CN1284535C - 一种联苯环辛二烯木脂素在制备抗肿瘤药物的用途 - Google Patents

一种联苯环辛二烯木脂素在制备抗肿瘤药物的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN1284535C
CN1284535C CN 200410077286 CN200410077286A CN1284535C CN 1284535 C CN1284535 C CN 1284535C CN 200410077286 CN200410077286 CN 200410077286 CN 200410077286 A CN200410077286 A CN 200410077286A CN 1284535 C CN1284535 C CN 1284535C
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
biphenyl
lignan
compound
tumors
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN 200410077286
Other languages
English (en)
Other versions
CN1660067A (zh
Inventor
陈新滋
肖培根
陈士林
陈四保
许利嘉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Poole Drug Technology Development (shenzhen) Co Ltd
Original Assignee
Poole Drug Technology Development (shenzhen) Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Poole Drug Technology Development (shenzhen) Co Ltd filed Critical Poole Drug Technology Development (shenzhen) Co Ltd
Priority to CN 200410077286 priority Critical patent/CN1284535C/zh
Publication of CN1660067A publication Critical patent/CN1660067A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1284535C publication Critical patent/CN1284535C/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明涉及一种联苯环辛烯类木脂素在制备抗肿瘤药物的用途,该化合物是从五味子属植物铁箍散[Schisandra propinqua(Wall.)Baill.]的根和茎中提取的一种联苯环辛烯类木脂素(1羟基-2,3,12,13,14-五甲氧基-6-己酸酯基-7-羟基-8-甲基-9-苯甲酸酯基-联苯环辛二烯木脂素),实验研究证明,它们具有对血液瘤和实体瘤的细胞毒作用,能诱导肿瘤细胞凋亡和G1期阻滞的细胞形态学和细胞周期的变化,有望开发其在肿瘤的临床预防与治疗中的应用。

Description

一种联苯环辛二烯木脂素在制备抗肿瘤药物的用途
技术领域
本发明涉及从五味子属药用植物铁箍散[Schisandra propinqua(Wall.)Baill.]的根和茎中分离得到的联苯环辛二烯木脂素化合物I对血液瘤和实体瘤的细胞毒作用、诱导凋亡作用、影响细胞周期作用及其在肿瘤的临床预防与治疗中的应用。
背景技术
联苯环辛二稀类木脂素在自然界中主要来源于五味子科植物,是该科植物的特征成分,这类木脂素骨架独特,立体化学复杂,生物活性广泛。七十年代,我国临床研究中发现五味子能明显降低肝炎患者血清谷并转氨酶SGPT水平,从而引起了五味子可药用植物研究的热潮,并由此开发出治疗肝炎药物联苯双酯。近年来,人们通过研究发现,木脂素除了具有人们熟知的保肝降酶,还有其他方面的生物活性,比如调节中枢神经以及抗脂质过氧化、抗肿瘤、抗HIV等等。因此继续深入研究五味子科成分的生物活性,对阐明该科植物传统功效的物质基础具有重大意义。
铁箍散[Schisandra propinqua(Wall.)Baill.]是五味子科五味子属植物,木质藤本,是我国特有的药用植物,在我国分布广泛(甘,陕,豫,鄂,滇,川,黔,桂等地均有分布),资源丰富,在民间用来治疗风湿麻木,神经衰弱,跌打损伤,风湿骨痛,月经不调,外伤出血,疮疖肿痛,胃痛及脉管炎等疾病。本实验室在研究铁箍散的木脂素类化合物的过程中,分离得到了联苯环辛二烯木脂素化合物Schisantherin I(五味子酯I),迄今为止未见任何有关该化合物的活性报道。
本发明的目的是在研究联苯环辛二烯木脂素Schisantherin I的细胞毒性、细胞形态学、细胞周期实验的基础上,开发推出其在抗肿瘤临床治疗中的实际应用。
发明内容
本发明提供了联苯环辛二烯木脂素类化合物Schisantherin I在制药中的应用。
本发明提供了1-羟基-2,3,12,13,14-五甲氧基-6-己酸酯基-7-羟基-8-甲基-9-苯甲酸酯基-联苯环辛二烯木脂素在制备治疗和/或预防肿瘤药物中的应用。
上述联苯环辛二烯木脂素,即Schisantherin I,其化学结构如下:
该化合物提取自铁箍散[Schisandra propinqua(Wall.)Baill.]干燥根茎,30Kg原材料用95%乙醇回流提取三次(每次2小时),浓缩至浸膏状,以适量蒸馏水混悬,静置过夜,分层得到水不溶部分A和水溶部分B。水不溶部分用适量乙醇溶解后拌以粗硅胶(100目),依次以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮洗脱后浓缩至浸膏。将乙酸乙酯部分浸膏(42g)经硅胶(200-300目)柱色谱分离,依次用石油醚至石油醚-丙酮(1∶2)不同比例的溶液梯度洗脱得到15个馏分,馏分11经Sephadex LH-20色谱柱分离,以氯仿∶甲醇(1∶1)为洗脱剂,得到12个馏分。其中5-7合并(约1.9g)利用反相硅胶柱(RP-18)分离,以65%甲醇梯度洗脱得到38个馏分,合并fr19-37得到化合物I(约891mg)。
化合物I为无色针晶,熔点167-168℃。ESI,IR,UR,1HNMR,13CNMR波谱数据与文献报道基本一致,故推定化合物I为1羟基-2,3,12,13,14-五甲氧基-6-己酸酯基-7-羟基-8-甲基-9-苯甲酸酯基-联苯环辛二烯木脂素(schisantherin I)。
将得到的化合物Schisantherin I用DMSO溶解配成10mg/ml的浓缩液,分别进行细胞毒性试验、细胞形态学试验(细胞凋亡)和细胞周期试验。细胞毒性试验结果表明,化合物Schisantherin I对血液瘤及实体瘤均有较好的抑瘤作用。对小鼠正常成纤维细胞株NIH3T3的IC50值均大于其它肿瘤细胞株,说明化合物Schisantherin I在抑制肿瘤细胞的同时对正常细胞的毒性较低。细胞形态学试验结果表明,化合物Schisantherin I对细胞株HL-60能引起与凋亡和G1期停滞有关的形态学变化。琼脂糖凝胶电泳实验结果表明,化合物Schisantherin I能诱导细胞凋亡,出现特征性的凋亡梯带。细胞周期试验结果表明,化合物Schisantherin I在10ug/ml时可使细胞株HL-60、MDA-MB-231、MCF-7停止在G1期。
本发明涉及的化合物Schisantherin I在体外对血液瘤(HL-60)和实体瘤(MDA-MB-231、MCF-7)均有良好的杀伤作用,而对小鼠正常成纤维细胞株NIH3T3杀伤作用相对微弱,DNA电泳实验、细胞形态学和细胞周期试验证明,所说化合物主要是通过诱导细胞凋亡和G1期阻滞来起作用的。因此,本发明所说的联苯环辛烯木脂素类化合物Schisantherin I可用于临床肿瘤预防和治疗药物。
附图说明
图1:Schisantherin I的制备流程;
图2:Schisantherin I的细胞凋亡形态学变化;
图3:Schisantherin I的细胞凋亡电泳梯形条带。
具体实施方式
下面所列实施例有助于本领域技术人员更好地理解本发明,但不以任何方式限制本发明。
本发明的药物组合物,含有生理有效量的联苯环辛烯木脂素和/或药物可接受的载体,所述联苯环辛烯木脂素类化合物I为1-羟基-2,3,12,13,14-五甲氧基-6-己酸酯基-7-羟基-8-甲基-9-苯甲酸酯基-联苯环辛二烯木脂素。
上述的药物组合物可应用于制备治疗和/或预防肿瘤药物。
上述联苯环辛烯木脂素类化合物可应用于制备治疗和/或预防肿瘤药物,所述联苯环辛烯类化合物为1-羟基-2,3,12,13,14-五甲氧基-6-己酸酯基-7-羟基-8-甲基-9-苯甲酸酯基-联苯环辛二烯木脂素。
本发明的药物组合物采用适合药用的制剂形式,这些制剂形式可以是:片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、缓释片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、缓释胶囊剂、口服液、合剂、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
本发明所说的联苯环辛二烯木脂素为Schisantherin I:其化学结构如下:
该化合物提取自铁箍散[Schisandra propinqua(Wall.)Baill.]干燥根茎,30Kg原材料用95%乙醇回流提取三次(每次2小时),浓缩至浸膏状,以适量蒸馏水混悬,静置过夜,分层得到水不溶部分A和水溶部分B。水不溶部分用适量乙醇溶解后拌以粗硅胶(100目),依次以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮洗脱后浓缩至浸膏。将乙酸乙酯部分浸膏(42g)经硅胶(200-300目)柱色谱分离,依次用石油醚至石油醚-丙酮(1∶2)不同比例的溶液梯度洗脱得到15个馏分,馏分11经Sephadex LH-20色谱柱分离,以氯仿∶甲醇(1∶1)为洗脱剂,得到12个馏分。其中5-7合并(约1.9g)利用反相硅胶柱(RP-18)分离,以65%甲醇梯度洗脱得到38个馏分,合并fr19-37得到化合物I(约891mg),其分离流程见附图1。
化合物I为无色针晶,熔点167-168℃。ESI,IR,UR,1HNMR,13CNMR波谱数据与文献报道基本一致,故推定化合物I为1羟基-2,3,12,13,14-五甲氧基-6-己酸酯基-7-羟基-8-甲基-9-苯甲酸酯基-联苯环辛二烯木脂素(schisantherin I)。
将得到的化合物Schisantherin I用DMSO溶解配成10mg/ml的浓缩液,分别进行细胞毒性试验、细胞形态学试验(细胞凋亡)和细胞周期试验。细胞毒性试验结果表明,化合物Schisantherin I对血液瘤及实体瘤均有较好的抑瘤作用。对小鼠正常成纤维细胞株NIH3T3的IC50值均大于其它肿瘤细胞株,说明化合物Schisantherin I在抑制肿瘤细胞的同时对正常细胞的毒性较低。细胞形态学试验结果表明,化合物Schisantherin I对细胞株HL-60能引起与凋亡和G1期停滞有关的形态学变化。琼脂糖凝胶电泳实验结果表明,化合物Schisantherin I能诱导细胞凋亡,出现特征性的凋亡梯带。细胞周期试验结果表明,化合物Schisantherin I在10ug/ml时可使细胞株HL-60、MDA-MB-231、MCF-7停止在G1期。
上述有关试/实验举例如下:
细胞形态学实验(细胞调亡):
1.材料:人急性早幼粒白血病细胞株(HL-60),Hoechst 33258荧光染色剂,PBS(无Ca2+,Mg2+,PH:7.2),4%甲醛溶液。
2.方法:在35×10mm含HL-60细胞的培养皿中,给药作用一段时间后,收集约106个细胞。用冷的PBS洗2次,4%甲醛溶液在4℃固定10min,用1ug/mlHoechst 33258在37℃染色7min,滴片,在40×10荧光倒置显微镜下观察。
3.结果:观察化合物1对HL-60细胞形态学的影响,发现化合物1对HL-60细胞株能引起调亡形态学的变化,调亡的细胞核呈现凝聚并裂解。(见附图2)
细胞毒性试验:
1.材料:人乳腺癌细胞株MCF-7(ER+)、MDA-MB-231(ER-),人急性早幼粒白血病细胞株HL-60,小鼠成纤维细胞株NIH3T3均购自美国ATCC(American Type CultureCollection)。培养基RPMI 1640、DMEM,胎牛血清均购自Gibico公司,MTT(3-(4,5-DIMETHYLTHIAZOL-2-YL)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)为AMRESCO公司产品,生产批号:3133B50。其它试剂均为国产分析纯。
2.方法:细胞增殖检测(MTT法),细胞以1×104/孔接种96孔板上,在预实验基础上选用倍比稀释后的六个药物浓度(3.125~100μg/ml),每个浓度重复3孔,空白对照组用等体积溶媒替代。孵育72小时后每孔加入5mg/mlMTT液10μl后再孵育4小时,离心去上清,每孔加入二甲基亚砜液150μl,振荡器充分振荡后,用Zenyth 200rtmicroplate reader测定各孔在540nm处的吸光度(A),根据药物处理组A值、对照组A值,计算细胞生长抑制率,细胞生长抑制率按下式计算:对照组A值-实验组A值/对照组A值,并计算50%细胞存活时药物浓度(IC50)。
3.结果:联苯环辛二烯木脂素类化合物Schisantherin I作用于细胞72小时后,与对照组比较,细胞株HL-60、MDA-MB-231、MCF-7、NIH3T3均表现为A值减低,提示细胞生长受抑,说明联苯环辛二烯木脂素类化合物Schisantherin I对血液瘤及实体瘤均有较好的抑瘤作用,且对小鼠正常成纤维细胞株NIH3T3的IC50值均大于其它肿瘤细胞株,说明化合物Schisantherin I在抑制肿瘤细胞的同时对正常细胞的毒性较弱(表1)。
表1  化合物Schisantherin I对肿瘤细胞株以及正常细胞的IC50
  HL-60   MDA-MB-231   MCF-7   NIH3T3
  Schisantherin I(ug/ml) 33.5 23.9 18.9 >50
细胞周期试验:
1.材料:RNase A(Sigma公司产品,生产批号:063k1174);PI(propidium iodide)(Fluka公司产品,生产批号:1086355 30304232)。其它试剂均为国产分析纯。
2.方法:FCM检测HL-60、MDA-MB-231、MCF-7细胞DNA含量及细胞周期分析,细胞以1×106/ml接种100ml培养瓶,分别加入终浓度为10μg/ml的联苯环辛烯木脂素类化合物Schisantherin I,同时设空白对照组,24小时后收获细胞,1000rpm×5分钟离心,用冷PBS洗3次后弃上清液,用预冷75%酒精固定,4℃保存。临用前固定细胞悬液离心,加预冷PBS2ml,2000rpm×5分钟洗2次,调整细胞浓度至1×106/ml,加入RNaseA(10mg/ml)100μl混匀,室温孵育10分钟;加入碘化丙啶染液(PI,50μg/ml)800μl混匀,4℃避光放置30分钟后流式细胞仪检测分析,Celluest3.1软件获取直方图,Multicycle3.0分析获取数据。
3.结果:联苯环辛二烯木脂素类化合物Schisantherin I在10ug/ml浓度时,作用24小时,使细胞株HL-60、MDA-MB-231、MCF-7均停止在G1期(表2)。
表2.化合物Schisantherin I对细胞周期的影响
  HL-60   MDA-MB-231   MCF-7
  Schisantherin I   59   79.2   63.7
  空白对照   47.9   64.6   59
细胞凋亡试验:
1.材料:琼脂糖(Spanish公司产品,上海生物工程公司分装,生产批号:GI-122401);溴化乙锭(sigma公司产品,生产批号:);RNase A(Sigma公司产品,生产批号:063k1174);Proteinase K(MERCK公司产品,生产批号:Y354968 926)。其它试剂均为国产分析纯。
2.方法:DNA提取及电泳分析,细胞株HL-60、MDA-MB-231均以5×105/ml接种35mm培养皿,培育24小时后,加入不同浓度化合物Schisantherin I,继续孵育48小时后,1000rpm×5分钟收集细胞,PBS洗2次。每2×106/ml细胞加600μl裂解液(10mmol/LTris.CL,10mmol/LEDTA,75mmol/LNaCl;5g/LSDS),加RNase A 10μl(10mg/ml)和蛋白酶K 15μl(20mg/ml),56℃孵育2小时,用酚和氯仿抽提DNA,沉淀的DNA溶于20μl TBE缓冲液,加6×DNA加样缓冲液1μl,1%琼脂糖、40V×4小时电泳,Kodak凝胶成像系统下摄片。
3.结果:细胞DNA片段分析,用浓度为10、20μg/ml化合物Schisantherin I处理细胞后48小时,提取DNA并行琼脂糖凝胶电泳,出现明显的DNA断裂梯形条带(图3)。所述联苯环辛烯类化合物I在组合物的重量比为0.1-99.9%,药物可接受的载体在组合物中的重量比为0.1-99-9%。以下为几种常用制剂形式的制备实施例:
片剂的制备
Schisantherin I     40g
微晶纤维素  80g
硬脂酸镁    1.2%
3%聚维酮乙醇溶液适量
共制成1000片
取处方量化合物1与处方量微晶纤维素混合均匀,加3%聚维酮乙醇溶液制软材,过18目筛制颗粒,50℃干燥30-45分钟,整粒,加入硬脂酸镁,混匀,压片。每片含化合物40mg。
颗粒剂的制备
Schisantherin I 40g
微晶纤维素  80g
硬脂酸镁    1.2%
3%聚维酮乙醇溶液  适量
取处方量Schisantherin I与处方量微晶纤维素混合均匀,加3%聚维酮乙醇溶液适量制软材,过18目筛制颗粒,50℃干燥30-45分钟,整粒,装袋,每袋含化合物40mg。
注射剂的制备
Schisantherin I 20g
土温-80  40g
山梨醇   10g
生理盐水  加到1000ml
共制成  1000瓶
取处方量Schisantherin I与处方量土温-80和山梨醇混合均匀,加入适量生理盐水使溶解,过滤,分装,灭菌,包装即得。

Claims (1)

1、1-羟基-2,3,12,13,14-五甲氧基-6-己酸酯基-7-羟基-8-甲基-9-苯甲酸酯基-联苯环辛二烯木脂素在制备治疗和/或预防肿瘤药物中的应用。
CN 200410077286 2004-12-01 2004-12-01 一种联苯环辛二烯木脂素在制备抗肿瘤药物的用途 Expired - Fee Related CN1284535C (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200410077286 CN1284535C (zh) 2004-12-01 2004-12-01 一种联苯环辛二烯木脂素在制备抗肿瘤药物的用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200410077286 CN1284535C (zh) 2004-12-01 2004-12-01 一种联苯环辛二烯木脂素在制备抗肿瘤药物的用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1660067A CN1660067A (zh) 2005-08-31
CN1284535C true CN1284535C (zh) 2006-11-15

Family

ID=35009812

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 200410077286 Expired - Fee Related CN1284535C (zh) 2004-12-01 2004-12-01 一种联苯环辛二烯木脂素在制备抗肿瘤药物的用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN1284535C (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011144054A1 (zh) * 2010-05-21 2011-11-24 中国科学院上海有机化学研究所 联苯环辛烯类木脂素衍生物及其在治疗病毒性肝炎方面的应用

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1994289B (zh) * 2006-01-05 2010-06-09 胡汛 联苯环辛二烯木脂素在制备酪氨酸激酶抑制药物中的应用
CN101555206B (zh) * 2009-04-15 2011-12-28 云南民族大学 一种狭叶木脂素及其制备方法和应用
CN102048827A (zh) * 2010-01-25 2011-05-11 浙江大学 五味子在制备抗肿瘤侵袭转移的药物中的应用

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011144054A1 (zh) * 2010-05-21 2011-11-24 中国科学院上海有机化学研究所 联苯环辛烯类木脂素衍生物及其在治疗病毒性肝炎方面的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN1660067A (zh) 2005-08-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102018759B (zh) 迷迭香酸、含迷迭香酸的夏枯草有效组分及其制备方法和其在防治癌症术后转移方面的应用
CN1246325C (zh) 一种红景天有效成分提取物的制备方法
CN102552644A (zh) 大蒜总多糖的抗癌用途、制备方法及组合物
CN1733662A (zh) 蒲葵的抗肿瘤提取物及其制备方法及应用
CN101391961A (zh) 余甘子叶或果实抗癌中药及其制备方法和应用
CN1706397A (zh) 具有升高白细胞作用的芍药苷与芍药内酯苷的组合物
CN1300176C (zh) 一种新皂苷及其衍生物、其制备方法及其医药用途
CN1284535C (zh) 一种联苯环辛二烯木脂素在制备抗肿瘤药物的用途
CN1709417A (zh) 一种杏香兔耳风提取物及其制备方法
US20050287230A1 (en) Method of producing ginsenoside 20 (R)-Rh2 and composition of matter thereof
CN1247855A (zh) 丹参多酚酸盐的制备方法和用途
CN102362971A (zh) 一种治疗冠心病中药及其有效化学组分的制备方法和制剂
CN1989984A (zh) 川芎有效组分、制备方法及其制剂与用途
CN1709415A (zh) 石刁柏提取物及其制备方法
CN1141101C (zh) 治疗乙肝的药物及其制备方法
CN1250240C (zh) 板蓝根提取物及制备方法和它的应用
CN1282468C (zh) 中药脑得生软胶囊及其制备方法
CN1537849A (zh) 羟基茋类化合物及其制备方法和应用
CN1488355A (zh) 芒果叶总苷止咳中药制剂及其生产方法
CN1156624A (zh) 一种猕猴桃根提取物药物制剂及其制备方法
CN1068782C (zh) 以栾树提取物为有效组分的抗癌药物及制备方法
CN1943609A (zh) 一种具有抗病毒作用的药物组合物及其制备方法
CN1739548A (zh) 治疗肝癌的虎眼万年青多糖药物
CN100383155C (zh) 抱茎苦荬菜内酯及其衍生物组合物和它的制备方法及其应用
CN1150918C (zh) 珠子参有效成份制剂及制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20061115

Termination date: 20101201