)、(II)、(II^*)对实验性高血糖模型小鼠

                       血糖的影响(X＝SD)

组别	N	剂量(g/kg)	血糖(mmol/L)
					给药前	给药后
			模型组	10				25.7±5.34	31.42±5.64

(I)	1010	4.008.00	23.10±7.5726.11±9.75	16.18±6.36△△*16.32±9.58△△*
					(II)	1010	4.008.00	23.65±10.7522.49±6.80	17.88±5.38△△10.11±7.13△△***
(II*)	1010	4.008.00	21.23±0.3924.43±10.64	18.06±4.66△14.78±3.22△△*

与模型组比较△：P＜0.01，△△：P＜0.001

与给药前比较^*：P＜0.05，^**：P＜0.01，^***：P＜0.001

6实验结论：月季花水提物(I)、醇提物(II、II^*)可明显降低实验性高血糖模型小鼠的血糖值。

实施例五：月季花水提物过阴离子交换树脂柱洗脱物的制备(III)

取月季花药材1kg，稍加捣碎，加入10倍量水室温浸提，共提取3次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液浓缩至每1ml含1g生药的浸膏，共得浸膏约330g。将浸膏上阴离子交换树脂柱，分别用水、稀酸水洗脱，得酸水洗脱部分约100g。

实施例六：月季花提取物(III)对KKII型糖尿病小鼠血糖的影响

1实验目的

观察月季花提取物(III)口服给药后对KKII型糖尿病小鼠血糖的影响。

2实验材料：

2.1受试物及药品

月季花提取物(III)为棕色浸膏，用少量吐温-80研磨后，加蒸馏水配制成0.4g/ml，供KK小鼠灌胃用。

马来酸罗格列酮片，史克必成(天津)有限公司生产，每片含罗格列酮4mg，用前将片剂研碎，用蒸馏水配制成0.025mg/ml的混悬液供KK小鼠灌胃用。

2.2动物

KK/Upj-A^y/JII型糖尿病小鼠，中国医学科学院实验动物所提供，二级动物，动物合格证号：SGKKII-00-0006。动物饲养在有空调调控的观察室，室温为24±2℃，饲以高脂肪的诱发饲料(中国医学科学院实验动物所饲料营养部门提供)，自由饮水(含0.16％盐酸的自来水，PH9.3)。

2.3仪器

GT-1640京都血糖仪，日本ARKRAY，Inc.产品。

3试验方法

KKII型糖尿病小鼠32只，体重41.4±7.4g，雌雄兼用，动物禁食不禁水2h后，尾静脉取血约10ml，用GT-1640京都血糖仪测定其血糖值，选取血糖值≥8.0nmol/L的小鼠，按血糖值和体重分层随机分成4组，每组8只，溶剂对照组给予含1％吐温-80的蒸馏水，月季花提取物(III)给予相应的药液，剂量为8g生药/kg，阳性药物组给予罗格列酮，剂量为0.5mg/kg，给药体积均为0.2ml/10g，每天1次，连续15天，分别于第5、10、15天给药后1h测定血糖值(禁食不禁水2小时)，计算各组小鼠血糖值的均值，采用配对t检验进行统计学处理，比较给药前、后均数的差异性。

4试验结果

KKII型糖尿病小鼠口服给予月季花提取物(III)、罗格列酮后，其血糖均有显著的降低。

表2  月季花提取物(III)对糖尿病小鼠的血糖影响

组别	剂量(g生药/kg/d)	血糖值(mmol/L)
						给药前	药后第5天	药后第10天	药后第15天
		溶剂对照		11.7±2.9	11.6±3.1-0.09±2.43					11.6±3.1-0.10±2.20	11.9±2.80.24±1.52

(III)	8	11.8±3.3	8.8±2.3**-3.00±2.31	8.2±2.5***-3.59±1.86	8.5±1.8***-3.28±1.71
						罗格列酮	0.5mg/kg/d	11.9±2.5	8.5±3.0**-3.44±2.41	8.1±2.1**-3.85±2.20	7.1±2.0***-4.80±1.91

与给药前比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

5结论

上述结果表明，月季花提取物(III)有显著的降糖作用。

实施例七：醇提法月季花总黄酮C的制备

月季花药材1kg，稍加捣碎，用10倍量95％乙醇于室温下浸渍，共浸提三次，每次24小时，过滤，滤液合并，回收乙醇至无醇味得浸膏，浸膏用水混悬后乙酸乙酯进行多次萃取，直到萃取液色淡或几尽无色为止。合并乙酸乙酯萃取液，浓缩至稠膏状，干燥。共得干粉约70g。

取上述干粉少许用甲醇溶解，用化学试剂显色法对此干粉进行定性，结果如下：

显色试剂/条件	显色结果
		盐酸—镁粉反应1％三氯化铝/日光1％三氯化铝/UVNH3/日光NH3/UV1％Mg(OAC)2/UV	泡沫红色黄色黄绿色深黄色黄绿色黄绿色

上述反应为黄酮类物质定性反应，故所得干粉为月季花总黄酮。

实施例八：水提过柱法月季花总酚酸D的制备

取月季花药材1kg，加8倍量水于室温下浸提三次，每次24小时，过滤，滤液通过717型碱离子交换树脂柱，依次用水、0.2N盐酸洗脱，收集酸水洗脱液浓缩至稠膏状，干燥得干粉约40g.

取上述干粉少许用水溶解，采用化学试剂显色法对此干粉进行定性，结果如下：

显色试剂/条件	显色结果
		2％FeCL31％FeCL3/1％K3Fe(CN)60.05％溴酚蓝0.1％溴甲酚绿	蓝紫色深蓝色黄色黄色

上述反应为酚羟基或羧基物质定性反应，故所得干粉为月季花总酚酸。

实施例九：水提醇沉法月季花总多糖E的制备

月季花药材1kg用8倍量石油醚(60-90℃)回流提取三次，每次1小时，药渣挥干石油醚.加10倍量水回流提取两次，每次1小时，过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10(50℃)的清膏，加95％乙醇使含醇量达80％，静置过夜，离心过滤，收集沉淀，干燥得干粉约120g。

取上述干粉少许用水溶解，采用化学试剂显色法对此干粉进行定性，结果如下：

检验试剂	显色结果
		α-萘酚	紫色环

水提醇沉法是多数植物类多糖的提取方法，上述反应为多糖类物质定性反应，故所得干粉为月季花总多糖。

实施例十：月季花总黄酮C、总酚酸D、总多糖E药理实验

1.实验材料与方法：

1.1主要的试剂和设备：

链脲佐菌素(STZ)：SIGMA公司提供，批号：112K1006；

柠檬酸钠：由沈阳化学试剂厂提供，批号：2000040；

胰岛素试剂盒：由美国Market公司提供，批号：50920601。

血糖试剂盒：保定长城临床试剂有限公司

Nikon ALPHAPHOT-2YS2s型生物显微镜

1.2实验用药品：

月季花各提取部分：中奇制药技术(石家庄)有限公司提供。

糖适平：德国格林格翰、北京万辉制药公司提供。

1.3实验动物：

体重为170+15g的Wistar大鼠236只，雌雄各半，由中国医科大学实验动物中心提供。

1.4实验方法：

取体重为170±15g的Wistar大鼠236只，其中10只作为正常试验组。其余大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)，剂量为65mg/kg(链脲佐菌素临用前用无菌柠檬酸钠缓冲液配制成1％浓度的溶液，PH＝4.3)。腹腔注射链脲佐菌素(STZ)后前二天大鼠应给予10％浓度的糖水，以防止出现大鼠低血糖性死亡。一周后测定大鼠血糖，取血糖值大于16.7mmol/L者作为糖尿病模型动物，记录血糖值。

采用区组法随机分成11组，每组7只(其中模型组8只)，分别为模型组、阳性药组(糖适平)、C、D、E组分高、中、低剂量组(高剂量组为20g生药/kg，中剂量组10g生药/kg，低剂量组5g生药/kg)。阳性药和实验用药分别用0.1％的CMC钠溶液配制成混悬液，灌胃给药。模型组给予CMC钠溶液。正常组给予等量的自来水。分别于给药后7天、14天眼眶取血，测量大鼠血糖值和胰岛素水平。实验结束后根据所测血糖、胰岛素值，取疗效最为明显的试验组大鼠的胰腺组织，用10％福尔马林溶液固定，常规HE染色，观察胰岛病理改变情况。

2.实验结果

2.1.各药物对糖尿病大鼠血糖的影响  见表I

中药ND-YJH的C组中、低剂量组与模型组相比有显著性差异(P＜0.05)，D组分的高低剂量组与模型组相比有非常显著性差异(P＜0.01)，中剂量组与与模型组相比有显著性差异(P＜0.05)，E组分中、低剂量组与模型组相比有显著性差异(P＜0.05)，表明月季花各提取物有明显的降低链脲佐菌素(STZ)所造成的高血糖大鼠的血糖水平的作用。

                        表I：各药物对糖尿病大鼠血糖的影响

	剂量	样本数(n)	给药前	给药后7天		给药后14天
								X±SD(2h)	X±SD(5h)	X±SD(2h)	X±SD(5h)
				阴性组	蒸馏水	10
模型组	0.1％CMC液	7	27.32±6.22					23.73±4.74	23.57±6.00	26.41±4.80	27.17±6.08
				阳性组		8	25.61±6.17					17.56±8.44	15.24±8.31*	18.17±10.37*	16.67±11.17*
C	H(20g/kg)	7	25.66±6.03					18.64±7.82	13.99±7.09**	18.84±9.61	17.79±9.70*
				M(10g/kg)	7	24.63±7.09	15.03±8.80*					13.10±8.46*	23.89±8.93	17.24±9.85*
	L(5g/kg)	7	26.64±7.45					14.83±11.07*	13.81±9.23*	15.26±10.57*	14.10±10.44**
				D	H(20g/kg)	7	27.51±6.65					18.39±9.23	10.09±7.70**	9.81±9.68**	10.70+10.33**
M(10g/kg)	7	24.11±6.36	14.456+11.72*					12.43±9.64*	16.47±12.93*	17.13±8.56*
					L(5g/kg)	7	24.94±7.93				14.80±6.81**	12.99±6.00**	19.45±6.11*	18.77±6.98*
E	H(20g/kg)	7	26.37±5.42					25.56±5.91	21.29±7.50	23.66±9.45					25.64±9.68
				M(10g/kg)	7	24.88±5.38	17.089±7.00*				15.79±6.61*	18.66±9.01*	19.63±9.62
	L(5g/kg)	7	24.54±8.01					14.57±6.94*	14.63±8.21*	20.74±8.08				18.57±9.30*

与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

2.2.各药物对糖尿病大鼠胰岛素水平的影响，见表II

中药ND-YJH的C组分中、低剂量组与模型组相比有非常显著性差异(P＜0.01)，其高剂量组与模型组有显著性差异(P＜0.05)，D组分的高、低剂量组与模型组相比有非常显著性差异(P＜0.01)，其中剂量组与模型组有显著性差异(P＜0.05)。说明中药ND-YJH具有促糖尿病大鼠分泌胰岛素的作用。同时E组分没有促胰岛素分泌的作用，但能够降低大鼠血糖，说明其降低糖尿病大鼠血糖是通过其他途径来实现的。

表II：各药物对糖尿病大鼠胰岛素水平的影响

	剂量	样本数(n)	给药后7天	给药后14天
					X±SD(2h)	X±SD(2h)
			阴性组	蒸馏水			9	0.4243±0.0673**	0.4102±0.0512**
模型组	0.1％CMC液	6			0.5438+0.0759	0.5485±0.0739
			阳性组				6	0.4253+0.0656*	0.4248±0.0655**
C	H(20g/kg)	6			0.4428+0.0550*	0.4548+0.0522
			M(10g/kg)	7			0.4451+0.0262*	0.4508+0.0269*
	L(5g/kg)	6			0.4268±0.0317**	0.4323+0.0318**
			D	H(20g/kg)			7	0.4025±0.0219**	0.4083±0.0218**
M(10g/kg)	7	0.4730+0.0632			0.4597+0.0397*
				L(5g/kg)		6	0.4275±0.0309**	0.4377±0.0310**
E	H(20g/kg)	7			0.4946+0.0642				0.5280+0.1481
			M(10g/kg)	6		0.5098+0.0982	0.5028+0.0908
	L(5g/kg)	6			0.5173+0.0774			0.6065+0.0903

与模型组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

2.3.各实验药物对糖尿病大鼠胰腺病理改变的影响。

由血糖和胰岛素测定结果可见实验药的C、D提取部位的疗效明确，所以对C、D两组、阳性药物组和正常组进行病理检测。由病理切片显示，正常组大鼠胰腺内的胰岛数量众多，胰岛内胰岛细胞丰富，排列规则。模型组大鼠胰腺内胰岛数量减少，胰岛细胞数目也明显减少，这是由于链脲佐菌素(STZ0能够破坏大鼠胰腺内胰岛细胞。阳性药物组大鼠胰腺内的胰岛数目与正常组大鼠相比也明显减少，胰岛内胰岛细胞数量也显著减少，排列不规则。实验药物组的C、D提取部位组的胰腺中的胰岛数目和胰岛细胞情况与正常组相比也明显减少，与阳性药物组相比没有明显的差别。

3.总结

中药ND-YJH的C、D、E组分具有明显的降血糖作用，并且具有促胰岛素分泌的作用。该中药对链脲佐菌素(STZ)造成的大鼠胰岛和胰岛细胞的损伤未见有明显的改善作用。

实施例十一：月季花水提物的制备

取月季花药材1kg，稍加捣碎，加入10倍量水60℃温浸，共浸提3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液浓缩至每1ml含1g生药的浸膏，共得浸膏约295g。

实施例十二：月季花水提物的制备

取月季花药材1kg，稍加捣碎，加入10倍量水于室温下进行冷浸，共浸提3次，每次12小时，合并提取液，过滤，滤液浓缩至每1ml含1g生药的浸膏，共得浸膏约254g。

实施例十三：醇提法制备月季花总黄酮

月季花药材1kg，稍加捣碎，用10倍量95％乙醇于60℃温浸，共浸提三次，每次8小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，得浸膏，浸膏用水混悬后用乙酸乙酯进行多次萃取，直到萃取液无色。合并乙酸乙酯萃取液，浓缩至稠膏状，干燥。共得干粉85g。

取上述干粉少许用甲醇溶解，用化学试剂显色法对此干粉进行定性，显色结果同实施例七。

实施例十四：醇提法制备月季花总黄酮

月季花药材1kg，稍加捣碎，用10倍量95％乙醇回流提取，共提取三次，每次2小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，得浸膏，浸膏用水混悬后用乙酸乙酯进行多次萃取，直到萃取液无色。合并乙酸乙酯萃取液，浓缩至稠膏状，干燥。共得干粉102g。

取上述干粉少许用甲醇溶解，用化学试剂显色法对此干粉进行定性，显色结果同实施例七。

实施例十五：水提过柱法制备月季花总酚酸

取月季花药材1kg，用8倍量水于60℃温浸，共浸提三次，每次8小时，过滤，合并滤液通过717型强碱离子交换树脂柱，分别用水、0.2N盐酸洗脱，收集盐酸洗脱液，浓缩成稠膏，干燥。共得干粉51g。

取上述干粉少许用水溶解，用化学试剂显色法对此干粉进行定性，显色结果同实施例八。

实施例十六：水提过柱法制备月季花总酚酸

取月季花药材1kg，用8倍量水回流提取，共提取三次，每次1小时，过滤，合并滤液通过717型强碱离子交换树脂柱，分别用水、0.2N盐酸洗脱，收集盐酸洗脱液，浓缩成稠膏，干燥。共得干粉57g。

取上述干粉少许用水溶解，用化学试剂显色法对此干粉进行定性，显色结果同实施例八。

实施例十七：水提过柱法制备月季花总酚酸

取月季花药材1kg，用8倍量水于室温下浸提三次，每次24小时，过滤，合并滤液通过大孔吸附树脂S-8，分别用水、50％乙醇和95％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液，浓缩成稠膏状，干燥。共得干粉30g。

取上述干粉少许用水溶解，用化学试剂显色法对此干粉进行定性，显色结果同实施例八。

实施例十八：水提过柱法制备月季花总酚酸

取月季花药材1kg，用8倍量水于室温下浸提三次，每次24小时，过滤，合并滤液通过聚酰胺柱，分别用水、30％甲醇、50％甲醇和甲醇洗脱，收集30％甲醇洗脱液，浓缩成稠膏状，干燥。共得干粉27g。

取上述干粉少许用水溶解，用化学试剂显色法对此干粉进行定性，显色结果同实施例八。

实施例十九：水提醇沉法制备月季花总多糖

月季花药材1kg用8倍量石油醚(60-90℃)回流提取三次，每次1小时，药渣挥干石油醚，加10倍量水于室温下浸泡，共浸提三次，每次24小时，过滤，滤液浓缩成相对密度为1.10(50℃)的清膏，加95％乙醇使含醇量达80％，静置过夜，收集沉淀，干燥得干粉105g。

取上述干粉少许用水溶解，用化学试剂显色法对此干粉进行定性，显色结果同实施例九。

实施例二十：水提醇沉法制备月季花总多糖

月季花药材1kg用8倍量石油醚(60-90℃)回流提取三次，每次1小时，药渣挥干石油醚，加10倍量水于60℃进行温浸，共浸提三次，每次8小时，过滤，滤液浓缩成相对密度为1.10(50℃)的清膏，加95％乙醇使含醇量达80％，静置过夜，收集沉淀，干燥得干粉117g。

取上述干粉少许用水溶解，用化学试剂显色法对此干粉进行定性，显色结果同实施例九。

Claims (3)

1、一种月季花总黄酮在制备降糖药物中的应用，所述月季花总黄酮的制备方法如下：

(1)取月季花药材，捣碎，用30～98％的低级醇提取，温度0～90℃，提取液过滤，滤液合并，浓缩至浸膏，得月季花醇提物，所述的低级醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇中的一种，或者两种以上的混合醇；

(2)取上述醇提法得到的醇提物，浸膏用水混悬后，用乙酸乙酯萃取，合并萃取液，浓缩至稠膏，即得月季花总黄酮。

2、如权利要求1所述的应用，其中所述的降糖药物是以月季花总黄酮为活性成分与可接受的药物载体制成的口服或注射单方制剂。

3、一种月季花总黄酮在制备降糖保健品中的应用，所述月季花总黄酮的制备方法如下：

(1)取月季花药材，捣碎，用30～98％的低级醇提取，温度0～90℃，提取液过滤，滤液合并，浓缩至浸膏，得月季花醇提物，所述的低级醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇中的一种，或者两种以上的混合醇；

(2)取上述醇提法得到的醇提物，浸膏用水混悬后，用乙酸乙酯萃取，合并萃取液，浓缩至稠膏，即得月季花总黄酮。