CN1474684A - 护理皮肤的美容方法 - Google Patents

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Abstract

护理老化、起皱和/或光损伤皮肤的美容方法，通过局部施用含8－异戊二烯基－4′，5，7－三羟黄烷酮的组合物而提供。

Description

护理皮肤的美容方法
技术领域
本发明涉及改进皮肤状态和外观的美容方法并涉及在改进皮肤状态和外观的局部组合物制备中8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮的使用。
背景技术
皮肤常随着皮肤病、环境因素(风、空调、中央暖气系统等)或正常的老化过程(随时间的老化)——老化可通过将皮肤暴露在太阳下而加速(光老化)——而遭受破坏。近年来，对于美容产品组合物以及改进皮肤状态和外观的美容方法的需求剧增。
消费者日益寻求“抗老化”美容产品，它护理或延缓明显的随时间老化和光老化的迹象如皱纹、线纹、松弛、严重色素沉积和老年斑。
消费者还常常从美容产品中寻求除抗老化之外的其它益处。“敏感皮肤”的概念也提高了消费者对美容产品的要求，他们希望产品可以改进敏感、干燥和/或易起皮皮肤的外观和状态并舒缓发红和/或受刺激皮肤。消费者还期望治疗雀斑、面泡和瑕疵的美容产品。
8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮是一种已知物质。例如，在Journal of Endocrinology & Metabolism第83卷第6期中Milligan等人的“ Identification of a potent phytoestrogen in hops andbeer”中，8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮被认为是有效的植物雌激素。8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮的结构在那篇文献中也有显示。8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮存在于天然的蛇麻草中，从中它可以被分离并浓缩出来。
现在我们惊讶地发现8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮的更多未公开的特性，它在美容产品组合物中有用，局部地应用于皮肤以提供以前未公开的护肤益处。
现在我们已发现对于正常皮肤随时间老化和光老化的状况，如皱纹、线纹、松弛、严重色素沉积和老年斑的有效护理和预防，可以通过对皮肤使用含8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮或其衍生物的美容产品组合物而实现。我们还发现美容产品组合物中8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮的使用有利地提供了除抗老化之外的更多皮肤益处如舒缓发红和/或受刺激的皮肤。
发明内容
第一方面，本发明含有应用于人类皮肤的局部组合物，组合物含有效量的8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮。
依照本发明的更进一步方面，是提供至少一种美容产品护肤益处的方法，护肤益处选自：治疗/预防皱纹、松弛、老化和/或光损伤皮肤；促进皮肤的胶原沉积、促进皮肤的核心蛋白聚糖生成；舒缓受刺激、发红和/或敏感皮肤；改善皮肤肌理、光滑度和紧致度；此方法包括对皮肤使用含有8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮和/或其衍生物的局部组合物。
本发明还包含在制备提供至少一种护肤益处的局部组合物时，8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮和/或其衍生物的用途，护肤益处选自：治疗/预防皱纹、松弛、老化和/或光损伤皮肤；促进皮肤的胶原沉积、促进皮肤的核心蛋白聚糖生成；舒缓受刺激、发红和/或敏感皮肤；改进皮肤肌理、光滑度和/或紧致度。
本发明的另一方面提供8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮，用于治疗皱纹、松弛、老化和/或光损伤皮肤；促进皮肤的胶原沉积、促进皮肤的核心蛋白聚糖生成；舒缓受刺激、发红和/或敏感皮肤；改进皮肤肌理、光滑度和/或紧致度。
从而本发明方法和8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮的使用提供了抗老化益处，结果促进皮肤的光滑和柔软并改善弹性且减少或延缓皱纹和老化肌肤的出现并改善肤色。可以获得外观、肌理和状态的普遍改善，尤其对于光泽度、明晰度和皮肤通常的年轻外观而言。本发明方法和使用也利于舒缓和镇静敏感和/或受刺激肌肤。因此本发明方法有利地提供了大范围的护肤益处。
这些益处应包括改进的含水性、肌理/色调、光滑度、柔软度、紧致度、强度/弹性和光泽度。
术语“护理”用在此，其范围包括减少、延缓和/或预防上述皮肤状况如皱纹、老化、光损伤和/或受刺激皮肤，通常提高皮肤质量并通过预防或减少皱纹且提高皮肤的适应性、紧致度、光滑度、柔软度和弹性而改进其外观和肌理。依照本发明的美容方法和8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮和/或其衍生物的使用可能对护理已处于皱纹、老化、光损伤和受刺激状态的皮肤有用，或护理年轻皮肤以预防或减少前述因正常老化/光老化过程而引起的不良变化。
本发明还包括含有8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮部分的游离分子衍生物。
依照本发明使用的活性8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮以有效量存在于局部组合物中。通常活性物质的总量以组合物的0.0001重量％-50重量％的量存在。更优选的量为0.001％-10％且为了用最小的花费得到最大的利益，最优选的量是0.01％-1％。
依照本发明使用的组合物还含有皮肤病学/美容可接受的赋形剂，作为活性物质的稀释剂、分散剂或载体。赋形剂可含有通常用于护肤品的物质，如水、液体或固态润肤剂、有机硅油、乳化剂、保湿剂、增稠剂、粉、促进剂等。
赋形剂通常占组合物的5重量％-99.9重量％，优选25重量％-80重量％，且可以在无其它美容助剂时平衡组合物。
除了活性成分8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮外，还可以包括其它特殊的益于皮肤的活性成分如遮光剂、皮肤发光剂和皮肤鞣制剂。赋形剂还可进一步包括助剂如香料、不透明剂、防腐剂、着色剂和缓冲剂。
为制备用于本发明方法的局部组合物，可使用制备护肤品的通常方式。活性成分通常以传统方式结合在皮肤病学可接受的载体内。活性成分可首先恰当地溶解或分散在一份水或其它溶剂或液体中以结合到组合物中。优选的组合物是水包油或油包水乳液。
组合物可以是传统的护肤品形式如霜、凝胶或洗液等。组合物也可以是所谓的“洗掉”产品形式例如沐浴或淋浴凝胶，它可能含有活性成分的传递系统以提高冲洗过程中对皮肤的粘附。最优选地，产品是“留住”产品；是一种使用到皮肤上后不需马上进行仔细冲洗的产品。
组合物可以以任意合适的传统形式包装如罐装、瓶装、管装、滚球装等。
本发明的方法可以每天对需要护理的皮肤进行一次或多次。皮肤外观的改进通常在1-3个月后变得明显，这依赖于皮肤的状态、本发明所用活性物质的浓度、所用组合物的量以及使用频率。通常，从合适的容器或涂药器中取少量组合物，如0.1-5mL使用到皮肤上并用手或手指或合适的设备覆盖和/或擦在皮肤上。可附带冲洗步骤，这依赖于组合物是否按照“留住”或“洗掉”产品配制。
附图简述
为使本发明更易于理解，仅以示例方式给出下面实施例，并参考附图，其中
-图1显示了8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮对核心蛋白聚糖合成的影响；
-图2显示了8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮对原胶原合成的影响；和
-图3显示了8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮对PGE2表达降低的影响。
实施例
第一个实施例证实了8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮的抗老化益处。
从我们的共同未决欧洲专利申请99908956.8知道，局部视黄酸处理可引起活生物体内原胶原I和核心蛋白聚糖的上调。最终，那份申请中标题“ Identification of procollagen I and核心蛋白聚糖upregulation in skin in vivo following topical retinoic acidtreatment for comparat ive purposes”下的段落在此总体引入。
实施例1
测量人真皮成纤维细胞中原胶原I和核心蛋白聚糖合成的步骤
真皮成纤维细胞条件培养液的制备
第2代(P2)主要的人包皮成纤维细胞以10000细胞/cm2接种到12孔板中，并在5％二氧化碳和4％氧气氛围下于含10％胎牛血清的Dulbeccos Modified Eagles Medium(DMEM)中培养24小时。此时间过后，用不含血清的DMEM漂洗，然后在不含血清的新鲜DMEM中进一步孵育60小时。然后再次用不含血清的DMED漂洗成纤维细胞单层。测试试剂和赋形剂对照分三份加入到细胞中，在最终体积为0.4ml/孔不含血清的新鲜DMEM中进一步培养24小时。立即分析此成纤维细胞条件培养液或是将其在液氮中迅速冷冻并保存在-70℃留待以后分析。然后进行细胞计数并将从斑点印迹分析得来的数据标准化为细胞数。
真皮成纤维细胞条件培养液中原胶原-I和核心蛋白聚糖蛋白的斑点印迹分析
从赋形剂(作为对照)或测试试剂处理过的真皮成纤维细胞中得来的条件培养液样品，其中补充20mM的二硫苏糖醇(200mM储备液的1∶10稀释液)和0.1％十二烷基硫酸钠(10％储备液的1∶100稀释液)，充分混合后在75℃培养2分钟。通过连续稀释纯的成纤维细胞条件培养液得到分析标准，纯的成纤维细胞条件培养液从以10000细胞/cm2密度接种在175cm2培养瓶中并在上述无血清的DMEM中培养的成纤维细胞得来。
然后依照生产商的使用说明，使用Bio-Rad生产的96孔Bio-Dot仪将鉴定样品分三份施用到Imobilon-P转移膜的预湿片上。每孔大约施用200μL培养液。培养液在重力作用下通过膜滤过(30分钟)，然后将膜用PBS洗涤两次(200μL)。此PBS洗液可允许在重力下通过膜滤过(2×15分钟)。然后将Bio-Dot仪连接到真空歧管上并在吸力下第三次也是最后一次用PBS洗涤。拆开仪器，取出膜并在置于封存缓冲液中4℃过夜之前根据需要快速切割。
为核心蛋白聚糖分析制备的膜在PBS中用3％(重量/体积)BSA/0.1％(体积/体积)Tween 20阻断，同时用于原胶原分析的膜在PBS中用5％(重量/体积)干燥脱脂奶粉/0.05％ Tween 20阻断。在接下来几天中，膜用1∶10000抗人原胶原-I(MAB1912；鼠单克隆；Chemicon Int.Inc.，Temecula，CA)或抗人核心蛋白聚糖(兔多克隆；Biogenesis)的一抗稀释液在室温下标记2小时。随后膜用TBS/0.05％ Tween 20(3×5分钟)淋洗，接着如所需用125I-标记鼠抗或兔抗F(ab’)2片段(Amersham)的1∶1000稀释液在室温下孵育1小时。
此后，在允许空气中室温干燥之前，Immobilon带再次用TBS/Tween 20(3×5分钟)淋洗。干燥的膜包裹在玻璃纸中并暴露于Molecular Dynamics的磷光屏(phosphor screen)达16-18小时。然后暴露的磷光屏用ImageQuantTM软件通过磷显示计(MolecularDynamics Phosphorimager SF)扫描。点密度通过计算机辅助图像分析来评估，使用ImageQuantTM中的定量工具，标准化为细胞数，并确定了不同检测试剂对核心蛋白聚糖和原胶原-I合成的影响与100个随机单元的赋形剂处理对照值相关。
检测
测试结果图示于图1和图2。为了将测试结果标准化，确定了检测物质的效用与100个随机单元的赋形剂处理对照值相关。
作为对照，用视黄酸进行试验以评估它对人真皮成纤维细胞中核心蛋白聚糖合成的影响。
图1和图2的结果表明，与对照样相比，8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮显著地促进了人真皮成纤维细胞中原胶原-I和核心蛋白聚糖的合成。
皮肤中核心蛋白聚糖的水平与皮肤改善的状态和外观有关。提高皮肤中核心蛋白聚糖的水平对于控制和校正皮肤中胶原沉积很重要，这与许多皮肤益处有关，如光损伤皮肤的除皱和真皮修复。
视黄酸(1μm)对照试验表明核心蛋白聚糖升高，138 3 14(p＝0.035，n＝4)，经确定与100个随机单元的赋形剂处理对照值相关。令人惊讶的是，数据进一步表明受影响的人真皮成纤维细胞中核心蛋白聚糖合成的上调程度超过了原有的抗老化真皮修复活性成分，即视黄酸。
使用8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮和其它已知雌激素或植物雌激素进行了进一步的对照检测，以比较原胶原-I和核心蛋白聚糖的上调。
在检测中使用与上述相同的程序。
开始，得到含苯酚红(它本身具有雌激素活性)的培养液中已知雌激素和植物雌激素的结果。然后进行8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮和不含苯酚红的培养液中已知雌激素和植物雌激素的重复检测。结果列于下面表1和表2中。
表1
用含苯酚红的培养液培养的人成纤维细胞分泌的原胶原I和核心蛋白聚糖水平的增长百分比。
1μM的活性成分(在含苯酚红的培养液中) 原胶原I   核心蛋白聚糖
17-β-雌二醇 107.7   121
白藜芦醇 102.1   113.1
大豆黄素 118   98.9
5，7，45-三羟基异黄酮 124   114
数据以与赋形剂处理对照值100相关的随机单元表示。
表2
用不含苯酚红培养液培养的人成纤维细胞分泌的原胶原I和核心蛋白聚糖水平的增长百分比。
1μM的活性成分(在不含苯酚红的培养液中) 原胶原I  核心蛋白聚糖
8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮 350  800
17-β-雌二醇 170  130
大豆黄素 152  252
5，7，45-三羟基异黄酮 200  240
数据用与赋形剂处理对照值100相关的随机单元表示。
上面的检测结果清楚地表明8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮与其它已知的雌激素和植物雌激素相比是一种更好的原胶原I和核心蛋白聚糖诱导剂。不希望被理论束缚，相信8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮不会像雌激素一样发挥作用但可以通过另一种分子途径促进这两种修复标记物的合成。
实施例2
成纤维细胞的PGE2分析
下面的实施例表明8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮能有效地降低体外培养成纤维细胞分泌的前列腺素E2(PGE2)的基本水平。
第2代(P2)主要的人包皮成纤维细胞以10000细胞/孔接种到96孔板中，并在5％二氧化碳气氛下于含10％胎牛血清的DulbeccosModified Eagles Medium(DMEM)中培养24小时。然后将8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮溶于乙醇并加入到新鲜的细胞培养液中(乙醇在含10％胎牛血清的DMEM中的最终浓度为1％)并分三份加入孔内细胞中进一步培养24小时。佛波醇十四(烷)酸酯乙酸盐(PMA)(Sigma)加入到培养液中并进一步培养细胞24小时。PMA用作引发细胞中氧化应激和发炎反应的应激物。然后立即如下述分析成纤维细胞/培养液或将其在液氮中迅速冷冻并保存在-70℃以进行进一步分析。
前列腺素E2(PGE2)分析
轻摇培养板后取50μL体积的培养液进行PGE2分析。培养液中的PGE2水平用Biotrak PGE2免疫测定试剂盒(Amersham，英国)测定。对有限量的固定的PGE2特异性抗体的分析基于样品中未标记的PGE2与固定量的用山葵过氧化物酶标记的PGE2之间的竞争。未标记的PGE2的浓度根据同时获得的标准曲线来确定。
通过化合物与对照样相比降低所分泌PGE2基本水平的能力来测试化合物的抗炎能力。所得结果示于图3。
PGE2是一种人所熟知的皮肤炎症调节剂，见Greaves等“Prostagludus，leukotriemes，phospholipase，plateletactuating factor and cytokine：an intergrated approach toinflammation of human skin”，Arch.Dermatol.Res.(1988)280[supp]：533-541。结果表明用8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮处理过的成纤维细胞产生较少的促炎前列腺素PGE2，从而降低皮肤的发炎可能性。
实施例3
下面的配方描述了一种适合于本发明方法和用途的水包油霜。百分比为组合物的重量百分比。
重量％
 矿物油 4
 8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮 1.15
 Brij 56* 4
 Alfol 16RD* 4
 三乙醇胺 0.75
 1，3-丁二醇 3
 黄原胶 0.3
 香料 Qs
 丁醇醚化羟基甲苯 0.01
 水 至100
*Brij 56是十六烷基醇POE(10)
Alfol 16RD是十六烷基醇
实施例4
下面的配方描述了依照本发明的乳霜。
化学全称或CTFA名 商品名  重量％
8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮  2.0
EDTA二钠 Sequesterene Na2  0.05
铝硅酸镁 Veegum Ultra  0.6
甲基对羟基苯甲酸酯 Methyl Paraben  0.15
二甲基硅氧烷 DC Antifoam Emulsion  0.01
1，3-丁二醇 Butylene Glycol 1，3  3.0
羟乙基纤维素 Natrosol 250HHR  0.5
丙三醇，USP Glycerine USP  2.0
黄原胶 Keltrol 1000  0.2
三乙醇胺 Triethanolamine(99％)  1.2
硬脂酸 Pristerene 4911  3.0
丙基对羟基苯甲酸酯NF Propylparaben NF  0.1
甘油基氢化硬脂酸酯 Naturechem GMHS  1.5
十八烷醇 Lanette 18 DEO  1.5
异硬脂基棕榈酸酯 Protachem ISP  6.0
C12-15醇辛酸酯 Hetester FAO  3.0
二甲基硅氧烷 Silicone Fluid 200(50cts)  1.0
胆固醇NF Cholesterol NF  0.5
山梨糖硬脂酸酯 Sorbitan Stearate  1.0
丁醇醚化羟基甲苯 Embanox BHT  0.05
生育酚乙酸酯 Vitamin E Acetate  0.1
PEG-100硬脂酸酯 Myrj 59  2.0
十八烷酰乳酸钠 Pationic SSL  0.5
羟基辛酸 Hydroxycaprylic Acid  0.1
视黄基棕榈酸盐 Vitamin A Palmitate  0.06
α-红没药醇 Alpha-bisabolol  0.2
水，DI  至100
上述实施例3和4的局部组合物都提供了有效的美容护理以改进皱纹、老化、光损伤和/或受刺激皮肤的外观，当施用到随老化或光老化而变坏的皮肤上时或施用到年轻皮肤上以帮助预防或延缓这些变质时。组合物可用传统方式加工。

Claims (4)

1.一种局部组合物，包含：
(a)有效量的8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮；和
(b)皮肤病学可接受的赋形剂。
2.依照权利要求1的局部组合物，其中8-异戊二烯基-4′，5，7-三羟黄烷酮以组合物的0.001-1.0重量％存在。
3.一种提供了至少一种美容护肤益处的美容方法，益处选自：护理/预防皱纹、松弛、干燥、老化和/或光老化皮肤；促进/保持皮肤的胶原水平；促进/保持皮肤的核心蛋白聚糖水平；改善皮肤的肌理、光滑度和/或紧致度；并舒缓受刺激的、发红的和/或敏感皮肤；此方法包括给皮肤施用如权利要求1或2的局部组合物。
4.权利要求1或2之一的局部组合物用于提供至少一种护肤益处的用途，益处选自：护理/预防皱纹、松弛、干燥、老化和/或光老化皮肤；促进/保持皮肤的胶原水平；促进/保持皮肤的核心蛋白聚糖水平；舒缓受刺激的、发红的和/或敏感皮肤；改善皮肤的肌理、光滑度和/或紧致度。
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