CN101433575B - 一种乌桕种子提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种乌桕种子提取物,是将乌桕种子粉碎后,用醇溶液提取,再用低极性有机溶剂进行萃取获得。经动物抗肿瘤实验证明,该提取物对各种肿瘤均有明显的抑制作用。
Description
技术领域:
本发明涉及中药制药领域,具体涉及一种乌桕种子提取物及其制备方法。
背景技术:
乌桕Sapium sebiferum(L.)Roxb.为大戟科乌桕属植物,为我国一民间常用中药,以根皮、树皮、茎叶入药,以种子入药较为少见。根皮及树皮四季可采,去栓皮,切片晒干;茎叶多鲜用或晒干,全年可采;秋季采收种子。据《全国中草药汇编》记载,本品性味苦,微温。入肺、脾、肾、大肠经。有小毒。功能主治为杀虫,解毒,利尿,通便。用于血吸虫病,肝硬化腹水,大小便不利,毒蛇咬伤;外用治疔疮,鸡眼,乳腺炎,跌打损伤,湿疹,皮炎。用法用量为根皮1~3钱;叶3~5钱;外用适量,鲜叶捣烂敷患处,或煎水洗。副作用为呕吐较剧,溃疡病患者忌服。
发明内容:
本发明的目的在于提供一种乌桕种子提取物及其制备方法,所述的这种乌桕种子提取物及其制备方法要解决现有技术中的药物治疗肿瘤效果不佳的技术问题。
本发明提供了一种乌桕种子提取物,其特征在于:是将乌桕种子粉碎后,用醇溶液提取,再用低极性有机溶剂进行萃取获得。
本发明还提供了上述的一种乌桕种子提取物的制备方法,包括下列步骤,
1)将乌桕种子粉碎,
2)用乌桕种子的重量1~15倍的醇溶液提取;
3)合并提取液,回收溶剂后的残留物加入乌桕种子的重量1~15倍的水溶解,再用乌桕种子重量1~15倍的低极性有机溶剂萃取;
4)萃取液回收溶剂后即得。
进一步的,所述的醇溶液选自浓度为5-95%的甲醇、或者5-95%的乙醇、或者5-95%的丙醇及、或者5-95%的丁醇。
进一步的,所述的醇溶液提取的方法选自浸渍法、或者渗漉法、或者加热回流法。
进一步的,所述的低极性有机溶剂选自汽油、或者乙醚、或者石油醚、或者烷烃。
本发明还提供了上述的乌桕种子提取物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。
进一步的,其中的肿瘤包括乳腺癌、或者卵巢癌、或者宫颈癌、或者肝癌、或者肉瘤实体瘤、或者Lewis肺癌、或者骨髓瘤、或者白血病、或者胃癌。
经动物抗肿瘤实验证明,该提取物对各种肿瘤均有明显的抑制作用,剂量从0.1至1g/kg时,其抑瘤作用逐渐增强,实验结果:对裸鼠乳腺癌抑瘤率分别为45.16、58.32、71.45%,对裸鼠卵巢癌抑瘤率分别为43.58、57.26、70.53%,对小鼠腹水型宫颈癌抑瘤率分别为42.94、55.84、69.37%,对小鼠肝癌H22实体瘤抑瘤率分别为49.08%、63.26%、76.34%,对小鼠肉瘤S180(实体型)抑瘤率分别为52.63%、62.37%、75.96%,对小鼠Lewis肺癌抑瘤率分别为44.96%、52.27%、66.03%,对移植于裸鼠的人体肝癌QGY抑瘤率分别为39.85%、61.67%、78.34%,对人体胃癌MKN45抑瘤率分别为44.69%、43.05%、53.85%,对人体骨髓瘤KM3抑瘤率分别为47.67%、66.23%、75.39%,对人体白血病K562抑瘤分别为42.81%、47.38%、68.46%。实验结果重复性好,统计分析表明,该提取物各剂量组的作用与对照组之间差异非常显著(P<0.01)。由此可知,本发明具有明显的抗肿瘤效果。
具体实施方式:
实施例1:
乌桕种子粉末加5倍量的95%乙醇回流提取1小时,过滤后的残渣加4倍量的95%乙醇回流提取1小时,过滤,4倍量再重复提取一次合并三次滤液,60℃,700mmHg回收乙醇,浓缩至近无乙醇味,加水至生药重量的0.8倍,加等量的石油醚(60~90℃)萃取,回收石油醚层后的粗提物,得率约为40%。
实施例2:
生药粉末加5倍量的85%乙醇回流提取1.5小时,过滤后的残渣加4倍量的85%乙醇回流提取1小时,过滤,4倍量再重复提取一次合并三次滤液,60C,700mmHg回收乙醇,浓缩至近无乙醇味,加水至生药重量的1.0倍,加等量的石油醚(30~60℃)萃取,回收石油醚层后的粗提物,得率约为38%。
实施列3:
配方:乌桕种子提取物2.5g
乳糖6.0g
微晶纤维素2.0g
硬脂酸镁0.3g
将上述成分混合均匀制成颗粒过20~80目筛,于40-80℃干燥,压片即得。
实施例4:
配方:乌桕种子提取物2.0g
淀粉4.0g
微晶纤维素3.0g
滑石粉0.5g
将上述成分混合均匀制成颗粒过20~80目筛,于40~80℃干燥,装入0~3号胶囊即得。
实施例5:
配方:乌桕种子提取物5.0g
辛癸酸三苷酯6.0g
羟苯乙酯0.03g
将上述组分混匀,装入软胶囊即得。
实施例6:
配方:乌桕种子提取物5.0g
丙二醇50.0ml
将上述组分混溶,滤过,灭菌,采用安瓿灌封即得。
实施例7:
用本发明乌桕种子中提取的有效部位进行药效学试验、急性毒性、一般药理学和长期毒性试验:
一、对乳腺癌,卵巢癌,宫颈癌,小鼠肝癌H22、S180肉瘤、Lewis肺癌对人体骨髓瘤KM3对人体白血病K562和移植于裸鼠的人体肿瘤的疗效
1、试验样品:
名称:WJ-01(实施例3的产品)、WJ-02(实施例4的产品)、WJ-03(实施例5的产品)
性状:油状物
2、阳性对照药物
名称:环磷酰胺(CTX)
规格:200mg/瓶
配制方法:用生理盐水配制成溶液
3、试验动物:
品系:昆明种小鼠
体重:19-21g
性别:雌雄兼用,同批实验同一性别
每组动物数:10只
4、移植性肿瘤:
乳腺癌,卵巢癌,宫颈癌,小鼠肝癌H22(腹水型),S180肉瘤(腹水型)、Lewis肺癌、骨髓瘤KM3、白血病K562保种维持。
5、试验方法:
取生长良好的小鼠肿瘤,用生理盐水稀释成(1-2)X107celVml浓度的细胞悬液,每只小鼠腋皮下接种0.2ml,随机分组,设生理盐水组、CTX组(30mg/kg),WJ Sample设3个剂量组,分别为0.1、0.5和1g/kg,给药体积为0.5ml/20g体重。接种后次日起给药,连续经口灌胃7天。接种后10~14日脱颈处死动物,称体重后解剖取瘤块,称瘤重,计算抑瘤率。实验重复三批。
6、试验结果:
该部位的抗肿瘤的药效实验显示,对裸鼠乳腺癌有明显的抑制作用,剂量从0.1、0.5、1g//kg时,其抑瘤作用逐渐增强,三批实验平均抑瘤率分别为45.16、58.32、71.45%。三批实验结果重复性好,统计分析表明,该部位各剂组的抑瘤作用与对照组之间的差异非常显著(P<0.01)。
该部位对裸鼠卵巢癌有明显的抑制作用,剂量从0.1、0.5、1g//kg时,其抑瘤作用逐渐增强,三批实验平均抑瘤率分别为43.58、57.26、70.53%。三批实验结果重复性好,统计分析表明,该部位各剂组的抑瘤作用与对照组之间的差异非常显著(P<0.01)。
该部位对小鼠腹水型宫颈癌有明显的抑制作用,剂量从0.1、0.5、1g//kg时,其抑瘤作用逐渐增强,三批实验平均抑瘤率分别为42.94、55.84、69.37%。三批实验结果重复性好,统计分析表明,该部位各剂组的抑瘤作用与对照组之间的差异非常显著(P<0.01)。
该部位对小鼠肝癌H22实体瘤有明显的抑制作用,剂量从0.1、0.5、1g//kg时,其抑瘤作用逐渐增强,三批实验平均抑瘤率分别为49.08、63.26、76.34%。三批实验结果重复性好,统计分析表明,该部位各剂组的抑瘤作用与对照组之间的差异非常显著(P<0.01)。
该部位对小鼠肉瘤S180实体瘤亦有明显的抑制作用,剂量从0.1、0.5、1g//kg时,其抑瘤作用逐渐增强,三批实验平均抑瘤率分别为52.63、62.37、75.96%。三批实验结果重复性好,统计分析表明,该部位各剂量组的抑瘤作用与对照组之间的差异非常显著(P<0.01)。
该部位对小鼠肝癌Lewis肺瘤同样具有明显的抑制作用,剂量从0.1、0.5、1g//kg时,其抑瘤作用逐渐增强,三批实验平均抑瘤率分别为44.96、52.27、66.03%。三批实验结果重复性好,统计分析表明,该部位各剂量组的抑瘤作用与对照组之间的差异非常显著(P<0.01)。
该部位对移植于裸鼠的人体肝癌QGY、人体胃癌MKN45在见瘤(接种约7天)后开始给药具有明显的抑瘤作用,剂量从0.1、0.5、1g//kg时,对人体肝癌QGY的抑瘤率分别为39.85、61.67、78.34%,对人体胃癌MKN45的抑瘤率分别为44.69、43.05、53.85%。对人体骨髓瘤KM3的抑瘤率分别达47.67%、66.23%、75.39%对人体白血病K562的抑瘤分别为42.81%、47.38%、68.46%。实验结果重复性好,统计分析表明,该部位各剂量组的抑瘤作用与对照组之间的差异非常显著(P<0.01)。
该部位抗肿瘤药效实验的对照组为环磷酰胺(CTX)(0.03g/kg)。
二、毒理试验
1、本发明乌桕种子有效部位的小鼠急性毒性实验结果显示,小鼠给药后各组动物无明显异常,未发生死亡;观察其终止时处死全部存活动物进行解剖,尸检也未见明显异常变化。其小鼠口服给药,雄性小鼠的LD50>10g/kg,雌性小鼠的LD50>10g/kg。
2、SD大鼠口服三个月长期毒性实验结果表明,对一般症状(动物的活动、体重、精神状态、粪便等)、血液学、血清生化、尿常规、系统尸检等检查均未见与药物有关的明显毒性反应。给药3个月停药3周血液学、血清生化、尿常规、系统尸检及脏器系数等检查均未见与药物有关的明显毒性反应。
上述试验证明,本发明从乌桕种子中提取的有效部位安全无毒,且有明显的抗肿瘤作用。
Claims (5)
1.一种乌桕种子提取物,其特征在于:是将乌桕种子粉碎后,用醇溶液提取,再用低极性有机溶剂进行萃取获得,所述的醇溶液选自浓度为5-95%的甲醇、或者5-95%的乙醇、或者5-95%的丙醇、或者5-95%的丁醇,所述的低极性有机溶剂选自汽油、或者乙醚、或者石油醚、或者烷烃。
2.权利要求1所述的一种乌桕种子提取物的制备方法,其特征在于:包括下列步骤,
1)将乌桕种子粉碎;
2)用乌桕种子的重量1~15倍的醇溶液提取,所述的醇溶液选自浓度为5-95%的甲醇、或者5-95%的乙醇、或者5-95%的丙醇、或者5-95%的丁醇;
3)合并提取液,回收溶剂后的残留物加入乌桕种子的重量1~15倍的水溶解;再用乌桕种子重量1~15倍的低极性有机溶剂萃取,所述的低极性有机溶剂选自汽油、或者乙醚、或者石油醚、或者烷烃;
4)萃取液回收溶剂后即得。
3.根据权利要求2所述的一种乌桕种子提取物的制备方法,其特征在于:所述的醇溶液提取的方法选自浸渍法、或者渗漉法、或者加热回流法。
4.权利要求1所述的乌桕种子提取物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的乌桕种子提取物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用,其中的肿瘤包括乳腺癌、或者卵巢癌、或者宫颈癌、或者肝癌、或者肉瘤实体瘤、或者Lewis肺癌、或者骨髓瘤、或者白血病、或者胃癌。
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