CN100473388C - 一种从蝼蛄中提取的抗肿瘤有效部位及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及从蝼蛄中提取的抗肿瘤有效部位及制备方法。所述的有效部位是将蝼蛄整虫粉碎后，用醇溶液提取，再用低极性有机溶剂进行萃取后获得。该有效部位具有显著的抗肿瘤活性，可用于制备治疗抗肿瘤药物。
Description
技术领域：
本发明涉及中药制药领域，具体涉及从蝼蛄中提取的抗肿瘤有效部位及制备方法。
背景技术：
蝼蛄(Gryllotalpa africana Pal.de Beauvois)，为我国一传统的中药。据《中药大辞典》记载，蝼蛄性味咸，寒，主要作用为利水，通便，治水肿，石淋，小便不利，瘰疬，痈肿恶疮。临床使用方法为取蝼蛄去尽头、爪、翼，置锅内以文火焙焦，研成细末。每日2钱，分3次用开水或米汤送服，5～7天为一个疗程。
发明内容：
本发明所要解决的技术问题在于开发蝼蛄的新的药用部位，提供一种从蝼蛄中提取的具有抗肿瘤活性的有效部位。
本发明公开的蝼蛄抗肿瘤有效部位是将蝼蛄整虫粉碎后，用醇溶液提取，再用低极性有机溶剂进行萃取获得的提取物。
经动物抗肿瘤实验证明，该提取物对小鼠肝癌H22实体瘤、小鼠肉瘤S180(实体型)和小鼠Lewis肺癌有明显的抑制作用。剂量从0.1至1g/kg时，其抑瘤作用逐渐增强。1g/kg剂量时抑瘤作用平均分别达37.87％、44.30％、57.94％。三批实验结果重复性好，统计分析表明，该提取物各剂量组的作用与对照组之间差异非常显著(P<0.01)。对移植于裸鼠的人体肝癌QGY的抑瘤率分别达32.95％、54.55％、70.45％对人体胃癌MKN45的抑瘤分别为37.67％、34.25％、46.58％。对人体骨髓瘤KM3的抑瘤率分别达40.56％、58.34％、67.78％对人体白血病K562的抑瘤分别为35.28％、39.46％、61.15％。
本发明所要解决的另一技术问题在于公开上述从蝼蛄中提取的抗肿瘤有效部位的制备方法。
本发明公开的从蝼蛄中提取的抗肿瘤有效部位的制备方法包括下列步骤：
1、蝼蛄整虫粉碎；
2、用生药量1～10倍醇溶液提取；
3、合并提取液，回收溶剂后的残留物加入生药量1～10倍的水溶解，用生药量1～10倍的低极性有机溶剂萃取；
4、萃取液回收溶剂后即得有效部位。
本发明所述的醇溶液选自浓度为10～90％的甲醇，乙醇，丙醇及丁醇，醇溶液提取的方法包括浸出(浸渍)法，渗漉法，加热回流法。
本发明所述低极性有机溶剂选自各种规格的汽油，乙醚，各种规格的石油醚。
本发明所要解决的再一技术问题在于公开上述从蝼蛄中提取的有效部位在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。
用本发明方法获得的蝼蛄有效部位其抗肿瘤的范围包括小鼠肝癌H22实体瘤，小鼠肉瘤S180(实体型)，小鼠Lewis肺癌，骨髓瘤，白血病，胃癌。
本发明获得的蝼蛄有效部位可与药用辅料制成各种医学上可接受的制剂形式，用于上述肿瘤的治疗。
用本发明蝼蛄中提取的有效部位进行药效学试验、急性毒性、一般药理学和长期毒性试验：
一、对小鼠肝癌H22、S180肉瘤、Lewis肺癌对人体骨髓瘤KM3对人体白血病K562和移植于裸鼠的人体肿瘤的疗效
1、试验样品：
名称：长动
提供单位：上海医药工业研究院
批号：20030322-A，20030322-B，20030322-C
性状：提取物呈棕褐色
2、阳性对照药物
名称：环磷酰胺(CTX)
生产单位：上海华联制药有限公司
批号：010703
规格：200mg/瓶
配制方法：用生理盐水配制成溶液
3、试验动物：
品系：昆明种小鼠
来源：由本院动物房提供
合格证号：沪动合证字107号
体重：19-21g
性别：雌雄兼用，同批实验同一性别。
每组动物数：10只
4、移植性肿瘤：
小鼠肝癌H22(腹水型)，S180肉瘤(腹水型)、Lewis肺癌、骨髓瘤KM3、白血病K562保种维持。
5、试验方法：
取生长良好的小鼠肿瘤，用生理盐水稀释成(1-2)×107cell/ml浓度的细胞悬液，每只小鼠腋皮下接种0.2ml，随机分组，设生理盐水组、CTX组(30mg/kg)，长动设3个剂组，分别为0.1、0.1和1g/kg，给药体积为0.5ml/20g体重。接种后次日起给药，连续经口灌胃7天。接种后10～14日脱颈处死动物，称体重后解剖取瘤块，称瘤重，计算抑瘤率。实验重复三批。
6、试验结果：
该部分的抗肿瘤的药效实验显示，对小鼠肝癌H22实体瘤有明显的抑制作用，剂量从0.1、0.5、1g/kg时，其抑瘤作用逐渐增强，三批实验平均抑瘤率分别达41.15、55.97、68.63％三批实验结果重复性好，统计分析表明，该部位各剂组的抑瘤作用与对照组之间的差异非常显著(P<0.01)。
该部位对小鼠肉瘤S180实体瘤亦有明显的抑制作用，剂量从0.1、0.5、1g/kg时，其抑瘤作用逐渐增强，三批实验平均抑瘤率分别达45.01、54.53、68.95％。三批实验结果重复性好，统计分析表明，该部位各剂量组的抑瘤作用与对照组之间的差异非常显著(P<0.01)。
该部位对小鼠肝癌Lewis肺瘤同样具有明显的抑制作用，剂量从0.1、0.5、1g/kg时，其抑瘤作用逐渐增强，三批实验平均抑瘤率分别达37.87、44.30、57.94％。三批实验结果重复性好，统计分析表明，该部位各剂量组的抑瘤作用与对照组之间的差异非常显著(P<0.01)。
该部位对移植于裸鼠的人体肝癌QGY、人体胃癌MKN45在见瘤(接种约7天)后工始给药具有明显的抑瘤作用，剂量从0.1、0.5、1g/kg时，对人体肝癌QGY的抑瘤率分别达32.95、54.55、70.45％，对人体胃癌MKN45的抑瘤率分别为37.67、34.25、46.58％。对人体骨髓瘤KM3的抑瘤率分别达40.56％、58.34％、67.78％对人体白血病K562的抑瘤分别为35.28％、39.46％、61.15％。
该部位抗肿瘤药效实验的对照组为环磷酰胺(CTX)(0.03g/kg)。
二、毒理试验
1、本发明蝼蛄有效部位的小鼠急性毒性实验结果显示，小鼠给药后各组动物无明显异常，未发生死亡；观察其终止时处死全部存活动物进行解剖，巨检也未见明显异常变化。其小鼠口服给药，雄性小鼠的LD50>10g/kg，雌性小鼠的LD50>10g/kg。
2、SD大鼠口服三个月长期毒性实验结果表明，对一般症状(动物的活动、体重、精神状态、粪便等)、血液学、血清生化、尿常规、系统尸检等检查均未见与药物有关的明显毒性反应。给药3个月停药3周血液学、血清生化、尿常规、系统尸检及脏器系数等检查均未见与药物有关的明显毒性反应。
上述试验证明，本发明从蝼蛄中提取的有效部位安全无毒，且有明显的抗肿瘤作用。
具体实施方式：
实施例1、
生药粉末加5倍量的95％乙醇回流提取1小时，过滤后的残渣加4倍量的95％乙醇回流提取1小时，过滤，4倍量再重复提取一次合并三次滤液，60℃，700mmHg回收乙醇，浓缩至近无乙醇味，加水至生药重量的0.8倍，加等量的石油醚(60°～90℃)萃取，回收石油醚层后的粗提物，得率约为20％。
实施例2
生药粉末加5倍量的85％乙醇回流提取1.5小时，过滤后的残渣加4倍量的85％乙醇回流提取1小时，过滤，4倍量再重复提取一次合并三次滤液，60℃，700mmHg回收乙醇，浓缩至近无乙醇味，加水至生药重量的1.0倍，加等量的石油醚(30°～60℃)萃取，回收石油醚层后的粗提物，得率约为20％。
实施列3、
处方：
蝼蛄提取物 0.2g(实施例1制得)
淀粉 0.01g
乳糖 0.5g
微晶纤维素 0.5g
硬脂酸镁 0.02g
滑石粉 0.01
将上述成分混合均匀制成颗粒过20～80目筛，于40～80℃干燥，
压片即得。
实施列4制剂
处方：
蝼蛄提取物 0.3g(实施例2制得)
淀粉 0.01g
乳糖 0.4g
微晶纤维素 0.5g
硬脂酸镁 0.02g
滑石粉 0.03g
将上述成分混合均匀制成颗粒过20～80目筛，于40～80℃干燥，装入0～3号胶囊，即得。
实施例5
处方：
蝼蛄提取物 0.5g
聚乙二醇 0.7g
植物油 0.09g
抗氧化剂 0.02g
将上述组分混匀，装入软胶囊即得。
Claims (4)
1、一种从蝼蛄中提取的有效部位，其特征在于所述的有效部位是将蝼蛄整虫粉碎后，用85％—95％乙醇溶液提取，提取液回收溶剂后的残渣再用石油醚进行萃取获得的提取物。
2、根据权利要求1所述的从蝼蛄中提取的有效部位的制备方法，其特征在于所述的制备方法包括下列步骤：
1)蝼蛄整虫粉碎；
2)用生药量1-10倍的85％-95％乙醇溶液提取；
3)合并提取液，回收溶剂后的残留物加入生药量1-10倍的水溶解，用生药量1-10倍的石油醚萃取；
4)萃取液回收溶剂后即得蝼蛄提取物。
3、一种如权利要求1所述的从蝼蛄中提取的有效部位在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。
4、根据权利要求3所述的从蝼蛄中提取的有效部位在制备治疗抗肿瘤药物中的应用，其中所述的肿瘤包括肝癌，肉瘤实体瘤，Lewis肺癌，骨髓瘤，白血病和胃癌。
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