CN1579378A - 紫草素在制备治疗肿瘤疾病药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供紫草素的一种新用途，紫草素，分子量：288.2994，化学命名为：(+)－5，8－dihydroxy－2－(1－hydroxy－4－methyl－3－pentenyl)－1，4－naphthoquinone，分子式为C16H16O5，本发明提供的紫草素与药物赋形剂或载体组合，用于制备治疗肿瘤疾病药物中的应用。紫草素对多药耐药肿瘤细胞的作用不受p－糖蛋白的影响，而且对多药耐药肿瘤细胞的杀伤作用明显优于目前常用的有代表性的抗肿瘤药物，紫草素杀死Pgp高表达的多药耐药肿瘤细胞的机理是诱导细胞凋亡，与其亲本药敏细胞一致。紫草素具有较低的毒性，因此，紫草素具有很好的临床肿瘤化疗、尤其是抗临床肿瘤多药耐药的应用前景。
Description
技术领域
本发明属中药有效成分的用途，主要涉及紫草素在制备抗多药耐药肿瘤作用药物的新用途。
背景技术
紫草素是从紫草科多年生草本植物紫草的根中提取的主要成分之一，紫草在我国大部分省区均有分布，它有消炎、收敛和解热作用，药用其根，已应用于临床，疗效确切。紫草最初记载于《神农本草经》，为防治麻疹的中药。而紫草素则是抗炎症的主要成分。紫草富含紫草素及其衍生物，其含量占3～6.5％，颜色深红，化学结构为萘醌类，在生物体内的氧化还原反应中能传递介子。具有止血、抗炎、抗菌、抗病毒及抗癌的药理活性。紫草的多种成分及其结构决定了其功能的广谱性和用途的多样化，可成为多种行业天然系列产品的中间体原料。
紫草素，英文名为shikonin，CAS number：517-89-5，分子量：288.2994，化学命名为：(+)-5，8-dihydroxy-2-(1-hydroxy-4-methyl-3-pentenyl)-1，4-naphthoquinone，分子式为C16H16O5，结构式如下：
它具有旋光性，和异紫草素Alkannin是一对对映体。紫草素是紫红色带有金属光泽的针状晶体，微溶于水，易溶于苯、乙醇、乙醚等有机溶剂，由于能够吸收500～560nm波长的光而呈现红色，且吸收光谱会随pH而发生迁移。它具有酸碱稳定性，并且溶液颜色随着pH而变化，酸性条件下呈红色，中性时紫色，碱性时呈蓝色，由于颜色稳定，并且本身LD50，对雄性小鼠为3.0±0.1g/kg，对雌性小鼠为3.1±0.1g/kg，实际为无毒性组分，目前广泛用于食品添加剂的色素。而且在如面乳、唇膏化妆品中，也用作天然的色素成分，这在日本的化妆品中多见[1，2]。而早在1984年日本就已经开始利用细胞工程培养的方式来工业化规模生产紫草素，作为化妆品的原料[3]。
对于紫草素的医药用途，还没有一个系统研究，对紫草素的药理研究主要集中在抗炎作用，加速创伤愈合上[4～8]，对于抗癌活性的研究虽然很早就发现有抗肿瘤作用，但药理的研究较少，在1977年有日本学者[9]对紫草素的抗肿瘤活性的报道，但机理还不明确。而在1991年有中国学者[10]用紫草素复合方剂用于临床实验治疗晚期癌症患者证实了紫草素的疗效。至1999年国外才有紫草素的诱导HL-60肿瘤细胞凋亡的报道[11，12]，并且发现凋亡细胞中有起关键作用的半胱天冬酶Caspase 3的激活，而国内至2001年才有紫草素诱导大肠癌细胞凋亡的报道[13]。而对于紫草素抗多药耐药肿瘤作用则至今未见有任何的报道。
多药耐药是指肿瘤细胞对不同结构和作用机理的药物产生交叉耐受性，肿瘤细胞对多种化疗药物产生交叉耐药是成为化疗成功的障碍。据不完全统计，90％以上的患者死因与多药耐药(MDR)有关。其中最典型的的机制是ATP能量依赖的膜转运蛋白Pgp(P-glycoprotein)的高表达。Pgp的高表达导致肿瘤细胞对多种结构和功能不同的抗肿瘤化疗药物如紫三醇、蒽环类、长春碱类等产生抗药性，其机理是Pgp是细胞膜上的药物泵，将进入细胞内的药物泵出细胞外，细胞因此获得耐药性。
Pgp是1976年由Ling等从耐秋水仙素的中国仓鼠卵巢细胞中分离得到的一种分子量约为170kDa糖基化膜蛋白，由于它能改变药物的通透性，所以命名为P-glycoprotein(P是指Permeability)[14]，简称Pgp。迄今为止肿瘤细胞的Pgp过量表达被认为是最典型的耐药机理。
Pgp是由1280个氨基残基组成的跨膜蛋白，它是最典型的ABC转运蛋白，具有其一般共同的结构。通过电子显微镜和单一粒子图像分析技术得到了25埃分辨率的Pgp结构，数据表明Pgp是一个近乎直径为10nm的的圆柱体，Pgp是由四个明显区域组成：两个高度疏水的跨膜区域和两个高度亲水的位于细胞质内的ATP绑定区域。人的Pgp是由MDR基因家族之一MDR1编码的，该基因位于染色体7q21.1。MDR基因家族在人类中包括MDR1和MDR3(也称MDR2)，Pgp是指MDR1编码的，因而Pgp也称为MDR1。
在肿瘤细胞中，Pgp的过量表达导致细胞内药物积聚的减少，从而使细胞产生耐药。Pgp是一种药物外排泵，通过它的ATP结合位点，水解ATP后产生能量使药物逆着浓度梯度排出胞外，因此是一种ATP依赖泵。
Pgp是目前研究的最为彻底的一个导致肿瘤多药耐药的蛋白质，目前临床上的重要抗肿瘤化疗药物如紫三醇、阿霉素、表柔比星、表阿霉素、长春新碱、米脱蒽醌、格律维(gleevec，STI571，imatinib)，羟基喜树碱，等均为Pgp的底物，药效均因肿瘤Pgp的表达而大大降低。肿瘤细胞内Pgp的表达是肿瘤化疗失败的重要原因。因此，开发药效不受Pgp影响的抗肿瘤药物，尤其是抗Pgp高表达的多药耐药肿瘤的药物非常重要。我们发现紫草素可有效地杀死Pgp高表达的多药耐药肿瘤细胞，其药效不受肿瘤细胞Pgp表达的影响，紫草素杀死多药耐药细胞的药效显著优于紫三醇，表阿霉素，长春新碱，丝裂霉素，羟基喜树碱等临床抗肿瘤药物。
发明内容
本发明的目的是提供紫草素的一种新用途，即：紫草素在制备治疗肿瘤药物中的应用。本发明所采用紫草素根据现有技术从植物如紫草中提取或化学合成，制备的药物可含有其他的抗肿瘤药物，及药物赋形剂或载体。本发明的紫草素主要在制备抗肿瘤细胞多药耐药性药物中的应用；也在制备临床肿瘤化疗药物中的应用。
所述的药物可按本制剂领域已知方法制成肠道或非肠道组合药的剂型。制剂形式主要包括液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、胶丸、胶囊、滴丸剂或注射剂。
制剂的给药形式主要包括口服给药或注射给药。口服制剂包括缓释剂。
肿瘤细胞产生多药耐药性时，细胞内高表达Pgp，Pgp为一跨膜蛋白质，可将进入细胞内的抗肿瘤药物如紫三醇、阿霉素、长春新碱排出细胞外，使药效大大降低，而紫草素对多药耐药肿瘤细胞的作用不受p-糖蛋白的影响，而且对多药耐药肿瘤细胞的杀伤作用明显优于紫三醇、阿霉素、表阿霉素、长春新碱、羟基喜树碱等。紫草素杀死Pgp高表达的多药耐药肿瘤细胞的机理是诱导细胞凋亡，与其亲本药敏细胞一致。
本发明所述的紫草素在制备肿瘤药物中的应用的有益效果如下：(1)具有临床应用前景，紫草素可杀伤多药耐药肿瘤细胞的药效显著高于紫三醇、阿霉素、表阿霉素、长春新碱、羟基喜树碱等现有临床药物；(2)紫草素具有较低的毒性，因此，紫草素具有很好的临床肿瘤化疗、尤其是抗临床肿瘤多药耐药的应用前景。
附图说明
图1为阿霉素在K562和K562/Adr细胞中的积聚；
图2为K562和K562/ADR细胞的Pgp表达情况；
图3为紫草素抑制K562为K562/ADR细胞生长；
图4为紫草素抑制KB和KBv200的细胞生长；
图5为紫草素处理细胞后K562和K562/Adr细胞的DNA梯形条带图，细胞凋亡的特征；
图6为1μg/ml的紫草素素处理K562细胞不同时间后的形态变化。细胞出现凋亡的特征形态，核固缩；
图7为1μg/ml的紫草素素处理K562/Adr细胞不同时间后的形态变化。细胞出现凋亡的特征形态，核固缩；
图8为不同浓度的紫草素处理K562和K562/Adr细胞72hr后流式细胞仪分析结果；
图9为不同浓度的紫草素处理K562和K562/Adr细胞72hr后流式细胞仪分析结果；
图10为1μg/ml的紫草素处理K562细胞48hr后Caspase3，6，9酶活性变化；
图11为1μg/ml的紫草素处理K562/Adr细胞48hr后Caspase3，6，9酶活性变化。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1多药耐药细胞K562/ADR细胞株的抗药谱鉴定
多药耐药细胞株K562/ADR系由胡汛等人于1995年用人的红白血病细胞株K562通过抗肿瘤药物阿霉素诱导的方法建立[15]。
MTT法测定耐药细胞对11种典型抗肿瘤药的耐药情况
取长势形态良好的处于指数生长期的K562及K562/ADR两种细胞，计数，离心，以8×103细胞数/孔的浓度接种于96孔板，每孔100μl分别加入终浓度为0.01，0.02，0.1，0.2，1，2，10，20μg/ml的阿霉素、表阿霉素、柔红霉素、长春新碱、紫杉醇、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、丝裂霉素C、依托泊甙、羟基喜树碱、高三尖杉酯碱等11种有代表性的抗肿瘤药(每浓度均行三个平行复孔)，每孔加100μl，总体积200μl，并设空白未加药物只加细胞对照孔，共同孵育由72小时后，进行MTT法检测细胞增殖存活情况：每孔加入2mg/ml MTT 58μl，培育4hr；平板离心机上1000r.p.m离心10min，弃去上清液，吸干培养液，后每孔加入200μl DMSO，溶解细胞内蓝紫色结晶Formazan；振荡5min结晶溶解后，并酶标仪上测570nm波长处OD值。
以OD值来反映存活的细胞数量，计算各浓度药物作用后各细胞的存活率
存活率＝加药孔OD值/无药对照空的OD值×100％
取平均值，用Origin 7.0软件绘制药物浓度与细胞存活率的相关曲线，得到各种药物对各细胞的半数抑制浓度IC50，并以此来计算耐药细胞对各种药物的耐药倍数(resistance factor)
RF＝IC50耐药细胞/IC50敏感细胞
结果：K562/ADR细胞具有多药耐药性。对蒽环类抗肿瘤药物柔红霉素，阿霉素和表阿霉素以及以微管为靶向的长春新碱，紫杉醇，依托泊甙与高三尖杉酯碱，丝裂霉素c均具有较高的耐药性，而对于以拓扑异构酶为靶向的羟基喜树碱同抗代谢药氟尿嘧啶，甲氨蝶呤则基本上不耐药。耐药谱结果见表1。
表1 K562/ADR的耐药谱
K562 IC50 K562/ADR IC50
药物
K562/ADR RF
(μg/ml) (μg/ml)
柔红霉素 0.030±0.011 0.189±0.064 6.3±0.2
阿霉素 0.032±0.014 0.248±0.041 7.8±2.1
表阿霉素 0.026±0.006 2.549±0.016 98.0±22.0
依托泊甙 2.840±0.083 15.069±0.022 5.3±0.2
氟尿嘧啶 1.515±0.0424 1.882±0.041 1.2±0.0
高三尖杉酯碱 0.016±0.07 0.116±0.003 7.3±3.0
羟基喜树碱 0.103±0.058 0.298±0.036 2.9±1.3
甲氨蝶呤 ＜0.01±0.028 ＜0.01±0.010
丝裂霉素C 0.033±0.019 0.395±0.085 12.0±4.3
紫杉醇 ＜0.01±0.008 0.413±0.054 ＞41.3±27.6
长春新碱 ＜0.01±0.004 0.603±0.210 ＞60.3±3.12
实施例2流式细胞仪分析K562和K562/ADR细胞对阿霉素的积聚能力
取生长良好的处于指数生长期的K562及K562/ADR两种细胞，与终浓度为10μg/ml的阿霉素于培养箱中培养120min后，以冷PBS洗涤2次，收集细胞，计数，用冷PBS配成1×106cells/ml的细胞悬液，4℃保存至上样行流式细胞仪测定细胞内阿霉素的荧光强度，检测激发波长为488nm，接受波长为575nm，强度任意单位表示相对细胞内阿霉素浓度。
结果：K562积聚阿霉素的能力强，经10μg/ml的阿霉素共同培养2hr后，K562细胞内阿霉素浓度约为K562/ADR细胞的5倍，而K562/ADR细胞则由于Pgp的外排导致耐药性产生，细胞内阿霉素浓度明显小于敏感细胞。见图1。
实施例3流式细胞仪检测K562/ADR细胞的Pgp表达情况
取生长良好的处于指数生长期的K562及K562/ADR两种细胞，以冷PBS洗涤2次，收集细胞，计数，用冷PBS配成1×106cells/ml的细胞悬液，分别加入20μl抗Pgp的结合有PE(藻红蛋白)标记的单克隆抗体(BD公司R-PE-17F9)，室温下避光结合反应15min，加PBS洗两次，上样行流式细胞仪，以荧光强度表示Pgp的表达量。
结果：阴性对照的K562细胞，高表达Pgp的比例仅有0.68％，而耐药细胞K562/ADR的则高达88.79％。同时耐药细胞K562/ADR的平均膜蛋白Pgp的表达量是K562的302.40/9.65＝31倍。因此K562/ADR细胞的耐药机理主要是Pgp的过量表达引起的，参见图2。
小结：K562/ADR细胞株是典型的以Pgp高表达为特征的多药耐药细胞株。
实施例4紫草素与紫三醇等药物的抗多药耐药细胞的比较
取长势形态良好的处于指数生长期的K562及K562/ADR两种细胞，计数，离心，以8×103cells/well的细胞浓度接种于96孔板，每孔100μl。分别加入终浓度为0.01，0.02，0.1，0.2，1，2，10，20μg/m的紫草素、紫三醇、阿霉素、长春新碱等药物溶液，每孔加100μl，每浓度行3个平行孔，放入培养箱中孵育72小时，MTT法检测，作图，求得紫草素对两种细胞的IC70值。
结果：紫草素对多药耐药细胞的杀伤药效显著优于紫三醇、阿霉素、表阿霉素、长春新碱、羟基喜树碱等现有临床药物(表2)
表2.紫草素与其他临床化疗药物对杀伤多药耐药肿瘤细胞K562/Adr的药效比较
| 药物 | IC70(μg/ml) |
| 紫草素 | 0.743±0.001 |
| 紫杉醇 | 3.532±0.054 |
| 表阿霉素 | 9.256±0.062 |
| 阿霉素 | 0.923±0.041 |
| 长春新碱 | 9.674±0.211 |
| 丝裂霉素 | 1.866±0.085 |
| 羟基喜树碱 | 16.641±0.036 |
| 5-氟尿嘧啶 | 5.623±0.037 |
实施例5：紫草素对多药耐药细胞及其亲本药敏细胞的杀伤作用
多药耐药细胞K562/Adr来源于药敏细胞K562细胞，两者的区别在于前者高表达p-糖蛋白，因此前者有对肿瘤化疗药物的多药耐药性，而后者无多药耐药性；KBv200和KB细胞是另一对多药耐药细胞和药敏细胞，前者高表达p-糖蛋白。
取长势形态良好的处于指数生长期的K562、K562/ADR、KB和KBv四种细胞，计数，离心，以8×103cells/well的细胞浓度接种于96孔板，每孔100μl。分别加入终浓度为0.01，0.02，0.1，0.2，1，2，10，20μg/m的紫草素溶液，每孔加100μl，每浓度行3个平行孔，放入培养箱中孵育72小时，MTT法检测，作图，求得紫草素对两种细胞的IC50值。
结果：从两条抑制生长的量效关系曲线来看，两曲线基本重合，且IC50基本相同，K562为0.436μg/ml，K562/ADR为0.445μg/ml也就是说紫草素对敏感细胞系K562和多药耐药系K562/ADR的杀伤能力无显著差别，证明MDR细胞K562/ADR对紫草素不具有耐受性。紫草素对两种细胞的IC50均为0.45μg/ml左右，当达到1μg/ml时，两种细胞基本上已经被杀光(见图3)。
紫草素对KB和KBv200的杀伤效应相当，也证明MDR细胞KBv200对紫草素不具有耐受性(见图4)。
这些结果表明紫草素对肿瘤细胞的杀伤和抑制药效不受肿瘤多药耐药的影响，尤其不受肿瘤细胞p-糖蛋白的影响，即使肿瘤细胞表达p-糖蛋白，使多种抗肿瘤药物的药效大大降低，仍不影响紫草素的抗肿瘤药效。
实施例6紫草素抗肿瘤多药耐药的机理—琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA
取长势形态良好的处于指数生长期的K562及K562/ADR两种细胞，计数，离心，以每孔1×106细胞数接种于6孔板。加入终浓度为1μg/ml的紫草素，并加入培养液补足至每孔总体积为6ml。放入培养箱中培养，并分别在0hr，24hr、48hr和72hr收集细胞，以冷PBS洗两遍，离心机上3500r.p.m离心5min，把细胞转移至1.5ml eppendorf管，按试剂盒(上海申能博彩科技有限公司)上说明提取基因组DNA。取10μl提取物，加入2μl 6×的DNA Loading Buffer，在0.5ml eppendorf管内混匀后上样到1％的琼脂糖凝胶(0.5g/50mlTAE缓冲液，已加入2μl EB)，在80V电压下跑胶90min后，紫外成像下观察结果并拍照。
结果：用1μg/ml的紫草素诱导K562和耐药细胞株K562/ADR 24小时后，两种细胞均可见有由于细胞凋亡引起的DNA降解为小片断而形成的特有的Ladder现象，并且随时间的变化，梯度越明显，小片段越浓，说明紫草素抗肿瘤多药耐药细胞的机理与抗药敏肿瘤细胞的机理是相同的，即以诱导细胞凋亡为主，参见图5，其中条带1：0小时，条带2：24小时，条带3：48小时，条带4：72小时。
实施例7紫草素抗肿瘤多药耐药的机理—紫草素诱导两种细胞凋亡的形态学观察
收集长势形态良好的处于指数生长期的K562及K562/ADR两种细胞，计数，离心，以每孔1×106细胞数接种于6孔板。加入终浓度为1μg/ml紫草素，并加入培养液补足至每孔总体积为6ml，分别在12小时，24小时和48小时收集一孔的细胞100μl。细胞浓度用PBS稀释至4×105cells/ml左右，用制片机在加100μl的上述细胞悬液把细胞固定在载波片上，制成样片。染色：用1∶1的Wright和Giemsa复合染色液，加pH6.8的磷酸缓冲液稀释10倍后染色10～20min，流水冲洗玻片背面，晾干。油镜下观察和拍摄凋亡过程的细胞形态变化。
结果：用1μg/ml的紫草素诱导K562和耐药细胞K562/ADR，12hr后与正常的染色细胞相比，体积有所缩小，且均有核染色质朝核膜一侧固缩，颜色变深，此乃处于凋亡早期。24hr后可见核进一步浓缩，且染色体断裂，形成若干个还未离开细胞的凋亡小体，此乃凋亡中期细胞。48hr以后，可见细胞已发生继发性坏死，胞浆内有空泡，细胞有肿胀变形，甚至开始破裂，此时处于凋亡晚期，见图6和图7，其中A：对照，B：12小时，C：24小时，D：48小时。
实施例8紫草素抗肿瘤多药耐药的机理—凋亡相关蛋白酶Caspase-3，6，9活性的检测
收集处于对数生长期的细胞计数，以每孔2×106细胞数接种于6孔板，其中三孔作为对照，三孔加药。加入终浓度为1μg/ml的紫草素溶液，最后加培养液补足至总体积6ml。培养至有处在调亡期细胞后，吹打混匀，离心收集细胞，下面按照检测试剂盒(Caspase-3，6，9比色检验试剂盒，BD公司)说明书操作。
结果：1μg/ml的紫草素诱导两种细胞48hr出现大部分的凋亡细胞后，检测胞内Caspase酶活性吸光度，可以明显看出处于凋亡期的两种细胞的Caspase3，6，9的酶均有被激活，并且以Caspase3的激活程度最强。所以紫草素是诱导细胞发生凋亡的，因为作为凋亡的核心蛋白酶Caspase3有激活，结果参见图8，9。
表3 Caspase酶活性检测结果
实施例9紫草素抗肿瘤多药耐药的机理—流式细胞仪分析细胞凋亡率
取长势形态良好的处于指数生长期的K562及K562/ADR两种细胞，计数，离心，以每孔1×106细胞数接种于6孔板。加入终浓度分别为0.5，1，5μg/ml的紫草素，并加入培养液补足至每孔总体积为6ml，放入培养箱中培养，培养72hr后，收集细胞，以冷PBS洗两遍，离心机上2000r.p.m离心5min，把细胞转移至流式管，并加入1ml 70％的乙醇固定细胞。4℃冰箱过夜后，离心倒去固定液，加入少量的PBS，后加入几滴碘化丙啶(PI)，避光反应10～20min，上流式细胞仪检测凋亡率。
结果：细胞凋亡时，由于核酸内切酶的激活，导致染色质在核小体连接处广泛断裂，在细胞用PI染色做FCM前，一些降解的DNA由于70％乙醇的固定导致通透性增加，DNA碎片从细胞内逸出，凋亡细胞的DNA含量减少，染色后荧光强度降低，因而在DNA直方图上的G0/G1期前方出现了一个亚二倍体的凋亡峰。而对于坏死细胞则由于肿胀形态上的不同，可以从FCM的反映细胞形态的参数图上就可以加以分选。参见图10、图11，结合表4可知，两种细胞经紫草素诱导诱导72hr后，均发生凋亡，并且凋亡率呈浓度依赖关系，从0.5μg/ml的11％到5μg/ml的60％，且同浓度的紫草素对两种细胞的凋亡率差别不大。图10中A：对照，B：0.5μg/ml紫草素，C：1μg/ml紫草素，D：5μg/ml紫草素；图11中A：0.05μg/ml紫草素，B：0.5μg/ml紫草素，C：1μg/ml紫草素，D：5μg/ml紫草素。
表4 不同浓度的紫草素诱导K562和K562/ADR细胞72小时后的凋亡率
以上实施例说明：紫草素对多药耐药肿瘤细胞的药效显著优于紫三醇、表阿霉素、长春新碱、羟基喜树碱、丝裂霉素等抗肿瘤临床药物；紫草素杀死多药耐药肿瘤细胞及其亲本细胞的药效无显著区别，证明紫草素的药效不受肿瘤细胞Pgp表达的影响；紫草素处理Pgp高表达多药耐药肿瘤细胞后，基因组DNA琼脂糖凝胶电泳出现Ladder特征、流式细胞仪分析图中亚二倍体峰的的出现，染色后油镜观察细胞形态上的变化，及Caspase-3酶的激活，表明紫草素杀死多药耐药肿瘤的作用机理是诱导细胞发生凋亡。这些结果说明紫草素具有广阔的抗Pgp高表达的肿瘤多药耐药性的药物制备和临床应用前景。
无需进一步详细阐述，相信采用前面所公开的内容，本领域技术人员可最大限度地应用本发明。因此，工艺过程、质量指标的各种测量方法及其它类似的变更都属于本发明范围。
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Claims (5)
1.紫草素在制备治疗肿瘤疾病药物中的用途，紫草素，英文名为shikonin，CAS number：517-89-5，分子量：288.2994，化学命名为：(+)-5，8-dihydroxy-2-(1-hydroxy-4-methyl-3-pentenyl)-1，4-naphthoquinone，分子式为C16H16O5，它具有旋光性，和异紫草素Alkannin是一对对映体，其特征是：与药物赋形剂或载体组合，用于制备治疗肿瘤疾病药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的紫草素在制备治疗肿瘤疾病药物中的用途，其特征是：在制备抗肿瘤细胞多药耐药性药物中的应用。
3.根据权利要求1所述的紫草素在制备治疗肿瘤疾病药物中的用途，其特征是：在制备临床肿瘤化疗药物中的应用。
4.根据权利要求1-3所述的紫草素的药物组合物，其特征是：制剂形式主要包括液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、胶丸、胶囊、缓释剂、滴丸剂或注射剂。
5.根据权利要求4所述的紫草素的药物组合物，其特征是：所述制剂的给药形式主要包括口服给药或注射给药。
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