CN104435293B - 异型南五味子总三萜乙醇提取物在制备抗关节炎药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种异型南五味子乙醇提取物在制备抗关节炎药物中的应用，特别涉及异型南五味子总三萜提取物在制备抗类风湿性关节炎药物中的应用。

Description

异型南五味子总三萜乙醇提取物在制备抗关节炎药物中的 应用

技术领域

本发明涉及异型南五味子总三萜乙醇提取物在制备抗关节炎的药物中的应用。

背景技术

类风湿性关节炎是一种慢性、对称性、系统性的自身免疫炎性疾病，表现为关节滑膜细胞浸润，血管翳形成，软骨及骨组织的侵蚀，最终导致关节结构的破坏、畸形。RA呈全球性分布，患病率高(0.5～1％)，病程反复、缠绵不愈，致畸、致残率高，严重影响人类健康。目前使用的西医疗法皆有不同程度的毒副作用或其他副作用，其预后仍存在诸多问题。故研制抗类风湿性关节炎的药物，对于缓解该类疾病的临床症状，提高病人的生存质量，保障生产力，具有积极的意义。

异型南五味子(Kadsura heteroclita(Roxb)Craib(Schizandraceae))，为木兰科南五味子属植物，其味甘、微辛，性温，具有祛风除湿、补血活血、行气止痛之功效，民间常以其藤茎治疗风湿痹痛、胃脘痛、骨痛等。国内外文献报道异型南五味子藤茎含有三萜、木脂素、倍半萜、脂肪酸、挥发油等化学成分，而三萜类成分是该植物主要的生物活性成份，其中发明人已得到多个结构新颖的异型南五味子三萜类成分。药理研究表明，异型南五味子的三萜化合物具有抗HIV、抗HBV、抗白血病、抗氧化活性、细胞毒活性和肝损伤保护的活性，但至今未见关于异型南五味子总三萜乙醇提取物治疗关节炎的文献报道。

发明内容

本发明提供异型南五味子总三萜乙醇提取物在制备抗关节炎药物中的应用。

根据本发明的应用，其中所述的关节炎优选是类风湿性关节炎。

根据本发明的应用，其中所述的异型南五味子总三萜提取物是按照如下 方法制备的，该方法包括如下步骤：

(1)制备异型南五味子粗提物：将异型南五味子藤茎以6～10倍重量90～100％乙醇回流提取2～5次，每次0.5～4小时，滤过，得提取液，将提取液合并、浓缩，即得异型南五味子粗提物；

(2)将步骤(1)制得的异型南五味子粗提物进一步纯化得到总三萜提取物。

根据本发明的应用，其中步骤(2)的进一步纯化是用正反相硅胶柱色谱、凝胶色谱、制备型高效液相色谱或醋酸乙酯萃取纯化。

根据本发明的应用，其中所述凝胶色谱柱为Sephadex LH-20色谱柱。

根据本发明的应用，其中步骤(1)所述乙醇回流是用7～9倍重量95％乙醇回流3～4次，每次1～3小时。

根据本发明的应用，其中步骤(1)所述乙醇回流是用8倍重量95％乙醇回流3次，每次2小时。

根据本发明的应用，优选具体包括如下步骤：

(1)取异型南五味子材藤茎，加8倍其重量的95％乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，合并提取液，提取液回收乙醇并浓缩成稠膏；

(2)加适量无水乙醇溶解，与同重量的大孔吸附树脂拌匀，加入10倍重量以上无水乙醇量的水，搅拌，加于已处理过大孔吸附树脂柱上，先用30％的低浓度乙醇洗脱至无色，将此30％乙醇洗脱液弃去，再用90％的乙醇洗脱至无色，收集此90％乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩成相对密度1.25的稠膏，真空干燥，即得。

本发明的异型南五味子总三萜提取物中总三萜的含量不低于55％。异型南五味子总三萜提取物中总三萜的含量是按照高效液相色谱方法测定的(见中国药典2010版附录VD项下外标测定法)。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：经药效学及毒理学试验证明，该异型南五味子总三萜乙醇提取物能显著改善关节炎，同时具有较好的抗炎镇痛作用；本发明的异型南五味子总三萜乙醇提取物不仅有效成分明确，而且，总三萜含量高，杂质少，更有利于保证药物的安全性和有效性；同时，该异型南五味子总三萜乙醇提取物不同于化学药物单一成分起效，而是“多成分、多途径、 多靶点”起作用，毒副作用小。

附图说明

图1显示本发明的异型南五味子总三萜乙醇提取物对胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠的影响，说明异型南五味子总三萜乙醇提取物可明显改善胶原诱导大鼠关节炎症状。图1-A、1-B、1-C是造模第25天的模型大鼠，由图1-A可见其后足发红肿胀明显，图1-B阳性对照组大鼠无红肿表现，图1-C异型南五味子总三萜乙醇提取物给药组大鼠红肿表现不明显。

具体实施方式

本发明的异型南五味子总三萜乙醇提取物适宜以药物组合物的形式给药。这类组合物可以按照常规方式与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合使用。若有可能，在治疗上将本发明的异型南五味子总三萜乙醇提取物作为原料药给药，优选活性成分直接作为药物制剂。在与其它成分相容和对服药者无害的意义上，载体必须是药学上可接受的。

因此，本发明的异型南五味子总三萜乙醇提取物的可以制成药物制剂，其包含本发明的异型南五味子总三萜乙醇提取物和一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，以及含有或不含其它治疗和/或预防性成分。这些制剂适用于口服、胃肠外(包括皮下例如注射或药库片；真皮内；鞘内；肌内例如药库；静脉内等)、直肠和局部(如舌下)给药，但最适合的给药途径应取决于患者的病症。该制剂可以是单位制剂，并且可以通过用药学领域熟知的任一种方法制备。所有方法包括使异型南五味子总三萜乙醇提取物与载体结合的步骤，该载体构成一种或多种辅助成分。一般来说，该制剂的制备过程如下：使本发明的异型南五味子总三萜乙醇提取物与液体载体、或微细粉碎的固体载体、或二者的结合均匀而紧密的结合，然后，如果必要的话，使产物成型为所必须的制剂。

通常可使用标准的制药技术，即可将本发明的异型南五味子总三萜乙醇提取物和药学上可接受的载体或赋形剂制得本发明药物组合物，这些方法包括混合、制粒和压制。本领域技术人员所熟知的是，药学上可接受的载体或赋形剂的形式和特性取决于与其混合的活性成分的量、给药途径和其它已知因素。

本文中，所用的药学上可接受的载体或赋形剂是可与药物组合物联 用给药的各种有机或无机的载体或赋形剂，例如用于固体制剂的赋形剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂和包衣剂；也可使用药用添加剂，例如着色剂和甜味剂。

其药物制剂形式可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂，例如糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂；胶囊剂，例如硬胶囊剂、软胶囊剂；口服液；口含剂；颗粒剂；冲剂；丸剂；散剂；膏剂；丹剂；混悬剂；粉剂；溶液剂；注射剂；栓剂；膏剂，例如软膏剂、硬膏剂；霜剂；喷雾剂；滴剂以及贴剂。本发明的制剂优选：口服剂型，如胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等；以及注射剂，如粉针剂、注射液、输液等。本发明的制剂最优选为片剂。

下面通过具体的实施例和实验例进一步说明本发明。下述实施例和实验例是用于说明本发明而不是对本发明的限制，根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。

实施例

实施例1异型南五味子总三萜乙醇提取物的制备方法

将异型南五味子材藤茎100kg，加95％的乙醇回流提取3次，每次2小时，每次加800kg95％的乙醇，滤过，合并提取液，提取液回收乙醇并浓缩成稠膏，加适量无水乙醇溶解，与同重量的大孔吸附树脂拌匀，加入10倍以上无水乙醇量的水，搅拌，加于已处理过大孔吸附树脂柱上，先用30％的低浓度乙醇洗脱至无色，将此30％乙醇洗脱液弃去，再用90％的乙醇洗脱至无色，收集此90％乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩成相对密度1.25的稠膏，真空干燥，即得到提取率为2％的异型南五味子总三萜乙醇提取物。该提取物中异型南五味子总三萜的含量为57.5％。

实施例2异型南五味子总三萜乙醇提取物的制备方法

将异型南五味子材藤茎100kg，加90％的乙醇回流提取5次，每次0.5小时，每次加600kg的乙醇，滤过，合并提取液，提取液回收乙醇并浓缩成稠膏，加适量无水乙醇溶解，与同重量的大孔吸附树脂拌匀，加入10倍以上无水乙醇量的水，搅拌，加于已处理过大孔吸附树脂柱上，先用30％的低浓度乙醇洗脱至无色，将此30％乙醇洗脱液弃去，再用90％的乙醇洗脱至无色，收集此90％乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩成相对密度1.25的稠膏，真空干燥，即得到提取 率为2％的异型南五味子总三萜乙醇提取物。该提取物中异型南五味子总三萜的含量为55.8％。

实施例3异型南五味子总三萜乙醇提取物的制备方法

将异型南五味子材藤茎100kg，加100％的乙醇回流提取2次，每次4小时，每次加1000kg的乙醇，滤过，合并提取液，提取液回收乙醇并浓缩成稠膏，加适量无水乙醇溶解，与同重量的大孔吸附树脂拌匀，加入10倍以上无水乙醇量的水，搅拌，加于已处理过大孔吸附树脂柱上，先用30％的低浓度乙醇洗脱至无色，将此30％乙醇洗脱液弃去，再用90％的乙醇洗脱至无色，收集此90％乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩成相对密度1.25的稠膏，真空干燥，即得到提取率为2％的异型南五味子总三萜乙醇提取物。该提取物中异型南五味子总三萜的含量为56.5％。

实验例

为考察本发明异型南五味子总三萜乙醇提取物的有效性和安全性，发明人分别以实施例1所述的提取物为试验药物，进行了药效学试验和毒理学试验考察，试验方法和结果等分别如下：

实验例1抗炎试验

动物：ICR小鼠，SPF级，鼠龄8～9周，体重18～22g，由湖南中医药大学动物中心提供；Wistar大鼠，SPF级，体重180～220g，由北京维通利华实验动物有限公司提供，动物合格证号：11400700018629，动物许可证号：SCXK(京)2012-0001。

药物：异型南五味子总三萜乙醇提取物(由实施例1制得)，实验时用生理盐水配制成溶液；吲哚美辛肠溶片，规格：25mg/片，由山西云鹏制药有限公司生产，批号：A120401；二甲苯(分析纯)，规格：500ml/瓶，重庆川东化工(集团)有限公司生产，批号：20111008；角叉菜胶，由Sigma公司生产，批号：1408463V。

一、对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响

试验方法：Wistar大鼠50只，按体重随机分成5组，每组10只，分别为：①空白对照组：蒸馏水1ml/100g体重灌胃；②吲哚美辛组：10mg/kg；③～⑤异 型南五味子总三萜乙醇提取物，分别灌胃200mg/kg、400mg/kg、800mg/kg。各组大鼠适应性喂养7天后，禁食不禁水48小时后进行试验。试验当日各组大鼠测定左、右后足正常足容积作为致炎前足容积，然后灌胃给药，给药1小时后，大鼠右足趾部皮内注射1.5％角叉菜胶0.1ml致炎，在大鼠致炎后1、2、3、4、5、6、7、8小时测定足容积，计算足肿胀度。

结果：见表1。表1显示本发明的异型南五味子总三萜乙醇提取物对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响(mean±SD，n＝10)，其中*vs模型组，P<0.05，说明结果有统计学差异；**vs模型组，P<0.01，结果有明显统计学差异。说明异型南五味子总三萜乙醇提取物有急性抗炎作用，且呈剂量依赖性。

结果：与模型组比较，异型南五味子总三萜乙醇提取物低、中、高剂量组均对角叉菜胶引起的大鼠足肿胀显示出一定的抑制作用(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比，异型南五味子总三萜乙醇提取物高剂量组于注射后第4、5、6、7、8h有极显著性差异(P<0.01)；中剂量组(400mg/kg)于注射后第5、7、8h有显著性差异(P<0.05)；低剂量组仅于注射后第7h有显著性差异(P<0.05)；阳性药吲哚美辛组(10mg/kg)，则于注射角叉菜胶后第1～8h各个时间点均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。而大鼠左足作为空白对照，于实验整个过程并未有体积的变化，说明右足肿胀是由角叉菜胶引起的。以上结果显示，异型南五味子总三萜乙醇提取物的急性抗炎作用呈剂量依赖性，其抑炎效果可于灌胃给药后至少持续9h。

二、对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

试验方法：取小鼠30只，按体重分层随机分为3组，每组10只，分别为：①空白对照组：蒸馏水0.2ml/10g体重；②吲哚美辛组：10mg/kg；③异型南五味子总三萜乙醇提取物200mg/kg。各组小鼠适应性喂养7天后，禁食不禁水24小时后进行试验。各组动物灌胃给药1次，给药1h后，取二甲苯30μl均匀涂布于小鼠右耳两面引起炎症。致炎15min后处死小鼠，剪下左右两侧耳片，用直径9mm的打孔器分别在左右两耳片的相同部位打下圆形耳片，精密称取两耳片重量。以左右两耳片重量的差值(mg)作为炎症肿胀度。

结果：见表2。表2显示本发明的异型南五味子总三萜乙醇提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(mean±SD，n＝10)，其中*vs模型组，P<0.05，说明结果有统 计学差异；**vs模型组，P<0.01，说明结果在统计学上有极显著性差异。说明异型南五味子总三萜乙醇提取物具有明显的抗炎作用，且呈量效关系，随着其中总三萜提取物剂量的增高，其效果增强。

结果：与模型组比较，异型南五味子总三萜乙醇提取物组(200mg/kg)可显著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀(P<0.01)。研究提示，异型南五味子总三萜乙醇提取物能够抑制炎症早期的渗出和水肿。

炎症抑制率(％)＝[(对照组肿胀度-给药组肿胀度)/对照组肿胀度]×100％

结果表明：异型南五味子总三萜乙醇提取物具有明显的抗炎作用，且呈量效关系，随着其中总三萜乙醇提取物剂量的增高，其效果增强。

实验例2镇痛试验(扭体法)

动物：ICR小鼠，SPF级，鼠龄8～9周，体重18～22g，由湖南中医药大学动物中心提供。

药物：异型南五味子总三萜乙醇提取物(由实施例1制得)；罗通定，规格：30mg/片，由四川康福来药业集团有限公司生产，批号：120601。实验时用生理盐水配制成溶液。

试验方法：取小鼠100只，随机分为10组，每组10只，分别为：给予0.8％醋酸的五个组：①对照组：蒸馏水0.2ml/10g体重；②吲哚美辛组：10mg/kg；③～⑤异型南五味子总三萜乙醇提取物，分别灌胃100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg；给予1.1％醋酸的五个组：①’对照组：蒸馏水0.2ml/10g体重；②’吲哚美辛组：10mg/kg；③’～⑤’异型南五味子总三萜乙醇提取物，分别灌胃100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg。各组小鼠适应性喂养7天后，禁食不禁水24小时后进行试验。灌胃给药2h后，①～⑤组每只小鼠腹腔注射0.8％的冰醋酸溶液0.2ml，①’～⑤’组每只小鼠腹腔注射1.1％的冰醋酸溶液0.2ml，并立即观察记录小鼠在15分钟内，出现扭体反应(腹部内凹，伸展后肢，臀部抬高)的次数。

镇痛百分率(％)＝[(对照组扭体次数-给药组扭体次数)/对照组扭体次数]×100％

结果：见表3。表3显示本发明的异型南五味子总三萜乙醇提取物对 0.8％浓度和1.1％浓度的醋酸致小鼠扭体的影响(mean±SD，n＝10)，其中*vs模型组，P<0.05，说明结果有统计学差异；**vs模型组，P<0.01，结果在统计学上有极显著性差异。说明异型南五味子总三萜乙醇提取物具有明显的镇痛作用。

结果：腹腔注射醋酸溶液后，各组小鼠均出现不同程度的扭体反应。与模型组比较，异型南五味子总三萜乙醇提取物低、中、高剂量组对不同浓度的醋酸引起的小鼠疼痛模型均有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01)。其中，以0.8％浓度的醋酸所致小鼠扭体实验中，异型南五味子总三萜乙醇提取物低、中、高剂量组呈剂量依赖性，其镇痛率分别为31.4％、41.6％、50.8％。而以1.1％浓度的醋酸所致小鼠扭体实验中，异型南五味子总三萜乙醇提取物低、中、高各个剂量仍显示出较强的急性镇痛作用，其镇痛率分别为39.1％、37.7％、35.9％。以上结果表明，异型南五味子总三萜乙醇提取物灌胃给药可显著抑制醋酸诱导的扭体反应。

结果表明：异型南五味子总三萜乙醇提取物各剂量均能显著降低0.8％和1.1％醋酸所致的小鼠扭体次数，说明异型南五味子总三萜乙醇提取物具有明显的镇痛作用。

实验例3对大鼠胶原诱导性关节炎的作用

动物：Wistar雌性大鼠，SPF级，体重150～170g，由北京维通利华实验动物有限公司提供，动物合格证号：11400700004931，动物许可证号：SCXK(京)2012-0001。

药物：异型南五味子总三萜乙醇提取物(由实施例1制得)；吲哚美辛肠溶片，规格：25mg/片，由山西云鹏制药有限公司生产，批号：A120401。实验时用生理盐水配制成溶液。牛II型胶原蛋白，由Chondrex公司提供，批号：130042，不完全弗氏佐剂，由Chondrex公司提供，批号：130103。

试验方法：将适量的牛II型胶原蛋白溶于0.1mol/L的冰醋酸中，浓度为2mg/ml，在4℃下搅拌充分溶解，置4℃冰箱过夜。再将80℃、l h灭活的卡介苗置于液体石蜡中配成0.5mg/ml的弗氏不完全佐剂(Incomplete Freund adjuvant，IFA)，将二者等体积混合、乳化，制成CII乳剂(即每0.1ml，含0.1mg CII)。置4℃冰箱保存备用。

取21只大鼠，分别为：①模型组：蒸馏水1ml/100g体重灌胃；② 吲哚美辛组：1mg/kg；③异型南五味子总三萜乙醇提取物200mg/kg，将已制好的乳剂于每鼠距尾根部1cm处皮内注射0.1ml致炎，一周后取同量乳剂再加强注射一次。于首次注射CII乳剂时，分别对阳性对照组灌胃给予吲哚美辛1mg/kg，异型南五味子总三萜乙醇提取物组大鼠灌胃药物200mg/kg，模型组给予等量的生理盐水。一天一次，连续30d。

致炎后，记录各组大鼠出现关节炎症状的时间，并于d15、d17、d20、d23、d25、d27、d30测定各组大鼠肿胀程度，观察并记录全身关节病变程度，按5级评分法评价，计算出多发性关节炎指数：0＝无红肿；1＝趾关节红肿；2＝趾关节和足趾肿胀；3＝踝关节以下的足爪肿胀；4＝包括踝关节在内的全部足爪肿胀。根据未注射胶原的其余3个关节的病变程度累计积分，即为每只大鼠的多发性关节炎指数。

结果：见图1、表4、表5、表6。

表4显示本发明的异型南五味子总三萜乙醇提取物对胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠发生率的影响(mean±SD，n＝7)，其中*vs模型组，P<0.05，说明结果有统计学差异；**vs模型组，P<0.01，结果在统计学上有极显著性差异，异型南五味子总三萜乙醇提取物可明显改善胶原诱导大鼠关节炎症状。

表5显示本发明的异型南五味子总三萜乙醇提取物对胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠肿胀度的影响(mean±SD，n＝7)，其中*vs模型组，P<0.05，说明结果有统计学差异；**vs模型组，P<0.01，结果在统计学上有极显著性差异。说明异型南五味子总三萜乙醇提取物可明显改善胶原诱导大鼠关节炎症状

表6显示本发明的异型南五味子总三萜乙醇提取物对胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠关节炎指数的影响(mean±SD，n＝7)，其中*vs模型组，P<0.05，结果有统计学差异；**vs模型组，P<0.01，结果在统计学上有极显著性差异。说明异型南五味子总三萜乙醇提取物可明显改善胶原诱导大鼠关节炎症状。

结果：自首次免疫后第9天左右，模型组大鼠出现倦怠，食欲减退，后足发红、肿胀，活动不便，活动量减少，灵活性变差等关节炎症状；第25天时，关节炎症状最为严重，前足出现红肿，行走不便，活动明显受限；此后关节炎症状稍有消退，但部分大鼠关节出现变形。实验观测期(30天)内，模型组大鼠于实验第17天关节炎发生率达100％；于造模之日起，给予异型南五味子总三萜 乙醇提取物药物组大鼠的关节炎发生率明显低于模型组(P<0.05)。与模型组比较，异型南五味子总三萜乙醇提取物组(200mg/kg)大鼠出现的关节炎症状较轻，反应较灵活，且能显著降低CIA模型大鼠足(踝关节)肿胀程度(P<0.05或P<0.01)、关节炎指数(AI)(P<0.05或P<0.01)，改善大鼠的关节炎症状。

结果表明：异型南五味子总三萜乙醇提取物可明显改善胶原诱导大鼠关节炎症状。

实验例4急性毒性试验：

为了考察异型南五味子总三萜乙醇提取物的安全性，特对其进行了急性毒性的考察研究，试验方法结果如下：

药物：由实施例1制得的异型南五味子总三萜乙醇提取物(提取率2％)。

动物：ICR小鼠，SPF级，鼠龄8～9周，体重18～22g。

方法：在预试无法测得LD50(以改良寇法试验(参照《中药药理研究方法学》第113页，人民卫生出版社，第1版，陈奇主编))的情况下，进行MTD的测定。取40只小鼠(雌雄各半)随机分成两组，每组20只。试验药物以蒸馏水溶解后，对小鼠以最大给药体积(0.4ml/10g)和最大浓度灌胃给药两次，中间间隔8小时。对照组小鼠经同样途径给予对应体积蒸馏水。对各组小鼠的毛色、粪便、呼吸、自主活动、精神状态进行观察；记录给药当天及此后7天、给药后第14天的死亡率和体质量情况；于实验第14天解剖小鼠，观察各脏器的病理变化情况。

结果：见表7。表7显示本发明的异型南五味子总三萜乙醇提取物动物体重随时间变化(mean±SD，n＝20)，其中*vs空白对照组，P＜0.05，说明结果有统计学差异；**vs空白对照组，P＜0.01，说明结果在统计学上有极显著性差异。说明异型南五味子总三萜乙醇提取物毒性很低。

结果：两组小鼠14d内摄食、饮水、排便、皮毛、呼吸、精神状态均未发生异常，且均无小鼠死亡。体质量与空白对照组比较无显著性差异(P>0.05)，见表7。14d后，处死小鼠，两组小鼠各主要脏器均未发现异常变化。研究结果显示，小鼠经口服异型南五味子总三萜乙醇提取物的最大耐受量为2314.41g/kg(按生药量计)，相当于每日临床用量的5400倍。

结果表明本发明药物急性毒性小，安全度大。

由上述药效学和毒理学试验的结果可以得出：异型南五味子总三萜乙醇提取物具有较好的治疗关节炎的作用，且MTD为最大浓度2314.41g/kg(此约为临床人用量的5400倍)，毒性很低。

表1异型南五味子总三萜乙醇提取物对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响(n＝10)

注：与模型组比较，^*P<0.05，^**P<0.01。

表2异型南五味子总三萜乙醇提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(n＝10)

注：与模型组比较，^*P<0.05，^**P<0.01。

表3异型南五味子总三萜乙醇提取物对不同浓度醋酸致小鼠扭体反应的影响(n＝12)

表4异型南五味子总三萜乙醇提取物对大鼠胶原诱导性关节炎发生率的影响(n＝7)

表5异型南五味子总三萜乙醇提取物对大鼠胶原诱导性关节炎肿胀度的影响 (n＝7)

表6异型南五味子总三萜乙醇提取物对大鼠胶原诱导性关节炎指数的影响(n＝7)

表7小鼠最大耐受量实验体质量测定结果(n＝20)

注：与空白对照组比较，^*P<0.05。

Claims (6)

1.异型南五味子乙醇提取物在制备抗关节炎药物中的应用；

所述的异型南五味子乙醇提取物是按照如下方法制备的，该方法包括如下步骤：

(1)制备异型南五味子粗提物：将异型南五味子藤茎以6～10倍重量90～100％乙醇回流提取2～5次，每次0.5～4小时，滤过，得提取液，将提取液合并、浓缩，即得异型南五味子粗提物；

(2)在步骤(1)粗提物的基础上，加适量无水乙醇溶解，与同重量的大孔吸附树脂拌匀，加入10倍重量以上无水乙醇量的水，搅拌，加于已处理过大孔吸附树脂柱上，先用30％的低浓度乙醇洗脱至无色，将此30％乙醇洗脱液弃去，再用90％的乙醇洗脱至无色，收集此90％乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩成相对密度1.25的稠膏，真空干燥，即得。

2.根据权利要求1的应用，其中所述的异型南五味子乙醇提取物是异型南五味子总三萜。

3.根据权利要求1或2的应用，其中所述的关节炎是类风湿性关节炎。

4.根据权利要求1的应用，其特征在于步骤(1)所述乙醇回流是用7～9倍重量95％乙醇回流3～4次，每次1～3小时。

5.根据权利要求4的应用，其特征在于步骤(1)所述乙醇回流是用8倍重量95％乙醇回流3次，每次2小时。

6.根据权利要求5的应用，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)取异型南五味子材藤茎，加8倍其重量的95％乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，合并提取液，提取液回收乙醇并浓缩成稠膏；

(2)加适量无水乙醇溶解，与同重量的大孔吸附树脂拌匀，加入10倍重量以上无水乙醇量的水，搅拌，加于已处理过大孔吸附树脂柱上，先用30％的低浓度乙醇洗脱至无色，将此30％乙醇洗脱液弃去，再用90％的乙醇洗脱至无色，收集此90％乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩成相对密度1.25的稠膏，真空干燥，即得。