CN115737470A - 一种肌肽-pdrn复合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种肌肽‑PDRN复合物及其制备方法和应用。所述肌肽‑PDRN复合物由肌肽与PDRN复合构建，所述复合物中，肌肽与PDRN的质量比为5:1至1:5。肌肽与PDRN通过静电作用结合可以增强对细胞的穿透力，提升PDRN在皮肤表面抵御紫外线，抵抗光老化的作用。
Description
技术领域
本发明涉及功能型化妆品制备技术领域，具体涉及一种肌肽-PDRN复合物及其制备方法和应用。
背景技术
在整个说明书中对现有技术的任何讨论都不应被视为承认这些现有技术是广为人知的，或构成本领域公知常识的一部分。
当皮肤出现皱纹、暗沉粗糙或是色斑等症状时，说明皮肤健康受到影响，有衰老的趋势。现有的研究报告已指出，皮肤衰老是由内源性和外源性因素共同造成的，内源性老化是指随着年龄增长，皮肤细胞保水能力变差，胶原蛋白减少，导致皮肤松弛，皱纹增加，是皮肤细胞自然老化的过程；外源性老化则是因气候、紫外线和生活习惯等因素使皮肤成纤维细胞活性降低、胶原蛋白减少，进而导致皮肤变薄，弹性丧失。
上述关于皮肤衰老原因的总结说明，对抗皮肤衰老需要针对内外源因素进行全面抗衰老。现有技术及抗衰产品中，多是添加多肽、植物提取物或是两者的复配组合物作为抗衰成分，对激活老化的皮肤细胞、增强成纤维细胞活性作用甚微，抗衰老效果不明显；且当前抗衰产品中对于自然光线等外因造成的皮肤老化没有过多关注，抗衰靶点单一，无法做到全面抗衰。
PDRN(多聚脱氧核糖核苷酸)，天然存在于人体胎盘中，与人体DNA相似度高达98％。PDRN可以高效激活细胞表面的A2A腺苷受体，促进细胞因子释放，显著增强成纤维细胞增殖，可以激活老化或是受损细胞，从根本上做到抗衰老。
本发明的目的在于克服或改善现有技术中的至少一个缺点，或提供一个有用的替代方案。除非上下文有明确的要求，否则在整个说明书和权利要求中，“包括”、“包含”等词应从包容性的角度来解释，而不是从排他性或详尽性的角度来解释；也就是说，从“包括，但不限于”的角度来解释。
发明内容
本发明提供了一种肌肽-PDRN复合物及其制备方法和应用，本发明提供的肌肽-PDRN复合物，肌肽与PDRN通过静电作用结合同时不同分子量的PDRN形成分层复配，不仅可以增强活性成分对细胞的穿透力，而且能够显著提升了在皮肤表面抵御紫外线、抵抗光老化的作用；同时，本发明还提供了包含肌肽-PDRN复合物的组合物及其制剂，组合物或制剂中含有的其他功效性成分比如功能性多肽还可以促胶原蛋白生长和抑制肌肉收缩，有效缓解皮肤因自然老化或外源因素影响造成的胶原蛋白流失、产生皱纹等现象，增强皮肤弹性，达到全面抗衰的目的。
具体地，本发明提供了下述的技术方案。
在本发明的第一方面，本发明提供了一种肌肽-PDRN复合物，其由肌肽与PDRN复合构建，所述复合物中，肌肽与PDRN的质量比为10:1至1:10。
对抗皮肤衰老不仅需要关注年龄增长造成的细胞老化、肌肤松弛、皱纹增多等问题，也应重视由气候、紫外线和生活习惯等外因造成的皮肤暗淡无光、长斑、粗糙等问题，内外源因素共同加剧皮肤的衰老。肌肽具有显著的抗氧化、清除自由基的效果，PDRN可以从根本上激活老化及受损细胞，促成纤维细胞增殖。然而，发明人发现肌肽与PDRN独自作为组分共同使用时所能实现的效果有限，且难以产生协同效果。
本发明提供的肌肽-PDRN复合物，肌肽和PDRN通过静电作用形成离子键的方式结合成复合物，增强了活性成分对细胞的穿透力，同时，本发明的肌肽-PDRN复合物中，不同分子量的PDRN形成分层复配，显著提升了在皮肤表面抵御紫外线、抵抗光老化的作用。
在本发明的一些实施方式中，所述复合物中，肌肽与PDRN的质量比为5:1至1:5，进一步优选为3:1至1:3。
在本发明的一些实施方式中，所述复合物中，肌肽与PDRN的质量比为10:1-10，优选为5:1-5，更优选为3:1-3。
在本发明的一些实施方式中，所述复合物中，肌肽与PDRN的质量比为1:1-10，优选为1:1-5，更优选为1:1-3。
在本发明的一些实施方式中，所述PDRN的分子量为0.5-1000万。
在本发明的第二方面，本发明提供了一种制备上述第一方面中所述的肌肽-PDRN复合物的方法，其包括：将肌肽溶液与PDRN溶液混合，此为初溶，静置后干燥制得初溶粉状物；使用PDRN溶液将初溶粉状物复溶，静置后干燥制得肌肽-PDRN复合物。
在本发明的实施方式中，初溶时所用PDRN的分子量不高于复溶时所用PDRN的分子量；在较为优选的实施方式中，初溶时所用PDRN的分子量低于复溶时所用PDRN的分子量；
比如，在本发明的一些实施方式中，初溶时所用PDRN的分子量为不高于30万，比如分子量范围为0.5-30万，复溶时所用PDRN的分子量为不高于1000万，比如分子量范围为30-1000万；在这些实施方式中，复溶时以所用PDRN的分子量为30万＜PDRN的分子量≤1000万为较优。
在本发明的实施方式中，PDRN以不同的分子量参与复合物的构建，能够有效地使不同分子量PDRN形成分层复配，尤其是初溶时采用的PDRN分子量较低或者低于复溶时采用的PDRN的分子量的构建形式，能够使外层大分子量PDRN在皮肤表面可以形成薄膜，具有抵御紫外线的功效；内层小分子量PDRN与肌肽结合，增强透皮性，有效提升PDRN的生物利用度，整体上提升肌肽-PDRN复合物的美容效果。
在本发明的一些实施方式中，初溶时，肌肽与PDRN的质量比为2-2.5:1；
复溶时，初溶粉状物与PDRN的质量比为1:1-2.5。
在本发明的一些实施方式中，所述静置为在一个标准大气压下18-25℃的条件下静置，静置时间为0.5-2h。
在本发明的一些实施方式中，干燥方式选自真空干燥、喷雾干燥、流动干燥和冷冻干燥，优选为冷冻干燥。
在本发明的第三方面，本发明提供了一种组合物，其包含上述第一方面中所述的肌肽-PDRN复合物。
在本发明的一些实施方式中，本发明提供了一种组合物，其至少包括肌肽-PDRN复合物和功能性多肽。
本发明所述功能性多肽可以为具有美白、抗氧化、抗衰抗皱、抗过敏和修复功能的多肽，只要这些成分不影响肌肽-PDRN复合物的活性，和/或与肌肽-PDRN复合物同时使用不产生不良影响；本发明所述组合物中可以包含上述成分中的一种，也可以包含上述成分中的两种或两种以上，只要这些成分同时使用时无不不良影响产生。
在本发明的一些实施方式中，所述功能性多肽选自棕榈酰三肽-1、棕榈酰五肽-4、棕榈酰四肽-7、铜肽、乙酰基六肽-8、谷胱甘肽中的一种或多种。如无特殊说明，所述多种在本发明中是指包含两种或两种以上。
在本发明的一些实施方式中，本发明提供了一种组合物，其包括肌肽-PDRN复合物、功能性多肽和其他活性成分。
本发明所述其他活性成分为保湿成分、美白组分、抑菌成分和pH调节剂中的一种或多种，只要这些成分不影响肌肽-PDRN复合物的活性，和/或与肌肽-PDRN复合物同时使用不产生不良影响，以及，这些成分中的两种或两种以上同时使用时无不良影响产生。
在本发明的一些实施方式中，所述其他活性成分为透明质酸钠、乙酰透明质酸钠、甘油、乙基己基甘油、植物提取物、1,2-己二醇和三乙醇胺中的一种或多种；所述植物提取物比如红茶提取物、越橘果提取物等等。
一般而言，肌肽-PDRN复合物的功效会随着用量的增加而更显著，但依然需要考虑功效与成本以及与其他成分调配组合时整体功效的发挥。在本发明的一些实施方式中，所述组合物中肌肽-PDRN复合物的添加量以质量百分比0.1％-2％为较优；该范围内，可根据需要选择合适的添加量，比如，以质量百分比计，肌肽-PDRN复合物的添加量可以为0.2％-1％，可以为0.2％-0.6％，也可以为1％-2％。但整体上，在0.1％-2％的添加范围内，在本发明的组合物配方中能够整体上发挥良好的美容护肤作用。
在本发明的一些实施方式中，所述组合物中功能性多肽的添加量为质量百分比0.001％-1％。
在本发明的一些实施方式中，所述组合物中其他活性成分的总的添加量为质量百分比20％-30％。
在上述实施方式中，如有需要可加入溶剂，合适的溶剂并无特别限制，但应至少不影响肌肽-PDRN复合物以及组合物中添加的其他成分，比如所述溶剂为水，尤其为去离子水，或者根据组合物的需要或制剂需要，所述溶剂可以为纯化水或去离子水。
在本发明的一些实施方式中，本发明提供了一种组合物，其组成为：肌肽-PDRN复合物、功能性多肽、其他活性成分和水；
其中，所述功能性多肽包括乙酰基六肽-8，和包括或不包括选自棕榈酰三肽-1、棕榈酰五肽-4和棕榈酰四肽-7中的至少一种；
所述其他活性成分包括乙酰透明质酸钠、乙基己基甘油、1,2-己二醇、甘油、三乙醇胺，以及可选地包括或不包括至少一种植物提取物；
其中，肌肽-PDRN复合物的添加量为质量百分比0.1％-2％，优选为0.2-1％，比如可以为0.2％-0.6％；
功能性多肽的添加量为质量百分比0.001％-1％，优选为0.03％-0.5％，比如可以为0.03％-0.1％；
其他活性成分的添加量为质量百分比20％-30％，优选为25％-30％。
在本发明的一种实施方式中，本发明提供了一种组合物，其组成为：肌肽-PDRN复合物、功能性多肽、其他活性成分和水；
其中，所述功能性多肽包括乙酰基六肽-8、棕榈酰三肽-1和棕榈酰四肽-7，或者包括乙酰基六肽-8和棕榈酰五肽-4；
所述其他活性成分包括乙酰透明质酸钠、乙基己基甘油、1,2-己二醇、甘油和三乙醇胺，或者包含乙酰透明质酸钠、乙基己基甘油、1,2-己二醇、甘油和三乙醇胺以及选自红茶/藻发酵物和越橘果提取物中的至少一种；
其中，肌肽-PDRN复合物的添加量为质量百分比0.1％-2％，优选为0.2-1％，比如可以为0.2％-0.6％；
所述功能性多肽的添加量为质量百分比0.001％-1％，优选为0.03％-0.5％，比如可以为0.03％-0.1％；
所述其他活性成分的添加量为质量百分比20％-30％，优选为25％-30％。
在本发明的一些实施方式中，所述功能性多肽中，乙酰基六肽-8的添加量为质量百分比0.01％-0.03％；
在本发明的一些实施方式中，所述功能性多肽中，棕榈酰三肽-1的添加量为质量百分比0.005％-0.02％；
在本发明的一些实施方式中，所述功能性多肽中，棕榈酰四肽-7的添加量为质量百分比0.001％-0.01％；
在本发明的一些实施方式中，所述其他活性成分中，乙酰透明质酸钠的添加量为质量百分比0.05％-2％，优选为0.05％-1％，更优选为0.1-0.5％；
在本发明的一些实施方式中，所述其他活性成分中，甘油的添加量为质量百分比20％-30％；
在本发明的一些实施方式中，所述其他活性成分中，乙基己基甘油的添加量为质量百分比0.1％-0.5％；
在本发明的一些实施方式中，所述其他活性成分中，1,2-己二醇的添加量为质量百分比0.5％-2％；
在本发明的一些实施方式中，所述其他活性成分中，三乙醇胺的添加量为质量百分比0.001％-1％。
在本发明的一些实施方式中，所述其他活性成分中，红茶/藻发酵物的添加量为质量百分比0.1％-3％。
在本发明的一些实施方式中，所述其他活性成分中，越橘果提取物的添加量为质量百分比0.1-1％。
在本发明的第四方面，本发明提供了一种制备上述第三方面中所述的组合物的方法，其包括：调节溶剂的pH至3-6，按配方量加入原料，搅拌，即得，所述溶剂优选为去离子水。
在本发明的第五方面，本发明提供了一种外用制剂，其以上述第一方面中所述的肌肽-PDRN复合物或者上述第三方面中所述的组合物为原料。
在本发明的一些实施方式中，所述外用制剂中，肌肽-PDRN复合物的添加量为质量百分比0.1％-2％。
在本发明的一些实施方式中，所述外用制剂中，所述包含肌肽-PDRN复合物的组合物的添加量为质量百分比2％-10％。
在本发明的一些实施方式中，所述外用制剂为原液，该原液可用于制备外用护肤产品，所述外用护肤产品包括但不限于化妆水、乳液、精华、膏霜和凝胶等。
在本发明的一些实施方式中，所述原液用于制备外用护肤产品时，在外用护肤品中的添加量为质量百分比2％-10％。
在本发明的第六方面，本发明提供了上述第一方面中所述的肌肽-PDRN复合物或者上述第三方面中所述的组合物或者上述第五方面中所述的外用制剂在制备外用护肤产品中的应用。所述护肤产品具有抗光老化、抗氧化、美白、祛皱和抗衰的作用。
在本发明的一些实施方式中，所述外用护肤产品包括但不限于美容原液、化妆水、乳液、精华、膏霜和凝胶等。
在本发明的第七方面，本发明提供了一种美容方法，其包括向受试者皮肤施用有效量地上述第一方面中所述的肌肽-PDRN复合物或者上述第三方面中所述的组合物或者上述第五方面中所述的外用制剂或护肤产品；
所述美容主要指抗光老化(防晒)、抗氧化、美白、祛皱和抗衰老。
所述受试者主要指人，尤其指有美容需求或日常保养需求的人士。
所述有效量主要指是指包括本发明所述肌肽-PDRN复合物在内的活性化物质或制剂的量，该量可引起人的生物学响应，这包括减轻或部分减轻皮肤因自然老化或外源因素影响造成的皮肤老化比如产生皱纹、粗糙、弹性减退等的症状。
相较于现有技术，本发明的优势在于：
本发明提供了肌肽-PDRN复合物，肌肽和PDRN通过静电作用形成离子键的方式结合成复合物，增强了活性成分对细胞的穿透力，同时，本发明的肌肽-PDRN复合物中，不同分子量的PDRN形成分层复配，显著提升了在皮肤表面抵御紫外线、抵抗光老化的作用。特别是，肌肽-PDRN复合物中，PDRN以不同的分子量参与复合物的构建，有效地使不同分子量的PDRN形成分层复配，尤其是初溶时采用的PDRN分子量较低或者低于复溶时采用的PDRN的分子量的构建形式，能够使外层大分子量PDRN在皮肤表面可以形成薄膜，具有抵御紫外线的功效；内层小分子量PDRN与肌肽结合，增强透皮性，有效提升PDRN的生物利用度，整体上提升肌肽-PDRN复合物的美容效果。
本发明提供了包含肌肽-PDRN复合物的组合物及外用制剂，针对皮肤衰老的内外源因素提供了一种全面的抗衰美容护肤的解决方案，可以激活老化的皮肤细胞、增强成纤维细胞活性，从根本上缓解皮肤老化，同时可以有效抵御紫外线，防止光老化；同时，组合物或制剂中其他功效性成分比如功能性多肽可以促胶原蛋白生长和抑制肌肉收缩，有效缓解皮肤因自然老化或外源因素影响造成的胶原蛋白流失、产生皱纹等现象，增强皮肤弹性，达到全面抗衰的目的。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1示出了实验例1中施用各样品组后培养24h和48h后的细胞增殖率及增殖变化率情况。
图2示出了实验例2中施用各样品组28天后受试者皮肤粗糙度及其变化率情况。
图3示出了实验例4中施用各样品组28天后皮肤弹性指数及变化率情况。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。本发明所使用的试剂或原料均可通过常规途径购买获得，如无特殊说明，本发明所使用的试剂或原料均按照本领域常规方式使用或者按照产品说明书使用。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
如无特殊说明，本发明下述实施例中所述小分子量PDRN是指分子量为0.5-30万的PDRN；所述大分子量PDRN是指分子量大于30万但小于1000万的PDRN。如PDRN无单独注明大分子量和小分子量，则指分子量为0.5-1000万的PDRN，尤其是指小分子量PDRN和大分子量PDRN以质量比1:1比例混合的PDRN。
实施例1肌肽-PDRN复合物的构建
步骤一：将0.2g/mL肌肽溶液与0.2g/mL小分子量PDRN溶液按照组分质量比2:1的比例混合，将混合溶液室温静置1h后进行冷冻干燥；
步骤二：将步骤一所得粉末与0.2g/mL大分子量PDRN溶液按照质量比1：1的比例混合，将混合溶液室温静置1h后进行冷冻干燥得到肌肽-PDRN复合物。
实施例2肌肽-PDRN复合物的构建
步骤一：将0.2g/mL肌肽溶液与0.2g/mL小分子量PDRN溶液按照组分质量比2.5:1的比例混合，将混合溶液室温静置1h后进行冷冻干燥；
步骤二：将步骤一所得粉末与0.2g/mL大分子量PDRN溶液按照质量比1：1的比例混合，将混合溶液室温静置1h后进行冷冻干燥得到肌肽-PDRN复合物。
实施例3
按照如下原液配方，制备全面抗衰美容原液。
使用三乙醇胺调节去离子水pH至3-6，按配方量依次加入剩余原料并搅拌均匀，得到全面抗衰美容原液。
一公斤原液配方：
| 组分名称 | 含量 |
| 肌肽-PDRN复合物(实施例1) | 5g(0.5％) |
| 乙酰基六肽-8 | 0.3g(0.03％) |
| 棕榈酰三肽-1 | 0.1g(0.01％) |
| 棕榈酰四肽-7 | 0.05g(0.005％) |
| 乙酰透明质酸钠 | 2g(0.2％) |
| 乙基己基甘油 | 1g(0.1％) |
| 1,2-己二醇 | 10g(1％) |
| 甘油 | 250g(25％) |
| 去离子水 | 添加至1kg |
实施例4
按照如下原液配方，制备全面抗衰美容原液。
使用三乙醇胺调节去离子水pH至3-6，按配方量依次加入剩余原料并搅拌均匀，得到全面抗衰美容原液。
一公斤原液配方：
实施例5
按照如下原液配方，制备美容原液。
使用三乙醇胺调节去离子水pH至3-6，按配方量依次加入剩余原料并搅拌均匀，得到美容原液。
一公斤原液配方：
| 组分名称 | 含量 |
| 肌肽-PDRN复合物(实施例2) | 2g(0.2％) |
| 红茶提取物 | 20g(2％) |
| 乙酰基六肽-8 | 0.3g(0.03％) |
| 棕榈酰三肽-1 | 0.1g(0.01％) |
| 棕榈酰四肽-7 | 0.05g(0.005％) |
| 乙酰透明质酸钠 | 2g(0.2％) |
| 乙基己基甘油 | 1g(0.1％) |
| 1,2-己二醇 | 10g(1％) |
| 甘油 | 250g(25％) |
| 去离子水 | 添加至1kg |
对比例1
按照如下原液配方，制备美容原液，其中，该对比例中，肌肽和PDRN的添加量分别是与实施例3中添加的肌肽-PDRN复合物中的组分肌肽和PDRN的量的等效量。
使用三乙醇胺调节去离子水pH至3-6，按配方量依次加入剩余原料并搅拌均匀，得到美容原液。
对比例2
按照如下原液配方，制备美容原液，其中，该对比例中，肌肽和PDRN的添加量分别是与实施例4中添加的肌肽-PDRN复合物中的组分肌肽和PDRN的量的等效量。
使用三乙醇胺调节去离子水pH至3-6，按配方量依次加入剩余原料并搅拌均匀，得到美容原液。
一公斤原液配方：
| 组分名称 | 含量 |
| 肌肽 | 2.14g(0.214％) |
| PDRN | 3.86g(0.386％) |
| 乙酰基六肽-8 | 0.3g(0.03％) |
| 棕榈酰五肽-4 | 0.1g(0.01％) |
| 乙酰透明质酸钠 | 2g(0.2％) |
| 乙基己基甘油 | 1g(0.1％) |
| 1,2-己二醇 | 10g(1％) |
| 甘油 | 250g(25％) |
| 去离子水 | 添加至1kg |
对比例3
按照如下原液配方，制备美容原液，其中，该对比例中，肌肽和PDRN的添加量分别是与实施例5中添加的肌肽-PDRN复合物中的组分肌肽和PDRN的量的等效量。
使用三乙醇胺调节去离子水pH至3-6，按配方量依次加入剩余原料并搅拌均匀，得到美容原液。
一公斤原液配方：
| 组分名称 | 含量 |
| 肌肽 | 0.71g(0.071％) |
| PDRN | 1.29g(0.129％) |
| 红茶提取物 | 20g(2％) |
| 乙酰基六肽-8 | 0.3g(0.03％) |
| 棕榈酰三肽-1 | 0.1g(0.01％) |
| 棕榈酰四肽-7 | 0.05g(0.005％) |
| 乙酰透明质酸钠 | 2g(0.2％) |
| 乙基己基甘油 | 1g(0.1％) |
| 1,2-己二醇 | 10g(1％) |
| 甘油 | 250g(25％) |
| 去离子水 | 添加至1kg |
实验例1促成纤维细胞增殖试验
为验证本发明所述组合物具有促成纤维细胞生长的功效，对实施例3-5及对比例1-3的原液进行促成纤维细胞增殖评价试验。
采用MTT细胞增殖评价方法，实验细胞选用CTCC-197-Hum成纤维细胞，实验培养液选择10％胎牛血清培养液，实验设置样品组、阳性对照组、阴性对照组、调零组。
具体实验步骤如下：
1.将成纤维细胞用含10％胎牛血清的细胞培养液制备成2×104个/mL的细胞悬液备用；
2.将2×104个/mL细胞悬液接种于96孔细胞培养板(200μL/孔)，置于37℃、5％CO2培养箱中孵育培养；
3.待孔板中细胞贴壁，且铺板率达到30％时，进行分组给药，每组设5个复孔(200μL/孔)：
(1)样品组，共6组，分别加入含实施例3、实施例4、实施例5、对比例1、对比例2、对比例3原液的细胞培养液，受测原液添加量为1g/mL；并分别命名为样品组1、样品组2、样品组3、样品组4、样品组5、样品组6；
(2)阳性对照组，共1组，加入含TGF-β1蛋白的细胞培养液，TGF-β1蛋白的添加量为100ng/mL；
(3)阴性对照对，共一组，加入细胞培养液；
(4)调零组，共1组，均为无接种细胞孔，加入细胞培养液。
给药完成后，将孔板置于37℃、5％ CO2培养箱中分别培养24h、48h。
4.孵育培养完成后，弃掉上层清液，将20μL MTT溶液加入到每孔中，而后在37℃、5％CO2培养箱中继续孵育4h；
弃去MTT溶液，每孔加入150μL DMSO溶液，震荡平板，置于微孔滴定板光度计上测定490nm处的吸光度，根据式1计算细胞增殖率(RGR，％)。
式1：
培养24h和48h后的细胞增殖率如表1所示
表1细胞增殖率(％)变化
使用Origin软件对数据进行t-test差异性分析，并绘制不同给药组别对成纤维细胞增殖率的影响曲线图，如图1所示。
与阴性对照组相比，阳性对照组细胞增殖率显著升高，说明本发明的促成纤维细胞增殖评价试验体系有效，可以验证本发明实施例原液是否具备促成纤维细胞增殖的作用。
与阴性对照组相比，样品组1-6在24h和48h均具有明显促进成纤维细胞增殖的作用，而样品组1-3在24h和48h细胞增殖率更高，促成纤维细胞增殖效果优于样品组4-6，说明本发明实施例中制备的肌肽-PDRN复合物显著的促成纤维细胞增殖作用并非是肌肽与PDRN简单混合产生的，而是结构使然。肌肽-PDRN复合物显著提高了肌肽和PDRN的透皮性，增强了PDRN激活老化细胞的效果。
实验例2防晒效果试验
为验证本发明所述组合物具有抗紫外线的功效，对实施例3及对比例1的原液进行防晒效果评价试验。
选取年龄在20岁至40岁之间的受试者20名，随机分为2组，每组10人。将受试样按2mg/cm2均匀涂抹于每组受试者的背部，受试区面积不小于30cm2，自然干燥15分钟后，使用日光模拟器氙弧灯作为紫外光源照射受试者背部。使用UV-2000S紫外线透过率分析仪在受试者背部的受试区随机5处检测，得到SPF值，结果如表2所示。
表2防晒效果检测值
| 样品 | SPF值 |
| 实施例3 | 28.9 |
| 对比例1 | 10.25 |
由表2可知，实施例3制备的美容原液SPF值明显高于对比例1制备的美容原液，说明本发明制备的肌肽-PDRN复合物，通过PDRN的分层复配与肌肽复合，赋予了肌肽-PDRN复合物更好的抵御紫外线的功效。
实验例3皮肤平均粗糙度试验
选取年龄在30岁至50岁之间的女性受试者40名，随机分为5组，每组8人。受试者洁面后在室温23℃、相对湿度55％的环境中静坐30分钟，待面部肌群放松后，使用VISIOSCANVC98皮肤测试仪测量受试者皮肤初始粗糙度。
初始值测量完毕后，受试者于每日早晚清洁面部后，取适量受试物均匀涂抹全脸，持续4周，期间不使用其他护肤品，所有使用本发明产品的受试者在使用过程中均未产生过敏等不良症状。分别于试验的第7天、第14天、第28天再次测定受试者皮肤粗糙度。
第1组为涂抹实施例3制得的抗衰美容原液的实验组，第2组为涂抹实施例4制得的美容原液的对照组，第3组为涂抹对比例1制得的美容原液的对照组，第4组为涂抹对比例2制得的美容原液的对照组，第5组为涂抹纯化水的空白对照组。
测量中需保持测试环境稳定，不同时间下皮肤平均粗糙度数据如表3所示，不同受试物改善皮肤粗糙度图3所示，其中，SEr为皮肤平均粗糙度指标，数值越小，说明皮肤粗糙度越小。
表3不同时间下皮肤平均粗糙度
由表3及图2可知，空白对照组对皮肤粗糙度没有改善效果，使用样品28天后，所有实验组皮肤粗糙度均有不同程度降低，说明本发明实施例配方组分可以改善皮肤粗糙的状况。使用本发明实施例3、实施例4制备的美容原液4周后，皮肤粗糙度分别减少80％和71.1％，而使用对比例1、对比例2制备的美容原液，4周后皮肤粗糙度分别减少63.3％和54％。说明本发明实施例中制备的组合物原液的显著的改善粗糙度效果并非是肌肽与PDRN简单混合产生的，而是结构使然。肌肽-PDRN复合物显著提高了肌肽和PDRN的稳定性，增强了透皮性，有效促进了皮肤对肌肽和PDRN的吸收，使其具有更加明显的改善粗糙的效果。
实验例4皮肤弹性试验
选取年龄在30岁至50岁之间的女性受试者40名，随机分为5组，每组8人。受试者洁面后在室温23℃、相对湿度55％的环境中静坐30分钟，待面部肌群放松后，使用皮肤弹性测试仪(Cotometer MPA580)测量受试者皮肤初始弹性指数。
初始值测量完毕后，受试者于每日早晚清洁面部后，取适量受试物均匀涂抹全脸，持续4周，期间不使用其他护肤品，所有使用本发明产品的受试者在使用过程中均未产生过敏等不良症状。分别于试验的第7天、第14天、第28天再次测定受试者皮肤弹性指数。
第1组为涂抹实施例3制得的抗衰美容原液的实验组，第2组为涂抹实施例5制得的美容原液的对照组，第3组为涂抹对比例1制得的美容原液的对照组，第4组为涂抹对比例3制得的美容原液的对照组，第5组为涂抹纯化水的空白对照组。
测量中需保持测试环境稳定，不同时间下皮肤弹性数据如表4所示，不同受试物改善皮肤弹性效果如图3所示，其中，R2为皮肤平均皮肤弹性指标，数值越接近1，说明皮肤弹性越好。
表4不同时间下皮肤弹性指数
由表4及图3可知，空白对照组对皮肤弹性没有提升效果，使用样品28天后，所有实验组皮肤弹性均有不同程度提升，说明本发明配方组分可以提升皮肤弹性。使用本发明实施例3、实施例5制备的美容原液4周后，皮肤弹性指数分别增加45.03％和33.3％，而使用对比例1、对比例3制备的美容原液，4周后皮肤指数分别增加25.5％和20.09％。说明本发明中制备的组合物原液的显著的提升皮肤弹性效果并非是肌肽与PDRN简单混合产生的，而是结构使然。肌肽-PDRN复合物提高了肌肽和PDRN的稳定性，增强了透皮性，有效促进了皮肤对肌肽和PDRN的吸收，使其具有更加明显的提升皮肤弹性效果。
综上所述，本发明将肌肽与PDRN通过静电作用形成离子键的方式，形成肌肽-PDRN复合物，并通过不同分子量PDRN分层复配，制备可以抵御紫外线、抗氧化、内源抗老的复合物，同时增强了两种组分透皮性，使其抗衰老效果明显优于肌肽和PDRN单独添加时的效果，可应用范围广。
同时，本发明提供了包含肌肽-PDRN复合物的组合物及外用制剂，针对皮肤衰老的内外源因素提供了一种全面的抗衰美容护肤的解决方案，可以激活老化的皮肤细胞、增强成纤维细胞活性，从根本上缓解皮肤老化，同时可以有效抵御紫外线，防止光老化；同时，组合物或制剂中其他功效性成分比如功能性多肽可以促胶原蛋白生长和抑制肌肉收缩，有效缓解皮肤因自然老化或外源因素影响造成的胶原蛋白流失、产生皱纹等现象，增强皮肤弹性，达到全面抗衰的目的。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种肌肽-PDRN复合物，其由肌肽与PDRN复合构建，所述复合物中，肌肽与PDRN的质量比为10:1至1:10。
2.根据权利要求1所述的肌肽-PDRN复合物，其特征在于，所述PDRN的分子量为0.5-1000万。
3.一种制备权利要求1或2中所述的肌肽-PDRN复合物的方法，其包括：将肌肽溶液与PDRN溶液混合，静置后干燥制得初溶粉状物；使用PDRN溶液将初溶粉状物复溶，静置后干燥制得肌肽-PDRN复合物。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，初溶时所用PDRN溶液中PDRN的分子量不高于复溶时所用PDRN溶液中PDRN的分子量；优选初溶时所用PDRN溶液中PDRN的分子量低于复溶时所用PDRN溶液中PDRN的分子量；
优选地，初溶时所用PDRN溶液中PDRN的分子量为不高于30万；复溶时所用PDRN溶液中PDRN的分子量为不高于1000万；
优选地，复溶时所用PDRN溶液中，30万＜PDRN的分子量≤1000万；
优选地，初溶时，肌肽与PDRN的质量比为2-2.5:1；
优选地，复溶时，初溶粉状物与PDRN的质量比为1:1-2.5；
优选地，静置条件为：一个标准大气压下18-25℃；
优选地，静置时间为0.5-2h；
优选地，干燥方式选自真空干燥、喷雾干燥、流动干燥和冷冻干燥。
5.一种组合物，其包含权利要求1或2所述的肌肽-PDRN复合物。
6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括肌肽-PDRN复合物和功能性多肽；
优选地，所述功能性多肽选自具有美白、抗氧化、抗衰抗皱、抗过敏和修复功能的多肽中的一种或几种；
优选地，所述功能性多肽选自棕榈酰三肽-1、棕榈酰五肽-4、棕榈酰四肽-7、铜肽、乙酰基六肽-8、谷胱甘肽中的一种或多种；
优选地，所述组合物中还包含其他活性成分；
所述其他活性成分为保湿成分、美白组分、抑菌成分和pH调节剂中的一种或多种；
优选地，所述其他活性成分为透明质酸钠、乙酰透明质酸钠、甘油、乙基己基甘油、植物提取物、1,2-己二醇和三乙醇胺中的一种或多种；
优选地，所述组合物中肌肽-PDRN复合物的添加量为质量百分比0.1％-2％；
优选地，所述组合物中功能性多肽的添加量为质量百分比0.001％-1％；
优选地，所述组合物中其他活性成分的添加量为质量百分比20％-30％；。
7.根据权利要求5或6所述的组合物，其特征在于，所述组合物的组成为：肌肽-PDRN复合物、功能性多肽、其他活性成分和水；
其中，所述功能性多肽包括乙酰基六肽-8以及选自棕榈酰三肽-1、棕榈酰五肽-4和棕榈酰四肽-7中的至少一种；
所述其他活性成分包括乙酰透明质酸钠、乙基己基甘油、1,2-己二醇、甘油、三乙醇胺，以及可选地包括至少一种植物提取物；
其中，肌肽-PDRN复合物的添加量为质量百分比0.1％-2％；
功能性多肽的添加量为质量百分比0.001％-1％；
其他活性成分的添加量为质量百分比20％-30％；
优选地，所述组合物的组成为：肌肽-PDRN复合物、功能性多肽、其他活性成分和水；
其中，所述功能性多肽包括乙酰基六肽-8、棕榈酰三肽-1和棕榈酰四肽-7，或者包括乙酰基六肽-8和棕榈酰五肽-4；
所述其他活性成分包括乙酰透明质酸钠、乙基己基甘油、1,2-己二醇、甘油和三乙醇胺，或者包含乙酰透明质酸钠、乙基己基甘油、1,2-己二醇、甘油和三乙醇胺以及选自红茶提取物和越橘果提取物中的至少一种；
其中，肌肽-PDRN复合物的添加量为质量百分比0.1％-2％；所述功能性多肽的添加量为质量百分比0.001％-1％；所述其他活性成分的添加量为质量百分比25％-30％；
优选地，所述功能性多肽中，乙酰基六肽-8的添加量为质量百分比0.01-0.03％；
所述功能性多肽中，棕榈酰三肽-1的添加量为质量百分比0.005-0.02％；
所述功能性多肽中，棕榈酰四肽-7的添加量为质量百分比0.001-0.01％；
所述其他活性成分中，乙酰透明质酸钠的添加量为质量百分比0.05％-2％；
所述其他活性成分中，甘油的添加量为质量百分比20％-30％；
所述其他活性成分中，乙基己基甘油的添加量为质量百分比0.1％-0.5％；
所述其他活性成分中，1,2-己二醇的添加量为质量百分比0.5％-2％；
所述其他活性成分中，三乙醇胺的添加量为质量百分比0.001％-1％。
所述其他活性成分中，红茶提取物的添加量为质量百分比0.1％-3％；
所述其他活性成分中，越橘果提取物的添加量为质量百分比0.1-1％。
8.一种制备权利要求5至7中任一项所述的组合物的方法，其包括：调节水的pH至3-6，按配方量加入原料，搅拌，即得。
9.一种外用制剂，其以权利要求1或2所述的肌肽-PDRN复合物或者权利要求5至7中任一项所述的组合物为原料；
优选地，肌肽-PDRN复合物的添加量为质量百分比0.1％-2％；
优选地，组合物的添加量为质量百分比2-10％；
优选地，所述外用制剂为原液，可用于制备外用护肤产品，所述外用护肤产品包括化妆水、乳液、精华、膏霜和凝胶；
优选地，原液在外用护肤品中的添加量为质量百分比2-10％。
10.权利要求1或2所述的肌肽-PDRN复合物或者权利要求5至7中任一项所述的组合物或者权利要求9所述的外用制剂在制备外用护肤产品中的应用；
优选地，所述外用护肤产品包括原液、化妆水、乳液、精华、膏霜和凝胶；
优选地，所述护肤产品具有抗光老化、抗氧化、美白、祛皱和抗衰的作用。
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