CN1240390C - 生物转化人参组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种生物转化人参组合物，其特征在于，在所述人参组合物中，(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人参二醇+人参皂苷F)/(人参皂苷Rc+人参皂苷Rd+人参皂苷Rb1+人参皂苷Rb2)的比为0.1或0.1以上。又，本发明提供一种生物转化人参组合物，其特征在于，在所述人参组合物中，(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人参二醇+人参皂苷F)/(人参皂苷Rc+人参皂苷Rd+人参皂苷Rb1+人参皂苷Rb2)的比为0.1或0.1以上，在被人体吸收时，其抑制组胺的游离，用作抗变应性、抗癌物质。又，本发明提供一种生物转化人参组合物的制备方法，其特征在于，所述人参组合物的制备方法包括将人参原材料在水中悬浮后，加入乳酸菌或肠道细菌，培养24～72小时左右，得到生物转化人参液的生物转化过程；以及将经过上述方法的生物转化人参液原样浓缩或冷冻/干燥，将上述生物转化人参液离心分离，只过滤上清液，得到生物转化人参浓缩液的浓缩过程。
Description
技术领域
本发明涉及人参组合物及其制备方法，特别涉及通过乳酸菌和肠道细菌的处理过程增强抗癌成分的生物转化人参组合物及其制备方法。本申请要求基于韩国特许申请第2002-5369号(2002.01.30)，“生物转化人参组合物的制备方法”的优先权。
背景技术
通常，人参属于植物分类学上的五加皮科人参属的多年生宿根植物，地球上已知约11种，通常代表的品种为下述：
1)人参：Panax ginseng C.A.Meyer
-野生于亚洲远东地区(北纬33-48：韩国、东北北部、俄罗斯的一部分)，药效极好。
2)西洋参：Panax quinquefolium L.
-在美国、加拿大野生和栽培。
3)三七：Panax notoginseng F.H.Chen
-从中国云南省东南部至广西省西南部地区野生或栽培。
4)珠子参：Panax japonicus C.A.Meyer
-分布在日本、中国西南部到尼泊尔。
上述人参主要在韩国、中国、日本等亚洲国家以生药的状态用于精神医学的神经科疾病以及糖尿病等多种疾病。已经证明上述人参的主要成分人参皂苷具有强壮、强精、镇静、造血以及抗高血压等效果。
具体而言，已证明上述人参皂苷的微生物代谢产物IH-901、IH-902、IH-903以及IH-904等不仅具有免疫增强作用，还具有极强的抑制肿瘤血管新生作用以及抑制癌细胞转移作用，因此需要开发利用这些性质的抗癌人参组合物。下述表(表1)证明IH-901等对癌细胞转移作用的效果，表中显示在给鼠移植癌细胞后，从第2天到第5天之间经口给予0.5mg的药物，14天后解剖的肺中癌转移的集落数的测定结果值。
[表1]
| 投入成分 | 肺转移癌集落数 | 癌肺转移抑制率 | 有效差(％对照)P＜0.05 |
| IH-901 | 167.6+62.0 | 39.1+22.1 | |
| IH-902 | 139.2+72.9 | 47.5+27.4 | |
| IH-903 | 162.0+63.5 | 39.6+27.9 | |
| IH-904 | 139.8+6.4 | 24.0+38.2 |
上述IH-901、IH-902、IH-903和IH-904，作为人参的人参皂苷的内原人参二醇(protopanaxadiol)型的人参皂苷-Rb1、Rb2、Rc、Rd等的微生物最终代谢产物，通过IV型胶原酶分泌的阻断、抗生血管的活性以及抑制血小板聚集而具有强的癌细胞转移抑制活性。其中，通过药理功能试验、一般的药理试验以及稳定性试验等证明上述IH-901没有毒性和副作用，损害癌细胞HL-60细胞的正常分化过程，对细胞的增殖具有极强的抑制，IH-901的细胞凋亡诱导活性达到与目前作为抗癌治疗剂广泛使用的顺铂的活性可以匹敌的程度。
一方面，韩国特许申请第1980-4291号，“乳酸菌人参饮料的制备方法”中公开了‘在有机氮浓度为0.2～0.8％，生成的葡萄糖含量为适合乳酸菌发酵的3％或3％以上的条件下，发酵已将人参中原有的芳香成分分离的人参残渣，用有机酸调节pH 3.8～4.8之后，在除去不溶性高分子蛋白质和纤维素的滤液中培养乳酸菌后，再向其中添加人参固有的芳香成分的方法’。
韩国特许申请第1988-12502号，“利用人参的活性乳酸菌饮料的制备方法”中公开了‘将处理人参的鲜汁和提取物或对人参进行蒸煮处理，在蒸煮处理后的杂质中进行发酵作用后的所得作为基质培养乳酸菌之后，添加混合脱脂牛奶、脱脂奶粉、碳酸水、维生素类，制备高营养价值的人参乳酸菌的碳酸水性饮料水和水果类的方法’。
韩国特许申请第1996-23750号，“含有人参或生人参的发酵乳组合物及其制备方法”中公开了‘包括添加0.001～2.39％(重量)的磨碎至0.1～0.6cm形成的微粒状人参或生人参的过程，以及追加添加选自水、维生素、糖类、有机酸类、果实类、谷类、野菜类的1种或2种以上的成分的过程的含有人参或生人参的发酵乳组合物的制备方法’。
综上所述，以前的含有人参的组合物等是向既存的发酵乳或乳酸菌饮料等中追加人参的芳香成分或添加人参粉等能够得到的人参成分加味的组合物。
可是，上述含有人参组合物等只不过是添加人参成分的饮料用组合物，但没有提到得到如人参皂苷的代谢产物IH-901那样的抗癌成分的作用。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的是提供IH-901等的抗癌成分被大幅度强化的生物转化人参组合物及其制备方法。
本发明的另一目的是提供人参原材料中含有的有效成分的作用得到最大化提高的生物转化人参组合物及其制备方法。
本发明的再一目的是提供具有抗变应性、防止老化以及预防大肠癌/肝脏损伤等对人体有益的作用的生物转化人参组合物及其制备方法。
为了达到上述目的，本发明提供一种生物转化人参组合物，其特征在于，在所述人参组合物中，(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人参二醇+人参皂苷F)/(人参皂苷Rc+人参皂苷Rd+人参皂苷Rb1+人参皂苷Rb2)的比为0.1或0.1以上。
另外，本发明提供生物转化人参组合物的制备方法，其特征在于，所述人参组合物的制备方法包括将人参原材料在水中悬浮后，加入乳酸菌或肠道细菌，培养48～72小时左右，得到生物转化人参液的生物转化过程；以及将经过上述过程的生物转化人参液离心分离，只过滤上清液，得到生物转化人参浓缩液的浓缩过程。
附图说明
图1是显示按照本发明的优选实施例的生物转化人参组合物的制备方法的流程图；
图2是显示人参皂苷的代谢过程的概略图。
图中的符号说明
S10：生物转化过程 S20：浓缩过程
S30：提取过程 S40：干燥过程
S50：搅拌过程 S60：稀释过程
具体实施方式
以下参照附图详组说明本发明的优选实施例。在本发明的说明中，在判断不会使本发明的要旨不清楚的情况下，省略了相关的公知技术或对其构成的具体说明。
本发明提供人参皂苷的微生物最终代谢产物内，抗癌作用及其稳定性优异的IH-901的含量高的人参组合物及其制备方法。
图1是显示按照本发明的优选实施例的生物转化人参组合物的制备方法的流程图。通过图1显示，按照本发明的优选实施例的生物转化人参组合物的制备方法包括生物转化过程(S10)以及浓缩过程(S20)，还可以追加进行提取过程(S30)、干燥过程(S40)、搅拌过程(S50)、稀释过程(S60)。
1.生物转化过程
上述生物转化过程(S10)是将人参原材料在水中悬浮后，加入乳酸菌或肠道细菌，培养一定时间以上，优选24～72小时左右，得到生物转化人参液的过程。
(1)人参原材料
本发明的人参原材料可以是人参以及人参加工物中的任一种，优选可以使用生人参、红参、白参、尾参、人参叶、人参提取液以及人参粉末中的任一种或多种。
(2)乳酸菌和肠道细菌
乳酸菌和肠道细菌中的一部分将食物和药物中含有的化合物等生物转化，此时生成的生物转化体等一般要比原化合物生理活性高。如图2所示，在符合本发明的原材料人参中含有的化合物人参皂苷-Rb1、人参皂苷-Rb2+人参皂苷-Rc的情况下，它们经过这些乳酸菌和肠道细菌代谢的一次中间代谢产物人参皂苷-Rd、化合物-O、人参皂苷-Mcl以及二次中间代谢物人参皂苷-F2、IH-902(化合物-Y)、IH-903(化合物-Mc)变成最终代谢物IH-901(化合物-K)。
上述乳酸菌为可以将人参皂苷成分代谢生成生物转化体IH-901的任一种乳酸菌，优选使用双歧杆菌K-103、双歧杆菌K-506、双岐杆菌KK-1、双岐杆菌KK-2中的任一种或多种。而且，上述双岐杆菌KK-1的保藏号为KCCM-10364(2002.03.22)，上述双岐杆菌KK-2的保藏号为KCCM-10365(2002.03.22)，各自保藏在韩国微生物保藏中心(Korean Culture Center of Microorganisms)，韩国，汉城。
上述肠道细菌还可以是能够将人参皂苷成分代谢生成生物转化体IH-901的任一种，优选使用口部普雷沃菌(Prevotella oris)、梭杆菌K-60(Fusobacterium K-6)中的任一种或多种。
2.浓缩过程
上述浓缩过程(S20)是将生物转化人参液原样浓缩或冷冻/干燥，或者将上述生物转化人参液离心分离，只过滤上清液，得到生物转化人参浓缩液的过程。通过上述浓缩过程(S20)，可以除去生物转化人参液中含有的不纯物以及沉淀物。
3.提取过程
上述提取过程(S30)是向生物转化人参浓缩液中加入预定的溶剂，得到生物转化人参浓缩液的过程。
上述溶剂完成将生物转化人参浓缩液中含有的有效成分溶解并提取的任务，作为上述溶剂，可以使用水、甲醇和乙醇等低级醇、超临界液体或它们的混合液。
4.干燥过程
上述干燥过程(S40)是将生物转化人参浓缩液冷冻干燥得到生物转化人参粉末的过程。
5.搅拌过程和稀释过程
上述搅拌过程和稀释过程是为了利用根据本发明的特征制备的生物转化人参提取液或生物转化人参粉末等制备加工饮料进行的过程。
上述搅拌过程(S50)是向在甜味剂中加蒸馏水混合的饮料原液中加入生物转化人参提取液或生物转化人参粉末并搅拌，得到生物转化人参混合液的过程。也可以向上述饮料原液中添加柠檬酸、柠檬酸钠、生药提取物、氨基乙磺酸中的任一种或多种，根据应用例，可以添加生药提取物五味子、枣、桂皮、枸杞、黄精、黄耆等。
上述稀释过程(S60)是向生物转化人参混合液中加入预定量的蒸馏水，得到生物转化人参饮料液的过程。
根据上述过程制备的本发明的生物转化人参组合物使(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人参二醇+人参皂苷F)/(人参皂苷Rc+人参皂苷Rd+人参皂苷Rb1+人参皂苷Rb2)的比维持在0.1或0.1以上的范围。此时，上述20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人参二醇指IH-901。
<实施例1>
将用水提取尾参并干燥得到的人参粉末100mg在水中悬浮以后，加入乳酸菌双歧杆菌K-103和双歧杆菌K-506菌株，培养72小时，然后将其离心分离，将过滤后的上清液浓缩，得到生物转化人参浓缩液。
<实施例2>
将用甲醇冷浸白参1kg得到的提取液再用丁醇提取得到的皂苷部分在水中悬浮后，加入乳酸菌双歧杆菌K-103和双歧杆菌K-506菌株，培养72小时，将其离心分离，只过滤上清液后浓缩，得到生物转化人参浓缩液。
<实施例3>
将生人参细切并灭菌，在水中悬浮之后，加入双歧杆菌K-103和双歧杆菌K-506菌株，培养48小时，将其离心分离，只过滤上清液后浓缩，将其冷冻干燥，得到生物转化人参粉末。
<实施例4>
将用水提取尾参并干燥后得到的人参粉末100mg在水中悬浮之后，加入乳酸菌双歧杆菌KK-1和双歧杆菌KK-2菌株，培养72小时，将其离心分离，只过滤上清液后浓缩，得到生物转化人参浓缩液。
<实施例5>
将用甲醇冷浸白参1kg得到的提取液再用丁醇提取得到的皂苷部分在水中悬浮后，加入乳酸菌双歧杆菌KK-1和双歧杆菌KK-2菌株，培养72小时，将其离心分离，只过滤上清液后浓缩，得到生物转化人参浓缩液。
<实施例6>
将生人参细切并灭菌，在水中悬浮之后，加入乳酸菌双歧杆菌KK-1和双歧杆菌KK-2菌株，培养48小时，将其离心分离，只过滤上清液后浓缩，将其冷冻干燥，得到生物转化人参粉末。
<实施例7>
向果糖、葡萄糖和白糖中加入蒸馏水，加热至95℃溶解后，缓慢冷却至70℃后冷却，向其中加入柠檬酸、柠檬酸钠和苯甲酸钠，搅拌使之溶解。
接着，加入五加皮提取液和氨基乙磺酸搅拌使之溶解。向由此生成的溶液中加入生物转化人参粉末剧烈搅拌后，加入补足量的蒸馏水使总体积为100ml，制备含有250mg生物转化人参提取物的100ml饮料组合物。
<试验例1：含量分析1>
向2g白参粉末中加入500ml水后，加入乳酸菌双歧杆菌KK-1和双歧杆菌KK-2菌株各1g，在37℃培养72小时，将其减压浓缩，得到生物转化人参浓缩液。接着将上述生物转化人参浓缩液和市售的普通白参2g分别用100ml甲醇分三次提取浓缩后悬浮于水中，用100ml乙醚分三次提取。接着用100ml丁醇分三次提取后，浓缩丁醇部分，将获得的浓缩物在甲醇中溶解，进行TLC分析，得到下述<表2>中的结果。
[表2]
| 成分 | 各种成分含量 | |
| 白参 | 生物转化人参 | |
| 人参皂苷Rb1 | 15.1 | 4.3 |
| 人参皂苷Rb2 | 8.2 | 2.2 |
| 人参皂苷Re | 9.5 | 1.1 |
| 人参皂苷Rd | 3.5 | 4.5 |
| IH-901 | 0 | 16.1 |
| 人参皂苷F2 | ＜1 | 5.5 |
| 原人参二醇 | ＜1 | ＜1 |
(1)溶剂CHCl3∶MeOH∶H2O＝65∶35∶10的下层
(2)显色试剂5％硫酸MeOH溶液
(3)岛津TLC检测器CS-9301PC扫描仪
<试验例2：含量分析2>
向1g白参皂苷部分中加入100ml水，加入双歧杆菌KK-1和双歧杆菌KK-2菌株各1g，在37℃培养48小时，将其减压浓缩，得到生物转化人参浓缩液。接着将上述生物转化人参浓缩液和1g白参皂苷分别在甲醇中溶解，进行TLC分析，得到下述
<表3>中的结果。
[表3]
| 成分 | 各种成分含量 | |
| 白参 | 生物转化人参 | |
| 人参皂苷Rb1 | 15.1 | 1.6 |
| 人参皂苷Rb2 | 8.2 | 1.1 |
| 人参皂苷Rc | 9.5 | 0.5 |
| 人参皂苷Rd | 3.5 | 0.5 |
| IH-901 | 0 | 28.6 |
| 人参皂苷F2 | ＜1 | 2.2 |
| 原人参二醇 | ＜1 | 2.1 |
(1)溶剂CHCl3∶MeOH∶H2O＝65∶35∶10的下层
(2)显色试剂5％硫酸MeOH溶液
(3)岛津TLC检测器CS-9301PC扫描仪
<试验例3：抗癌活性分析>
将HepG2(人肝癌细胞系)、A-549(人肺癌细胞系)、P-388(小鼠淋巴瘤细胞系)、L-1210(小鼠淋巴细胞白血病细胞系)和10％FBS、1％抗生素-抗真菌素和2.2g/L碳酸氢钠用增强RPMI 1640培养基培养。
用0.25％胰蛋白酶处理上述HepG2、A-549，将细胞从烧瓶中取出，将180μl以3×104细胞/孔的细胞数均匀地铺在96孔中，在37℃的用5％CO2饱和的CO2培养箱中附着24小时，将180μl P-388和L-1210以4×104细胞/孔的细胞数均匀地铺上，在用5％CO2饱和的CO2培养箱中稳定2小时。
再分别将浓度为10mg/ml的人参提取物和生物转化人参提取物用高压蒸汽灭菌后，每孔加入20μl使试样的最终浓度为1mg/ml，然后在37℃的用5％CO2饱和的CO2培养箱中培养48小时。48小时后，将20mg/ml的MTT试剂以每孔50μl加入，在CO2培养箱中反应4小时后，除去培养基，向沉淀中加入100μl DMSO，在580nm处用ELISA读数器测定吸光度，从而测定细胞的毒性。测定结果通过下述<表4>表示。
[表4]
| 组分 | EDso(μg/ml) | |||
| P388 | L1210 | A549 | HepG2 | |
| 普通人参提取物 | ＞100 | ＞100 | ＞100 | ＞100 |
| 生物转化人参 | 98 | 50 | 160 | 96 |
<试验例4：抗变应性效果分析1>
将RBL-2H3细胞(大鼠肥大细胞系)用含有10％胎牛血清和L-谷氨酰胺的Dulbeccos’s Modifed Eagle’s培养基(DMEN)在37℃，湿润的5％CO2培养箱中培养，用胰蛋白酶-EDTA溶液浮游具有固着性的细胞，分离它们，回收供试验使用。
将RBL-2H3细胞在24孔中分别以5×105细胞/孔平均分株后，加入小鼠单克隆IgE 0.5μg/ml，保温致敏12小时。将上述细胞用0.5ml的siraganian缓冲液(119mM NaCl、5mM KCl、0.4mM MgCl2、25mM PIPES、40mM NaOH、pH 7.2)洗净后，加入0.16ml的siraganian缓冲液(添加5.6mM葡萄糖、1mM CaCl2、0.1％BSA)后，在37℃保温10分钟。
接着，分别加入0.04ml人参提取物和生物转化人参提取物试样，20分钟后，用0.02ml的抗原(DPN-BSA 1μg/ml)在37℃下使细胞活化10分钟，在2000rpm下离心分离10分钟，将0.025ml的上清液移至96孔中。在此，加入0.025ml的基质液1mM p-NAG(在0.1M柠檬酸缓冲液中的对硝基苯基-N-乙酰基-β-D-葡糖胺，pH 4.5)后，在37℃下培养60分钟，加入0.2ml的0.1M Na2CO3/NaHCO3使反应停止，在405nm处用ELISA读数器测定吸光度。测定结果通过下述<表5>表示。
[表5]
| 组分 | IC50(mg/ml) |
| 普通人参提取物 | ＞0.25 |
| 生物转化人参 | 0.103 |
| 色甘酸二钠盐 | 0.22 |
<试验例5：抗变应性效果分析2—组胺游离抑制>
为了测定抗组胺效果，利用取自二十日鼠腹腔内部的化合物K48/80，将雌性Wistar大鼠(200+20g)处死后，将20ml生理溶液(137mM NaCl、2.7mM CaCl2、1mM MgCl2·6H2O、5.6mM葡萄糖、肝素1单位/ml、5mM磷酸盐缓冲液pH 7.2)给予腹膜内。然后将腹部轻轻按摩2分钟，再用注射器抽取腹膜排出液。将抽取的腹水300×g在4℃下离心分离5分钟，用生理溶液数次洗涤。
接着，将腹膜排出细胞悬浮液(2.5ml)的各试样与多种浓度的悬浮生理溶液0.5ml混合后，在37℃预保温5分钟。用同样的方法处理对照和空白。然后将此反应液(3.0ml)与化合物48/800.5ml混合，在37℃下保温10分钟。将反应液(3.5ml)在2500×g，4℃下离心分离10分钟后，测定上清液和沉淀中分泌的组胺的量。组胺的定量是用上述上清液0.6ml、蒸馏水1.4ml、1N NaOH 0.4ml、1％邻苯二甲醛(在甲醇中)0.1ml在常温下反应4分钟后，用3N HCl 0.2ml停止反应，用荧光光度计(Jasco FP-750，激发353nm，发射438nm)测定。测定结果通过下述<表6>表示。
下表表示了普通人参和生物转化人参两者的化合物48/80诱导的白鼠肥大细胞的组胺游离抑制效果的测定结果，结果表明存在组胺游离抑制效果，特别是生物转化人参提取物在更低浓度表现出效果。因此，表明在被人体吸收时，本发明的生物转化人参组合物可以用作抑制组胺的游离的抗变应性物质。
[表6]
| 组分 | IC50(mg/ml) |
| 普通人参提取物 | 0.5 |
| 生物转化人参 | 0.3 |
| 色甘酸二钠盐 | 0.22 |
<试验例6：抗变应性-效果分析3>
本抗变应性-效果分析3采用下述的Inagaki等的方法(Int.Arch.Allergy Appl.Immunol.，87，254-259，1988)进行。
将针对二硝基-牛血清白蛋白(DNP-BSA)的IgE血清用生理盐水稀释，向用乙醚麻醉的二十日鼠背部注射10μg，手工敏化48小时后，将含DNP-BSA 0.2mg和伊文思蓝1.6mg的整理食盐水0.2ml从尾静脉注射入，30分钟后颈部脱骨处死，测定从背部漏出的伊文思蓝的色素量。将二十日鼠的背的一定部位切开，插入试验管抽取，加入1N-KOH 0.7ml在37℃下培养一夜。
在此试验管中加入0.6N磷酸∶丙酮混合液(5∶13)4ml后，振荡过滤，对提取的色素在620nm处进行比色定量。
接着，将人参提取物和生物转化人参提取物分别在整理食盐水中溶解或悬浮，经口或腹腔在抗原给药1小时前给药。测定结果通过下述<表7>表示。
[表7]
| 组分 | 容量(mg/kg) | 抑制(％) | |
| 经口给药 | 腹腔给药 | ||
| 普通人参提取物 | 50 | 0 | 5 |
| 生物转化人参 | 50 | 48 | 52 |
| 色甘酸二钠盐 | 100 | 37 | 未测定 |
<试验例7：抗氧化效果-随着自由基的清楚而防止老化>
为了测定DPPH(1，1-二苯基-2-苦基偕腙肼)自由基的清除效果，反应液60μm DPPH(在乙醇中)500μl中加入试样500μl，在常温下反应30分钟后，在520nm处测定吸光度。空白中用乙醇代替DPPH，作为对照组，用水代替试样时作为100％，求出DPPH自由基去除程度％。使用咖啡酸作为对照药物。
而且，为了测定超氧化物阴离子自由基清除效果，反应液0.05MNa2CO3(pH 10.2)900μl中分别各自添加3mM黄嘌呤(Sigma公司)、3mM EDTA(Sigma公司)、1.5μg/ml BSA(Sigma公司)、0.75mM NBT(Sigma公司)50μl。此时，加入试样50μl和0.1μg/ml黄嘌呤氧化酶50μl反应30分钟后，加入6mM CuCl2停止反应，在560nm处测定吸光度。使用咖啡酸作为对照药物。
人参皂苷部分的抗氧化效果不强。可是，与普通人参相比，生物转化人参效果更好，这样可以期望抗氧化效果带来防止老化的效果。上述测定结果通过下述<表8>表示。表明在被人体吸收时，本发明的生物转化人参组合物可以用作起清除自由基的抗氧化作用从而防止老化的物质。
[表8]
| 组分 | 5％抑制浓度(mM) | |
| DPPH游离基 | 超氧化物自由基 | |
| 普通人参提取物 | 0.8 | 0.14 |
| 生物转化人参 | 0.7 | 0.11 |
| 咖啡酸 | 0.004 | 0.004 |
<试验例8：大肠癌/肝脏损伤诱发β-葡糖醛酸糖苷酶的抑制效果>
已知大肠癌和肝脏损伤引起人的肠道细菌产生β-葡糖醛酸糖苷酶，抑制这种酶的物质具有预防大肠癌和肝脏损伤的效果(D.H.Kim，I.S.Jang，J.B.Park，S.W.Lee，Protective roles of mushrooms inexperimental colon rcinogenesis.Arch.Pharm.Res.18，79-83，1995；D.H.Kim，S.B.Shim，N.J.Kim，I.S.Jang，β-glucuronidase-inhibitoryactivity and hepatoprotective effects of Ganoderma lucidum.Biol.Pharm.Bull.22，162-164，1999)。
然后，采用Kim等的方法(D.H.Kim，S.B.Shim，N.J.Kim，I.S.Jang，β-glucuronidase-inhibitory activity and hepatoprotective effects ofGanoderma lucidum.Biol.Pharm.Bull.22，162-164，1999)确定人参和生物转化人参是否抑制β-葡糖醛酸糖苷酶。
首先，用Kim等的方法培养从人的肠内分离的大肠杆菌HGU-3菌株，精制β-葡糖醛酸糖苷酶。加入50mM人参缓冲液0.38ml，20mM对硝基苯基-β-D-葡糖苷酸(Sigma公司，美国)0.02ml、水或人参提取液0.05ml和酶液0.05ml反应30分钟后，加入0.2N NaOH0.5ml停止反应，在405nm处测定吸光度，计算抑制活性。
测定结果通过下述<表9>表示。测定结果表明本发明的生物转化人参抑制大肠癌和肝脏损伤诱发的β-葡糖醛酸糖苷酶，可以用作大肠癌和肝脏损伤的预防物质。
[表9]
| 组分 | IC50(mg/ml) |
| 普通人参提取物 | 0.2 |
| 生物转化人参 | 0.1 |
| 糖二酸1，4-内酯 | 0.004 |
[发明效果]
通过上述，本发明的实施例中的生物转化人参组合物及其制备方法通过保持(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人参二醇+人参皂苷F)/(人参皂苷Rc+人参皂苷Rd+人参皂苷Rbl+人参皂苷Rb2)的比在0.1或0.1以上而提供抗癌成分被大幅度增强的生物转化人参组合物。
而且，本发明的实施例中的生物转化人参组合物及其制备方法通过对人参原材料中含有的皂苷成分进行生物转化，生成生理活性高的代谢物，能使皂苷等有效成分含量低的不适合用作人参加工物原料的人参叶等原材料也灵活使用。
而且，本发明的实施例的生物转化人参组合物及其制备方法具有在被人体吸收时，抑制组胺游离的抗变应性作用、自由基清除的抗氧化作用从而抑制老化、抑制肠道细菌产生β-葡糖醛酸糖苷酶从而预防大肠癌和肝脏损伤的效果。
Claims (5)
1.一种生物转化人参组合物用于生产药物的用途，所述药物为抗变态反应药，其在被人体吸收时，抑制组胺的游离，其中在所述人参组合物中，(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人参二醇+人参皂苷F)/(人参皂苷Rc+人参皂苷Rd+人参皂苷Rb1+人参皂苷Rb2)的比为0.1或0.1以上。
2.一种生物转化人参组合物用于生产药物的用途，所述药物为抗癌药，其在被人体吸收时，抗癌，并通过清除自由基而起抗氧化作用，用作防止老化的物质，其中在所述人参组合物中，(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人参二醇+人参皂苷F)/(人参皂苷Rc+人参皂苷Rd+人参皂苷Rb1+人参皂苷Rb2)的比为0.1或0.1以上。
3.一种生物转化人参组合物用于生产药物的用途，所述药物用于预防大肠癌和肝脏损伤，其在被人体吸收时，抑制肠道细菌产生的β-葡糖醛酸糖苷酶的生成，其中在所述人参组合物中，(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人参二醇+人参皂苷F)/(人参皂苷Rc+人参皂苷Rd+人参皂苷Rb1+人参皂苷Rb2)的比为0.1或0.1以上。
4.一种人参组合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
将人参原材料在水中悬浮，向其中加入双岐杆菌KK-1、双岐杆菌KK-2、双歧杆菌K-103和双歧杆菌K-506中的至少一种乳酸菌，并且培养24～72小时，从而制备生物转化人参液；以及
将经过以上步骤加工的生物转化人参液浓缩或冷冻/干燥，并且将该生物转化人参液离心分离，过滤上清液，从而得到生物转化人参浓缩液。
5.根据权利要求4的生物转化人参组合物的制备方法，其特征在于，使用生人参、红参、白参、尾参、人参叶、人参提取液和人参粉末中的任一种或多种作为所述人参原材料。
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