CN1559453A - 一种抗癌中药冻干粉针剂的制备方法 - Google Patents

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本发明公开了一种抗癌中药冻干粉针剂的制备方法，其特征在于该冻干粉针剂由中药人参、黄芪提取的有效部位和苦参素组成的，其中人参、黄芪采用先醇提后水提及超滤法进行纯化，得到有效部位—人参总皂苷、黄芪总皂苷和人参多糖、黄芪多糖；将有效部位与苦参素混合后按冻干粉针剂的要求制成抗癌中药冻干粉针剂，药理实验结果表明，本发明的一种抗癌中药冻干粉针剂具有较强的药理活性。

Description

一种抗癌中药冻干粉针剂的制备方法
所属技术领域
本发明属于中药制药领域，具体涉及一种抗癌中药冻干粉针剂的制备方法。
背景技术
癌症是一类严重威胁人类生命和健康的疾病。据最新的统计资料报道，我国每年新发现的癌症病人约100万左右，在全球癌症每年夺去大约600万人生命，并把1000万人置于死亡边缘，随着人类生存环境的日益恶化，癌症的发生率呈逐年上升趋势。世界卫生组织预测21世纪癌症将成为人类的“第一杀手”。目前现代医学对癌症的治疗，主要是手术治疗配合方、化疗。手术虽能虽能去除原发病灶，但不能从根本上杜绝癌细胞的再生与繁殖，而这正是日后癌症复发和转移的根源，放、化疗虽能杀灭癌细胞，但同时也使大量的正常组织细胞受到损害，诱发胃肠反应、骨髓抑制和肝肾、心脏功能损害，使病人的身体更加虚弱，难以接受进一步治疗。而中医中药治疗癌症更有悠久的历史，经过历代医家反复实践、潜心摸索，已形成了自身独特的理论体系。并在数千年的临床发展中形成了自己独特的一些治疗法则，如扶正祛邪、清热解毒、活血化瘀等法则，特别是近年来经过众多中医、中西医结合工作者的不断努力、大胆实践，也已证实中医药治疗癌症具有抗癌抑瘤，提高机体免疫功能，降低放化疗毒副反应，调节机体阴阳平衡，对癌症的治疗起到了药到病减或药到病除的效果，提高带癌生存率及生存质量的突出作用，特别是中医药对癌症手术后的康复，以及对放化疗的增效减毒方面发挥了重要的作用，深受患者的欢迎。有些病人采用中医药治疗后奇迹般的康复是不足为奇的。
人们对中药多糖的研究始于50年代末，对真菌多糖抗癌作用的发现，经过近年来对多糖不断的深入研究，对其作用又有了新的认识，它参与细胞的各种生命现象的调节，如免疫细胞间信息的传递和感受，与细胞表面的多糖体的介导密切相关。
人参是长白山区盛产的道地药材之一，以其根部入药，具有“大补元气，固脱生津，安神益智”等良好作用，是著名的珍贵药材。经国内外学者研究证实，人参中含有人参皂苷、人参多糖、人参挥发油等有效成分，人参多糖药理实验研究证实：人参多糖对免疫功能有刺激作用，可以促进人体非特异性免疫力的提高，人参多糖主要由半乳糖，半乳糖醛酸、阿拉伯糖和鼠李糖等组成，毒理实验证实其无毒副作用；黄芪是一种常用中药，味甘、性温，有补气升阳、固表止汗、托毒排脓和生肌等功效，我国药典规定，药用黄芪有两种：豆科植物蒙古黄芪及膜荚黄芪的干燥根，近年来研究发现黄芪中除黄芪甲苷、黄酮等小分子化合物具有较强的生物活性，大分子化合物如黄芪多糖(APS)也同样具有多方面的活性，黄芪多糖能提高人体免疫功能，增强细胞生理代谢，提高巨噬细胞活性，是理想的免疫增强剂，它能促进T细胞、B细胞、NK细胞等免疫细胞的功能，对艾滋病等多种免疫缺陷症均有良好的防治作用，还有抑制EAS，双向调节血糖等作用，延缓细胞衰老，有利于延年益寿。当黄芪多糖与人参多糖配伍，可显著提高抗癌活性，降低化疗副作用，癌症患者化疗后使用该药，能明显升高白细胞的计数。
标准号为WS-11222(ZD-1222)-2002的药品标准中【制法】记录了黄芪、人参、苦参素组方的注射液的制法，该制备方法仅利用了人参、黄芪苷类组分，却使大量的具有抗肿瘤作用的人参多糖、黄芪多糖被舍弃，诚为可惜。
发明内容
基于以上情况，本发明不仅采用了现代超滤法工艺纯化人参多糖、黄芪多糖，从而为得到药理活性更强的制剂提供了物质基础。
本发明的目的是运用现代科技手段对人参、黄芪中抗癌活性很好的人参总皂苷、黄芪总皂苷、人参多糖、黄芪多糖进行提取纯化，采用冷冻干燥法制成一种用于治疗肿瘤的中药冻干粉针剂，使该注射制剂的抗癌药理作用较强。
本发明是通过以下技术方案实现的。
一.工艺制法
取人参饮片，放入中药多功能提取罐中，用70％-90％乙醇提取2-4小时，提取2-4次，提取液浓缩至相对密度为1.10-1.20的清膏，提取后的残渣另用；取黄芪饮片，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮2-4次，每次2-4小时，煎煮后，提取液浓缩至相对密度为1.10-1.20的清膏，与人参清膏合并，加入乙醇使醇浓度达到70％-90％，静置，过滤，滤液回收乙醇至尽，备用，沉淀与人参残渣混合后，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮3-5次，每次3-5小时，提取液合并过滤浓缩干燥粉碎，；取粉碎后的粉末用40℃-60℃的热水溶解完全，用0.1-0.3um滤芯过滤，滤液加热水保持温度为40℃-60℃，用截留分子量3000-10000的中空纤维柱进行超滤，超滤至原体积1/2-1/3时，加热水至原体积，保持温度为40℃-60℃，超滤时透过液弃去，循环液超滤3-5次，最后一次浓缩至糖度为1％-4％，备用。取上述备用原料，与苦参素混合，冷冻干燥后，按常规冻干粉针剂的要求制备成一种用于治疗肿瘤的中药冻干粉针剂。
二.检测分析
本发明的冻干粉针剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)
市售康艾注射液(北京白塔寺医药批发公司购买，长白山制药股份公司生产)
1.苷类的检测分析
(1)人参总皂苷的检测分析
按照WS3-B-3809-98中检测分析人参总皂苷的方法检测分析，经过计算得到人参总皂苷(以人参皂苷Re计)的含量，见表1：
(2)黄芪总皂苷的检测分析
按照《中华人民共和国药典》2000年版一部249页黄芪的【含量测定】进行检测分析，经过计算得到黄芪总皂苷(以黄芪甲苷计)的含量，见表1：
                表1两种制剂的各组分含量比较
组别 人参总皂苷(以人参皂苷Re计) 黄芪总皂苷(以黄芪甲苷计)
本发明的冻干粉针剂mg/g   72.3   89.4
市售康艾注射液mg/g   55.4   75.3
2.多糖的检测分析
运用高效液相色谱法进行检测分析。
各种单糖标准品均为生化试剂，其它为分析试剂。
仪器：Beckman-332型高效液相色谱仪，岛津RID-6A示差折光检测器，色谱柱MICROSORB-MVTM86-700-C5NH25μm。
方法：取样品加乙醇沉淀，用高速离心仪进行离心，离心沉淀物用蒸馏水溶解后，进样20ul。
经过检测分析计算，得到两种制剂多糖含量的比较，见表2：
          表2两种制剂多糖含量
组别 植物多糖含量mg/g
本发明的冻干粉针剂 398.7
市售康艾注射液 未检出
通过以上实验数据，我们可以得知本发明的提取纯化工艺制备得到制剂中有效部位比市售康艾注射液的有效部位的含量要高很多，因此，本发明的提取纯化工艺具有一定的实际意义。
二.药理实施例
实施例一
对小鼠S180肿瘤生长抑制作用
实验动物：健康小鼠，体重16-20g，雌雄各办。(北京中医药大学提供)
瘤株：小鼠S180(北京中医药大学提供)
实验药物：生理盐水(北京乾露春科技有限公司实验室提供)市售康艾注射液(北京白塔寺医药批发公司购买，长白山制药股份公司生产)
本发明的冻干粉针剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)
实验方法：取接种传代小鼠S180，在匀浆器中加入生理盐水，制成小鼠S180瘤匀浆液，再以生理盐水1∶3稀释，然后取0.2ml注入小鼠左腋下皮下，24小时称重，小鼠每日灌胃给药一次，给药容积相同(0.5ml/只)，共7天。停药次日处死小鼠，称体重并细心剥离皮下瘤块，于EM50电子天平称取瘤重，并计算抑瘤率，见表3：
    表3两种制剂对小鼠S180肿瘤生长抑制作用
组别 瘤体重量mg 抑瘤率
生理盐水 1.4965 100％
市售康艾注射液 0.9924 33.7％*
本发明的冻干粉针剂 0.8893 40.6％**
*P＜0.01，**P＜0.01，**P与*P比较＜0.05
实施例二
对大鼠肝肿瘤抑制的比较
实验动物：大鼠30只，150g～180g，雌雄不分，分成3组，每组10只，分别用于空白组、两种制剂实验组。
实验药物：生理盐水(北京乾露春科技有限公司实验室提供)市售康艾注射液(北京白塔寺医药批发公司购买，长白山制药股份公司生产)
本发明的冻干粉针剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)
实验方法：取大鼠作W256的肝内接种，接种7天后，用戊巴比妥钠按35mg/kg的剂量腹腔注射麻醉，固定，剖腹暴露肝，测量肝上肿瘤表面最大径(a)和最小径(b)，按(a*b2)/2＝V(肿瘤体积)。分离胃、十二指肠动脉、肝总动脉和肝固有动脉，结扎胃、十二指肠动脉远端，以银夹阻断肝总动脉，于手术放大镜下在胃十二指肠动脉上切口并插入外径0.3mm导管后再送入肝固有动脉，然后按实验分组分别注入受试药物，术后拔管结扎胃十二指肠动脉，放开肝总动脉银夹，再缝合切口，将大鼠置于动物室待苏醒，继续饲养观察，手术后8天，按上法检测肿瘤体积，见表1：
                           表4两种制剂对肿瘤的抑制
药物名称 给药前肿瘤体积mm3 给药后肿瘤体积mm3 体积变化百分数
空白组 3.85 5.13 +33.2％
市售康艾注射液 3.76 3.01 -19.9％*
本发明的冻干粉针剂 3.79 2.85 -24.8％**
注：**P＜0.01，*P＜0.01，**与*比较P＜0.05
按上述方法，在进行实验，观察大鼠存活天数，见表5
         表5大鼠存活天数比较
药物名称 存活天数(平均数)
空白组 17.2天
市售康艾注射液 21.8天*
本发明的冻干粉针剂 28.3天**
注：**P＜0.01，*P＜0.01，**与*比较P＜0.05
实施例三
物理、化学和生物因素均能诱发癌症，但人癌发病原因的80％-90％认为是环境化学物质引起的。
两种制剂对二乙基亚硝胺(DENA)诱发大鼠肝癌的抑制
实验动物：大鼠30只，120g左右，雌雄不分，分成3组，每组10只，分别用于空白组、两种制剂实验组。
实验药物：生理盐水(北京乾露春科技有限公司实验室提供)市售康艾注射液(北京白塔寺医药批发公司购买，长白山制药股份公司生产)
本发明的冻干粉针剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)
实验方法：用含二乙基亚硝胺(DENA)的饮水喂养大鼠，36周得原发性肝癌，分别给药，按实施例给药，按实施例二方法，计算得到见表6
                      表6两种制剂对肿瘤的抑制
药物名称 给药前肿瘤体积mm3 给药后肿瘤体积mm3 体积变化百分数
空白组 9.75 14.53 +49.0％
市售康艾注射液 9.87 7.34 -25.6％*
本发明的冻干粉针剂 9.96 6.98 -29.9％**
注：**P＜0.01，*P＜0.01，**与*比较P＜0.05
        表7大鼠存活天数比较
药物名称 存活天数(平均数)
空白组 11.5天
市售康艾注射液 16.6天*
本发明的冻干粉针剂 20.8天**
注：**P＜0.01，*P＜0.01，**与*比较P＜0.05
结论：通过以上药理实验表明，本发明的冻干粉针剂比市售康艾注射液的药理作用更好，有利于癌症的治疗。
三.制备实施例
实施例一
取人参饮片80克，放入中药多功能提取罐中，用70％乙醇提取2小时，提取2次，提取液浓缩至相对密度为1.10的清膏，提取后的残渣干燥后备用；取黄芪饮片200克，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮2次，每次2小时，煎煮后，提取液浓缩至相对密度为1.10的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使醇度达到70％，静置，过滤，滤液回收乙醇至尽，备用，沉淀干燥备用；取上述中干燥后的沉淀与残渣混合后，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮3次，每次3小时，提取液合并浓缩干燥粉碎；取粉碎后的粉末用40℃的热水溶解完全，用0.1滤芯过滤，滤液加热水保持温度为40℃，用截取分子量3000的中空纤维柱进行超滤，超滤至原体积1/2时，加热水至原体积，保持温度为40℃，超滤时透过液弃去，循环液超滤3次，最后一次浓缩至糖度为1％，备用。取上述备用原料，与苦参素5克混合，冷冻干燥后，按冻干粉针剂的要求制备成一种用于治疗肿瘤的中药冻干粉针剂。
实施例二
取人参饮片120克，放入中药多功能提取罐中，用90％乙醇提取4小时，提取4次，提取液浓缩至相对密度为1.20的清膏，提取后的残渣干燥后备用；取黄芪饮片，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮4次，每次4小时，煎煮后，提取液浓缩至相对密度为1.20的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使醇度达到90％，静置，过滤，滤液回收乙醇至尽，备用，沉淀干燥备用；取上述中干燥后的沉淀与残渣混合后，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮5次，每次5小时，提取液合并浓缩干燥粉碎；取粉碎后的粉末用60℃的热水溶解完全，用0.3um滤芯过滤，滤液加热水保持温度为60℃，用截取分子量10000的中空纤维柱进行超滤，超滤至原体积1/3时，加热水至原体积，保持温度为60℃，超滤时透过液弃去，循环液超滤5次，最后一次浓缩至糖度为4％，备用。取上述备用原料，与苦参素20克混合，冷冻干燥后，按冻干粉针剂的要求制备成一种用于治疗肿瘤的中药冻干粉针剂。
实施例三
取人参饮片100克，放入中药多功能提取罐中，用80％乙醇提取3小时，提取3次，提取液浓缩至相对密度为1.15的清膏，提取后的残渣干燥后备用；取黄芪饮片300克，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮3次，每次3小时，煎煮后，提取液浓缩至相对密度为1.15的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使醇度达到80％，静置，过滤，滤液回收乙醇至尽，备用，沉淀干燥备用；取上述中干燥后的沉淀与残渣混合后，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮4次，每次4小时，提取液合并浓缩干燥粉碎；取粉碎后的粉末用50℃的热水溶解完全，用0.2um滤芯过滤，滤液加热水保持温度为50℃，用截留分子量8000的中空纤维柱进行超滤，超滤至原体积1/2时，加热水至原体积，保持温度为50℃，超滤时透过液弃去，循环液超滤4次，最后一次浓缩至糖度为3％，备用。取上述备用原料，与苦参素10克混合，冷冻干燥后，按冻干粉针剂的要求制备成一种用于治疗肿瘤的中药冻干粉针剂。
实施例四
取人参饮片1000克，放入中药多功能提取罐中，用75％乙醇提取3小时，提取3次，提取液浓缩至相对密度为1.10的清膏，提取后的残渣干燥后备用；取黄芪饮片3000克，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮3次，每次3小时，煎煮后，提取液浓缩至相对密度为1.10的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使醇度达到85％，静置，过滤，滤液回收乙醇至尽，备用，沉淀干燥备用；取上述中干燥后的沉淀与残渣混合后，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮3次，每次3小时，提取液合并浓缩干燥粉碎；取粉碎后的粉末用45℃的热水溶解完全，用0.1um滤芯过滤，滤液加热水保持温度为45℃，用截留分子量5000的中空纤维柱进行超滤，超滤至原体积1/2时，加热水至原体积，保持温度为45℃，超滤时透过液弃去，循环液超滤5次，最后一次浓缩至糖度为2％，备用。取上述备用原料，与苦参素100克混合，冷冻干燥后，按冻干粉针剂的要求制备成一种用于治疗肿瘤的中药冻干粉针剂。
实施例五
取人参饮片200克，放入中药多功能提取罐中，用85％乙醇提取2小时，提取3次，提取液浓缩至相对密度为1.20的清膏，提取后的残渣干燥后备用；取黄芪饮片600克，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮4次，每次2小时，煎煮后，提取液浓缩至相对密度为1.20的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使醇度达到85％，静置，过滤，滤液回收乙醇至尽，备用，沉淀干燥备用；取上述中干燥后的沉淀与残渣混合后，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮5次，每次3小时，提取液合并浓缩干燥粉碎，；取粉碎后的粉末用55℃的热水溶解完全，用0.2um滤芯过滤，滤液加热水保持温度为55℃，用截留分子量为5000中空纤维柱进行超滤，超滤至原体积1/3时，加热水至原体积，保持温度为55℃，超滤时透过液弃去，循环液超滤4次，最后一次浓缩至糖度为3％，备用。取上述备用原料，与苦参素20克混合，冷冻干燥后，按冻干粉针剂的要求制备成一种用于治疗肿瘤的中药冻干粉针剂。
实施例六
取人参饮片2000克，放入中药多功能提取罐中，用75％乙醇提取4小时，提取2次，提取液浓缩至相对密度为1.20的清膏，提取后的残渣干燥后备用；取黄芪饮片6000克，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮4次，每次2小时，煎煮后，提取液浓缩至相对密度为1.10的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使醇度达到80％，静置，过滤，滤液回收乙醇至尽，备用，沉淀干燥备用；取上述中干燥后的沉淀与残渣混合后，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮4次，每次4小时，提取液合并浓缩干燥粉碎；取粉碎后的粉末用50℃的热水溶解完全，用0.1um滤芯过滤，滤液加热水保持温度为50℃，用截留分子量8000中空纤维柱进行超滤，超滤至原体积1/3时，加热水至原体积，保持温度为50℃，超滤时透过液弃去，循环液超滤4次，最后一次浓缩至糖度为2％，备用。取上述备用原料，与苦参素200克混合，冷冻干燥后，按冻干粉针剂的要求制备成一种用于治疗肿瘤的中药冻干粉针剂。
实施例七
取人参饮片600克，放入中药多功能提取罐中，用90％乙醇提取4小时，提取3次，提取液浓缩至相对密度为1.15的清膏，提取后的残渣干燥后备用；取黄芪饮片1800克，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮3次，每次2小时，煎煮后，提取液浓缩至相对密度为1.10的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使醇度达到70％，静置，过滤，滤液回收乙醇至尽，备用，沉淀干燥备用；取上述中干燥后的沉淀与残渣混合后，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮5次，每次3小时，提取液合并浓缩干燥粉碎；取粉碎后的粉末用50℃的热水溶解完全，用0.2um滤芯过滤，滤液加热水保持温度为50℃，用截留分子量5000中空纤维柱进行超滤，超滤至原体积1/3时，加热水至原体积，保持温度为50℃，超滤时透过液弃去，循环液超滤5次，最后一次浓缩至糖度为2％，备用。取上述备用原料，与苦参素60克混合，冷冻干燥后，按冻干粉针剂的要求制备成一种用于治疗肿瘤的中药冻干粉针剂。

Claims (2)

1.一种抗癌中药冻干粉针剂的制备方法，其特征包括以下步骤：
(1)称取下述重量配比的原料：人参80～120份，黄芪200～400份，苦参素5～20份；
(2)取人参饮片，放入中药多功能提取罐中，用70％-90％乙醇提取2-4小时，提取2-4次，提取液浓缩至相对密度为1.10-1.20的清膏，提取后的残渣干燥后备用；
(3)取黄芪饮片，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮2-4次，每次2-4小时，煎煮后，提取液浓缩至相对密度为1.10-1.20的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使醇度达到70％-90％，静置，过滤，滤液回收乙醇至尽，备用，沉淀干燥；
(4)取(3)中干燥后的沉淀与(2)中的残渣混合后，放入中药多功能提取罐中，用水煎煮3-5次，每次3-5小时，提取液合并浓缩干燥粉碎，备用；
(5)取(4)中粉碎后的粉末用40℃-60℃的热水溶解完全，用0.1-0.3um滤芯过滤，滤液加热水保持温度为40℃-60℃，用中空纤维柱进行超滤，超滤至原体积1/2-1/3时，加热水至原体积，保持温度为40℃-60℃，超滤时透过液弃去，循环液超滤3-5次，最后一次浓缩至糖度为1％-4％，备用；
(6)取2中(3)和(5)的备用原料，与苦参素混合后，冷冻干燥，按常规冻干粉针剂的要求制备成一种抗癌中药冻干粉针剂。
2.根据权利要求1中所述的中空纤维超滤柱的截留分子量为3000-10000。
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