CN101301284B - 大黄酸或其盐在制备治疗慢性肾炎或慢性肾功能衰竭药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及大黄酸或其盐治疗慢性肾炎或慢性肾功能衰竭的应用。具体地说，涉及大黄酸或其药用盐、其前药衍生物在制备用于预防或者治疗慢性肾炎或慢性肾功能衰竭的药品或者保健品中的应用，尤其是制备预防或者治疗慢性肾功能衰竭的药品或者保健品。本发明所述的治疗慢性肾炎或慢性肾功能衰竭的药品或者保健品可以制成药剂学上任何一种剂型，优选制成胶囊剂、片剂、输液剂、注射液、冻干粉针剂、混悬剂、丸剂、乳剂、冲剂或凝胶剂等。

Description

大黄酸或其盐在制备治疗慢性肾炎或慢性肾功能衰竭药物中的应用

技术领域

本发明涉及大黄酸或其盐的一种新用途，具体地说，提供大黄酸或其盐在制备用于预防或者治疗慢性肾炎或慢性肾功能衰竭的药物中的应用，属于医药领域。

背景技术

大黄酸，化学名1.8-二羟基-3-羧基蒽醌(1.8-Dihydroxy-3-carboxy-anthraquinone)，为咖啡色针晶，升华后为黄色针晶。熔点：321-322℃。不溶于水，能溶于吡啶、碳酸氢钠水溶液，微溶于乙醇、苯、氨仿、乙醚和石油醚。分子式C15H8O6。目前可以使用人工合成的大黄酸，也可以使用从自然界提取的大黄酸，例如可使用从蓼科植物大黄(如药用大黄、掌叶大黄或者唐古特大黄)的根茎、何首乌的根、豆科植物狭叶番泻的荚、芸香科植物芸香或百合科植物麝香萱的根中，提取得到大黄酸。

肾炎是肾小球肾炎的简称，它是影响人类身体健康的重要病因，每年因肾炎而进人终末期肾功能衰竭的患者占该病之首。若急性肾小球肾炎未能彻底控制，临床症状及尿蛋白持续存在，迁延1年以上，就有可能演变为慢性肾炎，出现不可逆性肾损害、心力衰竭及尿毒症。

慢性肾功能衰竭(chronic renal failure，CRF)是指原发性或继发性慢性肾疾患所致肾功能损害所出现的一系列症状和代谢紊乱组成的临床综合征。目前治疗肾衰的方法主要有肾透析、肾移植、药物治疗等。肾透析是采用体外模拟肾脏器官的仪器替代体内衰竭肾脏来清除体内毒素的功能，改善肾中毒症状，达到延长病人寿命的目的，其治疗本质不能恢复肾脏的自身功能，肾脏内分泌功能和其他功能得不到改善，另外，肾透析不能从本质上治疗和预防肾衰所导致的继发疾病，病人如若进行了肾透析，则需终生使用，费用昂贵，给患者及家属带来巨大的负担。肾移植能够从根本上治疗肾衰，但目前因为可移植的受体有限、强烈的排斥反应、费用昂贵的局限，可以得到治疗的病人非常少。药物治疗方面，西药治疗只能缓解肾衰症状，不能从本质上治疗这一疾病；中药治疗肾衰的复方很多，也具有一定的疗效，但中药复方体积大、服用不方便、作用原理不明确性。

大黄酸已有报道具有改善糖代谢异常，逆转胰岛素抵抗，有效防止糖尿病肾病的作用，报道用于治疗糖尿病肾病，具有确切疗效。但是，现有技术没有公开和启示过大黄酸具有治疗慢性肾病、慢性肾功能衰竭的治疗用途，尤其是治疗慢性肾功能衰竭的应用。

发明内容

本发明在大黄酸的研究过程中，意外地发现大黄酸具有预防或者治疗慢性肾炎、慢性肾功能衰竭的疗效，尤其是对慢性肾功能衰竭具有很好治疗作用，从而完成本发明。

因此，本发明的目的在于提供大黄酸的一种新治疗用途。本发明技术方案如下：

本发明提供一种大黄酸或其药用盐、其前药衍生物在制备用于预防或者治疗慢性肾炎或慢性肾功能衰竭的药品或者保健品中的应用。

优选地，上述所述的应用，其中制备用于预防或者治疗慢性肾功能衰竭的药品或者保健品。

本发明所述的大黄酸可以使用人工合成的大黄酸，也可以使用从自然界提取的大黄酸。例如，可使用从蓼科植物大黄(如药用大黄、掌叶大黄或者唐古特大黄)的根茎、何首乌的根、豆科植物狭叶番泻的荚、芸香科植物芸香或百合科植物麝香萱的根中提取的大黄酸。本发明优选使用从自然界提取的大黄酸，特别是从大黄、何首乌或者番泻叶中提取得到大黄酸。作为优选，本发明所述的大黄酸的纯度不低于90％，更优选不低于98％。

本发明所述的大黄酸药用盐可以是任何一种药学上可接受的盐，可以是有机酸盐，也可以是无机酸盐。例如，可以使用大黄酸钠、大黄酸钾、大黄酸镁、大黄酸铝或大黄酸钙、大黄酸葡甲胺等；优选使用大黄酸钠、大黄酸钾或大黄酸镁；最优选使用大黄酸钠。由于大黄酸不溶于水，因此用于治疗慢性肾炎或慢性肾功能衰竭的药物为注射剂或口服剂等液体制剂时，使用大黄酸盐更具优势，这样能简化制备工艺。但这并不意味着将治疗慢性肾炎或慢性肾功能衰竭的药物制备成注射剂或口服剂等液体制剂时，不能使用大黄酸。使用大黄酸作为活性成分时，需要加入适宜的药学上可接受的辅料，也能制备成注射剂或口服剂等液体制剂。

上述所述的大黄酸前药衍生物，可以是药学上可接受的大黄酸前体药物，例如1，8-二乙酰基大黄酸等。

本发明所述的用于治疗慢性肾炎或慢性肾功能衰竭的药物可以制成药剂学上任何一种剂型。例如，可以是口服形式或者注射形式的，如胶囊剂、片剂、分散片、输液剂、注射剂、冻干剂、口服剂、混悬剂、丸剂、乳剂、冲剂或凝胶剂。可采用本技术领域常用的技术将所述的用于治疗慢性肾炎或慢性肾功能衰竭的药物制成任何一种所需要的剂型。

具体实施方式

下面通过实施例来进一步解释或者说明本发明内容，但不构成对发明主旨的限制。

实施例1：大黄酸对小鼠基底膜肾炎的作用观察试验

1.材料：

动物：大耳白兔，雄性，2-2.5kg，中山医科大学动物中心提供；Balb\c小鼠，雌性，18-22g，中山医科大学动物中心提供。

药物：对照药，福辛普利，中美上海施贵宝制药有限公司生产，每日给药5mg\kg；大黄酸片，自制，每日给药按大黄酸计高剂量组20mg\kg，低剂量组10mg\kg；兔IgG，美国Miles公司产品。

2.方法：

采用兔IgG加速型小鼠抗基底膜肾炎的方法。用含小鼠肾小球基底膜及完全佐剂的乳剂免疫兔，每周1次，共6次，取兔血清为肾毒血清。小鼠先腹腔注射兔IgG，再静脉注射肾毒血清造膜，5天后依小鼠尿蛋白水平均匀分为模型组、对照组、高剂量组合低剂量组，连续口服给药3周，每周测尿蛋白、血浆白蛋白和血浆尿素氮，试验结果如表1-表3所示。

表1尿中蛋白(g\L)的变化(X±SD)

注：t测验：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

表2血浆尿素氮(mmol\L)的变化(X±SD)

注：t测验：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

表3血浆白蛋白(g\L)的变化(X±SD)

注：t测验：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

由试验结果可以看出，对照药不能降低血浆尿素氮，尿蛋白下降幅度也不大；大黄酸不仅可明显降低血浆尿素氮，而且可明显降低尿蛋白，这说明大黄酸对小鼠抗基底膜肾炎有一定治疗作用。

实施例2：大黄酸对慢性肾功能衰竭的治疗作用

1.材料：

动物：雄性SD大鼠140只，体重200±20克，由中山医科大学实验动物中心提供。

药物：大黄酸片，自制，每日灌胃一次，按主药大黄酸计每天10mg；对照药：福辛普利，由中美上海施贵宝制药有限公司生产；戊巴比妥钠：由中国医药集团上海化学试剂公司提供；高糖高脂饲料：在普通饲料的基础上添加10％的猪油、10％的豆油和10％的蔗糖；肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、游离脂肪酸(NEFA)试剂盒由南京建成生物工程研究所提供；肾组织氧化修饰低密度脂蛋白(OX-LDL)，美国Santa Cruz公司；转化生长因子-β1(TGF-β1)上海博彩生物科技有限公司提供。

2.方法：

将140只大鼠随机分为正常组16只(A)，造模组124只，对造模组大鼠124只切除5/6肾组织制作慢性肾功能衰竭动物模型。方法如下：以2％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，然后以乙醚诱导麻醉，弧型切除左肾2/3肾脏组织，压迫止血片刻，再滴加数滴凝血酶溶液，当切面上不再有活动性出血后复位剩余左肾，缝合，一周后切除整个右肾，两次手术共切除肾脏约80％左右。2周后在大鼠尾静脉采血测定血肌酐(Scr)，造摸组大鼠血肌酐显著高于正常组为模型成功(P＜0.05)。挑选模型成功的大鼠有100只，根据模型制作成功后的大鼠血肌酐值，分为5组，左肾2/3切除后即进行10天正常饲料喂食，然后右肾结扎，继续喂食7天后测定血肌酐，根据饲料不同分为以下几组：B组(普通饲料模型组)、C组(普通饲料治疗组)；D组(高脂饲料模型组)、E组(高脂饲料治疗组)、F组(高脂饲料对照组)动物自由饮水、摄食，白然照明。8周后处死大鼠，处死前一天各组大鼠分别置代谢笼收集24小时尿液。摘眼球采血，检测相关指标。

观测指标采用常规生化方法检测：血尿素氮、肌酐、甘油三脂、胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血常规、24h尿蛋白定量；肾组织匀浆中测定超氧物歧化酶(SOD)采用黄嗓吟氧化酶法；丙二醛(MDA)采用硫代巴比妥酸法；游离脂肪酸(NEFA)采用铜试剂测定法。所有测定结果用x±s表示，采用组间t检验。

(1)大黄酸对不同饮食喂养CRF大鼠肾功能、血常规、24小时尿蛋白定量的影响。根据血肌配值进行分组，使实验开始前各组血肌酐值没有显著性差异。在第二次手术后第七天开始测定血肌酐、尿素氮、总胆固醇和甘油三脂，测定结果见表4。

表4试验前各组肾功能和血脂情况

分组后，各组血肌配与正常组比较均差异显著(p＜0.05)，但各组间比较无差别，治疗一月后测定肾功能，观察各组血肌配、尿素氮值的变化；实验结束时测定各模型组尿素氮、肌酐和24h尿蛋白定量。测定结果见表5。

表5大黄酸对不同饮食喂养CRF人鼠肾功能及蛋白尿结果(x±s)

组  别	动  物  数	血尿素氮(1  个月)	血肌酐(1个  月)	血尿素氮(结  束)	血肌酐(结束)	24h尿蛋白
							A	16	11.02±0.77	50.75±2.55<sup>*</sup>	9.20±0.33	35.33±5.03	23.15±4.30
B	19	19.55±1.91<sup>*</sup>	80.05±10.33<sup>*</sup>	16.56±3.04<sup>**</sup>	61.12±9.43<sup>**</sup>	34.76±8.12<sup>**</sup>
							C	18	19.00±3.22<sup>*</sup>	78.10±13.55<sup>*</sup>	15.12±3.83	55.53±7.41	24.61±5.80
D	19	21.40±5.30<sup>*</sup>	88.34±15.54<sup>*</sup>	22.21±4.65<sup>**</sup>  ○	83.89±23.34<sup>**</sup>	43.85±4.72<sup>**</sup>  ○
							E	19	16,72±2.75<sup>*</sup>  ●	70.75±8.90<sup>*</sup>●  △	18.42±2.73	59.40±8.05●	36.32±6.67●
F	18	16.88±2.85<sup>*</sup>  ●	76.10±23.12<sup>*</sup>	18.62±5.35	62.77±15.62	28.98±6.67●

^*与正常组比较p＜0.05；^**与正常组比较p＜0.01；○与正常饲料模型组比较p＜0.05；○○与正常饲料模型组比较p＜0.01；●与切肾后高脂饲料模型组比较p＜0.05；●●与切肾后高脂饲料模型组比较p＜0.01；△与切肾后高脂饲料对照组比较p＜0.05；△△与切肾后高脂饲料对照组比较p＜0.01。

一个月后各模型组肌酐、尿素氮比正常组有显著的升高，切肾后高脂饲料治疗组比同种模型组的血肌酐有下降，说明开始有改善肾功能的作用。实验结束时各模型组尿素氮、肌酐和24h尿蛋白定量均显著高于正常组(P＜0.05)，三模型组之间随着高脂高糖饮食的增加，尿素氮、肌醉和24h尿蛋白定量都有上升趋势，且有显著统计学差异，说明给予5/6肾切除大鼠高脂高糖饮食，会使其24小时蛋白定量及血肌配、尿素氮显著升高。正常饲料治疗组比正常饲料模型组有显著降低24h尿蛋白定量的作用。切肾后高脂饲料治疗组能显著抑制慢性肾衰，大黄酸具有显著降低持续高脂饲料模型组血肌酐、24h尿蛋白定量和尿素氮作用(P＜0.01)。福欣普利组具有显著降低切肾后高脂饲料模型组24h尿蛋白定量的作用，对血肌配、尿素氮也有下降作用，但统计学上没有显著性意义。

(2)大黄酸对不同蛋白饮食喂养CRF大鼠血脂的影响

表6大黄酸对不同蛋白饮食喂养CRF大鼠血脂的结果

^*与正常组比较p＜0.05；^**与正常组比较p＜0.01；○与正常饲料模型组比较p＜0.05；○○与正常饲料模型组比较p＜0.01；●与切肾后高脂饲料模型组比较p＜0.05；●●与切肾后高脂饲料模型组比较p＜0.01；△与切肾后高脂饲料对照组比较p＜0.05；△△与切肾后高脂饲料对照组比较p＜0,01。

试验结果表明：切肾后高脂饲料模型组的血甘油三脂、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇明显高于正常组，而且在高脂饲料模型组中甘油三脂、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇明显高于正常饲料模型组(P＜0.05-0.01)，说明高脂高糖饮食可以加重慢性肾衰大鼠的脂质代谢异常；而正常饲料模型组的低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇显著高于正常组(P＜0.05)；正常饲料治疗组比起正常饲料模型组中的低密度脂蛋白胆固醇有显著的下降的作用；大黄酸有明显抑制总胆固醇、甘油三脂和低密度脂蛋白的作用，且在切肾后高脂饲料组中的总胆固醇、低密度脂蛋白疗效明显优于对照组。福欣普利组仅具有降低同种模型组甘油三脂、低密度脂蛋白胆固醇的作用，但疗效不及大黄酸。

(3)大黄酸对不同饮食喂养的CRF大鼠肾组织氧化低密度脂蛋白和转化生长因子-β1的影响。

表7大黄酸对不同饮食喂养的CRF大鼠肾组织氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响

^*与正常组比较p＜0.05；^**与正常组比较p＜0.01；○与正常饲料模型组比较p＜0.05；○○与正常饲料模型组比较p＜0.01；●与切肾后高脂饲料模型组比较p＜0.05；●●与切肾后高脂饲料模型组比较p＜0.01；△与切肾后高脂饲料对照组比较p＜0.05；△△与切肾后高脂饲料对照组比较p＜0.01。

试验结果表明：正常饲料模型组、切肾后高脂饲料模型组的肾组织氧化低密度脂蛋白和转化生长因子-β1明显高于正常组，而且切肾后高脂饲料模型组的氧化低密度脂蛋白的阳性反映面积和转化生长因子-β1显著高于正常饲料模型组(P＜0.05-0.01)，说明高脂高糖饮食能加重慢性肾衰大鼠的脂质代谢异常和炎症表现，加速慢性肾衰肾小球硬化和肾小管间质纤维化的形成。大黄酸和福欣普利对切肾后高脂饲料模型大鼠有明显降低氧化低密度脂蛋白的阳性反映面积和阳性表达强度的作用(P＜0.01)。而且大黄酸组对切肾后高脂饲料模型大鼠有明显降低转化生长因子-β1的作用且优于对照组。

(4)大黄酸对不同饮食喂养的CRF大鼠肾组织氧化抗氧化系统及游离脂肪酸的影响

表8大黄酸对不同饮食喂养的CRF大鼠肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和游离脂肪酸(NEFA)的影响

^*与正常组比较p＜0.05；^**与正常组比较p＜0.01；○与正常饲料模型组比较p＜0.05；○○与正常饲料模型组比较p＜0.01；●与切肾后高脂饲料模型组比较p＜0.05；●●与切肾后高脂饲料模型组比较p＜0.01。

试验结果表明：正常饲料模型组和切肾后高脂饲料模型组的肾组织超氧化物歧化酶明显低于正常组，丙二醛和游离脂肪酸明显高于正常组，而且切肾后高脂饲料模型组与正常饲料模型组相比超氧化物歧化酶、丙二醛和游离脂肪酸的变化与高脂高糖饮食时间呈明显的相关性，说明高脂高糖饮食能加重慢性肾衰大鼠的脂质代谢和氧化抗氧化系统的异常；本发明和福欣普利能明显提高切肾后高脂饲料模型大鼠的超氧化物歧化酶和降低游离脂肪酸的作用(P＜0.01)。

由上述试验可以看出，大黄酸可以很好的治疗慢性肾炎，特别是对预防和治疗慢性肾功能衰竭有较好疗效。

制剂实施例1：

取1份纯度为90％的大黄酸粉末，加入4份糊精混合均匀干燥，粉碎，整粒，灌胶囊，即得胶囊剂。

制剂实施例2：

取1份纯度为98％的大黄酸粉末，加入3份淀粉混合均匀干燥，粉碎，加入适量滑石粉、微粉硅胶，混合均匀，压片，得片剂。

制剂实施例3：

取1份大黄酸钠，加上2份淀粉混合均匀，加入1份磷酸氢钙，1份低取代羟丙基纤维素和1份交联聚乙烯吡咯烷酮混合均匀，制软材，制粒，干燥，整粒，加入适量滑石粉，混合均匀，压片，得分散片。

制剂实施例4：

取大黄酸钾25克，加3L注射用水和1L PEG-200搅拌溶解；加入活性炭0.1克，加热煮沸30分钟，过滤，补充注射用水至4.9升，调pH值至6.5，静置2h，用0.22μm微孔滤膜过滤，补充注射用水至5.0升，按单位制剂10ml的剂量分装，灭菌，即得注射剂。

制剂实施例5：

取大黄酸钠20克，加注射用水5L、500ml PEG-300共搅拌溶解；加入活性炭0.1克，沸水浴30分钟，用0.45μm微孔滤膜过滤，补充注射用水至10升，调pH值至6.5，静置2h，用0.22μm微孔滤膜过滤，补充注射用水至20.0升，按单位制剂100ml的剂量分装，灭菌，即得输液剂。

制剂实施例6：

取大黄酸12.5克、葡甲胺10克和精氨酸5克，加入到4.5L注射用水中，搅拌直至溶解。将所得溶液用截留分子量为10000的超滤膜进行超滤，所得滤液煮沸后加入0.6％(W/V)的活性炭，沸水浴15min，稍冷过滤，滤液调pH值至5.5-7.0，用0.45μm微孔滤膜进行粗滤、再用0.22μm微孔滤膜进行精滤；取甘露醇80mg加注射用水配制成溶液，与上述滤液混匀，用0.22μm微孔滤膜进行过滤，补充注射用水至5L，按单位制剂10ml的剂量分装，冷冻干燥，得冻干制剂。

Claims (7)

1.大黄酸作为唯一活性成分在制备用于抗基底膜肾炎的药品或者保健品中的应用。

2.按照权利要求1所述的应用，其特征在于：所述大黄酸来自大黄、何首乌、番泻叶或者由化学合成得到。

3.按照权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述大黄酸纯度不低于90％。

4.按照权利要求3所述的应用，其特征在于：所述大黄酸纯度不低于98％。

5.按照权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述用于抗基底膜肾炎的药品或者保健品为口服形式或者注射形式。

6.按照权利要求5所述的应用，其特征在于：所述用于抗基底膜肾炎的药品或者保健品为胶囊剂、片剂、颗粒剂、注射液、混悬剂、丸剂、乳剂或凝胶剂。

7.按照权利要求5所述的应用，其特征在于：所述用于抗基底膜肾炎的药品或者保健品为分散片或冻干粉针剂。