CN103989668A - 连翘苷元在制备预防或治疗肝损伤或肝衰竭药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明请求保护连翘苷元用于制备预防或治疗肝损伤或肝衰竭药物的用途，属于医药领域。本发明所述连翘苷元为从传统中药连翘中提取得到的中药单体，动物试验显示,其对于对乙酰氨基酚导致的肝损伤，对于抗肿瘤药物顺铂导致的肝损伤，四氯化碳导致的急慢性肝损伤，D-氨基半乳糖导致的肝损伤，以及D-氨基半乳糖和脂多糖导致的肝衰竭均具有很好的治疗效果，且其治疗肝损伤及肝衰竭的效果显著优于连翘提取物和连翘苷。连翘苷元治疗肝损伤及肝衰竭作用疗效确切、副作用低，有广阔的医疗应用前景。

Description

连翘苷元在制备预防或治疗肝损伤或肝衰竭药物中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种连翘苷元的医药用途，具体涉及连翘苷元在制备预防或治疗肝损伤或肝衰竭药物中的医药用途。 

背景技术

肝脏作为最重要的解毒器官，是许多药物、外源性化学物质的重要靶点。肝损伤系各种肝脏疾病的病变结果，是多种严重肝脏疾病的发生、发展及最终走向肝功能衰竭的始动环节和共同途径，其中化学性肝损伤、免疫性肝损伤和物理性肝损伤等各种肝损伤为我国目前严重的多发常见病。肝损伤的发病机制十分复杂，是多因素、多层面、多靶点上共同作用的结果，主要由药物、酒精、生物、病毒、环境等因素造成。各种有害因素所致的肝损伤可以表现为肝坏死、脂肪肝、胆汁郁积、肝纤维化、肝硬化和肝癌等。我国是肝病流行比较严重的国家，全世界每年有100余万患者死于肝病，其中1/3在中国。 

化学性肝损伤是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤，呈不断上升趋势。这些化学物质包括环境中的化学毒物及某些药物。大自然和人类工业生产过程中均存在一些对肝脏有毒性的物质，称为"亲肝毒物"，这些毒物在人群中普遍易感，潜伏期短，病变的过程与感染的剂量直接相关，可引起肝脏不同程度的肝细胞坏死、脂肪变形、肝硬化和肝癌。现已证实，经常接触肝细胞毒性物质可造成急性或慢性肝损伤。某些工业用有机溶剂，如四氯化碳、二甲基亚砜、二乙基亚硝胺、四氯乙烷等对肝细胞均有严重的损害作用。据了解，目前有近千种西药会造成肝损伤。随着药物种类的不断增加，药物性肝损害的发生率也在相应上升。药物性肝损伤占整个药物不良反应的10％-15％，我国药物性肝炎约占急性肝炎住院患者的10％。 

肝损伤是肝功能衰竭(liver failure，LF)的基础，严重或持续的肝损伤最终将导致肝功能衰竭。肝功能衰竭患者自然病死率高，不同地区报道在10％-90％。肝功能衰竭是临床常见的严重肝病症候群，是多种因素引起的严重肝脏损害，导致其合成、解毒、排泄和生物转化等功能发生严重障碍或失代偿，出现以凝血机制障碍和黄疽、肝性脑病、腹水等为主要表现的一组临床症候群。 

随着医药科技的飞速发展，尽管治疗肝损伤的药物已经研究报道很多，但是一些研究 表明，有些抗肝损伤的药物还会不可避免的产生生物毒性，对生命造成危险，况且靶向性给药也不强。对肝损伤的防治目前仍是一个全球性的严峻课题。鉴于此，研究开发具有良好治疗作用的肝损伤药物是非常迫切而必要的。 

连翘，又名旱莲子(《药性论》)、大翘子(《新修本草》)，为木犀科植物连翘Forsythia suspense(Thunb.Vahl)的干燥果实。味苦微寒，归肺、心、小肠经，具有清热解毒、消肿散结的功效，主治痈疽、乳痈、丹毒、风热感冒、湿病初起、高热烦渴、神昏发斑、热淋尿闭。连翘的化学成分复杂多样，其中主要是苯乙醇及其苷、C₆-C₂天然醇、木脂素，此外还有黄酮、五环三萜、生物碱等。 

连翘苷元(phillygenin)为从木犀科植物连翘中提取的木脂素类化合物单体。1977年，Nishibe Sansei等人分离得到phillyrin连翘苷，phillygenin连翘苷元，(+)-pinoresinol右旋松脂酚(NISHIBEI S,CHIBA M,HISADA S.Studies on the Chinese Crude Drug“Forsythiae Fructus”I.Constituents of Forsythiae Fruits on the Market[J].Yakugaku Zassh,i1977,97(10):1134-1137.)。药理实验研究表明连翘苷元具有多种药理活性。 

Chen CC等研究了从连翘果实中提取分离得到的连翘苷元对低密度脂蛋白氧化抑制作用，结果表明，连翘苷元的抗氧化潜力比对照组(普罗布考)更强，是普罗布考的7.9倍，且有后遗效应，给药3h之后，仍保留71％的抑制活性(Chen CC，Chen HY，Shiao MS，et a1.Inhibition of low density lipoprotein oxidation by tetrahydrofurofuran lignans from Forsythia suspense and Magnolia coco[J].Planta Med，1999，65:709)。毛威通过MTT比色法研究了连翘苷、连翘苷元、表松脂素对人胃癌细胞株SGC7901的生长抑制作用，结果发现连翘苷元和表松脂素对人胃癌细胞株SGC7901的生长有一定的抑制作用，而连翘苷的抑制作用不明显(毛威.连翘化学成分及其抗肿瘤活性的研究[D].武汉：湖北中医学院，2009)。中国专利申请CN101537046A公开了一种连翘苷元的制备方法，并公开了连翘苷元的降血脂和抗氧化活性。 

发明内容

本发明提供了一种新的预防或治疗肝损伤或肝衰竭的药物，该药物以连翘苷元为药物活性成分。连翘苷元为从中药连翘中提取的一种中药单体，现有技术表明其具有多种治疗活性，因此本发明涉及连翘苷元的一种新的医药用途，即连翘苷元在制备预防或治疗肝损伤或肝衰竭药物中的用途。 

化学性肝毒性物质包括环境中的化学毒物及药物，现已证实，经常接触肝细胞毒性物质可造成急性或慢性肝损伤。肝损伤过程中，肝细胞膜结构破坏，细胞膜通透性增大，肝细胞内血清谷丙转氨酶逸出肝细胞进入血液循环中，血清谷草转氨酶活性升高，因此血清AST与ALT的测定是反映肝损伤的灵敏监测指标。 

本发明所述的连翘苷元在制备预防或治疗肝损伤或肝衰竭药物中的用途，其中所述肝损伤为化学性肝损伤，即由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。本发明药效实施例显示，连翘苷元对于多种药物或其他化学物质所导致的肝损伤均具有很好的治疗效果，能够显著降低肝损伤模型的ALT和AST。连翘苷元用于上述肝损伤动物模型的治疗时在降低动物ALT和AST值方面均显著优于连翘苷或连翘提取物。因此所述的连翘苷元用于临床上化学性肝损伤或肝衰竭患者是，其最重要的特点就是能够显著降低患者的ALT和AST值。 

优选地，所述化学性肝损伤为药物性肝损伤或药物性肝炎。药物性肝损伤或药物性肝炎是指由于药物或/及其代谢产物引起的肝脏损害。可以发生在以往没有肝病史的健康者或原来就有严重疾病的病人，在使用某种药物后发生程度不同的肝脏损害，均称药肝。其临床症状可有肝区不适，腹胀，食欲减退，恶心，乏力等，实验室检查中最早最常见的为血清转氨酶增高，亦可发生黄疸，血胆红素增高，其他尚有血碱性磷酸酶，谷氨酰转肽酶增高。本发明药效实施例显示，连翘苷元对乙酰氨基酚导致的肝损伤或肝炎模型以及抗肿瘤药物顺铂所致的肝损伤或肝炎模型中转氨酶升高具有很好的治疗效果。 

优选地，所述化学性肝损伤为有机溶剂所致的肝损伤或有机溶剂所致的中毒性肝炎，中毒性肝炎是由化学毒物(如磷、砷、四氯化碳等)、药物或生物毒素所引起的肝炎或所致的肝脏病变。中毒性肝炎按接触毒物的时间和量可分为急性和慢性中毒性肝炎两类，以慢性者多见。急性中毒性肝炎发病急骤，常无前驱症状，一般在中毒24～48小时出现症状。本发明药效实施例显示，连翘苷元对四氯化碳导致的急性肝损伤或急性中毒性肝炎和四氯化碳导致的慢性肝损伤或慢性中毒性肝炎均具有很好的治疗效果。 

本发明人还将连翘苷元应用于肝衰竭的治疗中，动物试验显示，连翘苷元对于D-氨基 半乳糖联合脂多糖诱导小鼠肝衰竭模型均有很好的治疗效果，其不仅能够显著降低肝衰竭小鼠的AST和ALT，而且能够大幅度提高肝衰竭小鼠的生存率，其在上述指标的改善方面均显著优于连翘苷或连翘提取物。 

上述所述的医药用途中，连翘苷元可以制备成合适的药物剂型口服给药或注射给药，其适用对象可以为人或其他恒温动物。当适用对象为人时，连翘苷元的用量优选为0.001mg/kg·d～50mg/kg·d，进一步优选为0.01mg/kg·d～10mg/kg·d。对于本发明预防或治疗肝损伤或肝衰竭的药物的给药时间和给药次数需要根据病情的具体诊断结果而定，这在本领域技术人员掌握的技术范围之内。例如，将对小鼠预防或治疗肝损伤或肝衰竭的治疗方案应用于人身上，所用药物对人的有效剂量可以通过该药物对小鼠的有效剂量进行换算，这对于本领域的普通技术人员来说是显而易见的。 

上述所述的医药用途中，根据动物病情以及用药部位可以将连翘苷元制备成合适的药物制剂以方便用药，如连翘苷元可以开发成口服制剂、舌下含服制剂或注射制剂方便患者的使用，其中所述口服制剂可以为片剂、胶囊剂或微乳制剂，优选为片剂；所述舌下含服制剂为含有连翘苷元并适用舌下给药的药物制剂，优选为其舌下含片；所述注射制剂可以为其注射液、注射微乳等，优选为注射液。当连翘苷元制备成注射液时，药物可接受的载体可以为注射用水、氯化钠、柠檬酸钠、柠檬酸、甘油、乙醇、丙二醇等。上述所述连翘苷元注射液还可以根据药物的性质加入适宜的附加剂，如渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、治疗氧剂、抑菌剂、乳化剂、助悬剂等，其中所述增溶剂为聚乙二醇400、吐温-80中的任意一种或两种。 

上述药物制剂的制备方法均可采用本领域技术人员制备该种剂型常规使用制备方法制得。上述药物制剂中，每一制剂单位中含有连翘苷元的含量为0.001mg～50mg。 

与现有技术相比，本发明的优势在于： 

1、本发明所述的连翘苷元具有显著的预防或治疗肝损伤或肝衰竭的作用。本发明实施例显示本发明的连翘苷元能够用于对乙酰氨基酚导致的肝损伤的治疗，用于抗肿瘤药物顺铂导致的肝损伤的治疗，用于四氯化碳导致的急性肝损伤的治疗，用于四氯化碳导致的慢性肝损伤的治疗，用于D-氨基半乳糖导致的肝损伤的治疗，用于刀豆蛋白A导致的肝损伤的治疗，以及用于治疗D-氨基半乳糖和脂多糖导致的肝衰竭。本发明的实施例显示本发明的连翘苷元对上述疾病的治疗效果优于连翘提取物和连翘苷。 

2、本发明所述连翘苷元是从传统中药连翘中提取得到的天然中药单体，其对人体毒副作用低，可以显著提高患者的用药安全性和用药依从性，进而大幅度改善了肝损伤患者的 治疗效果和生活质量。 

具体实施方式

为了使本领域技术人员充分了解本发明，以下通过具体的实施例进一步说明本发明，但本领域技术人员应该知晓，本发明实施例并不以任何方式限制本发明。 

实施例1连翘苷元注射液 

制备工艺：将处方量的丙二醇和乙醇混合均匀，加入连翘苷元，搅拌溶解，加入处方量的0.9％氯化钠溶液，搅拌均匀，加入0.5％针用活性炭，搅拌，脱炭，即得。 

实施例2连翘苷元注射液 

制备工艺：向处方量的PEG-400加入连翘苷元，搅拌溶解，加入0.9％氯化钠溶液至10L，搅拌均匀，加入0.5％针用活性炭，搅拌，脱炭，即得。 

实施例3连翘苷元注射液 

制备工艺：将处方量的乙醇和吐温-80混合均匀，加入连翘苷元，搅拌溶解，加入注射 用水至10L，搅拌均匀，加入0.5％针用活性炭，搅拌，脱炭，即得。 

实施例4连翘苷元注射液 

连翘苷元    0.01g 

乙醇        3.3L 

注射用水    加至10L 

制备工艺：将处方量的乙醇加入连翘苷元，搅拌溶解，加入注射用水至10L，搅拌均匀，加入0.5％针用活性炭，搅拌，脱炭，即得。 

实施例5片剂的制备 

制备工艺:将连翘苷元和辅料微晶纤维素、羧甲基淀粉钠混合均匀，加入适量的淀粉浆制软材，然后过16目筛制粒。湿颗粒在60℃干燥，干颗粒过20目筛整粒，筛出干粒中的细粉，与硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混匀，压片，每片约200mg，即得。 

实施例6连翘苷元舌下含片 

制备工艺：上述组分烘干、粉碎过筛预处理后混匀直接压片制得。 

实施例7连翘苷元舌下含片 

制备工艺：将主药及各辅料成分烘干、粉碎过筛预处理，将主药与糖分、乳糖、羧甲基纤维素钠混匀，以纯水作为粘合剂将混匀的物料制备软材，过20目筛制粒并于60℃下干燥制备干颗粒，将硬脂酸镁加入到上述干颗粒总混，压片即得。 

实施例8微乳浓缩物 

制备工艺：称取处方量中链脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油EL-40、1，2-丙二醇、无水乙醇，混合后搅拌均匀，然后加入连翘苷元溶解，也可以超声波处理以加速溶解，得澄清浓缩液，即为连翘苷元微乳浓缩物。上述微乳浓缩物可进一步稀释用于注射或口服。 

实施例9微乳浓缩物 

制备工艺：称取处方量PEG-2-硬脂酸酯、吐温-20、1-己醇、PEG3350混合后搅拌均匀，然后加入连翘苷元溶解，也可以超声波处理以加速溶解，得澄清浓缩液，即为连翘苷元微乳浓缩物。上述微乳浓缩物可以根据用药需要进行进一步稀释用于患者注射给药或口服给药。 

实施例10连翘苷元对对乙酰氨基酚致大鼠肝损伤或肝炎模型的实验研究 

肝损伤过程中，肝细胞膜结构破坏，细胞膜通透性增大，肝细胞内血清谷丙转氨酶(glutamic pyruvic transminase，ALT)可逸出肝细胞进入血液循环中，血清谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase，AST)活性升高提示细胞线粒体损伤，故血清AST与ALT的测定是反映肝损伤的灵敏监测指标。 

1.动物分组及给药 

健康SD大鼠，清洁级，80只，雌性，体重(180±20)g，将大鼠按体重随机分为8组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、甘草组、连翘提取物组(按照专利申请CN101085043B实施例2制备工艺制备得到连翘提取物)、连翘苷组(按照《中药化学》第188页，上海科学技术出版社，1987年出版，自制连翘苷，纯度大于97％)、连翘苷元低剂量组、连翘苷元中剂量组、连翘苷元高剂量组。各组分别给予下述药物： 

正常对照组：等体积的生理盐水，皮下注射 

模型对照组：等体积的生理盐水，皮下注射 

甘草组：25mg/kg甘草酸二铵注射液，静脉注射 

连翘提取物组：60mg/kg连翘提取物，灌胃给药 

连翘苷组：60mg/kg连翘苷，灌胃给药 

连翘苷元低剂量组：0.1mg/kg连翘苷元，皮下注射 

连翘苷元中剂量组：0.5mg/kg连翘苷元，皮下注射 

连翘苷元高剂量组：2.5mg/kg连翘苷元，皮下注射 

按剂量每日给药一次，连续7d，末次给药后1h，除正常对照组外，其余各组均腹腔注射对乙酰氨基酚无菌生理盐水溶液1g/kg造模。大鼠禁食不禁水24h，摘除大鼠眼球取血，用于测定血清生化指标；取出肝脏以制备肝组织匀浆和肝组织病理学检查。 

2.实验方法及数据处理 

2.1血清ALT和AST的测定 

大鼠造模后禁食不禁水24h，摘除大鼠眼球取血，静置1h，3000r/min，离心15min取血清，冷藏4℃待用自动生化分析仪测ALT、AST。 

2.2数据统计与分析 

数据以表示，采用SPSS15.0软件进行方差分析。 

3.结果与讨论 

由表1结果可知: 

(1)与正常对照组相比，模型对照组大鼠血清ALT、AST均显著升高。各给药组处理大鼠后，均能降低大鼠血清ALT、AST，与对照组相比具有统计学差异。 

(2)连翘苷元各剂量组能够显著降低大鼠血清ALT、AST，与连翘提取物组相比，极显著性(P<0.01)差异，表明连翘苷元治疗肝损伤的效果优于连翘提取物。连翘苷元各剂量组能够显著降低大鼠血清ALT、AST，与连翘苷组相比，具有显著性(P<0.05)或极显著性(P<0.01)差异，表明连翘苷元治疗肝损伤的效果优于连翘苷。 

表1连翘苷元对对乙酰氨基酚致大鼠肝损伤的的影响 

与正常对照组相比，^￥P<0.05，^￥￥P<0.01； 

与模型对照组相比，^#P<0.05，^##P<0.01； 

与连翘提取物组相比，^Ω<0.05，^ΩΩP<0.01； 

与连翘苷组相比，^&P<0.05，^&&P<0.01。 

实施例11连翘苷元对抗肿瘤药物顺铂致大鼠肝损伤或肝炎模型的实验研究 

1.动物分组及给药 

健康SD大鼠，清洁级，60只，雌性，体重(180±20)g，将大鼠按体重随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、连翘提取物组(按照专利申请CN101085043B实施例2制备工艺制备得到连翘提取物)、连翘苷组(按照《中药化学》第188页，上海科学技术出版社，1987年出版，自制连翘苷，纯度大于97％)、连翘苷元低剂量组、连翘苷元高剂量组。各组分别给予下述药物： 

正常对照组：等体积的生理盐水，皮下注射 

模型对照组：等体积的生理盐水，皮下注射 

连翘提取物组：60mg/kg连翘提取物，灌胃给药 

连翘苷组：60mg/kg连翘苷，灌胃给药 

连翘苷元低剂量组：0.1mg/kg连翘苷元，皮下注射 

连翘苷元高剂量组：2.5mg/kg连翘苷元，皮下注射 

造模方法为：大鼠尾静脉注射顺铂2.0mg/kg，每天1次，连续给药2d后间隔5d，再给药2d，如此3个循环，共注射6次，停药恢复观察28d。造模成功后，按上述剂量每日给药一次，连续7d，末次给药后，大鼠禁食不禁水24h，摘除大鼠眼球取血，用于测定血清生化指标；取出肝脏以制备肝组织匀浆和肝组织病理学检查。 

2.实验方法及数据处理 

2.1血清ALT和AST的测定 

大鼠造模后禁食不禁水24h，摘除大鼠眼球取血，静置1h，3000r/min，离心15min取血清，冷藏4℃待用自动生化分析仪测ALT、AST。 

2.2数据统计与分析 

数据以表示，采用SPSS15.0软件进行方差分析。 

3.结果与讨论 

由表2结果可知:(1)与正常对照组相比，模型对照组大鼠血清ALT、AST均显著升高。各给药组处理大鼠后，均能降低大鼠血清ALT、AST，与对照组相比具有统计学差异。 

(2)连翘苷元各剂量组能够显著降低大鼠血清ALT、AST，与连翘提取物组相比，具有显著性(P<0.05)或极显著性(P<0.01)差异，表明连翘苷元治疗肝损伤的效果优于连翘提取物。连翘苷元各剂量组能够显著降低大鼠血清ALT、AST，与连翘苷组相比，具有显著性(P<0.05)或极显著性(P<0.01)差异，表明连翘苷元治疗肝损伤的效果优于连翘苷。 

表2连翘苷元对顺铂致大鼠肝损伤的的影响 

与正常对照组相比，^￥P<0.05，^￥￥P<0.01； 

与模型对照组相比，^#P<0.05，^##P<0.01； 

与连翘提取物组相比，^Ω<0.05，^ΩΩP<0.01； 

与连翘苷组相比，^&P<0.05，^&&P<0.01。 

实施例10和实施例11所述的实验结果显示，连翘苷元对于对乙酰氨基酚所导致的肝损伤或肝炎模型以及对于顺铂所导致的肝损伤或肝炎模型均具有降低其血清转氨酶ALT和AST的作用，体现出显著的治疗效果。这表明连翘苷元对于药物所致的肝损伤或药物性肝炎具有积极的治疗作用。 

实施例12连翘苷元对四氯化碳致大鼠急性肝损伤或肝炎模型的实验研究 

1.动物分组及给药 

健康SD大鼠，清洁级，60只，雌性，体重(180±20)g，将大鼠按体重随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、连翘提取物组(按照专利申请CN101085043B实施例2制备工艺制备得到连翘提取物)、连翘苷组(按照《中药化学》第188页，上海科学技术出版社，1987年出版，自制连翘苷，纯度大于97％)、连翘苷元低剂量组、连翘苷元高剂量组。各组分别给予下述药物： 

正常对照组：等体积的生理盐水，灌胃给药 

模型对照组：等体积的生理盐水，灌胃给药 

连翘提取物组：60mg/kg连翘提取物，灌胃给药 

连翘苷组：60mg/kg连翘苷，灌胃给药 

连翘苷元低剂量组：5.0mg/kg连翘苷元，灌胃给药 

连翘苷元高剂量组：10.0mg/kg连翘苷元，灌胃给药 

按剂量每日给药一次，连续7d，末次给药后1h，除正常对照组外，其余每个组均给与CCl₄诱导肝损伤，具体方法为：大鼠腹腔注射5％CCl₄花生油溶液6ml/kg。造模后，大鼠禁食不禁水24h，麻醉后取血，用于测定血清生化指标；取出肝脏以制备肝组织匀浆和肝 组织病理学检查。 

2.实验方法及数据处理 

2.1血清ALT和AST的测定 

大鼠造模后禁食不禁水24h，麻醉后取血，静置1h，3000r/min，离心15min取血清，冷藏4℃待用自动生化分析仪测ALT、AST。 

2.2数据统计与分析 

数据以表示，采用SPSS15.0软件进行方差分析。 

3.结果与讨论 

由表3结果可知:(1)与正常对照组相比，模型对照组大鼠血清ALT、AST均显著升高。各给药组处理大鼠后，均能降低大鼠血清ALT、AST，与对照组相比具有统计学差异。 

(2)连翘苷元各剂量组能够显著降低大鼠血清ALT、AST，与连翘提取物组相比，极显著性(P<0.01)差异，表明连翘苷元治疗肝损伤的效果优于连翘提取物。连翘苷元各剂量组能够显著降低大鼠血清ALT、AST，与连翘苷组相比，具有极显著性(P<0.01)差异，表明连翘苷元治疗肝损伤的效果优于连翘苷。 

表3连翘苷元对四氯化碳致大鼠急性肝损伤的的影响 

与正常对照组相比，^￥P<0.05，^￥￥P<0.01； 

与模型对照组相比，^#P<0.05，^##P<0.01； 

与连翘提取物组相比，^Ω<0.05，^ΩΩP<0.01； 

与连翘苷组相比，^&P<0.05，^&&P<0.01。 

实施例13连翘苷元对四氯化碳致小鼠慢性肝损伤或肝炎模型的实验研究 

1.动物分组及给药 

健康昆明小鼠，清洁级，60只，雌性，体重(18±2)g，将小鼠按体重随机分为6组， 每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、连翘提取物组(按照专利申请CN101085043B实施例2制备工艺制备得到连翘提取物)、连翘苷组(按照《中药化学》第188页，上海科学技术出版社，1987年出版，自制连翘苷，纯度大于97％)、连翘苷元低剂量组、连翘苷元高剂量组。各组分别给予下述药物： 

正常对照组：等体积的生理盐水，皮下注射 

模型对照组：等体积的生理盐水，皮下注射 

连翘提取物组：60mg/kg连翘提取物，灌胃给药 

连翘苷组：60mg/kg连翘苷，灌胃给药 

连翘苷元低剂量组：0.5mg/kg连翘苷元，皮下注射 

连翘苷元高剂量组：2.5mg/kg连翘苷元，皮下注射 

按剂量每日给药一次，连续给药4周。除正常对照组外，其余各组小鼠均自试验开始之日起，给予40％CCl₄橄榄油溶液0.05ml/只皮下注射，每周2次(周一和周四各1次)，共4周。正常对照组皮下注射等量的橄榄油，次数相同。末次给药后小鼠禁食不禁水24h(全程给药结束后24h)，摘眼球取血，离心取血清，用于测定血清生化指标；取出肝脏以制备肝组织匀浆和肝组织病理学检查。 

2.实验方法及数据处理 

2.1血清ALT和AST的测定 

小鼠造模后禁食不禁水24h，麻醉后取血，静置1h，3000r/min，离心15min取血清，冷藏4℃待用自动生化分析仪测ALT、AST。 

2.2数据统计与分析 

数据以表示，采用SPSS15.0软件进行方差分析。 

3.结果与讨论 

由表4结果可知:(1)与正常对照组相比，模型对照组小鼠血清ALT、AST均显著升高。各给药组处理小鼠后，均能降低小鼠血清ALT、AST，与对照组相比具有统计学差异。 

(2)连翘苷元各剂量组能够显著降低小鼠血清ALT、AST，与连翘提取物组相比，极显著性(P<0.01)差异，表明连翘苷元治疗肝损伤的效果优于连翘提取物。连翘苷元各剂量组能够显著降低小鼠血清ALT、AST，与连翘苷组相比，具有极显著性(P<0.01)差异，表明连翘苷元治疗肝损伤的效果优于连翘苷。 

表4连翘苷元对四氯化碳致小鼠慢性肝损伤的的影响 

与正常对照组相比，^￥P<0.05，^￥￥P<0.01； 

与模型对照组相比，^#P<0.05，^##P<0.01； 

与连翘提取物组相比，^Ω<0.05，^ΩΩP<0.01； 

与连翘苷组相比，^&P<0.05，^&&P<0.01。 

实施例12和实施例13所述的实验结果显示，连翘苷元对于四氯化碳所致的大鼠急性肝损伤或肝炎模型以及四氯化碳所致的小鼠慢性肝损伤或肝炎模型均具有显著降低其血清转氨酶ALT和AST的水平，体现出显著的治疗作用。这表明，连翘苷元对于有机溶剂所致的肝损伤或有机溶剂所致的中毒性肝炎具有积极的治疗作用。 

实施例14连翘苷元对D-氨基半乳糖致小鼠肝损伤作用的实验研究 

1.动物分组及给药 

健康BALB/C小鼠，清洁级，60只，雌性，体重(20±2)g，将小鼠按体重随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、连翘提取物组(按照专利申请CN101085043B实施例2制备工艺制备得到连翘提取物)、连翘苷组(按照《中药化学》第188页，上海科学技术出版社，1987年出版，自制连翘苷，纯度大于97％)、连翘苷元低剂量组、连翘苷元高剂量组。各组分别给予下述药物： 

正常对照组：等体积的生理盐水，皮下注射 

模型对照组：等体积的生理盐水，皮下注射 

连翘提取物组：50mg/kg连翘提取物，灌胃给药 

连翘苷组：50mg/kg连翘苷，灌胃给药 

连翘苷元低剂量组：0.5mg/kg连翘苷元，皮下注射 

连翘苷元高剂量组：2.5mg/kg连翘苷元，皮下注射 

按剂量每日上午给药一次，连续3d，最后一天上午给药后1h，除正常对照组外，其余每个组均给与D-氨基半乳糖诱导肝损伤，具体方法为：小鼠腹腔注射800mg/kgD-氨基半乳糖，小鼠禁食不禁水，下午2点再给药一次。造模后，禁食，24h后麻醉取血，用于测定 血清生化指标；取出肝脏以制备肝组织匀浆和肝组织病理学检查。 

2.实验方法及数据处理 

2.1血清ALT和AST的测定 

小鼠造模后禁食不禁水24h，麻醉后取血，静置1h，3000r/min，离心15min取血清，冷藏4℃待用自动生化分析仪测ALT、AST。 

2.2数据统计与分析 

数据以表示，采用SPSS15.0软件进行方差分析。 

3.结果与讨论 

由表5结果可知: 

(1)与正常对照组相比，模型对照组小鼠血清ALT、AST均显著升高。各给药组处理小鼠后，均能降低小鼠血清ALT、AST，与对照组相比具有统计学差异。 

(2)连翘苷元各剂量组能够显著降低小鼠血清ALT、AST，与连翘提取物组相比，极显著性(P<0.01)差异，表明连翘苷元治疗肝损伤的效果优于连翘提取物。连翘苷元各剂量组能够显著降低小鼠血清ALT、AST，与连翘苷组相比，具有极显著性(P<0.01)差异，表明连翘苷元治疗肝损伤的效果优于连翘苷。 

表5连翘苷元对D-氨基半乳糖致小鼠肝损伤的的影响 

与正常对照组相比，^￥P<0.05，^￥￥P<0.01； 

与模型对照组相比，^#P<0.05，^##P<0.01； 

与连翘提取物组相比，^Ω<0.05，^ΩΩP<0.01； 

与连翘苷组相比，^&P<0.05，^&&P<0.01。 

实施例16连翘苷元对D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠急性肝衰竭作用的实验研究 

1.动物分组及给药 

健康ICR小鼠，清洁级，120只，雄性，体重(18±2)g，将小鼠按体重随机分为6组，每组20只，分别为正常对照组、模型对照组、连翘提取物组(按照专利申请CN101085043B实施例2制备工艺制备得到连翘提取物)、连翘苷组(按照《中药化学》第188页，上海科学技术出版社，1987年出版，自制连翘苷，纯度大于97％)、连翘苷元低剂量组、连翘苷元高剂量组。各组分别给予下述药物： 

正常对照组：等体积的生理盐水，灌胃给药 

模型对照组：等体积的生理盐水，灌胃给药 

连翘提取物组：50mg/kg连翘提取物，灌胃给药 

连翘苷组：50mg/kg连翘苷，灌胃给药 

连翘苷元低剂量组：4.5mg/kg连翘苷元，灌胃给药 

连翘苷元高剂量组：9.0mg/kg连翘苷元，灌胃给药 

模型对照组和各治疗组分别腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GAL)600mg/kg联合脂多糖(LPS)10μg/kg构建小鼠急性肝衰竭模型，各治疗组于造模前2h按上述方式和剂量给药，模型对照组相应地在造模前2h给与生理盐水，正常对照组均在相应时间点给与生理盐水及腹腔注射。 

2.实验方法及数据处理 

2.1血清ALT和AST的测定 

小鼠造模后禁食不禁水6h，每组随机选取10只小鼠麻醉，眼球采血，静置1h，3000r/min，离心15min取血清，冷藏4℃待用自动生化分析仪测血清转氨酶ALT、AST。 

2.2小鼠生存率的统计 

统计小鼠48h的生存率。 

2.3数据统计与分析 

数据以表示，采用SPSS15.0软件进行方差分析。 

3.结果与讨论 

由表7结果可知:(1)与正常对照组相比，模型对照组小鼠血清ALT、AST均显著升高。各给药组处理小鼠后，均能降低小鼠血清ALT、AST，与对照组相比具有统计学差异。 

(2)连翘苷元各剂量组能够显著降低小鼠血清ALT、AST，与连翘提取物组相比，极显著性(P<0.01)差异，表明连翘苷元减轻肝衰竭肝损伤程度的效果优于连翘提取物。连翘苷元各剂量组能够显著降低小鼠血清ALT、AST，与连翘苷组相比，具有极显著性(P<0.01)差 异，表明连翘苷元减轻肝衰竭肝损伤程度的效果优于连翘苷。 

表7连翘苷元对D-GAL/LPS致小鼠急性肝衰竭ALT、AST的影响 

与正常对照组相比，^￥P<0.05，^￥￥P<0.01； 

与模型对照组相比，^#P<0.05，^##P<0.01； 

与连翘提取物组相比，^Ω<0.05，^ΩΩP<0.01； 

与连翘苷组相比，^&P<0.05，^&&P<0.01。 

由表8结果可知:(1)与正常对照组相比，模型对照组小鼠生存率明显降低。各给药组处理小鼠后，均能提高小鼠生存率。 

(2)连翘苷元各剂量组能够明显提高小鼠生存率，与连翘苷组及连翘提取物组相比，连翘苷元提高肝衰竭小鼠生存率的效果更优。 

表8连翘苷元对肝衰竭小鼠生存率的影响 

Claims (10)

1.连翘苷元在制备预防或治疗肝损伤或肝衰竭药物中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，连翘苷元能够降低肝损伤或肝衰竭患者的AST和ALT值。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的肝损伤为化学性肝损伤，所述的化学性肝损伤包括急性化学性肝损伤和慢性化学性肝损伤。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的化学性肝损伤为药物性肝损伤或药物性肝炎。

5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的化学性肝损伤为有机溶剂所致的肝损伤或有机溶剂所致的中毒性肝炎。

6.如权利要求1-5任一所述的用途，其特征在于，所述连翘苷元的人用给药量为0.001mg/kg·d～50mg/kg·d。

7.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述连翘苷元的人用给药量为0.01mg/kg·d～10mg/kg·d。

8.如权利要求1-5任一所述的用途，其特征在于，所述连翘苷元为口服制剂、舌下含服制剂或注射制剂。

9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述的连翘苷元的口服制剂、舌下含服制剂或注射制剂的每一制剂单位中连翘苷元的含量为0.001mg～50mg。

10.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述的口服制剂为片剂、胶囊剂或微乳制剂，所述的注射制剂为注射液或注射微乳。